CN114539331B - 甲钴胺的合成和精制纯化方法 - Google Patents
甲钴胺的合成和精制纯化方法 Download PDFInfo
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07H23/00—Compounds containing boron, silicon, or a metal, e.g. chelates, vitamin B12
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/584—Recycling of catalysts
Abstract
本发明公开了一种甲钴胺的合成和精制纯化方法，包括：(1)以维生素B12为原料，六水合硫酸亚铁(Ⅱ)铵‑水为反应液，加入硼氢化钠进行还原反应；(2)以甲基磷酸酯作为甲基化试剂，在碱性条件下用卤代亚铜盐作为催化剂进行甲基化反应；(3)反应产物初步分离处理得到甲钴胺粗品；(4)将粗品精制纯化得到纯品。本发明使用成本低廉、反应条件温和、活性高且毒性小的甲基磷酸酯作为甲基化试剂，采用磷酸酯‑亚铜离子为催化体系，实现温和、低毒、安全、彻底的甲基化反应，极大改善了甲钴胺粗品品质。本发明精制纯化工艺有效去除生产工艺过程中引入的杂质，有关物质最大单总杂小于0.1％，总杂小于0.2％，保证了产品质量的可控性。
Description
技术领域
本发明涉及甲钴胺的制备方法，尤其涉及甲钴胺的合成以及精制纯化方法，属于甲钴胺的合成和纯化领域。
背景技术
甲钴胺用于治疗缺乏维生素B12引起的巨幼细胞性贫血，也用于周围神经病。与其它维生素B12类药物相比，甲钴胺在神经系统内传递性好；可促进核酸、蛋白及脂肪的代谢；药理上通过促进神经细胞内核酸和蛋白质以及神经骨鞘的合成从而修复受损伤的周围神经。临床上对糖尿病神经障碍、多发性神经炎等周围神经疾病(尤其是对麻痛及麻痹)有明显效果，是目前临床上治疗该疾病的有效药物，并且副作用极小。此外，有研究表明，甲钴胺是有效治疗帕金森症、阿尔兹海默综合症、肌肉萎缩和神经衰弱的潜在药物。
现有的甲钴胺的制备方法均为采用还原和甲基化两步的合成方法及相对应的纯化工艺，以得到甲钴胺成品，其主要的具体制备方法包括如下几种：
(1)用维生素B12为原料，以水为溶媒，通过硼氢化钠还原，并加入硝酸钴作为催化剂，避光，并通氩气除氧，以碘甲烷为甲基化试剂，即制备得甲钴胺；反应液经苯酚-二氯甲烷萃取除去水溶性盐，再用蒸馏水自有机层萃取甲钴胺，50℃减压浓缩，然后羧甲基纤维素柱层析，最后丙酮析晶，可得合格甲钴胺。
(2)以维生素B12为原料，甲醇-水为反应液，同时加入羟钴胺为催化剂，通过硼氢化钠还原，避光，碘甲烷为甲基化试剂，反应完毕后反应液经葡聚糖凝胶过滤，然后经SEAE-sephadexA25和CM-sephadexC25色谱柱分离，即得合格产品。
(3)以维生素B12为原料，水为溶剂，硼氢化钠还原，以硫酸亚铁氨及氯化亚铁为催化剂，碘甲烷甲基化，反应完毕后产物先后通过硅胶-40柱，硅胶柱，HP-20柱等分离即可得到合格产品。
(4)以维生素B12为原料，在高纯氮气保持下，使用非质子性极性溶剂作为反应液，在强碱的作用下加入甲基化反应试剂以对维生素B12进行甲基化反应，反应完毕后于低温下加冰水有大量固体析出，析出产物经层析柱进行层板分离后得甲钴胺。检测甲钴胺晶体有关物质最佳结果是单杂为0.13％，总杂≤0.72％。
现有甲钴胺的制备方法技术中，大多数都以维生素B12为原料，硼氢化钠还原，不同的甲基化试剂甲基化，反应完毕后，经不同的纯化工艺而得到甲钴胺成品。现有技术中关于甲基化试剂的选择多是碘甲烷、硫酸二甲酯、对甲基苯磺酸甲酯、碳酸二甲酯等甲基化试剂，而碘甲烷、硫酸二甲酯、对甲基苯磺酸甲酯虽然活性较高，但是都有一定的毒性，使用需要谨慎；碳酸二甲酯虽然毒性较低，但是活性远远不足，导致甲钴胺的粗品纯度降低太多，后处理精制提纯压力很大。此外，现有技术中的后处理一般的方法是萃取后溶剂析晶，采用凝胶过滤吸附、柱层析分离提纯等方法，虽然通过工艺改进能够提高纯化效果，但成品质量中有关物质高，产品质量不稳定。
有鉴于此，有必要对现有技术中的甲钴胺的制备与后处理精制纯化工艺方法予以改进，以提高产品质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简便有效、稳定、高纯度且适合工业化生产的甲钴胺的制备与后处理精制纯化方法。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
