CN108845040B

CN108845040B - 一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法

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Publication number: CN108845040B
Application number: CN201810252080.8A
Authority: CN
Inventors: 穆向荣; 林林; 郭东晓; 林永强; 徐丽华
Original assignee: Shandong Institute for Food and Drug Control
Current assignee: Shandong Institute for Food and Drug Control
Priority date: 2018-03-26
Filing date: 2018-03-26
Publication date: 2021-01-22
Anticipated expiration: 2038-03-26
Also published as: CN108845040A

Abstract

本发明涉及药品分析技术领域一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法。将待检样品和对照品分别注入液相色谱仪进行检测，以对照品谱图进行定位，判断待检样品中是否含有老瓜头。本发明方法顺利解决了现有技术中无女金丸制剂生产过程中白薇在投料时是否违规以老瓜头投料的检测方法，在规范女金丸制剂中白薇投料方面将发挥巨大的作用；方法操作简便，步骤简单；结果明确，易于判断。

Description

一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法

技术领域

本发明涉及药品分析技术领域，特别涉及一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法。

背景技术

女金丸处方由当归、白芍、川芎和白薇等23味药材组成。其中白薇为萝藦科植物白薇（Cynanchum atratum Bge.）或蔓生白薇（Cynanchum versicolor Bge.）的干燥根和根茎。通过赴药材市场调研，发现市场所售白薇多为萝藦科植物老瓜头（Cynanchum komarovii Al. Iljinski）的干燥根和根茎（以老瓜头代称），两者来源不同，即老瓜头为白薇的易混淆品。

虽然白薇和老瓜头药材外形有差异，但市场上白薇多以干燥并切段的状态流通，如用于小包装饮片、粉末饮片和配方颗粒等。当白薇用于成方制剂投料时，常粉碎成粉末，导致现阶段监管企业是否违规投料无计可施。2015版药典收载有女金丸的性状、鉴别、检查和含量测定质控项目，但各项目下未见对白薇的控制方法。现有方法并不能防止以老瓜头违规投料的行为，而现有技术中也没有对这种行为进行监督和检验的文献记载。

发明内容

为了解决以上现有技术中无法确定女金丸制剂生产过程中白薇在投料时是否掺杂老瓜头，本申请提供了一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法。

经过前期实验研究，从老瓜头中分离得到一种区别于白薇的特征性成分，使用该成分来进行定位。本发明是通过以下步骤得到的：

一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法，包括以下步骤：

（1）待检样品制备：取女金丸，加入女金丸取样量一半的硅藻土，研细，加甲醇超声溶解，滤过，蒸至近干，残渣加水溶解，滤过，滤液通过D101型大孔树脂柱，以水洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，滤过，取续滤液，即得待检样品；

（2）对照品制备：取老瓜头粉末使用甲醇超声提取，过滤，蒸干，残渣加甲醇溶解，二次过滤，经半制备HPLC纯化，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，体积比30:70，325nm检测，收集含有目标成分的洗脱液，得对照品；

（3）将待检样品和对照品分别注入液相色谱仪进行检测，以对照品谱图进行定位，若待检样品谱图与对照品谱图未出现保留时间相同的色谱峰，则待检样品中不含有老瓜头；若待检样品谱图与对照品谱图出现保留时间相同的色谱峰，则待检样品中含有老瓜头。

所述的鉴别方法，优选步骤（3）中若待检样品谱图与对照品谱图出现保留时间相同的色谱峰，比较相应色谱峰在200~400nm波长范围的紫外-可见吸收光谱进行验证，吸收光谱相同时，则待检样品中含有老瓜头。

所述的鉴别方法，优选色谱条件如下：

Kromasil C₁₈色谱柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃；以甲醇为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，0-10min，流动相A由20%递增为30%，流动相B由80%递减为70%，10-25min，流动相A由30%，流动相B 70%，流速为1.0ml/min；采用二极管阵列检测器；检测波长为325nm。

