CN113884582B - 滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法及检测方法 - Google Patents
滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法及检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113884582B CN113884582B CN202010626656.XA CN202010626656A CN113884582B CN 113884582 B CN113884582 B CN 113884582B CN 202010626656 A CN202010626656 A CN 202010626656A CN 113884582 B CN113884582 B CN 113884582B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nourishing
- kidney
- mobile phase
- pill
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000006187 pill Substances 0.000 title claims abstract description 88
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 title claims abstract description 36
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 title description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 54
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 44
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 25
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims abstract description 18
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 15
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 11
- 241000123589 Dipsacus Species 0.000 claims abstract description 10
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 17
- TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rb2 Natural products CC(=CCCC(OC1OC(COC2OCC(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- LQGUBLBATBMXHT-UHFFFAOYSA-N chrysophanol Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O LQGUBLBATBMXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- FFWOKTFYGVYKIR-UHFFFAOYSA-N physcion Chemical compound C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(OC)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O FFWOKTFYGVYKIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 claims description 8
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 claims description 7
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- AMBQHHVBBHTQBF-UHFFFAOYSA-N Loganin Natural products C12C(C)C(O)CC2C(C(=O)OC)=COC1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O AMBQHHVBBHTQBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims description 7
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 claims description 7
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 claims description 7
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 claims description 7
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims description 7
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims description 7
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 claims description 7
- AMBQHHVBBHTQBF-UOUCRYGSSA-N loganin Chemical compound O([C@@H]1OC=C([C@H]2C[C@H](O)[C@H](C)[C@H]21)C(=O)OC)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AMBQHHVBBHTQBF-UOUCRYGSSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- FBFMBWCLBGQEBU-RXMALORBSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[[(3s,5r,6s,8r,9r,10r,12r,13r,14r,17s)-3,12-dihydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-17-[(2s)-6-methyl-2-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhept-5-en-2-yl]-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecah Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(C[C@@H]([C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O FBFMBWCLBGQEBU-RXMALORBSA-N 0.000 claims description 6
- FBFMBWCLBGQEBU-GYMUUCMZSA-N 20-gluco-ginsenoside-Rf Natural products O([C@](CC/C=C(\C)/C)(C)[C@@H]1[C@H]2[C@H](O)C[C@H]3[C@](C)([C@]2(C)CC1)C[C@H](O[C@@H]1[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@H]1C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]31C)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 FBFMBWCLBGQEBU-GYMUUCMZSA-N 0.000 claims description 6