一种甲钴胺的合成和精制纯化方法，包括：
(1)以维生素B12为原料，六水合硫酸亚铁(Ⅱ)铵-水为反应液，加入硼氢化钠进行还原反应；(2)以甲基磷酸酯作为甲基化试剂，在碱性条件下用卤代亚铜盐作为催化剂加入步骤(1)的反应产物中进行钴的甲基化反应；(3)收集反应产物并进行初步分离处理得到甲钴胺粗品；(4)将甲钴胺粗品进行精制纯化得到甲钴胺纯品。
其中，步骤(1)中的还原反应的温度控制为≤35℃，优选为20-35℃；步骤(2)中所述的甲基化反应的温度控制为≤35℃，优选为20-35℃；所述的碱性条件优选为pH值为9-12。
步骤(2)中所述的卤代亚铜盐包括碘化亚铜或碘化锂；
步骤(3)中所述的初步分离处理包括：(a)将反应产物调节pH＝4～5后过滤，经大孔吸附树脂过滤，滤液除盐后在丙酮中析晶得到甲钴胺粗品。
步骤(4)中所述的精制纯化方法包括：(a)将甲钴胺粗品加到纯化水中溶解得到水溶液；(b)水溶液过滤后经制备液相柱分离纯化；(c)纯化液进行浓缩，丙酮析晶，干燥得到甲钴胺纯品。
优选的，步骤(a)中，将甲钴胺粗品加到纯化水中溶解时，内温控制在40～45℃，搅拌30-40min；甲钴胺粗品与水的质量比例优选为1：(80-500)；步骤(b)中制备液相柱根据样品性质的不同，可以选择不同的填料，如C8、C18等；适宜的上样量与半制备/制备的柱内径，长度，填料量等有关，与分析型高效液体物质分离效果有关，一般上样量为0.1％-1％；其中，制备液相柱进行分离纯化时进行梯度洗脱的溶剂可为异丙醇、乙腈、乙醇、甲醇等醇类或水中的一种或两种。
本发明甲钴胺的制备过程中，甲基化试剂使用了成本低廉、反应条件温和、活性高且毒性小的甲基磷酸酯作为甲基化试剂，采用磷酸酯-亚铜离子为催化体系，代替了现有技术中以碘甲烷、硫酸二甲酯为代表的有毒有害甲基化试剂，实现温和、低毒、安全、彻底的甲基化反应，极大的改善了甲钴胺粗品的品质。
本发明选择制备型高效液相进行分离纯化，具有制备工艺简单、相容性好、柱效高、寿命长、选材范围广、重现性好及使用不受pH限制等优势,有效去除粗品中的杂质。本发明精制纯化工艺可有效去除甲钴胺生产工艺过程中引入的杂质，有关物质最大单总杂小于0.1％，总杂小于0.2％，保证了产品质量的可控性。
本发明经制备分离得到的纯化液，经析晶、干燥不影响产品质量的稳定性，收率可达72.8％。
附图说明
图1甲钴胺的红外图谱的标准图。
图2实施例1制备的甲钴胺的红外图谱。
图3甲钴胺对照品液相图谱。
图4实施例1制备的甲钴胺的液相图谱。
图5实施例2制备的甲钴胺的液相图谱。
图6实施例3制备的甲钴胺的液相图谱。
图7实施例4制备的甲钴胺的液相图谱。
图8实施例5制备的甲钴胺的液相图谱。
图9实施例6制备的甲钴胺的液相图谱。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1甲钴胺的合成和精制纯化
(1)：称取240g维生素B12，加入12L水于20L反应釜中，氮气保护，室温下搅拌30min。
(2)：向反应液中加入硼氢化钠的水溶液(将120g硼氢化钠溶于900g的水中)，滴加时控温35℃，滴加完毕保温30℃搅拌30min。
(3)：向反应液中缓慢加入30g六水合硫酸亚铁铵，加入过程中控制体系温度35℃，加入完毕在30℃下保温搅拌30min。
(4)：向反应液中加入5％的碳酸钾水溶液保证反应体系的pH＝9,随后加入0.85g碘化亚铜和0.60g碘化锂，搅拌均匀后滴加入磷酸三甲酯的甲醇溶液(12g的磷酸三甲酯溶于100ml的甲醇溶液),滴加过程中控制内温35℃。
(5)：滴加结束后，保温30℃反应1h，随后用浓盐酸调节体系的pH＝4,过滤除去不溶物，滤液转入下道工序。
(6)：称取XAD1600N树脂9.6kg，加入乙醇19.2kg进行溶胀活化，活化5小时后再用纯化水约45kg冲洗树脂柱。
(7)：待树脂上水几乎不流时，将步骤(5)所得母液慢慢均匀的倒入树脂柱，加入完毕后，用约36kg纯化水冲洗反应液中的盐，并用1％硝酸银(0.5g硝酸银溶于50g纯化水，棕色试剂瓶保存)检测溶液中是否有氯残留，确定没有氯离子残留后用甲醇约40L冲洗产品，接收液有颜色时开始收集，颜色变为淡粉色后停止收集。
(8)：将收集的接收液减压蒸馏至干。向体系中加入3kg水和2.364kg丙酮，倒入反应釜中，于45℃下搅拌30min，随后向体系中滴入9.356kg丙酮。