所述的鉴别方法，优选

步骤（1）中滤液通过D101型大孔树脂柱，D101型大孔树脂柱各项参数为16～60目，内径为1.5cm，柱高为15cm，流速1.0～1.5ml。

所述的鉴别方法，优选待检样品制备：

取女金丸40g，加硅藻土20g，研细，称取30g，加甲醇100ml（蜜丸）或150ml（水蜜丸），超声30min，滤过，蒸至近干，残渣加水10ml使溶解，用脱脂棉滤过，滤液通过D101型大孔树脂柱（16～60目，内径为1.5cm，柱高为15cm），流速1.0～1.5ml，以水 50ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，取续滤液，即得。

所述的鉴别方法，优选步骤（2）中二次过滤为使用0.45μm微孔滤膜过滤。

所述的鉴别方法，优选设置对照品贮备液，浓度为0.1003 mg/ml，对照品溶液浓度为40.12 μg/mL。

所述的老瓜头为萝藦科植物老瓜头（Cynanchum komarovii Al. Iljinski）的干燥根和根茎。

本发明的有益效果：

1）本发明方法顺利解决了现有技术中无女金丸制剂生产过程中白薇在投料时是否违规以老瓜头投料的检测方法，在规范女金丸制剂中白薇投料方面将发挥巨大的作用；

2）方法操作简便，步骤简单；结果明确，易于判断。

附图说明

图1 对照品HPLC色谱图，

图2 对照品吸收光谱图，

图3 当归的HPLC色谱图，

图4 白芍的HPLC色谱图，

图5 川芎的HPLC色谱图，

图6 川芎在相应保留时间色谱峰的吸收光谱图，

图7 熟地黄的HPLC色谱图，

图8 党参的HPLC色谱图，

图9 炒白术的HPLC色谱图，

图10 茯苓的HPLC色谱图，

图11 甘草的HPLC色谱图，

图12 肉桂的HPLC色谱图，

图13 益母草的HPLC色谱图，

图14 牡丹皮的HPLC色谱图，

图15 没药（制）的HPLC色谱图，

图16 醋延胡索的HPLC色谱图，

图17 藁本的HPLC色谱图，

图18 白芷的HPLC色谱图，

图19 黄芩的HPLC色谱图，

图20 醋香附的HPLC色谱图，

图21 砂仁的HPLC色谱图，

图22 陈皮的HPLC色谱图，

图23 煅赤石脂的HPLC色谱图，

图24 鹿角霜的HPLC色谱图，

图25 阿胶的HPLC色谱图，

图26 检出老瓜头的女金丸样品HPLC色谱图，

图27 检出老瓜头的女金丸样品在相应保留时间色谱峰的吸收光谱图，

图28未检出老瓜头的女金丸样品HPLC色谱图。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明作进一步的说明，并非对本发明的限定，依照本领域公知的现有技术，本发明的实施方式并不限于具体实施例。

实施例1

1 仪器与试药

仪器：Sartorius CP225D电子天平；岛津LC-20A高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）；试剂：甲醇为色谱纯，水为Millipore制备的纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 色谱条件

2.1对照品溶液的制备

取老瓜头粉末约0.4g，加甲醇30ml，超声30min，滤过，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解， 0.45μm微孔滤膜滤过，经半制备HPLC纯化，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，体积比30:70，将所有的洗脱液在325nm检测后，确定收集保留时间为15.7～15.9分钟的洗脱液，减压浓缩干燥。

精密称取上述制备得到的对照品10.03mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（0.1003 mg/ml）。精密量取上述对照品贮备液10ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得到浓度为40.12 μg/ml的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备取女金丸40g，加硅藻土20g，研细，称取30g，加甲醇100ml（蜜丸）或150ml（水蜜丸），超声30min，滤过，蒸至近干，残渣加水10ml使溶解，用脱脂棉滤过，滤液通过D101型大孔树脂柱（16～60目，内径为1.5cm，柱高为15cm），流速1.0～1.5ml，以水 50ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0~10	20→30	80→70
10~25	30	70

