CN114259602B - 注射用重组胶原蛋白水凝胶及其制备方法 - Google Patents
注射用重组胶原蛋白水凝胶及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114259602B CN114259602B CN202111646421.8A CN202111646421A CN114259602B CN 114259602 B CN114259602 B CN 114259602B CN 202111646421 A CN202111646421 A CN 202111646421A CN 114259602 B CN114259602 B CN 114259602B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- recombinant collagen
- solution
- mass
- injection
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 44
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 44
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 44
- 238000002347 injection Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 239000007924 injection Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 31
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 claims abstract description 29
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 19
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 claims abstract description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims abstract description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 42
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 22
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(oxiran-2-ylmethoxy)butoxymethyl]oxirane Chemical group C1OC1COCCCCOCC1CO1 SHKUUQIDMUMQQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 7
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 4
- LFKLPJRVSHJZPL-UHFFFAOYSA-N 1,2:7,8-diepoxyoctane Chemical compound C1OC1CCCCC1CO1 LFKLPJRVSHJZPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 claims description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 206010051246 Photodermatosis Diseases 0.000 abstract description 11
- 230000008845 photoaging Effects 0.000 abstract description 11
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 45
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 10
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 3
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 3
- 206010040954 Skin wrinkling Diseases 0.000 description 3
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 3
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000007665 sagging Methods 0.000 description 3
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-diol Chemical compound OCCCCO WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 208000001126 Keratosis Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000007863 gel particle Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229940097156 peroxyl Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000011506 response to oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 1
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种注射用重组胶原蛋白水凝胶及其制备方法。所述方法先将重组胶原蛋白和茶多酚溶于碱性溶液中，得到pH值为9～13的预混液，再加入交联剂，然后将混合溶液水浴加热，进行交联反应，得到交联重组胶原蛋白水凝胶，最后将交联重组胶原蛋白水凝胶凝胶切块，清洗，经均质后灌装、灭菌，得到注射用重组胶原蛋白水凝胶。本发明的重组胶原蛋白水凝胶力学性能优异，可注射使用，改善光老化所造成的皮肤损伤。
Description
技术领域
本发明属于生物医学材料技术领域，涉及一种注射用重组胶原蛋白水凝胶及其制备方法。
背景技术
皮肤是人体最大的器官，是机体第一道保护屏障，对于抵御外界侵害、维持内环境的稳定发挥着至关重要的作用。皮肤老化是机体衰老的一部分，而机体衰老在皮肤上表现最为明显。目前一般把皮肤老化分为遗传因素及不可抗力因素(如重力、机体内分泌及免疫功能随机体衰老的改变)引起的固有性老化，又称自然老化，以及由环境因素如太阳辐射、接触化学物质、干燥等造成皮肤的衰老为外源性老化。其中光老化特指由于长期的紫外线暴露所引起的皮肤老化，光老化的临床症状包括皱纹、色素沉着、干燥、弹性丧失等。过量的紫外照射往往引起皮肤一系列的氧化应激反应，如诱导产生大量的活性氧如羟基自由基、超氧自由基、过氧自由基等。活跃自由基的大量产生，使自由基与抗氧化剂之间的平衡被打破，易造成细胞膜、DNA、脂质和蛋白质的损伤，也是皮肤老化的主要原因。
随着皮肤老化，皮肤的外观和机械性能都发生了深刻的变化，最常见的表现为面部组织的松弛和皱纹等的产生。面部组织松弛的主要原因是面部容量的流失和脂肪的分布不均衡。研究表明注射填充物可较好地减轻面部松弛松垂、补充容量缺失、重塑面部轮廓以及改善皮肤质量等。局部注射填充物因操作简便、损伤小且生物相容性好等优势，已成为最常用的方法。
目前对于填充剂的研究，主要针对由于自然老化而导致的面部松弛的填充。例如中国专利申请201310268278.2公开了一种注射用胶原蛋白水凝胶及其制备方法，该水凝胶无生物学毒性且保留时间长；中国专利申请202010674496.6公开了一种注射用交联透明质酸凝胶的制备及应用，该方法制备的水凝胶交联效率高、均匀性好，在体内维持时间久。然而上述水凝胶均仅适用于减轻自然老化导致的面部松弛松垂、补充容量缺失和重塑面部轮廓等，无法改善光老化所造成的皮肤损伤。
发明内容
本发明提供一种可减轻面部容量流失、改善光老化造成的皮肤损伤的注射用重组胶原蛋白水凝胶及其制备方法。
本发明的技术方案如下：
注射用重组胶原蛋白水凝胶的制备方法，具体步骤如下：
(1)将重组胶原蛋白和茶多酚溶于碱性溶液中，得到pH值为9～13的预混液，其中重组胶原蛋白质量为碱性溶液质量的6wt％～30wt％，茶多酚质量为碱性溶液质量的5wt％～15wt％；
(2)将交联剂加入预混液中，混合均匀后得到混合溶液；
(3)将混合溶液在50～80℃下水浴加热，进行交联反应，得到交联重组胶原蛋白水凝胶；
(4)将交联重组胶原蛋白水凝胶凝胶切块，置于缓冲溶液中，搅拌清洗，经均质后灌装、灭菌，得到注射用重组胶原蛋白水凝胶。
优选地，步骤(1)中，重组胶原蛋白由保藏编号为CGMCC No.5021的巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris发酵所产生。
优选地，步骤(1)中，碱性溶液为氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。
优选地，步骤(1)中，氢氧化钠溶液的浓度为0.05mmol/L～12.5mmol/L。
优选地，步骤(1)中，重组胶原蛋白质量为碱性溶液质量的10wt％～20wt％。
优选地，步骤(1)中，茶多酚质量为碱性溶液质量的10wt％～15wt％。
优选地，步骤(1)中，预混液的pH值为10～12。
优选地，步骤(2)中，交联剂选自1,4-丁二醇二环氧甘油醚(BDDE)、3-氯-1,2-环氧丙烷、1,3-二环氧丁烷、碳化二亚胺或1,2,7,8-二环氧辛烷等环氧类化合物，更优选为1,4-丁二醇二环氧甘油醚(BDDE)。
优选地，步骤(2)中，1,4-丁二醇二环氧甘油醚质量为预混液质量的1.4wt％～2.6wt％，更优选为1.6wt％～2.1wt％。
优选地，步骤(3)中，加热温度为55～65℃。
优选地，步骤(3)中，交联反应时间为0.5～4h，优选为1.5～3h。
优选地，步骤(4)中，块状凝胶的体积为0.5cm3～3cm3，更优选为1cm3。
优选地，步骤(4)中，缓冲溶液为生理盐水或磷酸盐缓冲溶液；清洗时间为4～36h，更优选为8～24h。
优选地，步骤(4)中，可注射用重组胶原蛋白水凝胶的粒径为50μm-1000μm。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明以具有良好生物相容性的天然高分子材料重组胶原蛋白为原料，引入交联剂形成水凝胶，通过均质和灭菌制备注射用重组胶原蛋白水凝胶，可作为面部重塑的软组织填充物，其具有良好的生物相容性、非免疫原性及发生不良反应风险低等特点。同时，在交联前添加茶多酚，茶多酚与交联重组胶原蛋白水凝胶通过席夫碱反应接枝在凝胶上，通过缓释作用而改善由于光老化所造成的暴露部位皮肤的松弛、粗糙、皱纹加深、不规则性色素沉着、表皮角化不良和异常增殖等问题。
附图说明
表1为经均质后凝胶的流变学性能、BDDE含量和灭菌前后的动力黏度。
图1为实施例7经均质后凝胶颗粒经甲苯胺蓝染色后的形态图。
图2为实施例7和对比例8的茶多酚缓释曲线图。
图3为皮肤光老化模型小鼠皮肤组织T-AOC、SOD、MDA的含量。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详述。
实施例1
将1g重组胶原蛋白和0.5g茶多酚溶于10g浓度为1.25mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为12的预混液。再将0.2g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为60℃，反应时间为1h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为1cm3，经生理盐水清洗24h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
实施例2
将1g重组胶原蛋白和1g茶多酚溶于10g浓度为0.04mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为10的预混液。再将0.2g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为60℃，反应时间为1h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为1cm3，经生理盐水清洗24h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
实施例3
将1g重组胶原蛋白和1g茶多酚溶于10g浓度为1.25mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为12的预混液。再将0.3g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为60℃，反应时间为1h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为1cm3，经生理盐水清洗24h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
实施例4
将1g重组胶原蛋白和1.5g茶多酚溶于10g浓度为1.25mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为12的预混液。再将0.2g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为55℃，反应时间为1h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为1cm3，经生理盐水清洗24h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
实施例5
将1g重组胶原蛋白和0.5g茶多酚溶于10g浓度为1.25mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为12的预混液，再将0.2g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为60℃，反应时间为0.5h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为1cm3，经生理盐水清洗24h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
实施例6
将1g重组胶原蛋白和1g茶多酚溶于10g浓度为1.25mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为12的预混液，再将0.2g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为60℃，反应时间为1h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为1cm3，经生理盐水清洗12h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
实施例7
将2g重组胶原蛋白和1g茶多酚溶于10g浓度为1.25mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为12的预混液，再将0.2g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为60℃，反应时间为3h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为1cm3，经生理盐水清洗24h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
实施例8
将1g重组胶原蛋白和1g茶多酚溶于10g浓度为1.25mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为12的预混液，再将0.2g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为60℃，反应时间为1h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为2cm3，经生理盐水清洗24h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
实施例9
将0.6g重组胶原蛋白和1g茶多酚溶于10g浓度为100mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为13的预混液，再将0.3g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为80℃，反应时间为0.5h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为3cm3，经生理盐水清洗36h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
实施例10
将3g重组胶原蛋白和1g茶多酚溶于10g浓度为0.01mmol/L的氢氧化钠溶液中混合均匀得pH值为9的预混液，再将0.2g 1,4-丁二醇二缩水甘油醚加入到预混液中，混合均匀后置于恒温水浴锅中，设定反应温度为50℃，反应时间为4h得到交联重组胶原蛋白凝胶。然后将交联重组胶原蛋白凝胶切块，体积约为0.5cm3，经生理盐水清洗4h，均质，灌封，灭菌，得到注射用交联重组胶原蛋白凝胶。
对比例1
按照实施例7的方法制备注射用交联重组胶原蛋白凝胶，不同之处在于，重组胶原蛋白的加入量为0.5g。
对比例2
按照实施例7的方法制备注射用交联重组胶原蛋白凝胶，不同之处在于，茶多酚的加入量为0.06g。
对比例3
按照实施例7的方法制备注射用交联重组胶原蛋白凝胶，不同之处在于，pH为8。
对比例4
按照实施例7的方法制备注射用交联重组胶原蛋白凝胶，不同之处在于，反应温度为40℃。
对比例5
按照实施例7的方法制备注射用交联重组胶原蛋白凝胶，不同之处在于，交联剂的加入量为0.005g。
对比例6
按照实施例7的方法制备注射用交联重组胶原蛋白凝胶，不同之处在于，切块的体积约为5cm3。
对比例7
按照实施例7的方法制备注射用交联重组胶原蛋白凝胶，不同之处在于，清洗时间为2小时。
对比例8
按照实施例7的方法制备注射用交联重组胶原蛋白凝胶，不同之处在于，茶多酚在重组胶原蛋白凝胶均质完后加入，茶多酚的加入量为1g。
性能测试1
将各实施例和对比例制备的注射用交联重组胶原蛋白凝胶用Haake RS6000(赛默飞世尔(中国)公司)高级旋转流变仪测定凝胶的粘弹性，在测试温度25℃的条件下，狭缝宽度1.00mm，振动频率在0.1-100Hz范围，对注射用交联重组胶原蛋白凝胶进行弹性和粘性的动态测定，观察指标为弹性模量(G’)和粘性模量(G”)。记录0.1Hz频率下的弹性模量(G’)和粘性模量(G”)如表1所示。实施例相比于对比例1、5和3的弹性模量(G’)远大于粘性模量(G”)，说明实施例所制备的凝胶具有良好的粘弹性，说明反应体系中的重组胶原蛋白的含量、交联剂的含量及pH值，对凝胶的性能具有显著的影响。
表1各样品的流变学性能、BDDE含量和灭菌前后的动力黏度
性能测试2
按照YY/T 0962-2014(整形手术用交联透明质酸钠凝胶)附录F交联剂1,4-丁二醇二缩水甘油基醚(BDDE)的残留量测定的酶标法对实施例和对比例的BDDE残留量测定，结果如表1所示。实施例与对比例6和7的测试结果表明实施例的凝胶切块体积大小和清洗时间均会影响BDDE的残留量，凝胶切块体积过大以及清洗时间过短，均会导致BDDE的残留量过高，不满足后续人体应用要求。
性能测试3
按照《中华人民共和国药典(四部)》(2020版)0633黏度测定法的旋转黏度计测定法，利用转子型黏度计通过将转子浸入待测样品中，并以恒定的角速度(ω)转动，测定马达转动产生的扭矩(M)，根据公式η＝K*M/η(K为常数)可得出待测样品的黏度，结果如表1所示。结果表明，灭菌前后样品的黏度无明显变化，表明湿热灭菌可保证样品的灭菌稳定性。
性能测试4
按照YY/T 0962-2014(整形手术用交联透明质酸钠凝胶)附录A交联透明质酸钠粒径分布实验方法对实施例7的注射用交联重组胶原蛋白凝胶进行测定，结果如图1所示。结果表明，样品形态不一，尺寸在一定范围内。
性能测试5
将实施例7和对比例8的样品分别放入20mL的pH7.4的PBS缓冲液的玻璃瓶中，置于37℃恒温摇床上，设定转速为60r/min，每隔一定的时间更换缓冲溶液，用紫外分光光度计测定吸光度值。记录实验数据，并根据实验数据计算缓冲溶液中的药物浓度，然后计算累积释放的百分率，具体结果如图2所示。通过实施例7和对比例8的缓释曲线，表明茶多酚通过席夫碱反应及可逆的共价键反应，可显著提高茶多酚的缓释时间。
性能测试6
采用化学比色法测定皮肤组织的总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量，实施例7、对比例2和对比例8实验结果如图3所示。跟空白组相比，添加茶多酚可有效防治小鼠皮肤光老化；实施例7和对比例2的结果表明，茶多酚的加入量对防治小鼠皮肤光老化具有显著影响；实施例7和对比例8的结果表明，茶多酚的加入时机对防治小鼠皮肤光老化具有显著影响，实施例7的茶多酚与重组胶原蛋白凝胶通过席夫碱反应形成的注射用交联重组胶原蛋白凝胶相比于对比例8的茶多酚与重组胶原蛋白凝胶的物理结合形成的注射用交联重组胶原蛋白凝胶，对防治小鼠皮肤光老化具有更显著的作用。
Claims (11)
1.注射用重组胶原蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）将重组胶原蛋白和茶多酚溶于碱性溶液中，得到pH值为9~13的预混液，其中重组胶原蛋白质量为碱性溶液质量的6wt%~30wt%，茶多酚质量为碱性溶液质量的5wt%~15wt%；
（2）将交联剂加入预混液中，混合均匀后得到混合溶液；
（3）将混合溶液在50~80℃下水浴加热，进行交联反应，交联反应时间为0.5~4h，得到交联重组胶原蛋白水凝胶；
（4）将交联重组胶原蛋白水凝胶凝胶切块，置于缓冲溶液中，搅拌清洗，经均质后灌装、灭菌，得到注射用重组胶原蛋白水凝胶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，重组胶原蛋白由保藏编号为CGMCC No.5021的巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris发酵所产生。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，碱性溶液为氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，氢氧化钠溶液的浓度为0.05mmol/L~12.5mmol/L。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，重组胶原蛋白质量为碱性溶液质量的10wt%~20wt%，茶多酚质量为碱性溶液质量的10wt%~15wt%，预混液的pH值为10~12。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，交联剂选自1,4-丁二醇二环氧甘油醚、3-氯-1,2-环氧丙烷、1,3-二环氧丁烷、碳化二亚胺或1,2,7,8-二环氧辛烷。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，1,4-丁二醇二环氧甘油醚质量为预混液质量的1.4wt%~2.6wt%。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，1,4-丁二醇二环氧甘油醚质量为预混液质量的1.6wt%~2.1wt%。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，加热温度为55~65℃，交联反应时间为1.5~3h；步骤（4）中，块状凝胶的体积为0.5cm3~3cm3，缓冲溶液为生理盐水或磷酸盐缓冲溶液，清洗时间为4~36h。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，块状凝胶的体积为1cm3，清洗时间为8~24h。
11.根据权利要求1~10任一所述的制备方法制得的注射用重组胶原蛋白水凝胶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111646421.8A CN114259602B (zh) | 2021-12-29 | 2021-12-29 | 注射用重组胶原蛋白水凝胶及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111646421.8A CN114259602B (zh) | 2021-12-29 | 2021-12-29 | 注射用重组胶原蛋白水凝胶及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114259602A CN114259602A (zh) | 2022-04-01 |
| CN114259602B true CN114259602B (zh) | 2022-09-30 |
Family
ID=80831590
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111646421.8A Active CN114259602B (zh) | 2021-12-29 | 2021-12-29 | 注射用重组胶原蛋白水凝胶及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114259602B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114712530B (zh) * | 2022-04-18 | 2023-10-24 | 哈尔滨敷尔佳科技股份有限公司 | 提高重组胶原蛋白填充剂稳定性的湿热灭菌方法 |
| CN114634651B (zh) * | 2022-05-17 | 2022-07-29 | 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 | 一种无菌多孔胶原蛋白修复凝胶及其制备方法 |
| CN115671365B (zh) * | 2022-11-04 | 2024-02-13 | 浙江诸暨聚源生物技术有限公司 | 交联重组胶原蛋白海绵及其制备方法和应用 |
| CN115919751B (zh) * | 2022-12-16 | 2024-03-19 | 江苏创健医疗科技股份有限公司 | 一种重组胶原蛋白水凝胶的制备方法及其应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106456797A (zh) * | 2014-05-15 | 2017-02-22 | 新加坡科技研究局 | 聚合物‑类黄酮缀合物及其用途 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9248165B2 (en) * | 2008-11-05 | 2016-02-02 | Hancock-Jaffe Laboratories, Inc. | Composite containing collagen and elastin as a dermal expander and tissue filler |
| KR101563398B1 (ko) * | 2012-05-29 | 2015-10-26 | 한국교통대학교산학협력단 | 접착특성을 갖는 항균 유기 공중합체, 그 유기 공중합체의 제조방법, 그 유기화합물이 코팅된 항균 코팅필름 및 그 코팅필름의 코팅방법 |
| JP6355959B2 (ja) * | 2014-04-24 | 2018-07-11 | 国立大学法人京都工芸繊維大学 | 機能性架橋構造体及びその製造方法並びに医療材料 |
| CN106496620A (zh) * | 2016-11-22 | 2017-03-15 | 四川大学 | 一种改性胶原及其制备方法 |
| CN108003357B (zh) * | 2017-11-13 | 2020-07-07 | 西南大学 | 儿茶醛交联胶原水凝胶及其制备方法 |
| CN110152066A (zh) * | 2018-03-29 | 2019-08-23 | 四川大学 | 一种提高生物材料结构稳定性能的方法及其生物材料 |
| CN108744060B (zh) * | 2018-05-29 | 2021-05-07 | 四川大学 | 一种可注射多重孔隙结构的骨修复材料及其制备方法 |
| CN113397998A (zh) * | 2021-07-08 | 2021-09-17 | 江苏江山聚源生物技术有限公司 | 重组人源化胶原蛋白在制备抗皮肤衰老产品中的应用 |
-
2021
- 2021-12-29 CN CN202111646421.8A patent/CN114259602B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106456797A (zh) * | 2014-05-15 | 2017-02-22 | 新加坡科技研究局 | 聚合物‑类黄酮缀合物及其用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114259602A (zh) | 2022-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN114259602B (zh) | 注射用重组胶原蛋白水凝胶及其制备方法 | |
| KR101514831B1 (ko) | 히알루론산 또는 그의 염 중 하나, 폴리올 및 리도카인의 가열 멸균된 주사용 조성물 | |
| RU2648450C2 (ru) | Приемлемая для инъекций стерильная водная композиция на основе сшитой гиалуроновой кислоты и гидроксиапатита для применения в пластической хирургии | |
| CN104086788B (zh) | 一种注射用修饰透明质酸钠凝胶 | |
| JP2023139249A (ja) | 絹－ヒアルロン酸系組織フィラー、及びそれを用いる方法 | |
| CN109276515B (zh) | 一种含有生物活性胶原肽的组合物及其制备方法与应用 | |
| JP2015526489A (ja) | 少なくとも１種のヒアルロン酸及びリン酸アスコルビルマグネシウムを含有する滅菌組成物 | |
| JP2021515088A (ja) | 架橋ヒアルロン酸及びｐｒｐ／ｂｍｃとの組み合わせ | |
| CN104774337B (zh) | 注射用含琼脂糖微球交联透明质酸钠凝胶及制备方法 | |
| CN109806182B (zh) | 一种含透明质酸和氨基酸的组合物及其制备方法和应用 | |
| KR20220013374A (ko) | 키토산 및 이의 적용 | |
| JP7481453B2 (ja) | 物理混合ｈａ－コラーゲン皮膚充填剤 | |
| CN108774329A (zh) | 一种医用交联透明质酸钠凝胶的制备方法 | |
| US20230114250A1 (en) | Silk-hyaluronic acid tissue fillers and methods of making and using the same | |
| CN110327488A (zh) | 一种注射填充微球制剂及其制备方法 | |
| CN116019978B (zh) | 一种微交联透明质酸钠-重组胶原蛋白复合凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN110655662A (zh) | 一种橄榄苦苷交联制备透明质酸钠凝胶的方法及透明质酸钠凝胶 | |
| EP3231455A1 (en) | Biocompatible composition and method for preparing same | |
| CN114306125B (zh) | 一种含不同分子量裂褶多糖的组合物及其制备方法和应用 | |
| CN114634585A (zh) | 带负电荷的壳聚糖 | |
| CN114712530A (zh) | 提高重组胶原蛋白填充剂稳定性的湿热灭菌方法 | |
| KR102496590B1 (ko) | 가교제의 독성 물질 억제 활성으로 조직 내 염증 방지효과 및 우수한 피부 수복효과를 나타내는 조직 수복용 조성물 | |
| CN115869250A (zh) | 一种注射用透明质酸或透明质酸钠组合物及其制备方法和用途 | |
| AU2020413349B2 (en) | Physical mix HA-collagen dermal fillers | |
| CN110698699B (zh) | 一种葛根素交联制备透明质酸钠凝胶的方法及透明质酸钠凝胶 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240219 Address after: No. 500 Meigu Road, Songbei District, Harbin City, Heilongjiang Province, 150029 Patentee after: Harbin fuerjia Technology Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: 214500 No.49 Yongxing street, Jingjiang City, Taizhou City, Jiangsu Province Patentee before: JIANGSU JLAND BIOTECH Co.,Ltd. Country or region before: China |