CN114392226A

CN114392226A - 一种抗敏多肽纳米组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN114392226A
Application number: CN202210175681.XA
Authority: CN
Inventors: 刘卫; 陈家玲; 吴雨桐; 刘雅雯; 沈慧慧
Original assignee: Wuhan Best Carrier Biotechnology Co ltd
Current assignee: Wuhan Best Carrier Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-02-24
Filing date: 2022-02-24
Publication date: 2022-04-26
Anticipated expiration: 2042-02-24
Also published as: CN114392226B

Abstract

本发明提供了一种抗敏多肽纳米组合物，按质量百分含量计，其原料组成包括：抗敏多肽活性成分0.001～1％，抗敏化学活性成分0.1～10％，抗敏植物活性成分0.001～10％，磷脂0.5～20％，胆固醇0.1～5％，液体脂质1～20％，乳化剂1～20％，多元醇5～40％，余量的水。本发明还提供了一种抗敏多肽纳米组合物的制备方法及其在化妆品中的应用。本发明将抗敏多肽活性成分、抗敏化学活性成分、抗敏植物活性成分负载于同一纳米级脂质囊泡中，协同增效，高效透皮，使得所制备的抗敏多肽纳米组合物具有优异的抗敏、抗炎和修复功效，通过修复角质屏障、提高皮肤耐受阈值、抗炎三种抗敏感机制进行全方位抗敏，并且安全无刺激。

Description

一种抗敏多肽纳米组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，具体地涉及一种抗敏多肽纳米组合物及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，随着人们生活水平的提高和环境污染问题的加剧，皮肤敏感问题日益突出。敏感性肌肤作为令人困扰的皮肤问题已经成为影响生活质量的关键因素之一。敏感性肌肤是一种神经现象，与表皮敏感神经的生理机制有关，与超敏性或特异性皮炎无关。敏感肌肤多因角质屏障受损，经皮水分流失速率增加而导致气流、快速变化的温度、化学或天然物质等外界因素引起皮肤末梢神经感受器的过度反应，耐受阈值降低，皮肤出现干燥、紧绷感、灼热、瘙痒等等各类肌肤不适症状；其次还会激活细胞免疫反应，导致炎症因子和炎症介质释放、炎症细胞浸润，皮肤出现充血、红肿现象。

因此，敏感肌肤通常伴随皮肤耐受阈值的降低和炎症因子的释放。前者皮肤耐受阈值降低与皮肤感觉受体如瞬时受体电位通道香草醛亚型-1(TRPVI)过度活跃和神经肽降钙素基因相关肽(CGRP)的释放相关。后者炎症因子以及组胺的释放引起血流加快、血管的通透性增加，导致皮肤出现红肿热痛现象。敏感性肌肤受到紫外线等刺激，进而诱导皮肤表皮的角质形成细胞分泌炎症因子，如IL1、IL6、IL8和TNF-α，以及肥大细胞释放组胺、白三烯等炎性介质。另一些内源性炎症因子如缓激肽、神经生长因子、前列腺素类(如PGE2)、蛋白酶激活受体(如PAR-2，可导致血管舒张)也与炎症发生有关。

目前，市面上抗敏化妆品层出不穷，但仍存在诸多问题，如由于皮肤自身屏障功能，导致抗敏活性物透皮效果差，活性成分无法到达皮肤靶部位，导致抗敏功效大大降低；此外，现有的抗敏活性物往往存在光、热、氧稳定性差或者溶解性低，直接用于护肤产品基质中活性物易氧化变质或结晶析出，导致抗敏效果大打折扣；而且，部分产品甚至添加糖皮质激素等违禁成分，对消费者造成巨大伤害。

鉴于此，提供一种能有效解决敏感肌肤问题的产品，并保证其稳定性、功效性、安全性是化妆品行业亟需解决的问题。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种抗敏多肽纳米组合物，按质量百分含量计，其原料组成包括：

进一步地，所述抗敏多肽活性成分为乙酰基四肽-15、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-8、寡肽-1、乙酰基六肽-49、乙酰基二肽-1鲸蜡酯中的至少一种。

进一步地，所述抗敏化学活性成分包括油溶抗敏化学活性成分和/或水溶抗敏化学活性成分，所述油溶抗敏化学活性成分为羟苯基丙酰胺苯甲酸、4-叔丁基环己醇、甘草次酸、红没药醇、神经酰胺中的至少一种，所述水溶抗敏化学活性成分为依克多因。

