CN114106042B - 一种氘代化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种氘代化合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114106042B CN114106042B CN202111346190.9A CN202111346190A CN114106042B CN 114106042 B CN114106042 B CN 114106042B CN 202111346190 A CN202111346190 A CN 202111346190A CN 114106042 B CN114106042 B CN 114106042B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- substituted
- compound
- alkyl
- membered
- aryl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 210
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims abstract description 99
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 83
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 66
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 34
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 117
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 115
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 93
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims description 83
- -1 mercapto, amino Chemical group 0.000 claims description 80
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 77
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 74
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 65
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 59
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims description 53
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 52
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 49
- 125000003601 C2-C6 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 33
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 32
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 30
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 29
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 29
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 29
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 26
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 26
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 25
- 125000006552 (C3-C8) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 24
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 24
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims description 24
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims description 24
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 22
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 claims description 22
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 20
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 19
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical group CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 18
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 17
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 16
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 16
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 16
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 16
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 15
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 15
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 15
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 14
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 claims description 13
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 13
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 13
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 13
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical class C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Chemical class CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 11
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 11
- 238000001394 phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 claims description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 10
- TURWXBQPPKQQIC-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(4-oxobutylamino)butylamino]butanal Chemical compound O=CCCCNCCCCNCCCC=O TURWXBQPPKQQIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012624 DNA alkylating agent Substances 0.000 claims description 9
- 229940126161 DNA alkylating agent Drugs 0.000 claims description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 102000004602 Aldo-Keto Reductase Family 1 Member C3 Human genes 0.000 claims description 8
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 108010065942 Prostaglandin-F synthase Proteins 0.000 claims description 8
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 8
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims description 8
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 claims description 8
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 8
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 8
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 7
- 125000006570 (C5-C6) heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 6
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 6
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 6
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 6
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 6
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 claims description 6
- MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N chlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1 MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 5
- 125000002462 isocyano group Chemical group *[N+]#[C-] 0.000 claims description 5
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims description 5
- 125000005913 (C3-C6) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- GQHTUMJGOHRCHB-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,6,7,8,9,10-octahydropyrimido[1,2-a]azepine Chemical compound C1CCCCN2CCCN=C21 GQHTUMJGOHRCHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KDSNLYIMUZNERS-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropanamine Chemical compound CC(C)CN KDSNLYIMUZNERS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 4
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 claims description 4
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000005347 biaryls Chemical group 0.000 claims description 4
- HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N butan-1-amine Chemical compound CCCCN HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 claims description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SNOOUWRIMMFWNE-UHFFFAOYSA-M sodium;6-[(3,4,5-trimethoxybenzoyl)amino]hexanoate Chemical compound [Na+].COC1=CC(C(=O)NCCCCCC([O-])=O)=CC(OC)=C1OC SNOOUWRIMMFWNE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 4
- 125000005017 substituted alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000005415 substituted alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004426 substituted alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 4
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 3
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 claims description 3
- KYVBNYUBXIEUFW-UHFFFAOYSA-N 1,1,3,3-tetramethylguanidine Chemical compound CN(C)C(=N)N(C)C KYVBNYUBXIEUFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GSCCALZHGUWNJW-UHFFFAOYSA-N N-Cyclohexyl-N-methylcyclohexanamine Chemical compound C1CCCCC1N(C)C1CCCCC1 GSCCALZHGUWNJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003570 air Substances 0.000 claims description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 2
- 150000001924 cycloalkanes Chemical class 0.000 claims description 2
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LQNUZADURLCDLV-IDEBNGHGSA-N nitrobenzene Chemical group [O-][N+](=O)[13C]1=[13CH][13CH]=[13CH][13CH]=[13CH]1 LQNUZADURLCDLV-IDEBNGHGSA-N 0.000 claims description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000005346 substituted cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 2
- GBXQPDCOMJJCMJ-UHFFFAOYSA-M trimethyl-[6-(trimethylazaniumyl)hexyl]azanium;bromide Chemical compound [Br-].C[N+](C)(C)CCCCCC[N+](C)(C)C GBXQPDCOMJJCMJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims 19
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 claims 1
- BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N hydridophosphorus(.) (triplet) Chemical compound [PH] BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000003107 substituted aryl group Chemical group 0.000 claims 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 abstract description 19
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 abstract description 18
- 102000018658 Myotonin-Protein Kinase Human genes 0.000 abstract description 13
- 108010052185 Myotonin-Protein Kinase Proteins 0.000 abstract description 13
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 abstract description 11
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 abstract description 11
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 44
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 36
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 26
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 24
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 22
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 15
- NWGZZGNICQFUHV-OAHLLOKOSA-N C[C@@H](OP(=O)(N1CC1)N1CC1)C1=CC(OC2=CC(=CC=C2)C(=O)N(C)C)=C(C=C1)[N+]([O-])=O Chemical class C[C@@H](OP(=O)(N1CC1)N1CC1)C1=CC(OC2=CC(=CC=C2)C(=O)N(C)C)=C(C=C1)[N+]([O-])=O NWGZZGNICQFUHV-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 14
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N phosphoryl trichloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)=O XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 10
- 230000008859 change Effects 0.000 description 10
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 10
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 9
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 8
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 8
- IZQAUUVBKYXMET-UHFFFAOYSA-N 2-bromoethanamine Chemical class NCCBr IZQAUUVBKYXMET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000000041 C6-C10 aryl group Chemical group 0.000 description 7
- 239000013062 quality control Sample Substances 0.000 description 7
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 7
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 7
- 239000002359 drug metabolite Substances 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 150000003947 ethylamines Chemical class 0.000 description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000010813 internal standard method Methods 0.000 description 5
- 125000006574 non-aromatic ring group Chemical group 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 5
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 4
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 3
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 3
- 125000004857 imidazopyridinyl group Chemical group N1C(=NC2=C1C=CC=N2)* 0.000 description 3
- 125000003387 indolinyl group Chemical group N1(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 3
- 125000004594 isoindolinyl group Chemical group C1(NCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 3
- 125000002183 isoquinolinyl group Chemical group C1(=NC=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 3
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 125000004191 (C1-C6) alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 2-bromoethanamine;hydron;bromide Chemical class [Br-].[NH3+]CCBr WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000001204 N-oxides Chemical class 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004931 azocinyl group Chemical group N1=C(C=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 125000004196 benzothienyl group Chemical group S1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 2
- 125000003354 benzotriazolyl group Chemical group N1N=NC2=C1C=CC=C2* 0.000 description 2
- MFJKYZMZFSPQJM-UHFFFAOYSA-N bis(aziridin-1-yl)phosphinic acid Chemical class C1CN1P(=O)(O)N1CC1 MFJKYZMZFSPQJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 2
- 125000000259 cinnolinyl group Chemical group N1=NC(=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 2
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N diphenyl Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 230000005311 nuclear magnetism Effects 0.000 description 2
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 2
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005493 quinolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 125000000475 sulfinyl group Chemical group [*:2]S([*:1])=O 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Chemical group 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 2
- 125000004209 (C1-C8) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- PIINXYKJQGMIOZ-UHFFFAOYSA-N 1,2-dipyridin-2-ylethane-1,2-dione Chemical compound C=1C=CC=NC=1C(=O)C(=O)C1=CC=CC=N1 PIINXYKJQGMIOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclohexen-1-yl)cyclohexan-1-one Chemical compound O=C1CCCCC1C1=CCCCC1 GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004174 2-benzimidazolyl group Chemical group [H]N1C(*)=NC2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 208000025321 B-lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N Bipyridyl Chemical compound N1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101150065749 Churc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000009052 Precursor T-Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000017414 Precursor T-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100038239 Protein Churchill Human genes 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N Protium Chemical compound [1H] YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N 0.000 description 1
- 241000720974 Protium Species 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 208000029052 T-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000641 acridinyl group Chemical group C1(=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000005073 adamantyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)* 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000288 alkali metal carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008041 alkali metal carbonates Chemical class 0.000 description 1
- 229910001860 alkaline earth metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001420 alkaline earth metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002178 anthracenyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 150000005840 aryl radicals Chemical class 0.000 description 1
- 125000000732 arylene group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003785 benzimidazolyl group Chemical group N1=C(NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004604 benzisothiazolyl group Chemical group S1N=C(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004603 benzisoxazolyl group Chemical group O1N=C(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000000499 benzofuranyl group Chemical group O1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004619 benzopyranyl group Chemical group O1C(C=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000001164 benzothiazolyl group Chemical group S1C(=NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004541 benzoxazolyl group Chemical group O1C(=NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000005841 biaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 1
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000000609 carbazolyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 125000004623 carbolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 125000003016 chromanyl group Chemical group O1C(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000004230 chromenyl group Chemical group O1C(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002993 cycloalkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 1
- 125000000640 cyclooctyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012362 drug development process Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000003838 furazanyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000005549 heteroarylene group Chemical group 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 125000003037 imidazol-2-yl group Chemical group [H]N1C([*])=NC([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000336 imidazol-5-yl group Chemical group [H]N1C([H])=NC([H])=C1[*] 0.000 description 1
- 125000002636 imidazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003453 indazolyl group Chemical group N1N=C(C2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000003406 indolizinyl group Chemical group C=1(C=CN2C=CC=CC12)* 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 125000002346 iodo group Chemical group I* 0.000 description 1
- 125000001977 isobenzofuranyl group Chemical group C=1(OC=C2C=CC=CC12)* 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000904 isoindolyl group Chemical group C=1(NC=C2C=CC=CC12)* 0.000 description 1
- 125000005956 isoquinolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004628 isothiazolidinyl group Chemical group S1N(CCC1)* 0.000 description 1
- 125000001786 isothiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000004458 methylaminocarbonyl group Chemical group [H]N(C(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 125000002757 morpholinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004593 naphthyridinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CN=C12)* 0.000 description 1
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 125000004930 octahydroisoquinolinyl group Chemical group C1(NCCC2CCCC=C12)* 0.000 description 1
- 125000001715 oxadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005968 oxazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001820 oxy group Chemical group [*:1]O[*:2] 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 125000004934 phenanthridinyl group Chemical group C1(=CC=CC2=NC=C3C=CC=CC3=C12)* 0.000 description 1
- 125000001791 phenazinyl group Chemical group C1(=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C12)* 0.000 description 1
- 125000001484 phenothiazinyl group Chemical group C1(=CC=CC=2SC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 125000001644 phenoxazinyl group Chemical group C1(=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- RLOWWWKZYUNIDI-UHFFFAOYSA-N phosphinic chloride Chemical compound ClP=O RLOWWWKZYUNIDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- UXCDUFKZSUBXGM-UHFFFAOYSA-N phosphoric tribromide Chemical compound BrP(Br)(Br)=O UXCDUFKZSUBXGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004592 phthalazinyl group Chemical group C1(=NN=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 description 1
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000017426 precursor B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 125000001042 pteridinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=NC=CN=C12)* 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 125000004309 pyranyl group Chemical group O1C(C=CC=C1)* 0.000 description 1
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003072 pyrazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002755 pyrazolinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002098 pyridazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002294 quinazolinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000002943 quinolinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000001567 quinoxalinyl group Chemical group N1=C(C=NC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000004621 quinuclidinyl group Chemical group N12C(CC(CC1)CC2)* 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003039 tetrahydroisoquinolinyl group Chemical group C1(NCCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000147 tetrahydroquinolinyl group Chemical group N1(CCCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 125000004525 thiadiazinyl group Chemical group S1NN=C(C=C1)* 0.000 description 1
- 125000001113 thiadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004627 thianthrenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2SC3=CC=CC=C3SC12)* 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000004306 triazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001834 xanthenyl group Chemical group C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/553—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07F9/564—Three-membered rings
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
- B01D15/16—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the fluid carrier
- B01D15/166—Fluid composition conditioning, e.g. gradient
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/42—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the development mode, e.g. by displacement or by elution
- B01D15/424—Elution mode
- B01D15/426—Specific type of solvent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B59/00—Introduction of isotopes of elements into organic compounds ; Labelled organic compounds per se
- C07B59/002—Heterocyclic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B59/00—Introduction of isotopes of elements into organic compounds ; Labelled organic compounds per se
- C07B59/004—Acyclic, carbocyclic or heterocyclic compounds containing elements other than carbon, hydrogen, halogen, oxygen, nitrogen, sulfur, selenium or tellurium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
- C07F9/65583—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system each of the hetero rings containing nitrogen as ring hetero atom
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/16—Injection
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
- G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/05—Isotopically modified compounds, e.g. labelled
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
- G01N2030/045—Standards internal
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及一种氘代化合物及其制备方法和应用，所述氘代化合物I的结构式如式(I)所示，其中，A为H或D，且8个A中至少有1个为D；M为H或碱金属、碱土金属、铵根。本发明提供了氘代化合物I作为内标在检测生物样本中代谢产物II含量中的应用，其中，代谢产物II的结构式如式(II)所示；其中，A为H，M为H或碱金属、碱土金属、铵根。本申请使用氘代化合物I作为内标定量分析生物样本中低含量的代谢产物II的含量，能够满足低浓度情况下的定量检测要求，适合临床试验中DMPK研究。
Description
技术领域
本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种氘代化合物及其制备方法和用途。
背景技术
在人体临床试验中，需要对受试者的生物样本，如血液、尿液、组织等进行药物和药物代 谢物的含量检测，通过检测得到的药物和药物代谢物的含量进行药物的DMPK(DrugMetabolism and Pharmacokinetics,中文意思是药物代谢及药代动力学)研究。在新药开发环节， 对药物进行DMPK研究是必须的。
常用的方法是液相色谱法，借助HPLC或UHPLC的高超分离能力和紫外吸收检测器(UVD)二极管阵列检测器(PDAD)、荧光检测器(FLD)、蒸发光散射检测器(ELSD)、 示差折光检测器、质谱检测器(MSD)的检测性能可以检测几乎所有类型的药物和药物代谢 物。
AST2660(又名AST-2660)是AST-3424(又名OBI-3424、TH-3424)的代谢产物(Meng,F.,Li,W.F.,Jung,D.,Wang,C.C.,Qi,T.,Shia,C.S.,Hsu,R.Y.,Hsieh,Y.C.,&Duan,J.(2021).A novel selective AKR1C3-activated prodrug AST-3424/OBI-3424exhibitsbroad anti-tumor activity.American journal of cancer research,11(7),3645–3659.)，也是前药AST-3424发挥药效 的化学成分。
在临床试验中(美国OBI-3424药物的临床试验登记号为NCT03592264，试验阶段为II 期，适应症为去势前列腺癌和肝癌，申办方为中国台湾浩鼎生技股份有限公司OBI；美国OBI-3424药物的临床试验登记号为NCT04315324，试验阶段为II期，适应症为T-ALLT淋巴细胞急性白血病，申办方为美国西南肿瘤协作组SWOG；中国AST-3424药物的临床试验登记号为CTR20191399，试验阶段为II期，适应症为各种实体瘤，申办方为深圳艾欣达伟医药科技有限公司；中国AST-3424药物的临床试验登记号为CTR20201915，试验阶段为II期，适应症为T-ALL和B-ALL T淋巴细胞急性白血病和B淋巴细胞急性白血病，申办方为深圳艾欣达伟医药科技有限公司)使用的AST-3424含量是1mg开始直至100mg。
药物在较小的剂量下，常规的液相色谱法对应的外标法或内标法并不能满足低给药量情况 下生物样本中药物代谢物的定量检测要求。因此，需要开发一种检测方法满足低检测限情况下 的定量检测要求，且能满足上述药物DMPK研究要求。
发明内容
有鉴于此，本发明提供氘代化合物及其制备方法和应用，经检测并验证氘代化合物I作为 内标可用于定量检测生物样本中的代谢产物II的最低检测限为0.5ng/ml，达到了药物DMPK 研究中的要求：
作为DMPK分析中的氘代内标，本发明提供的氘代化合物I具有一定的稳定性，在实验 条件下(-20℃和-70℃储存不变质，质量稳定)能长期储存，适合临床试验中DMPK实验室中的样本长期储存和各种操作温度(实验室室温)要求。
总体来讲，本发明实际解决了上述代谢产物II在低检测限下、DMPK研究的要求：含量 低、样本因为需要集中检测因而储存实际长、符合实验室操作实际的要求，提供了一种生物样 本中低含量代谢产物II的检测体系：氘代内标、LC-MS/MS仪器及方法、曲线拟合定量及操 作规程。
本申请使用氘代化合物I用于定量检测生物样本中的代谢产物II，能够满足低检测限情况 下的定量检测要求，适合于临床试验中DMPK研究。
本发明提供氘代化合物I，其结构式如式(I)所示：
其中，A为H或D，且8个A中至少有1个为D；
M为H或碱金属、碱土金属、铵根。
氘代化合物I为氘代的二(氮丙啶-1-基)次膦酸或其盐，成盐的阳离子为碱金属如Na+、K+， 或碱土金属离子Ca2+，或铵根离子NH4 +。优选的，M为Na、K、Li或铵根。
氘代化合物根据生物样本的情况以及后处理操作中添加的试剂不同，可能是以酸、盐的形 式而存在，对应的，氘代化合物就是酸或盐。
优选的，氘代化合物I中的8个A中至少有3个为D。作为氘代内标，在质谱中对应的质 核比m/z应该能与非氘代化合物区分。实际上，质谱峰并不是一个单一的值，而是一个围绕主 峰往两边下降的山峰形状，其主峰的横坐标值m/z即为该化合物的数值,设为x；当化合物中一 个氢原子(氕)被氘取代后，其主峰的横坐标值m/z即为x+1。显然，由于主峰的形状是一个 山峰形状，x与x+1会相互重叠，有可能导致两者无法区分。根据化合物分子量的计算方式(将 化合物中所有原子的相对原子质量相加)可知，原子越多、对应原子具有的不同相对原子质量 的同位素原子种类越多，这个主峰的往两边下降的山峰形状就会越“粗壮”，对应的与其他化合 物的主峰的重叠部分就越多。为了减少重叠部分，方法之一是增加两个主峰的距离。对于氘代 氘代化合物而言，需要增加氘代化合物中氘原子的数目，本发明结合氘代化合物I的具体情况， 并通过实验验证和计算，氘代化合物I中有3个D(氘)原子后，非氘代化合物(代谢产物II) 与氘代氘代化合物I能较好区分，如D(氘)原子较少，则需要配制更高分辨能力的质谱。
优选的，氘代化合物I中D的个数为4或者8。
更优选的，氘代化合物I优选为式(I-1)或式(I-2)结构的化合物：
具体的，氘代化合物I选自以下结构的化合物：
本发明还提供制备氘代化合物I的方法，其包括以下步骤：
I-a化合物与三卤氧磷POX3反应得I-b化合物；
I-b化合物加入碱或不加入碱在水溶液中进行水解反应，对应得氘代化合物I；
其中，I-a化合物为氘代的2-卤代乙胺或其无机酸盐、硫酸盐、磷酸盐等，A为H或D，且在I-a化合物的4个A中至少有一个A为D，在I-b和I化合物的8个A中至少有1个为D；
水解反应中碱选自：MOH，M为碱金属、碱土金属或铵根；MH，M为碱金属；MOR， R为1-4个碳的烷基，M为碱金属；碱金属的碳酸盐或碳酸氢盐，
X为卤素。
第一步反应式是I-a化合物氘代的2-卤代乙胺或其氢卤酸盐与三卤氧磷POX3反应得I-b 化合物，这个过程中发生的反应可以有一个，也可以有多个。
可以使用氘代的2-卤代乙胺或2-卤代乙胺无机酸酸盐，具体根据反应使用的溶剂确定。
由于该反应为剧烈的放热反应，因此是将2-卤代乙胺或2-卤代乙胺氢卤酸盐溶解在溶剂 中降温，然后缓慢滴加三卤氧磷POX3或三卤氧磷POX3的溶液，搅拌反应(滴加速度包装反 应体系温度在-78至-20℃)。反应的溶剂为有机溶剂，如二氯甲烷、氯仿、氯苯、1,2-二氯乙 烷、乙酸乙酯、正己烷或环己烷中的一种或几种的混合。
三卤氧磷POX3包括三溴氧磷POBr3和三氯氧磷POCl3。氘代的2-卤代乙胺无机酸盐包括 氘代的2-卤代乙胺的氢卤酸(盐酸盐、氢溴酸盐)、无机含氧酸盐(硫酸盐、磷酸盐等)，优 选的，I-a化合物为氘代的2-卤代乙胺的盐酸盐、氢溴酸盐。
第一步反应中会产生酸，因此加入碱进行反应调节。加入的碱包括无机碱和有机碱，无机 碱选择较弱的碱，如碱土金属的氢氧化物(氢氧化钙)，碱金属的碳酸盐、碳酸氢盐(碳酸钠、 碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾)。优选地，所述有机碱为甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、N,N- 二乙胺、三乙胺、正丁胺、异丁胺、4-二甲氨基吡啶、N,N-二异丙基乙胺、1,8-二氮杂二环[5.4.0] 十一碳-7-烯、N,N,N',N'-四甲基乙二胺、四甲基胍、吡啶、N-甲基二环己胺或二环己胺中的一 种或几种的混合。
这样反应操作对应为将2-卤代乙胺或2-卤代乙胺氢卤酸盐溶解在溶剂中降温，然后缓慢 滴加三卤氧磷POX3或三卤氧磷POX3的溶液再降温，降温后，加入碱或碱溶液，搅拌反应。
优选地，所述有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、氯苯、1,2-二氯乙烷、乙酸乙酯、正己烷或环 己烷、四氢呋喃中的一种或几种的混合。
化合物I-a与三卤氧磷POX3的反应在一定的氛围下进行，所述氛围是空气、氮气或氩气 中的一种，优选地，所述氛围是氮气或氩气中的一种,更优选地，所述氛围是氮气。
第二步反应是I-b化合物加入碱或不加入碱在水溶液中进行水解反应，对应得氘代化合物 I。
水解反应须加入水进行反应，因此反应是在水的参与下进行的。如仅仅加入水而不加入碱， 则反应后的氘代化合物I中M为H，对应的是酸的形式；如加入碱则对应反应会生成盐。水 解反应中碱选自：MOH，M为碱金属、碱土金属或铵根；MH，M为碱金属；MOR，R为1-4个碳的烷基，M为碱金属；碱金属的碳酸盐或碳酸氢盐。优选为NaOH和KOH。
本发明还提供上述氘代化合物I含量的检测应用，即使用31P-NMR法检测上述的氘代化 合物I的含量，优选的，使用31P-NMR法检测含有氘代化合物I的溶液中氘代化合物I的含量； 或使用液相色谱法检测上述的氘代化合物I的含量，其中，液相色谱仪条件为：
氢受体型固定相色谱柱，
A流动相为醋酸铵的甲醇溶液，B流动相为乙腈，
A、B流动相梯度洗脱，从A流动相15％体积比逐渐升高至90％体积比，然后逐渐减少到 15％体积比。
氘代化合物在制备纯化后需要进行定量检测。定量检测的方法有很多，可以在纯化后直接 称量，也可以直接使用HPLC法进行检测。
本发明制备的氘代化合物I成品是在水溶液中，一般的HPLC法、精确称量法都不是十分 快捷，通过实验验证，使用31P-NMR法检测含量具有符合要求的准确度，且快捷方便。
本发明还提供一种检测上述氘代化合物I含量的方法，其包括：
检测氘代化合物I和已知含量的含磷化合物的31P-NMR，得到谱图；
根据31P-NMR谱图中氘代化合物I和含磷化合物的化学位移特征峰的峰面积比，代入已 知含量的含磷化合物的含量计算得到氘代化合物I的含量。
所述含磷化合物优选为含有一个磷原子的化合物，更优选为六甲基磷酰三胺。
优选的，将氘代化合物I和已知含量的含磷化合物加入到溶剂中一并测试31P-NMR谱图；
优选的，将氘代化合物I和已知含量的含磷化合物加入到水中溶解后一并测试31P-NMR 谱图。
使用含磷的化合物作为31P-NMR的内标对氘代化合物I进行定量，显然选用的含磷的化 合物的磷原子数目最好是1个，这样31P-NMR的谱图信号峰比较单一，便于进行定量。另含 磷的化合物的31P-NMR的谱图信号峰的化学位移应当与氘代化合物I的31P-NMR的谱图信号 峰的化学位移间隔足够大，便于将信号峰区分开。
31P-NMR法检测谱图时，扫描的次数对含磷的化合物的31P-NMR的谱图信号峰、氘代化 合物I的31P-NMR的谱图信号峰有一定的影响，通过实验验证，扫描的次数应不小于64次。
本发明还提供上述的氘代化合物I作为内标在检测生物样本中代谢产物II的应用，优选的， 本发明提供上述氘代化合物I作为内标在检测生物样本中DNA烷化剂前药的代谢产物含量的 应用，其中代谢产物II的结构式如式(II)所示：