- UFNDONGOJKNAES-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rb1 Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(COC2OC(CO)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CC(O)C45C)C UFNDONGOJKNAES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HYPFYJBWSTXDAS-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rd Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O)C2CCC3(C)C4CCC5C(C)(C)C(CCC5(C)C4CC(O)C23C)OC6OC(CO)C(O)C(O)C6OC7OC(CO)C(O)C(O)C7O)C HYPFYJBWSTXDAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241001530209 Swertia Species 0.000 claims description 6
- YURJSTAIMNSZAE-UHFFFAOYSA-N UNPD89172 Natural products C1CC(C2(CC(C3C(C)(C)C(O)CCC3(C)C2CC2O)OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O YURJSTAIMNSZAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 claims description 6
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 claims description 6
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 claims description 6
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 claims description 6
- CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N chikusetsusaponin LM5 Natural products C1CC(C2(CC(O)C3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC(C(C(O)C1O)O)OC1COC1OC(CO)C(O)C1O CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GZYPWOGIYAIIPV-JBDTYSNRSA-N ginsenoside Rb1 Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GZYPWOGIYAIIPV-JBDTYSNRSA-N 0.000 claims description 6
- JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N ginsenoside Rc Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@H]1O JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N 0.000 claims description 6
- PWAOOJDMFUQOKB-WCZZMFLVSA-N ginsenoside Re Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2[C@H]3C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]3(C)[C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@H]([C@H]4[C@H](O)C3)[C@](C)(CCC=C(C)C)O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C)(C)C2)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O PWAOOJDMFUQOKB-WCZZMFLVSA-N 0.000 claims description 6
- YURJSTAIMNSZAE-HHNZYBFYSA-N ginsenoside Rg1 Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(C[C@@H]([C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YURJSTAIMNSZAE-HHNZYBFYSA-N 0.000 claims description 6
- CBEHEBUBNAGGKC-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rg1 Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O)C2CCC3(C)C2C(O)CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CC(OC6OC(CO)C(O)C(O)C6O)C34C)C CBEHEBUBNAGGKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Rc Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC2OC(CO)C(O)C2O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- AOGZLQUEBLOQCI-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Re Natural products CC1OC(OCC2OC(OC3CC4(C)C(CC(O)C5C(CCC45C)C(C)(CCC=C(C)C)OC6OC(CO)C(O)C(O)C6O)C7(C)CCC(O)C(C)(C)C37)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O AOGZLQUEBLOQCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N physcion Natural products C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 6
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 6
- UOJAEODBOCLNBU-UHFFFAOYSA-N vinaginsenoside R4 Natural products C1CC(C2(CC(O)C3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O UOJAEODBOCLNBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 claims description 6
- UGNZSMZSJYOGNX-UHFFFAOYSA-N Isoviocristine Natural products O=C1C=C(C)C(=O)C2=CC3=CC(OC)=CC(O)=C3C(O)=C21 UGNZSMZSJYOGNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- WLXGUTUUWXVZNM-UHFFFAOYSA-N anthraglycoside A Natural products C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(OC)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O WLXGUTUUWXVZNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- NZPQWZZXRKZCDU-UHFFFAOYSA-N chrysophanol Natural products Cc1cc(O)c2C(=O)c3c(O)cccc3Oc2c1 NZPQWZZXRKZCDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 5