进一步地，所述抗敏植物活性成分包括油溶抗敏植物活性成分和/或水溶抗敏植物活性成分，所述水溶抗敏植物活性成分为羟基积雪草甙、小檗碱、姜根提取物、北美金缕梅提取物、绿豆籽提取物、金黄洋甘菊提取物、积雪草叶提取物、马齿苋提取物、大叶钩藤提取物、粉防己提取物、蒺藜提取物中的至少一种，所述油溶抗敏植物活性成分为苦参碱。

进一步地，所述磷脂为脑磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、溶血卵磷脂、羟基化卵磷脂、氢化卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱中的至少一种。

进一步地，所述液体脂质为辛酸/癸酸甘油三酯、植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯、甘油三(乙基己酸)酯、肉豆蔻酸异丙酯、二异硬脂醇苹果酸酯、棕榈酸甘油三酯、角鲨烷、环己硅氧烷、二苯基聚二甲基硅氧烷、乳木果油、霍霍巴油、橄榄油、蓖麻油中的至少一种。

进一步地，所述乳化剂为聚甘油-10油酸酯、聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-4油酸酯、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、聚山梨醇酯-80、辛基葡糖苷、椰油基葡糖苷、月桂基葡糖苷、PPG-26-丁醇聚醚-26、十三烷醇聚醚-12、蓖麻油醇聚醚-40、胆甾醇聚醚-24中的至少一种。

进一步地，所述多元醇为甘油、丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、辛甘醇、辛基十二醇、1,3-丙二醇、双丙甘醇、山梨糖醇中的至少一种。

另一方面，本发明还提供了一种制备上述任一所述的抗敏多肽纳米组合物的方法，包括如下步骤：

S1、将油溶抗敏化学活性成分、油溶抗敏植物活性成分、磷脂、胆固醇、液体脂质、多元醇混合，得脂质溶液；

S2、将抗敏多肽活性成分、水溶抗敏化学活性成分、水溶抗敏植物活性成分、乳化剂、水混合，得水相；

S3、将所述步骤S1中的脂质溶液与所述步骤S2中的水相混合乳化，之后，进行微米化处理，得微米级分散体；

S4、将所述步骤S3中的微米级分散体进行纳米化处理，即得所述抗敏多肽纳米组合物。

此外，本发明还提供了所述的抗敏多肽纳米组合物在化妆品中的应用。

本发明制备的抗敏多肽纳米组合物的粒径为10～200nm，Zeta电位为-60～0mV。本发明将抗敏多肽活性成分、抗敏化学活性成分、抗敏植物活性成分负载于同一纳米级脂质囊泡中，协同增效，使得所制备的抗敏多肽纳米组合物具有优异的抗敏、抗炎和修复功效，通过修复角质屏障、提高皮肤耐受阈值、抗炎三种抗敏感机制进行全方位抗敏，并且安全无刺激。此外，抗敏活性成分被包裹于脂质囊泡中，可防止抗敏活性成分氧化降解或失活，提高抗敏活性成分的稳定性；同时，脂质囊泡的磷脂双分子层结构能够进入皮肤角质层细胞内部，与角蛋白相互作用，使角质层细胞的致密程度降低，并构成脂质通道，促进抗敏活性成分透过角质层，能提高抗敏活性成分的经皮渗透量，延长抗敏活性成分在皮肤中的滞留时间和作用时间，提升抗敏功效。

本发明所提供的抗敏多肽纳米组合物的抗敏机理如下：

一方面，寡肽-1、依克多因、神经酰胺可有效修复受损的角质屏障，提升皮肤细胞的免疫防护能力，增加细胞修复能力，减少皮肤水分流失，有效抵御外界气候刺激，以及细菌、病毒、过敏原等有害物质和大多数化学物质的入侵，同时锁住皮肤内在水分，维持皮肤正常的含水量，减轻皮肤干燥、灼热、瘙痒等敏感症状。

另一方面，苦参碱、小檗碱和4-叔丁基环己醇能阻断瞬时受体电位通道香草醛亚型-1(TRPV1)受体通道，抑制TRPV1的活性，下调TRPV1 mRNA、蛋白表达水平及钙介导功能，进而降低末梢神经感受器的过度反应，缓解皮肤干燥、紧绷感、灼热、瘙痒等各类肌肤不适症状，舒缓皮肤，提高皮肤耐受阈值。

乙酰基四肽-15和乙酰基二肽-1鲸蜡酯能与阿片μ受体结合，抑制降钙素基因相关肽(CGRP)的释放，降低神经元的刺激/兴奋，提高皮肤耐受阈值，舒缓皮肤，使皮肤对各种刺激的不适感觉减弱。

