CN114395605A - 一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法、柞蚕蛹蛋白肽及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及食品加工技术领域，特别是涉及一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法、柞蚕蛹蛋白肽及其应用。所述制备方法包括以下步骤：利用碱性蛋白酶将柞蚕蛹蛋白粉进行第一酶解，得到第一酶解物；所述碱性蛋白酶的酶活为200U/mg；利用风味蛋白酶将第一酶解物进行第二酶解，得到所述柞蚕蛹蛋白肽；所述风味蛋白酶的酶活为20U/mg。本发明先利用碱性蛋白酶对柞蚕蛹蛋白粉进行第一酶解，可以最大程度对柞蚕蛹蛋白进行水解；再利用风味蛋白酶对酶解物进行第二酶解，可以有效改善柞蚕蛹多肽的气味，并进一步提高柞蚕蛹蛋白的水解度，增加柞蚕蛹蛋白多肽的生物活性。

Description

一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法、柞蚕蛹蛋白肽及其应用
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，特别是涉及一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法、柞蚕蛹蛋白肽及其应用。
背景技术
抗氧化肽具有抑制生物大分子过氧化或清除体内自由基产物的作用，作为一种来源方便、无毒副作用的新型抗氧化剂深受国内外学者的青睐。有研究表明，柞蚕蛹蛋白肽具有抗疲劳、抗氧化、抗衰老及降血压的功能，可用于治疗白血球减少症，急慢性、中毒性肝炎和生理衰退等病症。关于柞蚕蛹蛋白肽的研究，如闵建华等[i]初步研究了柞蚕蛹蛋白抗氧化活性肽的分离技术，赵鹏[ii]等以柞蚕蛹蛋白为原料，采用酶水解方法获得了柞蚕蛹活性肽。但现有技术制备的柞蚕蛹多肽存在气味较差或水解度较低等问题。因此，急需一种在保证水解度的同时改善柞蚕蛹多肽气味的方法。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法、柞蚕蛹蛋白肽及其应用。本发明提供的制备方法不仅对柞蚕蛹蛋白的水解度高，且能改善柞蚕蛹多肽的气味。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
利用碱性蛋白酶将柞蚕蛹蛋白粉进行第一酶解，得到第一酶解物；所述碱性蛋白酶的酶活为200U/mg；
利用风味蛋白酶将第一酶解物进行第二酶解，得到所述柞蚕蛹蛋白肽；所述风味蛋白酶的酶活为20U/mg。
优选的，所述第一酶解的条件包括：温度为45～55℃，pH值为9.3～9.8，碱性蛋白酶的添加量为2wt.％～3wt.％，柞蚕蛹蛋白粉在第一酶解体系中的浓度为5wt.％～6wt.％，酶解时间为4～6h。
优选的，所述柞蚕蛹蛋白粉在第一酶解体系中的浓度为5wt.％。
优选的，所述第一酶解的pH值为9。
优选的，所述碱性蛋白酶的添加量为2wt.％。
优选的，所述第二酶解的条件包括：温度为48～52℃，pH值为6.8～7.2，风味蛋白酶的添加量为2wt.％～3wt.％，第一酶解物在第二酶解体系中的浓度为5wt.％～6wt.％，酶解时间为1h。
优选的，所述第二酶解的pH值为7。
优选的，得到所述第一酶解物后还包括冻干处理。
本发明还提供了一种柞蚕蛹蛋白肽，包括利用上述制备方法制备得到的柞蚕蛹蛋白肽。
本发明还提供了上述柞蚕蛹蛋白肽在制备抗氧化和/或降血压的试剂或药物中的应用。
有益效果：
本发明提供了一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：利用碱性蛋白酶将柞蚕蛹蛋白粉进行第一酶解，得到第一酶解物；所述碱性蛋白酶的酶活为200U/mg；利用风味蛋白酶将第一酶解物进行第二酶解，得到所述柞蚕蛹蛋白肽；所述风味蛋白酶的酶活为20U/mg。本发明先利用碱性蛋白酶对柞蚕蛹蛋白粉进行第一酶解，可以最大程度对柞蚕蛹蛋白进行水解；再利用风味蛋白酶对酶解物进行第二酶解，可以有效改善柞蚕蛹多肽的气味，并进一步提高柞蚕蛹蛋白的水解度，增加柞蚕蛹蛋白多肽的生物活性。
附图说明
图1为不同蛋白酶在不同酶解时间下的柞蚕蛹蛋白的水解度；
图2为不同底物浓度下的水解度；
图3为不同大小柞蚕蛹肽段对DPPH的清除率；
图4为FRAP标准曲线；