(9)：滴加完毕，将反应体系降温至5℃，在0-5℃下保温搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。
(10)：将步骤(9)操作得到的产品加入2.87kg水、2.26kg丙酮，在45℃下搅拌30min，随后向反应液中滴加9.06kg丙酮。
(11)：滴加完成后，将反应液降温至5℃(内温)，计时，保温0-5℃搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。得到甲钴铵粗品。
(12)：向30L反应釜中加入20L水，将体系温度控制至40-45℃，加入200g步骤(11)的粗品，控制内温40-45℃搅拌30min，随后过滤，所得滤液分11次进样，每次进样约1.9L。制备液相进行洗脱，A相：分析级甲醇，B相：纯化水，流速1L/min，波长266nm，从吸收值2000mv开始计时1.0min后，收集馏分，至峰后2000mv时停止收集，将每次收集到的馏分于45-50℃(旋蒸水浴温度)，真空度≧-0.095MPa旋蒸1.5h，将浓缩液倒出。
表1每次设备开启时选择梯度进行平衡
| 时间min | 流速ml/min | A(分析级甲醇)％ | B(纯化水)％ |
| 0 | 1000 | 15 | 85 |
| 15 | 1000 | 15 | 85 |
表2进样后选择梯度进行洗脱
| 时间min | 流速ml/min | A％ | B％ |
| 0 | 1000 | 15 | 85 |
| 80 | 1000 | 43 | 57 |
| 80.01 | 1000 | 50 | 50 |
| 90 | 1000 | 50 | 50 |
| 90.01 | 1000 | 15 | 85 |
| 105 | 1000 | 15 | 85 |
表3每次关机前用清洁并保存填料
| 时间min | 流速ml/min | A％ | B％ |
| 0 | 500 | 100 | 0 |
| 40 | 500 | 100 | 0 |
(13)：将所有的馏分全部浓缩后，过树脂柱进行富集。
树脂柱富集操作：称取XDA1600N树脂4.8kg，加入乙醇9.6kg进行溶胀活化，活化时间不得少于5小时(可以提前一天活化)，使用前用纯化水23kg冲洗树脂柱，最后下流溶液无乙醇气味(若有乙醇气味继续使用纯化水冲洗)。将旋蒸后的馏分缓慢、均匀倒入树脂柱中，无液体流出后，用分析级甲醇23.754kg(约30L)冲洗树脂柱，接收液有颜色后开始收集，至液体颜色变为淡粉色时停止收集。
(1)：将所收集到的洗脱液，于45-50℃旋蒸至干。向旋蒸瓶内加入2L水和1.576kg丙酮(2L)，控制水浴锅温度为45-50℃旋转30min，然后向旋蒸瓶内加入4.8g活性炭，旋转30分钟。
(2)：将反应液过滤除去活性炭，转移至反应釜内，随后向反应釜中滴加6.204kg丙酮，滴加完毕后，将反应液降温至5℃(内温)，开始计时，控温0-5℃搅拌析晶8小时。
(3)：析晶结束，过滤，少量的丙酮淋洗滤饼，60℃下真空干燥4小时，收料得到甲钴胺198.78g，收率：83.50％。液相检测纯度99.89％。图2为红外图谱，图4为液相色谱图。
表4甲钴胺对照品液相图谱的积分结果
表5本实施例制备的甲钴胺的液相图谱的积分结果
实施例2甲钴胺的合成和精制纯化
(1)：称取240g维生素B12，加入12L水于20L反应釜中，氮气保护，室温下搅拌30min。
(2)：向反应液中加入硼氢化钠的水溶液(将150g硼氢化钠溶于1000g的水中)，滴加时控温35℃，滴加完毕保温30℃搅拌30min。
(3)：向反应液中缓慢加入37.5g六水合硫酸亚铁铵，加入过程中控制体系温度35℃，加入完毕在30℃下保温搅拌30min。
(4)：向反应液中加入5％的碳酸钾水溶液保证反应体系的pH＝11,随后加入1.0g碘化亚铜和0.72g碘化锂，搅拌均匀后滴加入磷酸三甲酯的甲醇溶液(15g的磷酸三甲酯溶于100ml的甲醇溶液),滴加过程中控制内温35℃。
(5)：滴加结束后，保温30℃反应1h，随后用浓盐酸调节体系的pH＝4～5,过滤除去不溶物，滤液转入下道工序。
(6)：称取XAD1600N树脂9.6kg，加入乙醇25.0kg进行溶胀活化，活化5小时后再用纯化水约45kg冲洗树脂柱。
(7)：待树脂上水几乎不流时，将步骤(5)所得母液慢慢均匀的倒入树脂柱，加入完毕后，用约36kg纯化水冲洗反应液中的盐，并用1％硝酸银(0.5g硝酸银溶于50g纯化水，棕色试剂瓶保存)检测溶液中是否有氯残留，确定没有氯离子残留后用甲醇约40L冲洗产品，接收液有颜色时开始收集，颜色变为淡粉色后停止收集。
(8)：将收集的接收液减压蒸馏至干。向体系中加入3kg水和2.364kg丙酮，倒入反应釜中，于45℃下搅拌30min，随后向体系中滴入9.356kg丙酮。
(9)：滴加完毕，将反应体系降温至5℃，在0-5℃下保温搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。
(10)：将步骤(9)操作得到的产品加入2.87kg水、2.26kg丙酮，在45℃下搅拌30min，随后向反应液中滴加9.06kg丙酮。
(11)：滴加完成后，将反应液降温至5℃(内温)，计时，保温0-5℃搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。得到甲钴铵粗品。
(12)：向30L反应釜中加入20L水，将体系温度控制至40-45℃，加入200g步骤(11)的粗品，控制内温40-45℃搅拌30min，随后过滤，所得滤液分11次进样，每次进样约1.9L。制备液相进行洗脱，A相：分析级乙醇，B相：纯化水，流速1L/min，波长266nm，从吸收值2000mv开始计时1.0min后，收集馏分，至峰后2000mv时停止收集，将每次收集到的馏分于45-50℃(旋蒸水浴温度)，真空度≧-0.095MPa旋蒸1.5h，将浓缩液倒出。
表6每次设备开启时选择梯度进行平衡
表7进样后选择梯度进行洗脱
表8每次关机前用清洁并保存填料
| 时间min | 流速ml/min | A％ | B％ |
| 0 | 500 | 100 | 0 |
| 40 | 500 | 100 | 0 |
(13)：将所有的馏分全部浓缩后，过树脂柱进行富集。
树脂柱富集操作：称取XDA1600N树脂4.8kg，加入乙醇9.6kg进行溶胀活化，活化时间不得少于5小时(可以提前一天活化)，使用前用纯化水23kg冲洗树脂柱，最后下流溶液无乙醇气味(若有乙醇气味继续使用纯化水冲洗)。将旋蒸后的馏分缓慢、均匀倒入树脂柱中，无液体流出后，用分析级甲醇23.754kg(约30L)冲洗树脂柱，接收液有颜色后开始收集，至液体颜色变为淡粉色时停止收集。
(1)：将所收集到的洗脱液，于45-50℃旋蒸至干。向旋蒸瓶内加入2L水和1.576kg丙酮(2L)，控制水浴锅温度为45-50℃旋转30min，然后向旋蒸瓶内加入4.8g活性炭，旋转30分钟。
(2)：将反应液过滤除去活性炭，转移至反应釜内，随后向反应釜中滴加6.204kg丙酮，滴加完毕后，将反应液降温至5℃(内温)，开始计时，控温0-5℃搅拌析晶8小时。
(3)：析晶结束，过滤，少量的丙酮淋洗滤饼，60℃下真空干燥4小时，收料得到甲钴胺194.47g，收率：81.75％。液相检测纯度99.81％。图5为液相色谱图。
表9本实施例制备的甲钴胺的液相图谱的积分结果
实施例3甲钴胺的合成和精制纯化
(1)：称取240g维生素B12，加入12L水于20L反应釜中，氮气保护，室温下搅拌30min。
(2)：向反应液中加入硼氢化钠的水溶液(将100g硼氢化钠溶于600g的水中)，滴加时控温35℃，滴加完毕保温30℃搅拌30min。
(3)：向反应液中缓慢加入30g六水合硫酸亚铁铵，加入过程中控制体系温度35℃，加入完毕在30℃下保温搅拌30min。
(4)：向反应液中加入5％的碳酸钾水溶液保证反应体系的pH＝12,随后加入0.85g碘化亚铜和0.60g碘化锂，搅拌均匀后滴加入磷酸三甲酯的甲醇溶液(12g的磷酸三甲酯溶于100ml的甲醇溶液),滴加过程中控制内温35℃。
(5)：滴加结束后，保温30℃反应1h，随后用浓盐酸调节体系的pH＝5,过滤除去不溶物，滤液转入下道工序。
(6)：称取XAD1600N树脂9.6kg，加入乙醇19.2kg进行溶胀活化，活化5小时后再用纯化水约45kg冲洗树脂柱。
(7)：待树脂上水几乎不流时，将步骤(5)所得母液慢慢均匀的倒入树脂柱，加入完毕后，用约36kg纯化水冲洗反应液中的盐，并用1％硝酸银(0.5g硝酸银溶于50g纯化水，棕色试剂瓶保存)检测溶液中是否有氯残留，确定没有氯离子残留后用甲醇约40L冲洗产品，接收液有颜色时开始收集，颜色变为淡粉色后停止收集。
(8)：将收集的接收液减压蒸馏至干。向体系中加入3kg水和2.364kg丙酮，倒入反应釜中，于45℃下搅拌30min，随后向体系中滴入9.356kg丙酮，
(9)：滴加完毕，将反应体系降温至5℃，在0-5℃下保温搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。
(10)：将步骤(9)操作得到的产品加入2.87kg水、2.26kg丙酮，在45℃下搅拌30min，随后向反应液中滴加9.06kg丙酮。
(11)：滴加完成后，将反应液降温至5℃(内温)，计时，保温0-5℃搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。得到甲钴铵粗品。
(12)：向30L反应釜中加入20L水，将体系温度控制至40-45℃，加入200g步骤(11)的粗品，控制内温40-45℃搅拌30min，随后过滤，所得滤液分11次进样，每次进样约1.9L。制备液相进行洗脱，A相：分析级乙腈，B相：纯化水，流速1L/min，波长266nm，从吸收值2000mv开始计时1.0min后，收集馏分，至峰后2000mv时停止收集，将每次收集到的馏分于45-50℃(旋蒸水浴温度)，真空度≧-0.095MPa旋蒸1.5h，将浓缩液倒出。
表10每次设备开启时选择梯度进行平衡
表11进样后选择梯度进行洗脱
表12每次关机前用清洁并保存填料
| 时间min | 流速ml/min | A％ | B％ |
| 0 | 500 | 100 | 0 |
| 40 | 500 | 100 | 0 |
(13)：将所有的馏分全部浓缩后，过树脂柱进行富集。
树脂柱富集操作：称取XDA1600N树脂4.8kg，加入乙醇9.6kg进行溶胀活化，活化时间不得少于5小时(可以提前一天活化)，使用前用纯化水23kg冲洗树脂柱，最后下流溶液无乙醇气味(若有乙醇气味继续使用纯化水冲洗)。将旋蒸后的馏分缓慢、均匀倒入树脂柱中，无液体流出后，用分析级甲醇23.754kg(约30L)冲洗树脂柱，接收液有颜色后开始收集，至液体颜色变为淡粉色时停止收集。
(1)：将所收集到的洗脱液，于45-50℃旋蒸至干。向旋蒸瓶内加入2L水和1.576kg丙酮(2L)，控制水浴锅温度为45-50℃旋转30min，然后向旋蒸瓶内加入4.8g活性炭，旋转30分钟。
(2)：将反应液过滤除去活性炭，转移至反应釜内，随后向反应釜中滴加6.204kg丙酮，滴加完毕后，将反应液降温至5℃(内温)，开始计时，控温0-5℃搅拌析晶8小时。
(3)：析晶结束，过滤，少量的丙酮淋洗滤饼，60℃下真空干燥4小时，收料得到甲钴胺196.64g，收率：82.66％。液相检测纯度99.78％，图6为液相色谱图。
表13本实施例制备的甲钴胺的液相图谱的积分结果
实施例4甲钴胺的合成和精制纯化
(1)：称取240g维生素B12，加入12L水于20L反应釜中，氮气保护，室温下搅拌30min。
(2)：向反应液中加入硼氢化钠的水溶液(将120g硼氢化钠溶于900g的水中)，滴加时控温35℃，滴加完毕保温30℃搅拌30min。
(3)：向反应液中缓慢加入30g六水合硫酸亚铁铵，加入过程中控制体系温度35℃，加入完毕在30℃下保温搅拌30min。
(4)：向反应液中加入5％的碳酸钾水溶液保证反应体系的pH＝11,随后加入1.20g碘化亚铜和0.90g碘化锂，搅拌均匀后滴加入磷酸三甲酯的甲醇溶液(15g的磷酸三甲酯溶于100ml的甲醇溶液),滴加过程中控制内温35℃。
(5)：滴加结束后，保温30℃反应1h，随后用浓盐酸调节体系的pH＝4,过滤除去不溶物，滤液转入下道工序。
(6)：称取XAD1600N树脂9.6kg，加入乙醇19.2kg进行溶胀活化，活化5小时后再用纯化水约45kg冲洗树脂柱。
(7)：待树脂上水几乎不流时，将步骤(5)所得母液慢慢均匀的倒入树脂柱，加入完毕后，用约36kg纯化水冲洗反应液中的盐，并用1％硝酸银(0.5g硝酸银溶于50g纯化水，棕色试剂瓶保存)检测溶液中是否有氯残留，确定没有氯离子残留后用甲醇约40L冲洗产品，接收液有颜色时开始收集，颜色变为淡粉色后停止收集。
(8)：将收集的接收液减压蒸馏至干。向体系中加入3kg水和2.364kg丙酮，倒入反应釜中，于45℃下搅拌30min，随后向体系中滴入9.356kg丙酮。
(9)：滴加完毕，将反应体系降温至5℃，在0-5℃下保温搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。
(10)：将步骤(9)操作得到的产品加入2.87kg水、2.26kg丙酮，在45℃下搅拌30min，随后向反应液中滴加9.06kg丙酮。
(11)：滴加完成后，将反应液降温至5℃(内温)，计时，保温0-5℃搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。得到甲钴铵粗品。
(12)：向30L反应釜中加入20L水，将体系温度控制至40-45℃，加入200g步骤(11)的粗品，控制内温40-45℃搅拌30min，随后过滤，所得滤液分11次进样，每次进样约1.9L。制备液相进行洗脱，A相：分析级异丙醇，B相：纯化水，流速1L/min，波长266nm，从吸收值2000mv开始计时1.0min后，收集馏分，至峰后2000mv时停止收集，将每次收集到的馏分于45-50℃(旋蒸水浴温度)，真空度≧-0.095MPa旋蒸1.5h，将浓缩液倒出。
表14每次设备开启时选择梯度进行平衡
表15进样后选择梯度进行洗脱
| 时间min | 流速ml/min | A％ | B％ |
| 0 | 1000 | 15 | 85 |
| 80 | 1000 | 43 | 57 |
| 80.01 | 1000 | 50 | 50 |
| 90 | 1000 | 50 | 50 |
| 90.01 | 1000 | 15 | 85 |
| 105 | 1000 | 15 | 85 |
表16每次关机前用清洁并保存填料
| 时间min | 流速ml/min | A％ | B％ |
| 0 | 500 | 100 | 0 |
| 40 | 500 | 100 | 0 |
(13)：将所有的馏分全部浓缩后，过树脂柱进行富集。
树脂柱富集操作：称取XDA1600N树脂4.8kg，加入乙醇9.6kg进行溶胀活化，活化时间不得少于5小时(可以提前一天活化)，使用前用纯化水23kg冲洗树脂柱，最后下流溶液无乙醇气味(若有乙醇气味继续使用纯化水冲洗)。将旋蒸后的馏分缓慢、均匀倒入树脂柱中，无液体流出后，用分析级甲醇23.754kg(约30L)冲洗树脂柱，接收液有颜色后开始收集，至液体颜色变为淡粉色时停止收集。
(1)：将所收集到的洗脱液，于45-50℃旋蒸至干。向旋蒸瓶内加入2L水和1.576kg丙酮(2L)，控制水浴锅温度为45-50℃旋转30min，然后向旋蒸瓶内加入4.8g活性炭，旋转30分钟。
(2)：将反应液过滤除去活性炭，转移至反应釜内，随后向反应釜中滴加6.204kg丙酮，滴加完毕后，将反应液降温至5℃(内温)，开始计时，控温0-5℃搅拌析晶8小时。
(3)：析晶结束，过滤，少量的丙酮淋洗滤饼，60℃下真空干燥4小时，收料得到甲钴胺192.16g，收率80.78％。液相检测纯度99.85％，图7为液相色谱图。
表17本实施例制备的甲钴胺的液相图谱的积分结果
实施例5甲钴胺的合成和精制纯化
(1)：称取240g维生素B12，加入12L水于20L反应釜中，氮气保护，室温下搅拌30min。
(2)：向反应液中加入硼氢化钠的水溶液(将120g硼氢化钠溶于900g的水中)，滴加时控温20℃，滴加完毕保温20℃搅拌30min。
(3)：向反应液中缓慢加入30g六水合硫酸亚铁铵，加入过程中控制体系温度20℃，加入完毕在20℃下保温搅拌30min。
(4)：向反应液中加入5％的碳酸钾水溶液保证反应体系的pH＝10,随后加入1.20g碘化亚铜和0.90g碘化锂，搅拌均匀后滴加入磷酸三甲酯的甲醇溶液(15g的磷酸三甲酯溶于100ml的甲醇溶液),滴加过程中控制内温20℃。
(5)：滴加结束后，保温20℃反应1h，随后用浓盐酸调节体系的pH＝4,过滤除去不溶物，滤液转入下道工序。
(6)：称取XAD1600N树脂9.6kg，加入乙醇19.2kg进行溶胀活化，活化5小时后再用纯化水约45kg冲洗树脂柱。
(7)：待树脂上水几乎不流时，将步骤(5)所得母液慢慢均匀的倒入树脂柱，加入完毕后，用约36kg纯化水冲洗反应液中的盐，并用1％硝酸银(0.5g硝酸银溶于50g纯化水，棕色试剂瓶保存)检测溶液中是否有氯残留，确定没有氯离子残留后用甲醇约40L冲洗产品，接收液有颜色时开始收集，颜色变为淡粉色后停止收集。
(8)：将收集的接收液减压蒸馏至干。向体系中加入3kg水和2.364kg丙酮，倒入反应釜中，于45℃下搅拌30min，随后向体系中滴入9.356kg丙酮。
(9)：滴加完毕，将反应体系降温至5℃，在0-5℃下保温搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。
(10)：将步骤(9)操作得到的产品加入2.87kg水、2.26kg丙酮，在45℃下搅拌30min，随后向反应液中滴加9.06kg丙酮。