此外，棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-8、羟苯基丙酰胺苯甲酸、红没药醇和甘草次酸能有效减少皮肤表皮的角质形成细胞由紫外诱导并产生的白细胞介素、TNF-α以及肥大细胞中组胺等炎性介质的释放。羟基积雪草甙、姜根提取物、北美金缕梅提取物、绿豆籽提取物、金黄洋甘菊提取物、积雪草叶提取物、马齿苋提取物、大叶钩藤提取物、粉防己提取物、蒺藜提取物等植物提取物具有显著的抗炎活性，可以起到抗炎镇静的作用。其次，乙酰基六肽-49可以降低蛋白酶激活受体(PAR-2)的活性，减轻炎症和舒缓瘙痒，促进角质细胞的增殖和分化，有助于修复皮肤屏障功能。

本发明所述抗敏多肽纳米组合物可用于制备具有抗敏、舒缓等功效的化妆品。所述化妆品的形式包括但不限于爽肤水、膏霜、乳液、精华和凝胶。本发明所述抗敏多肽纳米组合物易溶于水，可提高活性物在水中的溶解度，可直接添加到不同类型的抗敏舒缓产品中，使用方便，温和无刺激。本发明所述抗敏多肽纳米组合物在化妆品中添加的质量百分含量为0.1～30％。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。

实施例1：

以质量百分含量计：

将3％羟苯基丙酰胺苯甲酸、4％甘草次酸、0.001％苦参碱、10％脑磷脂、10％大豆卵磷脂、0.2％胆固醇、10％甘油三(乙基己酸)酯、6％肉豆蔻酸异丙酯、5％辛基十二醇在温度为70℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.0003％寡肽-1、0.0003％乙酰基六肽-49、0.0004％乙酰基二肽-1鲸蜡酯、3％依克多因、10％聚甘油-4油酸酯、10％聚山梨醇酯-80与28.798％水混合，在温度为70℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以1滴/秒的速度滴加至水相中并在1000r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为17000rpm的条件下高速剪切乳化12min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为70℃、压力为1800bar的条件下进行高压均质处理，循环8次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为186.3nm，Zeta电位为-56.7mV。

在本发明中，所述水发挥溶剂的作用，用于溶解水溶性物质；本发明对所述水的来源没有严格要求，可为纯化水。

本发明对所述抗敏多肽纳米组合物中的组份的来源没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。

本发明制备脂质溶液和水相均在水浴条件下进行，可使得脂质溶液中的各组份均匀分散以及水相中的各组份均匀分散。

在本发明中，将脂质溶液滴加至水相中时，脂质溶液中磷脂和胆固醇在水中能形成磷脂双分子层结构的脂质囊泡，混合乳化时，活性成分被包封于脂质囊泡中，可防止活性成分氧化降解或失活，从而提高活性成分的稳定性。将水相和脂质溶液混合乳化后依次进行微米化、纳米化处理，使脂质囊泡粒径纳米化，粒度更均一。

实施例2：

以质量百分含量计：

将3％4-叔丁基环己醇、3％神经酰胺、3％红没药醇、9％二硬脂酰磷脂酰胆碱、9％二月桂酰磷脂酰胆碱、0.1％胆固醇、10％二苯基聚二甲基硅氧烷、8％乳木果油、10％1,2-戊二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.002％乙酰基四肽-15、0.001％棕榈酰三肽-8、0.002％寡肽-1、0.01％羟基积雪草甙、9％月桂基葡糖苷、9％PPG-26-丁醇聚醚-26与26.885％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以5滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在900r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为15000rpm的条件下高速剪切乳化10min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为50℃、压力为1600bar的条件下进行高压均质处理，循环6次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为145.8nm，Zeta电位为-45.2mV。

实施例3：

以质量百分含量计：

将2％羟苯基丙酰胺苯甲酸、3％4-叔丁基环己醇、3％神经酰胺、10％二棕榈酰磷脂酰胆碱、6％二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、0.5％胆固醇、10％棕榈酸甘油三酯、10％角鲨烷、15％1,2-己二醇在温度为60℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.005％乙酰基二肽-1鲸蜡酯、0.003％乙酰基六肽-49、0.002％棕榈酰三肽-8、0.03％绿豆籽提取物、0.02％羟基积雪草甙、8％聚甘油-10油酸酯、8％PEG-40氢化蓖麻油与24.44％水混合，在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以3滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在800r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为12000rpm的条件下高速剪切乳化8min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为60℃、压力为1200bar的条件下进行高压均质处理，循环5次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为94.6nm，Zeta电位为-42.9mV。

实施例4：

以质量百分含量计：

将2％羟苯基丙酰胺苯甲酸、2％4-叔丁基环己醇、7％大豆卵磷脂、6％二棕榈酰磷脂酰胆碱、1％胆固醇、9％环己硅氧烷、6％霍霍巴油、20％1,3-丙二醇在温度为40℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.01％乙酰基四肽-15、0.005％棕榈酰四肽-7、0.005％寡肽-1、2％依克多因、0.05％绿豆籽提取物、0.05％马齿苋提取物、7％聚甘油-10肉豆蔻酸酯、7％PEG-40氢化蓖麻油与30.88％水混合，在温度为40℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以6滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在700r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为10000rpm的条件下高速剪切乳化6min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为40℃、压力为1000bar的条件下进行高压均质处理，循环3次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为64.4nm，Zeta电位为-37.8mV。

实施例5：

以质量百分含量计：

将1％羟苯基丙酰胺苯甲酸、2％4-叔丁基环己醇、2％神经酰胺、0.5％苦参碱、5％大豆卵磷脂、5％羟基化卵磷脂、2％胆固醇、6％辛酸/癸酸甘油三酯、6％植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯、10％甘油、10％1,3-丙二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.2％乙酰基四肽-15、0.1％棕榈酰四肽-7、0.1％棕榈酰三肽-8、0.1％寡肽-1、1％绿豆籽提取物、0.5％羟基积雪草甙、6％PEG-40氢化蓖麻油、6％辛基葡糖苷与36.5％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以8滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在600r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为8000rpm的条件下高速剪切乳化7min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为50℃、压力为800bar的条件下进行高压均质处理，循环4次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为45.2nm，Zeta电位为-21.7mV。

实施例6：

以质量百分含量计：

将1.5％羟苯基丙酰胺苯甲酸、1.5％4-叔丁基环己醇、3％大豆卵磷脂、5％氢化卵磷脂、2.5％胆固醇、3％辛酸/癸酸甘油三酯、7％二异硬脂醇苹果酸酯、10％1,2-戊二醇、15％1,2-己二醇在温度为50℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.05％乙酰基四肽-15、0.05％棕榈酰四肽-7、0.05％棕榈酰三肽-8、0.05％寡肽-1、0.4％羟基积雪草甙、0.3％绿豆籽提取物、0.3％马齿苋提取物、5％聚甘油-10二异硬脂酸酯、5％十三烷醇聚醚-12与40.3％水混合，在温度为50℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以10滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在500r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为6000rpm的条件下高速剪切乳化4min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为50℃、压力为600bar的条件下进行高压均质处理，循环10次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为51.6nm，Zeta电位为-34.6mV。

实施例7：

以质量百分含量计：

将1％羟苯基丙酰胺苯甲酸、1％神经酰胺、0.2％苦参碱、2％蛋黄卵磷脂、3％溶血卵磷脂、5％胆固醇、5％辛酸/癸酸甘油三酯、3％甘油三(乙基己酸)酯、15％1,2-戊二醇、10％双丙甘醇在温度为60℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.04％寡肽-1、0.03％乙酰基六肽-49、0.03％乙酰基二肽-1鲸蜡酯、0.3％绿豆籽提取物、3％PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、5％蓖麻油醇聚醚-40与46.4％水混合，在温度为60℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以7滴/秒的速度滴加至水相中并在600r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为9000rpm的条件下高速剪切乳化5min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为60℃、压力为400bar的条件下进行高压均质处理，循环7次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为72.8nm，Zeta电位为-35.2mV。

实施例8：

以质量百分含量计：

将0.5％4-叔丁基环己醇、0.5％神经酰胺、3％大豆卵磷脂、4％胆固醇、2％橄榄油、3％蓖麻油、15％丙二醇、15％丁二醇在温度为40℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.03％乙酰基四肽-15、0.01％棕榈酰四肽-7、0.01％寡肽-1、2％小檗碱、2％姜根提取物、1％北美金缕梅提取物、3％椰油基葡糖苷、2％胆甾醇聚醚-24与46.95％水混合，在温度为40℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以12滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在300r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为7000rpm的条件下高速剪切乳化3min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为40℃、压力为200bar的条件下进行高压均质处理，循环12次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为38.3nm，Zeta电位为-28.7mV。

实施例9：

以质量百分含量计：

将0.3％4-叔丁基环己醇、1％羟基化卵磷脂、3％胆固醇、3％辛酸/癸酸甘油三酯、15％辛甘醇、20％山梨(糖)醇在温度为20℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.2％乙酰基四肽-15、0.2％棕榈酰四肽-7、0.1％寡肽-1、0.1％乙酰基六肽-49、0.2％依克多因、3％金黄洋甘菊提取物、3％积雪草叶提取物、2％大叶钩藤提取物、3％聚甘油-10油酸酯与45.9％水混合，在温度为20℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以13滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在200r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为3000rpm的条件下高速剪切乳化2min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为20℃、压力为18000psi的条件下进行高速微射流处理，循环8次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为13.5nm，Zeta电位为-13.5mV。

实施例10：

以质量百分含量计：

将0.05％甘草次酸、0.05％神经酰胺、0.5％氢化卵磷脂、3.5％胆固醇、1％植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯、20％1,2-戊二醇、20％1,2-己二醇在温度为30℃水浴条件下混合溶解，得到脂质溶液，备用；

将0.3％乙酰基四肽-15、0.3％棕榈酰四肽-7、0.2％棕榈酰三肽-8、0.2％寡肽-1、4％绿豆籽提取物、3％粉防己提取物、3％蒺藜提取物、1％PEG-40氢化蓖麻油与42.9％水混合，在温度为30℃水浴条件下搅拌溶解，得到水相，备用；

将脂质溶液以15滴/秒的速度滴加至水相溶液中并在400r/min的转率下不断搅拌，混合完成后，在转速为5000rpm的条件下高速剪切乳化1min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在温度为30℃、压力为4000psi的条件下进行高速微射流处理，循环3次，之后，冷却至室温，得到抗敏多肽纳米组合物。

对上述抗敏多肽纳米组合物的粒径进行检测，可得该抗敏多肽纳米组合物的粒径为27.6nm，Zeta电位为-8.6mV。

实施例11：

稳定性试验

将实施例1～10制得的抗敏多肽纳米组合物及其相对应的水稀释液在密闭容器、室温条件下放置180天，对纳米组合物的粒径、Zeta电位进行检测，检查纳米组合物及其相对应的水稀释液在贮存前后的性状外观，综合评价抗敏多肽纳米组合物的稳定性。具体检测结果如下表1所示。其中，水稀释液为用水分别将实施例1～10制得的抗敏多肽纳米组合物稀释至原质量的10倍。

表1

由表1可以看出，本发明抗敏多肽纳米组合物粒径在10～200nm之间，Zeta电位在-60～0mV之间，满足实际应用要求。纳米组合物室温放置6个月后粒径、Zeta电位未发生显著性变化，且未出现析出、团聚、分层现象，水稀释液放置6个月后未出现析出、浑浊现象，尤其在活性成分浓度高的情况下仍然较稳定，未发现结晶析出现象，仍然满足实际应用需求。因此，本发明提供的抗敏多肽纳米组合物具有良好的稳定性。

对比例1：

以质量百分含量计：

将5％辛酸癸酸甘油三酯、5％白油、2％十六十八醇、2％硬脂醇聚醚-2、2％硬脂醇聚醚-21于75℃水浴中加热熔融后得到油相；将5％丙二醇、0.15％卡波姆和余量的纯化水于75℃水浴溶解，得到水相；得到油相和水相后，于75℃条件下将油相以5滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为800rpm，混合完成后于10000rpm转速下剪切乳化3min，加入0.15％三乙醇胺，继续剪切2min，冷却后加入0.5％苯氧乙醇，搅拌均匀即得空白霜剂。

实施例12：

刺激性试验

将实施例1～10所制得的抗敏多肽纳米组合物，分别与对比例1中的空白霜剂按照质量比3:7进行复配，得相对应的复合霜剂，将复合霜剂进行皮肤刺激性试验：

取健康家兔66只，体重(2.0±0.2)kg，随机分为11组，每组动物6只，于实验前24h将家兔背部皮肤两侧去毛，去毛后24h检查去毛皮肤是否受伤，受伤皮肤不宜做皮肤刺激性试验。其中10组每天分别涂抹使用实施例1～10得到的抗敏多肽纳米组合物制备的复合霜剂3次，连续涂抹7天；对照组涂抹对比例1中的空白霜剂，观察试验结果，试验结果如下表2所示。

表2

注：“+”表示家兔皮肤充血、红肿；“++”表示充血、红肿现象仍在，但有增加趋势；“—”表示无充血、红肿现象。

根据表2中的试验结果可以看出，使用空白霜剂及实施例1～10得到的抗敏多肽纳米组合物制备的复合霜剂涂抹于家兔皮肤后均无充血、红肿现象，说明本发明提供的多肽抗敏纳米组合物对皮肤没有刺激性，安全性高。

对比例2：

将实施例5制备的抗敏多肽纳米组合物与对比例1中的空白霜剂按照质量比1:9进行复配，即得到纳米复合霜剂。纳米复合霜剂中功效成分及含量分别为：0.2％神经酰胺、0.01％寡肽-1、0.2％4-叔丁基环己醇、0.05％苦参碱、0.02％乙酰基四肽-15、0.1％羟苯基丙酰胺苯甲酸、0.01％棕榈酰四肽-7、0.01％棕榈酰三肽-8、0.1％绿豆籽提取物、0.05％羟基积雪草甙。

对比例3：

以质量百分含量计：

将0.2％神经酰胺、0.2％4-叔丁基环己醇、0.05％苦参碱、0.1％羟苯基丙酰胺苯甲酸、5％辛酸癸酸甘油三酯、5％白油、2％十六十八醇、2％硬脂醇聚醚-2、2％硬脂醇聚醚-21于75℃水浴中加热熔融后得到油相；将0.01％寡肽-1、0.02％乙酰基四肽-15、0.01％棕榈酰四肽-7、0.01％棕榈酰三肽-8、0.1％绿豆籽提取物、0.05％羟基积雪草甙、5％丙二醇、0.15％卡波姆和余量的纯化水于75℃水浴溶解，得到水相；将油相滴加至水相搅拌混合，于10000rpm转速下剪切乳化3min，加入0.15％三乙醇胺，继续剪切2min，冷却后加入0.5％苯氧乙醇，搅拌均匀，即得与对比例2中所制得的纳米复合霜剂中功效成分及含量相同的普通霜剂。

实施例13：

体外透皮实验

采用垂直式Franz扩散池法进行离体鼠皮的透皮实验。将SD雄性大鼠腹部皮肤固定于接收室和供给室之间，取对比例2制备的纳米复合霜剂和对比例3制备的普通霜剂各1g于供给室中，以质量分数15％丙二醇、5％吐温80和80％的生理盐水为接收液，37℃下搅拌扩散。于1，2，4，6，8，10，12h取0.5mL含有药物的接收液，并即时补充等量恒温的新鲜接收液。HPLC分析，计算12h后特定药物单位面积累积透过量。12h后，取下皮肤，洗净后剪碎，研磨成匀浆液，加适量接收液离心，取上清液HPLC分析，计算特定药物的单位面积皮肤滞留量。本实验中测定的药物为乙酰基四肽-15。实验结果如下表3所示。

表3

注：与普通霜剂对比，^**P<0.01。

由表1可知，普通霜剂12h后皮肤累积透过量仅为125.5μg/cm²，而纳米复合霜剂12h后皮肤累积透过量为286.6μg/cm²(^**P<0.01)；普通霜剂12h后皮肤滞留量仅为21.4μg/cm²，而纳米复合霜剂12h后皮肤滞留量为42.8μg/cm²(^**P<0.01)，表明本发明所制备的抗敏活性物经纳米包载后在皮肤中的累积透过量和滞留量显著提高。由于皮肤自有屏障功能，活性成分难以透过角质层发挥作用，经纳米包载后由于纳米载体粒径小，比表面积大，与细胞之间具有更强的粘附性，且纳米组合物具备脂质囊泡的磷脂双分子层结构与皮肤细胞膜结构接近，生物相容性好，能显著提高活性物的透皮性能，提高活性物的皮肤透过量和滞留量，延长活性成分在皮肤中的滞留时间，提高其生物利用度，从而增强抗敏功效。

实施例14：

细胞迁移实验

测试样品：将实施例1～10所制得的抗敏多肽纳米组合物用DMEM培养液稀释1000倍得到相对应的纳米组合物培养样品；利用DMEM培养液稀释相应游离活性原料，至其百分含量与各纳米组合物培养样品相同，得到游离活性原料培养样品，作为游离对照组。

收集对数生长期细胞，调整HaCaT细胞密度为5×10⁵个/mL，接种于6孔板中，培养过夜。用微量枪头在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分，用PBS冲洗划掉的部分，加入新鲜无血清培养基和测试样品，空白对照组不作任何处理，在培养箱中孵育24h，然后用显微镜观察划痕宽度，并拍照，根据细胞迁移距离计算细胞迁移率，并计算各样品相对空白组细胞迁移率的变化率，实验结果如下表4所示。

表4

根据表4的结果可知，培养24h后，相对于空白组，实施例1～10的细胞迁移率增加了60％以上，最高可增加97.74％，说明本发明制备的抗敏多肽纳米组合物具有优异的细胞修复能力；相对于空白组，游离对照组的细胞迁移率最高仅增加了44.64％，说明本发明的抗敏活性成分经纳米包载后，细胞修复能力显著增强，具有更好的角质屏障修复功能。

实施例15：

细胞抗炎实验

测试样品：同实施例14。

取对数生长期的HaCaT细胞，以每孔5×10⁵个细胞的密度接种于24孔板培养24h后，将细胞分为空白对照组、模型组、给药组。模型组加入含有50μg/mL LPS的DMEM完全培养基，给药组每孔分别加入含有50μg/mL LPS和测试样品的DMEM完全培养基继续培养，每组设3个复孔。继续培养24h后，收集细胞，提取蛋白，Elisa试剂盒测试各组TNF-α、IL-8炎症因子的含量，并计算各炎症因子相对于模型组含量的变化率，实验结果如下表5所示。

表5

由表5的结果可知，实施例组可以明显降低经LPS诱导产生的炎症因子，相对于模型组，TNF-α含量降低了60％以上，最高可降低83.61％，IL-8含量降低了60％以上，最高可降低79.83％，说明本发明制备的抗敏多肽纳米组合物具有显著的抗炎功效；活性成分含量相同的游离对照组TNF-α含量的降低最高仅为38.64％，IL-8含量的降低最高仅为42.39％，说明游离活性成分抗炎效果较差，活性物经纳米包裹后，抗炎效果显著增强。

对比例4：

与实施例5的区别在于：神经酰胺的质量百分含量为7.14％、寡肽-1的质量百分含量为0.36％，不含4-叔丁基环己醇、苦参碱、乙酰基四肽-15、羟苯基丙酰胺苯甲酸、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-8、绿豆籽提取物、羟基积雪草甙。

对比例5：

与实施例5的区别在于：4-叔丁基环己醇质量百分含量为5.56％、苦参碱质量百分含量为1.39％、乙酰基四肽-15质量百分含量为0.55％，不含神经酰胺、寡肽-1、羟苯基丙酰胺苯甲酸、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-8、绿豆籽提取物、羟基积雪草甙。

对比例6：

与实施例5的区别在于：羟苯基丙酰胺苯甲酸质量百分含量为2.78％、棕榈酰四肽-7质量百分含量为0.28％、棕榈酰三肽-8质量百分含量为0.28％、绿豆籽提取物质量百分含量为2.78％、羟基积雪草甙质量百分含量为1.38％，不含神经酰胺、寡肽-1、4-叔丁基环己醇、苦参碱、乙酰基四肽-15。

实施例16：

人体抗敏功效评价实验

测试样品：将实施例1～10制得的抗敏多肽纳米组合物和对比例4～6制得的纳米组合物，分别与对比例1中的空白霜剂以质量比为1：9进行复配，制备成纳米复合霜剂，分为实施例组、屏障修复组、提高耐受阈值组、抗炎组；对比例3的普通霜剂为游离原料组；对比例1中的空白霜剂为空白组。

选取300名脸部有干燥、紧绷、灼热、瘙痒、红肿等皮肤敏感的志愿者作为受试者，志愿者分为15组，每组20人，每天早晚洁面后分别涂抹实施例组、屏障修复组、提高耐受阈值组、抗炎组、游离原料组、空白组的测试样品，早晚各涂抹一次，连续使用4周，记录志愿者使用前后脸部症状，并对抗敏舒缓效果评分，评分标准为：以脸部干燥、紧绷、灼热、瘙痒、红肿感严重程度进行评分，无以上感觉评为0分，轻度评为1分，中度评为2分，重度评为3分。各组志愿者使用前后评分结果如下表6所示。

表6

组别	测试前评分	测试后评分	评分变化率/％
				空白组	2.68±0.45	2.60±0.52	-2.99
实施例1	2.73±0.58	0.75±0.08	-72.53
				实施例2	2.66±0.43	0.81±0.11	-69.55
实施例3	2.54±0.55	0.93±0.13	-63.39
				实施例4	2.67±0.61	0.82±0.09	-69.29
实施例6	2.58±0.48	0.97±0.14	-62.40
				实施例7	2.69±0.59	1.24±0.17	-53.90
实施例8	2.72±0.52	1.16±0.19	-57.35
				实施例9	2.56±0.53	1.28±0.21	-50.00
实施例10	2.77±0.54	1.14±0.15	-58.84
				实施例5	2.60±0.46	0.88±0.12	-66.15
游离原料组	2.54±0.44	1.72±0.24	-32.28
				屏障修复组	2.69±0.51	1.69±0.21	-37.17
提高耐受阈值组	2.62±0.47	1.57±0.19	-40.08
				抗炎组	2.55±0.46	1.68±0.22	-34.12

根据表6中的结果可知，相对于空白组，使用实施例1～10制得的纳米复合霜剂4周后评分值均显著降低，最高可降低72.53％，说明使用本发明制备的抗敏多肽纳米组合物能有效缓解敏感肌肤引起的脸部不适感，具有较好的修复、缓解、抗炎功效。

游离原料组与实施例5制备的纳米复合霜剂活性物含量相同，由表6可知，使用游离原料组4周后，评分降低32.28％，而使用实施例5所制备的纳米复合霜剂4周后，评分降低66.15％，说明本发明所提供的抗敏活性成分经纳米包裹后，抗敏效果显著增强。由于皮肤自有屏障功能，游离活性成分难以透过角质层进入皮肤发挥作用，经纳米包载后由于纳米载体粒径小，比表面积大，与细胞之间具有更强的粘附性，且纳米组合物具备脂质囊泡的类脂双分子层结构与皮肤细胞膜结构接近，生物相容性好，故能显著提高活性物的皮肤透过量和滞留量，延长活性成分在皮肤中的作用时间，从而增强抗敏功效。

对比例4～6制得的纳米组合物分别对应屏障修复组、提高耐受阈值组、抗炎组，屏障修复组仅含角质屏障修复活性成分，提高耐受阈值组仅含提高皮肤耐受阈值活性成分，抗炎组仅含抗炎活性成分，且各组活性物总含量与实施例5相同，由表6结果可知，与屏障修复组、提高耐受阈值组、抗炎组比较，实施例5评分值降低更明显，抗敏效果更优，说明屏障修复活性成分、提高皮肤耐受阈值成分、抗炎成分搭配使用可协同增效，比单一机制活性成分抗敏效果更优。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims

1.一种抗敏多肽纳米组合物，其特征在于，按质量百分含量计，其原料组成包括：

余量的水。

2.根据权利要求1所述的抗敏多肽纳米组合物，其特征在于，所述抗敏多肽活性成分为乙酰基四肽-15、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-8、寡肽-1、乙酰基六肽-49、乙酰基二肽-1鲸蜡酯中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的抗敏多肽纳米组合物，其特征在于，所述抗敏化学活性成分包括油溶抗敏化学活性成分和/或水溶抗敏化学活性成分，所述油溶抗敏化学活性成分为羟苯基丙酰胺苯甲酸、4-叔丁基环己醇、甘草次酸、红没药醇、神经酰胺中的至少一种，所述水溶抗敏化学活性成分为依克多因。

4.根据权利要求1所述的抗敏多肽纳米组合物，其特征在于，所述抗敏植物活性成分包括油溶抗敏植物活性成分和/或水溶抗敏植物活性成分，所述水溶抗敏植物活性成分为羟基积雪草甙、小檗碱、姜根提取物、北美金缕梅提取物、绿豆籽提取物、金黄洋甘菊提取物、积雪草叶提取物、马齿苋提取物、大叶钩藤提取物、粉防己提取物、蒺藜提取物中的至少一种，所述油溶抗敏植物活性成分为苦参碱。

5.根据权利要求1所述的抗敏多肽纳米组合物，其特征在于，所述磷脂为脑磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、溶血卵磷脂、羟基化卵磷脂、氢化卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的抗敏多肽纳米组合物，其特征在于，所述液体脂质为辛酸/癸酸甘油三酯、植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯、甘油三(乙基己酸)酯、肉豆蔻酸异丙酯、二异硬脂醇苹果酸酯、棕榈酸甘油三酯、角鲨烷、环己硅氧烷、二苯基聚二甲基硅氧烷、乳木果油、霍霍巴油、橄榄油、蓖麻油中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的抗敏多肽纳米组合物，其特征在于，所述乳化剂为聚甘油-10油酸酯、聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-4油酸酯、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-8辛酸/癸酸甘油酯类、聚山梨醇酯-80、辛基葡糖苷、椰油基葡糖苷、月桂基葡糖苷、PPG-26-丁醇聚醚-26、十三烷醇聚醚-12、蓖麻油醇聚醚-40、胆甾醇聚醚-24中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的抗敏多肽纳米组合物，其特征在于，所述多元醇为甘油、丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、辛甘醇、辛基十二醇、1,3-丙二醇、双丙甘醇、山梨糖醇中的至少一种。

9.一种制备权利要求1至8任一所述的抗敏多肽纳米组合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

10.一种如权利要求1至8任一所述的抗敏多肽纳米组合物在化妆品中的应用。