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 5
- SMDOOINVMJSDPS-UHFFFAOYSA-N Astragaloside Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)OC2C(C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(O)C(CO)O2)O)=C1 SMDOOINVMJSDPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QMNWISYXSJWHRY-XWJCTJPOSA-N astragaloside Chemical compound O1[C@H](C(C)(O)C)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@]2(C)CC[C@]34C[C@]4(CC[C@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO4)O)C4(C)C)C4[C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)CC3[C@]2(C)C[C@@H]1O QMNWISYXSJWHRY-XWJCTJPOSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 8
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 abstract description 6
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 abstract description 6
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 abstract description 6
- 235000003261 Artemisia vulgaris Nutrition 0.000 abstract description 5
- 240000006891 Artemisia vulgaris Species 0.000 abstract description 5
- 241000132012 Atractylodes Species 0.000 abstract description 5
- 240000001341 Reynoutria japonica Species 0.000 abstract description 5
- 235000018167 Reynoutria japonica Nutrition 0.000 abstract description 5
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 5
- 235000017784 Mespilus germanica Nutrition 0.000 abstract description 4
- 244000182216 Mimusops elengi Species 0.000 abstract description 4
- 235000000560 Mimusops elengi Nutrition 0.000 abstract description 4
- 235000007837 Vangueria infausta Nutrition 0.000 abstract description 4
- 240000007371 Cuscuta campestris Species 0.000 abstract description 3
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 abstract 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 17
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 8
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 8
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 3
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MQVRGDZCYDEQML-UHFFFAOYSA-N Astragalin Natural products C1=CC(OC)=CC=C1C1=C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 MQVRGDZCYDEQML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000122205 Chamaeleonidae Species 0.000 description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- JPUKWEQWGBDDQB-QSOFNFLRSA-N kaempferol 3-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=CC(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O JPUKWEQWGBDDQB-QSOFNFLRSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 1
- 206010000242 Abortion threatened Diseases 0.000 description 1
- 241001127714 Amomum Species 0.000 description 1
- VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N Catenarin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=C(O)C(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010282 Emodin Substances 0.000 description 1
- RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N Emodin-dianthron Natural products O=C1C2=CC(C)=CC(O)=C2C(=O)C2=C1CC(=O)C=C2O RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000208688 Eucommia Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000008899 Habitual abortion Diseases 0.000 description 1
- YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N Helminthosporin Natural products C1=CC(O)=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000241838 Lycium barbarum Species 0.000 description 1
- 235000015459 Lycium barbarum Nutrition 0.000 description 1
- 235000015468 Lycium chinense Nutrition 0.000 description 1
- 241000157491 Morinda Species 0.000 description 1
- 241000405414 Rehmannia Species 0.000 description 1
- NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N Rheoemodin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000316342 Taxillus Species 0.000 description 1
