CN107779489A - 一种具有抗氧化和ace抑制功能的蚕蛹蛋白肽 - Google Patents

一种具有抗氧化和ace抑制功能的蚕蛹蛋白肽 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽。该蚕蛹蛋白肽的制备方法包括：(1)蚕蛹蛋白粉中加水，在高温下处理得到蚕蛹蛋白液；(2)超声处理蚕蛹蛋白液；(3)加入复合蛋白酶酶解，同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；(4)分离液通过二步超滤法处理；(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。本发明方法操作简单，适于产业化生产，酶用量少，制备过程无需添加酸或碱调节pH值，且不添加任何添加剂，较好地保持产品的功能特性，得率高，风味好，所得的蚕蛹蛋白肽具有优异的ACE抑制活性，IC50小于320μg/mL，且具有较好的抗氧化功能，广泛应用于特需食品和营养食品的制造。

Description

一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，具体地涉及一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽及其制备方法。
背景技术
蛋白质经过水解得到多肽，使得蛋白质的结构被改变，疏水区的活性官能基团暴露，随着肽键的裂解，游离氨基酸增加，从而可以提供质子或电子源，保持较高的氧化还原电位，使其具有清除活性自由基的能力，还原力，具有抑制脂质过氧化作用的发生，从而抗氧化肽的抗氧化活性得以提高。氧化对需氧生物特别是脊椎动物和人类是一个重要的代谢过程，但是它却导致了自由基的形成。自由基是高度不稳定的、易于和其他分子发生化学反应，活性氧自由基(ROS)被认为能引起氧化应激。氧化应激涉及多种人类疾病如动脉粥样硬化，糖尿病，神经系统疾病，如阿尔茨海默病，帕金森氏病等等，以及老龄化。在食品体系中，脂类或蛋白质可能会受到ROS的攻击经历氧化过程，从而导致食品产生不愉快味道，颜色发暗，同时也可能产生潜在的毒性产物。抗氧化多肽的应用能使人体免受氧化应激的破坏，并防止食品成分由于捐献电子给ROS以及中和ROS的负面作用而变质。因此抗氧化肽在医学、化妆品、生物、食品领域有广泛的应用价值。
血管紧张素转化酶(Angiotensin I converting enzyme，ACE)为肾素-血管紧张素系统的关键酶。血管紧张素原在肾素的作用下转化为血管紧张素I，血管紧张素I在ACE的作用下转化为血管紧张素II，刺激血管收缩，造成血压上升。抑制ACE的活性对降低血压有着积极的作用，因而开发有效的ACE抑制剂引起人们的极大关注。虽然来源于食物的ACE抑制肽比人工合成的ACE抑制剂作用弱，但是它有其独特的优点，不会产生降压过度的问题，安全性高，无副作用，除降压功能外，往往同时具有免疫促进、易消化吸收等功能。由于药物疗法存在副作用，天然食物中的降血压功能因子的开发利用将成为今后高血压非药物治疗的重要部分。
现有技术中关于ACE抑制肽开发的报道，主要是通过酶解的方法从水产动物体或牛乳乳清蛋白源获得ACE抑制肽，酶解过程通常都需要通过添加酸或碱来调节体系的pH值，这无疑影响了获得的ACE抑制肽产品的功能特性，且增加了操作的繁琐程度，这些方法均不同程度地增加了操作步骤和生产成本，制约了产业化规模化ACE抑制肽的生产及蛋白肽的得率。目前国内外专利中未见利用蚕蛹为原料制备同时具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽的报道。
本发明针对目前蚕蛹蛋白产品开发的现状，利用蚕蛹蛋白粉为原料，在不添加任何酸和碱条件下，利用多种蛋白酶复合酶解，通过膜分离和凝胶分离技术，开发了同时具有特定降压和抗氧化功能的蚕蛹蛋白肽，建立一套简单高效的多功能的蚕蛹蛋白肽的制备方法。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是在于提供一种具有ACE抑制和抗氧化功能的蚕蛹蛋白肽。
本发明的另一目的在于提供上述蚕蛹蛋白肽的制备方法。
本发明的再一个目的在于提供上述蚕蛹蛋白肽的应用。
为了实现上述技术目的，本发明提供了一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽，包括以下步骤:
(1)蚕蛹蛋白粉中加水，在高温下处理得到蚕蛹蛋白液；
(2)超声处理蚕蛹蛋白液；
(3)加入复合蛋白酶酶解，酶解过程同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；
(4)分离液通过二步超滤法处理；
(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。
上述制备方法中，步骤(1)水与蚕蛹蛋白粉的质量比为10-15:1，所述高温下处理为100-121℃搅拌1-3小时。
步骤(2)超声处理方法为将步骤(1)得到的蚕蛹蛋白液调至75-80℃，75-100kH的超声频率处理25-30min。优选80kH的超声频率处理25-30min。
