CN113999315A - 融合蛋白及其应用 - Google Patents

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张岭
夏丽
张黎
李靖欣
潘红星
陈健平
刘勇
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Jiangsu Ruike Biotechnology Co ltd
Jiangsu Center For Disease Control And Prevention (jiangsu Institute Of Public Health)
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Abzymo Biosciences Co ltd
Jiangsu Ruike Biotechnology Co ltd
Jiangsu Center For Disease Control And Prevention (jiangsu Institute Of Public Health)
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Abstract

本申请涉及一种或多种融合蛋白，其包含SARS‑CoV‑2 S(Spike)蛋白的结构域。本申请还涉及了包含融合蛋白的免疫原性组合物及其应用。

Description

融合蛋白及其应用
技术领域
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段和/或SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段的融合蛋白、组合物及其应用。
背景技术
目前，控制新冠疫情的方式是实施检疫、隔离和保持物理距离。因此迫切需要针对COVID-19的有效疫苗，以减轻与SARS-CoV-2感染相关的死亡率和发病率的巨大负担。
SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)被认为是诱导机体产生中和抗体的最主要的抗原靶区域。RBD作为疫苗能够将机体刺激产生的中和抗体更加聚焦在针对病毒的受体结合，可以提高疫苗的免疫原性和免疫效率。
SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)为病毒S蛋白N端的一段序列，其可与宿主细胞的蛋白或糖蛋白结合，介导病毒入侵宿主细胞，故该段区域可能包含诱导中和抗体产生的表位。
发明内容
本申请提供了一种包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段和/或SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段的融合蛋白、组合物及其应用，其具有下列性质的一种或多种：1)融合蛋白具有免疫原性；2)包含融合蛋白的COVID-19亚单位疫苗免疫原性更强，能诱导产生更多的中和抗体。
一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及2)一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述RBD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
在某些实施方式中，所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
在某些实施方式中，所述RBD与野生型SAR-CoV-2的RBD相比，在选自下组的一个或多个氨基酸位点有突变：K417、L452、T478、E484和N501。
在某些实施方式中，所述RBD包含氨基酸突变K417T/N、L452R、T478K、E484K和N501Y的一种或多种。
在某些实施方式中，所述RBD包含K417T、E484K和N501Y氨基酸突变。
在某些实施方式中，所述RBD包含K417N、E484K和N501Y氨基酸突变。
在某些实施方式中，所述RBD包含SEQ ID NO:18、19、76、83、97-108中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述P2或其功能活性片段包含破伤风毒素的表位肽。
在某些实施方式中，所述破伤风毒素的表位肽包含SEQ ID NO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述P2或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段与所述P2或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段与所述foldon结构域或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
在某些实施方式中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含SEQ ID NO:70-72中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段与所述铁蛋白或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段与所述乙肝表面抗原或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述的融合蛋白包含SEQ ID NO:1-17、80和86中任一项所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段；以及2)一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述NTD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
在某些实施方式中，所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
在某些实施方式中，所述NTD包含在选自下组的一个或多个氨基酸位点的突变：L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246。
在某些实施方式中，所述NTD包含选自下组的一个或多个氨基酸突变：L18F、T19R、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I。
在某些实施方式中，所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。
在某些实施方式中，所述NTD包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R246I氨基酸突变。
在某些实施方式中，所述NTD包含SEQ ID NO:37、38、77、84和109-111中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述P2或其功能活性片段包含破伤风毒素的表位肽。
在某些实施方式中，所述破伤风毒素的表位肽包含SEQ ID NO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述P2或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段与所述P2或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段与所述foldon结构域或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
在某些实施方式中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含SEQ ID NO:70-72任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段与所述铁蛋白或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段与所述乙肝表面抗原或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述的融合蛋白包含SEQ ID NO:20-36、81和87中任一项所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及2)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述的融合蛋白还包括一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述RBD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
在某些实施方式中，所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
在某些实施方式中，所述RBD与野生型SAR-CoV-2的RBD相比，在选自下组的一个或多个氨基酸位点有突变：K417、L452、T478、E484和N501。
在某些实施方式中，所述RBD包含氨基酸突变K417T/N、L452R、T478K、E484K和N501Y的一种或多种。
在某些实施方式中，所述RBD包含K417T、E484K和N501Y氨基酸突变。
在某些实施方式中，所述RBD包含K417N、E484K和N501Y氨基酸突变。
在某些实施方式中，所述RBD包含SEQ ID NO:18、19、76、83、97-108中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述NTD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
在某些实施方式中，所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
在某些实施方式中，所述NTD包含在选自下组的一个或多个氨基酸位点的突变：L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246。
在某些实施方式中，所述NTD包含选自下组的一个或多个氨基酸突变：L18F、T19R、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I。
在某些实施方式中，所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。
在某些实施方式中，所述NTD包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R246I氨基酸突变。
在某些实施方式中，所述NTD包含SEQ ID NO:37、38、77、84和109-111中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述P2或其功能活性片段包含破伤风毒素的表位肽。
在某些实施方式中，所述破伤风毒素的表位肽包含SEQ ID NO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述P2或其功能活性片段与所述RBD或其功能性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述P2或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述P2或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性片段的N端与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。
在某些实施方式中，所述噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述foldon结构域或其功能活性片段的N端与所述P2或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述P2或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端与所述NTD或其功能活性的C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
在某些实施方式中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含SEQ ID NO:70-72任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述铁蛋白或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在某些实施方式中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在某些实施方式中，所述的融合蛋白包含SEQ ID NO:39-44、79、85和96中任一项所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供了一种免疫原性组合物，其包含所述的融合蛋白。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物包含第一组分，所述第一组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及第二组分，所述第二组分包含融合蛋白。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物包含第一组分，所述第一组分包含融合蛋白；以及第二组分，所述第二组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物包含第一组分，所述第一组分包含所述的融合蛋白；以及第二组分，所述第二组分包含所述的融合蛋白。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物，其按下述重量比配制而成：1)第一组分(1-15重量份)；和/或2)第二组分(1-15重量份)。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物，其包含：1)5-60μg第一组分；和/或2)5-60μg第二组分。
另一方面，本申请提供了一种免疫原性组合物，其包含第一组分，所述第一组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及第二组分，所述第二组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段。
在某些实施方式中，所述RBD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
在某些实施方式中，所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
在某些实施方式中，所述RBD与野生型SAR-CoV-2的RBD相比，在选自下组的一个或多个氨基酸位点有突变：K417、L452、T478、E484和N501。
在某些实施方式中，所述RBD包含氨基酸突变K417T/N、L452R、T478K、E484K和N501Y的一种或多种。
在某些实施方式中，所述RBD包含K417T、E484K和N501Y氨基酸突变。
在某些实施方式中，所述RBD包含K417N、E484K和N501Y氨基酸突变。
在某些实施方式中，所述RBD包含SEQ ID NO:18、19、76、83、97-108中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述RBD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
在某些实施方式中，所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
在某些实施方式中，所述NTD包含在选自下组的一个或多个氨基酸位点的突变：L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246。
在某些实施方式中，所述NTD包含选自下组的一个或多个氨基酸突变：L18F、T19R、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I。
在某些实施方式中，所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。
在某些实施方式中，所述NTD包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R246I氨基酸突变。
在某些实施方式中，所述NTD包含SEQ ID NO:37、38、77、84和109-111中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物，其按下述重量比配制而成：1)第一组分(1-15重量份)；和/或2)第二组分(1-15重量份)。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物，其包含：1)5-60μg第一组分；和/或2)5-60μg第二组分。
在某些实施方式中，所述RBD包含SEQ ID NO:18-19、76、83、97-108中任一项所示的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述NTD包含SEQ ID NO:37-38、77、84和109-111中任一项所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含所述的融合蛋白，或所述的免疫原性组合物，及任选地药学上可接受的赋形剂。
另一方面，本申请提供了一种所述的融合蛋白或所述的免疫原性组合物在制备疫苗中的用途。
在某些实施方式中，所述疫苗用于预防和/或治疗COVID-19。
另一方面，本申请提供了一种所述的融合蛋白或所述的免疫原性组合物，用于治疗和/或预防COVID-19。
另一方面，本申请提供了一种制备COVID-19亚单位疫苗的方法，其包括：
1)提供所述的融合蛋白或所述的免疫原性组合物；以及
2)使1)中所述融合蛋白或免疫原性组合物与药学上可接受的佐剂混合。
另一方面，本申请提供了一种检测SARS-CoV-2中和抗体的方法，其包括：
1)向受试者施用所述的COVID-19亚单位疫苗；以及
2)检测1)中所述受试者在接受所述COVID-19亚单位疫苗后体内产生的中和抗体。
另一方面，本申请提供了一种治疗和/或预防COVID-19的方法，其包括向受试者施用所述的融合蛋白或所述的免疫原性组合物或所述的COVID-19亚单位疫苗。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明如下：
图1显示的是用SDS-PAGE电泳与WB验证RBD-P2-6*HIS蛋白的结果图。
图2显示的是用SDS-PAGE电泳与WB验证NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)蛋白的结果图。
图3显示的是用SDS-PAGE电泳与WB验证NTD-RBD-foldon-8*HIS蛋白的结果图。
图4显示的是NTD-RBD-foldon-6×His(Gamma突变株)测序结果氨基酸序列比对。
图5显示的是NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)蛋白的尺寸排阻层析图谱。
图6显示的是SDS-PAGE电泳与Western blot验证NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)蛋白结果图。
图7显示的是NTD-RBD-foldon-6×His(Beta突变株)测序结果氨基酸序列比对。
图8显示的是NTD-RBD-foldon(Beta突变株)蛋白的尺寸排阻层析图谱。
图9显示的是SDS-PAGE电泳与Western blot验证NTD-RBD-foldon(Beta突变株)蛋白结果图。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
术语定义
在本申请中，术语“融合蛋白”通常是指通过基因工程技术得到的具有生物学功能活性的蛋白分子。在本申请中，所述融合蛋白可以是RBD或其功能活性片段与下列任一序列组成的融合蛋白：P2或其功能活性片段、foldon结构域或其功能活性片段、铁蛋白或其功能活性片段、乙肝表面抗原HBsAg或其功能活性片段。在本申请中，融合蛋白可以是NTD或其功能活性片段与下列任一序列组成的融合蛋白：P2或其功能活性片段、foldon结构域或其功能活性片段、铁蛋白或其功能活性片段、乙肝表面抗原HBsAg或其功能活性片段。在本申请中，融合蛋白可以是NTD或其功能活性片段和RBD或其功能活性片段组成的融合蛋白。在本申请中，融合蛋白可以是NTD或其功能活性片段、RBD或其功能活性片段与下列任一片段组成的融合蛋白：P2或其功能活性片段、foldon结构域或其功能活性片段、铁蛋白或其功能活性片段、乙肝表面抗原HBsAg或其功能活性片段。
GISAID将毒株hCoV-19/Wuhan/WIV04/2019(WIV04)的全基因组序列(EPI_ISL_402124)做为正式的参考序列。一般将WIV04毒株定义为野生株或原始株。在本申请中，术语“SARS-CoV-2野生型”通常指WIV04毒株。
在本申请中，术语“P2”通常是指破伤风毒素的表位肽。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到844的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到845的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽829到844的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽829到844的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到845的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到844的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。
在本申请中，术语“foldon结构域”通常是指在噬菌体T4纤维蛋白的C末端的残基。在本申请中，foldon结构域可以是噬菌体T4纤维蛋白的C末端的27个残基或突变体。在本申请中，foldon结构域可以是噬菌体T4纤维蛋白的C末端的27个残基截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的截短体或增长体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。
在本申请中，术语“铁蛋白”、“ferritin”通常是指粉纹夜蛾铁蛋白或幽门螺旋杆菌铁蛋白。在本申请中，粉纹夜蛾铁蛋白具有重链和轻链(ferritin LC和ferritin HC)。在本申请中，幽门螺旋杆菌铁蛋白具有单链结构。在本申请中，铁蛋白可以是粉纹夜蛾或幽门螺旋杆菌铁蛋白的突变体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。在本申请中，“粉纹夜蛾铁蛋白的轻链”、“LC”可以与“ferritin LC”互换使用。在本申请中，“粉纹夜蛾铁蛋白的重链”、“HC”可以与“ferritin HC”互换使用。
在本申请中，术语“乙肝表面抗原(HBsAg)”通常是指乙肝病毒最外层包膜中的一种外壳蛋白。例如，乙肝表面抗原的氨基酸序列可以为NCBI中的蛋白序列检索号AAA45524、ANJ76941、CAA24234或AAC34729对应的序列，也可以适宜地截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸，或有蛋白的突变，例如缺失、置换或插入一个或多个氨基酸。
在本申请中，术语“功能活性片段”通常是指与RBD、NTD、P2、foldon结构域、铁蛋白、乙肝表面抗原HBsAg具有相似生物学活性的片段。
在本申请中，术语“免疫原性组合物”通常是指一种亚单位组合物。在本申请中，亚单位组合物是在将组分混合形成抗原性组合物之前，其中组分已经被分离并纯化到至少50％、至少60％、70％、80％、90％纯度的组合物。例如，亚单位组合物可以是水溶性蛋白的水溶液。例如，所述亚单位组合物可包含洗涤剂。例如，亚单位组合物可包含非-离子、两性离子或离子洗涤剂。例如，亚单位组合物可包含脂类。在一些情形中，免疫原性组合物可包括RBD或其功能活性片段和NTD或其功能活性片段。在一些情形中，免疫原性组合物可包括RBD或其功能活性片段和包含NTD或其功能活性片段的融合蛋白。在一些情形中，免疫原性组合物可包括包含RBD或其功能活性片段的融合蛋白和NTD或其功能活性片段。在一些情形中，免疫原性组合物可包括包含RBD或其功能活性片段的融合蛋白和包含NTD或其功能活性片段的融合蛋白。在本申请中，所述免疫原性组合物还可包括佐剂。例如，所述的佐剂可以包括铝盐(例如氢氧化铝凝胶(alum)或磷酸铝)，但也可以是钙盐、铁盐或锌盐，或者可以是酰化酪氨酸或酰化糖、阳离子或阴离子衍生化多糖或聚磷腈的不溶性悬浮液。例如，所述的免疫原性组合物还可以选择为Th1型应答优先诱导物。例如，Th1型应答优先诱导物可以包括单磷酰脂质A或其衍生物。例如，所述佐剂可以是单磷酰脂质A(例如，3-脱-O-酰化单磷酰脂质A(3D-MPL))和铝盐的组合。一种佐剂增强系统可以包括单磷酰脂质A和皂苷衍生物的组合，特别是WO94/00153公开的QS21和3D-MPL的组合，或者如WO96/33739公开的用胆固醇将QS21猝灭从而使反应原性较弱的一种组合物。例如，所述佐剂还可以是WO95/17210中所述的佐剂，其在水包油乳剂中含有QS21、3D-MPL和生育酚。例如，所述佐剂可以是吐温80、山梨糖醇三油酸酯和角鲨烯混合后于高压条件下进行微流化形成的均一小滴状乳液。例如，所述佐剂可包含寡核苷酸的未甲基化CpG(WO96/02555)。
在本申请中，术语“重量份”通常是指免疫原性组合物的第一组分和第二组分的重量比。在本申请中，免疫原性组合物每剂量可含有如下成份：第一组分5-60μg和第二组分5-60μg。例如，免疫原性组合物可以包含5μg、10μg、20μg、30μg或40μg的第一组分。例如，免疫原性组合物可以包含5μg、10μg、20μg、30μg或40μg的第二组分。
在本申请中，术语“RBD”是指SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域。在本申请中，所述RBD可为SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)310-560氨基酸之间的肽段或其突变体，也可以截短N端或C端1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、20、25或30个氨基酸。在本申请中，所述RBD可为SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)319-541氨基酸之间的肽段或其突变体，也可以适宜地截短N端或C端1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、20、25或30个氨基酸。在本申请中，所述RBD可为SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)331-524氨基酸之间的肽段或其突变体，也可以适宜地截短N端或C端1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、20、25或30个氨基酸。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。
在某些实施方式中，所述RBD可以包含SARS-CoV-2(Gamma突变体)的RBD。
在某些实施方式中，所述RBD可以包含SARS-CoV-2(Beta突变体)的RBD。
在某些实施方式中，所述RBD可以包含SARS-CoV-2(Wuhan-1)的RBD。
在本申请中，术语“NTD”即SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端的结构域。在本申请中，所述NTD可以为SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)13-353氨基酸之间的肽段或其突变体，也可以适宜地截短N端或C端1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、20、25或30个氨基酸。例如，所述NTD可以为SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)13-303氨基酸之间的肽段或其突变体。在本申请中，所述NTD可以为SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)14-304氨基酸之间的肽段或其突变体。在本申请中，所述NTD可以为SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)18-353氨基酸之间的肽段或其突变体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。在某些实施方式中，所述NTD可以包含SARS-CoV-2(Gamma突变体)的NTD。在某些实施方式中，所述NTD可以包含SARS-CoV-2(Beta突变体)的NTD。在某些实施方式中，所述NTD可以包含SARS-CoV-2(Wuhan-1)的NTD。
在本申请中，术语“S蛋白”，也称为“Spike蛋白”或“刺突蛋白”，通常是指冠状病毒的衣壳表面糖蛋白。SARS-COV-2通过S蛋白与ACE2受体结合并侵入细胞。S蛋白由1213个氨基酸组成，含有一个跨膜区，包含来自冠状病毒的衣壳表面糖蛋白从N端起或从第14位氨基酸起至少到1213氨基酸片段，或者来自其它SARS病毒的相应区域。S1蛋白是S蛋白的亚单位1，主要指从N端或第14位氨基酸起到第685氨基酸片段。
在本申请中，所述突变体可以包含目前已知的任意一种或几种SAR-CoV-2突变株(突变体)。例如，所述Gamma突变株可以参考GenBank登录号为QRN46961.1的B.1.1.28谱系的SARS-CoV-2表面糖蛋白氨基酸序列。例如，所述Gamma突变株可以参考GenBank登录号为QLF80256.1的B.1.1.28谱系的SARS-CoV-2表面糖蛋白氨基酸序列。例如，所述Gamma突变株可以参考GenBank登录号为QVE55289.1的P.1谱系的SARS-CoV-2表面糖蛋白氨基酸序列。例如，所述Gamma突变株可以为Gamma突变株501Y.V3，其表面糖蛋白氨基酸序列可以如SEQ IDNO:88所示。
例如，所述Beta突变株可以参考GenBank登录号为QUA12570.1的B.1.351谱系的SARS-CoV-2表面糖蛋白氨基酸序列。例如，所述Beta突变株可以参考GenBank登录号为QIZ15537.1的B.1谱系的SARS-CoV-2表面糖蛋白氨基酸序列。例如，所述Beta突变株可以参考GenBank登录号为QVI03430.1的B.1.351谱系的SARS-CoV-2表面糖蛋白氨基酸序列。例如，所述Beta突变株可以为501Y.V2 Beta突变株，其表面糖蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:82所示。
在本文中所使用的术语“血凝素/血凝素蛋白/HA”通常是指可使红血球凝集的抗体或其他物质，在流感病毒、麻疹病毒(以及许多其他细菌和病毒)表面等均能找到，可附着于不同动物的红血球，而使红血球凝集，严重时可致死。在本文中是指流感病毒的表面糖蛋白hemagglutinin(HA)。每年WHO官网均会公布当年流感序列的预测，本文参考的是2021-2022年度的北半球的流感序列，即GISAID官网可查询的流感病毒A型(H1N1)EPI1661231|HA|A/Wisconsin/588/2019|EPI_ISL_404460，A型(H3N2)EPI1843589|HA|A/Cambodia/e0826360/2020|EPI_ISL_944639，B型EPI1394970|HA|B/Washington/02/2019|EPI_ISL_347829和B型EPI529345|HA|B/PHUKET/3073/2013|EPI_ISL_161843。
在本申请中，术语“包括”通常是指包含、总括、含有或包涵的含义。在某些情况下，也表示“为”、“由……组成”的含义。
在本申请中，术语“左右”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
在本申请中，术语“载体”通常是指能够在合适的宿主中自我复制的核酸分子，其将插入的核酸分子转移到宿主细胞中和/或宿主细胞之间。所述载体可包括主要用于将DNA或RNA插入细胞中的载体、主要用于复制DNA或RNA的载体，以及主要用于DNA或RNA的转录和/或翻译的表达的载体。所述载体还包括具有多种上述功能的载体。所述载体可以是当引入合适的宿主细胞时能够转录并翻译成多肽的多核苷酸。通常，通过培养包含所述载体的合适的宿主细胞，所述载体可以产生期望的表达产物。
在本申请中，术语“宿主细胞”通常是指可以或已经含有包括本申请所述的核酸分子的质粒或载体，或者能够表达本申请所述的抗体或其抗原结合片段的个体细胞，细胞系或细胞培养物。所述宿主细胞可以包括单个宿主细胞的子代。由于天然的，意外的或故意的突变，子代细胞与原始亲本细胞在形态上或在基因组上可能不一定完全相同，但能够表达本申请所述的融合蛋白即可。所述宿主细胞可以通过使用本申请所述的载体体外转染细胞而得到。所述宿主细胞可以是原核细胞(例如大肠杆菌)，也可以是真核细胞(例如酵母细胞，例如COS细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，HeLa细胞，HEK293细胞，COS-1细胞，NS0细胞或骨髓瘤细胞)。在一些实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。例如，所述哺乳动物细胞可以是CHO细胞。
发明详述
融合蛋白
一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及2)一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以来源于SARS-CoV-2野生型S蛋白的RBD，也可以来源于SARS-CoV-2突变体S蛋白的RBD。在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段可以在K417、L452、T478、E484和N501中的一个或多个氨基酸位点处包含氨基酸突变。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以包含Gamma突变株S蛋白的RBD。在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段可以包含K417T、L452R、T478K、E484K和N501Y中的一个或多个氨基酸突变。例如，所述RBD可以包含SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列。在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以包含Beta突变株S蛋白的RBD。在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段可以包含K417N、E484K和N501Y中的一个或多个氨基酸突变。例如，所述RBD可以包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可以包含破伤风毒素的表位肽。
例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到844的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到845的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽829到844的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽829到844的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到845的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到844的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。例如，所述破伤风毒素的表位肽包含SEQ ID NO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可与所述RBD或其功能活性片段的N端直接或间接地相连。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可与所述P2或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可以包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可以包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的27个氨基酸残基或突变体。在本申请中，foldon结构域可以是噬菌体T4纤维蛋白C末端的27个残基截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的截短体或增长体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。
例如，所述foldon结构域或其功能活性片段可以包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段的N端直接或间接相连。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以与所述foldon结构域或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可包含粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段。
在本申请中，所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段可包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
在本申请中，铁蛋白可以是粉纹夜蛾或幽门螺旋杆菌铁蛋白的突变体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。在本申请中，“粉纹夜蛾铁蛋白的轻链”、“LC”可以与“ferritin LC”互换使用。在本申请中，“粉纹夜蛾铁蛋白的重链”、“HC”可以与“ferritinHC”互换使用。在本申请中，“幽门螺杆菌铁蛋白”可以与“HP ferritin”互换使用。
在本申请中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链可包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链可包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可包含幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
在本申请中，所述幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:70-72中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
例如，所述铁蛋白或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段的N端直接或间接地相连。
例如，所述铁蛋白或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以与所述铁蛋白或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，术语“乙肝表面抗原(HBsAg)”通常是指乙肝病毒最外层包膜中的一种外壳蛋白。例如，乙肝表面抗原的氨基酸序列可以为NCBI中的蛋白序列检索号AAA45524、ANJ76941、CAA24234或AAC34729对应的序列，也可以适宜地截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸，或有蛋白的突变，例如缺失、置换或插入一个或多个氨基酸。
例如，所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段的N端直接或间接地相连。
在本申请中，所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以与所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述“直接或间接相连”通常是指两段序列直接相连和间接相连这两种不同的连接方式，其中的直接相连是指两段序列之间的连接没有任何人为添加的其余序列，如柔性Linker、刚性Linker或可剪切Linker等的参与。间接相连则是指两段序列是通过人为添加连接序列，例如柔性Linker、刚性Linker或可剪切Linker等手段实现的两段序列的连接方式。在某些实施方式中，所述柔性Linker可以包含GSGSG(SEQ ID NO:89)的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述连接序列可以包含SFTVEKGIYQTSNF(SEQ ID NO:90)的氨基酸序列。
在本申请中，所述融合蛋白还可以包含信号肽。在某些实施方式中，可以在所述融合蛋白的N段添加MGWSCIILFLVATATGVHS(SEQ ID NO:91)的信号肽序列。
在本申请中，所述的融合蛋白可包含SEQ ID NO:1-17、80和86中任一项所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段；以及2)一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以来源于SARS-CoV-2野生型S蛋白的NTD，也可以来源于SARS-CoV-2突变体S蛋白的NTD。在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段可以在L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246中的一个或多个氨基酸位点处包含氨基酸突变。在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段可以包含L18F、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I中的一个或多个氨基酸突变。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以包含Gamma突变株S蛋白的NTD。在某些实施方式中，所述NTD可以包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R190S氨基酸突变。例如，所述NTD可以包含SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以包含例如Beta突变株S蛋白的NTD。在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段可以包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。在某些实施方式中，所述NTD可以包含SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可以包含破伤风毒素的表位肽。
例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到844的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到845的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽829到844的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽829到844的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到845的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到844的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。例如，所述破伤风毒素的表位肽包含SEQ ID NO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的N端直接或间接地相连。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以与所述P2或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。在某些实施方式中，所述噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基可以包含SEQ ID NO:78所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的27个氨基酸残基或突变体。在本申请中，foldon结构域可以是噬菌体T4纤维蛋白C末端的27个残基截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的截短体或增长体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。
例如，所述foldon结构域或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的N端直接或间接相连。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以与所述foldon结构域或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可包含粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段。
在本申请中，所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段可包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
在本申请中，铁蛋白可以是粉纹夜蛾或幽门螺旋杆菌铁蛋白的突变体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。在本申请中，“粉纹夜蛾铁蛋白的轻链”、“LC”可以与“ferritin LC”互换使用。在本申请中，“粉纹夜蛾铁蛋白的重链”、“HC”可以与“ferritinHC”互换使用。在本申请中，“幽门螺杆菌铁蛋白”可以与“HP ferritin”互换使用。
在本申请中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链可包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链可包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可包含幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
在本申请中，所述幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:70-72中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
例如，所述铁蛋白或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的N端直接或间接地相连。
例如，所述铁蛋白或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以与所述铁蛋白或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，术语“乙肝表面抗原(HBsAg)”通常是指乙肝病毒最外层包膜中的一种外壳蛋白。例如，乙肝表面抗原的氨基酸序列可以为NCBI中的蛋白序列检索号AAA45524、ANJ76941、CAA24234或AAC34729对应的序列，也可以适宜地截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸，或有蛋白的突变，例如缺失、置换或插入一个或多个氨基酸。
例如，所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的N端直接或间接地相连。
在本申请中，所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段可以与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以与所述乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述“直接或间接相连”通常是指两段序列直接相连和间接相连这两种不同的连接方式，其中的直接相连是指两段序列之间的连接没有任何人为添加的其余序列，如柔性Linker、刚性Linker或可剪切Linker等的参与。间接相连则是指两段序列是通过人为添加连接序列，例如柔性Linker、刚性Linker或可剪切Linker等手段实现的两段序列的连接方式。在某些实施方式中，所述柔性Linker可以包含GSGSG(SEQ ID NO:89)的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述连接序列可以包含SFTVEKGIYQTSNF(SEQ ID NO:90)的氨基酸序列。
在本申请中，所述融合蛋白还可以包含信号肽。在某些实施方式中，可以在所述融合蛋白的N段添加MGWSCIILFLVATATGVHS(SEQ ID NO:91)的信号肽序列。
在本申请中，所述的融合蛋白可包含SEQ ID NO:20-36、81和87中任一项所示的氨基酸序列。
另一方面，本申请提供了一种融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及2)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以来源于SARS-CoV-2野生型S蛋白的RBD，也可以来源于SARS-CoV-2突变体S蛋白的RBD。在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段可以在K417、L452、T478、E484、和N501中的一个或多个氨基酸位点处包含氨基酸突变。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以包含Gamma突变株S蛋白的RBD。在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段可以包含K417T、E484K和N501Y中的一个或多个氨基酸突变。例如，所述RBD可以包含SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列。在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以包含Beta突变株S蛋白的RBD。在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段可以包含K417N、E484K和N501Y中的一个或多个氨基酸突变。例如，所述RBD可以包含SEQ ID NO：76所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以来源于SARS-CoV-2野生型S蛋白的NTD，也可以来源于SARS-CoV-2突变体S蛋白的NTD。在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段可以在L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246中的一个或多个氨基酸位点处包含氨基酸突变。在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段可以包含L18F、T19R、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I中的一个或多个氨基酸突变。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以包含Gamma突变株S蛋白的NTD。在某些实施方式中，所述NTD可以包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R190S氨基酸突变。例如，所述NTD可以包含SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以包含Beta突变株S蛋白的NTD。在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段可以包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。例如，所述NTD可以包含SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段的N端与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地连接。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段的C端与所述NTD或其功能活性片段的N端直接或间接地连接。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述的融合蛋白还可以包括一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可包含破伤风毒素的表位肽。