其中，A为H；M为H或碱金属、碱土金属、铵根。
前药，也称前体药物(prodrug)、药物前体、前驱药物等，是指经过生物体内转化后才 具有药理作用的化合物。前体药物本身没有生物活性或活性很低，经过体内代谢后变为有活性 的物质，这一过程的目的在于增加药物的生物利用度，加强靶向性，降低药物的毒性和副作用。 目前前体药物分为两大类：载体前体药物(carrier-prodrug)和生物前体(bioprecursor)。
本发明的DNA烷化剂前药是指经代谢后释放出DNA烷化剂即代谢产物II的前药。
本发明还提供上述的氘代化合物I作为内标在LC-MS/MS分析检测生物样本中AKR1C3 活化的DNA烷化剂前药或乏氧活化的DNA烷化剂前药的代谢产物含量的应用，其中代谢产 物II的结构式如式(II)所示：
其中，A为H；M为H或碱金属、碱土金属、铵根。
氘代化合物I选自
代谢产物II选自
AKR1C3活化的DNA烷化剂前药选自以下结构式1-5的化合物：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R8、R9、R10的定义如专利申请PCT/CN2020/089692，公开号WO2020228685A1中的权利要求书所记载。具体如下：
R1是C6-C10芳基或Z取代的芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基、7-15元的稠环或Z取代稠环；
R2是氢、卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、OMS、C1-C6烷基或Z 取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环 烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳 基、1-6个碳原子的醚或Z取代的1-6个碳原子的烷氧基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、-SO2R6、 -OCOO-R6、-COOR6、-NR6COR7、-OCOR6、-NR6SO2R7、-NR6SO2NR6R7或者R2和与其所 键结的R1基团上的原子一起形成7-15元的稠环或Z取代稠环；
R3是氢、卤素、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、OLCMS、C1-C6烷基或Z 取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环 烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳 基、C1-C6烷氧基或Z取代的C1-C6烷氧基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、-SO2R6、-OCO-R6、 -OCOO-R6、-COOR6、-NR6COR7，-OCOR6、-NR6SO2R7；
R4、R5各自独立地是氢、卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、OLCMS、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷 基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基 或Z取代杂芳基、C1-C6烷氧基或Z取代的C1-C6烷氧基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、-SO2R6、 -OCOO-R6、-COOR6、-NR6COR6、-OCOR6、-NR6SO2R7或者R4、R5和与其所键结的苯环上 的原子一起形成7-15元的稠环或Z取代稠环；
R6和R7各自独立地是氢、氰基或异氰基、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z 取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代 芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基、C1-C6烷氧基或Z取代 的C1-C6烷氧基，或者R6、R7基团与其所键结的原子一起形成5-7元杂环基或Z取代5-7 元杂环基；
R8、R10各自独立地为氢、氘、芳基或Z取代芳基、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基且必有一个为 氢、氘；
R9为至少具有一个氟原子或硝基取代的取代C6-C10芳基、至少具有一个氟原子或硝基 取代的取代4-15元杂环、至少具有一个氟原子或硝基取代的取代5-15元杂芳基。
Z取代基为卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、OMS、C1-C3烷基或 取代烷基、C1-C3烷氧基或取代烷氧基、C2-C3烯基或取代烯基、C2-C3炔基或取代炔基、C3-C8环烷基或取代环烷基、芳环、杂环、杂芳环和稠环或取代芳环、杂环、杂芳环和稠环，取 代的方式为单取代或偕二取代；
R9中的取代C6-C10芳基、取代4-15元杂环、取代5-15元杂芳基的取代基为卤素原子、 硝基、氰基或异氰基、羟基、胺基、C1-C3烷基或烷氧基、烯基、炔基、环烷基或苯环、取 代苯环、C1-C3烷氧基或卤原子取代烷氧基。
具体的，式(1)(2)的化合物选自：
具体定义和含义以及制备方法、波谱数据参见专利申请PCT/CN2020/089692，公开号WO2 020228685A1，在此将该申请全文引入。
显然结构式1/2的化合物与AST-342相同，都是AST-2660(酸形式)的前药，其会在AK R1C3酶的作用下活化而产生AST-2660发挥抗癌效果：
显然该化合物包括结构式1/2及其盐、酯、溶剂合物、同位素异构体。
其中，Rw的定义如专利申请PCT/CN2020/120281，公开号WO2021068952A1中的权利要求 书所记载。具体如下：
Rw为
R1为H、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、5-6元杂芳基或苯基，其中所述C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、5-6元杂芳基和苯基任选被1、2或3个Ra所取代；
各Ra独立地为H、F、Cl、Br、I、-CN、-OH、C1-3烷氧基或C1-3烷基；
R2为H或C1-6烷基；
或者R1和R2连接在一起，与其相连的N原子一起形成4-6元杂环烷基，其中所述4-6元杂 环烷基任选被1、2或3个Rb所取代；
各Rb独立地为H、F、Cl、Br、I、-CN、-OH、-NH2、-OCH3、-OCH2CH3、-CH3或-CH2 CH3；
R3为H、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、C1-3烷氧基或C1-3烷基；
或者R2和R3连接在一起使结构单元
为
T1为-(CRcRd)m-或-(CRcRd)n-O-；
m为1、2或3；
n为1或2；
T2为N或CH；
Rc和Rd各自独立地为H、F、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
R4、R5和R6各自独立地为H、F、Cl、Br、I、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
T为N或CH；
R7和R8各自独立地为H、F、Cl、Br或I；
R9和R10各自独立地为H、F、Cl、Br、I、-CN或
所述4-6元杂环烷基和5-6元杂芳基各自包含1、2、3或4个独立选自N、-O-和-S-的杂原 子。
具体的，式(3)的化合物选自：
具体定义和含义以及制备方法、波谱数据参见专利申请PCT/CN2020/120281，公开号WO2 021068952A1，在此将该申请全文引入。
显然结构式3的化合物与AST-3424相同，都是AST-2660(酸形式)的前药，其会在AKR1C3酶的作用下活化而产生AST-2660发挥抗癌效果：
其中，X、Y、Z、R、A以及X10的定义如专利申请PCT/US2016/021581，公开号WO2016145092A1(对应中国申请号2016800150788，公开号CN107530556A)中的权利要求 书所记载，T为
具体如下：
X10是O、S、SO或SO2；
A是C6-C10芳基、5-15元杂芳基或-N＝CR1R2；
R1及R2各自独立是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、醚、-CONR13R14或-NR13COR14；
X、Y及Z各自独立是氢、CN、卤基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、醚、-CONR13R14或-NR13COR14；
R是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、醚、-CONR13R14或-NR13COR14；
R13及R14各自独立是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环或醚
T为
且
其中这些烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环、杂芳基、醚基经取代或未经取代。
具体的，式(5)的化合物选自：
具体定义和含义以及制备方法、波谱数据参见专利申请PCT/US2016/021581，公开号WO2 016145092A1(对应中国申请号2016800150788，公开号CN107530556A)中的权利要求书所记 载，，在此将该申请全文引入。
显然结构式4的化合物与AST-3424T类似，是胺基磷酸酯烷化剂的前药，其会在AKR1C 3酶的作用下活化而产AST-2660(酸形式)发挥抗癌效果：
其中：
A是取代或未经取代的C6-C10的芳基、联芳基或取代的联芳基、5-15元的杂芳基或-N＝C R1R2，其中取代时的取代基选自由以下组成的群：卤基、-CN、-NO2、–O-(CH2)-O-、-CO2H及 其盐、-OR100、-CO2R100、-CONR101R102、-NR101R102、-NR100SO2R100、-SO2R100、-SO2NR101R102、C1-C6烷基、C3-C10杂环基；
其中，R100、R101及R102各自独立是氢、C1-C8烷基、C6-C12芳基；或R101及R102与其附接至的氮原子一起形成5-7元杂环；
其中烷基及芳基各自是经1-3个卤基或1-3个C1-C6烷基取代；
R1及R2各自独立是苯基或甲基；
X、Y及Z各自独立是氢或卤基；
R是氢或C1-C6烷基或卤素取代烷基。
基团前的“Cx-Cy”或“Cx-y”是指存在于该基团中的碳原子数目的范围。举例而言，C1-C6烷 基是指具有至少1个且最多6个碳原子的烷基。
“烷基”是指具有1至10个碳原子且在一些实施例中具有1至6个碳原子的单价饱和脂肪族烃 基。“Cx-y烷基”是指具有x至y个碳原子的烷基。此术语包括(举例而言)直链及具支链烃基，例 如甲基(CH3-)、乙基(CH3CH2-)、正丙基(CH3CH2CH2-)、异丙基((CH3)2CH-)、正丁基 (CH3CH2CH2CH2-)、异丁基((CH3)2CHCH2-)、仲丁基((CH3)(CH3CH2)CH-)、叔丁基((CH3)3C-)、 正戊基(CH3CH2CH2CH2CH2-)及新戊基((CH3)3CCH2-)。
“芳基”是指具有6至14个碳原子且不含环杂原子且具有单环(例如，苯基)或多个缩合(稠合) 环(例如，萘基或蒽基)的芳香族基团。对于包括不具有环杂原子的具有芳香族环及非芳香族环 的稠合、桥连及螺环系统的多环系统而言，当附接点位于芳香族碳原子处时，术语“芳基”或“Ar” 适用(例如，5,6,7,8四氢萘-2-基是芳基，此乃因其附接点是位于芳香族苯基环的2位处)。“伸芳 基”是指具有适当氢含量的二价芳基。
“环烷基”是指具有3至14碳原子且没有环杂原子且具有单环或包括稠合、桥连及螺环系统 的多环的饱和或部分饱和环状基团。对于不具有环杂原子的具有芳香族及非芳香族环的多环系 统而言，当附接点是位于非芳香族碳原子处时，术语“环烷基”适用(例如5,6,7,8-四氢萘-5-基)。 术语“环烷基”包括环烯基。环烷基的实例包括(例如)金刚烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环 辛基及环己烯基。“伸环烷基”是指具有适当氢含量的二价环烷基。
“卤基”是指氟、氯、溴及碘中的一或多者。
“杂芳基”是指具有1至14个碳原子及1至6个选自由氧、氮及硫组成的群的杂原子的芳香族 基团且包括单环(例如咪唑基-2-基及咪唑-5-基)及多环系统(例如咪唑并吡啶基、苯并三唑基、 苯并咪唑-2-基及苯并咪唑-6-基)。对于包括具有芳香族及非芳香族环的稠合、桥连及螺环系统 的多环系统而言，若存在至少一个环杂原子且附接点是位于芳香族环的原子处，则应用术语“杂 芳基”(例如1,2,3,4-四氢喹啉-6-基及5,6,7,8-四氢喹啉-3-基)。在一些实施例中，杂芳基的氮及/ 或硫环原子视情况经氧化以提供N-氧化物(N→O)、亚磺酰基或磺酰基部分。术语杂芳基包括(但 不限于)吖啶基、吖辛因基(azocinyl)、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩 基(benzothiophenyl)、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、 苯并异噻唑基、苯并噻吩基(benzothienyl)、苯并咪唑啉基、咔唑基、NH-咔唑基、咔啉基、苯 并二氢吡喃基(chromanyl)、苯并吡喃基(chromenyl)、噌啉基(cinnolinyl)、二噻嗪基、呋喃基、 呋呫基、咪唑啶基、咪唑啉基、咪唑并吡啶基、咪唑基、吲唑基、二氢吲哚基(indolenyl)、吲 哚啉基、吲嗪基、吲哚基、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基(isochromanyl)、异吲唑基、异吲 哚啉基、异吲哚基、异喹啉基(isoquinolinyl)、异喹啉基(isoquinolyl)、异噻唑基、异恶唑基、萘 啶基、八氢异喹啉基、恶二唑基、恶唑啶基、恶唑基、嘧啶基、啡啶基、啡啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩恶噻基、吩恶嗪基、酞嗪基、六氢吡嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡 唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、嗒嗪基、吡啶并恶唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喏啉基、奎宁环基、四 氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、噻二嗪基、噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基(thienyl)、 噻吩并噻唑基、噻吩并恶唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基(thiophenyl)、三嗪基及呫吨基。“伸杂 芳基”是指具有适当氢含量的二价杂芳基。
“杂环状”或“杂环”或“杂环烷基”或“杂环基”是指具有1至14个碳原子及1至6个选自由氮、硫 或氧组成的群的杂原子的饱和或部分饱和环状基团且包括单环及包括稠合、桥连及螺环系统的 多环系统。对于具有芳香族及/或非芳香族环的多环系统而言，当存在至少一个环杂原子且附 接点是位于非芳香族环的原子处时，术语“杂环状”、“杂环”、“杂环烷基”或“杂环基”适用(例如 1,2,3,4-四氢喹啉-3-基、5,6,7,8-四氢喹啉-6-基及十氢喹啉-6-基)。在一些实施例中，此处杂环基 是3-15元、4-14元、5-13元、7-12或5-7元杂环。在一些其他实施例中，杂环含有4个杂原子。 在一些其他实施例中，杂环含有3个杂原子。在另一实施例中，杂环含有最多2个杂原子。在一 些实施例中，杂环基的氮及/或硫原子视情况经氧化以提供N-氧化物、亚磺酰基、磺酰基部分。 杂环基包括(但不限于)四氢吡喃基、六氢吡啶基、N-甲基六氢吡啶-3-基、六氢吡嗪基、N-甲基 吡咯啶-3-基、3-吡咯啶基、2-吡咯啶酮-l-基、吗啉基及吡咯啶基。指示碳原子数的前缀(例如， C3-10)是指杂环基部分中除杂原子数之外的总碳原子数。二价杂环基将具有适当调整的氢含 量。
“联芳基”是指两个芳环通过C-C单键相联的结构，如联苯、联吡啶等。
术语“视情况经取代”是指经取代或未经取代的基团。基团可经一或多个取代基(例如1、2、 3、4或5个取代基)取代。较佳地，取代基选自由以下组成的群：侧氧基、卤基、-CN、NO2、 -N2+、-CO2R100、-OR100、-SR100、-SOR100、-SO2R100、-NR100SO2R100、-NR101R102、-CONR101R102、 -SO2NR101R102、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-CR100＝C(R100)2、-CCR100、C3-C10环烷基、C3-C10杂环基、C6-C12芳基及C2-C12杂芳基或诸如–O-(CH2)-O-、–O-(CH2)2-O-及其1-4个甲基经取代的 形式等二价取代基，其中R100、R101及R102各自独立是氢或C1-C8烷基；C3-C12环烷基；C3-C10杂 环基；C6-C12芳基；或C2-C12杂芳基；或R101及R102与其附接至的氮原子一起形成5-7元杂环；其 中烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基各自视情况经1-3个卤基、1-3个C1-C6烷基、1-3个C1-C6卤烷基或1-3个C1-C6烷氧基取代。较佳地，取代基选自由以下组成的群：氯、氟、-OCH3、甲 基、乙基、异丙基、环丙基、-CO2H及其盐及C1-C6烷基酯、CONMe2、CONHMe、CONH2、-SO2Me、 -SO2NH2、-SO2NMe2、-SO2NHMe、-NHSO2Me、-NHSO2CF3、-NHSO2CH2Cl、-NH2、-OCF3、-CF3及-OCHF2。
具体的，式(5)的化合物选自：
具体定义和含义以及制备方法、波谱数据参见PCT/US2016/021581，公开号WO201614509 2A1(对应中国申请号2016800150788，公开号CN107530556A)；PCT/US2020/120281，公开 号WO2021068952A1；PCT/CN2020/089692，公开号WO2020228686所公开，在此将这些申请 全文引入。
显然结构式6的化合物与AST-3424类似，是AST-2660的前药，其会在AKR1C3酶的作用 下活化而产生AST-2660发挥抗癌效果：
乏氧活化的DNA烷化剂前药选自选自以下结构式6-12的化合物：
其中，R1、R2、R3、Cx的定义如专利申请PCT/CN2020/114519，公开号WO2021120717A1中的权利要求书所记载。具体如下：
Cx为5-10元的芳环或芳杂环、脂杂环或环烷烃，其与硝基苯环共用两个碳原子形成稠 环结构；
R1连接在Cx环的任意骨架原子上，选自氢、卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基 或Z取代杂芳基、1-6个碳原子的烷氧基或Z取代的1-6个碳原子的烷氧基、-CONR6R7、 -SO2NR6R7、-SO2R6、-OCOO-R6、-COOR6、-NR6COR7、-OCOR6、-NR6SO2R7、-NR6SO2NR6R7，
R2、R3各自独立地是氢、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代 杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基或者R2、R3和与其所键结的苄位碳原子一起形成3-6元环；