本发明通过大量实验发现，蚕蛹蛋白液温度调至75-80℃进行超声处理，效果最好，能够较好地改变蚕蛹蛋白的组织结构，使下面酶解步骤缩短酶解时间和使用较少的酶量，就能够获得优质的蛋白肽。
步骤(3)按照蚕蛹蛋白液总重量的0.9-1.4％(优选参数值1.2％)的重量百分比加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶组成，四者质量比为1：(1-2):(1-2):1。
步骤(3)的酶解条件为50-65℃(优选参数值55℃)酶解1.5-3.5小时(优选参数值2.5小时)；步骤(3)所述超声处理是25-40kH处理；步骤(3)酶解之后于90-95℃下保温10-20min，冷却至65-75℃(优选参数值70℃)，过滤分离，收集分离液。在本发明的实施例中，是通过硅藻土进行过滤分离，然后收集分离液。本领域技术人员可以采用任何具有等同效果的分离方式进行过滤分离。
步骤(4)的两步超滤法为先用孔径为3000D的膜超滤，再用孔径为1000D的膜超滤，得到分子量小于1000D的蛋白肽。
具体地，是利用孔径为3000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于3000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为1000道尔顿的膜将分子量小于1000道尔顿的蛋白肽分离出来。
步骤(5)滤液过柱分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第3个洗脱峰，浓缩、冷冻干燥得到蚕蛹蛋白肽。
具体地，取分子量为小于1000的蛋白肽液，再经过Sephadex G-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第3个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第13-14分钟洗脱出来的肽液；将步骤(5)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽粉。
通过LC-MS/MS对蚕蛹蛋白肽的主要成分进行测定，其氨基酸序列为IDPEIQK(异亮氨酸-天冬氨酸-脯氨酸-谷氨酸-异亮氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸)、IDKVRF(异亮氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-缬氨酸-精氨酸-苯丙氨酸)、KNYSPY(赖氨酸-天冬酰胺-酪氨酸-丝氨酸-脯氨酸-酪氨酸)的肽的含量共计83％～90％，其中IDPEIQK(27％-31％)、IDKVRF(30％-37％)、KNYSPY(24％-30％)。所述％均为质量百分比。
上述制备方法制备得到的蚕蛹蛋白肽属于本发明的保护范围。本发明通过实验发现，本发明上述方法制备得到的蚕蛹蛋白肽具有优异的ACE抑制和抗氧化功能。
进而，本发明提供了该蚕蛹蛋白肽在制备降血压或抗氧化药物中的应用。含有本发明方法制得的蚕蛹蛋白肽的食品、保健品或药物也属于本发明的保护范围。
本发明发现氨基酸序列如SEQ ID NO.1-3所示的肽均具有抗氧化和ACE抑制功能。
进一步地，本发明提供了氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示的肽在制备食品、保健品或药物中的应用。
本发明的优点在于：
(1)本发明提出蚕蛹蛋白肽制备全过程同步利用不同频率的超声波处理，制备方法简单，整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。
(2)本发明的蛋白肽具有很好的抗氧化和ACE抑制功能，蚕蛹蛋白肽的清除DPPH自由基能力达到93％以上，还原力达到0.90以上，其ORAC为21以上，其中IDPEIQK肽清除DPPH自由基能力达到96％以上，还原力达到0.94以上，其ORAC为22以上。蚕蛹蛋白肽的ACE抑制活性(IC50值)小于320ug/mL，IDKVRF肽的ACE抑制活性(IC50值)小于270ug/mL。
(3)本发明利用特定频率超声波技术处理的蚕蛹蛋白液，可以明显改善蚕蛹蛋白对酶的敏感性，降低酶的使用量。
(4)开发的产品安全，本发明采用多种食品级复合蛋白酶(碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶)，经在温和条件下，经过适度酶解获得特定分子量和肽组成的蚕蛹蛋白肽，不加任何添加剂，为100％蚕蛹蛋白肽。
(5)本发明开发的蛋白肽，具有良好的风味和色泽，能广泛应用于特需食品和营养食品。
(6)本发明开发蛋白肽中分子量小于1000的肽的比例为95％以上，具有非常明确的肽的组成。
具体实施方式
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除有特别说明，本发明中用到的各种试剂、原料均为可以从市场上购买的商品或者可以通过公知的方法制得的产品。蚕蛹蛋白粉购自四川绵竹市瑞洋生物技术有限公司，碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶均购自诺维信(中国)投资有限公司，木瓜蛋白酶购自南宁庞博生物工程有限公司。
实施例1具有ACE抑制和抗氧化功能的蚕蛹蛋白肽的制备
(1)选用蚕蛹蛋白粉100克，加入蚕蛹粉总量10.0倍的水在121℃条件下处理1小时，得到蚕蛹蛋白液。
(2)将步骤(1)得到的蚕蛹蛋白液，温度调整到75℃，利用超声波发生器经超声波(频率为80kH)处理25分钟，改变蚕蛹蛋白的组织结构。
(3)按照蚕蛹液中蚕蛹蛋白重量0.9％的重量百分比加入复合蛋白酶进行酶解(复合蛋白酶组成：碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶组成，它们之间的质量比为1：1：2：1)，在60℃条件下进行酶解反应1.5h，酶解过程同步利用超声波发生器(频率为25kH)处理；在95℃下保温10分钟，冷却至75℃，通过硅藻土进行过滤分离，收集分离液；
(4)将步骤(3)所得的分离液通过二步超滤方法进行处理，利用孔径为3000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于3000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为1000道尔顿的膜将分子量小于1000道尔顿的蛋白肽分离出来。
(5)取分子量为小于1000的蛋白肽液，再经过Sephadex G-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第3个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第13-14分钟洗脱出来的肽液；
(6)将步骤(5)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽粉。通过LC-MS/MS对蚕蛹蛋白肽的主要成分进行测定，其氨基酸序列为IDPEIQK(异亮氨酸-天冬氨酸-脯氨酸-谷氨酸-异亮氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸)、IDKVRF(异亮氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-缬氨酸-精氨酸-苯丙氨酸)、KNYSPY(赖氨酸-天冬酰胺-酪氨酸-丝氨酸-脯氨酸-酪氨酸)的肽的含量为86％，其中IDPEIQK(30％)、IDKVRF(30％)、KNYSPY(26％)。
实施例2具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽的制备
(1)选用蚕蛹蛋白粉500克，加入蚕蛹粉总量15.0倍的水在115℃条件下处理2小时，得到蚕蛹液。
(2)将步骤(1)得到的蚕蛹蛋白液，温度调整到80℃，利用超声波发生器经超声波(频率为100kH)处理27分钟，改变蚕蛹蛋白的组织结构。
(3)按照蚕蛹液中蚕蛹蛋白重量1.2％的重量百分比加入复合蛋白酶进行酶解(复合蛋白酶组成：碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶组成，它们之间的质量比为1：2：1：1)，在55℃条件下进行酶解反应2.5h，酶解过程同步利用超声波发生器(频率为30kH)处理；在90℃下保温20分钟，冷却至70℃，通过硅藻土进行过滤分离，收集分离液；
(4)将步骤(3)所得的分离液通过二步超滤方法进行处理，利用孔径为3000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于3000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为1000道尔顿的膜将分子量小于1000道尔顿的蛋白肽分离出来。
(5)取分子量为小于1000的蛋白肽液，再经过Sephadex G-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第3个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第13-14分钟洗脱出来的肽液；
(6)将步骤(5)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽粉。通过LC-MS/MS对蚕蛹蛋白肽的主要成分进行测定，其氨基酸序列为IDPEIQK(异亮氨酸-天冬氨酸-脯氨酸-谷氨酸-异亮氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸)、IDKVRF(异亮氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-缬氨酸-精氨酸-苯丙氨酸)、KNYSPY(赖氨酸-天冬酰胺-酪氨酸-丝氨酸-脯氨酸-酪氨酸)的肽的含量为88％，其中IDPEIQK(29％)、IDKVRF(32％)、KNYSPY(27％)。
实施例3具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽的制备
(1)选用蚕蛹蛋白粉1000克，加入蚕蛹粉总量12.0倍的水在105℃条件下处理3小时，得到蚕蛹液。
(2)将步骤(1)得到的蚕蛹蛋白液，温度调整到80℃，利用超声波发生器经超声波(频率为90kH)处理30分钟，改变蚕蛹蛋白的组织结构。
(3)按照蚕蛹液中蚕蛹蛋白重量1.4％的重量百分比加入复合蛋白酶进行酶解(复合蛋白酶组成：碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶组成，它们之间的质量比为1：1：1：1)，在60℃条件下进行酶解反应3.5h，酶解过程同步利用超声波发生器(频率为30kH)处理；在95℃下保温10分钟，冷却至75℃，通过硅藻土进行过滤分离，收集分离液；
(4)将步骤(3)所得的分离液通过二步超滤方法进行处理，利用孔径为3000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于3000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为1000道尔顿的膜将分子量小于1000道尔顿的蛋白肽分离出来。
(5)取分子量为小于1000的蛋白肽液，再经过Sephadex G-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第3个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第13-14分钟洗脱出来的肽液；
(6)将步骤(5)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽粉。通过LC-MS/MS对蚕蛹蛋白肽的主要成分进行测定，其氨基酸序列为IDPEIQK(异亮氨酸-天冬氨酸-脯氨酸-谷氨酸-异亮氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸)、IDKVRF(异亮氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-缬氨酸-精氨酸-苯丙氨酸)、KNYSPY(赖氨酸-天冬酰胺-酪氨酸-丝氨酸-脯氨酸-酪氨酸)的肽的含量为87％，其中IDPEIQK(30％)、IDKVRF(31％)、KNYSPY(26％)。
实施例4蚕蛹蛋白肽抗氧化能力的测定试验
1、试验样品：样品1、2、3分别为实施例1、实施例2、实施例3制备的蚕蛹蛋白肽，样品4为实施例1的样品蚕蛹蛋白粉。
2、按照如下方法进行：
(1)清除DPPH自由基能力：取1.5mL，20μg/mL的抗氧化多肽，加入1.5mL 99.5％的乙醇和0.675mL的0.02％DPPH乙醇溶液混合，振荡混匀，室温下避光水浴30min，然后在517nm下检测体系吸光值。吸光值越低，体系的清除DPPH自由基能力越强。空白即是将1.5mL样品溶液换成1.5mL去离子水。
DPPH自由基清除能力％＝[(空白吸光值-样品吸光值)/空白吸光值]×100
(2)还原力的测定：取1mL，20μg/mL的抗氧化多肽，加入2.5mL 0.2M磷酸缓冲液(pH6.6)和2.5mL 1％(质量分数)的铁氰化钾溶液，混匀后放入50℃水浴加热20min。取出迅速冷却，加入2.5mL 10％(质量分数)三氯乙酸(TCA)溶液，混合均匀后用3000g离心10min。取上清液2.5mL，加入2.5mL去离子水和0.5mL 1％(质量分数)三氯化铁溶液，充分混匀，在室温下反应10min后，用700nm波长测定吸光度。还原力即可用700nm波长处吸光值表示。
(3)氧化自由基吸收能力(ORAC)：不同浓度的抗氧化多肽溶液20μL与75mM磷酸盐缓冲液80μL(pH 7.4)及50μL 200nM的荧光试剂充分混合后在37℃温育15min，然后再加入50μL 80mM的AAPH溶液。用酶标仪每分钟读取荧光值共进行100min。荧光的激发波长和发射波长分别是485nm和538nm。用磷酸缓冲溶液代替样品作为空白。以Trolox作为标准对照，使用的浓度为0，2，4，8，12，16μM，绘制荧光淬灭曲线，并计算荧光淬灭曲线下的积分面积(AUC)。AUC的计算公式如下：
其中：f0是0min时荧光值，fi是第i min时的荧光值。
ORAC值用样品曲线的斜率与Trolox曲线的斜率之比，ORAC值得单位表示为μMTrolox/mg肽。
实施例5蚕蛹蛋白肽血管紧张素转化酶(ACE)抑制能力的测定试验
1、试验样品：样品1、2、3分别为实施例1、实施例2、实施例3制备的蚕蛹蛋白肽，样品4为实施例1蚕蛹蛋白粉。
ACE抑制能力按照如下方法进行：
2、ACE抑制率的方法。用高效液相色谱可以在228nm下定量检测释放出的Hip量，从而计算出多肽的ACE抑制率。
(1)试剂的配置
pH8.3的磷酸盐缓冲溶液：用超纯水配制，其中含磷酸盐50mmol/L，NaCl 300mmol/L，调整pH到8.3；
ACE酶液：将2mL的磷酸盐缓冲液加入1U的ACE中，使其浓度变为0.5U/mL。
HHL溶液：使用磷酸缓冲液溶解HHL，使其终浓度为5mmol/L。
样品溶液：称取适量样品，用磷酸盐缓冲液所需浓度的溶液。
(2)ACE抑制率测定的色谱条件
检测波长：228nm；流速:1mL/min；流动相A:超纯水(含0.1％三氟乙酸)，流动相B:甲醇(含0.1％三氟乙酸)；进样量:10μL，手动进样；
(3)测定ACE抑制活性的方法
取120μL HHL底物溶液，加入20μL的样品混合均匀，在37℃恒温水浴中保温10min。然后加入10μL ACE酶液在37℃恒温水浴中反应30min，再加入150μL 1mol/L的HCl终止反应，得到反应液。该反应液利用HPLC进行分析，同时设置空白对照组。ACE抑制活性计算公式如下：
ACE抑制活性％＝(M-N)/M×100,
式中，M为对照组中马尿酸的峰面积，N为添加的样品组中马尿酸的峰面积。
(4)马尿酸标准曲线的绘制方法
用双蒸水将马尿酸溶解为1mmol/L、0.5mmol/L、0.25mmol/L、0.1mmol/L、0.05mmol/L、0.01mmol/L和0.005mmol/L的标准浓度，经0.22ul的滤膜过滤后在HPLC仪器上经行进样分析后，可求得不同浓度马尿酸的面积，然后建立马尿酸峰面积与浓度的线性关系。马尿酸的浓度与峰面积能够反应样品中马尿酸的含量，进而反应ACE抑制剂的抑制活性。
(5)半抑制浓度的测定
按照ACE抑制肽体外检测方法测定其抑制活性，以浓度为横坐标，ACE抑制率为纵坐标绘成圆滑的曲线，从曲线中计算出IC50值。结果(见表1)本发明蚕蛹蛋白肽具有较好的ACE抑制能力，ACE抑制活性(IC50值)低于305ug/mL，显著低于同类复合蛋白肽的IC50值，其中NVEIDPE肽ACE抑制活性(IC50值)为208ug/mL，具有很好的ACE抑制能力。
测定结果如表1，由表1可知，本发明制备的蚕蛹蛋白肽的清除DPPH自由基能力达到93％以上，还原力达到0.90以上，其ORAC为21以上，IDPEIQK肽清除DPPH自由基能力达到96％以上，还原力达到0.94以上，其ORAC为22以上。说明本发明蚕蛹蛋白肽具有很好的抗氧化能力，IDPEIQK肽是一个非常好的抗氧化肽。同时本发明制备的蚕蛹蛋白肽具有较好的ACE抑制活性，ACE抑制活性(IC50值)小于320ug/mL，IDKVRF肽的ACE抑制活性(IC50值)小于270ug/mL。
表1本发明蚕蛹蛋白肽的抗氧化和ACE抑制能力
以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案做出的各种变型和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Ile Asp Pro Glu Ile Gln Lys
1 5
<210> 2
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ile Asp Lys Val Arg Phe
1 5
<210> 3
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Lys Asn Tyr Ser Pro Tyr
1 5

Claims (10)

1.一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)蚕蛹蛋白粉中加水，在高温下处理得到蚕蛹蛋白液；
(2)超声处理蚕蛹蛋白液；
(3)加入复合蛋白酶酶解，酶解过程同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；
(4)分离液通过二步超滤法处理；
(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)水与蚕蛹蛋白粉的质量比为10-15:1，所述高温下处理为100-121℃搅拌1-3小时。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)超声处理方法为将步骤(1)得到的蚕蛹蛋白液调至75-80℃，75-100kH的超声频率处理25-30min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)按照蚕蛹蛋白液总重量的0.9-1.4％的重量百分比加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶组成，四者质量比为1：(1-2):(1-2):1。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)的酶解条件为50-65℃酶解1.5-3.5小时；步骤(3)所述超声处理是25-40kH处理；步骤(3)酶解之后于90-95℃下保温10-20min，冷却至65-75℃，过滤分离，收集分离液。
6.根据权利要求1-5任一所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)的两步超滤法为先用孔径为3000D的膜超滤，再用孔径为1000D的膜超滤，得到分子量小于1000D的蛋白肽。
7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法制备得到的蚕蛹蛋白肽。
8.权利要求7所述的蚕蛹蛋白肽在制备降血压或抗氧化药物中的应用。
9.含有权利要求7所述蚕蛹蛋白肽的食品、保健品或药物。
10.一种具有抗氧化和ACE抑制功能的肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。
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