(11)：滴加完成后，将反应液降温至5℃(内温)，计时，保温0-5℃搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。得到甲钴铵粗品。
(12)：向30L反应釜中加入20L水，将体系温度控制至40-45℃，加入200g步骤(11)的粗品，控制内温40-45℃搅拌30min，随后过滤，所得滤液分11次进样，每次进样约1.9L。制备液相进行洗脱，A相：分析级甲醇，B相：纯化水，流速1L/min，波长266nm，从吸收值2000mv开始计时1.0min后，收集馏分，至峰后2000mv时停止收集，将每次收集到的馏分于45-50℃(旋蒸水浴温度)，真空度≧-0.095MPa旋蒸1.5h，将浓缩液倒出。
表18每次设备开启时选择梯度进行平衡
表19进样后选择梯度进行洗脱
| 时间min | 流速ml/min | A％ | B％ |
| 0 | 1000 | 15 | 85 |
| 80 | 1000 | 43 | 57 |
| 80.01 | 1000 | 50 | 50 |
| 90 | 1000 | 50 | 50 |
| 90.01 | 1000 | 15 | 85 |
| 105 | 1000 | 15 | 85 |
表20每次关机前用清洁并保存填料
| 时间min | 流速ml/min | A％ | B％ |
| 0 | 500 | 100 | 0 |
| 40 | 500 | 100 | 0 |
(13)：将所有的馏分全部浓缩后，过树脂柱进行富集。
树脂柱富集操作：称取XDA1600N树脂4.8kg，加入乙醇9.6kg进行溶胀活化，活化时间不得少于5小时(可以提前一天活化)，使用前用纯化水23kg冲洗树脂柱，最后下流溶液无乙醇气味(若有乙醇气味继续使用纯化水冲洗)。将旋蒸后的馏分缓慢、均匀倒入树脂柱中，无液体流出后，用分析级甲醇23.754kg(约30L)冲洗树脂柱，接收液有颜色后开始收集，至液体颜色变为淡粉色时停止收集。
(1)：将所收集到的洗脱液，于45-50℃旋蒸至干。向旋蒸瓶内加入2L水和1.576kg丙酮(2L)，控制水浴锅温度为45-50℃旋转30min，然后向旋蒸瓶内加入4.8g活性炭，旋转30分钟。
(2)：将反应液过滤除去活性炭，转移至反应釜内，随后向反应釜中滴加6.204kg丙酮，滴加完毕后，将反应液降温至5℃(内温)，开始计时，控温0-5℃搅拌析晶8小时。
(3)：析晶结束，过滤，少量的丙酮淋洗滤饼，60℃下真空干燥4小时，收料得到甲钴胺195.54g，收率82.65％。液相检测纯度99.91％，图8为液相色谱图。
表21本实施例制备的甲钴胺的液相图谱的积分结果
实施例6甲钴胺的合成和精制纯化
(1)：称取240g维生素B12，加入12L水于20L反应釜中，氮气保护，室温下搅拌30min。
(2)：向反应液中加入硼氢化钠的水溶液(将120g硼氢化钠溶于900g的水中)，滴加时控温25℃，滴加完毕保温25℃搅拌30min。
(3)：向反应液中缓慢加入30g六水合硫酸亚铁铵，加入过程中控制体系温度25℃，加入完毕在25℃下保温搅拌30min。
(4)：向反应液中加入5％的碳酸钾水溶液保证反应体系的pH＝12,随后加入1.20g碘化亚铜和0.90g碘化锂，搅拌均匀后滴加入磷酸三甲酯的甲醇溶液(15g的磷酸三甲酯溶于100ml的甲醇溶液),滴加过程中控制内温25℃。
(5)：滴加结束后，保温25℃反应1h，随后用浓盐酸调节体系的pH＝5,过滤除去不溶物，滤液转入下道工序。
(6)：称取XAD1600N树脂9.6kg，加入乙醇19.2kg进行溶胀活化，活化5小时后再用纯化水约45kg冲洗树脂柱。
(7)：待树脂上水几乎不流时，将步骤(5)所得母液慢慢均匀的倒入树脂柱，加入完毕后，用约36kg纯化水冲洗反应液中的盐，并用1％硝酸银(0.5g硝酸银溶于50g纯化水，棕色试剂瓶保存)检测溶液中是否有氯残留，确定没有氯离子残留后用甲醇约40L冲洗产品，接收液有颜色时开始收集，颜色变为淡粉色后停止收集。
(8)：将收集的接收液减压蒸馏至干。向体系中加入3kg水和2.364kg丙酮，倒入反应釜中，于45℃下搅拌30min，随后向体系中滴入9.356kg丙酮。
(9)：滴加完毕，将反应体系降温至5℃，在0-5℃下保温搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。
(10)：将步骤(9)操作得到的产品加入2.87kg水、2.26kg丙酮，在45℃下搅拌30min，随后向反应液中滴加9.06kg丙酮。
(11)：滴加完成后，将反应液降温至5℃(内温)，计时，保温0-5℃搅拌析晶8小时。随后过滤，滤饼60℃真空干燥3小时，收料。得到甲钴铵粗品。
(12)：向30L反应釜中加入20L水，将体系温度控制至40-45℃，加入200g步骤(11)的粗品，控制内温40-45℃搅拌30min，随后过滤，所得滤液分11次进样，每次进样约1.9L。制备液相进行洗脱，A相：分析级乙醇，B相：纯化水，流速1L/min，波长266nm，从吸收值2000mv开始计时1.0min后，收集馏分，至峰后2000mv时停止收集，将每次收集到的馏分于45-50℃(旋蒸水浴温度)，真空度≧-0.095MPa旋蒸1.5h，将浓缩液倒出。
表22每次设备开启时选择梯度进行平衡
表23进样后选择梯度进行洗脱
/>
表24每次关机前用清洁并保存填料
| 时间min | 流速ml/min | A％ | B％ |
| 0 | 500 | 100 | 0 |
| 40 | 500 | 100 | 0 |
(13)：将所有的馏分全部浓缩后，过树脂柱进行富集。
树脂柱富集操作：称取XDA1600N树脂4.8kg，加入乙醇9.6kg进行溶胀活化，活化时间不得少于5小时(可以提前一天活化)，使用前用纯化水23kg冲洗树脂柱，最后下流溶液无乙醇气味(若有乙醇气味继续使用纯化水冲洗)。将旋蒸后的馏分缓慢、均匀倒入树脂柱中，无液体流出后，用分析级甲醇23.754kg(约30L)冲洗树脂柱，接收液有颜色后开始收集，至液体颜色变为淡粉色时停止收集。
(1)：将所收集到的洗脱液，于45-50℃旋蒸至干。向旋蒸瓶内加入2L水和1.576kg丙酮(2L)，控制水浴锅温度为45-50℃旋转30min，然后向旋蒸瓶内加入4.8g活性炭，旋转30分钟。
(2)：将反应液过滤除去活性炭，转移至反应釜内，随后向反应釜中滴加6.204kg丙酮，滴加完毕后，将反应液降温至5℃(内温)，开始计时，控温0-5℃搅拌析晶8小时。
(3)：析晶结束，过滤，少量的丙酮淋洗滤饼，60℃下真空干燥4小时，收料得到甲钴胺197.49g，收率83.02％。液相检测纯度99.94％，图9为液相色谱图。
表25本实施例制备的甲钴胺的液相图谱的积分结果
/>
Claims (8)
1.一种甲钴胺的合成和精制纯化方法，其特征在于，包括：
(1)以维生素B12为原料，六水合硫酸亚铁(Ⅱ)铵-水为反应液，加入硼氢化钠进行还原反应；(2)以磷酸三甲酯作为甲基化试剂，在碱性条件下用碘化亚铜和碘化锂作为催化剂加入步骤(1)的反应产物中进行甲基化反应；(3)收集反应产物并进行初步分离处理得到甲钴胺粗品；(4)将甲钴胺粗品进行精制纯化得到甲钴胺纯品；
步骤(3)中所述的初步分离处理包括：将反应产物调节pH＝4～5后过滤，经大孔吸附树脂过滤，滤液除盐后在丙酮中析晶得到甲钴胺粗品；
步骤(4)中所述的精制纯化方法包括：(a)将甲钴胺粗品加到纯化水中溶解得到水溶液；(b)水溶液过滤后经制备液相柱分离纯化；(c)纯化液进行浓缩，丙酮析晶，干燥得到甲钴胺纯品。
2.按照权利要求1所述的合成和精制纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述的还原反应的温度控制为≤35℃；步骤(2)中所述的甲基化反应的温度控制为≤35℃。
3.按照权利要求2所述的合成和精制纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述的还原反应的温度控制为20-35℃；步骤(2)中所述的甲基化反应的温度控制为20-35℃。
4.按照权利要求1所述的合成和精制纯化方法，其特征在于，步骤(2)所述的碱性条件的pH值为9-12。
5.按照权利要求1所述的合成和精制纯化方法，其特征在于，步骤(a)中将甲钴胺粗品加到纯化水中溶解时，内温控制在40～45℃，搅拌30-40min。
6.按照权利要求1或5所述的合成和精制纯化方法，其特征在于，步骤(a)中甲钴胺粗品与纯化水的质量比例为1：(80-500)。
7.按照权利要求1所述的合成和精制纯化方法，其特征在于，步骤(b)中制备液相柱填料选自C8或C18。
8.按照权利要求1所述的合成和精制纯化方法，其特征在于，步骤(b)中制备液相柱进行分离纯化时进行梯度洗脱的溶剂选自异丙醇、乙腈、乙醇、甲醇或水中的任何一种或多种。
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