Z取代基为卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、C1-C3烷基或取代烷基、C1-C3烷氧基或取代烷氧基、C2-C3烯基或取代烯基、C2-C3炔基或取代炔基、C3-C8环烷基或取代环烷基；
R6、R7各自独立地是氢、C1-C6烷基或Z取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或Z取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或Z取代的C2-C6炔基、C3-C8环烷基或Z取代的C3-C8环烷基、C6-C10芳基或Z取代的C6-C10芳基、4-15元杂环基或Z取代的4-15元杂环基、5-15元杂芳基或Z 取代的5-15元杂芳基，或者R6、R7和与其所键结的原子一起形成5-7元杂环基或Z取代的 5-7元杂环基。
具体定义和含义以及制备方法、波谱数据参见PCT/CN2020/114519，公开号WO2021120717A1所公开内容，在此将这些申请全文引入。
具体的，式(6)的化合物选自：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17的定义如专利申请PCT/US2016/039092，公开号WO2016210175A1(对应中国申请号 2016800368985，公开号CN108024974A)中的权利要求书所记载。具体如下：
R1为：氢、-N3、CN、卤基、NR21R22、-OR23、-SO2(C1-C6烷基)、C1-C6烷基、C2-C6 烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、5-15元杂芳基或醚；
R21和R22各自独立地为氢、羟基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、5-15元杂芳基或-SO2(C1-C6烷基)；或R21和R22与其所键接的氮 原子一起形成4-15元杂环或5-15元杂芳基；
R23为氢、C1-C6烷基或C6-C10芳基；
R2和R3独立地为氢或卤基；
R4为氢、卤基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基或C6-C10芳基，
R5、R7、R9、R12和R15独立地为氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷 基、C6-C10芳基、4-15元杂环、5-15元杂芳基；或R4和R5与其之间的介入碳原子一起形成 C5-C6环烷基环；
R6和R10独立地为氢或卤基；
R8为氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或5-15元杂芳基；
R11各自独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基或C6-C10芳基；
R13、R14、R16和R17独立地为氢、卤基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C1-C6 烷氧基；
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环、杂芳基、烷氧基和醚基团任选地经取 代。
具体定义和含义以及制备方法、波谱数据参见PCT/US2016/039092，公开号WO2016210175A1(对应中国申请号2016800368985，公开号CN108024974A)所公开内容， 在此将这些申请全文引入。
具体的，式(7)-(12)的化合物选自上述专利申请中具体公开的化合物。
显然，本说明书中上述化学式1-12中的“化合物”也当然包括化合物本身以及该化合物的溶 剂合物、盐、酯或同位素异构体等。
本发明还提供一种检测生物样本中代谢产物含量的方法，其包括以下步骤：
制备含有已知浓度的内标化合物的待测溶液供LC-MS/MS进样分析；
标准工作溶液的制备，制备含有已知浓度的内标化合物、已知浓度的代谢产物II的一系 列标准工作溶液，该一系列标准工作溶液中内标化合物的浓度一致，且与所述待测溶液中的内 标化合物浓度相同，该一系列标准工作溶液中代谢产物II的浓度是不同的；
液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定关系函数，吸取配制好的不同浓度的代谢产物 II的标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，得到关系函数y＝f(x)，其中y代表代 谢产物II与内标化合物峰面积的比值，x表示标准工作溶液中代谢产物II的浓度；
利用关系函数测定计算未知浓度的待测溶液中代谢产物II的浓度，吸取加入已知含量的 内标化合物的待测溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，测得代谢产物II与内标化合物峰面 积的比值y，代入函数y＝f(x)，求得待测溶液中代谢产物II的浓度x，
其中，所述待测溶液由所述生物样本经处理或不处理而制备，
所述内标化合物为氘代化合物I，其结构式如式(I)所示：
A为H或D，且8个A中至少有1个为D；
M为H或碱金属、碱土金属、铵根；
代谢产物II的结构式如式(II)所示：
A为H；
M为H或碱金属、碱土金属、铵根。
一种检测生物样本中代谢产物含量的方法，其包括以下步骤：
待测生物样本溶液中加入定量的内标化合物，经提取处理，作为待测溶液；
使用代谢产物II对照品稀释得到一系列不同浓度的代谢产物II的溶液，加入定量的内标 化合物，经提取处理，作为标准工作溶液，吸取系列标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统进 行检测，测得代谢产物II与内标化合物的峰面积，以代谢产物II与内标化合物的峰面积比值 为纵坐标，以代谢产物II浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程；
吸取待测溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，测得待测溶液中代谢产物II与氘代化合 物I峰面积的比值，代入回归方程，求得待测溶液中代谢产物II的含量，
其中，内标物为氘代化合物I，结构式如式(I)所示：
A为H或D，且8个A中至少有1个为D；
M为H或碱金属、碱土金属、铵根；
代谢产物II的结构式如式(II)所示：
A为H；
M为H或碱金属、碱土金属、铵根。
优选的，液相色谱-串联质谱法中液相色谱仪条件为：
氢受体型固定相色谱柱，
A流动相为醋酸铵的甲醇溶液，B流动相为乙腈，
A、B流动相梯度洗脱，从A流动相15％体积比逐渐升高至90％体积比，然后逐渐减少到 15％体积比；
质谱条件为：电喷雾离子源，
负离子扫描方式下
代谢产物II监测离子对为：m/z 147.0→m/z 62.9，
氘代化合物I监测离子对为：m/z(147.0+氘代的数目)→m/z 62.9；
或
正离子扫描方式下
代谢产物II监测离子对为：m/z 149.0→m/z 64.9，
氘代化合物I监测离子对为：m/z(149.0+氘代的数目)→m/z 64.9。
如使用正离子扫描方式，对应的流动相中建议添加酸，比如甲酸。
优选的，制备含有已知含量的氘代化合物I(内标化合物)的待测溶液时，制备含有已知 含量的氘代化合物I的待测溶液时，优选先在生物样本溶液中添加氘代化合物I后，再进行提 取操作；
对应的，制备标准工作溶液时，在含已知的不同浓度的代谢产物II的基质溶液中先添加 氘代化合物I后，再进行提取操作。
优选的，所述生物样本为尿液样本或血浆样本，对应的，在检测尿液样本时，对应的基质 溶液为含有添加剂的、没有给药的患者的尿液；在检测血液样本时，对应的基质溶液为含有抗 凝剂的、没有给药的患者的血浆。
加入氘代化合物、提取操作流程为:待测溶液、标准工作溶液加入氘代化合物I溶液，加入 甲醇混合均匀，离心取上清液即得；
添加剂为Na2HPO4或K2HPO4，抗凝剂为K2EDTA或Na2EDTA。
对于血液样本，应在采集后4小时内储存到-20℃以下环境中，优选为-70℃环境中，-70℃ 条件下可储存28天；；如经过处理则应在4℃或以下温度下冷藏且在54小时内完成进样检测
对于尿液样本，应在采集后的24小时内，优选4小时内储存在-70℃条件下，-70℃条件 下可储存32天；如经过处理则应在室温或以下温度条件下94小时内完成进样检测。
附图说明
图1为AST-2660-D8-钠盐的31P-NMR谱图。
图2为第一份AST-2660-D8-钠盐水溶液的31P-NMR谱图，分别为扫描64、128、256、512 次，分别参见a图、b图、c图和d图。
图3为零时刻的31P-NMR谱图，依此为AST-2660-D8钠盐溶液-20℃(a图)、AST-2660-D8 钠盐溶液-78℃(b图)。
图4为48小时后的31P-NMR谱图，依此为AST-2660-D8钠盐溶液-20℃(a图)、AST-2660-D8 钠盐溶液-78℃(b图)。
图5为-20℃储存6个月后AST-2660-D8钠盐水溶液的31P-NMR谱图。
图6为-78℃储存6个月后AST-2660-D8钠盐水溶液的31P-NMR谱图。
图7为空白人血浆提取物中AST-2660(a图)和内标AST-2660-D8(b图)的典型LC-MS/MS 谱图。
图8为零浓度血浆样品提取物中AST-2660(a图)和内标AST-2660-D8(b图)的的典型 LC-MS/MS谱图谱图。
图9为标准品溶液人血浆提取物(0.50ng/ml)的AST-2660(a图)和内标AST-2660-D8 (b图)的典型LC-MS/MS谱图。
图10为标准品溶液人血浆提取物(200ng/ml)的AST-2660(a图)和内标AST-2660-D8 (b图)的典型LC-MS/MS谱图。
图11为空白人尿液提取物中AST-2660和内标AST-2660-D8的典型LC-MS/MS谱图。
图12为零浓度尿液样品提取物中AST-2660和内标AST-2660-D8的的典型LC-MS/MS谱 图谱图。
图13为标准工作溶液人尿液提取物(0.50ng/ml)的AST-2660和内标AST-2660-D8的典 型LC-MS/MS谱图。
图14为标准工作溶液人尿液提取物(200ng/ml)的AST-2660和内标AST-2660-D8的典 型LC-MS/MS谱图。
图8至图14中的坐标图中，横坐标为时间，纵坐标为LC-MS/MS的质谱离子强度，质谱 离子为选定的离子。
具体实施方式
需要说明的是，除非另外定义，本说明书一个或多个实施例使用的技术术语或者科学术 语应当为本公开所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原 料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
申请人开发的AST-3424药物是DNA烷化剂AST-2660的前药，其特异性的被癌细胞高表 达的AKR1C3酶所激活而代谢为AST-2660发挥药效。如背景技术部分所示，在人体临床试验 中，需要对受试者的生物样本，如血液、尿液、组织等进行药物和药物代谢物的含量检测，通 过检测得到的药物和药物代谢物的含量进行药物的DMPK(Drug Metabolism andPharmacokinetics,中文意思是药物代谢及药代动力学)研究。而临床中使用的AST-3424含量较 低，是从1mg开始直至100mg，在较小的剂量下，常规的液相色谱法对应的外标法或内标法 并不能满足低检测限情况下的定量检测要求。因此，需要提供一种检测方法能够满足低检测限 情况下的定量检测要求。
本申请为了解决上述技术问题，申请人尝试采用内标定量对生物样本中低含量的AST-2660进行定量。内标法是色谱分析中一种比较准确的定量方法，内标法是将一定重量的 纯物质加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定 内标物和待测组分的峰面积，即可求出被测组分在样品中的百分含量。内标物的选择是一项十 分重要的工作。理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的已知化合物，这样它能以准确、已 知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的化学物理性质 (如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析 物质的一个同系物。当然，在色谱条件下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。对于内标 法定量分析来说，内标物的选择是十分重要的。它必须满足如下的条件：1.内标物与被分析 物质的物理化学性质要相似(如沸点、极性、化学结构等)；2.内标物应是该试样中不存在 的纯物质；3.它必须完全溶于被测样品(或溶剂)中，且不与被测样品起化学反应；并与试 样中各组分的色谱峰能完全分离；4.能加入内标物的量应接近于被测组分；5.色谱峰的位置 应与被测组分的色谱峰的位置相近，或在几个被测组分色谱峰中间。且又不共溢出，目的是为 了避免仪器的不稳定性所造成的灵敏度的差异；6.选择合适的内标物加入量，使得内标物和 被分析物质二者峰面积的匹配性大于75％，以免由于它们处在不同响应值区域而导致的灵敏度 偏差。
本申请对AST-2660的类似化合物进行了大量筛选，最终筛选得到氘代化合物I作为检测 代谢产物II的内标。使用氘代化合物I建立的液相-质谱/质谱联用方法具有较低的检测限：低 至0.5ng/ml。而且，本申请使用氘代化合物I建立的液相-质谱/质谱联用方法可用于检测人血 浆和人尿液中代谢产物AST-2660含量，该方法符合生物样本分析要求，样本处理方法简便， 方法灵敏度高，精密度和准确度高。
下面结合具体的实施例对本发明提供的技术方案做进一步的描述。下述实施例仅用于对本 发明进行说明，并不会对本发明的保护范围进行限制。
缩略语的一般列表
实施例1 AST-2660-D8-钠盐的合成
氮气保护下,氘代2-溴乙胺的氢溴酸盐(360mg，1.72mmol)，三氯氧磷(132mg，0.86mmol) 加入到无水二氯甲烷中(4mL)(先加入氘代2-溴乙胺的氢溴酸盐，后加入三氯氧磷)，降温 至-78℃，滴加入三乙胺(348mg，3.44mmol)的二氯甲烷溶液(2mL)，在-78℃下保温30min， 自然升温至0℃，然后在0℃下保温4小时，然后快速抽滤掉固体，低温浓缩母液，直接用于 下一步。
将上述所得粗品溶于水中(30.8mL)，缓慢分批加入氢氧化钠固体(275mg，6.88mmol)， 反应常温搅拌过夜。然后于-20℃保存。31P-NMR表征如图1所示：作为内标的HMPA的核磁 峰29.886ppm，而AST-2660-D8-钠盐核磁峰24.503PPM。
图1为AST-2660-D8-钠盐的31P-NMR谱图。
显然，在上述操作中，通过选取不同的氘代原料化合物I-a(氘代2-溴乙胺)可以合成不 同的中间体I-b，进而在水解反应中添加不同的碱(NaOH、KOH、LiOH或是氨水)得到不同 的氘代二(氮丙啶-1-基)次膦酸或其盐。
上述是I-a到I-b一个反应完成，实际上也可以采取分(两)步反应并改变投料顺序和反 应物的数量，显然如此操作与上述I-a到I-b一个反应完成是等同的，即：
氮气保护下,氘代2-溴乙胺的氢溴酸盐，三氯氧磷加入到无水二氯甲烷中先加入三氯氧磷， 后加入第一个氘代2-溴乙胺的氢溴酸盐，两者摩尔比三氯氧磷：氘代2-溴乙胺的氢溴酸盐大 于1)，降温至-78℃，滴加入三乙胺的二氯甲烷溶液，在-78℃下保温30min后再加入第二个 氘代2-溴乙胺的氢溴酸盐，滴加入三乙胺的二氯甲烷溶液，在-78℃下保温30min后，自然升 温至0℃，然后在0℃下保温4小时，然后快速抽滤掉固体，低温浓缩母液，直接用于下一步。
将上述所得粗品溶于水中，缓慢分批加入氢氧化钠固体，反应常温搅拌过夜。然后于-20℃ 保存，发生的反应如下：
通过选取不同的第一个氘代2-溴乙胺的氢溴酸盐和第二个氘代2-溴乙胺的氢溴酸盐的氘 代位置、氘代数目可以合成制备不同的氘代化合物I以及不同的盐。
以下以实施例1制备的AST-2660-D8-钠盐为例具体说明定量检测方法。
实施例2检测AST-2660-D8-钠盐的方法
本实施例以HMPA(六甲基磷酰三胺)作为磷谱内标用于检测实施例1制备的 AST-2660-D8-钠盐的含量。
取HMPA(33.0mg，0.1840mmol)溶于水(2.2mL)，总质量为2612mg，HMPA的浓度 为7.050×10-5(mmol/mg，31P-NMR的核磁位移为29.890ppm)
以HMPA的水溶液为内标测定磷谱，测定AST-2660-D8-钠盐的含量。
1、第一份样品检测
取实施例1制备的AST-2660-D8-钠盐水溶液，约0.5mL(488mg)和已精密称量配制的 HMPA水溶液(317mg)，扫描64次测定磷谱(如图2所示)：核磁中对应的HMPA的核磁 峰29.874ppm与AST-2660-D8-钠盐核磁峰24.491的峰积分面积比＝1：0.257。
图2为第一份AST-2660-D8-钠盐水溶液的31P-NMR谱图，从上到下，从左至右分别为扫 描64、128、256、512次。
已知HMPA的量为0.02235mmol，则根据核磁峰积分面积比可计算得到AST-2660-D8-钠盐 的量应为0.005743mmol，浓度应为1.177×10-5mmol/mg，即1.177×10-2mmol/g，对应的质 量含量即2.10mg/g。同样算得，扫描次数为128次、256次、512次时磷谱如图2所示，其 峰积分面积比依次为1：0.264，1：0.268，1：0.264，则同样的样品的浓度分别为1.209×10-5 mmol/mg、1.227×10-5mmol/mg、1.209×10-5mmol/mg，即2.15mg/g、2.18mg/g、2.15mg/g， 四份结果平均为2.1mg/g。
本实施例的核磁定量方法比较快捷简单，在一定范围内具有可接受的准确度，可以代替 HPLC产量分析方法。如果需要进一步的提高定量的准确度，应使用HPLC方法，选用外标法 定量，通过标准曲线来精确定量绝对含量。
实施例5和实施例7的LC-MS/MS方法适用于AST-2660-D8、AST-2660的低含量检测，其对应的LC液相方法(对应的MS/MS检测器替换为常规的示差检测器、电喷雾检测器、蒸 发光散射检测器)同样适用于AST-2660，AST-2660-D8的常量(mg/ml)含量检测。
实施例3 AST-2660-D8-钠盐的稳定性研究
本实施例是研究AST-2660-D8-钠盐水溶液含量检测样品溶液的稳定性：使用31P-NMR检 测，比较在48小时内作为内标的HMPA的31P峰和AST-2660-D8-钠盐的31P峰的面积比来表 征AST-2660-D8-钠盐水溶液含量检测样品溶液是否发生降解而质量减少。
1.分析方法
在NMR上运行样品的31P-NMR。
HMPA(21.8mg，0.1217mmol)溶于水(2.20mL)，总质量为2127mg，HMPA的浓度为5.72×10-5mmol/mg。AST-2660-D8-钠盐溶液(588mg，约0.5mL)和HMPA(293mg， 1.676×10- 2mmol)溶液混合在一起作为样品在-20℃储存条件下在不同时间进行31P-NMR分析。 并计算核磁中对应的HMPA的核磁峰(29.874ppm左右)与AST-2660-D8-钠盐核磁峰 (24.491ppm左右)的峰积分面积比，并且将HMPA的核磁峰峰积分设置为1。
同样的操作，配制另一份浓度的样品进行检测，在-78℃储存条件下在不同时间进行 31P-NMR分析。。
2.-20到-78℃储存48小时稳定性结果
在-20、-78℃储存48小时，并分别在0h、2h、4h、6h、8h、16h、24h、36h、48h分别检 测并记录，结果如下表1。
表1：AST-2660-D8钠盐在-20、-78℃储存48小时稳定性数据
在-20℃储存条件下，8/16/24/36/48小时的HMPA的31P-NMR核磁峰与AST-2660-D8-钠 盐溶液峰面积比稳定在1：0.43～1：0.47，而-78℃储存条件下比值稳定在1：0.21～1：0.24，因 此可以认为：AST-2660-D8-钠盐溶液，在-20到-78℃储存48小时是稳定的。
代表性谱图为图3、图4。
图3为零时刻的31P-NMR谱图，从左至右依此为AST-2660-D8钠盐溶液-20℃、 AST-2660-D8钠盐溶液-78℃。
图4为48小时后的31P-NMR谱图，从左至右依此为AST-2660-D8钠盐溶液-20℃、AST-2660-D8钠盐溶液-78℃。
3.在-20℃下储存6个月的稳定性
使用上述记载的方法测得AST-2660-D8钠盐的浓度在0天时为1.89mg/mL，并且-20℃储 存6个月后浓度为1.37mg/mL。AST-2660-D8钠盐在储存6个月内浓度降低了27.5％。
6个月后的31P-NMR谱图如图6所示。
图5为-20℃储存6个月后AST-2660-D8钠盐水溶液的31P-NMR谱图。
4.样品在-78℃下储存6个月的稳定性
使用上述记载的方法测得AST-2660-D8钠盐的浓度在0天时为1.89mg/mL，并且-78℃储 存6个月后浓度为1.71mg/mL。AST-2660-D8钠盐在储存6个月内浓度降低了9.5％，相对而 言，-78℃储存比-20℃储存更稳定，降解变化更慢。
6个月后的31P-NMR谱图如图7所示。
图6为-78℃储存6个月后AST-2660-D8钠盐水溶液的31P-NMR谱图。
由上述稳定性实验结果可知，AST-2660-D8钠盐水溶液含量检测样品溶液在-20至-78℃下 放置2天是稳定的，：当AST-2660-D8钠盐水溶液分别在-20℃和-78℃储存6个月时，浓度分 别降低27.5％和9.5％。
实施例4人血浆中AST-2660的检测方法的建立及验证
本实施例使用氘代内标(IS)AST-2660-D8(实施例1制备)对含有K2EDTA抗凝剂的人 血浆中的代谢产物AST-2660(以钠盐形式存在)进行定量检测。其中，AST-2660的结构式如 下所示：
AST-2660钠盐
分子式：C4H8N2O2PNa
分子量：170.08
使用的氘代化合物AST-2660-D8钠盐的结构如下所示：
AST-2660-D8钠盐
分子式：C4D8N2O2PNa
分子量：178.13
以下的AST-2660均指其钠盐，AST-2660-D8也是均指其钠盐。
1、LC-MS/MS实验方法。
给出了LC-MS/MS实验方法的相关参数。
表2：色谱分析法仪器参数
表3：质谱仪MS/MS的实验参数
表4：质谱仪MS/MS的实验参数可调参数(列出了典型值)
| 温度： | 500℃ |
| 离子喷雾电压： | -4500V |
2、样品制备
2.1标准品工作溶液的制备
AST-2660(参照实施例1选用非氘代原料制备)标准品贮备溶液(浓度1.0mg/ml的甲醇 溶液)：AST-2660适量，加甲醇适量稀释并混匀，得到1.0mg/ml溶液。
取100μL AST-2660标准品贮备溶液，加9900μL甲醇稀释并混匀，得到10.0μg/ml的校准 标准品工作溶液。
2.2标准曲线制备
将标准品工作溶液(SWS)和空白基质(稀释剂)放置至室温。使用前对标准品工作溶液 进行涡旋，其中，将含有抗凝剂(K2EDTA)的正常混合人血浆用作稀释剂和空白基质，按下 表制备不同浓度的标准曲线标准品样品溶液。
表5：标准品工作溶液(SWS)和空白基质(稀释剂)稀释数据
2.3内标工作溶液(标准工作溶液)的制备
AST-2660-D8贮备溶液(50μg/ml AST-2660-D8甲醇溶液)：AST-2660-D8对照品适量， 加入适量甲醇适量稀释并混匀，得到50μg/ml溶液。取20μL AST-2660-D8内标贮备溶液，加 9980μL甲醇稀释并混匀，得到100ng/ml的内标工作溶液。
2.4质控样品的制备
AST-2660质控贮备溶液(1.0mg/ml的甲醇溶液)：AST-2660对照品适量，加入适量甲醇 稀释并混匀，得到1.0mg/ml溶液。取100μL AST-2660QC贮备溶液和9990μL甲醇，得到10.0μg/ml的质控工作溶液；
将含有抗凝剂(K2EDTA)的正常混合人血浆用作稀释剂，按下表进行稀释，制备不同浓 度的质控样品。
表6：质控样品的制备
3、样品的前处理
使用蛋白质沉淀法提取样品的步骤：
1.确认标准曲线样品、质控样品和血浆样品的标签和顺序；
2.解冻后，将所有样品放在多管涡旋仪上涡旋均匀；
3.每份样品取100μl加入96孔板中；
4.除空白样品外，加入20μl AST-2660-D8质控工作溶液氘代内标(即100ng/mlAST-2660-D8甲醇溶液)。在空白样品中加入20μl甲醇；
5.加入500μl甲醇；
6.以中速将孔板涡旋3分钟；
7.在2143rcf(离心力)下离心96孔板10分钟；
8.将450μl上清液转移至一新的96孔板中；
9.用96孔Termovap样品浓缩仪干燥上清液；
10.用150μl甲醇复溶；
11.将平板超声30秒；
12.在4℃和2143rcf(离心力)下离心平板3分钟；
13.将120μl上清液转移至一块新的96孔板中。
4、实验结果
4.1标准曲线
人血浆中AST-2660标准曲线参数：斜率：0.063846，截距：-0.003788，相关系数0.9939， 则关系函数y＝f(x)＝0.063846x-0.003788，其中y代表代谢产物II与内标化合物峰面积的比 值，x表示标准工作溶液中代谢产物II的浓度，LLOQ(定量下限):0.5ng/ml，ULOQ(定量 上限):200ng/ml。由此可以看出，在0.5～200ng/ml的线性范围内，线性关系良好。
4.2质控样品的准确度和精密度考察结果
准确度和精密度定义如下：
准确度表示为相对误差(RE)。
RE＝[(平均值-标称值)/标称值]×100
精密度表示为变异系数(CV)。
CV＝(标准差/平均值)×100。
准确度和精密度考察结果如表7所示。由表7可以看出，批内和批间的精密度均小于8.3％， 批内和批间的准确度均在±8.7之间。准确度和精密度的分析标准为：对于LLOQQC样品，批 内和批间准确度(RE)必须在±20.0％范围内，并且批内和批间CV必须不大于20.0％。对于低、 几何平均、中、高和稀释QC(如适用)样品，批内和批间准确度(RE)必须在±15.0％范围内； 批内和批间精密度(CV)必须在每个QC浓度水平处不大于15.0％。因此，质控样品的批内和 批间的精密度和准确度符合要求。内标AST-2660-D8的精密度(％CV)≤40.0％，符合要求。
表7：质控样品的批内和批间的精密度和准确度结果
4.3 AST-2660和内标AST-2660-D8的提取回收率考察结果
表8：AST-2660和内标AST-2660-D8的提取回收率考察结果
注：％回收率＝(提取前平均值/提取后平均值)×100
CV＝(SD/平均值)×100
由表8可以看出，AST-2660和内标AST-2660-D8的提取回收率的CV均小于15.0％。提 取回收率的分析标准：对于提取后加标样品，在每个浓度水平处所测得的响应率的CV必须不 大于15.0％。因此，AST-2660和内标AST-2660-D8的提取回收率符合要求。
4.4基质效应考察结果
表9:：基质效应结果
根据表9的结果可知，AST-2660基质效应的批间基质准确度和精密度(CV)均小于15％， 符合要求。
4.5稳定性
表10：AST-2660工作溶液和AST-2660-D8(内标)工作溶液的稳定性结果
由表10可以看出，AST-2660工作溶液和内标AST-2660-D8工作溶液的稳定性的准确度在 ±8.1％范围内，精密度均小于5.5％。稳定性分析标准：贮藏稳定性溶液与新鲜配制的溶液之间 的差异必须在±10.0％范围内，并且每组重复实验的CV必须不大于10.0％。因此，在各种储存 条件下，AST-2660和AST-2660-D8(内标)工作溶液均稳定性良好，符合要求。
本实施例建立的液相-质谱/质谱联用方法检测人血浆中AST-2660的方法符合生物样本分 析要求，样本处理方法简便，方法灵敏度高，精密度和准确度高。
实施例5实际人血浆中AST-2660含量的检测
使用实施例4建立的检测方法对待测人血浆中的AST-2660含量进行检测。
以下为根据实施例4的方法学和验证后建立的检测标准操作流程SOP：
步骤一、溶液配制
基质：含有抗凝剂(K2EDTA)的正常混合人血浆
a：内标工作溶液：取AST-2660-D8，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含100ng的溶液。
b：待测溶液(此时的待测溶液未添加内标化合物)：取待测血液样品，即得。
c：标准工作溶液(此时的标准工作溶液未添加内标化合物)：取AST-2660适量，精密 称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为标准工作储备液，取标准工作 储备液适量，分别加基质稀释制成每1ml中约含200ng、160ng、100ng、50ng、10ng、2.0ng、 1.0ng、0.5ng的不同浓度的标准工作溶液。(溶液贮藏在-70℃)
d：质控样品溶液：取AST-2660适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含 10μg的溶液，作为质控工作储备液，取质控工作储备液适量，加基质制成每1ml中约含150ng、 60ng、15ng、1.5ng、0.5ng的不同浓度的质控工作溶液。(溶液贮藏在-70℃)
步骤二、样品提取
待测溶液、标准工作溶液、质控样品溶液，分别在室温状态下解冻并混合均匀，分别取 100μl上述溶液，加入20μl内标，加入500μl甲醇，涡旋3分钟混合均匀，在2143rcf下离心 10分钟，取450μl上清液干燥，加150μl甲醇复溶，超声，在4℃和2143rcf下离心平板3分钟，取120μl上清液，即得。
取100μl空白血液，加入20μl甲醇，同法提取，即得空白样品。
取100μl空白血液，加入20μl内标工作溶液，同法提取，即得零浓度样品。
经过样品提取、添加内标后的溶液才进行步骤四进样到LC-MS/MS进行检测。
步骤三、设置色谱-质谱测试条件
使用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定，并进行如下仪器测试条件设置：
液相条件：用SHARC 1，3μm，2.1*50mm或性能相当的色谱柱；流动相A为含有低含量醋酸铵的甲醇溶液，流动相B为乙腈，按下表进行梯度洗脱；柱温20℃；进样体积5μl
表11：实施例5中的液相色谱仪测试时梯度洗脱条件
| 时间 | 流速 | ％A | ％B |
| 初始 | 0.8 | 15 | 85 |
| 1.5 | 0.8 | 50 | 50 |
| 2.0 | 0.8 | 90 | 10 |
| 2.5 | 0.8 | 15 | 85 |
质谱条件：电喷雾离子源，负离子扫描方式；喷雾电压-4500V；离子源温度：500℃；碰 撞能(CE)为-22eV；去簇电压(DP)为-55V；入口电压(EP)为-10V；碰撞室出口电压(CXP)为-16V；驻留时间为100ms；所有气体均使用高纯氮气；AST-2660离子对：m/z 147.0→m/z62.9；内标AST-2660-D8离子对：m/z 155.0→m/z 62.9。
步骤四、测定
分别取经提取后的不同浓度的AST-2660标准工作溶液、空白样品、零浓度样品、待测样 品溶液、质控样品溶液，注入LC-MS/MS进行检测。
接受标准：标准工作溶液测定回收浓度，质控样品溶液的准确度以及空白样品中AST-2660 以及内标物峰残留应符合2020年版中国药典4部9012中要求。
吸取配制好的不同浓度的代谢产物II的标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测， 得到关系函数y＝f(x)，其中y代表代谢产物II与内标化合物峰面积的比值，x表示标准工 作溶液中代谢产物II的浓度；
计算结果：由不同浓度的AST-2660标准工作溶液得到AST-2660与内标峰面积比值的关 系函数y＝f(x)，将提取后的供试品溶液测得AST-2660与内标峰面积比值，代入关系函数y ＝f(x)，计算待测溶液中代谢产物II的浓度。
利用关系函数测定计算未知浓度的待测溶液中代谢产物II的浓度，吸取加入已知含量的 内标化合物的待测溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，测得代谢产物II与内标化合物峰面 积的比值y，代入函数y＝f(x)，求得待测溶液中代谢产物II的浓度x。
作为一种选择，上述的SOP将相关操作步骤先后顺序略作变通，得到以下的操作SOP：
待测生物样本溶液中加入定量的内标化合物，经提取处理，作为供试品溶液；
使用代谢产物II对照品稀释得到一系列不同浓度的代谢产物II的溶液，加入定量的内标 化合物，经提取处理，作为标准工作溶液，吸取系列标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统进行 检测，测得代谢产物II与内标化合物的峰面积，以代谢产物II与内标化合物的峰面积比值为 纵坐标，以代谢产物II浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程；
吸取供试品溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，测得供试品溶液溶液中代谢产物II与氘 代化合物I峰面积的比值，代入回归方程，求得待测生物样本溶液中代谢产物II的含量。
上述变通后的SOP根据实验室操作人员习惯，使用相同容积的容器配制相同浓度的溶液， 如此操作只需要保证添加的溶液体积相同，所得到的标准工作溶液依然是等浓度的。
图7至图10为血浆样本中检测过程的部分典型谱图。
图7为空白人血浆提取物中AST-2660和内标AST-2660-D8的典型LC-MS/MS谱图。
图8为零浓度血浆样品提取物中AST-2660和内标AST-2660-D8的的典型LC-MS/MS谱图 谱图。
图9为标准品溶液人血浆提取物(0.50ng/ml)的AST-2660和内标AST-2660-D8的典型 LC-MS/MS谱图。
图10为标准品溶液人血浆提取物(200ng/ml)的AST-2660和内标AST-2660-D8的典型 LC-MS/MS谱图。
使用本实施例提供的人血浆中的AST-2660含量检测的操作规程对部分样品进行检测。结 果如下表12-16所示。
表12：人血浆中AST-2660在-20℃和-70℃下的一个月稳定性研究数据
很明显，含有AST-2660的人血浆在-70℃条件下储存28天后，含有的AST-2660几乎没有 减少，而-20℃条件下减少较为明显，因此应尽量将AST-2660的人血浆样品储存在-70℃条件 下，并且在储存28天后没有变化。
表13：人血浆中AST-2660在-20℃和-70℃下的冷冻/融化稳定性研究数据
a冻融循环稳定性样品首先在-20℃、-70℃标称温度下冷冻至少24小时，然后在室温下解 冻。将样品冷冻至少12小时，以进行后续循环。
很明显，含有AST-2660的人血浆在-70℃到室温的冻融过程中含有的AST-2660几乎没有 减少，而-20℃到室温的冻融过程中减少较为明显：也就是说，根据表12的数据可知，将储存 在-70℃条件下的人血浆中的样品从储存条件转运到室温进行实验过程的温度急剧变化不会影 响到人血浆样本中AST-2660的稳定性。
表14：AST-2660-D8溶液在-70℃下贮藏的稳定性研究数据
很明显，根据表14的数据可知使用和AST-2660一样的-70℃条件下储存26天后，AST-2660-D8的甲醇溶液具有较强的稳定性。
表15：AST-2660在4℃下的处理后人血浆样品稳定性研究数据
很明显，根据表15的数据可知AST-2660甲醇溶液在常规的冷冻条件(实验室常用的冰柜) 下，54小时储存含量稳定。
表16：室温下人血浆中AST-2660实验台稳定性研究数据
很明显，根据表16的数据含有AST-2660的人血浆样本在室温下不稳定，随着存放时间的 与延长，人血浆样本中AST-2660的含量一直在减少，这提示在进行相关临床患者人血浆样本 采集过程中，采集到的血浆样本应立即储存在上述经过实验验证的低温环境中：储存在-70℃ 最稳妥，储存在-20℃也可以，如条件所限也也储存在常规的冰箱中(4℃至0℃)并且应尽量 在4小时内转移到上述低温环境中。在样本送往DMPK样本检测中心实验室过程中应使用全 程冷链物流(全程监控温度)温度选择为-20℃以下或干冰保温。
根据以上实验结果，可知：
(1)含有AST-2660的人血浆样本应在采集后立即储存在上述经过实验验证的低温环境 中：储存在-70℃最稳妥，储存在-20℃也可以，如条件所限也也储存在常规的冰箱中(4℃至0℃) 并且应尽量在4小时内转移到上述低温环境中。在样本送往DMPK样本检测中心实验室过程 中应使用全程冷链物流(全程监控温度)温度选择为-20℃以下或干冰保温；
(2)样本应储存在-70℃或更低温度条件下，在此条件下储存28天是稳定的，而且根据 变化趋势，更久的时间也许依然是稳定的；
(3)在取出储存的样本到室温过程中，即将储存在-70℃条件下的人血浆中的样品从储存 条件转运到室温进行实验过程的温度急剧变化不会影响到人血浆样本中AST-2660的稳定性， 取出后应放置在常规的冰箱中(4℃至0℃)，且常规冰箱中放置时间应不大于4小时，如放 置在室温环境下将导致AST-2660含量降低而不能使用；
(4)AST-2660-D8的甲醇溶液在-70℃条件下储存26天后含量不会发生变化，具有较强 的稳定性，而且根据变化趋势，更久的时间也许依然是稳定的。
因此，上述，对于血液样本的操作SOP中，应在采集后4小时内将血浆样本储存到-20℃ 以下环境中，优选为-70℃环境中，-70℃条件下可储存28天；如血浆样本经过上述提取处理 则应在4℃或以下温度下冷藏且在实验室室温环境下、54小时内完成进样检测；遵守这些储存 温度和时间所检测的结果是可靠的，否则将导致因样本中AST-2660储存过程中变化而结果不 真实、不可靠。
实施例6人尿液中AST-2660的检测方法的建立及验证
本实施例中人尿液中AST-2660的检测方法的建立步骤与实施例4基本相同，区别仅在于 基质不同(实施例4为人血浆，本实施例为人尿液)以及样品提取步骤略有差异。将含有添加 剂Na2HPO4·12H2O的混合正常人(不给药)尿液用作稀释剂和基质。
1、样品的前处理
使用蛋白质沉淀法提取样品的步骤：
1.确认标准品、质控样品和血浆样品的标签和顺序；
2.解冻后，将所有样品放在多管涡旋仪上涡旋均匀；
3.每份样品取100μl加入96孔板中；
4.除空白样品外，加入20μl AST-2660质控工作溶液(100ng/ml AST-2660-D8甲醇溶液)。 在空白样品中加入20μl甲醇；
5.加入500μl甲醇；
6.以中速将孔板涡旋3分钟；
7.在2143rcf(离心力)下离心96孔板10分钟；
8.将450μl上清液转移至一新的96孔板中；
9.在2143rcf(离心力)下离心96孔板10分钟；
10.将300μl上清液转移至一块新的96孔板中。
2.实验结果
2.1标准曲线
人尿液中AST-2660标准曲线参数：斜率：0.001400，截距：0.000016，相关系数0.9982， 关系函数y＝f(x)＝0.001400x+0.000016，其中y代表代谢产物II与内标化合物峰面积的比 值，x表示标准工作溶液中代谢产物II的浓度，LLOQ(定量下限):0.5ng/ml，ULOQ(定量 上限):200ng/ml。由此可以看出，在0.5～200ng/ml的线性范围内，线性关系良好。
2.2质控样品的准确度和精密度考察结果
准确度和精密度定义如下：
准确度表示为相对误差(RE)。
RE＝[(平均值-标称值)/标称值]×100
精密度表示为变异系数(CV)。
CV＝(标准差/平均值)×100。
准确度和精密度考察结果如表17所示。由表17可以看出，批内和批间的精密度均小于 15.5％，批内和批间的准确度均在±11.4之间。准确度和精密度的分析标准为：对于LLOQ QC 样品，批内和批间准确度(RE)必须在±20.0％范围内，并且批内和批间CV必须不大于20.0％。 对于低、几何平均、中、高和稀释QC(如适用)样品，批内和批间准确度(RE)必须在±15.0％ 范围内；批内和批间精密度(CV)必须在每个QC浓度水平处不大于15.0％。因此，质控样品 的批内和批间的精密度和准确度符合要求。内标AST-2660-D8的精密度(％CV)≤13.4％，符 合要求。
表17：质控样品的批内和批间的精密度和准确度结果
2.3基质效应考察结果
表18：基质效应结果
根据表18的结果可知，AST-2660基质效应的批间基质准确度和精密度(CV)均小于15％， 符合要求。
2.4稳定性
表19：AST-2660工作溶液的稳定性结果
由表19可以看出，AST-2660工作溶液的稳定性的准确度在±11.8％范围内，精密度均小于 11.5％。稳定性分析标准：贮藏稳定性溶液与新鲜配制的溶液之间的差异必须在±10.0％范围内， 并且每组重复实验的CV必须不大于15.0％。因此，在各种储存条件下，AST-2660工作溶液稳 定性良好，符合要求。
本实施例建立的液相-质谱联用方法检测人尿液中AST-2660的方法符合生物样本分析要 求，样本处理方法简便，方法灵敏度高，精密度和准确度高。
实施例7实际人尿液中AST-2660含量的检测
使用实施例6建立的检测方法对待测人尿液中的AST-2660含量进行检测。
以下为根据实施例6的方法学和验证后建立的检测标准操作流程SOP：
步骤一、溶液配制
基质：含有添加剂Na2HPO4·12H2O的混合正常人尿液。
a：内标工作溶液：取AST-2660-D8，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含100ng的溶液。
b：待测溶液(此时的待测溶液未添加内标化合物)：取待测血液样品，即得。
c：标准工作溶液(此时的标准工作溶液未添加内标化合物)：取AST-2660适量，精密 称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为标准工作储备液，取标准工作 储备液适量，分别加基质稀释制成每1ml中约含200ng、160ng、100ng、50ng、10ng、2.0ng、 1.0ng、0.5ng的不同浓度的标准工作溶液。(溶液贮藏在-70℃)
d：质控样品溶液：取AST-2660适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含 10μg的溶液，作为质控工作储备液，取质控工作储备液适量，加基质制成每1ml中约含150ng、 60ng、15ng、1.5ng、0.5ng的不同浓度的质控工作溶液。(溶液贮藏在-70℃)
步骤二、样品提取
供试品溶液、标准工作溶液、质控样品溶液，在室温状态下解冻并混合均匀，分别取100μl 上述溶液，加入20μl内标，加入500μl甲醇，涡旋3分钟混合均匀，在2143rcf下离心30分 钟，取450μl上清液，在2143rcf下离心96孔板10分钟，取300μl上清液，即得。
取100μl空白人尿液，加入20μl甲醇，同法提取，即得空白样品。
取100μl空白人尿液，加入20μl内标工作溶液，同法提取，即得零浓度样品。
经过样品提取、添加内标后的溶液才进行步骤四进样到LC-MS/MS进行检测。
步骤三、设置色谱-质谱测试条件
使用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定，并进行如下仪器测试条件设置：
液相条件：用SHARC 1，3μm，2.1*50mm或性能相当的色谱柱；含有低含量醋酸铵的甲 醇溶液，流动相B为乙腈，按下表进行梯度洗脱；柱温20℃；进样体积5μl。
表20：实施例7中的液相色谱仪测试时梯度洗脱条件
| 时间 | 流速 | ％A | ％B |
| 初始 | 0.8 | 15 | 85 |
| 1.5 | 0.8 | 50 | 50 |
| 2.0 | 0.8 | 90 | 10 |
| 2.5 | 0.8 | 15 | 85 |
质谱条件：电喷雾离子源，负离子扫描方式；喷雾电压-4500V；离子源温度：500℃；碰 撞能(CE)为-22eV；去簇电压(DP)为-55V；入口电压(EP)为-10V；碰撞室出口电压(CXP)为-16V；驻留时间为100ms；所有气体均使用高纯氮气；AST-2660离子对：m/z 147.0→m/z62.9；内标AST-2660-D8离子对：m/z 155.0→m/z 62.9。
步骤四、测定
分别取提取后的不同浓度的AST-2660标准工作溶液、空白样品、零浓度样品、供试品溶 液、质控工作溶液，注入LC-MS/MS进行检测。
接受标准：标准工作溶液测定回收浓度，质控工作溶液的准确度以及空白样品中AST-2660 以及内标物峰残留应符合2020年版中国药典4部9012中要求。
吸取配制好的不同浓度的代谢产物II的标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测， 得到关系函数y＝f(x)，其中y代表代谢产物II与内标化合物峰面积的比值，x表示标准工 作溶液中代谢产物II的浓度；
计算结果：由不同浓度的AST-2660标准工作溶液得到AST-2660与内标峰面积比值的关 系函数y＝f(x)，将提取后的待测溶液测得AST-2660与内标峰面积比值，代入关系函数y ＝f(x)，计算待测溶液中代谢产物II的浓度。
利利用关系函数测定计算未知浓度的待测溶液中代谢产物II的浓度，吸取加入已知含量 的内标化合物的待测溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，测得代谢产物II与内标化合物峰 面积的比值y，代入函数y＝f(x)，求得待测溶液中代谢产物II的浓度x。
作为一种选择，上述的SOP将相关操作步骤先后顺序略作变通，得到以下的操作SOP：
待测生物样本溶液中加入定量的内标化合物，经提取处理，作为供试品溶液；
使用代谢产物II对照品稀释得到一系列不同浓度的代谢产物II的溶液，加入定量的内标 化合物，经提取处理，作为标准工作溶液，吸取系列标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统进行 检测，测得代谢产物II与内标化合物的峰面积，以代谢产物II与内标化合物的峰面积比值为 纵坐标，以代谢产物II浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程；
吸取供试品溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，测得供试品溶液溶液中代谢产物II与氘 代化合物I峰面积的比值，代入回归方程，求得待测生物样本溶液中代谢产物II的含量。
上述变通后的SOP根据实验室操作人员习惯，使用相同容积的容器配制相同浓度的溶液， 如此操作只需要保证添加的溶液体积相同，所得到的标准工作溶液依然是等浓度的。
图11至图14为尿液样本中检测过程的部分典型谱图。
图11为空白人尿液提取物中AST-2660和内标AST-2660-D8的典型LC-MS/MS谱图。
图12为零浓度尿液样品提取物中AST-2660和内标AST-2660-D8的的典型LC-MS/MS谱 图谱图。
图13为标准工作溶液人尿液提取物(0.50ng/ml)的AST-2660和内标AST-2660-D8的典 型LC-MS/MS谱图。
图14为标准工作溶液人尿液提取物(200ng/ml)的AST-2660和内标AST-2660-D8的典 型LC-MS/MS谱图。
使用本实施例提供的人尿液中的AST-2660含量检测的操作规程对部分样品进行检测。结 果如下表21-24所示。
表21：人尿液中AST-2660在-20℃和-70℃下的一个月稳定性研究数据
很明显，含有AST-2660的人尿液在-70℃条件下储存32天后，含有的AST-2660几乎没有 减少，而-20℃条件下减少了近90％，因此必须将AST-2660的人尿液样品储存在-70℃条件下， 在此储存条件下储存32天的样品依然是稳定的。
表22：人尿液中AST-2660在-20℃和-70℃下的冷冻/融化稳定性研究数据
a冻融循环稳定性样品首先在-20℃、-70℃标称温度下冷冻至少24小时，然后在室温下解 冻。将样品冷冻至少12小时，以进行后续循环。
很明显，含有AST-2660的人尿液在-70℃到室温的冻融过程中含有的AST-2660几乎没有 减少，而-20℃到室温的冻融过程减少了近90％：也就是说，根据表22的数据可知，将储存在 -70℃条件下的人血浆中的样品从储存条件转运到室温进行实验过程的温度急剧变化不会影响 到人血浆样本中AST-2660的稳定性。
表23：在室温下处理人尿液样品稳定性(AST-2660含量变化)
表24：室温下人尿液中AST-2660实验台稳定性研究数据
根据表23可知，在室温下经处理后AST-2660的人尿液样本放置94小时是稳定的。
根据表24可知，在室温下未处理的含AST-2660的人尿液样本放置24小时是稳定的。根 据以上实验结果，可知：
(1)含有AST-2660的人尿液样本应在采集后24小时内(最晚)储存在上述经过实验验 证的低温环境中：储存在-70℃。在样本送往DMPK样本检测中心实验室过程中应尽量低温(室 温或更低)；
(2)样本应储存在-70℃或更低温度条件下，在此条件下储存32天是稳定的，而且根据 变化趋势，更久的时间也许依然是稳定的；
(3)经处理后含有AST-2660的人尿液样本可在室温或更低的温度下放置94小时稳定；
(4)在取出储存的样本到室温过程中，即将储存在-70℃条件下的人尿液中的样品从储存 条件转运到室温进行实验过程的温度急剧变化不会影响到人尿液样本中AST-2660的稳定性， 取出后应放置在常规的冰箱或室温是容许的，放置在室温环境下长达24小时是稳定的。
(5)对于人尿液样本，应在采集后的24小时内，优选4小时内储存在-70℃条件下；如 经过处理则应在室温条件下94小时内完成进样检测。
因此，上述，对于尿液样本的操作SOP中，应在采集后的24小时内，优选4小时内储存 在-70℃条件下，-70℃条件下可储存32天；；如经过处理则应在室温或以下温度条件下94小 时内完成进样检测；遵守这些储存温度和时间所检测的结果是可靠的，否则将导致因样本中 AST-2660储存过程中变化而结果不真实、不可靠。
Claims (31)
1.氘代化合物I，其结构式如式(I-1)或式(I-2)所示：
其中，M为Na、K、Li或铵根。
2.根据权利要求1所述的氘代化合物I，其中，氘代化合物I选自以下结构的化合物：
3.一种制备氘代化合物I的方法，其包括以下步骤：
I-a化合物与三卤氧磷POX3反应得I-b化合物；
I-b化合物加入碱在水溶液中进行水解反应，对应得化合物I-1或I-2；
其中，I-a化合物为氘代的2-卤代乙胺的氢卤酸盐，A为H或D，且在I-a化合物的4个A中D的个数为2或4；化合物I-b选自以下结构中的一种：
水解反应中碱选自：MOH，M为Na、K、Li或铵根；
X为卤素。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，I-a化合物与三卤氧磷POX3在有机溶剂中降温，滴加有机碱溶液反应得I-b化合物。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述降温为降温至-78至-20℃。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中，所述有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、氯苯、1,2-二氯乙烷、乙酸乙酯、正己烷或环己烷、四氢呋喃中的一种或几种的混合。
7.根据权利要求4或5所述的方法，其中，所述有机碱为甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、N,N-二乙胺、三乙胺、正丁胺、异丁胺、4-二甲氨基吡啶、N,N-二异丙基乙胺、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、N,N,N',N'-四甲基乙二胺、四甲基胍、吡啶、N-甲基二环己胺或二环己胺中的一种或几种的混合。
8.根据权利要求4或5所述的方法，其中，I-a化合物与三卤氧磷POX3的反应在一定的氛围下进行，所述氛围是空气、氮气或氩气中的一种。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述氛围是氮气或氩气中的一种。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述氛围是氮气。
11.使用31P-NMR法检测权利要求1或2所述的氘代化合物I的含量的方法。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，使用31P-NMR法检测含有氘代化合物I的溶液中氘代化合物I的含量。
13.使用液相色谱法检测权利要求1或2所述的氘代化合物I的含量的方法，其中，液相色谱仪条件为：
氢受体型固定相色谱柱，
A流动相为醋酸铵的甲醇溶液，B流动相为乙腈，
A、B流动相梯度洗脱，从A流动相15％体积比逐渐升高至90％体积比，然后逐渐减少到15％体积比。
14.一种检测权利要求1或2所述的氘代化合物I含量的方法，其包括：
检测氘代化合物I和已知含量的含磷化合物的31P-NMR，得到谱图；
根据31P-NMR谱图中氘代化合物I和含磷化合物的化学位移特征峰的峰面积比，代入已知含量的含磷化合物的含量计算得到氘代化合物I的含量。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，
所述含磷化合物为含有一个磷原子的化合物；
将氘代化合物I和已知含量的含磷化合物加入到溶剂中一并测试31P-NMR谱图。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述含磷化合物为六甲基磷酰三胺。
17.根据权利要求15所述的方法，其中，将氘代化合物I和已知含量的含磷化合物加入到水中溶解后一并测试31P-NMR谱图。
18.权利要求1或2所述的氘代化合物I作为内标在检测生物样本中代谢产物II的应用，代谢产物II结构式如式(II)所示：
其中，A为H；M为Na、K、Li或铵根。
19.权利要求1或2所述的氘代化合物I作为内标在LC-MS/MS分析检测生物样本中AKR1C3活化的DNA烷化剂前药或乏氧活化的DNA烷化剂前药的代谢产物II含量的应用，其中代谢产物II的结构式如式(II)所示：
其中，A为H；M为Na、K、Li或铵根。
20.根据权利要求18或19所述的应用，其中，
氘代化合物I选自
代谢产物II选自
21.根据权利要求20所述的应用，AKR1C3活化的DNA烷化剂前药选自以下结构式1-5的化合物：
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R8、R9、R10的定义如下所示：
R1是C6-C10芳基或Z取代的芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基、7-15元的稠环或Z取代稠环；
R2是氢、卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、OMS、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基、1-6个碳原子的醚或Z取代的1-6个碳原子的烷氧基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、-SO2R6、-OCOO-R6、-COOR6、-NR6COR7、-OCOR6、-NR6SO2R7、-NR6SO2NR6R7或者R2和与其所键结的R1基团上的原子一起形成7-15元的稠环或Z取代稠环；
R3是氢、卤素、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、OLCMS、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基、C1-C6烷氧基或Z取代的C1-C6烷氧基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、-SO2R6、-OCO-R6、-OCOO-R6、-COOR6、-NR6COR7，-OCOR6、-NR6SO2R7；
R4、R5各自独立地是氢、卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、OLCMS、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基、C1-C6烷氧基或Z取代的C1-C6烷氧基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、-SO2R6、-OCOO-R6、-COOR6、-NR6COR6、-OCOR6、-NR6SO2R7或者R4、R5和与其所键结的苯环上的原子一起形成7-15元的稠环或Z取代稠环；
R6和R7各自独立地是氢、氰基或异氰基、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基、C1-C6烷氧基或Z取代的C1-C6烷氧基，或者R6、R7基团与其所键结的原子一起形成5-7元杂环基或Z取代5-7元杂环基；
R8、R10各自独立地为氢、氘、芳基或Z取代芳基、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基且必有一个为氢、氘；
R9为至少具有一个氟原子或硝基取代的取代C6-C10芳基、至少具有一个氟原子或硝基取代的取代4-15元杂环、至少具有一个氟原子或硝基取代的取代5-15元杂芳基。
Z取代基为卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、OMS、C1-C3烷基或取代烷基、C1-C3烷氧基或取代烷氧基、C2-C3烯基或取代烯基、C2-C3炔基或取代炔基、C3-C8环烷基或取代环烷基、芳环、杂环、杂芳环和稠环或取代芳环、杂环、杂芳环和稠环，取代的方式为单取代或偕二取代；
R9中的取代C6-C10芳基、取代4-15元杂环、取代5-15元杂芳基的取代基为卤素原子、硝基、氰基或异氰基、羟基、胺基、C1-C3烷基或烷氧基、烯基、炔基、环烷基或苯环、取代苯环、C1-C3烷氧基或卤原子取代烷氧基；
或
其中，Rw的定义如下所示：
Rw为
R1为H、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、5-6元杂芳基或苯基，其中所述C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、5-6元杂芳基和苯基任选被1、2或3个Ra所取代；
各Ra独立地为H、F、Cl、Br、I、-CN、-OH、C1-3烷氧基或C1-3烷基；
R2为H或C1-6烷基；
或者R1和R2连接在一起，与其相连的N原子一起形成4-6元杂环烷基，其中所述4-6元杂环烷基任选被1、2或3个Rb所取代；
各Rb独立地为H、F、Cl、Br、I、-CN、-OH、-NH2、-OCH3、-OCH2CH3、-CH3或-CH2CH3；
R3为H、F、Cl、Br、I、-OH、-NH2、C1-3烷氧基或C1-3烷基；
或者R2和R3连接在一起使结构单元
为
T1为-(CRcRd)m-或-(CRcRd)n-O-；
m为1、2或3；
n为1或2；
T2为N或CH；
Rc和Rd各自独立地为H、F、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
R4、R5和R6各自独立地为H、F、Cl、Br、I、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
T为N或CH；
R7和R8各自独立地为H、F、Cl、Br或I；
R9和R10各自独立地为H、F、Cl、Br、I、-CN或
所述4-6元杂环烷基和5-6元杂芳基各自包含1、2、3或4个独立选自N、-O-和-S-的杂原子；
或
其中，X、Y、Z、R、A以及X10的定义如下所示：
X10是O、S、SO或SO2；
A是C6-C10芳基、5-15元杂芳基或-N＝CR1R2；
R1及R2各自独立是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、醚、-CONR13R14或-NR13COR14；
X、Y及Z各自独立是氢、CN、卤基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、醚、-CONR13R14或-NR13COR14；
R是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、醚、-CONR13R14或-NR13COR14；
R13及R14各自独立是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环或醚；
T为
且
其中这些烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环、杂芳基、醚基经取代或未经取代；
或
其中：
A是取代或未经取代的C6-C10的芳基、联芳基或取代的联芳基、5-15元的杂芳基或-N＝CR1R2，其中取代时的取代基选自由以下组成的群：卤基、-CN、-NO2、–O-(CH2)-O-、-CO2H及其盐、-OR100、-CO2R100、-CONR101R102、-NR101R102、-NR100SO2R100、-SO2R100、-SO2NR101R102、C1-C6烷基、C3-C10杂环基；
其中，R100、R101及R102各自独立是氢、C1-C8烷基、C6-C12芳基；或R101及R102与其附接至的氮原子一起形成5-7元杂环；
其中烷基及芳基各自是经1-3个卤基或1-3个C1-C6烷基取代；
R1及R2各自独立是苯基或甲基；
X、Y及Z各自独立是氢或卤基；
R是氢或C1-C6烷基或卤素取代烷基。
22.根据权利要求20所述的应用，乏氧活化的DNA烷化剂前药选自选自以下结构式6-12的化合物：
其中，R1、R2、R3、Cx的定义如下所示：
Cx为5-10元的芳环或芳杂环、脂杂环或环烷烃，其与硝基苯环共用两个碳原子形成稠环结构；
R1连接在Cx环的任意骨架原子上，选自氢、卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、OTs、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基、1-6个碳原子的烷氧基或Z取代的1-6个碳原子的烷氧基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、-SO2R6、-OCOO-R6、-COOR6、-NR6COR7、-OCOR6、-NR6SO2R7、-NR6SO2NR6R7，
R2、R3各自独立地是氢、C1-C6烷基或Z取代烷基、C2-C6烯基或Z取代烯基、C2-C6炔基或Z取代炔基、C3-C8环烷基或Z取代环烷基、C6-C10芳基或Z取代芳基、4-15元杂环或Z取代杂环、5-15元杂芳基或Z取代杂芳基或者R2、R3和与其所键结的苄位碳原子一起形成3-6元环；
Z取代基为卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、C1-C3烷基或取代烷基、C1-C3烷氧基或取代烷氧基、C2-C3烯基或取代烯基、C2-C3炔基或取代炔基、C3-C8环烷基或取代环烷基；
R6、R7各自独立地是氢、C1-C6烷基或Z取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基或Z取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或Z取代的C2-C6炔基、C3-C8环烷基或Z取代的C3-C8环烷基、C6-C10芳基或Z取代的C6-C10芳基、4-15元杂环基或Z取代的4-15元杂环基、5-15元杂芳基或Z取代的5-15元杂芳基，或者R6、R7和与其所键结的原子一起形成5-7元杂环基或Z取代的5-7元杂环基；
或
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17的定义如下所示：
R1为：氢、-N3、CN、卤基、NR21R22、-OR23、-SO2(C1-C6烷基)、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、5-15元杂芳基或醚；
R21和R22各自独立地为氢、羟基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、5-15元杂芳基或-SO2(C1-C6烷基)；或R21和R22与其所键接的氮原子一起形成4-15元杂环或5-15元杂芳基；
R23为氢、C1-C6烷基或C6-C10芳基；
R2和R3独立地为氢或卤基；
R4为氢、卤基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基或C6-C10芳基，
R5、R7、R9、R12和R15独立地为氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-15元杂环、5-15元杂芳基；或R4和R5与其之间的介入碳原子一起形成C5-C6环烷基环；
R6和R10独立地为氢或卤基；
R8为氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或5-15元杂芳基；
R11各自独立地为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基或C6-C10芳基；
R13、R14、R16和R17独立地为氢、卤基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C1-C6烷氧基；
其中所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环、杂芳基、烷氧基和醚基团任选地经取代。
23.一种检测生物样本中代谢产物含量的方法，其包括以下步骤：
制备含有已知浓度的内标化合物的待测溶液供LC-MS/MS进样分析；
标准工作溶液的制备，制备含有已知浓度的内标化合物、已知浓度的代谢产物II的一系列标准工作溶液，该一系列标准工作溶液中内标化合物的浓度一致，且与所述待测溶液中的内标化合物浓度相同，该一系列标准工作溶液中代谢产物II的浓度是不同的；
液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定关系函数，吸取配制好的不同浓度的代谢产物II的标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，得到关系函数y＝f(x)，其中y代表代谢产物II与内标化合物峰面积的比值，x表示标准工作溶液中代谢产物II的浓度；
利用关系函数测定计算未知浓度的待测溶液中代谢产物II的浓度，吸取加入已知含量的内标化合物的待测溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，测得代谢产物II与内标化合物峰面积的比值y，代入函数y＝f(x)，求得待测溶液中代谢产物II的浓度x，
其中，所述待测溶液由所述生物样本经处理或不处理而制备，
所述内标化合物为氘代化合物I，其结构式如式(I-1)或式(I-2)所示：
M为Na、K、Li或铵根；
代谢产物II的结构式如式(II)所示：
A为H；
M为Na、K、Li或铵根。
24.一种检测生物样本中代谢产物含量的方法，其包括以下步骤：
待测生物样本溶液中加入定量的内标化合物，经提取处理，作为待测溶液；
使用代谢产物II对照品稀释得到一系列不同浓度的代谢产物II的标准溶液，加入定量的内标化合物，经提取处理，作为标准工作溶液，吸取系列标准工作溶液，分别注入LC-MS/MS系统进行检测，测得代谢产物II与内标化合物的峰面积，以代谢产物II与内标化合物的峰面积比值为纵坐标，以代谢产物II浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程；
吸取待测溶液，注入LC-MS/MS系统进行检测，测得待测溶液中代谢产物II与内标化合物峰面积的比值，代入回归方程，求得待测溶液中代谢产物II的含量，
其中，内标物为氘代化合物I，结构式如式(I-1)或式(I-2)所示：
M为Na、K、Li或铵根；
代谢产物II的结构式如式(II)所示：
A为H；
M为Na、K、Li或铵根。
25.根据权利要求23或24所述的方法，其中，
液相色谱-串联质谱法中液相色谱仪条件为：
氢受体型固定相色谱柱，
A流动相为醋酸铵的甲醇溶液，B流动相为乙腈，
A、B流动相梯度洗脱，从A流动相15％体积比逐渐升高至90％体积比，然后逐渐减少到15％体积比；
质谱条件为：电喷雾离子源，
负离子扫描方式下
代谢产物II监测离子对为：m/z 147.0→m/z 62.9，
氘代化合物I监测离子对为：m/z(147.0+氘代的数目)→m/z 62.9；
或
正离子扫描方式下
代谢产物II监测离子对为：m/z 149.0→m/z 64.9，
氘代化合物I监测离子对为：m/z(149.0+氘代的数目)→m/z 64.9。
26.根据权利要求23或24所述的方法，其中，
制备含有已知含量的氘代化合物I的待测溶液时，先在生物样本溶液中添加氘代化合物I后，再进行提取操作；
对应的，制备标准工作溶液时，在含已知的不同浓度的代谢产物II的基质溶液中先添加氘代化合物I后，再进行提取操作。
27.根据权利要求24所述的方法，其中，所述生物样本为尿液样本或血浆样本，对应的，在检测尿液样本时，对应的基质溶液为含有添加剂的、没有给药的患者的尿液；在检测血液样本时，对应的基质溶液为含有抗凝剂的、没有给药的患者的血浆。
28.根据权利要求27所述的方法，其中，
加入氘代化合物、提取操作流程为:待测溶液、标准工作溶液加入氘代化合物I溶液，加入甲醇混合均匀，离心取上清液即得；
添加剂为Na2HPO4或K2HPO4，抗凝剂为K2EDTA或Na2EDTA。
29.根据权利要求27所述的方法，其中，
对于血液样本，应在采集后4小时内储存到-20℃以下环境中；如经过处理则应在4℃或以下温度下冷藏且在54小时内完成进样检测；
对于尿液样本，应在采集后的24小时内储存在-70℃条件下；如经过处理则应在室温或以下温度条件下94小时内完成进样检测。
30.根据权利要求29所述的方法，其中，对于血液样本，应在采集后4小时内储存到-70℃环境中，-70℃条件下可储存28天。
31.根据权利要求29所述的方法，其中，对于尿液样本，应在采集后的4小时内储存在-70℃条件下，-70℃条件下可储存32天。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211011792.3A CN116120365A (zh) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 一种氘代化合物及其制备方法和应用 |
| CN202111346190.9A CN114106042B (zh) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 一种氘代化合物及其制备方法和应用 |
| EP21946249.6A EP4206209A4 (en) | 2021-11-12 | 2021-11-26 | DEUTERATED COMPOUND, METHOD FOR PREPARING IT AND ITS USE |
| US18/003,402 US20240140970A1 (en) | 2021-11-12 | 2021-11-26 | A deuterated compound, and preparation method and use thereof |
| PCT/CN2021/133645 WO2023082354A1 (zh) | 2021-11-12 | 2021-11-26 | 一种氘代化合物及其制备方法和应用 |
| TW111134520A TWI820905B (zh) | 2021-11-12 | 2022-09-13 | 一種氘代化合物及其製備方法、相關的檢測方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111346190.9A CN114106042B (zh) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 一种氘代化合物及其制备方法和应用 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211011792.3A Division CN116120365A (zh) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 一种氘代化合物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114106042A CN114106042A (zh) | 2022-03-01 |
| CN114106042B true CN114106042B (zh) | 2022-09-16 |
Family
ID=80396137
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211011792.3A Pending CN116120365A (zh) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 一种氘代化合物及其制备方法和应用 |
| CN202111346190.9A Active CN114106042B (zh) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 一种氘代化合物及其制备方法和应用 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211011792.3A Pending CN116120365A (zh) | 2021-11-12 | 2021-11-12 | 一种氘代化合物及其制备方法和应用 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20240140970A1 (zh) |
| EP (1) | EP4206209A4 (zh) |
| CN (2) | CN116120365A (zh) |
| TW (1) | TWI820905B (zh) |
| WO (1) | WO2023082354A1 (zh) |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI674258B (zh) | 2015-03-10 | 2019-10-11 | 大陸商深圳艾欣達偉醫藥科技有限公司 | Ｄｎａ烷化劑 |
| JP7327900B2 (ja) * | 2015-06-24 | 2023-08-16 | スレッシュホールド ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | アジリジン含有ｄｎａアルキル化剤 |
| TWI694253B (zh) * | 2017-04-06 | 2020-05-21 | 財團法人國家衛生研究院 | 具有胺基團的目標分子的絕對定量方法 |
| CN107102079A (zh) * | 2017-04-26 | 2017-08-29 | 苏州海科医药技术有限公司 | 检测人血浆中阿托伐他汀及代谢物的液相色谱‑串联质谱方法及临床药动学研究的应用 |
| CN110536484B (zh) | 2019-05-13 | 2024-03-26 | 中兴通讯股份有限公司 | 多连接系统中的数据无线承载控制方法、装置和系统 |
| US20220119429A1 (en) | 2019-05-13 | 2022-04-21 | Ascentawits Pharmaceuticals, Ltd. | Fluorine-containing compound and anti-cancer medical use thereof |
| CN114555574B (zh) * | 2019-10-12 | 2024-04-12 | 深圳扬厉医药技术有限公司 | 靶向醛酮还原酶1c3的苯并二氢吡喃类化合物 |
| CN114555614A (zh) * | 2019-11-01 | 2022-05-27 | 深圳艾欣达伟医药科技有限公司 | 作为非pgp底物的抗癌化合物 |
| TWI837402B (zh) * | 2019-12-20 | 2024-04-01 | 大陸商深圳艾欣達偉醫藥科技有限公司 | 含氟化合物、含氟化合物之製備方法及其抗癌醫藥用途 |
| WO2023077452A1 (zh) * | 2021-11-05 | 2023-05-11 | 深圳艾欣达伟医药科技有限公司 | Akr1c3活化的dna烷化剂及其医药用途 |
-
2021
- 2021-11-12 CN CN202211011792.3A patent/CN116120365A/zh active Pending
- 2021-11-12 CN CN202111346190.9A patent/CN114106042B/zh active Active
- 2021-11-26 US US18/003,402 patent/US20240140970A1/en active Pending
- 2021-11-26 EP EP21946249.6A patent/EP4206209A4/en active Pending
- 2021-11-26 WO PCT/CN2021/133645 patent/WO2023082354A1/zh unknown
-
2022
- 2022-09-13 TW TW111134520A patent/TWI820905B/zh active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20240140970A1 (en) | 2024-05-02 |
| TWI820905B (zh) | 2023-11-01 |
| CN116120365A (zh) | 2023-05-16 |
| EP4206209A1 (en) | 2023-07-05 |
| WO2023082354A1 (zh) | 2023-05-19 |
| EP4206209A4 (en) | 2024-07-03 |
| CN114106042A (zh) | 2022-03-01 |
| TW202319743A (zh) | 2023-05-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102702008B (zh) | 阿戈美拉汀硫酸复合物及其制备方法 | |
| WO2022171044A1 (zh) | 一种氧氮杂螺环化合物、其盐型及其晶型 | |
| CN108689905A (zh) | 一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途 | |
| CN110156700A (zh) | 吉非替尼与水杨酸共晶体 | |
| CN104804079B (zh) | 伊马替尼免疫原、衍生物及合成方法、特异性抗体和检测试剂及制备方法 | |
| CN111217799A (zh) | 一种吲哚盐-香豆素衍生物及其合成方法和应用 | |
| CN107043376A (zh) | 一种利格列汀新晶型及其制备方法 | |
| CN102757391B (zh) | 一种苯巴比妥衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN114106042B (zh) | 一种氘代化合物及其制备方法和应用 | |
| CN109912512B (zh) | 一种新的替米沙坦杂质化合物及其制备方法和用途 | |
| CN109283262B (zh) | 通过高效液相色谱法分离测定雷替曲塞及其杂质的方法 | |
| CN108794383B (zh) | 硝苯地平与异烟酰胺的共晶 | |
| CN109574975A (zh) | 7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型及其制备方法和应用 | |
| CN105440083B (zh) | 一种洛铂晶体、制备方法及药物应用 | |
| CN114075145A (zh) | 一种法匹拉韦盐及其晶型和制备方法 | |
| CN108586461A (zh) | 氨苯蝶啶的烟酸盐、其水合物或溶剂合物及其制备方法和用途 | |
| CN101659667B (zh) | 一种盐酸伊立替康的纯化方法 | |
| CN106631880B (zh) | 一种乌苯美司δ晶型及其制备方法 | |
| CN110869382A (zh) | 甾体类衍生物fxr激动剂的结晶或无定型物、其制备方法和用途 | |
| CN108732276B (zh) | 马昔腾坦有关物质的高效液相色谱分析方法 | |
| CN101921227A (zh) | 5-氯-4-羟基-2(1h)-吡啶酮晶型及其制备方法和应用 | |
| CN108727279B (zh) | 马昔腾坦有关物质d、其制备方法及用途 | |
| TWI706934B (zh) | 一種苯基胺基丙酸鈉衍生物、其製備方法和應用 | |
| US20240239802A1 (en) | Crystal form of pyrrolopyrimidine compound and preparation method for crystal form | |
| CN110225913B (zh) | Fgfr4抑制剂晶型及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |