CN114184603A - 一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明属于试剂盒技术领域，涉及一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒，包括和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和生物素偶联的碱性磷酸酶试剂。本发明提供的试剂盒灵敏度高、稳定性好，可用于中风、心力衰竭以及心肌梗死的快速检测，为临床提供了更快的诊断技术。

Description

一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒
技术领域
本发明属于试剂盒技术领域，涉及一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒。
背景技术
据统计，我国目前心衰患病率已达1.3％左右，现症患者约1000万，中国已成为世界上拥有最大心衰病患群体的国家。人体在发生中风时，由下丘脑-脑垂体-肾上腺形成的压力轴线会被激活。在发病过程中，脑垂体后叶分泌的后叶加压素与促进肾上腺皮质激素扮演着重要角色。然而，上述两种激素较不稳定，半衰期较短，很难对它们进行准确测量。研究发现，下丘脑分泌的和肽素(copeptin，简称CPP)可以作为一种新的生物标记物，对预测中风发作有重要作用。
和肽素、神经垂体素运载蛋白以及精氨酸加压素/抗利尿激素(argininevasopressin，AVP)共同组成加压素原。和肽素在1972年被科研人员所发现。该蛋白含有39个氨基酸残基的糖肽，是抗利尿激素原的C端部分。精氨酸加压素由下丘脑分泌，在中枢系统可调节脑部组织代谢以及调和颅内压，具有收缩血管、升高血压、加强记忆、参与集体应激反应、参与体温及免疫调节等生理功能。和肽素作为一种与精氨酸加压素同源的蛋白，其分泌量和精氨酸加压素大致相同。
中风患者体内后叶加压素分泌量会体现在血液中的和肽素含量上，因此和肽素可作为一种新的预测中风生物标记物。血液中的和肽素水平越高，患者发生严重中风的几率也越高。另外，和肽素作为一种内源应激标记物，参与机体的应激反应，在急性冠脉综合征发生的最初就有显著升高，有可能成为急性心肌梗死的诊断与排除的标志物之一。同时，和肽素(CPP)可作为心力衰竭的标志物，在体内表达水平与患者心衰的程度密切相关，对指导心衰的诊断和评估预后有重要作用。
相比于后叶加压素和精氨酸加压素，和肽素更稳定更易测量，可以开发出灵敏度，稳定性更好检测试剂盒，用于中风、心力衰竭、心肌梗死等的检测。
现有测定和肽素的方法有放射免疫法、免疫层析法和化学发光法等。放射免疫法存在检测时间长，核元素污染的问题。免疫层析法存在灵敏度较低，线性范围较窄，操作复杂，自动化程度低且受人为因素影响较大的问题。化学发光法灵敏度高，线性范围广，检测结果准确，自动化程度高，无放射性风险及其检测时间短，并且可以对衍生物、抗体类目标物质进行检测，在临床应用中有更有前景。现有化学发光技术，将一株抗体直接包被磁珠上，另一株抗体标记生物素，链霉亲和素标记发光物，并没有实现信号值的放大，检测和肽素的灵敏度还是偏低，为并不能满足心血管疾病需要快速而准确被检测出来需要。因此国内急需一种高灵敏度的化学发光法法检测和肽素的试剂盒，辅助心血管疾病提供快速而准确的临床诊断方案，降低中风、心力衰竭、心肌梗死等病症及有可能导致的各种疾病的发生概率。
发明内容
本发明针对现有化学发光技术存在的问题，提供了一种灵敏度高、稳定性好的和肽素检测方法，可用于中风、心力衰竭以及心肌梗死的快速检测，为临床提供了更快的诊断技术。
本发明的以上目的通过以下技术方案来实现：一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒，包括：
和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和生物素偶联的碱性磷酸酶试剂。
作为优选，和肽素抗体包被磁性颗粒试剂中，和肽素抗体包被磁性颗粒的浓度为0.2～1mg/ml；和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂中，和肽素抗体偶联链霉亲和素的浓度为0.1～3μg/ml；生物素偶联的碱性磷酸酶试剂中，生物素偶联的碱性磷酸酶的浓度为0.2～1μg/ml。
作为优选，和肽素抗体包被磁性颗粒试剂的制备方法，包括以下步骤：
在磁性颗粒溶液中，加入和肽素抗体，然后加入反应催化剂，在24～42℃条件下混悬反应4～24小时，然后加入封闭剂，在24～42℃条件下混悬反应6～24小时，磁分离后，加入磁珠保护液备用，最后加入工作液稀释成浓度为0.2～1mg/ml。
本发明采用的磁微颗粒表面含有氨基、甲苯磺酰基或羧基活性基团，磁性颗粒粒径优选为1.0～3.0μm。
作为优选，和肽素抗体包被磁性颗粒试剂的制备方法中，和肽素抗体与磁性颗粒的质量比为(0.001～0.02)，加入的反应催化剂的加入质量是和肽素抗体与磁性颗粒的质量总和的0.5～2倍。
所述和肽素抗体包被磁性颗粒试剂的制备方法，具体包括以下步骤：
将磁性颗粒更换缓冲液，加入pH 4.5～9.5、0.08～0.12MHEPES缓冲液重悬；加入和肽素抗体，然后加入反应催化剂，反应催化剂可以列举为碳二亚胺(EDC)、NHS酯、亚氨酸酯、硫酸铵，然后在24～42℃条件下混悬反应4～24小时，反应最后加入封闭剂，封闭剂可以列举为JSR Life Science株式会社生产的BlockmasterTM CE510、CE210、DB1130以及PA108，按照每10mg磁性颗粒，加入0.05～0.25ml封闭剂，在24～42℃条件下混悬反应6～24小时，磁分离后，加入含2-5％BSA、0.1～0.2mol/L氯化镁、0.1～0.2mol/L氯化锌的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH值6～9)的磁珠保护液使得和肽素抗体包被磁性颗粒试剂的浓度为8～15mg/ml，备用，最后加入含有0.1～0.5mol/L Tris、2-6％BSA、0.1～0.3mol/L氯化镁、0.1～0.3mol/L氯化锌、0.1～0.3％Proclin300的工作液(pH值6～9)稀释成浓度为0.2～1mg/ml。
作为优选，和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂的制备方法，包括以下步骤：
将偶联剂与链霉亲和素混合，在室温下下反应30～60min，得偶联剂处理的链霉亲和素；
和肽素抗体中加入还原剂，10ml还原剂对应加入0.9～1.1mg和肽素抗体，在室温下孵育20～40min，得经还原剂处理的和肽素抗体；
将偶联剂处理的链霉亲和素和经还原剂处理的和肽素抗体混合，在室温下反应40～50min；反应后加入终止剂终止反应，获得偶联产物，纯化后，加入工作液稀释成浓度为0.1～3μg/ml。
具体包括以下步骤：
偶联剂处理链霉亲和素：在链霉亲和素中加入pH 7.2～7.4、0.08～0.12mol/L硼酸缓冲液溶解成1～5mg/ml形成链霉亲和素溶液；将偶联剂溶解于二甲基亚砜中，形成1～5mg/ml溶液，偶联剂列举为二环己基碳二亚胺(DCC)、N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)、SMCC等，按照链霉亲和素与偶联剂的质量比1：(2～4)，加入到链霉亲和素溶液中，在室温下下反应30～60min，离心，去除游离偶联剂，然后加入0.08～0.12M pH为6-8磷酸缓冲液使得偶联剂处理的链霉亲和素浓度为0.5～1.5mg/ml；
还原剂处理和肽素抗体：取和肽素抗体，使用pH为7.0～7.5、20～50mmol/L(mM)磷酸缓冲液替换和肽素抗体自带的缓冲液，然后加入0.03～0.06mmol/L的还原剂，10ml还原剂对应加入0.9～1.1mg和肽素抗体，其中还原剂列举为二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇等，在室温下孵育20～40min得经还原剂处理的和肽素抗体，离心去除还原剂，然后加入0.08～0.12M pH为6-8磷酸缓冲液使得还原剂处理和肽素抗体浓度为2～5mg/ml；
偶联剂处理的链霉亲和素与还原剂处理和肽素抗体按质量比1：(1～10)混合，在室温下反应40～50min；反应后加入0.1～0.3ml3～8mM终止剂溶液终止反应时间20～40min，终止剂列举为连四硫酸钠，获得偶联产物，偶联产物纯化后，加入含有0.1～0.5mol/LTris、2-6％BSA、0.1～0.3mol/L氯化镁、0.1～0.3mol/L氯化锌、0.1～0.3％Proclin300的工作液(pH值6～9)稀释成浓度为0.1～3μg/ml的工作液。
本发明中，室温定义为15～35℃的室内温度。
作为优选，生物素偶联的碱性磷酸酶试剂的制备方法，包括以下步骤：
将生物素加入碱性磷酸酶中，混合均匀后静置室温下反应50～70min，获得生物素偶联的碱性磷酸酶，纯化后，加入含保护剂的保护液备用，最后加入发光标记物稀释液稀释浓度为0.2～1μg/ml。
具体包括以下步骤：
碱性磷酸酶过脱盐柱除盐、离心浓缩，然后加入0.08～0.12MpH为6-8磷酸缓冲液形成0.8～1.2mg/ml碱性磷酸酶溶液；生物素中加入磷酸缓冲液形成0.8～1.2mg/ml生物素溶液；将生物素溶液加入碱性磷酸酶溶液中，加入的生物素的质量(μg)＝(碱性磷酸酶质量÷0.2)×6.75。混匀后静置室温反应50～70min，获得生物素偶联的碱性磷酸酶，纯化后，加入含0.1～0.5mol/L Tris、2-6％％胰蛋白胨、0.3～0.6mol/L氯化镁、0.3～0.6mol/L氯化锌、2～5％海藻糖、0.5～1.5％吐温20、0.1～0.3％Proclin300的含保护剂的保护液备用，最后加入发光标记物稀释液稀释浓度为0.2～1μg/ml。
作为优选，发光标记物稀释液包括：10～500mM缓冲液、1～10％蛋白质、0.01～0.1mol/L氯化镁、0.01～0.1mol/L氯化钙、0.01～0.1mol/L氯化锌、0.05～0.2mol/L氯化钠、1～5％糖类物质、10～20％保护剂、1～5％稳定剂、0.1～0.5％表面活性剂、0.1～0.3％防腐剂、0.1～0.3％蛋白质抑制剂，pH为7.0～8.0。
作为优选，蛋白质为牛血清白蛋白、酪蛋白、γ球蛋白(牛)中的一种或几种；糖类物质为半乳糖、乳糖、果糖、蔗糖、海藻糖中一种或几种；保护剂为甘油、甘露醇、山梨醇、肌醇、木糖醇中的一种或几种；稳定剂为聚乙二醇20000、聚乙二醇2000、聚乙二醇8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种；表面活性剂为月桂基磺化琥珀酸单酯二钠、脂肪醇聚氧乙烯醚(3)磺基琥珀酸单酯二钠、月桂醇醚磷酸酯钾、聚乙二醇辛基苯醚中的一种或多种；防腐剂为硫柳汞、庆大霉素、ProClin系列防腐剂中的一种或多种；蛋白抑制剂为苯甲基磺酰氟、胃蛋白酶抑制剂、亮抑蛋白酶肽、抑肽酶中的一种或多种；
发光标记物稀释液中含有高浓度的白蛋白质可防止溶液中碱性磷酸酶因吸附而变性，也可以防止碱性磷酸酶分子之间因相互作用而导致的聚合变性。氯化镁和氯化钙中的Mg2+、Ca2+以提高碱性磷酸酶催化水解反应的效率，且与蛋白形成多点接触，从而使蛋白的刚性增加，提高了蛋白对温度等的稳定性。氯化钠中钠离子可与碱性磷酸酶的锌结合中心结合，使碱性磷酸酶处于较低能级，从而使碱性磷酸酶更加稳定，更易保持活性。选用的保护剂为多羟基化合物，能与蛋白质分子形成很多氢键，有助于形成溶剂层，还可以增加溶剂水表面张力而导致碱性磷酸酶优先水化，从而增加碱性磷酸酶分子的稳定性。选用的糖类物质具有多元醇结构，既可通过氢键与碱性磷酸酶表面分子相联结，也能通过氢键有效地与外部水分子相联结，使碱性磷酸酶分子稳定。选用的稳定剂可以增加溶剂水表面张力而导致碱性磷酸酶优先水化，从而增加碱性磷酸酶分子的稳定性，也可通过氢键与碱性磷酸酶表面分子相联结，使碱性磷酸酶分子稳定。本发明配置的发光标记物稀释液能够有效稳定碱性磷酸酶，从而大大提高试剂盒稳定性。
作为优选，所述试剂盒还包括和肽素校准品和和肽素质控品，和肽素校准品为和肽素校准品稀释液将和肽素溶解稀释成4～8个系列浓度的和肽素溶液；和肽素质控品为肽素校准品稀释液稀释成的500±100pg/mL和2000±400pg/mL的和肽素溶液。
作为优选，和肽素校准品稀释液包括：10～500mM缓冲液、1～10％蛋白质、1～5％糖类物质、10～20％保护剂、1～5％稳定剂、0.1～0.5％表面活性剂、0.5～1.5％鱼皮明胶、0.2～0.8％甲基纤维素、0.1～0.6％防腐剂、pH为7.0～8.0。
作为优选，和肽素校准品稀释液中蛋白质为牛血清白蛋白、酪蛋白、γ球蛋白(牛)中的一种或几种；糖类物质为半乳糖、乳糖、果糖、蔗糖、海藻糖中一种或几种；保护剂为甘油、甘露醇、山梨醇、肌醇、木糖醇中的一种或几种；稳定剂为聚乙二醇20000、聚乙二醇2000、聚乙二醇8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种；表面活性剂为月桂基磺化琥珀酸单酯二钠、脂肪醇聚氧乙烯醚(3)磺基琥珀酸单酯二钠、月桂醇醚磷酸酯钾、聚乙二醇辛基苯醚中的一种或多种；防腐剂为硫柳汞、庆大霉素、ProClin系列防腐剂中的一种或多种，ProClin系列防腐剂列举为ProClin300。
和肽素校准品稀释液中的高蛋白浓度可防止和肽素吸附，糖类物质和保护剂能够干扰和肽素的重折叠过程，保护和肽素抗原的活性和孔间结构。稳定剂物质可以增加溶剂水表面张力而导致和肽素优先水化，从而增加稳定性。甲基纤维素和鱼皮明胶是很有效的增稠剂和稳定剂，可使和肽素溶液能够形成均匀的悬浊液，保持活性的状态。而防腐剂的加入大大降低了溶液张菌的概率。以本发明的和肽素校准品稀释液配置的和肽素校准品，具有优异的稳定性，从而大大提高试剂盒稳定性。
作为优选，发光标记物稀释液中的缓冲液和和肽素校准品稀释液中的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸、(N-吗啡啉)乙磺酸(MES2)缓冲液、3-(N-吗啡啉)丙磺酸(MOPS)缓冲液、N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸单钠盐(TAPSN)缓冲液、N-2-羟乙基哌嗪-N-3丙磺酸缓冲液中的一种或多种。
本发明提供的试剂盒测定和肽素的具体步骤包括：依次加入10ul样本、40～60ul和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、40～60ul和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和40～60ul生物素偶联的碱性磷酸酶试剂进入反应管中，孵育8～12分钟后，进行磁分离清洗，然后加入底物发光液，测定反应管中的发光值。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、本发明的试剂盒包括和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和生物素偶联的碱性磷酸酶试剂，整个试剂盒体系可以实现放大信号值的方法，大大提高了试剂盒的灵敏度；
2、本发明在特定条件下反应，成功制备了和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和生物素偶联的碱性磷酸酶试剂；
3、本发明的和肽素校准品采用特制和肽素校准品稀释液稀释保存，和肽素校准品稀释液中各成分的协同作用对和肽素具有较好的稳定性，从而大大提高试剂盒稳定性；
4、本发明的和肽素校准品采用特制发光标记物稀释液稀释保存生物素偶联的碱性磷酸酶试剂，发光标记物稀释液中各成分的协同作用对碱性磷酸酶具有较好的稳定性，从而大大提高试剂盒稳定性，延长试剂盒的使用期限；
5、本发明提供的试剂盒灵敏度高、稳定性好，可用于中风、心力衰竭以及心肌梗死的快速检测，为临床提供了更快的诊断技术。
附图说明
图1为本发明实施例1试剂盒的标准曲线；
图2展示了本发明实施例1的试剂盒与某厂家试剂盒的血清测值相关性。
具体实施方式
下面通过具体实施例和附图，对本发明的技术方案作进一步描述说明，应当理解的是，此处所描述的具体实施例仅用于帮助理解本发明，不用于本发明的具体限制。且本文中所使用的附图，仅仅是为了更好地说明本发明所公开内容，对保护范围并不具有限制作用。如果无特殊说明，本发明的实施例中所采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。
实施例1
本实施例的试剂盒包括：
和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂、生物素偶联的碱性磷酸酶试剂、和肽素校准品和和肽素质控品。
和肽素校准品包括0pg/mL、50pg/mL、250pg/mL、500pg/mL、2500pg/mL和5000pg/mL的和肽素溶液，和肽素质控品包括500pg/mL和2000pg/mL的和肽素溶液，和肽素校准品和和肽素质控品均由肽素校准品稀释液稀释而成。
和肽素校准品稀释液包括：50mM Tris缓冲液、10％牛血清蛋白、2％蔗糖、3％海藻糖、10％甘油、1％鱼皮明胶、0.5％甲基纤维素、1％聚乙二醇20000、0.2％月桂基磺化琥珀酸单酯二钠、0.5％Proclin300、0.1％庆大霉素，pH为7.4。
和肽素抗体包被磁性颗粒试剂的制备方法，具体包括以下步骤：将粒径为1.0～3.0μm甲苯磺酰基磁性颗粒更换缓冲液，加入pH 7.4、0.1M HEPES缓冲液重悬；加入和肽素抗体，和肽素抗体与磁性颗粒的质量比为0.01:1，然后加入EDC，EDC的加入量为磁性颗粒和抗体总质量，然后在35℃条件下混悬反应15h，反应最后加入CE210，按照每10mg磁性颗粒，加入0.1ml封闭剂，在35℃条件下混悬反应12h，磁分离后，加入含3％BSA、0.1mol/L氯化镁、0.1mol/L氯化锌的三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH值7.4)的磁珠保护液使得和肽素抗体包被磁性颗粒试剂的浓度为10mg/ml，备用，最后加入0.1mol/L Tris、5％BSA、0.2mol/L氯化镁、0.2mol/L氯化锌、0.1％Proclin300的工作液(pH值7.4)稀释成终浓度为0.5mg/ml。
和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂的制备方法，具体包括以下步骤：在链霉亲和素中加入pH 7.4、0.1mol/L硼酸缓冲液溶解成5mg/ml形成链霉亲和素溶液；将SMCC溶解于二甲基亚砜中，形成2mg/ml溶液，按照链霉亲和素与SMCC的质量比1：3，加入到链霉亲和素溶液中，在室温下反应50min，离心，去除游离SMCC，然后加入0.1M pH7.4磷酸缓冲液使得SMCC处理的链霉亲和素浓度为1mg/ml；
取和肽素抗体，使用pH为7.4、25mM磷酸缓冲液替换和肽素抗体自带的缓冲液，然后加入0.05mmol/L的DTT，10ml DTT对应加入1mg和肽素抗体，在室温下孵育30min得经还原剂处理的和肽素抗体，离心去除DTT，然后加入0.1M pH7.4磷酸缓冲液使得还原剂处理和肽素抗体浓度为3mg/ml；
SMCC处理的链霉亲和素与DTT处理的和肽素抗体按质量比1：3混合，在室温下反应45min；反应后加入0.1ml 5mM连四硫酸钠溶液终止反应，获得偶联产物，偶联产物使用AKTA纯化仪纯化后，加入0.1mol/L Tris、5％BSA、0.2mol/L氯化镁、0.2mol/L氯化锌、0.1％Proclin300的工作液(pH值7.4)稀释成浓度为1μg/ml。
生物素偶联的碱性磷酸酶试剂的制备方法，具体包括以下步骤：碱性磷酸酶过脱盐柱除盐、离心浓缩，然后加入pH 7.4、0.1mol/L磷酸缓冲液形成1mg/ml碱性磷酸酶溶液；生物素中加入pH 7.4、0.1mol/L磷酸缓冲液形成1mg/ml生物素溶液；将生物素溶液加入碱性磷酸酶溶液中，加入的生物素的质量(μg)＝(碱性磷酸酶质量÷0.2)×6.75。混匀后静置室温反应60min，获得生物素偶联的碱性磷酸酶，过柱纯化后，加入含0.1mol/L Tris、5％胰蛋白胨、0.5mol/L氯化镁、0.5mol/L氯化锌、3％海藻糖、1％吐温20、0.1％Proclin300的含保护剂的保护液备用，最后加入发光标记物稀释液稀释浓度为0.5μg/ml。
加入的发光标记物稀释液包括：100mM HEPES缓冲液、3％BSA、0.1mol/L氯化镁、0.1mol/L氯化钙、0.1mol/L氯化锌、0.13mol/L氯化钠、2％蔗糖、3％海藻糖、10％甘油、1％聚乙二醇20000、0.5％聚乙二醇辛基苯醚、0.1％Proclin300、0.1％苯甲基磺酰氟，pH为7.4。
对比例1
对比例1的试剂盒包括：
和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、生物素偶联和肽素抗体试剂、链霉亲和素标记碱性磷酸酶试剂、和肽素校准品和和肽素质控品。
生物素偶联和肽素抗体的制备方法，具体包括以下步骤：和肽素抗体过脱盐柱除盐、离心浓缩，用pH 7.4、0.1M PBS缓冲液，将和肽素抗体的浓度控制在1mg/ml范围内；生物素中加入pH 7.4、0.1mol/L磷酸缓冲液形成1mg/ml生物素溶液；将溶解好的生物素溶液加入纯化好的和肽素抗体中，加入的生物素的质量＝(碱性磷酸酶质量÷0.2)×6.75。混匀后静置室温反应1小时；将得到的生物素偶联的和肽素抗体，过柱纯化；加入0.1mol/L Tris、5％BSA、0.2mol/L氯化镁、0.2mol/L氯化锌、0.1％Proclin300的工作液(pH值7.4)稀释成浓度为1μg/ml。
链霉亲和素标记碱性磷酸酶试剂的制备方法，具体包括以下步骤：用0.1M pH6.8PBS缓冲液将戊二醛稀释成终浓度为1.25％的戊二醛溶液；称2.5mg碱性磷酸酶，取0.2ml配制好的戊二醛溶液将其溶解，混匀，置室温下反应过夜；将反应后的液体用0.05MpH 7.4PBS，4度电磁搅拌透析12小时后，把透析袋中液体吸出来；称取1.5mg链霉亲和素溶于0.1ml 0.1M pH为9.5碳酸盐缓冲液中；把上述碱性磷酸酶溶液与链霉亲和素溶液混合，4度反应24小时后，加入10μl 0.2M赖氨酸溶液，室温反应2小时；将上一步反应液0.05M pH7.4PBS，4度电磁搅拌透析12小时后，把透析袋中液体吸出来，进行离心，保留上清液，加入含0.1mol/L Tris、5％胰蛋白胨、0.5mol/L氯化镁、0.5mol/L氯化锌、3％海藻糖、1％吐温20、0.1％Proclin300的含保护剂的保护液稀释成0.5μg/ml。
其它与实施例1相同。
对比例2
对比例2的试剂盒与实施例1的区别在于，对比例2的生物素偶联的碱性磷酸酶试剂中，发光标记物稀释液不包括氯化镁、氯化钙、氯化锌和L氯化钠，其它与实施例1相同。
对比例3
对比例3的试剂盒与实施例1的区别在于，对比例3的和肽素校准品稀释液不包括鱼皮明胶和甲基纤维素，其它与实施例1相同。
1、标准曲线
采用实施例1的试剂盒检测和肽素校准品0pg/mL、50pg/mL、250pg/mL、500pg/mL、2500pg/mL、5000pg/mL，依次加入10ul和肽素校准品、50ul和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、50ul和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和50ul生物素偶联的碱性磷酸酶试剂进入反应管中，孵育10分钟后，进行磁分离清洗，然后加入底物发光液，测定反应管中的发光值。校准品测试发光值如表1所示，标准曲线如图1所示。
表1校准品测试发光值
Figure BDA0003348350120000121
Figure BDA0003348350120000131
表1和图1的结果显示，本发明试剂盒检测和肽素校准品反应梯度良好，曲线拟合度R2＝0.9999。
2、血清相关性对比
本发明实施例1的试剂盒与某厂家试剂盒平行测试100例血清样本，二者测值相关性，如图2所示。本发明试剂盒与某厂家试剂盒平行比对相关性好。
3、灵敏度性能测试
将本发明实施例1试剂盒和对比例1试剂盒重复测定近似LOD的低值样本20次，均值+2SD代入C0与C1的拟合曲线中，对比结果如表2所示。
表2最低检出限测试结果
Figure BDA0003348350120000132
表3 C0与C1测试值
Figure BDA0003348350120000141
对比例1试剂盒的灵敏度为5.4484pg/ml，而实施例1灵敏度为0.6705pg/m，实施例1试剂盒相对于对比例1试剂盒可检测出更低浓度的和肽素，试剂盒灵敏度更高。
4、和肽素校准品稳定性
4.1将实施例1和对比例3的和肽素校准品处于37℃加速破坏的环境，在第3天，第7天和第14天分别取出，测校准品发光值，结果如表4所示。
表4和肽素校准品37℃稳定性测试结果
Figure BDA0003348350120000142
4.2将实施例1和对比例3的和肽素校准品处于4℃保存，在第3个月，第7个月，第12个月，第15个月分别取出，测校准品发光值，结果如表5所示。
表5和肽素校准品4℃稳定性测试结果
Figure BDA0003348350120000151
实施例1和对比例3的和肽素校准品分别在37℃热加速破坏14天和4℃保存15个月，从表4和表5中可以看出，实施例1和肽素校准品发光值降幅可控制在8％以内，对比例3的和肽素校准品发光值降幅高达10％，实施例1采用的和肽素校准品稀释液具有更好的稳定性。
5、生物素偶联的碱性磷酸酶试剂稳定性
5.1将实施例1和对比例2的生物素偶联的碱性磷酸酶试剂处于37℃加速破坏的环境，在第3天，第7天和第14天分别取出，测校准品发光值，结果如表6所示。
表6生物素偶联的碱性磷酸酶试剂37℃稳定性测试结果
Figure BDA0003348350120000161
5.2将实施例1和对比例2的生物素偶联的碱性磷酸酶试剂处于4℃保存，在第3个月，第7个月，第12个月，第15个月分别取出，测校准品发光值，结果如表7所示。
表7生物素偶联的碱性磷酸酶试剂4℃稳定性测试结果
Figure BDA0003348350120000162
Figure BDA0003348350120000171
实施例1和对比例2的生物素偶联的碱性磷酸酶试剂分别在37℃热加速破坏14天和4℃保存15个月，从表6和表7中可以看出，实施例1的发光值降幅可控制在8％以内，对比例2的发光值降幅高达11％，实施例1采用的发光标记物稀释液对碱性磷酸酶具有更好的稳定性。
最后应说明的是，本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明，而并非对本发明的实施方式的限定。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具有实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，这里无需也无法对所有的实施方式予以全例。而这些属于本发明的实质精神所引申出的显而易见的变化或变动仍属于本发明的保护范围，把它们解释成任何一种附加的限制都是与本发明精神相违背的。

Claims (10)

1.一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和生物素偶联的碱性磷酸酶试剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，和肽素抗体包被磁性颗粒试剂中，和肽素抗体包被磁性颗粒的浓度为0.2～1mg/ml；和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂中，和肽素抗体偶联链霉亲和素的浓度为0.1～3μg/ml；生物素偶联的碱性磷酸酶试剂中，生物素偶联的碱性磷酸酶的浓度为0.2～1μg/ml。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，和肽素抗体包被磁性颗粒试剂的制备方法，包括以下步骤：
在磁性颗粒溶液中，加入和肽素抗体，然后加入反应催化剂，在24～42℃条件下混悬反应4～24小时，然后加入封闭剂，在24～42℃条件下混悬反应6～24小时，磁分离后，加入磁珠保护液备用，最后加入工作液稀释成浓度为0.2～1mg/ml。
4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂的制备方法，包括以下步骤：
将偶联剂与链霉亲和素混合，在室温下下反应30～60min，得偶联剂处理的链霉亲和素；
和肽素抗体中加入还原剂，10ml还原剂对应加入0.9～1.1mg和肽素抗体，在室温下孵育20～40min，得经还原剂处理的和肽素抗体；
将偶联剂处理的链霉亲和素和经还原剂处理的和肽素抗体混合，在室温下反应40～50min；反应后加入终止剂终止反应，获得偶联产物，纯化后，加入工作液稀释成浓度为0.1～3μg/ml。
5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，生物素偶联的碱性磷酸酶试剂的制备方法，包括以下步骤：
将生物素加入碱性磷酸酶中，混合均匀后静置室温下反应50～70min，获得生物素偶联的碱性磷酸酶，纯化后，加入含保护剂的保护液备用，最后加入发光标记物稀释液稀释浓度为0.2～1μg/ml。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，发光标记物稀释液包括：10～500mM缓冲液、1～10％蛋白质、0.01～0.1mol/L氯化镁、0.01～0.1mol/L氯化钙、0.01～0.1mol/L氯化锌、0.05～0.2mol/L氯化钠、1～5％糖类物质、10～20％保护剂、1～5％稳定剂、0.1～0.5％表面活性剂、0.1～0.3％防腐剂、0.1～0.3％蛋白质抑制剂，pH为7.0～8.0。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括和肽素校准品和和肽素质控品，和肽素校准品为和肽素校准品稀释液将和肽素溶解稀释成4～8个系列浓度的和肽素溶液；和肽素质控品为500±100pg/mL和2000±400pg/mL的和肽素溶液。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，和肽素校准品稀释液包括：10～500mM缓冲液、1～10％蛋白质、1～5％糖类物质、10～20％保护剂、1～5％稳定剂、0.1～0.5％表面活性剂、0.5～1.5％鱼皮明胶、0.2～0.8％甲基纤维素、0.1～0.6％防腐剂、pH为7.0～8.0。
9.根据权利要求6或8所述的试剂盒，其特征在于，蛋白质为牛血清白蛋白、酪蛋白、γ球蛋白(牛)中的一种或几种；糖类物质为半乳糖、乳糖、果糖、蔗糖、海藻糖中一种或几种；保护剂为甘油、甘露醇、山梨醇、肌醇、木糖醇中的一种或几种；稳定剂为聚乙二醇20000、聚乙二醇2000、聚乙二醇8000、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种；表面活性剂为月桂基磺化琥珀酸单酯二钠、脂肪醇聚氧乙烯醚(3)磺基琥珀酸单酯二钠、月桂醇醚磷酸酯钾、聚乙二醇辛基苯醚中的一种或多种；防腐剂为硫柳汞、庆大霉素、ProClin系列防腐剂中的一种或多种。
10.根据权利要求6或8所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸、(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啡啉)丙磺酸缓冲液、N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸单钠盐缓冲液、N-2-羟乙基哌嗪-N-3丙磺酸缓冲液中的一种或多种。
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Citations (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4413545A1 (de) * 1994-04-19 1995-10-26 Nycomed Arzneimittel Gmbh Elisa zur Bestimmung des KC - Genprodukt
CN102914650A (zh) * 2012-06-14 2013-02-06 北京大成生物工程有限公司 神经元特异性烯醇化酶定量检测试剂盒及其制备方法与应用
CN105372418A (zh) * 2014-08-25 2016-03-02 常州博闻迪医药科技有限公司 一种信号放大免疫检测方法
CN108375571A (zh) * 2018-02-05 2018-08-07 苏州长光华医生物医学工程有限公司 一种用于化学发光免疫检测的磁颗粒试剂及试剂盒
CN109116038A (zh) * 2018-08-17 2019-01-01 迪瑞医疗科技股份有限公司 未结合雌三醇化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN109596839A (zh) * 2018-12-25 2019-04-09 广州万孚生物技术股份有限公司 人和肽素快速定量检测方法与试剂盒
CN109679924A (zh) * 2018-12-25 2019-04-26 广州万孚生物技术股份有限公司 高亲和力抗人和肽素的单克隆抗体及其制备方法与应用
CN109781986A (zh) * 2019-03-11 2019-05-21 复旦大学附属妇产科医院 一种磁微粒化学发光免疫检测CA125表面Tn抗原的试剂盒及其制备方法
CN110204618A (zh) * 2019-05-13 2019-09-06 深圳优普生物技术有限公司 制备抗体-链霉亲和素偶联物的方法
KR20190121466A (ko) * 2018-04-18 2019-10-28 을지대학교 산학협력단 항체 배향성이 향상된 카르복실화 양자점-항체 복합체
CN111007270A (zh) * 2019-11-27 2020-04-14 迪瑞医疗科技股份有限公司 和肽素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
US20200309770A1 (en) * 2016-06-30 2020-10-01 Shenzhen Yhlo Biotech Co., Ltd. Chemiluminescence immunoassay kit for adiponectin, and preparation method and use thereof
CN111751533A (zh) * 2019-06-19 2020-10-09 吉林大学 建立化学发光免疫法检测和肽素试剂盒
CN112051403A (zh) * 2020-08-27 2020-12-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 C反应蛋白化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用
CN112526140A (zh) * 2020-11-16 2021-03-19 北京利德曼生化股份有限公司 测定超敏肌钙蛋白t含量的磁微粒化学发光检测试剂盒
CN112684166A (zh) * 2020-12-02 2021-04-20 北京利德曼生化股份有限公司 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒
CN112816694A (zh) * 2020-12-31 2021-05-18 泰州泽成生物技术有限公司 一种异常凝血酶原检测试剂盒及制备方法
CN112904023A (zh) * 2021-01-20 2021-06-04 宁波海壹生物科技有限公司 一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒
US20210190780A1 (en) * 2018-09-04 2021-06-24 Sino-Swed Tongkang Bio-Tech (Shenzhen) Limited Serum thymidine kinase 1 detection kit based on automatic chemiluminescence analyzer

Patent Citations (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4413545A1 (de) * 1994-04-19 1995-10-26 Nycomed Arzneimittel Gmbh Elisa zur Bestimmung des KC - Genprodukt
CN102914650A (zh) * 2012-06-14 2013-02-06 北京大成生物工程有限公司 神经元特异性烯醇化酶定量检测试剂盒及其制备方法与应用
CN105372418A (zh) * 2014-08-25 2016-03-02 常州博闻迪医药科技有限公司 一种信号放大免疫检测方法
US20200309770A1 (en) * 2016-06-30 2020-10-01 Shenzhen Yhlo Biotech Co., Ltd. Chemiluminescence immunoassay kit for adiponectin, and preparation method and use thereof
CN108375571A (zh) * 2018-02-05 2018-08-07 苏州长光华医生物医学工程有限公司 一种用于化学发光免疫检测的磁颗粒试剂及试剂盒
KR20190121466A (ko) * 2018-04-18 2019-10-28 을지대학교 산학협력단 항체 배향성이 향상된 카르복실화 양자점-항체 복합체
CN109116038A (zh) * 2018-08-17 2019-01-01 迪瑞医疗科技股份有限公司 未结合雌三醇化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
US20210190780A1 (en) * 2018-09-04 2021-06-24 Sino-Swed Tongkang Bio-Tech (Shenzhen) Limited Serum thymidine kinase 1 detection kit based on automatic chemiluminescence analyzer
CN109596839A (zh) * 2018-12-25 2019-04-09 广州万孚生物技术股份有限公司 人和肽素快速定量检测方法与试剂盒
CN109679924A (zh) * 2018-12-25 2019-04-26 广州万孚生物技术股份有限公司 高亲和力抗人和肽素的单克隆抗体及其制备方法与应用
CN109781986A (zh) * 2019-03-11 2019-05-21 复旦大学附属妇产科医院 一种磁微粒化学发光免疫检测CA125表面Tn抗原的试剂盒及其制备方法
CN110204618A (zh) * 2019-05-13 2019-09-06 深圳优普生物技术有限公司 制备抗体-链霉亲和素偶联物的方法
CN111751533A (zh) * 2019-06-19 2020-10-09 吉林大学 建立化学发光免疫法检测和肽素试剂盒
CN111007270A (zh) * 2019-11-27 2020-04-14 迪瑞医疗科技股份有限公司 和肽素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN112051403A (zh) * 2020-08-27 2020-12-08 武汉生之源生物科技股份有限公司 C反应蛋白化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和应用
CN112526140A (zh) * 2020-11-16 2021-03-19 北京利德曼生化股份有限公司 测定超敏肌钙蛋白t含量的磁微粒化学发光检测试剂盒
CN112684166A (zh) * 2020-12-02 2021-04-20 北京利德曼生化股份有限公司 测定人体胃泌素g17含量的磁微粒化学发光检测试剂盒
CN112816694A (zh) * 2020-12-31 2021-05-18 泰州泽成生物技术有限公司 一种异常凝血酶原检测试剂盒及制备方法
CN112904023A (zh) * 2021-01-20 2021-06-04 宁波海壹生物科技有限公司 一种降钙素原化学发光免疫检测试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIU TONG 等: "Hybridization chain reaction engineered DNA nanopolylinker for amplified electrochemical sensing of biomarkers", ANALYST, vol. 138, pages 4870 *
YU WANG等: "A sensitive and rapid chemiluminescence immunoassay for point-of-care testing (POCT) of copeptin in serum based on high-affinity monoclonal antibodies via cytokine-assisted immunization", INTERNATIONAL JOURNAL OF NANOMEDICINE, vol. 14, pages 4293 *
周方满;纪超;梅凯;夏雪飞;: "磁微粒化学发光检测人血清中NT-proBNP方法的建立", 中国卫生检验杂志, no. 12, pages 1429 - 1433 *

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CB02 Change of applicant information

Country or region after: China

Address after: 315040 east area, 4th floor, building 044, 66 Qingyi Road, high tech Zone, Ningbo City, Zhejiang Province

Applicant after: Ningbo Haiershi Intelligent Manufacturing Co.,Ltd.

Address before: 315040 east area, 4th floor, building 044, 66 Qingyi Road, high tech Zone, Ningbo City, Zhejiang Province

Applicant before: NINGBO HAIYI BIOTECHNOLOGY CO.,LTD.

Country or region before: China

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GR01 Patent grant
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