例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到844的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到845的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽829到844的肽段或其突变体。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽829到844的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到845的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。例如，P2可以是破伤风毒素的表位肽830到844的肽段截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的肽段。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。
例如，所述破伤风毒素的表位肽可包含SEQ ID NO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
例如，所述RBD或其功能活性片段的N端可以与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地连接，且所述P2或其功能活性片段的N端可以与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地连接。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段和所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。在某些实施方式中，所述噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基包含SEQIDNO:78所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段可包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的27个氨基酸残基或突变体。在本申请中，foldon结构域可以是噬菌体T4纤维蛋白C末端的27个残基截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸得到的截短体或增长体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。
例如，所述foldon结构域或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
例如，所述foldon结构域或其功能活性片段的N端可以与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端可以与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述foldon结构域或其功能活性片段的N端与所述P2或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述P2或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端与所述NTD或其功能活性的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述P2或其功能活性片段、foldon结构域或其功能活性片段、所述RBD或其功能活性片段和所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段包含粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段。
在本申请中，所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
在本申请中，铁蛋白可以是粉纹夜蛾或幽门螺旋杆菌铁蛋白的突变体。在本申请中，“突变体”通常是指因含有一个或多个差异(突变)而与参比序列不同的序列。该差异可以是取代、缺失或插入一个或多个氨基酸。在本申请中，“粉纹夜蛾铁蛋白的轻链”、“LC”可以与“ferritin LC”互换使用。在本申请中，“粉纹夜蛾铁蛋白的重链”、“HC”可以与“ferritinHC”互换使用。在本申请中，“幽门螺杆菌铁蛋白”可以与“HP ferritin”互换使用。
在本申请中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链可包含SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链可包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可包含幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:70-72任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述铁蛋白或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
例如，所述铁蛋白或其功能活性片段的N端可以与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端可以与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
例如，所述幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段的N端可以与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端可以与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段和所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，术语“乙肝表面抗原(HBsAg)”通常是指乙肝病毒最外层包膜中的一种外壳蛋白。例如，乙肝表面抗原的氨基酸序列可以为NCBI中的蛋白序列检索号AAA45524、ANJ76941、CAA24234或AAC34729对应的序列，也可以适宜地截短或增加N端或C端1、2、3、4、5、或6个或10个氨基酸，或有蛋白的突变，例如缺失、置换或插入一个或多个氨基酸。
在本申请中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段可包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段可以与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
在本申请中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段的N端可以与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端可以与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
在本申请中，所述乙肝表面抗原或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
在本申请中，所述“直接或间接相连”通常是指两段序列直接相连和间接相连这两种不同的连接方式，其中的直接相连是指两段序列之间的连接没有任何人为添加的其余序列，如柔性Linker、刚性Linker或可剪切Linker等的参与。间接相连则是指两段序列是通过人为添加连接序列，例如柔性Linker、刚性Linker或可剪切Linker等手段实现的两段序列的连接方式。在某些实施方式中，所述柔性Linker可以包含GSGSG(SEQ ID NO:89)的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述连接序列可以包含SFTVEKGIYQTSNF(SEQ ID NO:90)的氨基酸序列。
在本申请中，所述融合蛋白还可以包含信号肽。在某些实施方式中，可以在所述融合蛋白的N段添加MGWSCIILFLVATATGVHS(SEQ ID NO:91)的信号肽序列。
在本申请中，所述的融合蛋白包含SEQ ID NO:39-44、79、85和96中任一项所示的氨基酸序列。
免疫原性组合物
另一方面，本申请提供了一种免疫原性组合物，其包含所述的融合蛋白。
在本申请中，术语“免疫原性组合物”通常是指一种亚单位组合物。在本申请中，亚单位组合物是在将组分混合形成抗原性组合物之前，其中组分已经被分离并纯化到至少50％、至少60％、70％、80％、90％纯度的组合物。例如，亚单位组合物可以是水溶性蛋白的水溶液。例如，所述亚单位组合物可包含洗涤剂。例如，亚单位组合物可包含非-离子、两性离子或离子洗涤剂。例如，亚单位组合物可包含脂类。在一些情形中，免疫原性组合物可包括RBD或其功能活性片段和NTD或其功能活性片段。在一些情形中，免疫原性组合物可包括RBD或其功能活性片段和包含NTD或其功能活性片段的融合蛋白。在一些情形中，免疫原性组合物可包括包含RBD或其功能活性片段的融合蛋白和NTD或其功能活性片段。在一些情形中，免疫原性组合物可包括包含RBD或其功能活性片段的融合蛋白和包含NTD或其功能活性片段的融合蛋白。在一些情形中，所述免疫原性组合物还可以包含一种或几种人流感病毒血凝素蛋白HA。在本申请中，所述HA可以包含SEQ ID NO:92-95中任一项所述的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述的流感血凝素选自的流感毒株为每一年在WHO官网上公布的流行毒株，例如2021年WHO官网公布的流行毒株指的是A型(H1N1)EPI1661231|HA|A/Wisconsin/588/2019|EPI_ISL_404460，A型(H3N2)EPI1843589|HA|A/Cambodia/e0826360/2020|EPI_ISL_944639，B型EPI1394970|HA|B/Washington/02/2019|EPI_ISL_347829和B型EPI529345|HA|B/PHUKET/3073/2013|EPI_ISL_161843。在一个实施方式中制备预防流感和新冠病毒疫苗组合物包括上述各型别HA蛋白50ug及突变的NTD-RBD-foldon蛋白50μg及疫苗组合中常用的佐剂，例如AS03佐剂。
例如，所述免疫原性组合物可以包含第一组分和第二组分，所述第一组分可以包含本申请所述的RBD或其功能活性片段及NTD或其功能活性片段的融合蛋白，所述融合蛋白还可以包含一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段；所述第二组分可以包含所述RBD或其功能活性片段，所述NTD或其功能活性片段，或任选地一种或几种人流感病毒血凝素蛋白HA。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以来源于SARS-CoV-2野生型S蛋白的RBD，也可以来源于SARS-CoV-2突变体S蛋白的RBD。在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段可以在K417、L452、T478、E484和N501中的一个或多个氨基酸位点处包含氨基酸突变。
在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以包含Gamma突变株S蛋白的RBD。在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段可以包含K417T、E484K和N501Y中的一个或多个氨基酸突变。例如，所述RBD可以包含SEQ ID NO:83所示的氨基酸序列。在本申请中，所述RBD或其功能活性片段可以包含Beta突变株S蛋白的RBD。在某些实施方式中，所述RBD或其功能活性片段可以包含K417N、E484K和N501Y中的一个或多个氨基酸突变。在某些实施方式中，所述RBD可以包含SEQ ID NO:76所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以来源于SARS-CoV-2野生型S蛋白的NTD，也可以来源于SARS-CoV-2突变体S蛋白的NTD。在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段可以在L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246中的一个或多个氨基酸位点处包含氨基酸突变。在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段可以包含L18F、T19R、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I中的一个或多个氨基酸突变。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以包含Gamma突变株S蛋白的NTD。在某些实施方式中，所述NTD可以包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R190S氨基酸突变。例如，所述NTD可以包含SEQ ID NO:84所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述NTD或其功能活性片段可以包含Beta突变株S蛋白的NTD。在某些实施方式中，所述NTD或其功能活性片段可以包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。例如，所述NTD可以包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述免疫原性组合物还可包括佐剂。例如，所述的佐剂可以包括铝盐(例如氢氧化铝凝胶(alum)或磷酸铝)，但也可以是钙盐、铁盐或锌盐，或者可以是酰化酪氨酸或酰化糖、阳离子或阴离子衍生化多糖或聚磷腈的不溶性悬浮液。例如，所述的免疫原性组合物还可以选择为Th1型应答优先诱导物。例如，Th1型应答优先诱导物可以包括单磷酰脂质A或其衍生物。例如，所述佐剂可以是单磷酰脂质A(例如，3-脱-O-酰化单磷酰脂质A(3D-MPL))和铝盐的组合。一种佐剂增强系统可以包括单磷酰脂质A和皂苷衍生物的组合，特别是WO94/00153公开的QS21和3D-MPL的组合，或者如WO96/33739公开的用胆固醇将QS21猝灭从而使反应原性较弱的一种组合物。例如，所述佐剂还可以是WO95/17210中所述的佐剂，其在水包油乳剂中含有QS21、3D-MPL和生育酚。例如，所述佐剂可以是吐温80、山梨糖醇三油酸酯和角鲨烯混合后于高压条件下进行微流化形成的均一小滴状乳液。例如，所述佐剂可包含寡核苷酸的未甲基化CpG(WO96/02555)。
在本申请中，所述的免疫原性组合物包含第一组分，所述第一组分包含所述的融合蛋白；以及第二组分，所述第二组分包含所述的融合蛋白。
在本申请中，所述的免疫原性组合物，其可按下述重量比配制而成：1)第一组分(1-15重量份)；和/或2)第二组分(1-15重量份)。
在本申请中，所述的免疫原性组合物，其可包含：1)5-60μg第一组分；和/或2)5-60μg第二组分。
在本申请中，术语“重量份”通常是指免疫原性组合物的第一组分和第二组分的重量比。在本申请中，免疫原性组合物每剂量可含有如下成份：第一组分5-60μg和第二组分5-60μg。例如，免疫原性组合物可以包含5μg、10μg、20μg、30μg或40μg的第一组分。例如，免疫原性组合物可以包含5μg、10μg、20μg、30μg或40μg的第二组分。
另一方面，本申请提供了一种免疫原性组合物，其包含第一组分，所述第一组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及第二组分，所述第二组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段。
在本申请中，所述的免疫原性组合物，其可按下述重量比配制而成：1)第一组分(1-15重量份)；和/或2)第二组分(1-15重量份)。
在本申请中，所述的免疫原性组合物，其可包含：1)5-60μg第一组分；和/或2)5-60μg第二组分。
在本申请中，所述RBD可包含SEQ ID NO:18-19中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述NTD包含SEQ ID NO:37-38中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，术语“重量份”通常是指免疫原性组合物的第一组分和第二组分的重量比。在本申请中，免疫原性组合物每剂量可含有如下成份：第一组分5-60μg和第二组分5-60μg。例如，免疫原性组合物可以包含5μg、10μg、20μg、30μg或40μg的第一组分。例如，免疫原性组合物可以包含5μg、10μg、20μg、30μg或40μg的第二组分。
在一些情形中，所述免疫原性组合物可以包含第一组分NTD-RBD-foldon蛋白20～100μg；以及第二组分NTD-foldon蛋白20～100μg，或RBD-foldon蛋白20～100μg，或流感病毒血凝素蛋白15～80μg。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物包含NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)蛋白20～100μg，NTD-foldon(Gamma突变株)蛋白20～100μg，以及冻干保护剂，所述的冻干保护剂按照1％(w/v)蔗糖；2％(w/v)甘氨酸；0.02％(w/v)吐温80；和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)的配方配制。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物包含NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)蛋白20～100μg，RBD-foldon(Gamma突变株)蛋白20～100μg，以及冻干保护剂，所述的冻干保护剂按照1％(w/v)蔗糖；2％(w/v)甘氨酸；0.02％(w/v)吐温80；和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)的配方配制。
在某些实施方式中，所述的免疫原性组合物包含NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)蛋白20～100μg，流感病毒血凝素蛋白15～180μg，以及冻干保护剂，所述的冻干保护剂按照1％(w/v)蔗糖；2％(w/v)甘氨酸；0.02％(w/v)吐温80；和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)的配方配制。
另一方面，本发明提供了一种疫苗，其包含所述的融合蛋白，或所述的免疫原性组合物，及任选地药学上可接受的佐剂。
在某些实施方式中，所述疫苗包含0.5mL的融合蛋白或免疫原性组合物，及0.5mL任选地药学上可接受的佐剂。
本发明所述的佐剂选自角鲨烯、MF59、AS03、单磷脂酰脂质A、鞭毛蛋白、CpG-ODN、胞壁酰二肽、以及铝或钙盐的小分子中的一种或多种。这些佐剂均是本领域所熟知并可通过若干商业渠道获得的。
在某些实施方式中，所述佐剂是氢氧化铝佐剂。
在某些实施方式中，所述佐剂是MF59佐剂。
在某些实施方式中，所述佐剂优选地是AS03佐剂。
所述AS03佐剂的成分包括10.69mg的角鲨烯、11.86mg的α-生育酚、4.86mg的聚山梨酯80、3.53mg的氯化钠、0.09mg的氯化钾、0.51mg的磷酸氢二钠、0.09mg的磷酸二氢钾。
所述MF59佐剂的成分包括4.5％的角鲨烯，0.5％Tween 80，0.5％Span85。
在某些实施方式中，所述疫苗包含NTD-RBD-foldon蛋白20～100μg，1％(w/v)蔗糖，2％(w/v)甘氨酸，0.02％(w/v)吐温80和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，以及AS03佐剂。
在某些实施方式中，所述疫苗包含NTD-RBD-foldon蛋白20～100μg，H1N1毒株的HA15～45μg，H3N2毒株的HA 15～45μg，和B/Washington/02/2019毒株的HA 15～45μg，1％(w/v)蔗糖，2％(w/v)甘氨酸，0.02％(w/v)吐温80和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，以及AS03佐剂。
在某些实施方式中，所述疫苗包含NTD-RBD-foldon蛋白20～100μg，H1N1毒株的HA15～45μg，H3N2毒株的HA 15～45μg，B/Washington/02/2019毒株的HA 15～45μg，和B/PHUKET/3073/2013毒株的HA 15～45μg，1％(w/v)蔗糖，2％(w/v)甘氨酸，0.02％(w/v)吐温80和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，以及AS03佐剂。
在某些实施方式中，所述疫苗包含NTD-RBD-foldon蛋白20～100μg，H1N1毒株的HA15～45μg，H3N2毒株的HA 15～45μg，和B/Washington/02/2019毒株的HA 15～45μg，1％(w/v)蔗糖，2％(w/v)甘氨酸，0.02％(w/v)吐温80和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，以及MF59佐剂。
在某些实施方式中，所述疫苗包含NTD-RBD-foldon蛋白20～100μg，H1N1毒株的HA15～45μg，H3N2毒株的HA 15～45μg，B/Washington/02/2019毒株的HA 15～45μg，和B/PHUKET/3073/2013毒株的HA 15～45μg，1％(w/v)蔗糖，2％(w/v)甘氨酸，0.02％(w/v)吐温80和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，以及MF59佐剂。
在某些优选的实施方式中，所述疫苗包含NTD-RBD-foldon蛋白50μg，H1N1毒株的HA45μg，H3N2毒株的HA 45μg，B/Washington/02/2019毒株的HA 45μg，和B/PHUKET/3073/2013毒株的HA 45μg，1％(w/v)蔗糖，2％(w/v)甘氨酸，0.02％(w/v)吐温80和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，以及AS03佐剂。
在某些优选的实施方式中，所述疫苗包含NTD-RBD-foldon蛋白50μg，H1N1毒株的HA45μg，H3N2毒株的HA 45μg，B/Washington/02/2019毒株的HA 45μg，和B/PHUKET/3073/2013毒株的HA 45μg，1％(w/v)蔗糖，2％(w/v)甘氨酸，0.02％(w/v)吐温80和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，以及MF59佐剂。
在本申请中，所述RBD-NTD-foldon(Beta突变株)可以包含SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列。在本申请中，所述RBD-NTD-foldon(Gamma突变株)可以包含SEQ ID NO:85所示的氨基酸序列。在本申请中，所述RBD-NTD-foldon(Wuhan-1)可以包含SEQ ID NO:96所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述免疫原性组合物还可以包含一种或几种人流感病毒血凝素蛋白HA。在本申请中，所述HA可以包含SEQ ID NO:92-95中任一项所述的氨基酸序列。
在本申请中，所述RBD还可以包含SEQ ID NO:97-108中任一项所示的氨基酸序列。
在本申请中，所述NTD还可以包含SEQ ID NO:109-111中任一项所示的氨基酸序列。
核酸分子、药物组合物、应用
另一方面，本申请还提供了一种或多种分离的核酸分子，其可以编码本申请所述的融合蛋白。在某些实施方式中，所述核酸分子可以包含mRNA。
另一方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含所述的融合蛋白，或所述的免疫原性组合物，及任选地药学上可接受的赋形剂。
所述药学上可接受的载体可以包括缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂、低分子量多肽、蛋白质、亲水聚合物、氨基酸、糖、螯合剂、反离子、金属复合物和/或非离子表面活性剂等。
在本申请中，所述药物组合物可被配制用于口服给药，静脉内给药，肌肉内给药，在肿瘤部位的原位给药，吸入，直肠给药，阴道给药，经皮给药或通过皮下储存库给药。
所述药物组合物可以用于抑制或延缓疾病或病症的发展或进展，和/或可以减轻和/或稳定疾病或病症的状态。
本申请所述的药物组合物可以包含预防和/或治疗有效量的所述融合蛋白、或所述的免疫原性组合物。
所述预防和/或治疗有效量是能够预防和/或治疗(至少部分治疗)患有或具有发展风险的受试者中的疾病或病症和/或其任何并发症而所需的剂量。
在本申请中，术语“有效量”通常是指可以缓解或者消除受试者的疾病或症状，或者可以预防性地抑制或防止疾病或症状发生的药物的量。通常，可根据受试者的体重、年龄、性别、饮食、排泄速率、过往病史、现用治疗、给药时间、剂型、给药方法、给药途径、药物组合、所述受试者的健康状况和交叉感染的潜力、过敏、超敏和副作用、和/或上皮(或内皮)组织疾病发展的程度等来确定具体的有效量。本领域技术人员(例如，医生或兽医)可根据这些或其它条件或要求按比例降低或升高剂量。
在本申请中，所述受试者可以包括人或非人动物。例如，所述非人动物可以选自下组：猴、鸡、鹅、猫、狗、小鼠和大鼠。此外，非人动物也可以包括任何除人以外的动物物种，例如家畜动物，或啮齿类动物，或灵长类动物，或家养动物，或家禽动物。所述人可以是高加索人、非洲人、亚洲人、闪族人，或其他种族，或各种种族的杂合体。又例如，所述人可以是老年、成年、青少年、儿童或者婴儿。
可以根据在实验动物中的有效量推测在人类中的有效量。例如，Freireich等人描述了动物和人的剂量的相互关系(基于每平方米身体表面的毫克数)(Freireich et al.，CancerChemother.Rep.50，219(1966))。身体表面积可以从患者的身高和体重近似确定。参见例如Scientific Tables，Geigy Pharmaceuticals，Ardsley，N.Y.，537(1970)。
另一方面，本申请提供了一种所述的融合蛋白或所述的免疫原性组合物在制备疫苗中的用途。
在本申请中，所述疫苗可用于预防和/或治疗COVID-19。
另一方面，本申请提供了一种所述的融合蛋白或所述的免疫原性组合物，用于治疗和/或预防COVID-19。
另一方面，本申请提供了一种制备COVID-19亚单位疫苗的方法，其包括：
1)提供所述的融合蛋白或所述的免疫原性组合物；以及
2)使1)中所述融合蛋白或免疫原性组合物与药学上可接受的佐剂混合。
另一方面，本申请提供了一种检测SARS-CoV-2中和抗体的方法，其包括：
1)向受试者施用所述的COVID-19亚单位疫苗；以及
2)检测1)中所述受试者在接受所述COVID-19亚单位疫苗后体内产生的中和抗体。
另一方面，本申请提供了一种治疗和/或预防COVID-19的方法，其包括向受试者施用所述的融合蛋白或所述的免疫原性组合物或所述的COVID-19亚单位疫苗。
本申请还涉及以下的具体实施方式：
1.融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及2)一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
2.根据实施方式1所述的融合蛋白，其中所述RBD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
3.根据实施方式2所述的融合蛋白，其中所述SAR-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
4.根据实施方式1-3中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD与野生型SARS-CoV-2的RBD相比，在选自下组的一个或多个氨基酸位点有突变：K417、L452、T478、E484和N501。
5.根据实施方式1-4中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD包含氨基酸突变K417T/N、L452R、T478K、E484K和N501Y的一种或多种。
6.根据实施方式1-5中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD包含K417T、E484K和N501Y氨基酸突变。
7.根据实施方式1-6中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD包含K417N、E484K和N501Y氨基酸突变。
8.根据实施方式1-7中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD包含SEQ ID NO:18、19、76、83、97-108中任一项所示的氨基酸序列。
9.根据实施方式1-8任一项所述的融合蛋白，其中所述P2或其功能活性片段包含破伤风毒素的表位肽。
10.根据实施方式9所述的融合蛋白，其中所述破伤风毒素的表位肽包含SEQ IDNO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
11.根据实施方式1-10任一项所述的融合蛋白，其中所述P2或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
12.根据实施方式1-11任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD或其功能活性片段与所述P2或其功能活性片段在框内融合。
13.根据实施方式1-12任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。
14.根据实施方式1-13任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
15.根据实施方式1-14任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
16.根据实施方式1-15任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD或其功能活性片段与所述foldon结构域或其功能活性片段在框内融合。
17.根据实施方式1-16任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段。
18.根据实施方式17所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
19.根据实施方式18所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链包含SEQID NO:70所示的氨基酸序列。
20.根据实施方式18-19任一项所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链包含SEQID NO:71所示的氨基酸序列。
21.根据实施方式1-20任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
22.根据实施方式1-21任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含SEQID NO:70-72中任一项所示的氨基酸序列。
23.根据实施方式1-22任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
24.根据实施方式1-23任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD或其功能活性片段与所述铁蛋白或其功能活性片段在框内融合。
25.根据实施方式1-24任一项所述的融合蛋白，其中所述乙肝表面抗原或其功能活性片段包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
26.根据实施方式1-25任一项所述的融合蛋白，其中所述乙肝表面抗原或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
27.根据实施方式1-26任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD或其功能活性片段与所述乙肝表面抗原或其功能活性片段在框内融合。
28.根据实施方式11-27任一项所述的融合蛋白，其中所述直接或间接相连可以包含通过连接子相连。
29.根据实施方式28所述的融合蛋白，其中所述连接子可以包含刚性接头，柔性接头或其他序列。
30.根据实施方式28-29任一项所述的融合蛋白，其中所述连接子可以包含SEQ IDNO:89-90中任一项所示的氨基酸序列。
31.根据实施方式1-30任一项所述的融合蛋白，其包含SEQ ID NO:1-17、80和86中任一项所示的氨基酸序列。
32.融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段；以及2)一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
33.根据实施方式32所述的融合蛋白，其中所述NTD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体S蛋白的NTD。
34.根据实施方式33所述的融合蛋白，其中所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
35.根据实施方式32-34中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含在选自下组的一个或多个氨基酸位点的突变：L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246。
36.根据实施方式32-35中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含选自下组的一个或多个氨基酸突变：L18F、T19R、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I。
37.根据实施方式32-36中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。
38.根据实施方式32-37中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R190S氨基酸突变。
39.根据实施方式32-38中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R246I氨基酸突变。
40.根据实施方式32-39中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含SEQ ID NO:37、38、77、84和109-111中任一项所示的氨基酸序列。
41.根据实施方式32-40任一项所述的融合蛋白，其中所述P2或其功能活性片段包含破伤风毒素的表位肽。
42.根据实施方式41所述的融合蛋白，其中所述破伤风毒素的表位肽包含SEQ IDNO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
43.根据实施方式32-42任一项所述的融合蛋白，其中所述P2或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
44.根据实施方式32-43任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD或其功能活性片段与所述P2或其功能活性片段在框内融合。
45.根据实施方式32-44任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。
46.根据实施方式32-45任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
47.根据实施方式32-46任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
48.根据实施方式32-47任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD或其功能活性片段与所述foldon结构域或其功能活性片段在框内融合。
49.根据实施方式32-48任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段。
50.根据实施方式49所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
51.根据实施方式50所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链包含SEQID NO:70所示的氨基酸序列。
52.根据实施方式50-51任一项所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链包含SEQID NO:71所示的氨基酸序列。
53.根据实施方式32-52任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
54.根据实施方式32-53任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含SEQ ID NO:70-72任一项所示的氨基酸序列。
55.根据实施方式32-54任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
56.根据实施方式32-55任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD或其功能活性片段与所述铁蛋白或其功能活性片段在框内融合。
57.根据实施方式32-56任一项所述的融合蛋白，其中所述乙肝表面抗原或其功能活性片段包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
58.根据实施方式32-57任一项所述的融合蛋白，其中所述乙肝表面抗原或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
59.根据实施方式32-58任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD或其功能活性片段与所述乙肝表面抗原或其功能活性片段在框内融合。
60.根据实施方式43-59任一项所述的融合蛋白，其中所述直接或间接相连可以包含通过连接子相连。
61.根据实施方式60所述的融合蛋白，其中所述连接子可以包含刚性接头，柔性接头或其他序列。
62.根据实施方式60-61任一项所述的融合蛋白，其中所述连接子可以包含SEQ IDNO:89-90中任一项所示的氨基酸序列。
63.根据实施方式32-62中任一项所述的融合蛋白，其包含SEQ ID NO:20-36、81和87中任一项所示的氨基酸序列。
64.融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及2)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段。
65.根据实施方式64所述的融合蛋白，其中所述RBD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
66.根据实施方式65所述的融合蛋白，其中所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
67.根据实施方式64-66中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD在选自下组的一个或多个氨基酸位点有突变：K417、L452、T478、E484和N501。
68.根据实施方式64-67中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD包含氨基酸突变K417T/N、L452R、T478K、E484K和N501Y的一种或多种。
69.根据实施方式64-68中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD包含K417T、E484K和N501Y氨基酸突变。
70.根据实施方式64-69中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD包含K417N、E484K和N501Y氨基酸突变。
71.根据实施方式64-70中任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD包含SEQ ID NO:18、19、76、83、97-108中任一项所示的氨基酸序列。
72.根据实施方式64-71任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
73.根据实施方式72所述的融合蛋白，其中所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
74.根据实施方式64-73中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含在选自下组的一个或多个氨基酸位点的突变：L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246。
75.根据实施方式64-74中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含选自下组的一个或多个氨基酸突变：L18F、T19R、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I。
76.根据实施方式64-75中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。
77.根据实施方式64-76中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R190S氨基酸突变。
78.根据实施方式64-77中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R246I氨基酸突变。
79.根据实施方式64-78中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含SEQ ID NO:37、38、77、84和109-111中任一项所示的氨基酸序列。
80.根据实施方式64-79任一项所述的融合蛋白，其还包括一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
81.根据实施方式64-80任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
82.根据实施方式64-81任一项所述的融合蛋白，其中所述RBD或其功能活性片段与所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
83.根据实施方式64-82任一项所述的融合蛋白，其中所述P2或其功能活性片段包含破伤风毒素的表位肽。
84.根据实施方式83所述的融合蛋白，其中所述破伤风毒素的表位肽包含SEQ IDNO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
85.根据实施方式64-84任一项所述的融合蛋白，其中所述P2或其功能活性片段与所述RBD或其功能性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
86.根据实施方式64-85任一项所述的融合蛋白，其中所述P2或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
87.根据实施方式64-86任一项所述的融合蛋白，其中所述P2或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性片段的N端与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
88.根据实施方式64-87任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。
89.根据实施方式64-88任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
90.根据实施方式64-89任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
91.根据实施方式64-90任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
92.根据实施方式64-91任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
93.根据实施方式64-92任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段的N端与所述P2或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述P2或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端与所述NTD或其功能活性的C端直接或间接地相连。
94.根据实施方式64-93任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段。
95.根据实施方式94所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
96.根据实施方式95所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链包含SEQID NO:70所示的氨基酸序列。
97.根据实施方式95-96任一项所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链包含SEQID NO:71所示的氨基酸序列。
98.根据实施方式64-97任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
99.根据实施方式64-98任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含SEQ ID NO:70-72任一项所示的氨基酸序列。
100.根据实施方式64-99任一项所述地融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
101.根据实施方式64-100任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
102.根据实施方式64-101任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段的N端与所述RBD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连，所述RBD或其功能活性的N端与所述NTD或其功能活性片段的C端直接或间接地相连。
103.根据实施方式64-102任一项所述的融合蛋白，其中所述乙肝表面抗原或其功能活性片段包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
104.根据实施方式64-103任一项所述的融合蛋白，其中所述乙肝表面抗原或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段直接或间接地相连。
105.根据实施方式64-104任一项所述的融合蛋白，其中所述乙肝表面抗原或其功能活性片段与所述RBD或其功能活性片段和/或所述NTD或其功能活性片段在框内融合。
106.根据实施方式81-105任一项所述的融合蛋白，其中所述直接或间接相连可以包含通过连接子相连。
107.根据实施方式106所述的融合蛋白，其中所述连接子可以包含刚性接头，柔性接头或其他序列。
108.根据实施方式81-107所述的融合蛋白，其中所述连接子可以包含SEQ ID NO:89-90中任一项所示的氨基酸序列。
109.根据实施方式64-108中任一项所述的融合蛋白，其包含SEQ ID NO:39-44、79、85和96中任一项所示的氨基酸序列。
110.免疫原性组合物，其包含实施方式1-109中任一项所述的融合蛋白。
111.根据实施方式110所述的免疫原性组合物，其包含第一组分，所述第一组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及第二组分，所述第二组分包含实施方式1-109中任一项所述的融合蛋白。
112.根据实施方式110所述的免疫原性组合物，其包含第一组分，所述第一组分包含实施方式1-109中任一项所述的融合蛋白；以及第二组分，所述第二组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段。
113.根据实施方式110所述的免疫原性组合物，其包含第一组分，所述第一组分包含实施方式1-109中任一项所述的融合蛋白；以及第二组分，所述第二组分包含实施方式1-109中任一项所述的融合蛋白。
114.根据实施方式110-113任一项所述的免疫原性组合物，其按下述重量比配制而成：1)第一组分(1-15重量份)；和/或2)第二组分(1-15重量份)。
115.根据实施方式110-114任一项所述的免疫原性组合物，其包含：1)5-60μg第一组分；和/或2)5-60μg第二组分。
116.免疫原性组合物，其包含第一组分，所述第一组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段；以及第二组分，所述第二组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段。
117.根据实施方式116所述的免疫原性组合物，其中所述RBD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
118.根据实施方式117所述的免疫原性组合物，其中所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
119.根据实施方式116-118中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述RBD在选自下组的一个或多个氨基酸位点有突变：K417、L452、T478、E484和N501。
120.根据实施方式116-119中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述RBD包含氨基酸突变K417T/N、L452R、T478K、E484K和N501Y的一种或多种。
121.根据实施方式116-120中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述RBD包含K417T、E484K和N501Y氨基酸突变。
122.根据实施方式116-121中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述RBD包含K417N、E484K和N501Y氨基酸突变。
123.根据实施方式116-122中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述RBD包含SEQ ID NO:18、19、76、83、97-108中任一项所示的氨基酸序列。