图5为FRAP法测定的不同柞蚕蛹肽段的抗氧化能力；
图6为不同浓度柞蚕蛹蛋白肽总还原力的测定结果；
图7为不同浓度柞蚕蛹蛋白肽Fe2+的螯合能力测定结果。
具体实施方式
本发明提供了一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
利用碱性蛋白酶将柞蚕蛹蛋白粉进行第一酶解，得到第一酶解物；所述碱性蛋白酶的酶活为200U/mg；
利用风味蛋白酶将第一酶解物进行第二酶解，得到所述柞蚕蛹蛋白肽；所述风味蛋白酶的酶活为20U/mg。
如无特殊说明，本发明对制备所述柞蚕蛹蛋白肽时所使用的原料、酶和其他试剂的来源均没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。
本发明利用碱性蛋白酶将柞蚕蛹蛋白粉进行第一酶解，得到第一酶解物；所述碱性蛋白酶的酶活为200U/mg。在本发明中，所述第一酶解的温度优选为45～55℃，更优选为50℃；所述第一酶解的pH值优选为为9.3～9.8，更优选为9.5；所述第一酶解的碱性蛋白酶的添加量(即在第一酶解体系中的浓度)优选为2wt.％～3wt.％，更优选为2wt.％；所述第一酶解的柞蚕蛹蛋白粉在第一酶解体系中的浓度优选为5wt.％～6wt.％，更优选为5wt.％；所述第一酶解的酶解时间优选为4～6h，更优选为4h。本发明利用碱性蛋白酶对柞蚕蛹蛋白粉进行第一酶解，可以最大程度地对柞蚕蛹蛋白进行水解；另外通过适宜的酶解条件可以进一步提高柞蚕蛹蛋白的水解度。
得到第一酶解物后，本发明利用风味蛋白酶将第一酶解物进行第二酶解，得到所述柞蚕蛹蛋白肽；所述风味蛋白酶的酶活为20U/mg。在本发明中，得到所述第一酶解物后还优选包括冻干处理，即第二酶解的底物优选为冻干处理后的第一酶解物。本发明对所述冻干处理的操作方式没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的操作方式即可。
在本发明中，所述第二酶解的温度优选为48～52℃，更优选为50℃；所述第二酶解的pH值优选为6.8～7.2，更优选为7；所述第二酶解的风味蛋白酶的添加量(即在第二酶解体系中的浓度)优选为2wt.％～3wt.％，更优选为2wt.％；所述第二酶解的第一酶解物在第二酶解体系中的浓度优选为5wt.％～6wt.％，更优选为5wt.％；所述第二酶解的酶解时间优选为1h。
本发明利用风味蛋白酶对酶解物进行第二酶解，可以将呈苦味的多肽降解为氨基酸，使Pro(脯氨酸)在N端裸露，Lys(赖氨酸)在N端和C端裸露，Gly(甘氨酸)在C端裸露，疏水氨基酸裸露减少，苦味降低，从而有效改善柞蚕蛹多肽的气味，并进一步提高柞蚕蛹蛋白的水解度，增加柞蚕蛹蛋白多肽的生物活性。
本发明还提供了一种柞蚕蛹蛋白肽，包括利用上述制备方法制备得到的柞蚕蛹蛋白肽。本发明提供的柞蚕蛹蛋白肽抗氧化作用强，其中小于100KD的多肽对DPPH自由基的清除率能达到94％以上，所述柞蚕蛹蛋白肽溶液浓度为0.1mg/mL时，其铁螯合能力可达96.4％，具有较强的抗氧化能力和总还原力，并呈现剂量依赖；另外，本发明提供柞蚕蛹蛋白肽还有较强的降血压活性。
本发明还提供了上述柞蚕蛹蛋白肽在制备抗氧化和/或降血压的试剂或药物中的应用。本发明提供柞蚕蛹蛋白肽具有较强抗氧化能力和降血压活性，具体机理同上，在此不再赘述。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法、柞蚕蛹蛋白肽及其应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法，由以下步骤组成：
1)将0.5g柞蚕蛹蛋白粉(购自吉林省蚕业科学研究院，货号001)溶解于10mL pH值为9.5的缓冲液中，加入0.2g碱性蛋白酶(购自诺维信，货号9014-01-1，酶活为200U/mg)，使柞蚕蛹蛋白粉在酶解液中的浓度为5wt.％，碱性蛋白酶在酶解液中的浓度为2wt.％，于50℃中水浴4h，得到初级酶解物；
2)将步骤1)得到的初级酶解物冻干，得到初级多肽冻干粉；
3)将0.5g初级多肽冻干粉溶解于10mLpH值为7的缓冲液中，加入0.2g风味蛋白酶(购自上海源叶生物科技有限公司，货号YY-021，酶活为20U/mg)，使初级多肽冻干粉在酶解液中的浓度为5wt.％，风味蛋白酶在酶解液中的浓度为2wt.％，于50℃中水浴1h，得到柞蚕蛹多肽。
对比例1
一种与实施例1相似的柞蚕蛹多肽的制备方法，唯一区别在于，未进行步骤2)和步骤3)的操作。
对比例2
一种与对比例1相似的柞蚕蛹多肽的制备方法，区别在于，缓冲液的pH值为9.0，柞蚕蛹蛋白粉在酶解液中的浓度为3wt.％，碱性蛋白酶在酶解液中的浓度为3wt.％。
对比例3
一种与对比例2相似的柞蚕蛹多肽的制备方法，区别在于，缓冲液的pH值为7.0，将碱性蛋白酶替换为中性蛋白酶。
对比例4
一种与对比例2相似的柞蚕蛹多肽的制备方法，区别在于，将碱性蛋白酶替换为风味蛋白酶。
对比例5
一种与对比例2相似的柞蚕蛹多肽的制备方法，区别在于，缓冲液的pH值为6.0，将碱性蛋白酶替换为酸性蛋白酶。
对比例6
一种与对比例2相似的柞蚕蛹多肽的制备方法，区别在于，缓冲液的pH值为5.0，将碱性蛋白酶替换为胰蛋白酶。
根据文献【Mahta Mirzaei,Saeed Mirdamadi,Mohamad RezaEhsani,etal.Purification and identification of antioxidant and ACE-inhibitory peptidefrom Saccharomyces cerevisiae protein hydrolysate[J].Journal of FunctionalFoods,2015,19:259-268.】记载的方法，测定对比例2～6不同制备方法分别在酶解1h、3h和5h时柞蚕蛹蛋白粉的水解度，测定结果见图1和表1。
表1不同制备方法柞蚕蛹蛋白粉的水解度(OD340)
Figure BDA0003511807710000051
由图1和表1可以看出，在相同酶解时间内(1h，3h，5h)，碱性蛋白酶的酶解效果均优于其他蛋白酶。中性蛋白酶水解度与碱性蛋白酶接近，但其制备的柞蚕蛹蛋白肽气味较差。
对比例7
根据文献【Mahta Mirzaei,Saeed Mirdamadi,Mohamad RezaEhsani,etal.Purification and identification of antioxidant and ACE-inhibitory peptidefrom Saccharomyces cerevisiae protein hydrolysate[J].Journal of FunctionalFoods,2015,19:259-268.】记载的方法，测定对比例1在底物浓度(柞蚕蛹蛋白粉在酶解液中的质量浓度)为1％、2％、3％、4％、5％和6％时柞蚕蛹蛋白的水解度，测定结果见图2和表2。
表2不同底物浓度柞蚕蛹蛋白粉的水解度(％)
底物浓度 1％ 2％ 3％ 4％ 5％ 6％
水解度 5.5 7.4 10.1 20 29 27.8
由图2和表2可知，酶解液中不同底物浓度的水解度呈现先升高后降低的趋势，在底物浓度为5％时达到最大水解度。
对比例8
采用文献【黄静雅,张禹,朴美兰,魏福安,李晓艳,李喜升.酶解制备柞蚕蛹多肽及柠檬酸改善风味研究[J].北方蚕业,2020,41(02):6-13.】记载的方法，对实施例1和对比例1～6制备的柞蚕蛹多肽进行感官评价，评分指标见表3，评分结果见表4。
表3柞蚕蛹多肽感官评分指标
评分 色泽 气味 口感
7～10分 浅黄色、均一、明亮 香气舒适 舒适
5～7分 黄色、较明亮 可以接受 一般
0～5分 暗沉 刺鼻 较差
表4柞蚕蛹多肽感官评分结果
处理 分数/分
实施例1(碱性蛋白酶+风味蛋白酶) 9
对比例1(碱性蛋白酶) 6
对比例2(碱性蛋白酶) 5
对比例3(中性蛋白酶) 4
对比例4(风味蛋白酶) 7
对比例5(酸性蛋白酶) 4
对比例6(胰蛋白酶) 4
由表4可知，本发明提供的制备方法可以有效改善柞蚕蛹多肽的气味。
应用例1
1.DPPH自由基清除能力的测定
将实施例1制备的柞蚕蛹蛋白肽经截留量不同的超滤膜包分离得到不同分子量(<1KD、<3KD、<10KD、<30KD和<100KD)多肽冻干处理，得到冻干粉；将所述不同分子量的冻干粉分别溶于去离子水中配制成柞蚕蛹肽液(浓度均为20mg/mL)，分别记为处理组1～5；
将实施例1制备的柞蚕蛹蛋白肽冻干处理，得到总多肽冻干粉；将所述总多肽冻干粉溶于去离子水中配制成不同浓度的柞蚕蛹肽液(浓度分别为：0、0.005mg/mL、0.01mg/mL、0.05mg/mL，0.25mg/mL和1mg/mL)，记为处理组6～11，以相同浓度的还原性谷胱甘肽做为对照，比较对DPPH自由基的清除能力。不同处理组实验方案见表5。
表5DPPH自由基清除能力的测定方案
试剂 A A(R) A(S) A1 A2
DPPH/mL 0.6 0.6 0.6 - -
蒸馏水/mL 0.2 - - - -
无水乙醇/mL - - - 0.6 0.6
谷胱甘肽/mL - 0.2 - 0.2 -
柞蚕蛹肽/mL - - 0.2 - 0.2
将每个处理组按表5的配比配制并充分混匀，在20℃避光反应30min，以蒸馏水为空白，在OD517处测定溶液吸光值并根据公式Ⅰ和Ⅱ计算谷胱甘肽和柞蚕蛹肽对DPPH自由基的清除率。结果见表6和图3。
Figure BDA0003511807710000071
Figure BDA0003511807710000072
表6不同处理组对DPPH自由基的清除率
柞蚕蛹蛋白多肽分子量 <1KD <3KD <10KD <30KD <100KD >100KD
清除率 98.86％ 96.57％ 94.19％ 98％ 97.58％ 82.35％
柞蚕蛹蛋白肽液浓度(mg/ml) 0 0.005 0.01 0.05 0.25 1
清除率 18.52％ 19％ 33％ 49％ 51.00％ 79.06％
谷胱甘肽浓度(mg/ml) 0 0.005 0.01 0.05 0.25 1
清除率 18.52％ 28.43％ 32.60％ 69.63％ 77.03％ 91.67％
由表6和图3可以看出，大于100KD的组分，DPPH清除率降至82％，远低于其他分子量的肽段。小于100KD的肽段，抗氧化活性较强，均能＞94％。随着分子量的增加，抗氧化性能逐渐降低，分子量30KD～100KD及＜1k的肽段，抗氧化活性最强；另外不同浓度的柞蚕蛹蛋白肽的DPPH自由基的清除率和阳性对照组谷胱甘肽的清除率接近；说明本发明制备的柞蚕蛹蛋白肽具有良好的DPPH自由基清楚效果。
应用例2
FRAP法测定总抗氧化能力
采用应用例1相同的处理方式进行分组(去除分子量大于100KD的分组)，测定不同分子量柞蚕蛹蛋白肽、不同浓度柞蚕蛹蛋白肽和不同浓度谷胱甘肽对ABTS自由基的清除能力，实验方案见表7和表8。
表7FRAP标准曲线绘制方案
溶液 1 2 3 4 5 6 7
硫酸亚铁/mL 0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10
蒸馏水/mL 0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0
FRAP工作液/mL 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4
将表7中的1～7组溶液充分混合后，在37℃的恒温室中进行10分钟的避光反应，并在OD593下测量溶液的吸收值。用横坐标代表FeSO4标准液体浓度，纵坐标代表吸光值，绘制标准曲线，见图4。
表8样品与FRAP工作液反应方案
溶液 A A(R) A(S)
谷胱甘肽/mL - 0.1 -
柞蚕蛹肽/mL - - 0.1
蒸馏水/mL 0.1 - -
工作液/mL 2.4 2.4 2.4
将每个处理组按表8的配比配制并充分混匀，置于37℃的恒温箱中并反应10分钟，并用OD593测量溶液的吸光度。
结果计算：以1mM FeSO4为标准，样品的抗氧化活性以达到相同的吸光值为一个FRAP值。FRAP值越高，抗氧化活性越高。结果见图5和表9。
表9不同处理组OD593吸光度结果
蚕蛹蛋白多肽分子量 <1KD <3KD <10KD <30KD <100KD
OD<sub>593</sub> 1.791 1.625 2.138 1.331 1.841
蚕蛹蛋白肽液浓度(mg/ml) 0 0.005 0.01 0.05 0.25 1
OD<sub>593</sub> 0.423 0.488 0.474 0.483 0.48 0.52
谷胱甘肽浓度(mg/ml) 0 0.005 0.01 0.05 0.25 1
OD<sub>593</sub> 0.423 0.416 0.441 0.445 0.455 0.488
1mmolFeSO<sub>4</sub>添加量(ml) 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1
OD<sub>593</sub> 0.443 0.546 0.6 0.72 0.798 0.804
从图5和表9可以看出，3～10KD的柞蚕蛹蛋白肽总抗氧化能力最高，10～30KD的柞蚕蛹蛋白肽抗氧化能力最低。
应用例3
以GSH为阳性对照，采用铁氰化钾法测定柞蚕蛹肽总还原力，以表征其抗氧化性。
采用应用例1相同的处理方式进行分组，测定不同浓度(0、0.25、0.5、1、3、5和10mg/ml)柞蚕蛹蛋白肽和不同浓度(0、0.25、0.5、1、3、5和10mg/ml)谷胱甘肽的总还原力，实验方案见表10和图6。
表10总还原力的测定方案
溶液 A A(R) A(S) A1 A2
磷酸盐缓冲液/mL 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
蒸馏水/mL 0.25 - - 0.25 0.25
谷胱甘肽/mL - 0.25 - 0.25 -
柞蚕蛹肽/mL - - 0.25 - 0.25
铁氰化钾/mL 0.25 0.25 0.25 - -
参考文献【Kimatu Benard Muinde,Liyan Zhao,Yuan Biao,et al.Antioxidantpotential of edible mushroom(Agaricus bisporus)protein hydrolysates and theirultrafiltration fractions[J].Food chemistry,2017,230:58-67.】记载的方法，根据公式Ⅲ和Ⅳ计算柞蚕蛹蛋白肽总还原力。
Figure BDA0003511807710000091
Figure BDA0003511807710000092
表11不同处理组总还原力测定结果(％)
蚕蛹蛋白肽液浓度(mg/ml) 0 0.005 0.01 0.05 0.25 1
总还原力 0 39 49 81 93 93
谷胱甘肽浓度(mg/ml) 0 0.005 0.01 0.05 0.25 1
总还原力 0 11 32 73 80 82
如表11和图6可知，当浓度小于2.5mg/mL时，柞蚕蛹肽和GSH的总还原力均随浓度增大而明显上升，分别为86.8％和96.3％，此时，柞蚕蛹肽总还原力为GSH的90.1％。柞蚕蛹肽和GSH总还原力最强的浓度均为10mg/mL，总还原力分别为87.5％和97.0％，此时，柞蚕蛹肽总还原力为GSH的90.2％。上述结果表明：与GSH相比，柞蚕蛹肽具有较高的总还原力，并呈现剂量依赖，说明其通过较好的还原力而表现出较强的抗氧化性。
应用例4
金属Fe2+螯合力的活性测定
采用应用例1相同的处理方式进行分组，测定不同浓度(0、0.25、0.5、1、3、5和10mg/ml)柞蚕蛹蛋白肽和不同浓度(0、0.25、0.5、1、3、5和10mg/ml)EDTA对金属Fe2+螯合力的活性，测定实验方案见表12。
表12金属Fe2+螯合力的测定方案
溶液 A A(E) A(S) A1 A2
柠檬酸/mL - 0.2 - 0.1 -
柞蚕蛹肽/mL - - 0.2 - 0.2
氯化亚铁/mL 0.01 0.01 0.01 - -
蒸馏水/mL 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6
菲洛嗪/mL 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
按柠檬酸、柞蚕蛹肽、氯化亚铁、蒸馏水的顺序加入溶液，最后加入菲洛嗪后剧烈振荡2min，25℃恒温培养箱反应10min后马上测定。以蒸馏水做空白，在OD562处测定溶液吸光值并根据公式Ⅴ和Ⅵ计算谷胱甘肽和柞蚕蛹肽的Fe2+螯合力。结果见表13和图7。
Figure BDA0003511807710000101
Figure BDA0003511807710000102
表13不同处理组对Fe2+螯合能力测定结果(％)
Figure BDA0003511807710000103
由图7和表13可知，柞蚕蛹肽铁螯合能力很强，当浓度为0.1mg/mL时，铁螯合能力可达96.4％。当浓度为10mg/mL时，铁螯合能力最大，为99.8％。上述结果表明：柞蚕蛹肽具有很好的铁螯合能力，说明其通过此途径表现较强的抗氧化能力。
综上所述，本发明提供的柞蚕蛹蛋白肽抗氧化作用强，其中小于100KD的多肽对DPPH自由基的清除率能达到94％以上，所述柞蚕蛹蛋白肽溶液浓度为0.1mg/mL时，其铁螯合能力可达96.4％，具有较强的抗氧化能力和总还原力，并呈现剂量依赖；另外，本发明提供柞蚕蛹蛋白肽还有较强的降血压活性。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种柞蚕蛹蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
利用碱性蛋白酶将柞蚕蛹蛋白粉进行第一酶解，得到第一酶解物；所述碱性蛋白酶的酶活为200U/mg；
利用风味蛋白酶将第一酶解物进行第二酶解，得到所述柞蚕蛹蛋白肽；所述风味蛋白酶的酶活为20U/mg。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一酶解的条件包括：温度为45～55℃，pH值为9.3～9.8，碱性蛋白酶的添加量为2wt.％～3wt.％，柞蚕蛹蛋白粉在第一酶解体系中的浓度为5wt.％～6wt.％，酶解时间为4～6h。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述柞蚕蛹蛋白粉在第一酶解体系中的浓度为5wt.％。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述第一酶解的pH值为9。
5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋白酶的添加量为2wt.％。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第二酶解的条件包括：温度为48～52℃，pH值为6.8～7.2，风味蛋白酶的添加量为2wt.％～3wt.％，第一酶解物在第二酶解体系中的浓度为5wt.％～6wt.％，酶解时间为1h。
7.根据权利要求1或6所述的制备方法，其特征在于，所述第二酶解的pH值为7。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，得到所述第一酶解物后还包括冻干处理。
9.一种柞蚕蛹蛋白肽，其特征在于，包括利用权利要求1～8任一项所述制备方法制备得到的柞蚕蛹蛋白肽。
10.权利要求9所述柞蚕蛹蛋白肽在制备抗氧化和/或降血压的试剂或药物中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115232851A (zh) * 2022-09-01 2022-10-25 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 一种蚕蛹免疫肽及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107779489A (zh) * 2017-11-07 2018-03-09 安徽国肽生物科技有限公司 一种具有抗氧化和ace抑制功能的蚕蛹蛋白肽
CN108456707A (zh) * 2018-05-16 2018-08-28 西南大学 一种蚕蛹蛋白抗氧化肽的制备方法及蚕蛹蛋白抗氧化肽的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107779489A (zh) * 2017-11-07 2018-03-09 安徽国肽生物科技有限公司 一种具有抗氧化和ace抑制功能的蚕蛹蛋白肽
CN108456707A (zh) * 2018-05-16 2018-08-28 西南大学 一种蚕蛹蛋白抗氧化肽的制备方法及蚕蛹蛋白抗氧化肽的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘偲琪: "蚕蛹肽的制备以及功能活性的研究", 中国优秀硕士学位论文全文数据库•工程科技Ⅰ辑 *
鲁珍等: "蚕蛹蛋白酶法水解及美拉德反应改良其产物风味的研究", 食品工业科技 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115232851A (zh) * 2022-09-01 2022-10-25 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 一种蚕蛹免疫肽及其制备方法和应用
CN115232851B (zh) * 2022-09-01 2023-09-05 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 一种蚕蛹免疫肽及其制备方法和应用

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