CN113907025B - 一种珍珠龙胆石斑鱼的保护液及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种珍珠龙胆石斑鱼的保护液及其应用。所述保护液为包含维生素C和壳聚糖的牡蛎粘液水溶液。所述应用为珍珠龙胆石斑鱼无水保活运输。本发明通过采用含有维生素C和壳聚糖的牡蛎粘液水溶液作为保护液，提高鱼体的免疫力以应对低温无水环境的胁迫，维持珍珠龙胆石斑鱼的休眠状态，延长无水保活运输时间。本发明提供的保护液提高珍珠龙胆石斑鱼在无水运输中的存活率及存活时间，且该保护液对珍珠龙胆石斑鱼无害，不影响鱼的肉质和营养，具有良好的推广和应用前景。

Description

一种珍珠龙胆石斑鱼的保护液及其应用

技术领域

本发明涉及多糖应用的领域，具体地，涉及一种珍珠龙胆石斑鱼的保护液及其应用。

背景技术

珍珠龙胆石斑鱼，是以棕点石斑鱼(俗称老虎斑)与鞍带石斑鱼(俗称龙胆斑)杂交的新品种，俗称虎龙斑，具有鱼皮厚、胶原蛋白含量高、肉质纤维细腻等优点，并且生长速度快，8～10个月可长到1kg，是广东、海南地区主要的海水养殖品种，其中广东地区石斑鱼产量占全国的60％以上，其养殖基地主要分布在沿海的深圳、珠海、湛江等。

珍珠龙胆石斑鱼产于海域，由于产销地域跨度大、保活技术不成熟等原因，导致其运输成本高、运输过程中珍珠龙胆石斑鱼的死亡率较高，从而导致了珍珠龙胆石斑鱼的销售成本增加，不利于产业发展。

鱼类在活体运输过程中，由于水质劣变、振动、低温、低氧等环境变化因素的胁迫而导致鱼体组织损伤、营养物质消耗、生存能力下降等问题，从而提高活鱼运输成本。为了提高鱼体的抗应激作用，目前常采用在运输水体中添加免疫增加剂或抗应激剂。

无水运输是一种可降低鱼类运输成本的新型运输方法，采用运输保护液可以改善鱼体运输过程中的应激程度、适当降低能量物质的消耗。而无水运输方式中最关键的部分就是在运输过程中鱼的状态，一般是让鱼处于休眠状态，从而保证可以进行无水运输。对于不同的鱼类，针对不同的代谢与免疫调节特点开发合适的保护液，对于推动活鱼运输产业发展、扩大销售市场具有非常重要的意义。

发明内容

为降低活鱼在无水保活运输过程中的应激、延长无水保活时间、保证运输后鱼体的品质，本发明的目的是提供一种珍珠龙胆石斑鱼的保护液及其应用。

本发明的第一个目的是提供一种制备牡蛎粘液水溶液的方法。

本发明的第二个目的是提供一种由上述方法制备得到的牡蛎粘液水溶液。

本发明的第三个目的是提供上述方法和/或上述牡蛎粘液水溶液在石斑鱼保活运输中的应用。

本发明的第四个目的是提供一种石斑鱼的保护液。

本发明的第五个目的是提供一种石斑鱼的保护液在珍珠龙胆石斑鱼无水保活运输中的应用。

本发明的第六个目的是提供一种石斑鱼无水保活运输的方法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

本发明提供一种制备牡蛎粘液水溶液的方法，包括以下步骤：取新鲜牡蛎去壳后的全脏器，按照质量比为1:9～1:11加入生理盐水，充分搅拌，离心取上清液。

优选地，所述新鲜牡蛎去壳后的全脏器与生理盐水的质量比为1:10。

优选地，所述生理盐水的盐与水的质量体积比为0.9g:100mL。

本发明还提供一种上述方法制备得到的牡蛎粘液水溶液。

上述方法和/或上述牡蛎粘液水溶液在石斑鱼保活运输中的应用也在本发明的保护范围之内。

优选地，所述保活运输的方式为无水运输。

本发明还提供一种石斑鱼的保护液，所述保护液为含有维生素C及壳聚糖的上述的牡蛎粘液水溶液，所述维生素C的浓度为20～25mg/L；所述壳聚糖的浓度为2～6mg/L。

优选地，所述保护液中所含维生素C的浓度为25mg/L，所含壳聚糖的浓度为4mg/L。

上述保护液在石斑鱼无水保活运输中的应用也在本发明的保护范围之内。

本发明还提供一种石斑鱼无水保活运输的方法，所述方法使用上述的保护液，包括以下步骤：

S1.将鲜活的石斑鱼于暂养液中停食暂养，所述暂养液为含有维生素C和壳聚糖的海水；

S2.将S1停食暂养后的石斑鱼从暂养液中取出，转移至氧气浓度为6.5～7.5mg/L、二氧化碳浓度为75～100mg/L的海水中浸泡3～5min；

S3.将S2浸泡后的石斑鱼从海水中取出，转移至权利要求4所述的保护液中浸泡4～6s；

S4.将S3浸泡后的石斑鱼从保护液中取出，转移至湿度为90％以上的保活袋内，充入氧气并密封，15～18℃进行运输。

优选地，步骤S1中，所述停食暂养的时间为20～24h。

更优选地，步骤S1中，所述停食暂养的时间为24h。

优选地，步骤S1中，所述维生素C的浓度为20～25mg/L；所述壳聚糖的浓度为2～6mg/L。

更优选地，步骤S1中，所述维生素C的浓度为25mg/L；所述壳聚糖的浓度为4mg/L。

优选地，步骤S2中，所述海水的温度为18～20℃，pH为5.6～5.8。

进一步地，步骤S2中，所述海水为新鲜养殖海水。

更优选地，步骤S3中，所述浸泡后的石斑鱼呈鱼体侧翻，刺激无应激反应，呼吸频率为15～18次/min。

优选地，步骤S3中，所述保护液的温度为18～20℃；所述浸泡的时间为5s。

优选地，步骤S4中，所述15～18℃进行运输的时长为12～14h。

优选地，运输结束后，将石斑鱼放入20℃的海水中进行复苏，复苏过程中连续向海水充气。

优选地，上述石斑鱼为珍珠龙胆石斑鱼。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明通过采用含有维生素C和壳聚糖的牡蛎粘液水溶液作为保护液，降低鱼体氧化应激和能量代谢，提高鱼体的免疫力以应对低温无水环境的胁迫，维持珍珠龙胆石斑鱼的休眠状态，延长无水保活运输时间。本发明提供的保护液提高珍珠龙胆石斑鱼在无水运输中的存活率及存活时间，且该保护液对珍珠龙胆石斑鱼无害，不影响鱼的肉质和营养，具有良好的推广和应用前景。

附图说明

图1为珍珠龙胆石斑鱼无水运输后应激反应产物丙二醇的统计结果。

图2为珍珠龙胆石斑鱼无水运输后SOD酶活性的统计结果。

具体实施方式

下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

本发明所用珍珠龙胆石斑鱼均采购自湛江市东海岛石斑鱼养殖基地。

采用保活运输系统进行运输，保活运输系统配备旋流式蛋白质分离器、生物机械过滤器、制冷机、容积为1立方米的PP暂养池。

实施例1一种珍珠龙胆石斑鱼保护液的制备方法

取新鲜牡蛎去壳后的全脏器，按质量加入10倍的生理盐水(盐与水的质量体积比为0.9g:100mL)，人工搅拌10min直至溶液呈澄清透明均质的水溶液，4000rpm离心10min取上清液，得到牡蛎粘液水溶液。向牡蛎粘液水溶液加入维生素C和壳聚糖，使维生素C得终浓度为25mg/L、壳聚糖得终浓度为4mg/L，搅拌均匀，置于4℃下保存备用。

对比例1一种珍珠龙胆石斑鱼保护液的制备方法

在生理盐水(盐与水的质量体积比为0.9g:100mL)中加入维生素C，使维生素C的终浓度为25mg/L，搅拌均匀，置于4℃下保存备用。

对比例2一种珍珠龙胆石斑鱼保护液的制备方法

在生理盐水(盐与水的质量体积比为0.9g:100mL)中加入壳聚糖，使壳聚糖的终浓度为4mg/L，搅拌均匀，置于4℃下保存备用。

对比例3一种珍珠龙胆石斑鱼保护液的制备方法

在生理盐水(盐与水的质量体积比为0.9g:100mL)中加入维生素C和壳聚糖，使维生素C得终浓度为25mg/L、壳聚糖得终浓度为4mg/L。

应用例1不同保护液对珍珠龙胆石斑鱼无水运输的影响

1、实验方法

(1)选取体型大小均一的珍珠龙胆石斑鱼(平均体重550g)，放入实验室保活运输系统。

(2)暂养液的制备：在25℃、330L天然净化海水中加入终浓度为25mg/L的维生素C和终浓度为4mg/L的壳聚糖。

(3)将珍珠龙胆石斑鱼放入装有暂养液的保活运输系统中，停食暂养24h。

(4)休眠液的准备：取50L塑料框，加入15L新鲜养殖海水，降低水温到18～20℃，连续充氧，放入CO₂气体充气石，打开CO₂气体，保持水体中二氧化碳的浓度为75～100mg/L，使水体pH达到5.6，调低CO₂气体流量使水体pH值维持稳定，并保持水体中的溶解氧为6.5～7.5mg/L。

(5)将珍珠龙胆石斑鱼放入休眠液中，当鱼体呈身体侧翻，呼吸频率下降至15～18次/min，刺激无应激反应，即珍珠龙胆石斑鱼进入休眠状态，可进行离水操作。

(6)按照实施例1、对比例1～3所述的方法制备保护液。将休眠的珍珠龙胆石斑鱼平均分为4组，放入18～20℃保护液中浸泡5s。

(7)将经保护液处理后的珍珠龙胆石斑鱼放入湿度为90％以上的保活袋内，充入氧气并密封，置于15～18℃的运输箱中进行运输。从保活袋充氧包装结束开始计时，每2h观察1次，以刺激鱼体无反应作为死亡特征，记录并统计珍珠龙胆石斑鱼的存活时间。

(8)无水运输14h后，将石斑鱼放入20℃的海水中进行复苏，复苏过程中海水连续充气。复苏12h后观察计算珍珠龙胆石斑鱼成活率。

2、实验结果

(1)不同保护液对珍珠龙胆石斑鱼存活时间的影响

表1不同保护液对珍珠龙胆石斑鱼存活时间的影响

如表1所示，与对比例1～3相比，使用实施例1制备得到的保护液用于无水运输，珍珠龙胆石斑鱼的存活时间最长。

(2)不同保护液对珍珠龙胆石斑鱼的成活率的影响

统计结果显示，与对比例1～3相比，使用实施例1制备得到的保护液用于无水运输，复苏后珍珠龙胆石斑鱼成活率最高，存活率为96％。

应用例2珍珠龙胆石斑鱼的无水运输

1、实验方法

(1)选30尾体型大小均一的珍珠龙胆石斑鱼(平均体重550g)，平均分为3组，命名为A组、B组、C组，每组10尾。

(2)按照应用例1的方法配制暂养液。

(3)将B组和C组珍珠龙胆石斑鱼放入暂养液，将A组放入新鲜海水，同时停食暂养24h。

(4)按照应用例1的方法准备休眠液。

(5)将3组珍珠龙胆石斑鱼放入休眠液中，当鱼体呈身体侧翻，呼吸频率下降至15～18次/min，刺激无应激反应，即珍珠龙胆石斑鱼进入休眠状态，可进行离水操作。

(6)按照实施例1的方法制备保护液。将C组珍珠龙胆石斑鱼放入18～20℃的保护液中浸泡5s，将A组和B组珍珠龙胆石斑鱼放入新鲜海水中浸泡5s。

(7)将3组珍珠龙胆石斑鱼放入湿度为90％以上的保活袋内，充入氧气并密封，置于15～18℃的运输箱中进行运输。从保活袋充氧包装结束开始计时。

(8)无水运输14h后，将石斑鱼放入20℃的海水中进行复苏，复苏过程中海水连续充气。

(9)分别于无水运输14h后和复苏12h后，采用丙二醛(MDA)试剂盒(苏州格锐思，G0109W)检测应激产物MDA的含量，采用超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(苏州格锐思，G0101W)检测SOD酶活性，具体方法参考对应试剂盒的说明书。

以不经暂养液及保护液处理的A组作为空白组；以经暂养液处理但不经保护液处理的B组作为暂养液组；以既经暂养液处理又经保护液处理的C作组为保护液组；以10尾新鲜采购的体型大小均一的珍珠龙胆石斑鱼(平均体重550g)作为对照组(新鲜鱼组)，用于比较保活与复苏前后MDA含量及SOD酶活性的差异。

2、实验结果

如图1和图2所示，在停食暂养前，向暂养水体中添加保护液25mg/L的维生素C和4mg/L的壳聚糖能显著减少珍珠龙胆石斑鱼产生MDA，降低鱼体的应激反应，同时SOD酶活性显著上升。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (5)

1.保护液在石斑鱼无水保活运输中的应用，其特征在于，将石斑鱼浸泡于保护液中；所述保护液为含有维生素C及壳聚糖的牡蛎粘液水溶液，所述牡蛎粘液水溶液的制备方法包括以下步骤：取新鲜牡蛎去壳后的全脏器，按照质量比为1:9～1:11加入生理盐水，充分搅拌直至溶液呈澄清透明均质的水溶液，4000 rpm离心10 min，取上清液；所述维生素C的终浓度为20～25 mg/L；所述壳聚糖的终浓度为2～6 mg/L。

2.一种石斑鱼无水保活运输的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1. 将鲜活的石斑鱼于暂养液中停食暂养，所述暂养液为含有维生素C和壳聚糖的海水；所述维生素C的终浓度为20～25 mg/L；所述壳聚糖的终浓度为2～6 mg/L；

S2. 将S1停食暂养后的石斑鱼从暂养液中取出，转移至氧气浓度为6.5～7.5 mg/L、二氧化碳浓度为75～100 mg/L的海水中浸泡3～5 min；

S3. 将S2浸泡后的石斑鱼从海水中取出，转移至保护液中浸泡4～6 s；所述保护液为含有维生素C及壳聚糖的牡蛎粘液水溶液，所述牡蛎粘液水溶液的制备方法包括以下步骤：取新鲜牡蛎去壳后的全脏器，按照质量比为1:9～1:11加入生理盐水，充分搅拌直至溶液呈澄清透明均质的水溶液，4000 rpm离心10 min，取上清液；所述维生素C的终浓度为20～25mg/L；所述壳聚糖的终浓度为2～6 mg/L；

S4. 将S3浸泡后的石斑鱼从保护液中取出，转移至湿度为90%以上的保活袋内，充入氧气并密封，15～18℃进行运输。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述停食暂养的时间为20～24h。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S2中，所述海水的温度为18～20℃，pH为5.6～5.8。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S3中，所述保护液的温度为18～20℃。

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