Kromasil C₁₈色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；柱温：30℃；以甲醇为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，按上表中的规定进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min；采用二极管阵列检测器；检测波长为325nm。

流速1.0ml/min，柱温30℃。分别精密吸取2.1项下对照品溶液、2.2项下白薇和老瓜头的供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，进行测定。对照品色谱峰的峰型较好。

实施例2：方法学考察

老瓜头特征成分（即对照品）的专属性研究

按2.2.项下的高效液相色谱法条件对女金丸制剂中其他22味药材进行考察，结果显示：这22味药材中均未检出老瓜头特征成分，说明该方法可用于探索分析女金丸制剂中白薇质量的检查。22味药材的HPLC色谱图见图1～25。

由22味药材的HPLC色谱图可得，将对照品作为鉴别女金丸制剂中白薇投料是否掺杂老瓜头投料的特征性成分可行。

实施例3：样品测定

对收集的96批女金丸制剂进行检验，方法如实施例1，检验结果如下：

分别精密吸取对照品溶液和上述供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。色谱图见图26～28。

经测定，收集的96个生产批次的女金丸制剂中，52个批次样品谱图中出现与对照品谱图保留时间相同的色谱峰，比较相应色谱峰在200~400nm波长范围的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱相同，存在以老瓜头代替白薇投料的情况。问题样品占全部样品的54.2%。所建立的方法准确、可靠。本发明公开的鉴别方法在规范女金丸制剂中白薇投料方面将发挥巨大的作用。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）待检样品制备：取女金丸，加入硅藻土，研细，加甲醇超声溶解，滤过，蒸至近干，残渣加水溶解，滤过，滤液通过D101型大孔树脂柱，以水洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，滤过，取续滤液，即得待检样品；

（2）对照品制备：取老瓜头粉末使用甲醇超声提取，过滤，蒸干，残渣加甲醇溶解，二次过滤，经半制备HPLC纯化，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，体积比30:70，收集保留时间为15.7～15.9分钟的洗脱液，干燥得对照品；

（3）将待检样品和对照品分别注入液相色谱仪进行检测，以对照品谱图进行定位，若待检样品谱图与对照品谱图未出现保留时间相同的色谱峰，则待检样品中不含有老瓜头；若待检样品谱图与对照品谱图出现保留时间相同的色谱峰，则待检样品中含有老瓜头；

色谱条件如下：

Kromasil C₁₈色谱柱4.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃；以甲醇为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，0-10min，流动相A由20%递增为30%，流动相B由80%递减为70%，10-25min，流动相A为30%，流动相B 70%，流速为1.0ml/min；采用二极管阵列检测器；检测波长为325nm。

2.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于步骤（3）中若待检样品谱图与对照品谱图出现保留时间相同的色谱峰，比较相应色谱峰在200~400nm波长范围的紫外-可见吸收光谱进行验证，吸收光谱相同时，则待检样品中含有老瓜头。

3.根据权利要求1或2所述的鉴别方法，其特征在于

步骤（1）中滤液通过D101型大孔树脂柱，D101型大孔树脂柱各项参数为16～60目，内径为1.5cm，柱高为15cm，流速1.0～1.5ml/min。

4.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于待检样品制备：

取女金丸40g，加硅藻土20g，研细，称取30g，蜜丸加甲醇100ml或水蜜丸加甲醇150ml，超声30min，滤过，蒸至近干，残渣加水10ml使溶解，用脱脂棉滤过，滤液通过D101型大孔树脂柱，16～60目，内径为1.5cm，柱高为15cm，流速1.0～1.5ml/min，以水 50ml洗脱，弃去洗脱液，继用甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，滤过，取续滤液，即得。

5.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于步骤（2）中二次过滤为使用0.45μm微孔滤膜过滤。

6.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于设置对照品贮备液，浓度为0.1003 mg/ml，对照品溶液浓度为40.12 μg/mL。

7.根据权利要求3所述的鉴别方法，其特征在于步骤（2）中收集洗脱液是在将所有的洗脱液在325nm检测后，确定收集保留时间为15.7～15.9分钟的洗脱液。