124.根据实施方式116-123任一项所述的免疫原性组合物，其中所述NTD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体。
125.根据实施方式124所述的免疫原性组合物，其中所述SARS-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
126.根据实施方式116-125中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述NTD包含在选自下组的一个或多个氨基酸位点的突变：L18、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246。
127.根据实施方式116-126中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述NTD包含选自下组的一个或多个氨基酸突变：L18F、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I。
128.根据实施方式116-127中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。
129.根据实施方式116-128中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R190S氨基酸突变。
130.根据实施方式116-129中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述NTD包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R246I氨基酸突变。
131.根据实施方式116-130中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述NTD包含SEQ ID NO:37、38、77、84和109-111中任一项所示的氨基酸序列。
132.根据实施方式116-131任一项所述的免疫原性组合物，其按下述重量比配制而成：1)第一组分(1-15重量份)；和/或2)第二组分(1-15重量份)。
133.根据实施方式111-132任一项所述的免疫原性组合物，其包含：1)5-60μg第一组分；和/或2)5-60μg第二组分。
134.根据实施方式116-133任一项所述的免疫原性组合物，其中所述RBD包含SEQID NO:18-19中任一项所示的氨基酸序列。
135.根据实施方式116-134任一项所述的免疫原性组合物，其中所述NTD包含SEQID NO:37-38中任一项所示的氨基酸序列。
136.一种或多种分离的核酸分子，其编码权利要求1-109中任一项所述的融合蛋白。
137.根据权利要求136所述的核酸分子，其包含mRNA。
138.药物组合物，其包含实施方式1-109任一项所述的融合蛋白，或实施方式110-135中任一项所述的免疫原性组合物，或实施方式136-137中任一项所述的核酸分子，及任选地药学上可接受的赋形剂。
139.实施方式1-109任一项所述的融合蛋白或实施方式110-135任一项所述的免疫原性组合物在制备疫苗中的用途。
140.根据实施方式139所述的用途，其中所述疫苗用于预防和/或治疗COVID-19。
141.实施方式1-109任一项所述的融合蛋白，或实施方式110-135任一项所述的免疫原性组合物，或实施方式136-137中任一项所述的核酸分子，用于治疗和/或预防COVID-19。
142.一种制备COVID-19亚单位疫苗的方法，其包括：
1)提供实施方式1-109任一项所述的融合蛋白或实施方式110-135任一项所述的免疫原性组合物；以及
2)使1)中所述融合蛋白或免疫原性组合物与药学上可接受的佐剂混合。
143.一种检测SARS-CoV-2中和抗体的方法，其包括：
1)向受试者施用实施方式142所述的COVID-19亚单位疫苗；以及
2)检测1)中所述受试者在接受所述COVID-19亚单位疫苗后体内产生的中和抗体。
144.一种治疗和/或预防COVID-19的方法，其包括向受试者施用实施方式1-109任一项所述的融合蛋白，或实施方式110-135任一项所述的免疫原性组合物，或实施方式136-137中任一项所述的核酸分子，或实施方式142所述的COVID-19亚单位疫苗。
本申请还包含以下实施方案：
1.融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段；以及2)一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
2.根据实施方案1所述的融合蛋白，其中所述NTD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体S蛋白的NTD。
3.根据实施方案2所述的融合蛋白，其中所述SAR-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
4.根据实施方案1-3中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含在选自下组的一个或多个氨基酸位点的突变：L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246。
5.根据实施方案1-4中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含选自下组的一个或多个氨基酸突变：L18F、T19R、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I。
6.根据实施方案1-5中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R190S氨基酸突变。
8.根据实施方案1-7中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含SEQ ID NO:37、38、77、84和109-111中任一项所示的氨基酸序列。
9.根据实施方案1-8中任一项所述的融合蛋白，其中所述多肽与所述NTD或其功能活性片段的N端或C端直接或间接地相连。
10.根据实施方案1-9中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD或其功能活性片段与所述多肽在框内融合。
11.根据实施方案1-0中任一项所述的融合蛋白，其中所述P2或其功能活性片段包含破伤风毒素的表位肽。
12.根据实施方案11所述的融合蛋白，其中所述破伤风毒素的表位肽包含SEQ IDNO:64-66中任一项所示的氨基酸序列。
13.根据实施方案1-12中任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段包含噬菌体T4纤维蛋白C末端的氨基酸残基。
14.根据实施方案1-13中任一项所述的融合蛋白，其中所述foldon结构域或其功能活性片段包含SEQ ID NO:67-69和78中任一项所示的氨基酸序列。
15.根据实施方案1-14中任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含粉纹夜蛾铁蛋白、幽门螺杆菌铁蛋白或其功能活性片段。
16.根据实施方案15所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白或其功能活性片段包括粉纹夜蛾铁蛋白的重链或轻链。
17.根据实施方案16所述的融合蛋白，其中所述粉纹夜蛾铁蛋白的重链包含SEQID NO:70所示的氨基酸序列，所述粉纹夜蛾铁蛋白的轻链包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
18.根据实施方案1-17中任一项所述的融合蛋白，其中所述铁蛋白或其功能活性片段包含SEQ ID NO:70-72中任一项所示的氨基酸序列。
19.根据实施方案1-18中任一项所述的融合蛋白，其中所述乙肝表面抗原或其功能活性片段包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列。
20.根据实施方案9-19中任一项所述的融合蛋白，其中所述直接或间接相连包含通过连接子相连。
21.根据实施方案20所述的融合蛋白，其中所述连接子包含刚性接头，柔性接头或其他序列。
22.根据实施方案20-21中任一项所述的融合蛋白，其中所述连接子包含SEQ IDNO:89-90中任一项所示的氨基酸序列。
23.根据实施方案1-22中任一项所述的融合蛋白，其包含SEQ ID NO:20-36、81和87中任一项所示的氨基酸序列。
24.免疫原性组合物，其包含实施方案1-23中任一项所述的融合蛋白。
25.根据实施方案24所述的免疫原性组合物，其包含第一组分，所述第一组分包含权利1-23中任一项所述的融合蛋白，及第二组分，所述第二组分包含SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合结构域(RBD)或其功能活性片段。
26.根据实施方案25所述的免疫原性组合物，其按下述重量比配制而成：1)第一组分(1-15重量份)；和/或2)第二组分(1-15重量份)。
27.根据实施方案25-26中任一项所述的免疫原性组合物，其包含：1)5-60μg第一组分；和/或2)5-60μg第二组分。
28.根据实施方案24-27中任一项所述的免疫原性组合物，其还包含至少一种人流感病毒血凝素蛋白HA。
29.根据实施方案28所述的免疫原性组合物，其中所述HA包含SEQ ID NO:92-95中任一项所述的氨基酸序列。
30.一种或多种分离的核酸分子，其编码实施方案1-23中任一项所述的融合蛋白。
31.根据实施方案30所述的核酸分子，其包含mRNA。
32.药物组合物，其包含实施方案1-23中任一项所述的融合蛋白，实施方案24-29中任一项所述的免疫原性组合物，或实施方案30-31中任一项所述的核酸分子，及任选地药学上可接受的赋形剂。
33.实施方案1-23中任一项所述的融合蛋白、实施方案24-29中任一项所述的免疫原性组合物、实施方案30-31中任一项所述的核酸分子、或实施方案32所述的药物组合物在制备疫苗中的用途。
34.根据实施方案33所述的用途，其中所述疫苗用于预防和/或治疗COVID-19。
35.一种制备COVID-19亚单位疫苗的方法，其包括：
36.提供实施方案1-23中任一项所述的融合蛋白、实施方案24-29中任一项所述的免疫原性组合物或实施方案30-31中任一项所述的核酸分子；以及
37.使1)中所述的免疫原性组合物与药学上可接受的佐剂混合。
38.一种检测SARS-CoV-2中和抗体的方法，其包括：
1)向受试者施用实施方案35所述的COVID-19亚单位疫苗；以及
2)检测1)中所述受试者在接受所述COVID-19亚单位疫苗后体内产生的中和抗体。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的融合蛋白、免疫原性组合物、制备方法和用途等，而不用于限制本申请发明的范围。此外，实施例中无论是否有6个或8个HIS标签或N端的信号肽，不影响保护范围，熟悉本领域的技术人员根据本申请发明的内容对实施例进行非本质的改进和调整，仍属于本申请发明的保护范围。
实施例
实施例1构建RBD-P2-6*HIS(GP101150-7)重组表达质粒
信号肽添加：MGVPAVPEASSPRWGTLLLAIFLAASRGLVAA(SEQ ID NO：74)。载体选择:pcdna3.1(+)，按照宿主CHO细胞进行密码子优化。
片段的克隆。RBD-P2-6*HIS的引物通过PCR的方法扩增得到片段PCR产物,通过多段重组的方法重组到目的载体pcdna3.1(+)(BamHI-XhoI酶切载体)中，得到RBD-P2-6*HIS(GP101150-7)重组表达质粒。反应体系如表1所示。
表1处理好的目的片段与载体连接反应体系
名称 体积
酶切后载体 5μl
纯化的PCR产物 5μl
无缝组装MIX 10μl
总体积 20μl
以上连接液在52℃恒温环境下连接30min，得到RBD-P2-6*HIS(GP101150-7)重组表达质粒。
转化的方法：(1)将浓度在100ng/μl的RBD-P2-6*HIS(GP101150-7)重组表达质粒吸取1-3μl加入到100μl的感受态细胞里，轻轻晃动旋转以混匀，冰上放置3分钟。(2)42℃水浴90s不要摇动。(3)冰浴中放置3分钟左右。(4)每管中加入500-800μl 37℃预温LB培养基，37℃摇床200rpm温和振荡40分钟。
RBD-P2-6*HIS(GP101150-7)重组表达质粒的验证：(1)制备含相应抗性的琼脂平板。(2)取100μl菌液，然后平铺在含有相应抗性的琼脂板，用无菌玻璃涂布器轻轻将细菌涂在平板表面，将平板置于37℃培养15分钟。(3)倒置平板于37℃培养12-16小时可出现菌落。(4)平板挑菌，37℃250转/分钟摇菌14小时，用菌液进行PCR鉴定，将阳性克隆菌液送测序。
克隆质粒的鉴定方法：PCR扩增RBD-P2-6*HIS片段，鉴定引物序列由公司内部引物部合成预期扩增的片段长度为861bp，PCR反应采用20μL体系：引物0.5μL，模板菌液2μL，聚合酶缓冲液0.5μL，buffer 3μl，ddH2O 14μL。循环参数：96℃预变性3min；95℃15S，58℃15S，72℃20s，23个循环，72℃终延伸1min。以菌液PCR方法筛选阳性克隆，获得的阳性菌液37℃摇菌提质粒，测序。测序比对正确的质粒，用BamHI--XhoI进行双酶切，获得861bp、5372bp两个片段。
RBD-P2-6*HIS(GP101150-7)重组表达质粒抽提：接1％含RBD-P2-6*HIS(GP101150-7)重组表达质粒的大肠杆菌细胞(stbl3)于2mlLB培养基，37℃振荡培养过夜。处理细胞后，使用质粒提取试剂盒提取100ug质粒。测序比对正确的质粒，用BamHI--XhoI进行双酶切，获得861bp、5372bp两个片段。
实施例2细胞转染及RBD-P2-6*HIS蛋白纯化
在所有细胞操作过程中，温和地旋转混合宿主细胞，避免剧烈的混合/移液。继代培养和扩增CHO细胞(来自Thermo公司的EXPICHO)直到细胞密度达到4×106–6×106个/mL。第-1天：细胞扩增，扩增培养细胞到3×106–4×106个/mL，并允许细胞过夜生长。第0天：转染细胞，测定活细胞密度和存活率，细胞的密度应该达7×106–10×106个/mL,存活率到95–99％进行转染，新鲜的细胞表达培养基，预热至37℃，将细胞稀释至最终密度为6×106个/mL，50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。使用OPti-PROSFM培养基制备转染试剂和RBD-P2-6*HIS(GP101150-7)重组表达质粒复合物(4℃)，例：1ml CHO细胞准备40μl OPti-PRO SFM添加0.8ug RBD-P2-6*HIS(GP101150-7)重组表达质粒混匀放置5min；准备40μlOPti-PRO SFM添加3μl Expi Fectamine CHO试剂混匀放置5min，室温下1–5分钟，然后将溶液缓慢转移至摇瓶摇晃，在添加过程中轻轻摇动摇瓶。将细胞置于50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。转染后18-22小时，添加Enhancer和ExpiCHO Feed，执行标准实验方案。例：1ml细胞添加6μl Enhancer和0.24mlExpiCHO Feed，将细胞置于50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。转染后8天收集，进行后续纯化。
蛋白纯化。培养基离心，上清添加Ni柱，振荡孵育2h，经过重力空柱管柱进行亲和层析纯化。平衡缓冲液：“PBS”,pH7.4，清洗10CV；清洗缓冲液：“PBS”,pH7.4 with20mMimidazole，清洗10CV；洗脱缓冲液：“PBS”,pH7.4 with 500mM imidazole，洗脱1CV，重复5次，得到RBD-P2-6*HIS纯化蛋白，如表2所示。
表2蛋白纯化后的浓度和体积
P101150-7 Concentration(mg/ml) Volume(ml)
RBD-P2-6*HIS 0.05 1
SDS-PAGE电泳与WB验证。A.1.0mm PAGE胶，上样量8μl，跑胶顺序：M.Molecularweight marker.Me.Culture medium.FT.Flow through.W.Wash.E.Eluted fractions。B.电泳:将RBD-P2-6*HIS纯化蛋白与上样缓冲液混合(RBD-P2-6*HIS纯化蛋白:5x上样缓冲液＝4:1)，煮沸5min，进行点样。首先100V恒压电泳，可以看到Marker逐渐变成一条细线。待Marker进入分离胶后，将电压调到300V继续电泳，直到蓝色的溴酚蓝条带到达胶的底部(约25min)。C.转膜，撬开玻璃板，小心取出凝胶。PVDF膜用甲醇活化30s后和滤纸剪成和胶块相同大小，在转膜液中浸透。从下往上依次为：滤纸-PVDF膜-凝胶-滤纸。注意各层之间尤其是胶和膜之间不能有气泡。将平皿中的转膜液全部倒进转膜盒中。20V恒压转移，50KDa蛋白需20min。分子量越大需时间越长。D.抗体孵育，转膜后取出PVDF膜，可以看到Marker转移到膜上。用5％脱脂奶(1g脱脂奶粉加100ml PBST)封闭1小时，用PBST漂洗2x5min。一抗(anti-His Mab)用5％脱脂奶粉(1g脱脂奶粉，100ml TBS)稀释，放在小盒中孵育，4℃脱色摇床中反应2h。取出PVDF膜,PBST漂洗4×10min。二抗(羊抗鼠)也用5％脱脂奶粉稀释，孵育1小时。PBST漂洗4x 10min。均使用摇床震动。E.显色，ECL显色:每一块PBST膜，用A液1mL和B液10μL混合后滴在膜上，5min后在化学发光成像系统中拍照记录，如图1所示。
实施例3构建NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)重组表达质粒
信号肽添加：MFVFLVLLPLVS(SEQ ID NO：75)，载体选择:pcdna3.1(+)。按照宿主CHO细胞进行密码子优化。NTD-P2-6*HIS的引物通过PCR的方法扩增得到片段PCR产物,通过多段重组的方法重组到目的载体pcdna3.1(+)(BamHI-XhoI酶切载体)中，得到NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)重组表达质粒。反应体系如表3所示。
表3处理好的目的片段与载体连接反应体系
名称 体积
酶切后载体 5μl
纯化的PCR产物 5μl
无缝组装MIX 10μl
总体积 20μl
转化的方法：将浓度在100ng/μl左右的NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)重组表达质粒吸取1-3μl加入到100μl左右的感受态细胞里，轻轻晃动旋转以混匀，冰上放置3分钟。42℃水浴90s不要摇动；冰浴中放置3分钟左右；每管中加入500-800μl 37℃预温LB培养基，37℃摇床200rpm温和振荡40分钟。
NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)重组表达质粒的验证：(1)制备含相应抗性的琼脂平板。(2)取100μl菌液，然后平铺在含有相应抗性的琼脂板，用无菌玻璃涂布器轻轻将细菌涂在平板表面，将平板置于37℃培养15分钟。(3)倒置平板于37℃培养12-16小时可出现菌落。(4)平板挑菌，37℃250转/分钟摇菌14小时，用菌液进行PCR鉴定，将阳性克隆菌液送测序。
克隆质粒的鉴定方法：PCR扩增NTD-P2-6*HIS片段，鉴定引物序列由公司内部引物部合成预期扩增的片段长度为1005bp，PCR反应采用20μL体系：引物0.5μL，模板菌液2μL，聚合酶缓冲液0.5μL，buffer3μl，ddH2O 14μL。循环参数：96℃预变性3min；95℃15S，58℃15S，72℃20s，23个循环，72℃终延伸1min。以菌液PCR方法筛选阳性克隆，获得的阳性菌液37℃摇菌提质粒，测序。测序比对正确的质粒，用BamHI--XhoI进行双酶切，获得1005bp、5372bp两个片段。
NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)重组表达质粒抽提。接1％含NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)重组表达质粒的大肠杆菌细胞(stbl3)于2mlLB培养基，37℃振荡培养过夜。处理细胞后，使用质粒提取试剂盒提取100ug质粒。测序比对正确的质粒，用BamHI--XhoI进行双酶切，获得1005bp、5372bp两个片段。
实施例4细胞转染及NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)蛋白纯化
在所有细胞操作过程中，温和地旋转混合宿主细胞；避免剧烈的混合/移液。继代培养和扩增CHO细胞直到细胞密度达到4×106–6×106个/mL。第-1天：CHO细胞扩增，扩增培养细胞到3×106–4×106个/mL，并允许细胞过夜生长。第0天：转染细胞，测定活细胞密度和存活率，细胞的密度应该达7×106–10×106个/mL,存活率到95–99％进行转染，新鲜的细胞表达培养基，预热至37℃，将细胞稀释至最终密度为6×106个/mL，50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。使用OPti-PRO SFM培养基制备转染试剂和NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)重组表达质粒复合物(4℃)，例：1ml细胞准备40μl OPti-PRO SFM添加0.8ug NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)重组表达质粒混匀放置5min；准备40μl OPti-PRO SFM添加3μl ExpiFectamine CHO试剂混匀放置5min，室温下1–5分钟，然后将溶液缓慢转移至摇瓶摇晃，在添加过程中轻轻摇动摇瓶。将细胞置于50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。转染后18-22小时，添加Enhancer和ExpiCHO Feed，执行标准实验方案。例：1ml细胞添加6μlEnhancer和0.24ml ExpiCHO Feed，将细胞置于50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。转染后8天收集，进行后续纯化。
蛋白纯化，培养基离心，上清添加Ni柱，振荡孵育2h，经过重力空柱管柱进行亲和层析纯化。平衡缓冲液：“PBS”,pH7.4，清洗10CV；清洗缓冲液：“PBS”,pH7.4 with20mMimidazole，清洗10CV；洗脱缓冲液：“PBS”,pH7.4 with 500mM imidazole，洗脱1CV，重复5次，得到NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)纯化蛋白，结果如表4所示。
表4 NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)纯化蛋白的浓度和体积
P101150-8 浓度(mg/ml) 体积(ml)
NTD-P2-6*HIS 0.03 1
SDS-PAGE电泳与WB验证。A.1.0mm PAGE胶，上样量8μl，跑胶顺序：M.Molecμlarweight marker.Me.Cμlture medium.FT.Flow through.W.Wash.E.Eluted fractions。B.电泳:将NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)纯化蛋白与上样缓冲液混合(NTD-P2-6*HIS(GP101150-8)纯化蛋白:5x上样缓冲液＝4:1)，煮沸5min，进行点样。首先100V恒压电泳，可以看到Marker逐渐变成一条细线。待Marker进入分离胶后，将电压调到300V继续电泳，直到蓝色的溴酚蓝条带到达胶的底部(约25min)。C.转膜。撬开玻璃板，小心取出凝胶。PVDF膜用甲醇活化30s后和滤纸剪成和胶块相同大小，在转膜液中浸透。从下往上依次为：滤纸-PVDF膜-凝胶-滤纸。注意各层之间尤其是胶和膜之间不能有气泡。将平皿中的转膜液全部倒进转膜盒中。20V恒压转移，50KDa蛋白需20min。分子量越大需时间越长。D.抗体孵育。转膜后取出PVDF膜，可以看到Marker转移到膜上。用5％脱脂奶(1g脱脂奶粉加100mlPBST)封闭1小时，用PBST漂洗2x5min。一抗(anti-His Mab)用5％脱脂奶粉(1g脱脂奶粉，100ml TBS)稀释，放在小盒中孵育，4'C脱色摇床中反应2h。取出PVDF膜,PBST漂洗4×10min。二抗(羊抗鼠)也用5％脱脂奶粉稀释，孵育1小时。PBST漂洗4x10min。均使用摇床震动。E.显色。ECL显色:每一块PBST膜，用A液1mL和B液10μL混合后滴在膜上，5min后在化学发光成像系统中拍照记录，如图2所示。
实施例5构建NTD-RBD-foldon-8*HIS重组表达质粒
信号肽添加：MFVFLVLLPLVS(SEQ ID NO：75)，载体选择:pcdna3.1(+)。按照宿主CHO细胞进行密码子优化。NTD-RBD-foldon-8*HIS的引物通过PCR的方法扩增得到片段PCR产物，通过多段重组的方法重组到目的载体pcdna3.1(+)(BamHI-XhoI酶切载体)中，得到NTD-RBD-foldon-8*HIS重组表达质粒。反应体系如表5所示。
表5处理好的目的片段与载体连接反应体系
Figure BDA0003317174860000501
Figure BDA0003317174860000511
转化的方法：将浓度在100ng/μl左右的NTD-RBD-foldon-8*HIS重组表达质粒吸取1-3μl加入到100μl左右的感受态细胞里，轻轻晃动旋转以混匀，冰上放置3分钟。42℃水浴90s不要摇动；冰浴中放置3分钟左右；每管中加入500-800μl 37℃预温LB培养基，37℃摇床200rpm温和振荡40分钟。
NTD-RBD-foldon-8*HIS重组表达质粒的验证：(1)制备含相应抗性的琼脂平板。(2)取100μl菌液,然后平铺在含有相应抗性的琼脂板，用无菌玻璃涂布器轻轻将细菌涂在平板表面，将平板置于37℃培养15分钟。(3)倒置平板于37℃培养12-16小时可出现菌落。(4)平板挑菌，37℃250转/分钟摇菌14小时，用菌液进行PCR鉴定，将阳性克隆菌液送测序。
克隆质粒的鉴定方法：PCR扩增NTD-RBD-foldon-8*HIS片段，鉴定引物序列由公司内部引物部合成预期扩增的片段长度为1761bp，PCR反应采用20μL体系：引物0.5μL，模板菌液2μL，聚合酶缓冲液0.5μL，buffer3μl，ddH2O 14μL。循环参数：96℃预变性3min；95℃15S，58℃15S，72℃20s，23个循环，72℃终延伸1min。以菌液PCR方法筛选阳性克隆，获得的阳性菌液37℃摇菌提质粒，测序。测序比对正确的质粒，用BamHI--XhoI进行双酶切，获得1761bp、5372bp两个片段。
NTD-RBD-foldon-8*HIS重组表达质粒抽提。接1％含NTD-RBD-foldon-8*HIS重组表达质粒的大肠杆菌细胞(stbl3)于2mlLB培养基，37℃振荡培养过夜。处理细胞后，使用质粒提取试剂盒提取100ug质粒。测序比对正确的质粒，用BamHI--XhoI进行双酶切，获得1761bp、5372bp两个片段。
实施例6细胞转染及蛋白纯化
在所有细胞操作过程中，温和地旋转混合宿主细胞；避免剧烈的混合/移液。继代培养和扩增CHO细胞直到细胞密度达到4×106–6×106个/mL。第-1天：细胞扩增，扩增培养细胞到3×106–4×106个/mL，并允许细胞过夜生长。第0天：转染细胞，测定活细胞密度和存活率，细胞的密度应该达7×106–10×106个/mL，存活率到95–99％进行转染，新鲜的细胞表达培养基，预热至37℃，将细胞稀释至最终密度为6×106个/mL，50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。
使用OPti-PRO SFM培养基制备转染试剂和NTD-RBD-foldon-8*HIS重组表达质粒复合物(4℃)，例：1ml细胞准备40ul OPti-PRO SFM添加0.8ug NTD-RBD-foldon-8*HIS重组表达质粒混匀放置5min；准备40ul OPti-PRO SFM添加3ul Expi Fectamine CHO试剂混匀放置5min，室温下1–5分钟，然后将溶液缓慢转移至摇瓶摇晃，在添加过程中轻轻摇动摇瓶。将细胞置于50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。转染后18-22小时，添加Enhancer和ExpiCHO Feed，执行标准实验方案，例：1ml细胞添加6ul Enhancer和0.24ml ExpiCHOFeed，将细胞置于50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。转染后8天收集，进行后续纯化。
蛋白纯化：培养基离心，上清添加Ni柱，振荡孵育2h，经过重力空柱管柱进行亲和层析纯化。平衡缓冲液：“PBS”,pH7.4，清洗10CV；清洗缓冲液：“PBS”,pH7.4 with20mMimidazole，清洗10CV；洗脱缓冲液：“PBS”,pH7.4 with 500mM imidazole，洗脱1CV，重复5次，得到NTD-RBD-foldon-8*HIS纯化蛋白，结果如表6所示。
表6 NTD-RBD-foldon-8*HIS纯化蛋白的浓度和体积
P101150-5 Concentration(mg/ml) Volume(ml)
NR-foldon-8*HIS 0.05 0.5
SDS-PAGE电泳与WB验证。A.1.0mm PAGE胶，上样量8ul，跑胶顺序：M.Molecularweightmarker.Me.Culture medium.FT.Flow through.W.Wash.E.Eluted fractions。B.电泳:将NTD-RBD-foldon-8*HIS纯化蛋白与上样缓冲液混合(NR-foldon-8*HIS纯化蛋白:5x上样缓冲液＝4:1)，煮沸5min，进行点样。首先100V恒压电泳，可以看到Marker逐渐变成一条细线。待Marker进入分离胶后，将电压调到300V继续电泳，直到蓝色的溴酚蓝条带到达胶的底部(约25min)。C.转膜，撬开玻璃板，小心取出凝胶。PVDF膜用甲醇活化30s后和滤纸剪成和胶块相同大小，在转膜液中浸透。从下往上依次为：滤纸-PVDF膜-凝胶-滤纸。注意各层之间尤其是胶和膜之间不能有气泡。将平皿中的转膜液全部倒进转膜盒中。20V恒压转移，50KDa蛋白需20min。分子量越大需时间越长。D.抗体孵育转膜后取出PVDF膜，可以看到Marker转移到膜上。用5％脱脂奶(1g脱脂奶粉加100ml PBST)封闭1小时，用PBST漂洗2x5min。一抗(anti-His Mab)用5％脱脂奶粉(1g脱脂奶粉，100ml TBS)稀释，放在小盒中孵育，4'C脱色摇床中反应2h。取出PVDF膜,PBST漂洗4×10min。二抗(羊抗鼠)也用5％脱脂奶粉稀释，孵育1小时。PBST漂洗4x 10min.均使用摇床震动。E.显色，ECL显色:每一块PBST膜，用A液1mL和B液10μL混合后滴在膜上，5min后在化学发光成像系统中拍照记录，如图3所示。
实施例7构建载体和蛋白表达
参照上述实施例，构建如下需要表达的目的片段，并表达纯化蛋白，如表7所示。
表7不同的目的片段
基因名称 构建方式 SEQ ID NO
RBD-HBsAg-6*HIS 全基因合成 45
NTD-HBsAg-6*HIS 全基因合成 46
RBD-foldon-6*HIS 全基因合成 47
NTD-foldon-6*HIS 全基因合成 48
NTD-RBD-foldon-8*HIS 全基因合成 49
S-foldon-8*HIS 全基因合成 50
RBD-P2-6*HIS 全基因合成 51
NTD-P2-6*HIS 全基因合成 52
S1-P2-8*HIS 全基因合成 53
RBD-P2-foldon-6*HIS 全基因合成 54
NTD-P2-foldon-6*HIS 全基因合成 55
S1-P2-foldon-6*HIS 全基因合成 56
RBD-ferritin LC-6*HIS 全基因合成 57
RBD-ferritin HC-FLAG 全基因合成 58
RBD194-HBsAg PCR克隆 59
NTD-ferritin HC核酸序列 PCR克隆 60
NTD-ferritin LC核酸序列 PCR克隆 61
NTD ferritin核酸序列 全基因合成 62
RBD ferritin核酸序列 全基因合成 63
实施例8疫苗组合物的制备
0.04mg/mL的RBD蛋白，0.04mg/mL的NTD蛋白；2％至15％(w/v)蔗糖；0.01％至0.05％(w/v)吐温80；和pH为5.0至7.0的5mM至25mM组氨酸缓冲液，分装到2ml管制瓶，每管0.5ml，置冻干机进行冷冻干燥。
实施例9疫苗组合物的制备
0.04mg/mL的RBD-P2蛋白，0.04mg/mL的NTD-P2蛋白；2％至15％(w/v)山梨糖醇；0.01％至0.05％(w/v)聚山梨酯20；和pH为5.5至7.0的5mM至20mM组氨酸缓冲液，分装到2ml管制瓶，每管0.5ml，置冻干机进行冷冻干燥。
实施例10疫苗组合物的制备
0.04mg/mL的RBD蛋白，0.04mg/mL的NTD-P2蛋白；2％至15％(w/v)蔗糖；0.01％至0.05％(w/v)吐温80；和pH为4.5至5.5的5mM至25m琥珀酸缓冲液，分装到2ml管制瓶，每管0.5ml，置冻干机进行冷冻干燥。
实施例11疫苗组合物的制备
0.04mg/mL的RBD-P2蛋白，0.04mg/mL的NTD蛋白；2％至15％(w/v)山梨糖醇；0.01％至0.05％(w/v)聚山梨酯20；和pH为5.5至7.0的5mM至20mM组氨酸缓冲液，分装到2ml管制瓶，每管0.5ml，置冻干机进行冷冻干燥。
实施例12疫苗组合物的制备
实施例8-11中任一项所述的免疫原性组合物，该组合物进一步包含氢氧化铝佐剂，浓度为1mg/mL。
实施例8-11中任一项所述的免疫原性组合物中加入CpG1018佐剂，浓度为6mg/mL，CpG佐剂(CpG由上海生工生物公司按CpG1018序列合成)。
实施例13疫苗组合物的制备
实施例8-11中任一项所述的免疫原性组合物，该组合物进一步包含佐剂，例如佐剂瓶为0.5ml，50μg的MPL，500μg氢氧化铝，150mM的NaCl，8mM的二水磷酸氢二钠，加注射用水至0.5ml。
实施例14疫苗组合物的制备
实施例8-11中任一项所述的免疫原性组合物，该组合物进一步包含佐剂，例如佐剂瓶为0.25ml，成份包括10.69mg的角鲨烯，11.86mg的α-生育酚，4.86mg的吐温80，3.53mg的NaCl，0.09mg的KCl，0.51mg的Na2HPO4，0.09mg的KH2PO4和注射用水。
实施例15疫苗组合物的制备
实施例8-11中任一项所述的免疫原性组合物，该组合物进一步包含佐剂，例如佐剂瓶为0.5ml，成份包括50μg的MPL，50μg的QS-21，1mg的DOPC二油酰磷脂酰胆碱，0.25mg的胆固醇，0.15mg的无水磷酸二钠，0.54mg的磷酸二氢钾，4.385mg的氯化钠，和注射用水。
实施例16疫苗组合物的制备
实施例8-11中任一项所述的免疫原性组合物，该组合物进一步包含佐剂，例如佐剂瓶为0.5ml，成份包括9.75mg角鲨烯、1.175mg司盘85、1.175mg吐温80、0.66mg二水合柠檬酸三钠和0.04mg一水合柠檬酸，和注射用水。
实施例17不同抗原与佐剂的小鼠免疫实验
抗原蛋白结合不同佐剂用于免疫小鼠，蛋白诱导的中和抗体水平通过ELISA测定确定。小鼠分组及免疫方案如表8所示。
表8小鼠分组表
Figure BDA0003317174860000551
其中的NTD蛋白序列为SEQ ID NO：20中1-291氨基酸，RBD的序列为SEQ ID NO：1中1-223氨基酸，Al(OH)3佐剂、CpG佐剂、CpG+Al(OH)3佐剂参照实施例12的浓度，AS01的组成参照实施例15，AS04的组成参照实施例13，小鼠免疫后28天后检测结果如表9所示。结果显示，RBD+NTD诱导产生中和抗体的水平更强。
表9小鼠免疫后28天后检测结果
Figure BDA0003317174860000552
Figure BDA0003317174860000561
实施例18不同抗原与佐剂的免疫原性评价实验
抗原蛋白与MF59佐剂共同用于免疫日本大耳朵白兔，蛋白诱导的中和抗体水平通过ELISA测定确定。日本大耳朵白兔分组及免疫方案如表10所示。
表10日本大耳白兔免疫分组表
Figure BDA0003317174860000562
NTD-P2的序列见SEQ ID NO：20，RBD-P2的序列参照SEQ ID NO：1，NTD-foldon的序列见SEQ ID NO：22，RBD-foldon的序列见SEQ ID NO：3，NTD-ferritin LC的序列见SEQ IDNO：23，RBD-ferritin的序列参照SEQ ID NO：5，NTD-HBsAg的序列参照SEQ ID NO：25，RBD-HBsAg的序列参照SEQ ID NO：6，佐剂MF59参照实施例16。
NTD-RBD-P2的序列参照SEQ ID NO：40序列，但C端无HIS标签，NTD-RBD-foldon的序列参照SEQ ID NO：41序列，但C端无HIS标签，NTD-RBD-P2-foldon的序列参照SEQ ID NO：42序列，但C端无HIS标签，NTD-RBD-ferritin的序列参照SEQ ID NO：43序列，NTD-RBD-HBsAg的序列参照SEQ ID NO：44序列。日本大耳朵白兔免疫28天后的检测结果如表11所示，说明融合蛋白具有免疫原性。
表11日本大耳白兔免疫28天后的检测结果
Figure BDA0003317174860000563
Figure BDA0003317174860000571
实施例19不同抗原与佐剂的免疫原性评价实验
抗原蛋白与不同佐剂共同用于免疫恒河猴，蛋白诱导的中和抗体水平通过ELISA测定确定。恒河猴分组及免疫方案如下，阳性对照为新冠的灭活苗。恒河猴免疫28天后的检测结果如表12所示。
表12恒河猴免疫结果
Figure BDA0003317174860000572
实施例20小鼠中重组新冠疫苗候选抗原诱导中和抗体产生的效果检测
以Wuhan-1序列为基础，选择NTD和RBD作为候选抗原。检测单独NTD、单独RBD、NTD和RBD共免疫、NTD-RBD融合蛋白(以下简称NR)，以及NTD-RBD-foldon融合蛋白(以下简称NR-foldon)的免疫原性，结果如表14所示。结果显示，NR-foldon抗原和BFA03佐剂联合免疫BALB/c小鼠后，能够显著有效诱导机体产生高滴度的中和抗体(基于SARS-CoV-2病毒株及VSV假病毒检测系统)和抗原特异性IgG抗体，其中，对武汉原型株以及D614G、Gamma突变株的中和效果显著优于其他抗原。
表13 BALB/c小鼠中重组新冠疫苗候选抗原实验设计概况
Figure BDA0003317174860000581
表14 BALB/c小鼠中重组新冠疫苗候选抗原的筛选结果
Figure BDA0003317174860000582
备注：1.基于SARS-CoV-2毒株的新冠病毒中和抗体检测，下同。
2.假病毒类型：原型株(Wuhan-1)、主要流行毒株(D614G)；VOC变异毒株：英国突变株(Alpha，B.1.1.7)、南非突变株(Beta，B.1.351)、巴西突变株(Gamma，P.1)、印度突变株(Delta，B.1.617.2)；VOI变异毒株：秘鲁突变株(Lambda，C.37)，下同。
实施例21不同佐剂的免疫效果检测
选择Al(OH)3、BFA01、BFA02、BFA03、BFA04、CpG/Al(OH)3与NR-foldon抗原配伍免疫BALB/c小鼠，检测血清中中和抗体及抗原特异性IgG抗体。研究结果表明，在候选佐剂中，BFA03佐剂的免疫效果最佳且显著优于传统铝佐剂(氢氧化铝佐剂)，也优于以铝盐佐剂为基础的复合佐剂系统。
表15 BALB/c小鼠中重组新冠疫苗候选佐剂实验设计概况
Figure BDA0003317174860000583
Figure BDA0003317174860000591
备注：1.人用剂量(0.5ml)佐剂中主要成分的含量，BALB/c小鼠中的免疫剂量为1/5HD。
表16 BALB/c小鼠中重组新冠疫苗候选佐剂的实验结果
Figure BDA0003317174860000592
实施例22小鼠实验中不同剂量的免疫效果检测
将1/10及1/5人用剂量(即4μg和8μg)NR-foldon抗原，分别与1/5或1/10人用剂量BFA03佐剂联合免疫BALB/c小鼠。结果显示，在抗原剂量固定的前提下，1/10HD佐剂免疫产生中和抗体滴度低于1/5HD佐剂，各组不具有统计学差异，在一定程度上认为抗原和佐剂需要配比合适时可以诱导更强的免疫反应。
表17 BALB/c小鼠中重组新冠疫苗剂量考察结果
Figure BDA0003317174860000593
Figure BDA0003317174860000601
实施例23兔子实验中不同剂量的免疫效果检测
以1人用剂量BFA03佐剂(0.5ml)分别与20μg和40μg两个不同剂量的NR-foldon抗原联合免疫日本大耳白兔，结果如表18所示，40μg抗原免疫产生的抗体滴度较高。
表18不同剂量佐剂免疫日本大耳白兔结果
Figure BDA0003317174860000602
选择1HD(0.5ml)、1/2HD、1/4HD BFA03佐剂，分别与1HD NR-foldon抗原联合免疫日本大耳白兔，结果如表19所示，1HD的佐剂与1HD抗原免疫诱导机体产生的中和抗体及结合抗体水平最高，降低佐剂剂量则会降低免疫效果。
表19不同剂量佐剂免疫日本大耳白兔结果
Figure BDA0003317174860000603
实施例24抗原佐剂组合对新冠病毒不同变异株的中和作用检测
ReCOV疫苗(NR-foldon抗原/BFA03佐剂)免疫不同种属动物产生的中和抗体滴度GMT结果如下，由表可知，所确定的抗原佐剂组合对SARS-CoV-2病毒和不同的变异株均具有较好的中和作用。
表20不同种属动物产生的中和抗体滴度结果
Figure BDA0003317174860000604
Figure BDA0003317174860000611
使用Gamma突变株S蛋白NTD及RBD和Beta突变株S蛋白NTD及RBD的效果检测
实施例25构建NTD-RBD-foldon-6×His(Gamma突变株)和NTD-RBD-foldon-6×His(Beta突变株)重组表达质粒
如SEQ ID NO：85所示的NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)添加信号肽MGWSCIILFLVATATGVHS(SEQ ID NO:91)和6×His；如SEQ ID NO:79所示的NTD-RBD-foldon(Beta突变株)添加信号肽MGWSCIILFLVATATGVHS(SEQ ID NO:91)和6×His，全长氨基酸序列由无锡药明生物技术股份有限公司进行密码子优化，并通过PCR进行全基因合成得到NTD-RBD-foldon-6×His(Gamma突变株)和NTD-RBD-foldon-6×His(Beta突变株)的DNA片段。经凝胶纯化后，将纯化后的DNA片段重组到目的载体pcDNA3.1(+)中，得到NTD-RBD-foldon-6×His(Gamma突变株)和NTD-RBD-foldon-6×His(Beta突变株)重组表达质粒。并通过Sanger测序验证，序列100％正确，测序结果见图1和图7。
转化宿主菌：(1)将浓度在100ng/μL的NTD-RBD-foldon-6×His(Gamma突变株)或NTD-RBD-foldon-6×His(Beta突变株)重组表达质粒吸取1～3μL加入到100μL的大肠杆菌E.coli Top10感受态细胞里，轻轻晃动旋转以混匀，冰上放置3分钟。(2)42℃水浴90s不要摇动。(3)冰浴中放置3分钟左右。(4)每管中加入500～800μL 37℃预温LB培养基，37℃摇床200rpm温和振荡40分钟。
重组表达质粒抽提并测序：(1)制备含100μg/mL氨苄青霉素的琼脂平板。(2)取100μL菌液培养后用无菌玻璃涂布器轻轻划LB琼脂平板(含100μg/mL氨苄青霉素)，将平板置于37℃培养15分钟。(3)倒置平板于37℃培养12～16小时可出现菌落。(4)从平板上挑取一个单克隆接种至300mL LB培养基中扩大培养，采用NucleoBond Xtra Maxi EF试剂盒按照说明书进行质粒大量制备。并测序验证目的基因，测序结果与设计的基因组序列一致。
实施例26细胞转染及蛋白纯化
细胞转染：
在所有细胞操作过程中，温和地旋转混合宿主细胞，避免剧烈的混合/移液。继代培养和扩增CHO细胞(来自Thermo公司的ExpiCHO)直到细胞密度达到4×106～6×106个/mL。转染的第-1天：调整细胞密度到3×106～4×106个/mL，并允许细胞过夜生长。第0天：转染细胞，测定活细胞密度和存活率，细胞的密度应该达7×106～10×106个/mL，存活率达95～99％进行转染。新鲜的细胞表达培养基，预热至37℃，将细胞稀释至最终密度为6×106个/mL，在50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。使用OptiPROTMSFM培养基制备转染试剂和NTD-RBD-foldon-6×His(Gamma突变株/Beta突变株)重组表达质粒复合物(4℃)，例：1mLCHO细胞准备40μL OptiPROTMSFM添加0.8μg NTD-RBD-foldon-6×His(Gamma突变株/Beta突变株)重组表达质粒，混匀放置5分钟；准备40μL OptiPROTMSFM添加3μL ExpiFectamineTMCHO试剂混匀放置5分钟，室温下1～5分钟，然后将溶液缓慢转移至摇瓶摇晃，在添加过程中轻轻摇动摇瓶。将细胞置于50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。转染后18-22小时，添加Enhancer和ExpiCHO Feed，执行标准实验方案。例：1mL细胞添加6μL Enhancer和0.24mL ExpiCHO Feed，将细胞置于50mm振幅培养箱90rpm进行37℃培养，8％CO2。转染后6天收集，进行后续纯化。
蛋白纯化：
采用固定化金属离子亲和层析(IMAC)和尺寸排阻层析(SEC)相结合的方法进行纯化。采用装载NiSO4的Hi Trap 5ml Chelating HP层析柱(美国GE公司)。鳌合层析介质预处理后装柱，分别用50mmol/L EDTA、0.2mol/L NaOH、超纯水洗柱。5倍以上的裂解缓冲液平衡后，细胞裂解上清直接上柱，以溶液A(20mmol/L PB，pH7.4，0.15mol/L NaCl)与溶液B(20mmol/L PB，pH7.4，0.15mol/L NaCl，0.5mol/L咪唑)为流动相进行梯度洗脱(溶液B的浓度从4％(体积)增大至100％(体积))。收集目标组分，继续进行SEC分离。采用HiLoad 26/60Superdex-200 pre-grade凝胶柱(美国GE公司)。以溶液C(20mmol/L PB，pH7.4，0.15mol/LNaCl)为流动相洗脱1个柱体积，洗脱速率为2.5mL/min。SEC纯化后的层析图谱见图5和图8。
得到NTD-RBD-foldon-6×His(Gamma突变株/Beta突变株)纯化蛋白，蛋白纯化结果如表21所示，经纯化后的目的蛋白纯度可达93.6％(Gamma突变株)95％(Beta突变株)。
表21蛋白纯化结果
Figure BDA0003317174860000631
SDS-PAGE电泳和Western blot验证：
A.1.0mm PAGE胶，上样量8μL，跑胶顺序：M.Molecular weightmarker.Me.Culture medium.FT.Flow through.W.Wash.E.Eluted fractions。B.电泳：将NTD-RBD-foldon(Gamma突变株/Beta突变株)纯化蛋白与上样缓冲液混合(NTD-RBD-foldon(Gamma突变株/Beta突变株)纯化蛋白:5×上样缓冲液＝4:1)，煮沸5分钟，进行点样。首先100V恒压电泳，可以看到Marker逐渐变成一条细线。待Marker进入分离胶后，将电压调到300V继续电泳，直到蓝色的溴酚蓝条带到达胶的底部(约25分钟)。C.转膜，撬开玻璃板，小心取出凝胶。PVDF膜用甲醇活化30s后和滤纸剪成和胶块相同大小，在转膜液中浸透。从下往上依次为：滤纸-PVDF膜-凝胶-滤纸。注意各层之间尤其是胶和膜之间不能有气泡。将平皿中的转膜液全部倒进转膜盒中。20V恒压转移，50KDa蛋白需20分钟。分子量越大需时间越长。D.抗体孵育，转膜后取出PVDF膜，可以看到Marker转移到膜上。用5％脱脂奶(1g脱脂奶粉加100mLPBST)封闭1小时，用PBST漂洗2×5min。一抗(anti-His Mab)用5％脱脂奶粉(1g脱脂奶粉，100mL TBS)稀释，放在小盒中孵育，4℃脱色摇床中反应2h。取出PVDF膜，PBST漂洗4×10min。二抗(羊抗鼠)也用5％脱脂奶粉稀释，孵育1小时。PBST漂洗4×10min。均使用摇床震动。E.显色，ECL显色：每一块PBST膜，用A液1mL和B液10μL混合后滴在膜上，5分钟后在化学发光成像系统中拍照记录，如图6和图9所示。从SDS-PAGE电泳图和Western blot的结果图可知，经SEC分离后NTD-RBD-foldon(Beta突变株)溶液的电泳泳道上最大的条带是NTD-RBD-foldon(Beta突变株)，NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)溶液的电泳泳道上最大的条带是NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)，且其主要以三聚体的形式存在，Western blot结果可见对应的目的条带。
实施例27构建载体和蛋白表达
参照上述实施例，构建如表22所示需要表达的目的片段，并表达纯化蛋白。
表22不同的目的片段
Figure BDA0003317174860000632
Figure BDA0003317174860000641
实施例28免疫原性组合物的制备
50μg的NTD-RBD-foldon(Gamma突变株/Beta突变株)纯化蛋白，1％(w/v)蔗糖；2％(w/v)甘氨酸；0.02％(w/v)吐温80；和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，分装到2mL管制瓶，每管0.5mL，置冻干机进行冷冻干燥。
50μg的NTD-RBD-foldon(Gamma突变株/Beta突变株)纯化蛋白，50μg的RBD-foldon(Beta突变株/Gamma突变株)纯化蛋白；1％(w/v)蔗糖；2％(w/v)甘氨酸；0.02％(w/v)吐温80；和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，分装到2mL管制瓶，每管0.5mL，置冻干机进行冷冻干燥。
50μg的NTD-RBD-foldon(Gamma突变株/Beta突变株)纯化蛋白，50μg的NTD-foldon(Beta突变株/Gamma突变株)纯化蛋白；1％(w/v)蔗糖；2％(w/v)甘氨酸；0.02％(w/v)吐温80；和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，分装到2mL管制瓶，每管0.5mL，置冻干机进行冷冻干燥。
50μg的NTD-RBD-foldon(Gamma突变株/Beta突变株)纯化蛋白，50μg的NTD-RBD-foldon(Wuhan-1)纯化蛋白；1％(w/v)蔗糖；2％(w/v)甘氨酸；0.02％(w/v)吐温80；和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，分装到2mL管制瓶，每管0.5mL，置冻干机进行冷冻干燥。
50μg的NTD-RBD-foldon(Gamma突变株/Beta突变株)纯化蛋白；135μg的HA蛋白(45μg的H1N1的HA蛋白，45μg的H3N2的HA蛋白，45μg的B/Washington/02/2019的HA蛋白)；1％(w/v)蔗糖；2％(w/v)甘氨酸；0.02％(w/v)吐温80；和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，分装到2mL管制瓶，每管0.5mL，置冻干机进行冷冻干燥。选用的HA蛋白如表23所示。
50μg的NTD-RBD-foldon(Gamma突变株/Beta突变株)纯化蛋白；180μg的HA蛋白(45μg的H1N1的HA蛋白，45μg的H3N2的HA蛋白，45μg的B/Washington/02/2019的HA蛋白，45μg的B/Phuket/3073/2013的HA蛋白)；1％(w/v)蔗糖；2％(w/v)甘氨酸；0.02％(w/v)吐温80；和pH7.5的10mM的PB缓冲液(Na2HPO4，NaH2PO4)，分装到2mL管制瓶，每管0.5mL，置冻干机进行冷冻干燥。选用的HA蛋白如表23所示。
表23联用的流感毒株
Figure BDA0003317174860000651
实施例29疫苗的制备
前述任一项实施例所述的免疫原性组合物，该组合物进一步包含氢氧化铝佐剂，浓度为1mg/mL。
前述任一项实施例所述的免疫原性组合物，进一步包含佐剂AS03，佐剂瓶为0.5mL，成分包括10.69mg的角鲨烯、11.86mg的α-生育酚、4.86mg的聚山梨酯80、3.53mg的氯化钠、0.09mg的氯化钾、0.51mg的磷酸氢二钠、0.09mg的磷酸二氢钾和注射用水。
前述任一项实施例所述的免疫原性组合物，进一步包含佐剂MF59，佐剂瓶为0.5mL，成分包括4.5％的角鲨烯，0.5％Tween 80，0.5％Span85和注射用水。
实施例30疫苗的小鼠免疫实验(Beta突变株)
分别选用实施例28所述的免疫原性组合物结合AS03佐剂，按照2/25人用剂量进行小鼠免疫，以NTD-RBD-foldon(Wuhan-1)蛋白制备的免疫原性组合物结合AS03佐剂作为对照，诱导的中和抗体水平通过基于VSV(水疱性口炎病毒)系统的新冠假病毒中和抗体检测方法测定。小鼠分组及免疫方案如表24所示。
表24小鼠免疫分组表
Figure BDA0003317174860000652
Figure BDA0003317174860000661
AS03佐剂的配制参考实施例29，小鼠免疫第28天后，通过眼眶静脉采血的方式获得血清，利用基于VSV的假病毒检测系统检测中和抗体滴度，分别采用新冠病毒主要流行株(D614G)假病毒、新冠病毒Alpha突变株(B.1.1.7)假病毒、新冠病毒Beta突变株(501Y.V2)假病毒、新冠病毒Gamma突变株(501Y.V3)假病毒进行中和实验，考察疫苗对不同新冠病毒变异株的中和效果，检测结果如表25所示。结果显示，以NTD-RBD-foldon(Wuhan-1)为抗原结合AS03佐剂诱导产生的中和抗体对主要流行株假病毒和Gamma突变株假病毒的中和效果较好(GMT远高于10000)，而对于Alpha突变株假病毒和Beta突变株假病毒的中和效果较差(GMT远低于10000)；以NTD-RBD-foldon(Beta突变株)为抗原结合AS03佐剂诱导产生的中和抗体对Beta突变株假病毒和Gamma突变株假病毒均有较好的中和效果(GMT远高于10000)，更加令人意外的是，尤其是对于Gamma突变株假病毒的中和抗体GMT高达20944，但其对主要流行株假病毒和Alpha突变株假病毒的中和效果稍弱。可见，以NTD-RBD-foldon(Beta突变株)为免疫原的单价疫苗对4种新冠病毒突变株均有良好的免疫效果，其尤其可作为一种新的应对SARS-CoV-2突变株(尤其是南非和Gamma突变株)的COVID-19候选疫苗，更高效地诱导产生保护性中和抗体对抗新冠突变株的免疫逃逸。
而以NTD-RBD-foldon(Beta突变株)联合NTD-RBD-foldon(Wuhan-1)为免疫原的二价疫苗相比于NTD-RBD-foldon(Beta突变株)单价疫苗和NTD-RBD-foldon(Wuhan-1)单价疫苗，诱导产生的中和抗体水平整体提升，既增强了NTD-RBD-foldon(Wuhan-1)单价疫苗对Beta突变株假病毒的作用效果，又增强了NTD-RBD-foldon(Beta突变株)单价疫苗对主要流行株假病毒和英国流行株假病毒的作用效果。此二价疫苗具有作用范围更广，作用效果更强的特点，更适合作为一种应对COVID-19的候选疫苗发挥作用。
表25小鼠免疫28天后检测结果
Figure BDA0003317174860000662
Figure BDA0003317174860000671
实施例31疫苗的小鼠免疫实验(Gamma突变株)
选用实施例28所述的免疫原性组合物结合AS03佐剂，按照2/25人用剂量进行小鼠免疫，诱导的中和抗体水平通过基于VSV(水疱性口炎病毒)系统的新冠假病毒中和抗体检测方法测定。小鼠分组及免疫方案如表26所示。
表26小鼠免疫分组表
Figure BDA0003317174860000672
AS03佐剂的配制参考实施例29，小鼠免疫第28天后，通过眼眶静脉采血的方式获得血清，利用基于VSV的假病毒检测系统检测中和抗体滴度，分别采用新冠病毒主要流行株(D614G)假病毒、新冠病毒Alpha突变株(B.1.1.7)假病毒、新冠病毒Beta突变株(501Y.V2)假病毒、新冠病毒Gamma突变株(501Y.V3)假病毒进行中和实验，考察疫苗对不同新冠病毒变异株的中和效果，检测结果如表27所示。结果显示，以NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)为抗原结合AS03佐剂免疫小鼠诱导产生中和Beta突变株(501Y.V2)假病毒的抗体水平最高，诱导产生中和Gamma突变株(501Y.V3)假病毒的抗体水平其次，而诱导产生中和主要流行株(D614G)假病毒和Alpha突变株(B.1.1.7)假病毒的抗体水平较低。可见，以NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)为免疫原的单价疫苗对4种新冠病毒突变株均有效，其可作为一种新的应对SARS-CoV-2突变株(尤其是南非和Gamma突变株)的COVID-19候选疫苗，更高效地诱导产生保护性中和抗体对抗新冠突变株的免疫逃逸。
表27小鼠免疫28天后检测结果
Figure BDA0003317174860000681
由以上结果可确定，若是按照上述方法制备NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)联合NTD-RBD-foldon(Beta突变株)的二价疫苗，或NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)联合NTD-RBD-foldon(Wuhan-1)的二价疫苗，或NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)联合NTD-RBD-foldon(Beta突变株)和NTD-RBD-foldon(Wuhan-1)的三价疫苗，或NTD-RBD-foldon(Gamma突变株)联合NTD-RBD-foldon(Beta突变株)、NTD-RBD-foldon(Wuhan-1)和流感血凝素HA的多价疫苗等多价联合疫苗可能会产生更高的中和抗体滴度。
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-P2
<400> 1
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile
225 230 235 240
Thr Glu Leu
<210> 2
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-RBD
<400> 2
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro
20 25 30
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg
35 40 45
Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val
50 55 60
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys
65 70 75 80
Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn
85 90 95
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile
100 105 110
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
115 120 125
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
130 135 140
Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys
145 150 155 160
Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln
165 170 175
Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe
180 185 190
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln
195 200 205
Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
210 215 220
Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys
225 230 235 240
Val Asn Phe
<210> 3
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-foldon
<400> 3
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr
225 230 235 240
Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly
245 250 255
<210> 4
<211> 411
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-ferritin LC
<400> 4
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Glu Tyr Gly Ser His Gly Asn Val Ala Thr Glu Leu
225 230 235 240
Gln Ala Tyr Ala Lys Leu His Leu Glu Arg Ser Tyr Asp Tyr Leu Leu
245 250 255
Ser Ala Ala Tyr Phe Asn Asn Tyr Gln Thr Asn Arg Ala Gly Phe Ser
260 265 270
Lys Leu Phe Lys Lys Leu Ser Asp Glu Ala Trp Ser Lys Thr Ile Asp
275 280 285
Ile Ile Lys His Val Thr Lys Arg Gly Asp Lys Met Asn Phe Asp Gln
290 295 300
His Ser Thr Met Lys Thr Glu Arg Lys Asn Tyr Thr Ala Glu Asn His
305 310 315 320
Glu Leu Glu Ala Leu Ala Lys Ala Leu Asp Thr Gln Lys Glu Leu Ala
325 330 335
Glu Arg Ala Phe Tyr Ile His Arg Glu Ala Thr Arg Asn Ser Gln His
340 345 350
Leu His Asp Pro Glu Ile Ala Gln Tyr Leu Glu Glu Glu Phe Ile Glu
355 360 365
Asp His Ala Glu Lys Ile Arg Thr Leu Ala Gly His Thr Ser Asp Leu
370 375 380
Lys Lys Phe Ile Thr Ala Asn Asn Gly His Asp Leu Ser Leu Ala Leu
385 390 395 400
Tyr Val Phe Asp Glu Tyr Leu Gln Lys Thr Val
405 410
<210> 5
<211> 409
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-ferritin HC
<400> 5
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Arg Ser Cys Arg Asn Ser Met Arg Gln Gln Ile Gln
225 230 235 240
Met Glu Val Gly Ala Ser Leu Gln Tyr Leu Ala Met Gly Ala His Phe
245 250 255
Ser Lys Asp Val Val Asn Arg Pro Gly Phe Ala Gln Leu Phe Phe Asp
260 265 270
Ala Ala Ser Glu Glu Arg Glu His Ala Met Lys Leu Ile Glu Tyr Leu
275 280 285
Leu Met Arg Gly Glu Leu Thr Asn Asp Val Ser Ser Leu Leu Gln Val
290 295 300
Arg Pro Pro Thr Arg Ser Ser Trp Lys Gly Gly Val Glu Ala Leu Glu
305 310 315 320
His Ala Leu Ser Met Glu Ser Asp Val Thr Lys Ser Ile Arg Asn Val
325 330 335
Ile Lys Ala Cys Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asn Asp Tyr His Leu Val
340 345 350
Asp Tyr Leu Thr Gly Asp Phe Leu Glu Glu Gln Tyr Lys Gly Gln Arg
355 360 365
Asp Leu Ala Gly Lys Ala Ser Thr Leu Lys Lys Leu Met Asp Arg His
370 375 380
Glu Ala Leu Gly Glu Phe Ile Phe Asp Lys Lys Leu Leu Gly Ile Asp
385 390 395 400
Val Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
405
<210> 6
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-HBsAg
<400> 6
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu
225 230 235 240
Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile
245 250 255
Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly
260 265 270
Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser Asn His
275 280 285
Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Met Cys
290 295 300
Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile
305 310 315 320
Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro
325 330 335
Leu Ile Pro Gly Ser Thr Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys
340 345 350
Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr
355 360 365
Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp
370 375 380
Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp
385 390 395 400
Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro
405 410 415
Thr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser
420 425 430
Leu Tyr Ser Ile Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe
435 440 445
Cys Leu Trp Val Tyr Ile
450
<210> 7
<211> 275
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-P2-foldon
<400> 7
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile
225 230 235 240
Thr Glu Leu Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp
245 250 255
Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr
260 265 270
Phe Leu Gly
275
<210> 8
<211> 275
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-RBD-foldon
<400> 8
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro
20 25 30
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg
35 40 45
Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val
50 55 60
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys
65 70 75 80
Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn
85 90 95
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile
100 105 110
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
115 120 125
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
130 135 140
Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys
145 150 155 160
Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln
165 170 175
Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe
180 185 190
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln
195 200 205
Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
210 215 220
Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys
225 230 235 240
Val Asn Phe Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp
245 250 255
Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr
260 265 270
Phe Leu Gly
275
<210> 9
<211> 275
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-foldon-P2
<400> 9
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr
225 230 235 240
Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile
260 265 270
Thr Glu Leu
275
<210> 10
<211> 431
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-P2-ferritin LC
<400> 10
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile
225 230 235 240
Thr Glu Leu Gly Ser Gly Ser Gly Glu Tyr Gly Ser His Gly Asn Val
245 250 255
Ala Thr Glu Leu Gln Ala Tyr Ala Lys Leu His Leu Glu Arg Ser Tyr
260 265 270
Asp Tyr Leu Leu Ser Ala Ala Tyr Phe Asn Asn Tyr Gln Thr Asn Arg
275 280 285
Ala Gly Phe Ser Lys Leu Phe Lys Lys Leu Ser Asp Glu Ala Trp Ser
290 295 300
Lys Thr Ile Asp Ile Ile Lys His Val Thr Lys Arg Gly Asp Lys Met
305 310 315 320
Asn Phe Asp Gln His Ser Thr Met Lys Thr Glu Arg Lys Asn Tyr Thr
325 330 335
Ala Glu Asn His Glu Leu Glu Ala Leu Ala Lys Ala Leu Asp Thr Gln
340 345 350
Lys Glu Leu Ala Glu Arg Ala Phe Tyr Ile His Arg Glu Ala Thr Arg
355 360 365
Asn Ser Gln His Leu His Asp Pro Glu Ile Ala Gln Tyr Leu Glu Glu
370 375 380
Glu Phe Ile Glu Asp His Ala Glu Lys Ile Arg Thr Leu Ala Gly His
385 390 395 400
Thr Ser Asp Leu Lys Lys Phe Ile Thr Ala Asn Asn Gly His Asp Leu
405 410 415
Ser Leu Ala Leu Tyr Val Phe Asp Glu Tyr Leu Gln Lys Thr Val
420 425 430
<210> 11
<211> 429
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-P2-ferritin HC
<400> 11
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile
225 230 235 240
Thr Glu Leu Gly Ser Gly Ser Gly Arg Ser Cys Arg Asn Ser Met Arg
245 250 255
Gln Gln Ile Gln Met Glu Val Gly Ala Ser Leu Gln Tyr Leu Ala Met
260 265 270
Gly Ala His Phe Ser Lys Asp Val Val Asn Arg Pro Gly Phe Ala Gln
275 280 285
Leu Phe Phe Asp Ala Ala Ser Glu Glu Arg Glu His Ala Met Lys Leu
290 295 300
Ile Glu Tyr Leu Leu Met Arg Gly Glu Leu Thr Asn Asp Val Ser Ser
305 310 315 320
Leu Leu Gln Val Arg Pro Pro Thr Arg Ser Ser Trp Lys Gly Gly Val
325 330 335
Glu Ala Leu Glu His Ala Leu Ser Met Glu Ser Asp Val Thr Lys Ser
340 345 350
Ile Arg Asn Val Ile Lys Ala Cys Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asn Asp
355 360 365
Tyr His Leu Val Asp Tyr Leu Thr Gly Asp Phe Leu Glu Glu Gln Tyr
370 375 380
Lys Gly Gln Arg Asp Leu Ala Gly Lys Ala Ser Thr Leu Lys Lys Leu
385 390 395 400
Met Asp Arg His Glu Ala Leu Gly Glu Phe Ile Phe Asp Lys Lys Leu
405 410 415
Leu Gly Ile Asp Val Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
420 425
<210> 12
<211> 431
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-RBD-ferritin LC
<400> 12
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro
20 25 30
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg
35 40 45
Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val
50 55 60
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys
65 70 75 80
Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn
85 90 95
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile
100 105 110
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
115 120 125
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
130 135 140
Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys
145 150 155 160
Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln
165 170 175
Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe
180 185 190
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln
195 200 205
Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
210 215 220
Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys
225 230 235 240
Val Asn Phe Gly Ser Gly Ser Gly Glu Tyr Gly Ser His Gly Asn Val
245 250 255
Ala Thr Glu Leu Gln Ala Tyr Ala Lys Leu His Leu Glu Arg Ser Tyr
260 265 270
Asp Tyr Leu Leu Ser Ala Ala Tyr Phe Asn Asn Tyr Gln Thr Asn Arg
275 280 285
Ala Gly Phe Ser Lys Leu Phe Lys Lys Leu Ser Asp Glu Ala Trp Ser
290 295 300
Lys Thr Ile Asp Ile Ile Lys His Val Thr Lys Arg Gly Asp Lys Met
305 310 315 320
Asn Phe Asp Gln His Ser Thr Met Lys Thr Glu Arg Lys Asn Tyr Thr
325 330 335
Ala Glu Asn His Glu Leu Glu Ala Leu Ala Lys Ala Leu Asp Thr Gln
340 345 350
Lys Glu Leu Ala Glu Arg Ala Phe Tyr Ile His Arg Glu Ala Thr Arg
355 360 365
Asn Ser Gln His Leu His Asp Pro Glu Ile Ala Gln Tyr Leu Glu Glu
370 375 380
Glu Phe Ile Glu Asp His Ala Glu Lys Ile Arg Thr Leu Ala Gly His
385 390 395 400
Thr Ser Asp Leu Lys Lys Phe Ile Thr Ala Asn Asn Gly His Asp Leu
405 410 415
Ser Leu Ala Leu Tyr Val Phe Asp Glu Tyr Leu Gln Lys Thr Val
420 425 430
<210> 13
<211> 429
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-RBD-ferritin HC
<400> 13
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro
20 25 30
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg
35 40 45
Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val
50 55 60
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys
65 70 75 80
Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn
85 90 95
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile
100 105 110
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
115 120 125
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
130 135 140
Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys
145 150 155 160
Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln
165 170 175
Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe
180 185 190
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln
195 200 205
Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
210 215 220
Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys
225 230 235 240
Val Asn Phe Gly Ser Gly Ser Gly Arg Ser Cys Arg Asn Ser Met Arg
245 250 255
Gln Gln Ile Gln Met Glu Val Gly Ala Ser Leu Gln Tyr Leu Ala Met
260 265 270
Gly Ala His Phe Ser Lys Asp Val Val Asn Arg Pro Gly Phe Ala Gln
275 280 285
Leu Phe Phe Asp Ala Ala Ser Glu Glu Arg Glu His Ala Met Lys Leu
290 295 300
Ile Glu Tyr Leu Leu Met Arg Gly Glu Leu Thr Asn Asp Val Ser Ser
305 310 315 320
Leu Leu Gln Val Arg Pro Pro Thr Arg Ser Ser Trp Lys Gly Gly Val
325 330 335
Glu Ala Leu Glu His Ala Leu Ser Met Glu Ser Asp Val Thr Lys Ser
340 345 350
Ile Arg Asn Val Ile Lys Ala Cys Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asn Asp
355 360 365
Tyr His Leu Val Asp Tyr Leu Thr Gly Asp Phe Leu Glu Glu Gln Tyr
370 375 380
Lys Gly Gln Arg Asp Leu Ala Gly Lys Ala Ser Thr Leu Lys Lys Leu
385 390 395 400
Met Asp Arg His Glu Ala Leu Gly Glu Phe Ile Phe Asp Lys Lys Leu
405 410 415
Leu Gly Ile Asp Val Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
420 425
<210> 14
<211> 411
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-RBD-ferritin
<400> 14
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro
20 25 30
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg
35 40 45
Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val
50 55 60
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys
65 70 75 80
Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn
85 90 95
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile
100 105 110
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
115 120 125
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
130 135 140
Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys
145 150 155 160
Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln
165 170 175
Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe
180 185 190
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln
195 200 205
Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
210 215 220
Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys
225 230 235 240
Val Asn Phe Gly Ser Gly Ser Gly Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu
245 250 255
Gln Val Asn Lys Glu Met Asn Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser
260 265 270
Ser Trp Cys Tyr Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe
275 280 285
Asp His Ala Ala Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe
290 295 300
Leu Asn Glu Asn Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser Ala Pro
305 310 315 320
Glu His Lys Phe Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr Glu
325 330 335
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340 345 350
Ile Lys Ser Lys Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr Val
355 360 365
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370 375 380
Ile Glu Leu Ile Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln
385 390 395 400
Tyr Val Lys Gly Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser
405 410
<210> 15
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-P2-HBsAg
<400> 15
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile
225 230 235 240
Thr Glu Leu Gly Ser Gly Ser Gly Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe
245 250 255
Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg
260 265 270
Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn
275 280 285
Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro
290 295 300
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305 310 315 320
Arg Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu
325 330 335
Leu Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu
340 345 350
Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly Ser Thr Thr Thr Ser Thr Gly Pro
355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val
405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
Trp Gly Pro Ser Leu Tyr Ser Ile Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu
450 455 460
Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile
465 470
<210> 16
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-RBD-HBsAg
<400> 16
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro
20 25 30
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg
35 40 45
Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val
50 55 60
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys
65 70 75 80
Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn
85 90 95
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile
100 105 110
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
115 120 125
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
130 135 140
Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys
145 150 155 160
Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln
165 170 175
Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe
180 185 190
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln
195 200 205
Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
210 215 220
Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys
225 230 235 240
Val Asn Phe Gly Ser Gly Ser Gly Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe
245 250 255
Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg
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275 280 285
Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro
290 295 300
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305 310 315 320
Arg Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu
325 330 335
Leu Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu
340 345 350
Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly Ser Thr Thr Thr Ser Thr Gly Pro
355 360 365
Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser Met Phe Pro Ser
370 375 380
Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile
385 390 395 400
Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val
405 410 415
Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val
420 425 430
Gly Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr
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Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile
465 470
<210> 17
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-HBsAg-P2
<400> 17
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
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195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu
225 230 235 240
Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile
245 250 255
Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly
260 265 270
Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser Asn His
275 280 285
Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Met Cys
290 295 300
Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile
305 310 315 320
Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro
325 330 335
Leu Ile Pro Gly Ser Thr Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys
340 345 350
Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr
355 360 365
Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp
370 375 380
Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp
385 390 395 400
Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro
405 410 415
Thr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser
420 425 430
Leu Tyr Ser Ile Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe
435 440 445
Cys Leu Trp Val Tyr Ile Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala
450 455 460
Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
465 470
<210> 18
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD 319-541
<400> 18
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
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195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
210 215 220
<210> 19
<211> 194
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD 331-524
<400> 19
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
100 105 110
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Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
180 185 190
Thr Val
<210> 20
<211> 311
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-P2
<400> 20
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys
290 295 300
Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
305 310
<210> 21
<211> 311
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-NTD
<400> 21
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro
20 25 30
Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys
35 40 45
Val Phe Arg Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro
50 55 60
Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr
65 70 75 80
Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly
85 90 95
Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile
100 105 110
Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn
115 120 125
Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn
130 135 140
Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met
145 150 155 160
Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu
165 170 175
Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn
180 185 190
Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe
195 200 205
Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro
210 215 220
Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile
225 230 235 240
Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu
245 250 255
Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr
260 265 270
Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu
275 280 285
Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser
290 295 300
Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
305 310
<210> 22
<211> 323
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-foldon
<400> 22
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp
290 295 300
Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr
305 310 315 320
Phe Leu Gly
<210> 23
<211> 478
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-ferritin LC
<400> 23
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Glu Tyr Gly Ser His Gly Asn Val Ala
290 295 300
Thr Glu Leu Gln Ala Tyr Ala Lys Leu His Leu Glu Arg Ser Tyr Asp
305 310 315 320
Tyr Leu Leu Ser Ala Ala Tyr Phe Asn Asn Tyr Gln Thr Asn Arg Ala
325 330 335
Gly Phe Ser Lys Leu Phe Lys Lys Leu Ser Asp Glu Ala Trp Ser Lys
340 345 350
Thr Ile Asp Ile Ile Lys His Val Thr Lys Arg Gly Asp Lys Met Asn
355 360 365
Phe Asp Gln His Ser Thr Met Lys Thr Glu Arg Lys Asn Tyr Thr Ala
370 375 380
Glu Asn His Glu Leu Glu Ala Leu Ala Lys Ala Leu Asp Thr Gln Lys
385 390 395 400
Glu Leu Ala Glu Arg Ala Phe Tyr Ile His Arg Glu Ala Thr Arg Asn
405 410 415
Ser Gln His Leu His Asp Pro Glu Ile Ala Gln Tyr Leu Glu Glu Glu
420 425 430
Phe Ile Glu Asp His Ala Glu Lys Ile Arg Thr Leu Ala Gly His Thr
435 440 445
Ser Asp Leu Lys Lys Phe Ile Thr Ala Asn Asn Gly His Asp Leu Ser
450 455 460
Leu Ala Leu Tyr Val Phe Asp Glu Tyr Leu Gln Lys Thr Val
465 470 475
<210> 24
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-ferritin HC
<400> 24
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Arg Ser Cys Arg Asn Ser Met Arg Gln
290 295 300
Gln Ile Gln Met Glu Val Gly Ala Ser Leu Gln Tyr Leu Ala Met Gly
305 310 315 320
Ala His Phe Ser Lys Asp Val Val Asn Arg Pro Gly Phe Ala Gln Leu
325 330 335
Phe Phe Asp Ala Ala Ser Glu Glu Arg Glu His Ala Met Lys Leu Ile
340 345 350
Glu Tyr Leu Leu Met Arg Gly Glu Leu Thr Asn Asp Val Ser Ser Leu
355 360 365
Leu Gln Val Arg Pro Pro Thr Arg Ser Ser Trp Lys Gly Gly Val Glu
370 375 380
Ala Leu Glu His Ala Leu Ser Met Glu Ser Asp Val Thr Lys Ser Ile
385 390 395 400
Arg Asn Val Ile Lys Ala Cys Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asn Asp Tyr
405 410 415
His Leu Val Asp Tyr Leu Thr Gly Asp Phe Leu Glu Glu Gln Tyr Lys
420 425 430
Gly Gln Arg Asp Leu Ala Gly Lys Ala Ser Thr Leu Lys Lys Leu Met
435 440 445
Asp Arg His Glu Ala Leu Gly Glu Phe Ile Phe Asp Lys Lys Leu Leu
450 455 460
Gly Ile Asp Val Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
465 470 475
<210> 25
<211> 521
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-HBsAg
<400> 25
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu
290 295 300
Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile
305 310 315 320
Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe
325 330 335
Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr
340 345 350
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355 360 365
Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu
370 375 380
Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro
385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp
485 490 495
Gly Pro Ser Leu Tyr Ser Ile Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro
500 505 510
Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile
515 520
<210> 26
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-P2-foldon
<400> 26
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe
290 295 300
Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala
305 310 315 320
Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu
325 330 335
Leu Ser Thr Phe Leu Gly
340
<210> 27
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-NTD-foldon
<400> 27
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro
20 25 30
Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys
35 40 45
Val Phe Arg Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro
50 55 60
Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr
65 70 75 80
Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly
85 90 95
Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile
100 105 110
Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn
115 120 125
Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn
130 135 140
Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met
145 150 155 160
Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu
165 170 175
Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn
180 185 190
Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe
195 200 205
Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro
210 215 220
Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile
225 230 235 240
Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu
245 250 255
Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr
260 265 270
Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu
275 280 285
Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser
290 295 300
Glu Thr Lys Cys Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala
305 310 315 320
Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu
325 330 335
Leu Ser Thr Phe Leu Gly
340
<210> 28
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-foldon-P2
<400> 28
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly
290 295 300
Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe
305 310 315 320
Leu Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe
325 330 335
Ile Gly Ile Thr Glu Leu
340
<210> 29
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-P2-ferritin LC
<400> 29
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe
290 295 300
Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Ser Gly Ser Gly Glu Tyr Gly Ser His
305 310 315 320
Gly Asn Val Ala Thr Glu Leu Gln Ala Tyr Ala Lys Leu His Leu Glu
325 330 335
Arg Ser Tyr Asp Tyr Leu Leu Ser Ala Ala Tyr Phe Asn Asn Tyr Gln
340 345 350
Thr Asn Arg Ala Gly Phe Ser Lys Leu Phe Lys Lys Leu Ser Asp Glu
355 360 365
Ala Trp Ser Lys Thr Ile Asp Ile Ile Lys His Val Thr Lys Arg Gly
370 375 380
Asp Lys Met Asn Phe Asp Gln His Ser Thr Met Lys Thr Glu Arg Lys
385 390 395 400
Asn Tyr Thr Ala Glu Asn His Glu Leu Glu Ala Leu Ala Lys Ala Leu
405 410 415
Asp Thr Gln Lys Glu Leu Ala Glu Arg Ala Phe Tyr Ile His Arg Glu
420 425 430
Ala Thr Arg Asn Ser Gln His Leu His Asp Pro Glu Ile Ala Gln Tyr
435 440 445
Leu Glu Glu Glu Phe Ile Glu Asp His Ala Glu Lys Ile Arg Thr Leu
450 455 460
Ala Gly His Thr Ser Asp Leu Lys Lys Phe Ile Thr Ala Asn Asn Gly
465 470 475 480
His Asp Leu Ser Leu Ala Leu Tyr Val Phe Asp Glu Tyr Leu Gln Lys
485 490 495
Thr Val
<210> 30
<211> 488
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-P2-ferritin HC
<400> 30
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe
290 295 300
Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Ser Gly Ser Gly Arg Ser Cys Arg Asn
305 310 315 320
Ser Met Arg Gln Gln Ile Gln Met Glu Val Gly Ala Ser Leu Gln Tyr
325 330 335
Leu Ala Met Gly Ala His Phe Ser Lys Asp Val Val Asn Arg Pro Gly
340 345 350
Phe Ala Gln Leu Phe Phe Asp Ala Ala Ser Glu Glu Arg Glu His Ala
355 360 365
Met Lys Leu Ile Glu Tyr Leu Leu Met Arg Gly Glu Leu Thr Asn Asp
370 375 380
Val Ser Ser Leu Leu Gln Val Arg Pro Pro Thr Arg Ser Ser Trp Lys
385 390 395 400
Gly Gly Val Glu Ala Leu Glu His Ala Leu Ser Met Glu Ser Asp Val
405 410 415
Thr Lys Ser Ile Arg Asn Val Ile Lys Ala Cys Glu Asp Asp Ser Glu
420 425 430
Phe Asn Asp Tyr His Leu Val Asp Tyr Leu Thr Gly Asp Phe Leu Glu
435 440 445
Glu Gln Tyr Lys Gly Gln Arg Asp Leu Ala Gly Lys Ala Ser Thr Leu
450 455 460
Lys Lys Leu Met Asp Arg His Glu Ala Leu Gly Glu Phe Ile Phe Asp
465 470 475 480
Lys Lys Leu Leu Gly Ile Asp Val
485
<210> 31
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-NTD-ferritin LC
<400> 31
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro
20 25 30
Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys
35 40 45
Val Phe Arg Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro
50 55 60
Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr
65 70 75 80
Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly
85 90 95
Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile
100 105 110
Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn
115 120 125
Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn
130 135 140
Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met
145 150 155 160
Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu
165 170 175
Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn
180 185 190
Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe
195 200 205
Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro
210 215 220
Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile
225 230 235 240
Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu
245 250 255
Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr
260 265 270
Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu
275 280 285
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Gly Asn Val Ala Thr Glu Leu Gln Ala Tyr Ala Lys Leu His Leu Glu
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370 375 380
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465 470 475 480
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-NTD-ferritin HC
<400> 32
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1 5 10 15
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Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe
195 200 205
Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro
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Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile
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Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu
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Glu Thr Lys Cys Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Arg Ser Cys Arg Asn
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Ser Met Arg Gln Gln Ile Gln Met Glu Val Gly Ala Ser Leu Gln Tyr
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485
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-NTD-ferritin
<400> 33
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-P2-HBsAg
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530 535 540
<210> 35
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2-NTD-HBsAg
<400> 35
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Gly Ser Gly Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro
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Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys
35 40 45
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65 70 75 80
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Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile
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Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn
115 120 125
Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn
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Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu
165 170 175
Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn
180 185 190
Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe
195 200 205
Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro
210 215 220
Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile
225 230 235 240
Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu
245 250 255
Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr
260 265 270
Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu
275 280 285
Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser
290 295 300
Glu Thr Lys Cys Thr Leu Gly Ser Gly Ser Gly Met Glu Asn Ile Thr
305 310 315 320
Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu
325 330 335
Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr
340 345 350
Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser
355 360 365
Gln Ser Pro Thr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys
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Pro Gly Tyr Arg Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe
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Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln
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Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly Ser Thr Thr Thr Ser
420 425 430
Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser Met
435 440 445
Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys
450 455 460
Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp
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Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln
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Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile
530 535 540
<210> 36
<211> 541
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-HBsAg-P2
<400> 36
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275 280 285
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Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile
305 310 315 320
Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe
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355 360 365
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530 535 540
<210> 37
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD 14-304
<400> 37
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
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Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
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50 55 60
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100 105 110
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115 120 125
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195 200 205
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210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys
290
<210> 38
<211> 336
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD 18-353
<400> 38
Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr
1 5 10 15
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65 70 75 80
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100 105 110
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145 150 155 160
Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val
165 170 175
Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro
180 185 190
Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro
195 200 205
Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu
210 215 220
Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly
225 230 235 240
Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg
245 250 255
Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val
260 265 270
Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser
275 280 285
Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln
290 295 300
Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
305 310 315 320
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
325 330 335
<210> 39
<211> 536
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-RBD-6His
<400> 39
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
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210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
325 330 335
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
340 345 350
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
355 360 365
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
370 375 380
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
385 390 395 400
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405 410 415
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
420 425 430
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
435 440 445
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450 455 460
Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln
465 470 475 480
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485 490 495
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys
500 505 510
Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
515 520 525
Gly Ser His His His His His His
530 535
<210> 40
<211> 556
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-RBD-P2-6His
<400> 40
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
325 330 335
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
340 345 350
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
355 360 365
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
370 375 380
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
385 390 395 400
Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
405 410 415
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
420 425 430
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
435 440 445
Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser
450 455 460
Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln
465 470 475 480
Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg
485 490 495
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys
500 505 510
Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
515 520 525
Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly
530 535 540
Ile Thr Glu Leu Gly Ser His His His His His His
545 550 555
<210> 41
<211> 588
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-RBD-foldon-6His
<400> 41
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Ser Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro
20 25 30
Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys
35 40 45
Val Phe Arg Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro
50 55 60
Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr
65 70 75 80
Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly
85 90 95
Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile
100 105 110
Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn
115 120 125
Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn
130 135 140
Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met
145 150 155 160
Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu
165 170 175
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Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe
195 200 205
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225 230 235 240
Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu
245 250 255
Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr
260 265 270
Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu
275 280 285
Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser
290 295 300
Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr
305 310 315 320
Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe
325 330 335
Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr
340 345 350
Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys
355 360 365
Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe
370 375 380
Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr
385 390 395 400
Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln
405 410 415
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420 425 430
Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu
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Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg
450 455 460
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465 470 475 480
Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr
485 490 495
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500 505 510
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530 535 540
Cys Val Asn Phe Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg
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Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser
565 570 575
Thr Phe Leu Gly Gly Ser His His His His His His
580 585
<210> 42
<211> 608
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-RBD-P2-foldon-6His
<400> 42
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp
1 5 10 15
Val Leu Ser Ser Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro
20 25 30
Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys
35 40 45
Val Phe Arg Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro
50 55 60
Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr
65 70 75 80
Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly
85 90 95
Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile
100 105 110
Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn
115 120 125
Asn Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn
130 135 140
Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met
145 150 155 160
Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu
165 170 175
Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn
180 185 190
Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe
195 200 205
Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro
210 215 220
Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile
225 230 235 240
Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu
245 250 255
Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr
260 265 270
Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu
275 280 285
Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser
290 295 300
Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr
305 310 315 320
Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe
325 330 335
Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr
340 345 350
Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys
355 360 365
Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe
370 375 380
Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr
385 390 395 400
Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln
405 410 415
Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu
420 425 430
Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu
435 440 445
Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg
450 455 460
Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr
465 470 475 480
Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr
485 490 495
Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr
500 505 510
Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro
515 520 525
Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys
530 535 540
Cys Val Asn Phe Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser
545 550 555 560
Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro
565 570 575
Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp
580 585 590
Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly Gly Ser His His His His His His
595 600 605
<210> 43
<211> 695
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-RBD-ferritin
<400> 43
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
325 330 335
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
340 345 350
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
355 360 365
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
370 375 380
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
385 390 395 400
Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
405 410 415
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
420 425 430
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
435 440 445
Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser
450 455 460
Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln
465 470 475 480
Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg
485 490 495
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys
500 505 510
Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
515 520 525
Met Leu Ser Lys Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu Gln Val Asn Lys
530 535 540
Glu Met Asn Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser Ser Trp Cys Tyr
545 550 555 560
Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe Asp His Ala Ala
565 570 575
Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe Leu Asn Glu Asn
580 585 590
Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser Ala Pro Glu His Lys Phe
595 600 605
Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr Glu His Glu Gln His
610 615 620
Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp His Ala Ile Lys Ser Lys
625 630 635 640
Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr Val Ala Glu Gln His
645 650 655
Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp Lys Ile Glu Leu Ile
660 665 670
Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln Tyr Val Lys Gly
675 680 685
Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser
690 695
<210> 44
<211> 759
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-RBD- HBsAg
<400> 44
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
325 330 335
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
340 345 350
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
355 360 365
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
370 375 380
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
385 390 395 400
Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
405 410 415
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
420 425 430
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
435 440 445
Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser
450 455 460
Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln
465 470 475 480
Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg
485 490 495
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys
500 505 510
Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
515 520 525
Gly Ser Gly Ser Gly Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro
530 535 540
Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr
545 550 555 560
Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly
565 570 575
Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser Asn
580 585 590
His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Met
595 600 605
Cys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu
610 615 620
Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys
625 630 635 640
Pro Leu Ile Pro Gly Ser Thr Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr
645 650 655
Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys
660 665 670
Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser
675 680 685
Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser
690 695 700
Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser
705 710 715 720
Pro Thr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro
725 730 735
Ser Leu Tyr Ser Ile Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe
740 745 750
Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile
755
<210> 45
<211> 1500
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-HBsAg-6*HIS
<400> 45
ggatccgccg ccaccatggg cgtgcccgct gtgccagagg ccagctctcc taggtggggc 60
accctgctgc tggccatctt tctggccgcc agcagaggcc tggtggccgc tagagtgcag 120
cctaccgaga gcatcgtgcg gttcccaaac atcaccaacc tgtgtccttt cggcgaggtg 180
ttcaatgcca ccaggttcgc tagcgtgtat gcctggaaca ggaagaggat ctccaattgt 240
gtggctgact actccgtgct gtacaacagc gcttccttta gcaccttcaa gtgctacggc 300
gtgtccccca ccaagctgaa cgacttgtgc tttaccaacg tgtatgccga cagctttgtg 360
atcaggggcg acgaggtgcg gcagattgct cctggacaga ccggaaagat cgctgactat 420
aattacaagc tgcccgacga cttcaccggc tgcgttatcg cttggaatag caacaatctg 480
gattccaagg tgggcggcaa ttacaattat ctgtaccggc tgttcaggaa gtccaacctg 540
aagcccttcg agagggatat cagcaccgag atctatcagg ctggctccac cccctgtaac 600
ggcgttgaag gattcaattg ctacttcccc ctgcagagct acggctttca gcctaccaat 660
ggcgtgggct atcagcccta cagggtggtt gtgctgagct ttgagctgct gcacgctcct 720
gctaccgtgt gtggaccaaa gaagtccacc aacctggtga agaataagtg cgtgaatttt 780
ggatctggaa gcggaatgga gaacatcacc tccggcttcc tgggcccact gttggttctg 840
caggccggat tcttcctgct gaccagaatc ctgaccatcc cccagtccct ggacagctgg 900
tggacatctc tgaattttct gggcggctcc cccgtgtgcc tgggacagaa ctctcagagc 960
cccaccagca accactcccc aacaagctgc ccccctatct gtcccggata taggtggatg 1020
tgtctgaggc ggttcatcat cttcctgttt atcctgctgc tgtgcctgat cttcctgctg 1080
gtgctgctgg actaccaggg catgctgcca gtgtgccctc tgatcccagg ctctaccacc 1140
accagcaccg gaccttgtaa gacctgcacc acccctgccc agggaaatag catgtttcct 1200
tcctgttgct gcaccaagcc caccgatggc aactgcacct gtatccccat ccctagcagc 1260
tgggcctttg ctaagtacct gtgggagtgg gcttccgtgc ggtttagctg gctgtccctg 1320
ctggtgcctt tcgtgcagtg gttcgtgggc ctgagcccta cagtgtggct gtctgctatc 1380
tggatgatgt ggtattgggg ccctagcctg tacagcatcg tgtccccatt cattcctctg 1440
ctgcctatct ttttctgcct gtgggtgtat atccaccacc accaccatca ctgactcgag 1500
<210> 46
<211> 1644
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-HBsAg-6*HIS
<400> 46
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgtc ctcccagtgt 60
gttaatctga ccaccaggac ccagctgcct cctgcttaca ccaattcctt taccaggggc 120
gtgtactacc ccgacaaggt gttcaggtcc tccgtgctgc acagcaccca ggatctgttc 180
ctgcctttct ttagcaacgt gacctggttc cacgctatcc acgtgagcgg caccaacgga 240
accaagagat tcgacaatcc cgtgctgccc ttcaacgatg gcgtgtactt cgccagcacc 300
gagaagagca acatcatccg gggctggatc ttcggcacca ccttggattc caagacccag 360
agcctgctga tcgtgaacaa cgctaccaac gtggtcatta aggtgtgtga gttccagttt 420
tgtaacgacc cctttctggg cgtgtattat cacaagaaca ataagtcctg gatggagagc 480
gagtttaggg tgtattcctc cgctaacaac tgcacctttg agtatgtgag ccagcctttt 540
ctgatggacc tggagggcaa gcagggcaat ttcaagaacc tgagggagtt cgtgtttaag 600
aacatcgatg gctactttaa gatctactcc aagcacaccc ctatcaacct ggtgcgggat 660
ctgcctcagg gctttagcgc tctggagcct ctggtggatc tgccaatcgg catcaatatc 720
acccggtttc agaccctgct ggctctgcac aggagctacc tgacccctgg agatagctcc 780
agcggctgga cagctggagc tgctgcttac tacgtgggct acctgcagcc cagaaccttt 840
ctgctgaagt acaatgagaa cggcaccatc accgacgccg tggattgcgc tctggaccct 900
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atcccccagt ccctggacag ctggtggaca tctctgaatt ttctgggcgg ctcccccgtg 1080
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atctgtcccg gatataggtg gatgtgtctg aggcggttca tcatcttcct gtttatcctg 1200
ctgctgtgcc tgatcttcct gctggtgctg ctggactacc agggcatgct gccagtgtgc 1260
cctctgatcc caggctctac caccaccagc accggacctt gtaagacctg caccacccct 1320
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cctacagtgt ggctgtctgc tatctggatg atgtggtatt ggggccctag cctgtacagc 1560
atcgtgtccc cattcattcc tctgctgcct atctttttct gcctgtgggt gtatatccac 1620
caccaccacc atcactgact cgag 1644
<210> 47
<211> 903
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-foldon-6*HIS
<400> 47
ggatccgccg ccaccatggg cgtgcccgct gtgccagagg ccagctctcc taggtggggc 60
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gtggctgact actccgtgct gtacaacagc gcttccttta gcaccttcaa gtgctacggc 300
gtgtccccca ccaagctgaa cgacttgtgc tttaccaacg tgtatgccga cagctttgtg 360
atcaggggcg acgaggtgcg gcagattgct cctggacaga ccggaaagat cgctgactat 420
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ggcgttgaag gattcaattg ctacttcccc ctgcagagct acggctttca gcctaccaat 660
ggcgtgggct atcagcccta cagggtggtt gtgctgagct ttgagctgct gcacgctcct 720
gctaccgtgt gtggaccaaa gaagtccacc aacctggtga agaataagtg cgtgaatttt 780
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gag 903
<210> 48
<211> 1047
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-foldon-6*HIS
<400> 48
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgtc ctcccagtgt 60
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<210> 49
<211> 1767
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-RBD-foldon-8*HIS
<400> 49
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgag ctcccagtgt 60
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<210> 50
<211> 3783
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S-foldon-8*HIS
<400> 50
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgttcctg gtgctgctgc ccctggtgtc tagccagtgt 60
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tgtaacgacc ctttcctggg cgtgtattat cacaagaata acaagagctg gatggagtcc 480
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acacagacca atagccccag gagggccaga tccgtggctt ctcagagcat catcgcctac 2100
accatgagcc tgggcgccga aaattccgtg gcttatagca acaacagcat cgctatccct 2160
accaatttca ccatcagcgt gaccaccgag atcctgcccg tgtctatgac caagacctcc 2220
gtggactgta ccatgtatat ctgcggcgac agcaccgagt gcagcaactt gctgctgcag 2280
tatggcagct tctgcaccca gctgaatagg gctctgaccg gcatcgctgt ggagcaggat 2340
aagaacaccc aggaggtgtt cgcccaggtg aagcagatct ataagacccc tcctatcaag 2400
gactttggcg gcttcaactt cagccagatc ctgcccgacc ctagcaagcc aagcaagagg 2460
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aacggcctca ccgtgctgcc tcctctgttg acagacgaga tgatcgctca gtacacctcc 2640
gccctgctgg ctggaacaat cacctccgga tggaccttcg gcgccggagc tgctttgcag 2700
atcccattcg ccatgcagat ggcctaccgg ttcaacggca tcggcgtgac acagaatgtg 2760
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gatagcctga gcagcaccgc ctccgctttg ggaaagctgc aggacgtggt gaatcagaac 2880
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ttcaagaatc acaccagccc tgacgtggac ctgggcgata tttccggcat caacgccagc 3540
gtggtgaata tccagaagga gatcgacagg ctgaacgagg tggctaagaa tctgaacgag 3600
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gag 3783
<210> 51
<211> 867
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-P2-6*HIS
<400> 51
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<210> 52
<211> 1014
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD- P2-6*HIS
<400> 52
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgtc ctcccagtgt 60
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<210> 53
<211> 1731
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S1-P2-8*HIS
<400> 53
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgag ctcccagtgt 60
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gtgtactacc ctgacaaggt gttccggagc tccgtgctgc acagcacaca ggatctgttt 180
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aacatcgatg gctatttcaa gatctactcc aagcacaccc ctatcaacct ggtgagggac 660
ctgccccagg gattttccgc tctggagcca ctggtggacc tgcctatcgg aatcaacatc 720
accaggttcc agaccctgct ggctctgcac agatcctacc tgacccctgg cgattcctcc 780
tccggatgga cagctggagc tgctgcttac tacgtgggct acctgcagcc caggaccttc 840
ttgctgaagt acaacgagaa cggcaccatc accgacgctg tggactgcgc tctggaccct 900
ttgtccgaga ccaagtgtac cctgaagagc ttcaccgtgg agaagggcat ctatcagacc 960
agcaacttcc gggtgcagcc cacagagagc atcgtgagat tccctaacat caccaacctg 1020
tgtcccttcg gcgaggtgtt taatgccacc aggtttgcta gcgtgtacgc ttggaacagg 1080
aagcggatct ccaattgcgt ggccgattat agcgtgctgt acaactccgc tagcttcagc 1140
acctttaagt gctatggcgt gagccctacc aagctgaatg atctgtgttt caccaacgtg 1200
tatgctgact ccttcgtgat ccggggcgac gaagtgaggc agatcgctcc tggacagacc 1260
ggaaagatcg ctgattataa ctacaagctg cccgacgact ttaccggctg cgtgatcgct 1320
tggaatagca ataatctgga ctccaaggtg ggcggcaatt acaattatct gtataggctg 1380
ttcaggaagt ccaacctgaa gcccttcgag agggatatct ccaccgagat ctatcaggct 1440
ggctccaccc cttgtaacgg cgttgaggga ttcaactgtt acttccccct gcagtcctac 1500
ggctttcagc ctaccaacgg cgtgggctat cagccttacc gggtggttgt gctgtccttc 1560
gagctgctgc acgctcctgc taccgtgtgt ggaccaaaga agtccaccaa cctggtgaag 1620
aacaagtgtg tgaactttgg atctggaagc ggacagtaca tcaaggccaa ttccaagttc 1680
atcggcatca ccgagctgca ccaccaccac catcaccacc actgactcga g 1731
<210> 54
<211> 963
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-P2-foldon-6*HIS
<400> 54
ggatccgccg ccaccatggg cgtgcccgct gtgccagagg ccagctctcc taggtggggc 60
accctgctgc tggccatctt tctggccgcc agcagaggcc tggtggccgc tagagtgcag 120
cctaccgaga gcatcgtgcg gttcccaaac atcaccaacc tgtgtccttt cggcgaggtg 180
ttcaatgcca ccaggttcgc tagcgtgtat gcctggaaca ggaagaggat ctccaattgt 240
gtggctgact actccgtgct gtacaacagc gcttccttta gcaccttcaa gtgctacggc 300
gtgtccccca ccaagctgaa cgacttgtgc tttaccaacg tgtatgccga cagctttgtg 360
atcaggggcg acgaggtgcg gcagattgct cctggacaga ccggaaagat cgctgactat 420
aattacaagc tgcccgacga cttcaccggc tgcgttatcg cttggaatag caacaatctg 480
gattccaagg tgggcggcaa ttacaattat ctgtaccggc tgttcaggaa gtccaacctg 540
aagcccttcg agagggatat cagcaccgag atctatcagg ctggctccac cccctgtaac 600
ggcgttgaag gattcaattg ctacttcccc ctgcagagct acggctttca gcctaccaat 660
ggcgtgggct atcagcccta cagggtggtt gtgctgagct ttgagctgct gcacgctcct 720
gctaccgtgt gtggaccaaa gaagtccacc aacctggtga agaataagtg cgtgaatttt 780
ggatctggat ctggccagta catcaaggct aacagcaagt ttatcggcat caccgagctg 840
ggctccggct ctggatatat ccccgaggct cccagagacg gccaggctta cgttaggaag 900
gacggcgagt gggtgctgct gtctaccttc ctgggccacc accaccacca tcactgactc 960
gag 963
<210> 55
<211> 1107
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-P2-foldon-6*HIS
<400> 55
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgtc ctcccagtgt 60
gttaatctga ccaccaggac ccagctgcct cctgcttaca ccaattcctt taccaggggc 120
gtgtactacc ccgacaaggt gttcaggtcc tccgtgctgc acagcaccca ggatctgttc 180
ctgcctttct ttagcaacgt gacctggttc cacgctatcc acgtgagcgg caccaacgga 240
accaagagat tcgacaatcc cgtgctgccc ttcaacgatg gcgtgtactt cgccagcacc 300
gagaagagca acatcatccg gggctggatc ttcggcacca ccttggattc caagacccag 360
agcctgctga tcgtgaacaa cgctaccaac gtggtcatta aggtgtgtga gttccagttt 420
tgtaacgacc cctttctggg cgtgtattat cacaagaaca ataagtcctg gatggagagc 480
gagtttaggg tgtattcctc cgctaacaac tgcacctttg agtatgtgag ccagcctttt 540
ctgatggacc tggagggcaa gcagggcaat ttcaagaacc tgagggagtt cgtgtttaag 600
aacatcgatg gctactttaa gatctactcc aagcacaccc ctatcaacct ggtgcgggat 660
ctgcctcagg gctttagcgc tctggagcct ctggtggatc tgccaatcgg catcaatatc 720
acccggtttc agaccctgct ggctctgcac aggagctacc tgacccctgg agatagctcc 780
agcggctgga cagctggagc tgctgcttac tacgtgggct acctgcagcc cagaaccttt 840
ctgctgaagt acaatgagaa cggcaccatc accgacgccg tggattgcgc tctggaccct 900
ttgtccgaga ccaagtgtac cctgggatct ggatctggcc agtacatcaa ggctaacagc 960
aagtttatcg gcatcaccga gctgggctcc ggctctggat atatccccga ggctcccaga 1020
gacggccagg cttacgttag gaaggacggc gagtgggtgc tgctgtctac cttcctgggc 1080
caccaccacc accatcactg actcgag 1107
<210> 56
<211> 1827
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> S1-P2-foldon-6*HIS
<400> 56
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgag ctcccagtgt 60
gttaacctga ccacccggac ccagctgcca cctgcttata ccaacagctt tacccggggc 120
gtgtactacc ctgacaaggt gttccggagc tccgtgctgc acagcacaca ggatctgttt 180
ctgcctttct ttagcaacgt gacctggttc cacgccatcc acgtgagcgg aaccaacgga 240
accaagcggt tcgacaatcc cgtgctgcct ttcaacgatg gcgtgtattt cgctagcacc 300
gagaagagca atatcatcag gggctggatc ttcggcacca ccctggattc caagacccag 360
tccctgctga tcgtgaataa tgctaccaac gtggtcatta aggtgtgtga gttccagttt 420
tgtaacgacc cctttctggg cgtgtattat cacaagaaca acaagtcctg gatggagtcc 480
gagttccggg tgtactcctc cgctaataat tgcacctttg agtatgtgtc ccagcctttt 540
ctgatggacc tggagggcaa gcagggcaac tttaagaacc tgcgggagtt cgtgtttaag 600
aacatcgatg gctatttcaa gatctactcc aagcacaccc ctatcaacct ggtgagggac 660
ctgccccagg gattttccgc tctggagcca ctggtggacc tgcctatcgg aatcaacatc 720
accaggttcc agaccctgct ggctctgcac agatcctacc tgacccctgg cgattcctcc 780
tccggatgga cagctggagc tgctgcttac tacgtgggct acctgcagcc caggaccttc 840
ttgctgaagt acaacgagaa cggcaccatc accgacgctg tggactgcgc tctggaccct 900
ttgtccgaga ccaagtgtac cctgaagagc ttcaccgtgg agaagggcat ctatcagacc 960
agcaacttcc gggtgcagcc cacagagagc atcgtgagat tccctaacat caccaacctg 1020
tgtcccttcg gcgaggtgtt taatgccacc aggtttgcta gcgtgtacgc ttggaacagg 1080
aagcggatct ccaattgcgt ggccgattat agcgtgctgt acaactccgc tagcttcagc 1140
acctttaagt gctatggcgt gagccctacc aagctgaatg atctgtgttt caccaacgtg 1200
tatgctgact ccttcgtgat ccggggcgac gaagtgaggc agatcgctcc tggacagacc 1260
ggaaagatcg ctgattataa ctacaagctg cccgacgact ttaccggctg cgtgatcgct 1320
tggaatagca ataatctgga ctccaaggtg ggcggcaatt acaattatct gtataggctg 1380
ttcaggaagt ccaacctgaa gcccttcgag agggatatct ccaccgagat ctatcaggct 1440
ggctccaccc cttgtaacgg cgttgaggga ttcaactgtt acttccccct gcagtcctac 1500
ggctttcagc ctaccaacgg cgtgggctat cagccttacc gggtggttgt gctgtccttc 1560
gagctgctgc acgctcctgc taccgtgtgt ggaccaaaga agtccaccaa cctggtgaag 1620
aacaagtgtg tgaactttgg atctggatct ggccagtaca tcaaggctaa cagcaagttt 1680
atcggcatca ccgagctggg ctccggctct ggatatatcc ccgaggctcc cagagacggc 1740
caggcttacg ttaggaagga cggcgagtgg gtgctgctgt ctaccttcct gggccaccac 1800
caccaccatc accaccactg actcgag 1827
<210> 57
<211> 1371
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-ferritin LC-6*HIS
<400> 57
ggatccgccg ccaccatggg cgtgcccgct gtgccagagg ccagctctcc taggtggggc 60
accctgctgc tggccatctt tctggccgcc agcagaggcc tggtggccgc tagagtgcag 120
cctaccgaga gcatcgtgcg gttcccaaac atcaccaacc tgtgtccttt cggcgaggtg 180
ttcaatgcca ccaggttcgc tagcgtgtat gcctggaaca ggaagaggat ctccaattgt 240
gtggctgact actccgtgct gtacaacagc gcttccttta gcaccttcaa gtgctacggc 300
gtgtccccca ccaagctgaa cgacttgtgc tttaccaacg tgtatgccga cagctttgtg 360
atcaggggcg acgaggtgcg gcagattgct cctggacaga ccggaaagat cgctgactat 420
aattacaagc tgcccgacga cttcaccggc tgcgttatcg cttggaatag caacaatctg 480
gattccaagg tgggcggcaa ttacaattat ctgtaccggc tgttcaggaa gtccaacctg 540
aagcccttcg agagggatat cagcaccgag atctatcagg ctggctccac cccctgtaac 600
ggcgttgaag gattcaattg ctacttcccc ctgcagagct acggctttca gcctaccaat 660
ggcgtgggct atcagcccta cagggtggtt gtgctgagct ttgagctgct gcacgctcct 720
gctaccgtgt gtggaccaaa gaagtccacc aacctggtga agaataagtg cgtgaatttt 780
ggatctggat ctggcgagta cggcagccac ggaaacgtgg ctaccgagtt gcaggcctat 840
gctaagctgc acctggagag gtcctatgac tacctgctgt ccgccgctta ttttaacaac 900
taccagacca acagggccgg cttttccaag ctgtttaaga agctgagcga cgaggcctgg 960
agcaagacca tcgatatcat caagcacgtg accaagcggg gcgataagat gaattttgac 1020
cagcacagca ccatgaagac cgagcggaag aactataccg ctgagaatca cgagctggag 1080
gccctggcta aggctttgga tacccagaag gagctggctg agcgggcttt ctatatccac 1140
agggaggcta cccggaatag ccagcacctg cacgaccctg agatcgctca gtacctggag 1200
gaggagttca tcgaggatca cgctgagaag atccggaccc tggccggaca taccagcgat 1260
ttgaagaagt tcatcaccgc caataatggc cacgacctga gcctggctct gtacgttttc 1320
gacgagtacc tgcagaagac cgtgcaccac caccatcacc actgactcga g 1371
<210> 58
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-ferritin HC-FLAG
<400> 58
ggatccgccg ccaccatggg cgtgcccgct gtgccagagg ccagctctcc taggtggggc 60
accctgctgc tggccatctt tctggccgcc agcagaggcc tggtggccgc tagagtgcag 120
cctaccgaga gcatcgtgcg gttcccaaac atcaccaacc tgtgtccttt cggcgaggtg 180
ttcaatgcca ccaggttcgc tagcgtgtat gcctggaaca ggaagaggat ctccaattgt 240
gtggctgact actccgtgct gtacaacagc gcttccttta gcaccttcaa gtgctacggc 300
gtgtccccca ccaagctgaa cgacttgtgc tttaccaacg tgtatgccga cagctttgtg 360
atcaggggcg acgaggtgcg gcagattgct cctggacaga ccggaaagat cgctgactat 420
aattacaagc tgcccgacga cttcaccggc tgcgttatcg cttggaatag caacaatctg 480
gattccaagg tgggcggcaa ttacaattat ctgtaccggc tgttcaggaa gtccaacctg 540
aagcccttcg agagggatat cagcaccgag atctatcagg ctggctccac cccctgtaac 600
ggcgttgaag gattcaattg ctacttcccc ctgcagagct acggctttca gcctaccaat 660
ggcgtgggct atcagcccta cagggtggtt gtgctgagct ttgagctgct gcacgctcct 720
gctaccgtgt gtggaccaaa gaagtccacc aacctggtga agaataagtg cgtgaatttt 780
ggatctggat ctggcagatc ctgccggaac tccatgcggc agcagatcca gatggaggtg 840
ggcgcttccc tgcagtacct ggctatggga gcccacttta gcaaggatgt ggtgaacagg 900
cccggctttg cccagttgtt tttcgacgcc gcttccgagg agagggagca tgctatgaag 960
ctgatcgagt acctgctgat gcggggcgag ctgacaaacg acgtgagctc tctgctgcag 1020
gtgcggcctc ctacaagatc cagctggaag ggcggcgtgg aggctttgga acacgctttg 1080
agcatggaga gcgatgtgac caagagcatc aggaatgtga tcaaggcctg tgaggatgac 1140
agcgagttta atgattatca cctggtggat tacctgaccg gcgattttct ggaggagcag 1200
tacaagggcc agagggacct ggctggaaag gcttctaccc tgaagaagct gatggaccgg 1260
cacgaggctc tgggagaatt catcttcgat aagaagctgc tgggcatcga cgtggattat 1320
aaggatgatg acgataagtg actcgag 1347
<210> 59
<211> 1374
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD194-HBsAg
<400> 59
ggatccgccg ccaccatgga gactgggctg cgctggcttc tcctggtcgc tgtgctcaaa 60
ggtgtccagt gtaacatcac caacctgtgt cctttcggcg aggtgttcaa tgccaccagg 120
ttcgctagcg tgtatgcctg gaacaggaag aggatctcca attgtgtggc tgactactcc 180
gtgctgtaca acagcgcttc ctttagcacc ttcaagtgct acggcgtgtc ccccaccaag 240
ctgaacgact tgtgctttac caacgtgtat gccgacagct ttgtgatcag gggcgacgag 300
gtgcggcaga ttgctcctgg acagaccgga aagatcgctg actataatta caagctgccc 360
gacgacttca ccggctgcgt tatcgcttgg aatagcaaca atctggattc caaggtgggc 420
ggcaattaca attatctgta ccggctgttc aggaagtcca acctgaagcc cttcgagagg 480
gatatcagca ccgagatcta tcaggctggc tccaccccct gtaacggcgt tgaaggattc 540
aattgctact tccccctgca gagctacggc tttcagccta ccaatggcgt gggctatcag 600
ccctacaggg tggttgtgct gagctttgag ctgctgcacg ctcctgctac cgtgggatct 660
ggaagcggaa tggagaacat cacctccggc ttcctgggcc cactgttggt tctgcaggcc 720
ggattcttcc tgctgaccag aatcctgacc atcccccagt ccctggacag ctggtggaca 780
tctctgaatt ttctgggcgg ctcccccgtg tgcctgggac agaactctca gagccccacc 840
agcaaccact ccccaacaag ctgcccccct atctgtcccg gatataggtg gatgtgtctg 900
aggcggttca tcatcttcct gtttatcctg ctgctgtgcc tgatcttcct gctggtgctg 960
ctggactacc agggcatgct gccagtgtgc cctctgatcc caggctctac caccaccagc 1020
accggacctt gtaagacctg caccacccct gcccagggaa atagcatgtt tccttcctgt 1080
tgctgcacca agcccaccga tggcaactgc acctgtatcc ccatccctag cagctgggcc 1140
tttgctaagt acctgtggga gtgggcttcc gtgcggttta gctggctgtc cctgctggtg 1200
cctttcgtgc agtggttcgt gggcctgagc cctacagtgt ggctgtctgc tatctggatg 1260
atgtggtatt ggggccctag cctgtacagc atcgtgtccc cattcattcc tctgctgcct 1320
atctttttct gcctgtgggt gtatatccac caccaccacc atcactgact cgag 1374
<210> 60
<211> 1491
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-ferritin HC 核酸序列
<400> 60
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgtc ctcccagtgt 60
gttaatctga ccaccaggac ccagctgcct cctgcttaca ccaattcctt taccaggggc 120
gtgtactacc ccgacaaggt gttcaggtcc tccgtgctgc acagcaccca ggatctgttc 180
ctgcctttct ttagcaacgt gacctggttc cacgctatcc acgtgagcgg caccaacgga 240
accaagagat tcgacaatcc cgtgctgccc ttcaacgatg gcgtgtactt cgccagcacc 300
gagaagagca acatcatccg gggctggatc ttcggcacca ccttggattc caagacccag 360
agcctgctga tcgtgaacaa cgctaccaac gtggtcatta aggtgtgtga gttccagttt 420
tgtaacgacc cctttctggg cgtgtattat cacaagaaca ataagtcctg gatggagagc 480
gagtttaggg tgtattcctc cgctaacaac tgcacctttg agtatgtgag ccagcctttt 540
ctgatggacc tggagggcaa gcagggcaat ttcaagaacc tgagggagtt cgtgtttaag 600
aacatcgatg gctactttaa gatctactcc aagcacaccc ctatcaacct ggtgcgggat 660
ctgcctcagg gctttagcgc tctggagcct ctggtggatc tgccaatcgg catcaatatc 720
acccggtttc agaccctgct ggctctgcac aggagctacc tgacccctgg agatagctcc 780
agcggctgga cagctggagc tgctgcttac tacgtgggct acctgcagcc cagaaccttt 840
ctgctgaagt acaatgagaa cggcaccatc accgacgccg tggattgcgc tctggaccct 900
ttgtccgaga ccaagtgtac cctgggatct ggatctggca gatcctgccg gaactccatg 960
cggcagcaga tccagatgga ggtgggcgct tccctgcagt acctggctat gggagcccac 1020
tttagcaagg atgtggtgaa caggcccggc tttgcccagt tgtttttcga cgccgcttcc 1080
gaggagaggg agcatgctat gaagctgatc gagtacctgc tgatgcgggg cgagctgaca 1140
aacgacgtga gctctctgct gcaggtgcgg cctcctacaa gatccagctg gaagggcggc 1200
gtggaggctt tggaacacgc tttgagcatg gagagcgatg tgaccaagag catcaggaat 1260
gtgatcaagg cctgtgagga tgacagcgag tttaatgatt atcacctggt ggattacctg 1320
accggcgatt ttctggagga gcagtacaag ggccagaggg acctggctgg aaaggcttct 1380
accctgaaga agctgatgga ccggcacgag gctctgggag aattcatctt cgataagaag 1440
ctgctgggca tcgacgtgga ttataaggat gatgacgata agtgactcga g 1491
<210> 61
<211> 1515
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-ferritin LC 核酸序列
<400> 61
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgtc ctcccagtgt 60
gttaatctga ccaccaggac ccagctgcct cctgcttaca ccaattcctt taccaggggc 120
gtgtactacc ccgacaaggt gttcaggtcc tccgtgctgc acagcaccca ggatctgttc 180
ctgcctttct ttagcaacgt gacctggttc cacgctatcc acgtgagcgg caccaacgga 240
accaagagat tcgacaatcc cgtgctgccc ttcaacgatg gcgtgtactt cgccagcacc 300
gagaagagca acatcatccg gggctggatc ttcggcacca ccttggattc caagacccag 360
agcctgctga tcgtgaacaa cgctaccaac gtggtcatta aggtgtgtga gttccagttt 420
tgtaacgacc cctttctggg cgtgtattat cacaagaaca ataagtcctg gatggagagc 480
gagtttaggg tgtattcctc cgctaacaac tgcacctttg agtatgtgag ccagcctttt 540
ctgatggacc tggagggcaa gcagggcaat ttcaagaacc tgagggagtt cgtgtttaag 600
aacatcgatg gctactttaa gatctactcc aagcacaccc ctatcaacct ggtgcgggat 660
ctgcctcagg gctttagcgc tctggagcct ctggtggatc tgccaatcgg catcaatatc 720
acccggtttc agaccctgct ggctctgcac aggagctacc tgacccctgg agatagctcc 780
agcggctgga cagctggagc tgctgcttac tacgtgggct acctgcagcc cagaaccttt 840
ctgctgaagt acaatgagaa cggcaccatc accgacgccg tggattgcgc tctggaccct 900
ttgtccgaga ccaagtgtac cctgggatct ggatctggcg agtacggcag ccacggaaac 960
gtggctaccg agttgcaggc ctatgctaag ctgcacctgg agaggtccta tgactacctg 1020
ctgtccgccg cttattttaa caactaccag accaacaggg ccggcttttc caagctgttt 1080
aagaagctga gcgacgaggc ctggagcaag accatcgata tcatcaagca cgtgaccaag 1140
cggggcgata agatgaattt tgaccagcac agcaccatga agaccgagcg gaagaactat 1200
accgctgaga atcacgagct ggaggccctg gctaaggctt tggataccca gaaggagctg 1260
gctgagcggg ctttctatat ccacagggag gctacccgga atagccagca cctgcacgac 1320
cctgagatcg ctcagtacct ggaggaggag ttcatcgagg atcacgctga gaagatccgg 1380
accctggccg gacataccag cgatttgaag aagttcatca ccgccaataa tggccacgac 1440
ctgagcctgg ctctgtacgt tttcgacgag tacctgcaga agaccgtgca ccaccaccat 1500
caccactgac tcgag 1515
<210> 62
<211> 1455
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-ferritin 核酸序列
<400> 62
ggatccgccg ccaccatgtt cgtgtttctg gtgctgctgc ccctggtgtc ctcccagtgt 60
gttaatctga ccaccaggac ccagctgcct cctgcttaca ccaattcctt taccaggggc 120
gtgtactacc ccgacaaggt gttcaggtcc tccgtgctgc acagcaccca ggatctgttc 180
ctgcctttct ttagcaacgt gacctggttc cacgctatcc acgtgagcgg caccaacgga 240
accaagagat tcgacaatcc cgtgctgccc ttcaacgatg gcgtgtactt cgccagcacc 300
gagaagagca acatcatccg gggctggatc ttcggcacca ccttggattc caagacccag 360
agcctgctga tcgtgaacaa cgctaccaac gtggtcatta aggtgtgtga gttccagttt 420
tgtaacgacc cctttctggg cgtgtattat cacaagaaca ataagtcctg gatggagagc 480
gagtttaggg tgtattcctc cgctaacaac tgcacctttg agtatgtgag ccagcctttt 540
ctgatggacc tggagggcaa gcagggcaat ttcaagaacc tgagggagtt cgtgtttaag 600
aacatcgatg gctactttaa gatctactcc aagcacaccc ctatcaacct ggtgcgggat 660
ctgcctcagg gctttagcgc tctggagcct ctggtggatc tgccaatcgg catcaatatc 720
acccggtttc agaccctgct ggctctgcac aggagctacc tgacccctgg agatagctcc 780
agcggctgga cagctggagc tgctgcttac tacgtgggct acctgcagcc cagaaccttt 840
ctgctgaagt acaatgagaa cggcaccatc accgacgccg tggattgcgc tctggaccct 900
ttgtccgaga ccaagtgtac cctgggatct ggatctggcg atatcatcaa gctgctgaac 960
gagcaggtga ataaggagat gaactcctcc aacctgtaca tgagcatgtc cagctggtgt 1020
tacacccact ccctggacgg cgctggattg tttctgttcg accacgctgc cgaggagtac 1080
gagcacgcta agaagctgat catcttcctg aatgagaata atgtgcccgt gcagctgacc 1140
tccatctccg ctcctgagca caagtttgag ggcctgaccc agatcttcca gaaggcttac 1200
gagcacgagc agcacatcag cgagagcatc aacaacatcg tggaccacgc tatcaagtcc 1260
aaggaccacg ccacctttaa tttcctgcag tggtatgtgg ctgagcagca cgaggaggag 1320
gtgttgttta aggatatcct ggacaagatc gagctgatcg gcaatgagaa tcacggcctg 1380
tatctggctg accagtatgt gaagggcatc gccaagagca ggaagagcca ccaccaccac 1440
catcactgac tcgag 1455
<210> 63
<211> 1311
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-ferritin 核酸序列
<400> 63
ggatccgccg ccaccatggg cgtgcccgct gtgccagagg ccagctctcc taggtggggc 60
accctgctgc tggccatctt tctggccgcc agcagaggcc tggtggccgc tagagtgcag 120
cctaccgaga gcatcgtgcg gttcccaaac atcaccaacc tgtgtccttt cggcgaggtg 180
ttcaatgcca ccaggttcgc tagcgtgtat gcctggaaca ggaagaggat ctccaattgt 240
gtggctgact actccgtgct gtacaacagc gcttccttta gcaccttcaa gtgctacggc 300
gtgtccccca ccaagctgaa cgacttgtgc tttaccaacg tgtatgccga cagctttgtg 360
atcaggggcg acgaggtgcg gcagattgct cctggacaga ccggaaagat cgctgactat 420
aattacaagc tgcccgacga cttcaccggc tgcgttatcg cttggaatag caacaatctg 480
gattccaagg tgggcggcaa ttacaattat ctgtaccggc tgttcaggaa gtccaacctg 540
aagcccttcg agagggatat cagcaccgag atctatcagg ctggctccac cccctgtaac 600
ggcgttgaag gattcaattg ctacttcccc ctgcagagct acggctttca gcctaccaat 660
ggcgtgggct atcagcccta cagggtggtt gtgctgagct ttgagctgct gcacgctcct 720
gctaccgtgt gtggaccaaa gaagtccacc aacctggtga agaataagtg cgtgaatttt 780
ggatctggat ctggcgatat catcaagctg ctgaacgagc aggtgaataa ggagatgaac 840
tcctccaacc tgtacatgag catgtccagc tggtgttaca cccactccct ggacggcgct 900
ggattgtttc tgttcgacca cgctgccgag gagtacgagc acgctaagaa gctgatcatc 960
ttcctgaatg agaataatgt gcccgtgcag ctgacctcca tctccgctcc tgagcacaag 1020
tttgagggcc tgacccagat cttccagaag gcttacgagc acgagcagca catcagcgag 1080
agcatcaaca acatcgtgga ccacgctatc aagtccaagg accacgccac ctttaatttc 1140
ctgcagtggt atgtggctga gcagcacgag gaggaggtgt tgtttaagga tatcctggac 1200
aagatcgagc tgatcggcaa tgagaatcac ggcctgtatc tggctgacca gtatgtgaag 1260
ggcatcgcca agagcaggaa gagccaccac caccaccatc actgactcga g 1311
<210> 64
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2_1
<400> 64
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
1 5 10 15
<210> 65
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2_2
<400> 65
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Lys
1 5 10 15
<210> 66
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> P2_3
<400> 66
Met Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
1 5 10 15
<210> 67
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> foldon_1
<400> 67
Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu
1 5 10 15
Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Ser Pro Ala
20 25
<210> 68
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> foldon_2
<400> 68
Ala Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg
1 5 10 15
Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe
20 25
<210> 69
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> foldon_3
<400> 69
Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp
1 5 10 15
Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly
20 25
<210> 70
<211> 173
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ferritin HC
<400> 70
Arg Ser Cys Arg Asn Ser Met Arg Gln Gln Ile Gln Met Glu Val Gly
1 5 10 15
Ala Ser Leu Gln Tyr Leu Ala Met Gly Ala His Phe Ser Lys Asp Val
20 25 30
Val Asn Arg Pro Gly Phe Ala Gln Leu Phe Phe Asp Ala Ala Ser Glu
35 40 45
Glu Arg Glu His Ala Met Lys Leu Ile Glu Tyr Leu Leu Met Arg Gly
50 55 60
Glu Leu Thr Asn Asp Val Ser Ser Leu Leu Gln Val Arg Pro Pro Thr
65 70 75 80
Arg Ser Ser Trp Lys Gly Gly Val Glu Ala Leu Glu His Ala Leu Ser
85 90 95
Met Glu Ser Asp Val Thr Lys Ser Ile Arg Asn Val Ile Lys Ala Cys
100 105 110
Glu Asp Asp Ser Glu Phe Asn Asp Tyr His Leu Val Asp Tyr Leu Thr
115 120 125
Gly Asp Phe Leu Glu Glu Gln Tyr Lys Gly Gln Arg Asp Leu Ala Gly
130 135 140
Lys Ala Ser Thr Leu Lys Lys Leu Met Asp Arg His Glu Ala Leu Gly
145 150 155 160
Glu Phe Ile Phe Asp Lys Lys Leu Leu Gly Ile Asp Val
165 170
<210> 71
<211> 183
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ferritin LC
<400> 71
Glu Tyr Gly Ser His Gly Asn Val Ala Thr Glu Leu Gln Ala Tyr Ala
1 5 10 15
Lys Leu His Leu Glu Arg Ser Tyr Asp Tyr Leu Leu Ser Ala Ala Tyr
20 25 30
Phe Asn Asn Tyr Gln Thr Asn Arg Ala Gly Phe Ser Lys Leu Phe Lys
35 40 45
Lys Leu Ser Asp Glu Ala Trp Ser Lys Thr Ile Asp Ile Ile Lys His
50 55 60
Val Thr Lys Arg Gly Asp Lys Met Asn Phe Asp Gln His Ser Thr Met
65 70 75 80
Lys Thr Glu Arg Lys Asn Tyr Thr Ala Glu Asn His Glu Leu Glu Ala
85 90 95
Leu Ala Lys Ala Leu Asp Thr Gln Lys Glu Leu Ala Glu Arg Ala Phe
100 105 110
Tyr Ile His Arg Glu Ala Thr Arg Asn Ser Gln His Leu His Asp Pro
115 120 125
Glu Ile Ala Gln Tyr Leu Glu Glu Glu Phe Ile Glu Asp His Ala Glu
130 135 140
Lys Ile Arg Thr Leu Ala Gly His Thr Ser Asp Leu Lys Lys Phe Ile
145 150 155 160
Thr Ala Asn Asn Gly His Asp Leu Ser Leu Ala Leu Tyr Val Phe Asp
165 170 175
Glu Tyr Leu Gln Lys Thr Val
180
<210> 72
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 幽门螺旋杆菌铁蛋白
<400> 72
Met Leu Ser Lys Asp Ile Ile Lys Leu Leu Asn Glu Gln Val Asn Lys
1 5 10 15
Glu Met Asn Ser Ser Asn Leu Tyr Met Ser Met Ser Ser Trp Cys Tyr
20 25 30
Thr His Ser Leu Asp Gly Ala Gly Leu Phe Leu Phe Asp His Ala Ala
35 40 45
Glu Glu Tyr Glu His Ala Lys Lys Leu Ile Ile Phe Leu Asn Glu Asn
50 55 60
Asn Val Pro Val Gln Leu Thr Ser Ile Ser Ala Pro Glu His Lys Phe
65 70 75 80
Glu Gly Leu Thr Gln Ile Phe Gln Lys Ala Tyr Glu His Glu Gln His
85 90 95
Ile Ser Glu Ser Ile Asn Asn Ile Val Asp His Ala Ile Lys Ser Lys
100 105 110
Asp His Ala Thr Phe Asn Phe Leu Gln Trp Tyr Val Ala Glu Gln His
115 120 125
Glu Glu Glu Val Leu Phe Lys Asp Ile Leu Asp Lys Ile Glu Leu Ile
130 135 140
Gly Asn Glu Asn His Gly Leu Tyr Leu Ala Asp Gln Tyr Val Lys Gly
145 150 155 160
Ile Ala Lys Ser Arg Lys Ser
165
<210> 73
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 乙肝表面抗原HBsAg
<400> 73
Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln
1 5 10 15
Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu Thr Ile Pro Gln Ser Leu
20 25 30
Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ser Pro Val Cys
35 40 45
Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser
50 55 60
Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Met Cys Leu Arg Arg Phe
65 70 75 80
Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys Leu Ile Phe Leu Leu Val
85 90 95
Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Ile Pro Gly
100 105 110
Ser Thr Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro Ala
115 120 125
Gln Gly Asn Ser Met Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Thr Asp
130 135 140
Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Lys
145 150 155 160
Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu
165 170 175
Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu
180 185 190
Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Pro Ser Leu Tyr Ser Ile
195 200 205
Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile Phe Phe Cys Leu Trp Val
210 215 220
Tyr Ile
225
<210> 74
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 信号肽_1
<400> 74
Met Gly Val Pro Ala Val Pro Glu Ala Ser Ser Pro Arg Trp Gly Thr
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ala Ile Phe Leu Ala Ala Ser Arg Gly Leu Val Ala Ala
20 25 30
<210> 75
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 信号肽_2
<400> 75
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser
1 5 10
<210> 76
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD Beta突变株
<400> 76
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
210 215 220
<210> 77
<211> 288
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD Beta突变株
<400> 77
Gln Cys Val Asn Phe Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Ala Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Gly Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu His Ile Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
225 230 235 240
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
245 250 255
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
260 265 270
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
275 280 285
<210> 78
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> foldon（噬菌体T4纤维蛋白C）
<400> 78
Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp
1 5 10 15
Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu
20 25
<210> 79
<211> 557
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-NTD-foldon融合（Beta突变株）
<400> 79
Gln Cys Val Asn Phe Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Ala Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Gly Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu His Ile Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
225 230 235 240
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
245 250 255
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
260 265 270
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
275 280 285
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
290 295 300
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
305 310 315 320
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
325 330 335
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
340 345 350
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
355 360 365
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
370 375 380
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
385 390 395 400
Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
405 410 415
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
420 425 430
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
435 440 445
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
450 455 460
Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
465 470 475 480
Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
485 490 495
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
500 505 510
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly Ser Gly
515 520 525
Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg
530 535 540
Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly
545 550 555
<210> 80
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-foldon Beta突变株
<400> 80
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr
225 230 235 240
Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly
245 250 255
<210> 81
<211> 320
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-foldon Beta突变株
<400> 81
Gln Cys Val Asn Phe Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Ala Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Gly Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu His Ile Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
225 230 235 240
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
245 250 255
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
260 265 270
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
275 280 285
Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala
290 295 300
Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly
305 310 315 320
<210> 82
<211> 1270
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Beta501Y.V2表面糖蛋白
<400> 82
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Phe Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Ala
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Gly Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu His Ile Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr
245 250 255
Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe
260 265 270
Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys
275 280 285
Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser Phe Thr
290 295 300
Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro Thr
305 310 315 320
Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly
325 330 335
Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg
340 345 350
Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser
355 360 365
Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu
370 375 380
Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg
385 390 395 400
Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Asn Ile Ala
405 410 415
Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala
420 425 430
Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr
435 440 445
Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp
450 455 460
Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val
465 470 475 480
Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro
485 490 495
Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe
500 505 510
Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr
515 520 525
Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr
530 535 540
Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln
545 550 555 560
Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp Pro
565 570 575
Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val
580 585 590
Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val Ala Val Leu
595 600 605
Tyr Gln Gly Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile His Ala Asp
610 615 620
Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser Asn Val Phe
625 630 635 640
Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val Asn Asn Ser
645 650 655
Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala Ser Tyr Gln
660 665 670
Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala Ser Gln Ser
675 680 685
Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Val Glu Asn Ser Val Ala Tyr
690 695 700
Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val Thr
705 710 715 720
Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys Thr
725 730 735
Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu Gln
740 745 750
Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr Gly Ile Ala
755 760 765
Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln Val Lys Gln
770 775 780
Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe Asn Phe Ser
785 790 795 800
Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu
805 810 815
Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Ile Lys
820 825 830
Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys
835 840 845
Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp
850 855 860
Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr
865 870 875 880
Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala
885 890 895
Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val
900 905 910
Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile
915 920 925
Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly Lys
930 935 940
Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val
945 950 955 960
Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp
965 970 975
Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg
980 985 990
Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln
995 1000 1005
Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr
1010 1015 1020
Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys
1025 1030 1035 1040
Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly
1045 1050 1055
Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe
1060 1065 1070
Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg
1075 1080 1085
Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg
1090 1095 1100
Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser
1105 1110 1115 1120
Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp
1125 1130 1135
Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr
1140 1145 1150
Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly
1155 1160 1165
Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn
1170 1175 1180
Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1185 1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly
1205 1210 1215
Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met Leu Cys
1220 1225 1230
Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys Ser Cys Gly
1235 1240 1245
Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu Lys Gly
1250 1255 1260
Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 83
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD Gamma突变株
<400> 83
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Thr Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
210 215 220
<210> 84
<211> 291
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD Gamma突变株
<400> 84
Gln Cys Val Asn Phe Thr Asn Arg Thr Gln Leu Pro Ser Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Tyr Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Ser Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys
290
<210> 85
<211> 560
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-NTD-foldon融合（Gamma突变株）
<400> 85
Gln Cys Val Asn Phe Thr Asn Arg Thr Gln Leu Pro Ser Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Tyr Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Ser Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
325 330 335
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
340 345 350
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
355 360 365
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
370 375 380
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
385 390 395 400
Gln Thr Gly Thr Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
405 410 415
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
420 425 430
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
435 440 445
Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser
450 455 460
Thr Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln
465 470 475 480
Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg
485 490 495
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys
500 505 510
Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
515 520 525
Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala
530 535 540
Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly
545 550 555 560
<210> 86
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-foldon Gamma突变株
<400> 86
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Thr Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr
225 230 235 240
Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly
245 250 255
<210> 87
<211> 323
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD-foldon Gamma突变株
<400> 87
Gln Cys Val Asn Phe Thr Asn Arg Thr Gln Leu Pro Ser Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Tyr Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Ser Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp
290 295 300
Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr
305 310 315 320
Phe Leu Gly
<210> 88
<211> 1273
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Gamma501Y.V3表面糖蛋白
<400> 88
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Phe Thr Asn Arg Thr Gln Leu Pro Ser Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Tyr Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Ser Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Thr Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Gly Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu Tyr Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu
1010 1015 1020
Ala Ala Ile Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val
1025 1030 1035 1040
Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala
1045 1050 1055
Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu
1060 1065 1070
Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His
1075 1080 1085
Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val
1090 1095 1100
Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr
1105 1110 1115 1120
Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr
1125 1130 1135
Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu
1140 1145 1150
Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp
1155 1160 1165
Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Phe Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp
1170 1175 1180
Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu
1185 1190 1195 1200
Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile
1205 1210 1215
Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile
1220 1225 1230
Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val
1250 1255 1260
Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 89
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 柔性接头
<400> 89
Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
<210> 90
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 连接子序列
<400> 90
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe
1 5 10
<210> 91
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 信号肽_3
<400> 91
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser
<210> 92
<211> 566
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A型（H1N1）
<400> 92
Met Lys Ala Ile Leu Val Val Met Leu Tyr Thr Phe Thr Thr Ala Asn
1 5 10 15
Ala Asp Thr Leu Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr
20 25 30
Val Asp Thr Val Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn
35 40 45
Leu Leu Glu Asp Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Lys Leu Arg Gly Val
50 55 60
Ala Pro Leu His Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Ile Leu Gly
65 70 75 80
Asn Pro Glu Cys Glu Ser Leu Ser Thr Ala Arg Ser Trp Ser Tyr Ile
85 90 95
Val Glu Thr Ser Asn Ser Asp Asn Gly Thr Cys Tyr Pro Gly Asp Phe
100 105 110
Ile Asn Tyr Glu Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe
115 120 125
Glu Arg Phe Glu Ile Phe Pro Lys Thr Ser Ser Trp Pro Asn His Asp
130 135 140
Ser Asp Asn Gly Val Thr Ala Ala Cys Pro His Ala Gly Ala Lys Ser
145 150 155 160
Phe Tyr Lys Asn Leu Ile Trp Leu Val Lys Lys Gly Lys Ser Tyr Pro
165 170 175
Lys Ile Asn Gln Thr Tyr Ile Asn Asp Lys Gly Lys Glu Val Leu Val
180 185 190
Leu Trp Gly Ile His His Pro Pro Thr Ile Ala Asp Gln Gln Ser Leu
195 200 205
Tyr Gln Asn Ala Asp Ala Tyr Val Phe Val Gly Thr Ser Arg Tyr Ser
210 215 220
Lys Lys Phe Lys Pro Glu Ile Ala Thr Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln
225 230 235 240
Glu Gly Arg Met Asn Tyr Tyr Trp Thr Leu Val Glu Pro Gly Asp Lys
245 250 255
Ile Thr Phe Glu Ala Thr Gly Asn Leu Val Ala Pro Arg Tyr Ala Phe
260 265 270
Thr Met Glu Arg Asp Ala Gly Ser Gly Ile Ile Ile Ser Asp Thr Pro
275 280 285
Val His Asp Cys Asn Thr Thr Cys Gln Thr Pro Glu Gly Ala Ile Asn
290 295 300
Thr Ser Leu Pro Phe Gln Asn Val His Pro Ile Thr Ile Gly Lys Cys
305 310 315 320
Pro Lys Tyr Val Lys Ser Thr Lys Leu Arg Leu Ala Thr Gly Leu Arg
325 330 335
Asn Val Pro Ser Ile Gln Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly
340 345 350
Phe Ile Glu Gly Gly Trp Thr Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr
355 360 365
His His Gln Asn Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ala Ala Asp Leu Lys Ser
370 375 380
Thr Gln Asn Ala Ile Asp Lys Ile Thr Asn Lys Val Asn Ser Val Ile
385 390 395 400
Glu Lys Met Asn Thr Gln Phe Thr Ala Val Gly Lys Glu Phe Asn His
405 410 415
Leu Glu Lys Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe
420 425 430
Leu Asp Ile Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn
435 440 445
Glu Arg Thr Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu
450 455 460
Lys Val Arg Asn Gln Leu Lys Asn Asn Ala Lys Glu Ile Gly Asn Gly
465 470 475 480
Cys Phe Glu Phe Tyr His Lys Cys Asp Asn Thr Cys Met Glu Ser Val
485 490 495
Lys Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Pro Lys Tyr Ser Glu Glu Ala Lys Leu
500 505 510
Asn Arg Glu Lys Ile Asp Gly Val Lys Leu Asp Ser Thr Arg Ile Tyr
515 520 525
Gln Ile Leu Ala Ile Tyr Ser Thr Val Ala Ser Ser Leu Val Leu Val
530 535 540
Val Ser Leu Gly Ala Ile Ser Phe Trp Met Cys Ser Asn Gly Ser Leu
545 550 555 560
Gln Cys Arg Ile Cys Ile
565
<210> 93
<211> 566
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> A型（H3N2）
<400> 93
Met Lys Thr Ile Ile Ala Leu Ser Tyr Ile Leu Cys Leu Val Phe Ala
1 5 10 15
Gln Lys Ile Pro Gly Asn Asp Asn Ser Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly
20 25 30
His His Ala Val Pro Asn Gly Thr Ile Val Lys Thr Ile Thr Asn Asp
35 40 45
Arg Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu Leu Val Gln Asn Ser Ser Ile
50 55 60
Gly Glu Ile Cys Asp Ser Pro His Gln Ile Leu Asp Gly Gly Asn Cys
65 70 75 80
Thr Leu Ile Asp Ala Leu Leu Gly Asp Pro Gln Cys Asp Gly Phe Gln
85 90 95
Asn Lys Glu Trp Asp Leu Phe Val Glu Arg Ser Arg Ala Asn Ser Asn
100 105 110
Cys Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Leu Val
115 120 125
Ala Ser Ser Gly Thr Leu Glu Phe Lys Asn Glu Ser Phe Asn Trp Thr
130 135 140
Gly Val Lys Gln Asn Gly Thr Ser Ser Ala Cys Ile Arg Gly Ser Ser
145 150 155 160
Ser Ser Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Thr His Leu Asn Tyr Thr
165 170 175
Tyr Pro Ala Leu Asn Val Thr Met Pro Asn Asn Glu Gln Phe Asp Lys
180 185 190
Leu Tyr Ile Trp Gly Val His His Pro Ser Thr Asp Lys Asp Gln Ile
195 200 205
Ser Leu Phe Ala Gln Pro Ser Gly Arg Ile Thr Val Ser Thr Lys Arg
210 215 220
Ser Gln Gln Ala Val Ile Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Arg Ile Arg
225 230 235 240
Asp Ile Pro Ser Arg Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly
245 250 255
Asp Ile Leu Leu Ile Asn Ser Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly
260 265 270
Tyr Phe Lys Ile Arg Ser Gly Lys Ser Ser Ile Met Arg Ser Asp Ala
275 280 285
Pro Ile Gly Lys Cys Lys Ser Glu Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile
290 295 300
Pro Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val Asn Arg Ile Thr Tyr Gly Ala
305 310 315 320
Cys Pro Arg Tyr Val Lys Gln Ser Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met
325 330 335
Arg Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr Arg Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala
340 345 350
Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly
355 360 365
Phe Arg His Gln Asn Ser Glu Gly Arg Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys
370 375 380
Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Leu
385 390 395 400
Ile Gly Lys Thr Asn Glu Lys Phe His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser
405 410 415
Glu Val Glu Gly Arg Val Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr
420 425 430
Lys Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu
435 440 445
Asn Gln His Thr Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe
450 455 460
Glu Lys Thr Lys Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Met Gly Asn
465 470 475 480
Gly Cys Phe Lys Ile Tyr His Lys Cys Asp Asn Ala Cys Ile Gly Ser
485 490 495
Ile Arg Asn Glu Thr Tyr Asp His Asn Val Tyr Arg Asp Glu Ala Leu
500 505 510
Asn Asn Arg Phe Gln Ile Lys Gly Val Glu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys
515 520 525
Asp Trp Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ala Met Ser Cys Phe Leu Leu Cys
530 535 540
Ile Ala Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile
545 550 555 560
Arg Cys Asn Ile Cys Ile
565
<210> 94
<211> 582
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B型（B/Washington/02/2019）
<400> 94
Met Lys Ala Ile Ile Val Leu Leu Met Val Val Thr Ser Asn Ala Asp
1 5 10 15
Arg Ile Cys Thr Gly Ile Thr Ser Ser Asn Ser Pro His Val Val Lys
20 25 30
Thr Ala Thr Gln Gly Glu Val Asn Val Thr Gly Val Ile Pro Leu Thr
35 40 45
Thr Thr Pro Thr Lys Ser His Phe Ala Asn Leu Lys Gly Thr Glu Thr
50 55 60
Arg Gly Lys Leu Cys Pro Lys Cys Leu Asn Cys Thr Asp Leu Asp Val
65 70 75 80
Ala Leu Gly Arg Pro Lys Cys Thr Gly Lys Ile Pro Ser Ala Arg Val
85 90 95
Ser Ile Leu His Glu Val Arg Pro Val Thr Ser Gly Cys Phe Pro Ile
100 105 110
Met His Asp Arg Thr Lys Ile Arg Gln Leu Pro Asn Leu Leu Arg Gly
115 120 125
Tyr Glu His Val Arg Leu Ser Thr His Asn Val Ile Asn Ala Glu Asp
130 135 140
Ala Pro Gly Arg Pro Tyr Glu Ile Gly Thr Ser Gly Ser Cys Pro Asn
145 150 155 160
Ile Thr Asn Gly Asn Gly Phe Phe Ala Thr Met Ala Trp Ala Val Pro
165 170 175
Lys Asn Lys Thr Ala Thr Asn Pro Leu Thr Ile Glu Val Pro Tyr Ile
180 185 190
Cys Thr Glu Gly Glu Asp Gln Ile Thr Val Trp Gly Phe His Ser Asp
195 200 205
Asn Glu Thr Gln Met Ala Lys Leu Tyr Gly Asp Ser Lys Pro Gln Lys
210 215 220
Phe Thr Ser Ser Ala Asn Gly Val Thr Thr His Tyr Val Ser Gln Ile
225 230 235 240
Gly Gly Phe Pro Asn Gln Thr Glu Asp Gly Gly Leu Pro Gln Ser Gly
245 250 255
Arg Ile Val Val Asp Tyr Met Val Gln Lys Ser Gly Lys Thr Gly Thr
260 265 270
Ile Thr Tyr Gln Arg Gly Ile Leu Leu Pro Gln Lys Val Trp Cys Ala
275 280 285
Ser Gly Arg Ser Lys Val Ile Lys Gly Ser Leu Pro Leu Ile Gly Glu
290 295 300
Ala Asp Cys Leu His Glu Lys Tyr Gly Gly Leu Asn Lys Ser Lys Pro
305 310 315 320
Tyr Tyr Thr Gly Glu His Ala Lys Ala Ile Gly Asn Cys Pro Ile Trp
325 330 335
Val Lys Thr Pro Leu Lys Leu Ala Asn Gly Thr Lys Tyr Arg Pro Pro
340 345 350
Ala Lys Leu Leu Lys Glu Arg Gly Phe Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe
355 360 365
Leu Glu Gly Gly Trp Glu Gly Met Ile Ala Gly Trp His Gly Tyr Thr
370 375 380
Ser His Gly Ala His Gly Val Ala Val Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr
385 390 395 400
Gln Glu Ala Ile Asn Lys Ile Thr Lys Asn Leu Asn Ser Leu Ser Glu
405 410 415
Leu Glu Val Lys Asn Leu Gln Arg Leu Ser Gly Ala Met Asp Glu Leu
420 425 430
His Asn Glu Ile Leu Glu Leu Asp Glu Lys Val Asp Asp Leu Arg Ala
435 440 445
Asp Thr Ile Ser Ser Gln Ile Glu Leu Ala Val Leu Leu Ser Asn Glu
450 455 460
Gly Ile Ile Asn Ser Glu Asp Glu His Leu Leu Ala Leu Glu Arg Lys
465 470 475 480
Leu Lys Lys Met Leu Gly Pro Ser Ala Val Glu Ile Gly Asn Gly Cys
485 490 495
Phe Glu Thr Lys His Lys Cys Asn Gln Thr Cys Leu Asp Arg Ile Ala
500 505 510
Ala Gly Thr Phe Asp Ala Gly Glu Phe Ser Leu Pro Thr Phe Asp Ser
515 520 525
Leu Asn Ile Thr Ala Ala Ser Leu Asn Asp Asp Gly Leu Asp Asn His
530 535 540
Thr Ile Leu Leu Tyr Tyr Ser Thr Ala Ala Ser Ser Leu Ala Val Thr
545 550 555 560
Leu Met Ile Ala Ile Phe Val Val Tyr Met Val Ser Arg Asp Asn Val
565 570 575
Ser Cys Ser Ile Cys Leu
580
<210> 95
<211> 584
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> B型（B/PHUKET/3073/2013）
<400> 95
Met Lys Ala Ile Ile Val Leu Leu Met Val Val Thr Ser Asn Ala Asp
1 5 10 15
Arg Ile Cys Thr Gly Ile Thr Ser Ser Asn Ser Pro His Val Val Lys
20 25 30
Thr Ala Thr Gln Gly Glu Val Asn Val Thr Gly Val Ile Pro Leu Thr
35 40 45
Thr Thr Pro Thr Lys Ser Tyr Phe Ala Asn Leu Lys Gly Thr Arg Thr
50 55 60
Arg Gly Lys Leu Cys Pro Asp Cys Leu Asn Cys Thr Asp Leu Asp Val
65 70 75 80
Ala Leu Gly Arg Pro Met Cys Val Gly Thr Thr Pro Ser Ala Lys Ala
85 90 95
Ser Ile Leu His Glu Val Arg Pro Val Thr Ser Gly Cys Phe Pro Ile
100 105 110
Met His Asp Arg Thr Lys Ile Arg Gln Leu Pro Asn Leu Leu Arg Gly
115 120 125
Tyr Glu Lys Ile Arg Leu Ser Thr Gln Asn Val Ile Asp Ala Glu Lys
130 135 140
Ala Pro Gly Gly Pro Tyr Arg Leu Gly Thr Ser Gly Ser Cys Pro Asn
145 150 155 160
Ala Thr Ser Lys Ile Gly Phe Phe Ala Thr Met Ala Trp Ala Val Pro
165 170 175
Lys Asp Asn Tyr Lys Asn Ala Thr Asn Pro Leu Thr Val Glu Val Pro
180 185 190
Tyr Ile Cys Thr Glu Gly Glu Asp Gln Ile Thr Val Trp Gly Phe His
195 200 205
Ser Asp Asn Lys Thr Gln Met Lys Ser Leu Tyr Gly Asp Ser Asn Pro
210 215 220
Gln Lys Phe Thr Ser Ser Ala Asn Gly Val Thr Thr His Tyr Val Ser
225 230 235 240
Gln Ile Gly Asp Phe Pro Asp Gln Thr Glu Asp Gly Gly Leu Pro Gln
245 250 255
Ser Gly Arg Ile Val Val Asp Tyr Met Met Gln Lys Pro Gly Lys Thr
260 265 270
Gly Thr Ile Val Tyr Gln Arg Gly Val Leu Leu Pro Gln Lys Val Trp
275 280 285
Cys Ala Ser Gly Arg Ser Lys Val Ile Lys Gly Ser Leu Pro Leu Ile
290 295 300
Gly Glu Ala Asp Cys Leu His Glu Glu Tyr Gly Gly Leu Asn Lys Ser
305 310 315 320
Lys Pro Tyr Tyr Thr Gly Lys His Ala Lys Ala Ile Gly Asn Cys Pro
325 330 335
Ile Trp Val Lys Thr Pro Leu Lys Leu Ala Asn Gly Thr Lys Tyr Arg
340 345 350
Pro Pro Ala Lys Leu Leu Lys Glu Arg Gly Phe Phe Gly Ala Ile Ala
355 360 365
Gly Phe Leu Glu Gly Gly Trp Glu Gly Met Ile Ala Gly Trp His Gly
370 375 380
Tyr Thr Ser His Gly Ala His Gly Val Ala Val Ala Ala Asp Leu Lys
385 390 395 400
Ser Thr Gln Glu Ala Ile Asn Lys Ile Thr Lys Asn Leu Asn Ser Leu
405 410 415
Ser Glu Leu Glu Val Lys Asn Leu Gln Arg Leu Ser Gly Ala Met Asp
420 425 430
Glu Leu His Asn Glu Ile Leu Glu Leu Asp Glu Lys Val Asp Asp Leu
435 440 445
Arg Ala Asp Thr Ile Ser Ser Gln Ile Glu Leu Ala Val Leu Leu Ser
450 455 460
Asn Glu Gly Ile Ile Asn Ser Glu Asp Glu His Leu Leu Ala Leu Glu
465 470 475 480
Arg Lys Leu Lys Lys Met Leu Gly Pro Ser Ala Val Asp Ile Gly Asn
485 490 495
Gly Cys Phe Glu Thr Lys His Lys Cys Asn Gln Thr Cys Leu Asp Arg
500 505 510
Ile Ala Ala Gly Thr Phe Asn Ala Gly Glu Phe Ser Leu Pro Thr Phe
515 520 525
Asp Ser Leu Asn Ile Thr Ala Ala Ser Leu Asn Asp Asp Gly Leu Asp
530 535 540
Asn His Thr Ile Leu Leu Tyr Tyr Ser Thr Ala Ala Ser Ser Leu Ala
545 550 555 560
Val Thr Leu Met Leu Ala Ile Phe Ile Val Tyr Met Val Ser Arg Asp
565 570 575
Asn Val Ser Cys Ser Ile Cys Leu
580
<210> 96
<211> 579
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD-NTD-foldon融合（wuhan）
<400> 96
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro
20 25 30
Ala Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val
35 40 45
Phe Arg Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe
50 55 60
Phe Ser Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn
65 70 75 80
Gly Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val
85 90 95
Tyr Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe
100 105 110
Gly Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn
115 120 125
Ala Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp
130 135 140
Pro Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu
145 150 155 160
Ser Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr
165 170 175
Val Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe
180 185 190
Lys Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys
195 200 205
Ile Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln
210 215 220
Gly Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn
225 230 235 240
Ile Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr
245 250 255
Pro Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr
260 265 270
Val Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn
275 280 285
Gly Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu
290 295 300
Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln
305 310 315 320
Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro
325 330 335
Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg
340 345 350
Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val
355 360 365
Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys
370 375 380
Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn
385 390 395 400
Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile
405 410 415
Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro
420 425 430
Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp
435 440 445
Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys
450 455 460
Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln
465 470 475 480
Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe
485 490 495
Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln
500 505 510
Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
515 520 525
Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys
530 535 540
Val Asn Phe Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp
545 550 555 560
Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr
565 570 575
Phe Leu Gly
<210> 97
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（WH）8Cys
<400> 97
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys
210 215
<210> 98
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（WH）10Cys（N端加2个）
<400> 98
Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser
1 5 10 15
Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln
20 25 30
Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
35 40 45
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
50 55 60
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
85 90 95
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
100 105 110
Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys
115 120 125
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
130 135 140
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
145 150 155 160
Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
165 170 175
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn
180 185 190
Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
195 200 205
Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
210 215 220
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys
225 230 235 240
Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys
245
<210> 99
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（WH）10Cys（C端加2个）
<400> 99
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn
210 215 220
Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys
225 230 235 240
Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp
245 250 255
Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys
260 265 270
Ser Phe
<210> 100
<211> 303
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（WH）12Cys（N端和C端加2个）
<400> 100
Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser
1 5 10 15
Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln
20 25 30
Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
35 40 45
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
50 55 60
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
85 90 95
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
100 105 110
Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys
115 120 125
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
130 135 140
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
145 150 155 160
Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
165 170 175
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn
180 185 190
Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
195 200 205
Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
210 215 220
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys
225 230 235 240
Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly
245 250 255
Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro
260 265 270
Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg
275 280 285
Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
290 295 300
<210> 101
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（Africa）8Cys
<400> 101
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys
210 215
<210> 102
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（Africa）10Cys（N端加2个）
<400> 102
Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser
1 5 10 15
Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln
20 25 30
Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
35 40 45
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
50 55 60
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
85 90 95
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
100 105 110
Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Asn
115 120 125
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
130 135 140
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
145 150 155 160
Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
165 170 175
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn
180 185 190
Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
195 200 205
Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
210 215 220
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys
225 230 235 240
Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys
245
<210> 103
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（Africa）10Cys（C端加2个）
<400> 103
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn
210 215 220
Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys
225 230 235 240
Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp
245 250 255
Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys
260 265 270
Ser Phe
<210> 104
<211> 303
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（Africa）12Cys（N端和C端加2个）
<400> 104
Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser
1 5 10 15
Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln
20 25 30
Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
35 40 45
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
50 55 60
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
85 90 95
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
100 105 110
Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Asn
115 120 125
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
130 135 140
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
145 150 155 160
Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
165 170 175
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn
180 185 190
Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
195 200 205
Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
210 215 220
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys
225 230 235 240
Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly
245 250 255
Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro
260 265 270
Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg
275 280 285
Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
290 295 300
<210> 105
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（Delta）8Cys
<400> 105
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys
210 215
<210> 106
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（Delta）10Cys（N端加2个）
<400> 106
Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser
1 5 10 15
Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln
20 25 30
Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
35 40 45
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
50 55 60
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
85 90 95
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
100 105 110
Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys
115 120 125
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
130 135 140
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
145 150 155 160
Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
165 170 175
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys Pro Cys Asn
180 185 190
Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
195 200 205
Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
210 215 220
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys
225 230 235 240
Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys
245
<210> 107
<211> 274
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（Delta）10Cys（C端加2个）
<400> 107
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn
210 215 220
Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys
225 230 235 240
Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp
245 250 255
Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys
260 265 270
Ser Phe
<210> 108
<211> 303
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> RBD（Delta）12Cys（N端和C端加2个）
<400> 108
Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys Ser
1 5 10 15
Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val Gln
20 25 30
Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
35 40 45
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
50 55 60
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
85 90 95
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
100 105 110
Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys
115 120 125
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
130 135 140
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
145 150 155 160
Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
165 170 175
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys Pro Cys Asn
180 185 190
Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
195 200 205
Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
210 215 220
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys
225 230 235 240
Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn Gly
245 250 255
Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu Pro
260 265 270
Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val Arg
275 280 285
Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
290 295 300
<210> 109
<211> 305
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD（WH）
<400> 109
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe
305
<210> 110
<211> 302
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD（Africa）
<400> 110
Gln Cys Val Asn Phe Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Ala Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Gly Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu His Ile Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
225 230 235 240
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
245 250 255
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
260 265 270
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
275 280 285
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe
290 295 300
<210> 111
<211> 303
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> NTD（Delta）
<400> 111
Gln Cys Val Asn Leu Arg Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Ile Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Asp Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Gly Val
130 135 140
Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe
145 150 155 160
Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu
165 170 175
Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His
180 185 190
Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu
195 200 205
Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln
210 215 220
Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser
225 230 235 240
Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln
245 250 255
Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp
260 265 270
Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu
275 280 285
Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe
290 295 300

Claims (10)

1.融合蛋白，其包含：1)SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)N端结构域(NTD)或其功能活性片段；以及2)一种或多种选自下组的多肽：P2或其功能活性片段，foldon结构域或其功能活性片段，铁蛋白或其功能活性片段，以及乙肝表面抗原(HBsAg)或其功能活性片段。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述NTD源自SARS-CoV-2野生型或其突变体S蛋白的NTD。
3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其中所述SAR-CoV-2突变体选自下组中的任一种：Gamma突变体、Beta突变体、Delta突变体和Alpha突变体。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含在选自下组的一个或多个氨基酸位点的突变：L18、T19、T20、P26、D80、D138、R190、D215、L242-244和R246。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含选自下组的一个或多个氨基酸突变：L18F、T19R、T20N、P26S、D80A、D138Y、R190S、D215G、L242-244del和R246I。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、D80A、D215G、L242-244del和R246I突变。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含L18F、T20N、P26S、D138Y和R190S氨基酸突变。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的融合蛋白，其中所述NTD包含SEQ ID NO:37、38、77、84和109-111中任一项所示的氨基酸序列。
9.免疫原性组合物，其包含权利要求1-8中任一项所述的融合蛋白。
10.一种或多种分离的核酸分子，其编码权利要求1-8中任一项所述的融合蛋白。
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