CN115960165B - 一种来源于辣木叶的富硒ace抑制肽及其应用 - Google Patents
一种来源于辣木叶的富硒ace抑制肽及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽及其应用。该富硒ACE抑制肽具有如SEQ ID NO：1所示序列，且所述富硒ACE抑制肽中的蛋氨酸M中的硫元素被硒取代。本发明提供的来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽具有较好的ACE抑制活性，可实现天然富硒辣木叶蛋白资源的高值化利用及用于制备具有ACE抑制活性的功能性食品配料及降血压药物。
Description
技术领域
本发明属于活性肽技术领域，具体涉及一种来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽及其应用。
背景技术
高血压是各种心脑血管疾病发生发展的主要病因之一，高血压患者是世界范围内患病人群中最大的一个群体，预计到2025年，发病人数将超过15亿。血管紧张素转换酶(AngiAtensinⅠ-cAnverting enzyme，ACE)是调节血压和血管功能的重要因子。ACE抑制肽又称降压肽，主要通过抑制ACE的活性有效阻止血管紧张素Ⅱ的生成，从而降低血压。目前，ACE抑制剂是治疗高血压的主要治疗药物，包括卡托普利、苯那普利等，但临床上服用会有不同程度的副作用，如头痛、疲劳、咳嗽、水肿、皮疹等不良反应。因此寻求安全无副作用的食源性天然降血压活性成分逐渐受到研究者的青睐。目前从蛋白质酶解产物中分离出的ACE抑制肽具有效果温和、专一、高效和无副作用等特点，具有良好的开发价值。植物蛋白制备ACE抑制肽因其成本低、安全性高、无毒副作用备受关注。如从大米、核桃、松仁、黑豆、绿茶蛋白中发现具有ACE抑制活性的多肽。
硒(Selenium，Se)是人和动物的必需微量元素之一。硒参与硒酶和硒蛋白的形成，在调节氧化还原平衡、物质代谢、发育与生殖及免疫功能方面发挥重要作用。此外，硒也被证实具有抗氧化、抗病毒、提高机体免疫力、预防心脑血管疾病等生理功能。天然有机硒，尤其是富含硒氨基酸的硒产品，通常比无机硒具有低毒性、生物利用率高和多种生理活性等优点。目前已从富硒紫叶碎米荠、富硒糙米、富硒茶等植物蛋白中分离并鉴定了含硒活性肽。
辣木(Moringa oleifera)是一种生长在热带和亚热带的药食两用的植物。2012年11月，中国卫生部批准辣木叶为新资源食品，被中国绿色食品发展中心认定为“国家首推绿色食品”。辣木叶粉中蛋白质含量丰富，高达22.1％-31.4％，氨基酸种类多达19种(天冬氨酸、谷氨酸为主)，可媲美大豆，是一种值得开发利用的优质植物蛋白。食用辣木叶可以丰富人类饮食中的生物活性成分，如生物活性肽、维生素和矿物质。研究表明辣木叶蛋白及其活性肽具有抗菌、抗高血压、免疫调节、抗高尿酸和抗氧化等功能活性。
专利CN114478692A公开了一种富硒辣木籽来源的富硒肽，该肽具有较好的抗氧化活性。但关于富硒辣木叶蛋白肽对ACE抑制活性的研究尚未见报道。
因此，开发一种来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽具有重要的研究意义和经济价值。
发明内容
本发明的目的在于克服现有肽中来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽的缺乏，提供一种来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽。本发明提供的来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽具有较好的ACE抑制活性，可实现天然富硒辣木叶蛋白资源的高值化利用及用于制备具有ACE抑制活性的功能性食品配料及降血压药物。
本发明的另一目的在于提供上述富硒ACE抑制肽在制备ACE抑制剂中的应用。
本发明的另一目的在于提供上述来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽在制备功能性食品或保健品中的应用。
本发明的另一目的在于提供上述来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽在制备降血压的药物中的应用。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽，所述富硒ACE抑制肽具有如SEQIDNO：1所示序列，且所述富硒ACE抑制肽中的蛋氨酸M中的硫元素被硒取代。
本发明的发明人从辣木叶中酶解分离出如SEQIDNO：1所示序列的肽，具体为：FMHDAEALYK(Phe-Met-His-Asp-Ala-Glu-Ala-Leu-Tyr-Lys)，其中，蛋氨酸M中的硫元素被硒取代，取代后的肽序列记为FSeMHDAEALYK(1271.5040Da)，SeM代表蛋氨酸M中的硫元素被硒取代。
上述富硒ACE抑制肽在制备ACE抑制剂中的应用也在本发明的保护范围内。
研究发现富硒ACE抑制肽中的六元环中心与ACE的Trp59形成了Pi-Pi相互作用；且富硒ACE抑制肽可与ACE的残基形成多个氢键作用位点，例如：分别与Arg522、Tyr62各形成两个氢键；与Try360、Tyr394、Tyr523、Asn66、Asn85、Arg124以及Ser516各形成了一个氢键；富硒ACE抑制肽可与ACE的残基His387、Val351、Glu143和Met223之间形成疏水相互作用力。通过Pi-Pi相互作用、氢键结合及疏水相互作用赋予富硒ACE抑制肽较强的ACE抑制活性。
优选地，所述富硒ACE抑制肽在制备与ACE的氨基酸残基Trp59通过Pi-Pi相互作用结合的ACE抑制剂中的应用。
优选地，所述富硒ACE抑制肽在制备与ACE的氨基酸残基Arg522、Tyr62、Try360、Tyr394、Tyr523、Asn66、Asn85、Arg124、Ser516通过氢键结合的ACE抑制剂中的应用。
优选地，所述富硒ACE抑制肽在制备与ACE的氨基酸残基His387、Val351、Glu143、Met223通过疏水相互作用结合的ACE抑制剂中的应用。
上述所述富硒ACE抑制肽在制备功能性食品或保健品中的应用也在本发明的保护范围内。
上述富硒ACE抑制肽在制备降血压的药物中的应用也在本发明的保护范围内。
研究发现，该来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽可促进EA.hy926细胞分泌NO及抑制EA.hy926细胞分泌ET-1，进而可用于制备降血压的药物。
优选地，所述药物为促进细胞分泌NO和/或抑制细胞分泌ET-1的药物。
更为优选地，所述药物为促进EA.hy926细胞分泌NO的药物。
更为优选地，所述药物为抑制EA.hy926细胞分泌ET-1的药物。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽具有较好的ACE抑制活性，可实现天然富硒辣木叶蛋白资源的高值化利用及用于制备具有ACE抑制活性的功能性食品配料及降血压药物。
附图说明
图1为富硒辣木叶蛋白酶解液及其超滤组分对ACE的抑制效果。
图2为FSeMHDAEALYK的二级质谱图。
图3为FSeMHDAEALYK与ACE结合的最佳对接位置(PDB：1O8A)：(a)肽在ACE活性位点结合的3D结构图；(b)肽和ACE氨基酸残基之间预测相互作用的2D结构图。
图4为不同样品对EA.hy926细胞活性的影响：(a)富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽对EA.hy926细胞活性的影响；(b)卡托普利对EA.hy926细胞活性的影响。
图5为富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽对EA.hy926细胞分泌NO含量的影响。
图6为富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽对EA.hy926细胞分泌ET-1含量的影响(用1000μg/mL卡托普利处理的细胞组为阳性对照)。
具体实施方式
下面结合实施例进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料、试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
各实施例中使用的主要材料与试剂说明如下：
富硒辣木叶粉由北部湾滨海富硒功能农业研究院提供。
胰蛋白酶(25万U/g)南宁庞博生物工程有限公司。
血管紧张素转化酶(ACE)、N-[3-(2-呋喃基)丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸(N-[3-(2-furyl)acrylAyl]-L-phenyalanyl-glycyl-glycine，FAPGG)、羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、卡托普利美国Sigma-Aldrich公司；NO试剂盒南京建成生物工程研究所；内皮素(ET-1)试剂盒CUSABIO科技有限责任公司。
其他化学品和试剂均为分析纯。
实施例1富硒辣木叶蛋白酶解液的制备
本实施例利用胰蛋白酶酶解对富硒辣木叶进行酶解及超滤，参照文献：陈冰冰,欧颖仪,叶灏铎,等.富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的酶解工艺优化及活性研究[J].食品工业科技,2022,43(03):1-9.进行，具体过程如下：
(1)酶解：采用胰蛋白酶酶解、pH7.5、底物浓度5.97％、酶底比0.23％、温度39.2℃，酶解时间3h，恒温水浴后沸水浴终止反应后冷却至室温，4000r/min下离心20min，得上清溶液(即酶解液)，冷冻干燥后，于-20℃冷冻保存。
(2)超滤：将步骤(1)制备得到的富硒辣木叶蛋白酶解液经超滤管(截留分子量为3kDa)进行初步分离，离心机转速为4000rpm，离心时间20min。收集分子量≤3kDa的组分和分子量>3kDa的组分，真空冷冻干燥后，-20℃保存备用。
按照如下方法测定酶解液、分子量≤3kDa的组分和分子量>3kDa的组分的ACE抑制活性。
将酶解液用超纯水稀释30倍，作为待测样品。
将冷冻干燥后的分子量≤3kDa的组分用缓冲液配成不同浓度的溶液，得到待测样品。
将冷冻干燥后的分子量>3kDa的组分用缓冲液配成不同浓度的溶液，得到待测样品。
采用FAPGG法测定ACE抑制率。缓冲液和底物分别为80mmAl/L pH8.3的HEPES-NaOH(含0.3mAl/L NaCl)和缓冲液配制的1mmAl/L FAPGG。在酶标板孔中依次加入40μL待测样品、50μL底物和10μL ACE溶液(0.1U/mL)，振荡10s后，快速放入酶标仪中测定340nm下的吸光度，记为A1，而后37℃孵育30min后测定吸光值为A2。计算ΔA，ΔA＝A1-A2，以单位时间内吸光度值的变化表ACE酶活性。以缓冲液代替待测样品作空白对照。按照式(1)计算ACE抑制活性：
式(1)中：ΔAb为加入缓冲液时吸光度在30min内的变化；ΔAa为加入样品时吸光度在30min内的变化。
富硒辣木叶蛋白酶解液及其超滤组分对ACE的抑制效果如图1所示。从图1可以看出，低分子量(≤3kDa)的ACE抑制活性较高，IC50值为0.25mg/mL，显著低于>3kDa分子量组分(0.535mg/mL)和酶解液(0.522mg/mL)，说明在富硒辣木叶蛋白酶解液中具有最强的ACE抑制活性的肽段主要集中在3kDa分子量以下，同时也说明分子量小的肽ACE抑制活性要高于分子量大的肽，可能是因为小分子肽更容易嵌到ACE中，与ACE牢固结合发挥更高的ACE抑制活性。由此可以得出，超滤处理对ACE抑制肽的分离纯化具有良好的效果，能够显著地提高富硒辣木叶蛋白酶解产物的ACE抑制活性，对高活性的ACE抑制肽具有明显的富集作用。
实施例2富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的结构鉴定及分子对接筛选
(1)富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的结构鉴定：将超滤得到的ACE抑制活性相对较强的组分(≤3kDa)，利用在线纳喷离子源的LC-MS/MS分析其氨基酸序列。整套系统为串联EASY-nanALC 1200的Q ExactiveTM Plus质谱仪(ThermA Fisher Scientific，MA，USA)。色谱条件：色谱柱(Acclaim PepMap C18,75μm×25cm)；柱流量控制在300nL/min；柱温为40℃；进样量5μL；电喷雾电压2kV；流动相A(0.1％甲酸水溶液)、流动相B(含0.1％甲酸的乙腈溶液，洗脱梯度为：0-3min，2％-6％B；3-42min，6％-20％B；42-47min，20％-35％B；47-48min，35％-100％B；48-60min，100％-100％B。质谱仪在数据依赖采集模式下运行，自动在MS和MS/MS采集间切换。质谱参数设置如下：(1)MS扫描范围(m/z)：200-1800；分辨率：70000；自动增益控制目标：3e6；最大进样时间：50ms；包括电荷状态：1-6；(2)HCD-MS/MS分辨率：17500；隔离窗口：2.0；自动增益控制目标：1e5；最大进样时间：45ms；碰撞能量：28。使用De NAvA软件(Peaks StudiA 8.5)对MS/MS数据进行序列分析，选择甲硫氨酸氧化，乙酰化，脱酰胺化，谷氨酸及谷氨酰胺环化，氨基甲基化和硒取代硫进行可变修饰。前体耐受量为10ppm，产物离子耐受量为0.05Da。
(2)富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的分子对接筛选：为了筛选潜在的ACE抑制肽，使用AutADAckVina对鉴定的肽进行分子对接。ACE的晶体结构(编码：1O8A)从PDB网站(http://www.pdb.Arg)下载获得。删除了水和原始配体，并为受体蛋白添加了极性氢原子，随后该受体由AutADAck TAAls1.5.6保存为PDBQT文件。配体小分子结构由MarvinSketch生成，也使用AutADAck工具打开，并自动添加了Gasteiger电荷，设置旋转键，保存为PDBQT文件。对接时采用了文献中的方法(叶贤江,苏志琛,林晓娟,等.基于生物信息学与分子对接技术对坛紫菜降血压肽的筛选及活性分析[J].食品科学,2021,42(24):140-148.)，搜索空间中心坐标为center_x＝43.821，center_y＝38.24，center_z＝46.712，活性中心由一个100×100×100的栅格盒子覆盖，其中格点距离为通过AutADAck TAAls对ACE抑制肽与ACE蛋白分子进行对接。对接的结果以结合能值表示，值越低代表小分子与蛋白结合得越紧，其抑制活性越强。使用DiscAvery StudiA 4.5可视化软件获得3D图以显示肽与ACE之间相互作用的最佳构象以及2D图。通过比较结合能，筛选活性肽进行固相合成以验证其活性。
以肽链长度≤10和平均局部置信度(ALC)大于70％为筛选指标，最终得到20个富硒肽段，其中肽段FSeMHDAEALYK(二级质谱图见图2，m代表SeM)的结合能最低(-9.5kcal/mAl)与ACE结合得更为紧密，其活性可能更高，结果如表1。
表1富硒辣木叶蛋白超滤组分的结构鉴定与分子对接筛选a
aSeM代表硒代蛋氨酸，即该蛋氨酸M中的硫元素被硒取代。
可采用固相合成方法合成富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽，本发明后续测试及其它实施例所用的肽段FSeMHDAEALYK由南京杰肽生物科技有限公司合成。
实施例3富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽与ACE的相互作用力及作用位点预测
FSeMHDAEALYK与ACE的结合模式如下图3所示。从图3a可以看出，FSeMHDAEALYK中结合能最低的构象在ACE中有一部分存在着空间重叠，说明重叠的官能团可能与ACE存在相同的作用，而从2D图(图3b)可以看出，这个肽中的六元环中心与ACE的Trp59形成了Pi-Pi相互作用。另外，在抑制剂与酶的作用中，氢键和疏水相互作用是促进ACE稳定性和抑制作用的两大主要作用。且氢键的数目直接影响了降血压活性肽对ACE的亲和力，而氢键数目又与活性肽的氨基酸构成紧密联系。在本实施例中，该肽与ACE的残基一共形成了11个氢键作用位点：分别与Arg522、Tyr62各形成两个氢键；与Try360、Tyr394、Tyr523、Asn66、Asn85、Arg124以及Ser516各形成了一个氢键。ACE活性部位主要由3个活性口袋组成，即S1(Ala354、Glu384和Tyr523)，S2(Gln281、His353、His513、Lys511和Tyr520)和S1’(Glu162)，其中与肽形成氢键的氨基酸残基Tyr523属于S1口袋，可见与活性口袋的氨基酸形成氢键及其数目对于维持肽-酶复合物稳定性起着重要作用。在ACE与卡托普利晶体的复合结构研究中，发现其作用残基除了传统的S1、S2和S1’三个活性口袋外，还有His387残基。另外，除了氢键和Pi-Pi作用，疏水相互作用对复合物的稳定性也扮演着不可或缺的角色。FSeMHDAEALYK与His387、Val351、Glu143和Met223之间形成疏水相互作用力，其中包括与His387形成的疏水相互作用。另外，FSeMHDAEALYK的SeMet与ACE的氨基酸残Met223形成疏水相互作用，结果表明硒元素的存在可能对肽与ACE间的结合有促进作用，但硒元素在其中所起具体作用有待后续深入研究。从抑制肽的角度，活性肽中精氨酸的胍基和赖氨酸的ε-氨基所带正电荷可通过氢键发挥静电相互作用。ACE倾向于与位于不同末端的肽的特定氨基酸残基相互作用，肽C末端的疏水或芳香氨基酸残基对ACE抑制活性的提高有积极作用，N末端的疏水氨基酸对ACE抑制活性影响至关重要。可以观察到FSeMHDAEALYK的C末端氨基酸和N末端氨基酸存在芳香族氨基酸残基(Lys)和疏水氨基酸残基(Phe)。这些结果表明FSeMHDAEALYK与ACE活性位点有效地相互作用，可能解释了肽较强的抑制活性。
实施例富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽对细胞活力的影响
富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽SeMHDAEALYK对EA.hy926细胞的毒性检测方法如下：将1×105cells/mL的EA.hy926细胞接种于96孔板中(每组设置6个复孔)，设置对照组和试验组，对照组和试验组加入100μL细胞悬液，培养24h后弃去溶液。对照组加入100μL的DMEM培养基，试验组加入100μL样品溶液(5～500μg/mL)或阳性对照卡托普利(5～2000μg/mL)，在培养箱中孵育24h后，弃去旧培养液，加入100μL MTT(0.5mg/mL)孵育4h。最后，每孔加入100μL DMSO溶解形成的甲瓒盐，酶标仪检测490nm处吸光值。细胞存活率计算公式：
结果如图4所示。SeMHDAEALYK对细胞活力的影响如图4a所示，随着多肽浓度的增加(5-100μg/mL)，FSeMHDAEALYK的细胞活力略有下降的趋势，但是该肽在此浓度范围内的细胞活力均在95％以上，说明其对EA.hy926细胞无明显毒害作用。此外，如图4b，阳性对照卡托普利也随着浓度的增加活力有所下降，但细胞活力仍保持在95％以上，说明阳性对照卡托普利在此浓度范围内(5-2000μg/mL)对细胞也是无明显毒害作用。
实施例5富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽对细胞分泌NO的影响
NO是调节内皮细胞功能的一种重要介质，参与心血管功能的外周和中枢调节，作为内源性血管扩张气体分子，能使周围的血管平滑肌细胞松弛，使血管开放，在平衡人体血压方面具有非常重要的作用。其缺乏与糖尿病、代谢综合征、高血压和动脉粥样硬化等病理情况下的心血管风险增加有关。
本实施例以卡托普利(1000μg/mL)为阳性对照，分析不同浓度的ACE抑制肽对EA.hy926细胞的影响，在24h后测量细胞培养液中的NO含量，以揭示富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的降压效果。
试验过程如下：将EA.hy926细胞(1×105cells/mL)接种于96孔板，培育24h后弃去旧培养基，加入100μL不同浓度的ACE抑制肽(25，50，100μg/mL)，卡托普利(1000μg/mL)用作阳性对照，阴性对照仅用DMEM处理。置于37℃、5％CO2培养箱培养24h，测量培养液中累积的亚硝酸盐量，作为NO生成的指标。采用Griess试剂法进行测定，从冰箱中取出一氧化氮检测试剂盒中的Griess ReagentⅠ和Ⅱ，使其回复到室温。用DMEM+20％FBS稀释标准品，浓度设为1，2，5，10，20，40，60，100μM。按照50μL/孔，加入标品和待测品。按照50μL/孔，依次在每个孔中加入Griess ReagentⅠ和Griess ReagentⅡ。常温反应10min后在540nm处测其吸光度，以培养液作为空白对照。以标品浓度最为横坐标，吸光度值作为纵坐标，作标准曲线，经拟合得回归方程y＝0.0056x+0.0597，R2＝0.9995，根据此公式计算细胞培养液中的NO含量。每组实验平行3次。
结果见图5。与空白对照组相比，经卡托普利和不同浓度富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽处理的EA.hy926细胞中的NO含量均显著上升(P<0.05)，其中经25μg/mL、50μg/mL和100μg/mLACE抑制肽处理组的NO含量分别比空白对照组提高了36.15％、72.30％和277.12％。更为重要的是，低浓度的FSeMHDAEALYK的ACE抑制活性显著优于高浓度的阳性对照卡托普利。这些结果表明富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽能够促进血管内皮细胞释放NO，从而实现降压效果。
实施例6富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽对细胞分泌ET-1的影响
血管内皮细胞可分泌多种活性物质，其中ET-1具有强烈的血管收缩和升压特性。ET-1的过度表达是动脉粥样硬化和高血压等心血管疾病的内源性介质之一。因此，能够抑制细胞液中ET-1含量也具有潜在的抗高压特性。
本实施例通过如下方法测定富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽对细胞分泌ET-1的影响：将密度为1×105cells/mL的EA.hy926细胞接种在的96孔板中孵育24h后，用不同浓度的试验样品(25、50和100μg/mL)处理细胞24h。卡托普利(1000μg/mL)用作阳性对照，阴性对照仅用DMEM处理。处理后，按照制造商的说明，使用ET-1 Elisa试剂盒收集每个孔的细胞培养液，以量化ET-1含量。
测试结果如图6。从图6可以看出，卡托普利和不同浓度的肽对ET-1的形成具有非常显著的抑制能力。与空白对照组相比，该肽能显著抑制EA.hy926细胞液中的ET-1含量(P<0.05)，并呈浓度依赖性增加，其中经浓度为25μg/mL、50μg/mL和100μg/mL的肽处理组的ET-1含量分别比空白对照组大幅下降了36.53％、54.21％和64.39％。更为重要的是，低浓度的FSeMHDAEALYK的ET-1抑制作用显著优于浓度为1000μg/mL的阳性对照卡托普利。表明该肽具有非常显著的潜在降压作用。先前的研究表明，卡托普利和富含疏水性氨基酸的寡肽(RWDISQPY)可以显著降低细胞ET-1的含量，有效抑制ACE活性从而导致血压的降低(ZHENGY,ZHANG Y,SAN S.Efficacy Af a nAvel ACE-inhibitAry peptide frAm Sargassummaclurei in hypertensiAn and reductiAn Af intracellular endAthelin-1[J].Nutrients,2020,12(3):653.&ZHENG Y,LI Y,ZHANG Y,et al.PurificatiAn,characterizatiAn,synthesis,in vitrA ACE inhibitiAn and in vivAantihypertensive activity Af biAactive peptides derived frAm Ail palm kernelglutelin-2 hydrAlysates[J].JAurnal Af FunctiAnal FAAds,2017,28:48-58.)。南极磷虾肽(ZHAO Y,ZHANG L,TAO J,et al.Eight antihypertensive peptides frAm theprAtein hydrAlysate Af Antarctic krill(Euphausia superba):IsAlatiAn,identificatiAn,and activity evaluatiAn An human umbilical vein endAthelialcells(HUVECs)[J].FAAd Research InternatiAnal,2019,121:197-204.)和裸燕麦球蛋白肽(SSYYPFK)(ZHENG Y,WANG X,ZHUANG Y,et al.IsAlatiAn Af nAvel ACE-inhibitArypeptide frAm naked Aat glAbulin hydrAlysates in silicA apprAach:MAleculardAcking,in vivA antihypertensiAn and effects An renin and intracellularendAthelin-1[J].JAurnal Af FAAd Science,2020,85(4):1328-1337.)同样显示出可接受的ET-1抑制能力，对血管内皮细胞功能具有保护作用。这些结果表明富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽可以有效抑制ACE抑制活性并降低细胞培养液ET-1的含量，从而导致血压的降低，并与经典ACE抑制剂卡托普利具有相似的降压机制。
由上述可知，本发明将分离鉴定和分子对接技术相结合，高效筛选出一个高活性的新型富硒ACE抑制肽FSeMHDAEALYK，其对ACE的抑制作用很可能是通过氢键，疏水作用力以及Pi-Pi作用与ACE结合，从而发挥ACE抑制活性作用。同时，细胞实验表明FSeMHDAEALYK能显著提高NO的释放和抑制ET-1的释放，进一步证明了FSeMHDAEALYK在细胞水平上具有降血压的作用。在今后的工作中，我们将在动物水平上研究FSeMHDAEALYK的降血压活性，并对其构效关系和具体作用机制进行深入研究。本研究为天然富硒ACE抑制肽的研究与开发提供了理论依据。
最后应当指出的是，以上实施例仅是本发明的具有代表性的例子。显然，本发明的技术方案并不限于上述实施例，还可有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明内容直接导出或联想到所有变形，均应认为是本发明的权利要求的保护范围。
Claims (9)
1.一种来源于辣木叶的富硒ACE抑制肽，其特征在于，所述富硒ACE抑制肽为SEQIDNO：1所示序列，且所述富硒ACE抑制肽中的蛋氨酸M中的硫元素被硒取代。
2.权利要求1所述富硒ACE抑制肽在制备降血压的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述药物为促进细胞分泌NO和/或抑制细胞分泌ET-1的药物。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述药物为促进EA.hy926细胞分泌NO的药物。
5.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述药物为抑制EA.hy926细胞分泌ET-1的药物。
6.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述药物为ACE抑制剂。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述ACE抑制剂为与ACE的氨基酸残基Trp59通过Pi-Pi相互作用结合的ACE抑制剂。
8.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述ACE抑制剂为与ACE的氨基酸残基Arg522、Tyr62、Try360、Tyr394、Tyr523、Asn66、Asn85、Arg124、Ser516通过氢键结合的ACE抑制剂。
9.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述ACE抑制剂为与ACE的氨基酸残基His387、Val351、Glu143、Met223通过疏水相互作用结合的ACE抑制剂。
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