CN106749634B - 一种具有抗氧化活性的猪血红蛋白糖肽及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及动物蛋白加工领域，具体公开了一种具有抗氧化活性的猪血红蛋白糖肽极其制备方法与应用。本发明利用猪血球蛋白为原料，通过对猪血球蛋白的超声波等预处理，在不添加任何酸和碱条件下，利用多种蛋白酶复合酶解，通过膜分离技术，获得一定分子量的血红蛋白肽，通过与乳糖在较温和的条件下，通过美拉德反应，开发了具有抗氧化功能和较好色泽和风味的猪血红蛋白糖肽，建立一套简单高效的的猪血红蛋白糖肽的制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及动物蛋白加工领域，具体地说，涉及具有抗氧化活性的猪血红蛋白糖肽。
背景技术
蛋白质经过酶解得到多肽，使其蛋白质的结构发生改变，疏水区的活性官能基团暴露，随着肽键的裂解，小分子蛋白肽和氨基酸增加，从而可以提供质子或电子源，保持较高的氧化还原电位，使其具有清除活性自由基的能力。氧化对需氧生物特别是脊椎动物和人类是一个重要的代谢过程，但是它却导致了自由基的形成。活性氧自由基(ROS)被认为能引起氧化应激。在食品体系中，脂类或蛋白质可能会受到ROS的攻击经历氧化过程，从而导致食品产生不愉快味道，颜色发暗，同时也可能产生潜在的毒性终产物。抗氧化多肽的应用能防止食品成分由于捐献电子给活性氧自由基以及中和活性氧自由基的负面作用而变质。抗氧化肽在医学、化妆品、生物、食品领域有广泛的应用价值。
CN102228218A公开了一种具有抗氧化作用的美拉德呈味肽及其制备方法，其主要是利用各种鱼类加工的下脚料鱼皮为原料，通过原料预处理、可控酶解、超滤、美拉德反应、超滤、干燥等工序，制备分子量范围为1000-5000Da、肽含量≥90％的美拉德风味肽。
然而，该技术方案中的反应温度达到80-110℃，选用的糖为木糖、核糖、葡萄糖、果糖、半乳糖，如果反应温度在100℃以上，反应产物尽管具有良好的调味作用和一定的抗氧化作用，但产品的色泽较深，同时较容易产生一些危害因子。
因此，亟需开发一种较温和的糖基化反应，同时使产物具有适宜的甜度。本发明针对目前猪血产品开发的现状，利用猪血球蛋白为原料，通过对猪血球蛋白的超声波等预处理，在不添加任何酸和碱条件下，利用多种蛋白酶复合酶解，通过膜分离技术，获得一定分子量的血红蛋白肽，通过与乳糖在较温和的条件下，通过美拉德反应，开发了具有抗氧化功能和较好色泽和风味的猪血红蛋白糖肽，建立一套简单高效的的猪血红蛋白糖肽的制备方法。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种具有抗氧化活性的猪血红蛋白糖肽及其制备方法与应用，该抗氧化活性糖肽具有较好的清除自由基作用和较好色泽及风味。
为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：
第一方面，本发明提供一种具有抗氧化活性的猪血红蛋白糖肽，由分子量小于10000道尔顿的猪血红蛋白多肽与乳糖在70～90℃条件下制备得到。
作为优选，猪血红蛋白多肽和乳糖的质量比为5～7:1。
进一步地，将猪血红蛋白多肽配制成质量浓度为15～18％的猪血红蛋白多肽液，加入乳糖后，在70～90℃条件下缓慢搅拌2～3小时，经过喷雾干燥得到具有抗氧化功能的猪血红蛋白糖肽。
其中，所述猪血红蛋白多肽的制备方法包括如下步骤：
(1)将猪血球粉溶解于质量10～15倍25～30℃的水中，在8000～10000rpm下匀质1～3min，得到血红蛋白液，将所述血红蛋白液经超声波处理使血红细胞破裂；
(2)将超声处理后的血红蛋白液调节温度为50～60℃；按照复合蛋白酶与血球粉质量比为1：100～200的比例加入复合蛋白酶，搅拌，在50～60℃下酶解2～5h，再在95～100℃下保温3～5min，冷却至室温；接着在4000～6000g下离心10～15min，收集上清液；
所述复合蛋白酶为质量比为1～2:1:1～2：1的碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)所得的上清液利用孔径为10000道尔顿的膜进行超滤处理，将分子量小于10000道尔顿的蛋白肽分离出来，经过喷雾干燥得到猪血红蛋白多肽。
作为优选，步骤(1)中超声波处理的条件为45～60kHz，15～25分钟。
所述猪血球粉为本领域常规使用的市售可得的产品，例如，可购自北京鸿顺养源生物科技有限公司。
第二方面，本发明提供一种猪血红蛋白糖肽的制备方法，包括如下步骤：
(1)将猪血球粉溶解于质量10～15倍25～30℃的水中，在8000～10000rpm下匀质1～3min，得到血红蛋白液，将所述血红蛋白液经超声波处理使血红细胞破裂；
(2)将超声处理后的血红蛋白液调节温度为50～60℃；按照复合蛋白酶与血球粉质量比为1：100～200的比例加入复合蛋白酶，搅拌，在50～60℃下酶解2～5h，再在95～100℃下保温3～5min，冷却至室温；接着在4000～6000g下离心10～15min，收集上清液；
所述复合蛋白酶为质量比为1～2:1:1～2：1的碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)所得的上清液利用孔径为10000道尔顿的膜进行超滤处理，将分子量小于10000道尔顿的蛋白肽分离出来，经过喷雾干燥得到猪血红蛋白多肽；
(4)将猪血红蛋白多肽配制成质量浓度为15～18％的猪血红蛋白多肽液，加入乳糖后，在70～90℃条件下缓慢搅拌2～3小时，经过喷雾干燥即得。
其中，步骤(4)中，猪血红蛋白多肽和乳糖的质量比为5～7:1。
第三方面，本发明提供了含有前述猪血红蛋白糖肽的组合物。
所述猪血红蛋白糖肽在制备食品或饲料中的应用也属于本发明的保护范围。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明方法操作工艺简单，设备投资少，操作场地小，适用于工业化生产。(2)开发的血红蛋白糖肽具有较好的抗氧化功能。(3)本发明制备方法反应条件温和，反应温度较低，反应时间较短，制备过程中不会产生任何不利的物质，安全性好。(4)本发明利用频率为45-60kHz超声波技术处理血液，可以提高产品对酶的敏感性，提高产品的得率。(5)本发明开发的产品为淡黄色，具有较好的风味，较好的溶解性。(6)血红蛋白糖肽，能作为食品和饲料添加剂，广泛应用于食品和饲料领域。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1猪血红蛋白糖肽的制备
按照如下方法进行：
(1)血球粉溶解于12倍30℃的水中，用分散均质机在8000～10000rpm下匀质1～3min，得血红蛋白液，将血红蛋白液于超声波发生器中经超声波(频率为60kH)处理25分钟，得到破壁血红蛋白液。
(2)将所得破壁血红蛋白液调节温度为55℃；然后按照复合蛋白酶(碱性蛋白酶：菠萝蛋白酶：中性蛋白酶：风味蛋白酶＝2:1:2:1)与血球粉质量比为1:100的比例加入复合蛋白酶，搅拌，在55℃下酶解3.0h，再在95℃下保温5min，冷却至室温；接着在4000g下离心10min，收集上清液。
(3)将步骤(2)所得的上清液利用孔径为10000道尔顿的膜将分子量小于10000道尔顿的蛋白肽分离出来，经过喷雾干燥得到血红蛋白多肽。
(4)按照血红蛋白多肽和乳糖之间质量比为6:1的比例将血红蛋白多肽和乳糖混合，配成猪血红蛋白多肽质量浓度为18％的溶液，将溶液温度加热到70℃，缓慢搅拌，保持2-3小时，经过喷雾干燥得到具有抗氧化功能的血红蛋白糖肽。
实施例2猪血红蛋白糖肽的制备
(1)血球粉溶解于12倍30℃的水中，用分散均质机在10000rpm下匀质3min，得血红蛋白液，将血红蛋白液于超声波发生器中经超声波(频率为50kH)处理25分钟，得到破壁血红蛋白液。
(2)将所得破壁血红蛋白液温度调节为50℃；然后按照复合蛋白酶(碱性蛋白酶：菠萝蛋白酶：中性蛋白酶：风味蛋白酶＝1:1:2:1)与血球粉质量比为1:150的比例加入复合蛋白酶，搅拌，在50℃下酶解4.0h，再在95℃下保温5min，冷却至室温；接着在6000g下离心10min，收集上清液。
(3)将步骤(2)所得的上清液利用孔径为10000道尔顿的膜将分子量小于10000道尔顿的蛋白肽分离出来，经过喷雾干燥得到血红蛋白多肽。
(4)按照血红蛋白多肽液固形物和乳糖之间质量比为7:1的比例将血红蛋白多肽液和乳糖混合，配成猪血红蛋白多肽质量浓度为15％的溶液，将溶液温度加热到80℃，缓慢搅拌，保持3小时，经过喷雾干燥得到具有抗氧化功能的血红蛋白糖肽粉。
实施例3猪血红蛋白糖肽的制备
按照如下方法进行：
(1)血球粉溶解于10倍30℃的水中，用分散均质机在10000rpm下匀质3min，得血红蛋白液，将血红蛋白液于超声波发生器中经超声波(频率为60kH)处理20分钟，得到破壁血红蛋白液。
(2)将所得破壁血红蛋白液温度调节为50℃；然后按照复合蛋白酶(碱性蛋白酶：菠萝蛋白酶：中性蛋白酶：风味蛋白酶＝2:1:2:1)与血球粉质量比为1:150的比例加入复合蛋白酶，搅拌，在60℃下酶解4.0h，再在98℃下保温3min，冷却至室温；接着在5000g下离心15min，收集上清液。
(3)将步骤(2)所得的上清液通过超滤方法进行处理，利用孔径为10000道尔顿的膜将分子量小于10000道尔顿的蛋白肽分离出来，经过喷雾干燥得到血红蛋白多肽。
(4)按照血红蛋白多肽液固形物和乳糖之间质量比为7:1的比例将血红蛋白多肽液和乳糖混合，配成猪血红蛋白多肽质量浓度为16％的溶液，将溶液温度加热到90℃，缓慢搅拌，保持2小时，经过喷雾干燥得到具有抗氧化功能的血红蛋白糖肽粉。
实验例1血红蛋白多肽和血红蛋白糖肽的抗氧化活性比较
试验样品：样品1、样品2、样品3为实施例1、实施例2、实施例3步骤(3)制备的血红蛋白多肽，样品4、样品5、样品6为实施例1、实施例2、实施例3制备的血红蛋白糖肽粉。
按照如下方法进行：
(1)清除DPPH自由基能力：取1mg/mL的试验样品1.5mL，加入99.5％乙醇1.5mL和0.02％DPPH乙醇溶液0.675mL混合，振荡混匀，室温下避光水浴30min，然后在517nm下检测体系吸光值。吸光值越低，体系的清除DPPH自由基能力越强。空白对照即是将样品溶液1.5mL换成去离子水1.5mL。
DPPH自由基清除能力％＝((空白吸光值-样品吸光值)/空白吸光值)×100
(2)还原力测定：取1mg/mL的试验样品1mL，加入0.2M磷酸缓冲液(pH6.6)2.5mL和1％(质量分数)的铁氰化钾溶液2.5mL，混匀，然后在50℃水浴加热20min。取出迅速冷却，加入10％(质量分数)三氯乙酸(TCA)溶液2.5mL，混合均匀，然后在3000g下离心10min。取上清液2.5mL，加入去离子水2.5mL和1％(质量分数)三氯化铁溶液0.5mL，充分混匀，在室温下反应10min，用700nm波长测定吸光度。还原力即可用700nm波长处吸光值表示。
由表1可以看出，血红蛋白多肽和血红蛋白糖肽粉具有较好的抗氧化功能，血球粉色泽深红，有明显腥味；血红蛋白多肽还有一定的腥味和苦味，血红蛋白乳糖肽粉比血红蛋白肽粉具有较好的色泽、风味和抗氧化功能。
表1血红蛋白多肽及血红蛋白糖肽粉的抗氧化活性及风味和色泽的评价
| 抗氧化活性肽 | DPPH自由基清除能力(％) | 还原力(Abs) | 风味 | 颜色 |
| 样品1 | 85.22±0.32 | 0.843±0.007 | 有小许腥味和苦味 | 浅红色 |
| 样品2 | 85.61±0.42 | 0.845±0.005 | 有小许腥味和苦味 | 浅红色 |
| 样品3 | 85.92±0.25 | 0.853±0.002 | 有小许腥味和苦味 | 浅红色 |
| 样品4 | 93.06±0.31 | 0.916±0.005 | 有香味 | 淡黄色 |
| 样品5 | 92.95±0.20 | 0.918±0.008 | 有香味 | 淡黄色 |
| 样品6 | 92.32±0.28 | 0909±0.006 | 有香味 | 淡黄色 |
| 血球粉 | 40.68±0.45 | 0.562±0.008 | 有明显腥味 | 深红色 |
实验例2木糖、葡萄糖和乳糖对猪血红蛋白糖肽的抗氧化活性的影响
将实施例2制得的血红蛋白多肽液固形物分别与乳糖、木糖和葡萄糖按质量比为7:1的比例混合，配成猪血红蛋白多肽质量浓度为15％的溶液，将溶液温度加热到80℃，缓慢搅拌，保持3小时，经过喷雾干燥得到具有抗氧化功能的血红蛋白糖肽粉。
分别测定三种猪血红蛋白肽糖的抗氧化能力。实验结果如表2：
表2不同血红蛋白糖肽粉的抗氧化活性及风味和色泽的评价
| 抗氧化活性肽 | DPPH自由基清除能力(％) | 还原力(Abs) | 风味 | 颜色 |
| 血红蛋白乳糖多肽 | 92.95±0.20 | 0.918±0.008 | 有香味 | 淡黄色 |
| 血红蛋白木糖多肽 | 87.6±0.25 | 0.862±0.006 | 有小许苦味 | 黄色 |
| 血红蛋白葡萄糖多肽 | 86.9±0.18 | 0.856±0.007 | 有小许香味 | 黄色 |
由表2可以看出，血红蛋白乳糖肽粉比血红蛋白木糖肽粉和血红蛋白葡萄糖肽粉具有较好的色泽、风味和抗氧化功能。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (3)
1.一种具有抗氧化活性的猪血红蛋白糖肽，其特征在于，所述猪血红蛋白糖肽由如下方法制备得到:
(1)将猪血球粉溶解于质量10～15倍25～30℃的水中，在8000～10000rpm下匀质1～3min，得到血红蛋白液，将所述血红蛋白液经超声波处理使血红细胞破裂；
(2)将超声处理后的血红蛋白液调节温度为50～60℃；按照复合蛋白酶与血球粉质量比为1：100～200的比例加入复合蛋白酶，搅拌，在50～60℃下酶解2～5h，再在95～100℃下保温3～5min，冷却至室温；接着在4000～6000g下离心10～15min，收集上清液；
所述复合蛋白酶为质量比为1～2:1:1～2：1的碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶的混合物；
(3)将步骤(2)所得的上清液利用孔径为10000道尔顿的膜进行超滤处理，将分子量小于10000道尔顿的蛋白肽分离出来，经过喷雾干燥得到猪血红蛋白多肽；
(4)将猪血红蛋白多肽配制成质量浓度为15～18％的猪血红蛋白多肽液，加入乳糖后，在70～90℃条件下缓慢搅拌2～3小时，经过喷雾干燥即得；猪血红蛋白多肽和乳糖的质量比为5～7:1。
2.含有权利要求1所述猪血红蛋白糖肽的组合物。
3.权利要求1所述猪血红蛋白糖肽在制备食品或饲料中的应用。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102228218A (zh) * | 2011-05-27 | 2011-11-02 | 昆明理工大学 | 一种具有抗氧化作用的美拉德呈味肽及其制备方法 |
| CN102628073A (zh) * | 2012-03-28 | 2012-08-08 | 东北农业大学 | 具有抗氧化活性的糖基化乳清蛋白多肽及其制备方法和应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102228218A (zh) * | 2011-05-27 | 2011-11-02 | 昆明理工大学 | 一种具有抗氧化作用的美拉德呈味肽及其制备方法 |
| CN102628073A (zh) * | 2012-03-28 | 2012-08-08 | 东北农业大学 | 具有抗氧化活性的糖基化乳清蛋白多肽及其制备方法和应用 |
| CN103805668A (zh) * | 2014-03-05 | 2014-05-21 | 山东瀚龙生物科技有限公司 | 一种基于糖修饰的鱼皮抗冻蛋白多肽及其制备方法 |
| WO2015169511A2 (de) * | 2014-05-06 | 2015-11-12 | Diasys Diagnostic Systems Gmbh | Enzymatische bestimmung von hba1c |
| CN104745663A (zh) * | 2015-03-24 | 2015-07-01 | 合肥学院 | 一种猪血红蛋白综合利用的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Characterization of bovine serum albumin glycated with glucose,galactose and lactose;Ana Irene Ledesma-Osuna,et al.;《Aca Biochimica Polonica》;20080917;第55卷(第3期);第491–497页 * |
| 不同酶水解猪血红蛋白制备抗氧化肽的比较;张凤英;《科技展望》;20150831(第24期);摘要以及第56页1.2-2.3 * |
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