- 208000005985 Threatened Abortion Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 210000003056 antler Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 229930194605 dipsacoside Natural products 0.000 description 1
- 229930190976 dipsacussaponin Natural products 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N emodin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N emodin Natural products OC1=C(OC2=C(C=CC(=C2C1=O)O)O)C1=CC=C(C=C1)O VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- JNNGEAWILNVFFD-CDJYTOATSA-N loganic acid Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@H](C(=CO1)C(O)=O)C[C@H](O)[C@@H]2C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O JNNGEAWILNVFFD-CDJYTOATSA-N 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 235000017524 noni Nutrition 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/36—Control of physical parameters of the fluid carrier in high pressure liquid systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/60—Construction of the column
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/64—Electrical detectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8686—Fingerprinting, e.g. without prior knowledge of the sample components
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法及检测方法。所述指纹图谱构建方法包括如下步骤：制备对照品溶液和供试品溶液，其中，制备所述供试品溶液的步骤包括：取滋肾育胎丸供试品，加溶剂进行提取，收集提取液，得所述供试品溶液；以液相色谱法检测所述对照品溶液和供试品溶液；所述液相色谱法采用的洗脱条件为：以体积浓度0.05～2％的甲酸水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱。该指纹图谱构建方法能够构建获得特征峰包含续断、菟丝子、人参、枸杞子、制何首乌、白术、艾叶等多味药材的有效成分的指纹图谱，能够更全面地反应滋肾育胎丸整体化学成分，提高滋肾育胎丸质量控制的准确性和全面性。
Description
技术领域
本发明涉及中药检测技术领域，特别是滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法及检测方法。
背景技术
滋肾育胎丸由熟地黄、枸杞子、菟丝子、砂仁、人参、桑寄生、阿胶(炒)、(制)首乌、艾叶、巴戟天、白术、党参、鹿角霜、续断、杜仲等15味中药组成。为中医妇科专家罗元恺教授在张锡纯寿胎丸的基础上，经过多年的临床实践创制而成。功能主治滋补肝肾，益气培元，养血安胎，强壮身体，用于脾肾两虚，冲任不固所致的滑胎(防治习惯性流产和先兆性流产)。
由于滋肾育胎丸的药味较多，成分复杂，质量控制有一定的难度。其现有标准为卫生部标准，没有含量测定项，也缺乏总体的控制手段。另外，目前已有的关于滋肾育胎丸的指纹图谱研究，所建立的指纹图谱色谱峰少，且基本来源于续断(如绿原酸、马钱苷、当药苷、马钱苷酸、川续断皂苷Ⅵ)，只能反映滋肾育胎丸中小部分的成分特征，不能全面地反映药物的整体成分情况，不利于滋肾育胎丸质量控制的准确性和全面性。
发明内容
基于此，有必要提供一种滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法。该指纹图谱构建方法能够构建获得特征峰包含续断、菟丝子、人参、枸杞子、制何首乌、白术、艾叶等多味药材的有效成分的指纹图谱，该指纹图谱更具有指纹特性，能够更全面地反应滋肾育胎丸整体化学成分，提高滋肾育胎丸质量控制的准确性和全面性。
具体技术方案如下：
一种滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法，包括如下步骤：
制备对照品溶液和供试品溶液，其中，
制备所述对照品溶液的步骤包括：取绿原酸、当药苷、马钱苷、紫云英苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、川续断皂苷VI、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、大黄酚、大黄素甲醚和β-胡萝卜素对照品，加溶剂溶解，得所述对照品溶液；
制备所述供试品溶液的步骤包括：取滋肾育胎丸供试品，加溶剂进行提取，收集提取液，得所述供试品溶液；
以液相色谱法检测所述对照品溶液和供试品溶液；
所述液相色谱法采用的洗脱条件为：以体积浓度0.05～2％的甲酸水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱。
在其中一个实施例中，所述梯度洗脱的过程包括：
0～10min，保持流动相B的体积百分比为5％；
10～20min，流动相B的体积百分比由5％升高至10％；
20～40min，流动相B的体积百分比由10％升高至25％；
40～60min，流动相B的体积百分比由25％升高至30％；
60～75min，流动相B的体积百分比由30％升高至40％；
75～90min，流动相B的体积百分比由40％升高至75％；
90～120min，流动相B的体积百分比由75％升高至90％；
120～140min，流动相B的体积百分比由90％升高至100％；
140～190min，保持流动相B的体积百分比为100％。
在其中一个实施例中，所述液相色谱法采用的检测方法为电喷雾检测。
在其中一个实施例中，所述电喷雾检测采用的雾化温度为25～80℃。
在其中一个实施例中，所述液相色谱法采用的色谱柱为C18色谱柱，填料的粒径为1.5μm～5μm；及/或，
所述液相色谱法采用的流速为0.1～0.6mL/min，柱温为20～50℃。
本发明还提供一种滋肾育胎丸的检测方法，包括如下步骤：
取待测滋肾育胎丸，加溶剂进行提取，收集提取液，得待测滋肾育胎丸溶液；以液相色谱法检测所述待测滋肾育胎丸溶液；
所述液相色谱法采用的洗脱条件为：以体积浓度0.05～2.0％的甲酸水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱。
在其中一个实施例中，所述梯度洗脱的过程包括：
0～10min，保持流动相B的体积百分比为5％；
10～20min，流动相B的体积百分比由5％升高至10％；
20～40min，流动相B的体积百分比由10％升高至25％；
40～60min，流动相B的体积百分比由25％升高至30％；
60～75min，流动相B的体积百分比由30％升高至40％；
75～90min，流动相B的体积百分比由40％升高至75％；
90～120min，流动相B的体积百分比由75％升高至90％；
120～140min，流动相B的体积百分比由90％升高至100％；
140～190min，保持流动相B的体积百分比为100％。
在其中一个实施例中，所述液相色谱法采用的检测方法为电喷雾检测。
在其中一个实施例中，所述电喷雾检测采用的雾化温度为25～80℃。
在其中一个实施例中，所述液相色谱法采用的色谱柱为C18色谱柱，填料的粒径为1.5μm～5μm；及/或，
所述液相色谱法采用的流速为0.1～0.6mL/min，柱温为20～50℃。
与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
本发明提供一种滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法，该指纹图谱构建方法利用液相色谱法，以绿原酸、当药苷、马钱苷、紫云英苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、川续断皂苷VI、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、大黄酚、大黄素甲醚和β-胡萝卜素作为对照品，通过采用合适的流动相进行梯度洗脱，能够构建获得特征峰包含续断、菟丝子、人参、枸杞子、制何首乌、白术、艾叶等多味药材的有效成分的指纹图谱，与目前已有的滋肾育胎丸指纹图谱相比较，该指纹图谱更具有指纹特性，能够更全面地反应滋肾育胎丸整体化学成分，提高滋肾育胎丸质量控制的准确性和全面性。
本发明提供一种滋肾育胎丸的检测方法，该检测方法利用液相色谱法，并通过采用合适的流动相进行梯度洗脱，能够全面地提供滋肾育胎丸整体化学成分信息，使滋肾育胎丸的质量控制更为准确和全面。
附图说明
图1为16个批次的滋肾育胎丸样品的UPLC图谱；
图2为滋肾育胎丸标准指纹图谱；
图3为滋肾育胎丸成品样品(全方)及缺某一味药材的滋肾育胎丸样品的色谱图；
图4为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法的提取溶剂考察色谱图；
图5为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法的提取时间考察色谱图；
图6为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法的色谱柱考察色谱图；
图7为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法的流动相考察色谱图之一；
图8为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法的流动相考察色谱图之二；
图9为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法的柱温考察色谱图；
图10为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法的CAD雾化干燥温度考察色谱图；
图11为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法的检测器考察色谱图；
图12为待测滋肾育胎丸的色谱图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法及检测方法作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明的实施例提供一种滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法，包括如下步骤：
制备对照品溶液和供试品溶液，其中，
制备所述对照品溶液的步骤包括：取绿原酸、当药苷、马钱苷、紫云英苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、川续断皂苷VI、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、大黄酚、大黄素甲醚和β-胡萝卜素对照品，加溶剂溶解，滤过，得所述对照品溶液；
制备所述供试品溶液的步骤包括：取滋肾育胎丸供试品，加溶剂进行提取，收集提取液，得所述供试品溶液；
以液相色谱法检测所述对照品溶液和供试品溶液；
所述液相色谱法采用的洗脱条件为：以体积浓度0.05～2％的甲酸水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱。
在其中一个具体的实施例中，所述液相色谱法为快速分离液相色谱法，采用快速分离液相色谱系统进行。
在其中一个具体的实施例中，以体积浓度0.05～0.2％的甲酸水溶液作为流动相A。
在其中一个具体的实施例中，制备所述供试品溶液的步骤中，加溶剂进行提取之前，先将所述滋肾育胎丸供试品粉碎。
在其中一个具体的实施例中，所述梯度洗脱的过程包括：
0～10min，保持流动相B的体积百分比为5％；
10～20min，流动相B的体积百分比由5％升高至10％；
20～40min，流动相B的体积百分比由10％升高至25％；
40～60min，流动相B的体积百分比由25％升高至30％；
60～75min，流动相B的体积百分比由30％升高至40％；
75～90min，流动相B的体积百分比由40％升高至75％；
90～120min，流动相B的体积百分比由75％升高至90％；
120～140min，流动相B的体积百分比由90％升高至100％；
140～190min，保持流动相B的体积百分比为100％。
在其中一个具体的实施例中，所述液相色谱法采用的检测方法为电喷雾检测。电喷雾检测能够更全面地反应滋肾育胎丸中的皂苷类、糖类、生物碱类、脂类等成分，实现滋肾育胎丸中续断、菟丝子、人参、枸杞子、制何首乌、白术、艾叶等多味药材的有效成分的监控。
在其中一个具体的实施例中，所述电喷雾检测采用的雾化温度为25～80℃。更为具体地，所述雾化温度包括但不限于：26℃、28℃、30℃、31℃、32℃、34℃、35℃、37℃、40℃、45℃、50℃、60℃、70℃。作为优选地，所述电喷雾检测采用的雾化温度为30～40℃。由此，获得的基线噪音较小，同时样品中弱极性成分的信号较高。
在其中一个具体的实施例中，所述液相色谱法采用的色谱柱为C18色谱柱，填料的粒径为1.5μm～5μm。具体地，所述液相色谱法采用的色谱柱为BEH C18色谱柱或Hypersilgold C18色谱柱。优选为Hypersil gold C18色谱柱，其对滋肾育胎丸中的特征峰的选择性更强，分离度和峰形更好。
在其中一个具体的实施例中，所述液相色谱法采用的流速为0.1～0.6mL/min。更为具体地，所述流速包括但不限于：0.1mL/min、0.2mL/min、0.3mL/min、0.35mL/min、0.4mL/min、0.45mL/min、0.5mL/min。
在其中一个具体的实施例中，所述液相色谱法采用的柱温为20～50℃。更为具体地，所述柱温包括但不限于：20℃、25℃、30℃、35℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、45℃、50℃。
在其中一个具体的实施例中，制备所述对照品溶液和/或制备所述供试品溶液的步骤中，所述溶剂为甲醇。
在其中一个具体的实施例中，制备所述供试品溶液的步骤中，所述提取的方法为超声提取，超声功率为100～350KW，提取时间为10～120min。更为具体地，所述提取时间包括但不限于：10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、52min、55min、57min、58min、59min、60min、61min、62min、63min、65min、70min、75min、80min、90min、100min、110min、120min。
在其中一个具体的实施例中，制备所述供试品溶液的步骤中，所述收集提取液的方法为：离心，取上清液；或，直接过滤。更为具体地，所述离心的条件为于10000～15000rpm高速离心5～15min。
在其中一个具体的实施例中，进行所述检测时，所述对照品溶液和供试品溶液的进样量为1～5μL。
本发明的实施例还提供一种滋肾育胎丸的检测方法，包括如下步骤：
取待测滋肾育胎丸，加溶剂进行提取，收集提取液，得待测滋肾育胎丸溶液；以液相色谱法检测所述待测滋肾育胎丸溶液；
所述液相色谱法采用的洗脱条件为：以体积浓度0.05～2％的甲酸水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱。
可以理解地，上述滋肾育胎丸的检测方法中所述液相色谱法的各条件控制与上述滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法相同，所述待测滋肾育胎丸溶液的制备与指纹图谱构建方法中的供试品溶液制备相同。在此不再赘述。
另外，所述检测方法还包括：将所述待测滋肾育胎丸溶液的色谱图与所述指纹图谱构建方法构建获得的滋肾育胎丸指纹图谱进行比较。
如下为具体的实施例，如无特别说明，实施例中采用的原料均为市售获得。
实施例1
本实施例为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法。
1.实验仪器与试药
仪器：Ultimate 3000快速分离液相色谱系统(美国戴安公司)，包括：HPG-3400RS二元高压梯度泵，WPS-3000TRS自动进样器，TCC-3000RS柱温箱，RS Variable可变波长紫外检测器，Corona Veo RS电雾式检测器(CAD)以及变色龙色谱管理软件(SR7.2)；
Milli-Q超纯水处理系统(美国Millipore公司)；高速低温离心机(美国ThermoFisher公司)。
试剂：乙腈、甲醇、甲酸均为色谱纯试剂，磷酸为分析纯试剂，实验用超纯水(18.2Mohm.cm)由Milli-Q超纯水系统制得。
实验样品：试验中所有批次滋肾育胎丸成品样品均由广州中一药业提供，详见表1。
表1.滋肾育胎丸样品
2.方法
2.1色谱条件
色谱柱为ThermoFisher Hypersil gold C18(150mm×2.1mm,1.9μm)。
流动相A为体积浓度0.1％甲酸水，B为乙腈，梯度洗脱程序：0～10min，5％B；10～20min，5％～10％B；20～40min，10％～25％B；40～60min，25％～30％B；60～75min，30％～40％B；75～90min，40％～75％B；90～120min，75％～90％B；120～140min，90％～100％B；140～190min，100％B。
流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：4μL。
CAD检测器检测条件，雾化室温度：35℃；采样频率：10Hz。
2.2供试品溶液制备
将滋肾育胎丸成品样品粉碎成粉末，精密称取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，称定质量，超声处理60min，放冷，称重，用甲醇补足失重，摇匀，静置，取上清液于14000rpm高速离心10min，取上清液置于液相色谱进样瓶，即得。
2.3对照品溶液制备
分别精密称取绿原酸、当药苷、马钱苷、紫云英苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、川续断皂苷VI、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、大黄酚、大黄素甲醚和β-胡萝卜素对照品1mg，加甲醇溶解并定容至2mL作为标准储备液，并置于4℃的冰箱中保存备用。
2.4数据处理
实验中图谱均由变色龙色谱管理软件(SR7.2)处理并导出；所得导出后样品图谱以“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版”(国家药典委员会)进行指纹图谱分析，计算样品相似度。
2.5标准指纹图谱的建立
2.5.1指纹图谱的检测
取16个批次的滋肾育胎丸样品，按如上所述的指纹图谱测定方法进行分析，结果见图1。
2.5.2对照图谱和共有峰的标定
将16批样品的HPLC指纹图谱导入《中药色谱指纹图谱相识度评价系统2012版》进行数据处理，建立共有模式指纹图谱，即滋肾育胎丸标准指纹图谱，见图2。
根据16批样品的测定结果确定37个共有峰。选择8号峰为参照峰，将其保留时间和峰面积均设为1.0，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积分别列于表2和表3。
表2. 16批次滋肾育胎丸指纹图谱共有峰的相对保留时间
表3. 16批次滋肾育胎丸指纹图谱共有峰的相对保留峰面积
2.5.3相似度评价
将16批样品的HPLC指纹图谱导入《中药色谱指纹图谱相识度评价系统2012版》，生成滋肾育胎丸对照指纹图谱，在分析检验模式下，计算16批样品指纹图谱的相似度，结果见表4，所有代表性样品与标准指纹图谱的相似度均在0.90以上。
表4.指纹图谱相似性
2.5.4色谱峰指认及归属分析
采用相同色谱条件分别测定对照品溶液、缺某一味药材的滋肾育胎丸样品和滋肾育胎丸成品样品(全方)图谱(图3)，经与对照品溶液色谱图比对和质谱确认后，表明指纹图谱特征峰中1号峰为绿原酸，2号峰当药苷，3号峰为马钱苷，4号峰为紫云英苷，5号峰为人参皂苷Rg1，9号峰为人参皂苷Re，8号峰为川续断皂苷VI，9号峰为人参皂苷Rb1，10号峰为人参皂苷Rc，12号峰为人参皂苷Rd，20号峰为大黄酚，22号峰为大黄素甲醚，26号峰为β-胡萝卜素。
通过缺味药材分析，确认4、13号峰来源于菟丝子，26号峰来源于枸杞子，5、6、9、10、12号峰来源于人参，20、22号峰来源于制首乌，31号峰来源于艾叶，16、18、28来源于白术，1、2、3、7、8、11、14号峰来源于续断。
2.6方法学考察
2.6.1精密度
按样品制备方法制备供试品溶液，连续进样6次，进行UPLC分析，结果表明，各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD值分别小于4.4％和0.5％，表明仪器精密度良好，符合指纹图谱要求。
2.6.2稳定性
取同一供试品溶液，分别在0、3、6、9、12和24h时进行UPLC分析，结果表明，各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD值分别小于4.5％和0.4％，表明样品溶液在24h内稳定性良好。
2.6.3重复性
取同一批次滋肾育胎丸样品5份，分别制备供试品溶液，进行UPLC分析，结果表明，各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD值分别小于5.0％和0.3％，，表明该方法重复性较好。
实施例2
本实施例为滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法的条件考察。
1.供试品溶液制备工艺考察
1.1提取溶剂考察
保持其它条件不变，比较体积浓度分别为10％、40％、70％和100％甲醇共5种溶剂体系的超声提取效率，结果如图4所示。结果显示，以100％甲醇为提取溶剂时，色谱峰数量最多，因此选用甲醇作为滋肾育胎丸指纹图谱样品的提取溶剂。
1.2提取时间考察
保持其它条件不变，比较超声提取时间分别为10min、30min、60min、90min，结果如图5所示。结果显示，随着提取时间的增加，各色谱峰响应强度也逐步增强，当提取时间为60分钟时，色谱峰强度达到最高，并且提取时间为90分钟时，色谱峰强度无明显提高，因此优选60min作为滋肾育胎丸指纹图谱样品的超声提取时间。
2.色谱条件考察
2.1色谱柱考察
保持其它条件不变，比较三根不同类型的色谱柱的分离情况，包括ThermoFisherHypersil gold C18(150mm×2.1mm,1.9μm)、ThermoFisher Hypersil gold C8(150mm×2.1mm,3μm)和Waters BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm)，结果如图6所示。结果显示Hypersilgold C18色谱柱时选择性更强，分离度和峰形更好，因此选择Hypersil gold C18色谱柱进行后续指纹图谱研究。
2.2流动相考察
保持其它条件不变，比较不同流动相的组成的分离情况，包括甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1％甲酸水(体积浓度)、乙腈-0.2％甲酸水(体积浓度)、乙腈-0.4％甲酸水(体积浓度)和乙腈-0.1％磷酸水(体积浓度)。结果如图7～8所示。结果表明采用乙腈-水作为流动相进行梯度程序洗脱时基线平稳，色谱峰更多，峰型更好，并且灵敏度更高，因此选择乙腈-水体系进行研究。对比发现，在乙腈-0.1％甲酸水流动相体系下，50～70min内色谱峰信号响应有一定增强，同时，考虑色谱柱对酸性流动相的耐受性及实验的可重复性，因此本实验采用乙腈-0.1％甲酸水作为流动相进行梯度洗脱分析。
2.3柱温考察
保持其它条件不变，比较不同色谱柱柱温对样品分离的影响，包括35℃、40℃、45℃。结果如图9所示。结果显示，色谱柱温度为35℃、40℃、45℃时，各色谱峰分离效果类似，且均能得到较好的峰形。鉴于色谱柱寿命及实验的可重复性，本实验选择色谱柱温度为40℃。
2.4CAD雾化器温度考察
保持其它条件不变，比较不同CAD检测器雾化干燥温度对检测的影响，包括35℃、50℃、70℃，结果如图10所示。结果表明，随着温度的升高，基线噪音基本不变，但样品中的弱极性成分信号相应逐渐变差，导致灵敏度的降低因此，本实验设置CAD雾化器的温度为35℃。
3.检测器考察
保持其它条件不变，比较采用多波长紫外检测(检测条件，检测波长：254nm、281nm)与上述电喷雾检测对检测的影响，结果如图11所示，采用电喷雾检测器进行检测，能够极大的增加指纹图谱中包含的化学成分信息。
实施例3
本实施例为滋肾育胎丸的检测方法，包括如下步骤：
将待测滋肾育胎丸(批号为X00090)粉碎成末，精密称取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，称定质量，超声处理60min，放冷，称重，用甲醇补足失重，摇匀，静置，取上清液于14000rpm高速离心10min，取上清液置于液相色谱进样瓶，即得待测溶液。
将所述待测溶液按照如下色谱条件进行检测：
色谱柱为ThermoFisher Hypersil gold C18(150mm×2.1mm,1.9μm)。
流动相A为体积浓度0.1％甲酸水，B为乙腈，梯度洗脱程序：0～10min，5％B；10～20min，5％～10％B；20～40min，10％～25％B；40～60min，25％～30％B；60～75min，30％～40％B；75～90min，40％～75％B；90～120min，75％～90％B；120～140min，90％～100％B；140～190min，100％B。
流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：4μL。
CAD检测器检测条件，雾化室温度：35℃；采样频率：10Hz。
获得的待测溶液色谱图如图12所示，与滋肾育胎丸标准指纹图谱(图2)进行比较其相似度为0.9523，质量符合规定。同时说明所建立的滋肾育胎丸指纹图谱可用于滋肾育胎丸的质量控制。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
制备对照品溶液和供试品溶液，其中，
制备所述对照品溶液的步骤包括：取绿原酸、当药苷、马钱苷、紫云英苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、川续断皂苷VI、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、大黄酚、大黄素甲醚和β-胡萝卜素对照品，加溶剂溶解，得所述对照品溶液；
制备所述供试品溶液的步骤包括：取滋肾育胎丸供试品，加溶剂进行提取，收集提取液，得所述供试品溶液；所述溶剂为甲醇；
以液相色谱法检测所述对照品溶液和供试品溶液；所述液相色谱法采用的色谱柱为C18色谱柱；
所述液相色谱法采用的洗脱条件为：以体积浓度0.05～2％的甲酸水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱；
所述梯度洗脱的过程包括：
0～10min，保持流动相B的体积百分比为5％；
10～20min，流动相B的体积百分比由5％升高至10％；
20～40min，流动相B的体积百分比由10％升高至25％；
40～60min，流动相B的体积百分比由25％升高至30％；
60～75min，流动相B的体积百分比由30％升高至40％；
75～90min，流动相B的体积百分比由40％升高至75％；
90～120min，流动相B的体积百分比由75％升高至90％；
120～140min，流动相B的体积百分比由90％升高至100％；
140～190min，保持流动相B的体积百分比为100％；
所述液相色谱法采用的检测方法为电喷雾检测。
2.根据权利要求1所述的滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述电喷雾检测采用的雾化温度为25～80℃。
3.根据权利要求1或2所述的滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述液相色谱法采用的色谱柱的填料的粒径为1.5μm～5μm；及/或，所述液相色谱法采用的流速为0.1～0.6mL/min。
4.根据权利要求1或2所述的滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述液相色谱法采用的柱温为20～50℃。
5.根据权利要求1或2所述的滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法，其特征在于，制备所述供试品溶液的步骤中，所述提取的方法为超声提取，超声功率为100～350KW，提取时间为10～120min。
6.一种滋肾育胎丸的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
取待测滋肾育胎丸，加溶剂进行提取，收集提取液，得待测滋肾育胎丸溶液；以液相色谱法检测所述待测滋肾育胎丸溶液；所述溶剂为甲醇；所述液相色谱法采用的色谱柱为C18色谱柱；
所述液相色谱法采用的洗脱条件为：以体积浓度0.05～2％的甲酸水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱；
所述梯度洗脱的过程包括：
0～10min，保持流动相B的体积百分比为5％；
10～20min，流动相B的体积百分比由5％升高至10％；
20～40min，流动相B的体积百分比由10％升高至25％；
40～60min，流动相B的体积百分比由25％升高至30％；
60～75min，流动相B的体积百分比由30％升高至40％；
75～90min，流动相B的体积百分比由40％升高至75％；
90～120min，流动相B的体积百分比由75％升高至90％；
120～140min，流动相B的体积百分比由90％升高至100％；
140～190min，保持流动相B的体积百分比为100％；
所述液相色谱法采用的检测方法为电喷雾检测。
7.根据权利要求6所述的滋肾育胎丸的检测方法，其特征在于，所述电喷雾检测采用的雾化温度为25～80℃。
8.根据权利要求6或7所述的滋肾育胎丸的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法采用的色谱柱的填料的粒径为1.5μm～5μm；及/或，所述液相色谱法采用的流速为0.1～0.6mL/min。
9.根据权利要求6或7所述的滋肾育胎丸的检测方法，其特征在于，所述液相色谱法采用的柱温为20～50℃。
10.根据权利要求6或7所述的滋肾育胎丸的检测方法，其特征在于，制备所述待测滋肾育胎丸溶液的步骤中，所述提取的方法为超声提取，超声功率为100～350KW，提取时间为10～120min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010626656.XA CN113884582B (zh) | 2020-07-02 | 2020-07-02 | 滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法及检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010626656.XA CN113884582B (zh) | 2020-07-02 | 2020-07-02 | 滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法及检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113884582A CN113884582A (zh) | 2022-01-04 |
| CN113884582B true CN113884582B (zh) | 2024-05-03 |
Family
ID=79012360
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010626656.XA Active CN113884582B (zh) | 2020-07-02 | 2020-07-02 | 滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法及检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113884582B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1588079A (zh) * | 2004-08-27 | 2005-03-02 | 广州中一药业有限公司 | 滋肾育胎丸的质量控制方法 |
| WO2007139956A2 (en) * | 2006-05-26 | 2007-12-06 | Laboratory Corporation Of America Holdings | Methods and systems for the quantitative analysis of biomarkers |
| CN103776937A (zh) * | 2014-03-04 | 2014-05-07 | 南京中医药大学 | 一种采用一测多评检测人参提取物中多个或总人参皂苷含量的方法 |
| CN110308213A (zh) * | 2018-03-27 | 2019-10-08 | 广州白云山中一药业有限公司 | 滋肾育胎丸指纹图谱构建方法及其在质量检测中的应用 |
| CN110960642A (zh) * | 2018-09-29 | 2020-04-07 | 广州白云山中一药业有限公司 | 滋肾育胎丸在制备预防子痫前期的药物中的应用 |
-
2020
- 2020-07-02 CN CN202010626656.XA patent/CN113884582B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1588079A (zh) * | 2004-08-27 | 2005-03-02 | 广州中一药业有限公司 | 滋肾育胎丸的质量控制方法 |
| WO2007139956A2 (en) * | 2006-05-26 | 2007-12-06 | Laboratory Corporation Of America Holdings | Methods and systems for the quantitative analysis of biomarkers |
| CN103776937A (zh) * | 2014-03-04 | 2014-05-07 | 南京中医药大学 | 一种采用一测多评检测人参提取物中多个或总人参皂苷含量的方法 |
| CN110308213A (zh) * | 2018-03-27 | 2019-10-08 | 广州白云山中一药业有限公司 | 滋肾育胎丸指纹图谱构建方法及其在质量检测中的应用 |
| CN110960642A (zh) * | 2018-09-29 | 2020-04-07 | 广州白云山中一药业有限公司 | 滋肾育胎丸在制备预防子痫前期的药物中的应用 |
Non-Patent Citations (18)
| Title |
|---|
| Reproductive toxicity of ZishenYutai pill in rats: Perinatal and postnatal development study;Zhou, L等;Regulatory Toxicology And Pharmacology;第81卷;第120-127页 * |
| Reproductive toxicity of ZishenYutai pill in rats;Zhou, L 等;Regulatory Toxicology And Pharmacology;20161130;第81卷;第120-127页 * |
| The chronic hepatotoxicity assessment of the herbal formula Zishen Yutai pill;Xing, XY等;Regulatory Toxicology And Pharmacology;第83卷;第81-88页 * |
| Xing, XY 等.The chronic hepatotoxicity assessment of the herbal formula Zishen Yutai pill.Regulatory Toxicology And Pharmacology.2017,第83卷第 81-88页. * |
| 利用电雾式检测器建立三七药材液相色谱指纹图谱;白长财;柴兴云;王海龙;崔秀明;李萍;屠鹏飞;;中国药科大学学报(第01期);第54-58页 * |
| 反相高效液相色谱法测定滋肾育胎丸中金丝桃苷、毛蕊花糖苷和二苯乙烯苷含量;杨丽娟;张君娜;苗晓红;辛娜;;中国药业(第11期);第74-77页 * |
| 吴英健 ; 庞璐 ; 李敏 ; 黎亮星 ; .高效液相色谱-电喷雾检测器法测定枸杞子中甜菜碱的含量.山东化工.2018,(第12期),第67-69页. * |
| 基于高效液相色谱-电雾式检测的三七及人参、西洋参中水溶性非皂苷类部位的指纹图谱表征分析和三七素的含量测定;张艳海;杨远贵;施磊;金燕;王峥涛;;中国中药杂志(第14期);第3475-3480页 * |
| 张艳海 ; 杨远贵 ; 施磊 ; 金燕 ; 王峥涛 ; .基于高效液相色谱-电雾式检测的三七及人参、西洋参中水溶性非皂苷类部位的指纹图谱表征分析和三七素的含量测定.中国中药杂志.2020,(第14期),第3475-3480页. * |
| 杨丽娟 ; 张君娜 ; 苗晓红 ; 辛娜 ; .反相高效液相色谱法测定滋肾育胎丸中金丝桃苷、毛蕊花糖苷和二苯乙烯苷含量.中国药业.2020,(第11期),第74-77页. * |
| 滋肾育胎丸;邹琦; 王如萍;;广东药学(第02期);第56页 * |
| 滋肾育胎丸对SD大鼠胚胎-胎仔发育的影响;邹琦等;中国新药杂志;第26卷(第03期);第330-336页 * |
| 滋肾育胎丸指纹图谱及其5种指标成分含量测定的研究;马蕙文;邹琦;李春;尹震;易红;田莲超;任承涛;刘晓谦;王智民;;中国中药杂志(第14期);第2878-2883页 * |
| 白长财 ; 柴兴云 ; 王海龙 ; 崔秀明 ; 李萍 ; 屠鹏飞 ; .利用电雾式检测器建立三七药材液相色谱指纹图谱.中国药科大学学报.2009,(第01期),第54-58页. * |
| 邹琦 ; 王如萍 ; .滋肾育胎丸.广东药学.2002,(第02期),第56页. * |
| 邹琦等.滋肾育胎丸对SD大鼠胚胎-胎仔发育的影响.中国新药杂志.2017,第26卷(第03期),第330-336页. * |
| 马蕙文 ; 邹琦 ; 李春 ; 尹震 ; 易红 ; 田莲超 ; 任承涛 ; 刘晓谦 ; 王智民 ; .滋肾育胎丸指纹图谱及其5种指标成分含量测定的研究.中国中药杂志.2018,(第14期),第2878-2883页. * |
| 高效液相色谱-电喷雾检测器法测定枸杞子中甜菜碱的含量;吴英健;庞璐;李敏;黎亮星;;山东化工(第12期);第67-69页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113884582A (zh) | 2022-01-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106483213B (zh) | 桃核承气汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱 | |
| CN115718145A (zh) | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 | |
| CN111999423B (zh) | 一种颈痛颗粒指纹图谱的建立方法及其应用 | |
| CN110412155B (zh) | 一种两地汤的hplc特征图谱的检测方法 | |
| CN111487343A (zh) | 一种保元汤制剂指纹图谱的建立方法 | |
| CN107589191A (zh) | 金贝口服液hplc 指纹图谱建立和检测方法 | |
| CN106932509A (zh) | 芪葛颗粒指纹图谱及其构建方法 | |
| CN105486762B (zh) | 一种坤灵丸的高效液相指纹图谱检测方法 | |
| CN108459128A (zh) | 一种当归四逆汤组合物的质量控制方法 | |
| CN107643343B (zh) | 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 | |
| CN108061762B (zh) | 一种补肾托毒颗粒中三种黄酮成分的含量测定方法 | |
| CN108872417A (zh) | 一种指纹图谱的构建方法及hplc指纹图谱 | |
| CN113884582B (zh) | 滋肾育胎丸的指纹图谱构建方法及检测方法 | |
| CN109115904B (zh) | 一种定坤丹uplc指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| CN113791151B (zh) | 乌蛇止痒丸的指纹图谱构建和检测方法 | |
| CN106526000B (zh) | 升麻葛根汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱 | |
| CN113237974B (zh) | 一种小儿肺咳颗粒hplc指纹图谱的构建方法 | |
| CN113759011B (zh) | 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法 | |
| CN108362800A (zh) | Hplc指纹图谱的构建方法及hplc指纹图谱 | |
| CN109799303B (zh) | 止血调经组合物的指纹图谱构建方法、定量检测方法及质量检测方法 | |
| CN109425671A (zh) | 一种人参皂苷Rg1，Re，Rb1的双内标高效液相色谱检测方法 | |
| CN108845040B (zh) | 一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法 | |
| CN109709250B (zh) | 参茸酒指纹图谱的检测方法 | |
| CN107064402B (zh) | 一种益气养血、补肾壮阳的药物制剂的检测方法 | |
| CN114720568A (zh) | 一种太子参药材的指纹图谱建立方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |