CN115541746B - 不同基原白薇、老瓜头的指纹图谱的构建方法和鉴别方法 - Google Patents

不同基原白薇、老瓜头的指纹图谱的构建方法和鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种不同基原白薇、老瓜头的指纹图谱的构建方法和鉴别方法。所述不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：取对羟基苯乙酮对照品、2,4‑二羟基苯乙酮对照品和4‑甲氧基‑3‑羟基苯乙酮对照品，以第一溶剂溶解，制备对照品溶液；取不同基原白薇或老瓜头的样品，以第二溶剂提取，制备供试品溶液；对所述对照品溶液和供试品溶液进行超高效液相色谱检测，构建所述不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱；其中，所述超高效液相色谱检测的条件包括：流动相A为甲醇、流动相B为体积浓度0.08％～0.12％的磷酸水溶液，进行梯度洗脱。该构建方法构建获得的指纹图谱能够用于不同基原白薇、老瓜头的鉴别。

Description

不同基原白薇、老瓜头的指纹图谱的构建方法和鉴别方法
技术领域
本发明涉及中药质量分析技术领域，特别是涉及一种不同基原白薇、老瓜头的指纹图谱的构建方法和鉴别方法。
背景技术
中国药典2020年版记载白薇为萝藦科植物白薇Cynanchum atratum Bge.或蔓生白薇Cynanchum versicolor Bge.的干燥根和根茎。春、秋二季采挖，洗净，干燥。白薇始载于《神农本草经》，列为中品。别名，薇草、知微老、白幕、春草、骨美等。时珍曰：“薇，细也。其根细而白也”。白薇具有清热凉血，利尿通淋，解毒疗疮的功效，用于温邪伤营发热，阴虚发热，骨蒸劳热，产后血虚发热，热淋，血淋，痈疽肿毒。
现代研究表明白薇主要含有C21甾体皂苷、皂苷类、芳香族、脂肪酸类以及微量元素等成分，具有消炎、镇咳祛痰平喘、抗肿瘤等作用。白薇喜温暖湿润气候、耐寒、生于山坡或树林边缘，主产山东、辽宁、安徽。此外，湖北、江苏、浙江、福建、甘肃、河北、陕西等地亦产。
经调查发现，市场上白薇药材主要来源为萝藦科植物白薇Cynanchum atratumBge.的干燥根和根茎，且存在不同基原样品及伪品混用的现象，其中伪品主要以老瓜头冒充的情况最多。老瓜头，来源于萝藦科植物老瓜头Cynanchum komarovii Al.Iljinski的干燥根和根茎，能活血止痈，但全株有毒，主要毒性为生物碱类和挥发油，总生物碱对皮肤有很强的刺激性，其中7-脱甲基娃儿藤碱对动物具有不可逆的中枢神经毒性。可见，白薇和混淆品的功效差别较大，尤其老瓜头具有一定毒性，混用将严重危害用药安全。同时，白薇作为常用中药，在质量控制及基原鉴别方面的研究也尚不完善。中国药典2020年版一部对白薇的2个基原无论在【性状】或【鉴别】项下均没有区分二者，现有文献中也没有对不同基原白薇进行鉴别的相关研究。
有方法提供一种鉴别白薇中是否混有老瓜头的方法，其以从老瓜头粉末中提出所得的对照品为对照品溶液，以白薇HPLC色谱中是否出现该色谱峰作为判别依据，但该对照品化合物不明确，容易误判。同时，该方法仅针对白薇和老瓜头的鉴别，并没有针对白薇不同基原进行鉴别。
发明内容
基于此，本发明提供一种不同基原白薇、老瓜头的指纹图谱的构建方法。该构建方法构建获得的指纹图谱能够较为全面地展示不同基原白薇、老瓜头的特征，能够用于不同基原白薇、老瓜头的鉴别。
本发明的第一方面，提供一种不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
取对羟基苯乙酮对照品、2,4-二羟基苯乙酮对照品和4-甲氧基-3-羟基苯乙酮对照品，以第一溶剂溶解，制备对照品溶液；
取不同基原白薇或老瓜头的样品，以第二溶剂提取，制备供试品溶液；
对所述对照品溶液和供试品溶液进行超高效液相色谱检测，构建所述不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱；
其中，所述超高效液相色谱检测的条件包括：流动相A为甲醇、流动相B为体积浓度0.08％～0.12％的磷酸水溶液，进行梯度洗脱。
在其中一个实施例中，所述梯度洗脱包括如下洗脱程序：
0～3min，流动相A的体积百分比由3％变化至5％；
3～8min，流动相A的体积百分比由5％变化至12％；
8～13min，流动相A的体积百分比由12％变化至20％；
13～21min，流动相A的体积百分比由20％变化至25％；
21～26min，流动相A的体积百分比保持为在25％；
26～33min，流动相A的体积百分比由25％变化至40％；
33～35min，流动相A的体积百分比保持在40％。
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；进一步地，所述色谱柱的规格包括：柱长为100mm或150mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm～1.9μm。
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：流速为0.28～0.32mL/min；柱温为27℃～33℃；检测波长为305nm～315nm。
在其中一个实施例中，以第二溶剂提取的方法具有如下所示特征中的至少一项：
(1)所述第二溶剂为体积浓度为45％～55％的甲醇水溶液或体积浓度为5％～15％的乙醇水溶液；
(2)提取的方式为超声处理或回流提取；
(3)提取的时间为15min～60min；
(4)所述第二溶剂与不同基原白薇或老瓜头的样品的体积质量比为20～30mL/g。
在其中一个实施例中，所述第一溶剂选自醇类溶剂中的一种或多种。
在其中一个实施例中，所述不同基原白薇的样品包括：白薇药材、白薇标准汤剂、白薇配方颗粒、蔓生白薇药材、蔓生白薇标准汤剂和蔓生白薇配方颗粒中的一种或多种；所述老瓜头的样品包括老瓜头药材、老瓜头标准汤剂和老瓜头配方颗粒中的一种或多种。
本发明的第二方面，提供一种不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法，包括如下步骤：
取待测样品，以第二溶剂提取，制备待测品溶液；
对所述待测品溶液进行超高效液相色谱检测，根据检测获得的色谱图中的特征峰进行鉴别；
其中，所述超高效液相色谱检测的条件包括：流动相A为甲醇、流动相B为体积浓度0.08％～0.12％的磷酸水溶液，进行梯度洗脱。
在其中一个实施例中，所述梯度洗脱包括如下洗脱程序：
0～3min，流动相A的体积百分比由3％变化至5％；
3～8min，流动相A的体积百分比由5％变化至12％；
8～13min，流动相A的体积百分比由12％变化至20％；
13～21min，流动相A的体积百分比由20％变化至25％；
21～26min，流动相A的体积百分比保持为在25％；
26～33min，流动相A的体积百分比由25％变化至40％；
33～35min，流动相A的体积百分比保持在40％。
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；进一步地，所述色谱柱的规格包括：柱长为100mm或150mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm～1.9μm。
在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：流速为0.28～0.32mL/min；柱温为27℃～33℃；检测波长为305nm～315nm。
在其中一个实施例中，以第二溶剂提取的方法具有如下所示特征中的至少一项：
(1)所述第二溶剂为体积浓度为45％～55％的甲醇水溶液或体积浓度为5％～15％的乙醇水溶液；
(2)提取的方式为超声处理或回流提取；
(3)提取的时间为15min～60min；
(4)所述第二溶剂与待测样品的体积质量比为20～30mL/g。
在其中一个实施例中，根据检测获得的色谱图中的特征峰进行鉴别是指根据对羟基苯乙酮的特征峰和/或2,4-二羟基苯乙酮的特征峰进行鉴别。
在其中一个实施例中，根据检测获得的色谱图中的特征峰进行鉴别的方法包括如下一项或两项：
(1)若检测获得的色谱图中包括对羟基苯乙酮的特征峰和/或2,4-二羟基苯乙酮的特征峰，所述待测样品为白薇；若检测获得的色谱图中不包括对羟基苯乙酮的特征峰和/或2,4-二羟基苯乙酮的特征峰，所述待测样品为老瓜头；
(2)以对羟基苯乙酮的特征峰为S峰，计算2,4-二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积，若所述2,4-二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积≥0.10，所述待测样品为白薇；若所述2,4-二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积＜0.10，所述待测样品为蔓生白薇。
上述构建方法通过采用超高效液相色谱法，并合理设置色谱条件，构建获得的指纹图谱能够较为全面地展示不同基原白薇、老瓜头的特征，进而通过对不同基原白薇及伪品老瓜头的指纹图谱进行对比研究，能够准确鉴别不同基原白薇、老瓜头，为白薇的质量控制和评价及基原鉴别提供依据。
附图说明
图1为白薇(白薇)药材不同提取溶剂指纹图谱；
图2为白薇(白薇)药材不同提取方式指纹图谱；
图3为白薇(白薇)药材不同提取时间指纹图谱；
图4为白薇(白薇)药材指纹图谱专属性考察；
图5为不同仪器的白薇(白薇)药材指纹图谱；
图6为白薇(白薇)药材指纹图谱不同柱温色谱图；
图7为白薇(白薇)药材指纹图谱不同流速色谱图；
图8为白薇(白薇)药材指纹图谱不同色谱柱色谱图；
图9为白薇(白薇)药材指纹图谱共有模式图；
图10为白薇(白薇)药材对照指纹图谱，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图11为白薇(白薇)标准汤剂指纹图谱共有模式图；
图12为白薇(白薇)标准汤剂对照指纹图谱，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图13为白薇(白薇)配方颗粒指纹图谱共有模式图；
图14为白薇(白薇)配方颗粒对照指纹图谱，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图15为白薇(蔓生白薇)药材指纹图谱共有模式图；
图16为白薇(蔓生白薇)药材对照指纹图谱，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图17为白薇(蔓生白薇)标准汤剂指纹图谱共有模式图；
图18为白薇(蔓生白薇)标准汤剂对照指纹图谱，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图19为老瓜头药材指纹图谱共有模式图；
图20为老瓜头药材对照指纹图谱；
图21为老瓜头标准汤剂指纹图谱共有模式图；
图22为老瓜头标准汤剂对照指纹图谱；
图23为白薇(白薇)药材与白薇(蔓生白薇)药材对比，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图24为白薇(白薇)标准汤剂与白薇(蔓生白薇)标准汤剂对比，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图25为白薇(白薇)药材、白薇(蔓生白薇)药材与老瓜头药材对比，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图26为白薇(白薇)标准汤剂、白薇(蔓生白薇)标准汤剂与老瓜头标准汤剂对比，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图27为待测药材(Y1)与混合对照品色谱图，其中，峰5：对羟基苯乙酮；峰7：4-甲氧基-3-羟基苯乙酮；峰8：2,4-二羟基苯乙酮；
图28为白薇(白薇)药材(G1912153、G1905027)和混合对照品色谱图，其中，峰1：对羟基苯乙酮；峰2：2,4-二羟基苯乙酮；
图29为白薇(蔓生白薇)药材(G1911129、G1911131)和混合对照品色谱图，其中，峰1：对羟基苯乙酮；峰2：2,4-二羟基苯乙酮；
图30为老瓜头药材(G1904230、G1904231)和混合对照品色谱图，其中，峰1：对羟基苯乙酮；峰2：2,4-二羟基苯乙酮；
图31为白薇(白薇)药材(G1912153、G1905027)和老瓜头药材(G1904230、G1904231)对比色谱图；
图32为白薇(蔓生白薇)药材(G1911129、G1911131)和老瓜头药材(G1904230、G1904231)对比色谱图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的不同基原白薇、老瓜头的指纹图谱的构建方法和鉴别方法作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
本文中，“一种或多种”指所列项目的任一种、任两种或任两种以上。
本发明中，“第一方面”、“第二方面”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
本发明中，涉及到数值区间，如无特别说明，上述数值区间内视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。
本发明中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相-固相混合均指质量百分比，对于液相-液相混合指体积百分比。
本发明中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。
本发明中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。
本发明中的室温一般指4℃～30℃，较佳地指20±5℃。
本发明的提供一种不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
取对羟基苯乙酮对照品、2,4-二羟基苯乙酮对照品和4-甲氧基-3-羟基苯乙酮对照品，以第一溶剂溶解，制备对照品溶液；
取不同基原白薇或老瓜头的样品，以第二溶剂提取，制备供试品溶液；
对所述对照品溶液和供试品溶液进行超高效液相色谱检测，构建所述不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱；
其中，所述超高效液相色谱检测的条件包括：流动相A为甲醇、流动相B为体积浓度0.08％～0.12％的磷酸水溶液，进行梯度洗脱。
在其中一个示例中，所述梯度洗脱包括如下洗脱程序：
0～3min，流动相A的体积百分比由3％变化至5％；
3～8min，流动相A的体积百分比由5％变化至12％；
8～13min，流动相A的体积百分比由12％变化至20％；
13～21min，流动相A的体积百分比由20％变化至25％；
21～26min，流动相A的体积百分比保持为在25％；
26～33min，流动相A的体积百分比由25％变化至40％；
33～35min，流动相A的体积百分比保持在40％。
可以理解地，洗脱程序中流动相B随着流动相A的变化而相应变化，二者的总体积百分比为100％。
在其中一个示例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。进一步地，所述色谱柱的规格包括：柱长为100mm或150mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm～1.9μm。
在其中一个示例中，所述色谱柱为Waters BEH C18(2.1mm×150mm，1.7μm，编号：BH-367)、Waters HSS T3(2.1mm×150mm，1.8μm，编号：BH-317、BH-318)或YMC Triart C18(2.1mm×150mm，1.9μm，编号：BH-365)。
在其中一个示例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：流速为0.28～0.32mL/min；柱温为27℃～33℃；检测波长为305nm～315nm。
具体地，流速包括但不限于：0.28mL/min、0.29mL/min、0.3mL/min、0.31mL/min、0.32mL/min。
具体地，柱温包括但不限于：27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃。
具体地，检测波长包括但不限于：305nm、308nm、309nm、310nm、311nm、312nm、315nm。
在其中一个示例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：进样量为1μL～5μL。具体地，进样量包括但不限于：1μL、2μL、3μL、4μL、5μL。
在其中一个示例中，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：理论板数按对羟基苯乙酮的特征峰计算应不低于5000。
在其中一个示例中，以第二溶剂提取的步骤中，所述第二溶剂为体积浓度为45％～55％的甲醇水溶液或体积浓度为5％～15％的乙醇水溶液。具体地，甲醇水溶液的体积浓度包括但不限于：45％、48％、50％、52％、55％。乙醇水溶液的体积浓度包括但不限于：5％、8％、10％、12％、15％。
在其中一个示例中，以第二溶剂提取的步骤中，提取的方式为超声处理或回流提取。进一步地，提取的方式为超声处理，功率为250W～350W，频率45kHz～55kHz。
在其中一个示例中，以第二溶剂提取的步骤中，提取的时间为15min～60min。具体地，提取的时间包括但不限于：15min、20min、25min、28min、30min、32min、35min、40min、45min、50min、55min、60min。
在其中一个示例中，以第二溶剂提取的步骤中，所述第二溶剂与不同基原白薇或老瓜头的样品的体积质量比为20～30mL/g。具体地，所述第二溶剂与不同基原白薇或老瓜头的样品的体积质量比包括但不限于：20mL/g、23mL/g、25mL/g、27mL/g、30mL/g。
在其中一个示例中，所述第一溶剂选自醇类溶剂中的一种或多种。进一步地，所述第一溶剂为甲醇。
不作限制地，所述不同基原白薇的样品包括：白薇药材、白薇标准汤剂、白薇配方颗粒、蔓生白薇药材、蔓生白薇标准汤剂和蔓生白薇配方颗粒中的一种或多种；所述老瓜头的样品包括老瓜头药材、老瓜头标准汤剂和老瓜头配方颗粒中的一种或多种。可以理解地，此处的白薇药材、白薇标准汤剂、白薇配方颗粒是指基原为白薇的白薇药材、白薇标准汤剂、白薇配方颗粒。
本发明还提供一种不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法，包括如下步骤：
取待测样品，以第二溶剂提取，制备待测品溶液；
对所述待测品溶液进行超高效液相色谱检测，根据检测获得的色谱图中的特征峰进行鉴别；
其中，所述超高效液相色谱检测的条件包括：流动相A为甲醇、流动相B为体积浓度0.08％～0.12％的磷酸水溶液，进行梯度洗脱。
可以理解地，待测样品的超高效液相色谱检测的条件以及待测样品的制备方法同前述指纹图谱的构建方法，在此不再赘述。
在其中一个示例中，根据检测获得的色谱图中的特征峰进行鉴别是指根据对羟基苯乙酮的特征峰和/或2,4-二羟基苯乙酮的特征峰进行鉴别。
在其中一个示例中，根据检测获得的色谱图中的特征峰进行鉴别的方法包括如下一项或两项：
(1)若检测获得的色谱图中包括对羟基苯乙酮的特征峰和/或2,4-二羟基苯乙酮的特征峰，所述待测样品为白薇；若检测获得的色谱图中不包括对羟基苯乙酮的特征峰和/或2,4-二羟基苯乙酮的特征峰，所述待测样品为老瓜头；
(2)以对羟基苯乙酮的特征峰为S峰，计算2,4-二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积，若所述2,4-二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积≥0.10，所述待测样品为白薇；若所述2,4-二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积＜0.10，所述待测样品为蔓生白薇。
以下为具体的实施例，如无特别说明，实施例中采用的原料均为市售产品。
实施例1：
1、仪器、试剂和试药
仪器：Waters超高效液相色谱仪(Waters H-Class，沃特斯科技(中国)有限公司)，赛默飞超高效液相色谱仪(Themo Vanquish，赛默飞)，Waters BEH C18色谱柱(2.1mm×150mm，1.7μm，编号：BH-367)、Waters HSS T3色谱柱(2.1mm×150mm，1.8μm，编号：BH-317、BH-318)、YMC Triart C18色谱柱(2.1mm×150mm，1.9μm，编号：BH-365)，万分之一天平(ME204E，梅特勒-托利多公司)，百万分之一天平(XP26，梅特勒-托利多公司)，电热恒温水浴锅(HWS-28，上海一恒科技有限公司)，数控超声波清洗器(型号：KQ500DE；厂家：昆山市超声仪器有限公司)，超纯水系统(型号：Milli-Q Direct；厂家：默克股份有限公司)。
试剂：乙醇(西陇科学股份有限公司)、甲醇(西陇科学股份有限公司)为分析纯；甲酸(科密欧有限公司)、甲醇(默克股份有限公司)为色谱级；水为超纯水(实验室自制)。
试药：对羟基苯乙酮(含量：99.9％，中国食品药品检定研究院，批号：111897-201602)，4-甲氧基-3-羟基苯乙酮(wkq21102506；来源：四川省维克奇生物科技有限公司；纯度：98％)，2,4-二羟基苯乙酮(wkq19072604；来源：四川省维克奇生物科技有限公司；含量：99.39％)。
中国药典2020年版一部规定白薇为萝摩科植物白薇Cynanchum atratum BungeBge.或蔓生白薇Cynanchum versicolor Bge.的干燥根和根茎。本次研究所用药材均经中国中医科学院中药研究所鉴定。具体信息见表1。老瓜头样品信息见表2。
表1白薇药材产地信息表
表2老瓜头药材产地信息表
2、色谱条件
以Waters HSS T3(2.1mm×150mm，1.8μm)为色谱柱；以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，按表3中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.30mL；柱温为30℃；检测波长为310nm；进样量为2μL。
表3梯度洗脱表
3、对照品溶液的制备
精密称取对羟基苯乙酮对照品3.155mg，置10mL量瓶中，加甲醇制成每1mL含对羟基苯乙酮315.1845μg的对照品溶液，即得。
精密称取2,4-二羟基苯乙酮对照品2.073mg，置10mL量瓶中，加甲醇制成每1mL含2,4-二羟基苯乙酮206.8232μg的对照品溶液，即得。
精密称取4-甲氧基-3-羟基苯乙酮对照品2.093mg，置10mL量瓶中，加甲醇制成每1mL含4-甲氧基-3-羟基苯乙酮205.1140μg的对照品溶液，即得。
分别精密吸取上述对照品溶液1mL于10mL量瓶中，加甲醇至刻度，制得每1mL含对羟基苯乙酮31.5185μg、2,4-二羟基苯乙酮20.6823μg、4-甲氧基-3-羟基苯乙酮20.5114μg的混合对照品溶液。
4、供试品溶液的制备
分别考察提取溶剂、提取方式及提取时间对白薇(白薇)药材指纹图谱的影响，以确定最佳样品前处理方法。
(1)提取溶剂考察
本次实验分别考察了不同提取溶剂对白薇(白薇)药材指纹图谱的影响，选取甲醇、70％甲醇水溶液、50％甲醇水溶液、30％甲醇水溶液、10％甲醇水溶液、50％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液、10％乙醇水溶液作为提取溶剂，通过观察暂定的8个特征峰的峰型和分离效果，并计算8个特征峰的“总峰面积/称样量”来比较不同提取溶剂对白薇(白薇)药材指纹图谱的影响，选择最佳提取溶剂。
取白薇(白薇)药材粉末(过三号筛，批号：BW04)约1.0g，精密称定，平行8组，每组2份，置具塞锥形瓶中，分别加甲醇、70％甲醇水溶液、50％甲醇水溶液、30％甲醇水溶液、10％甲醇水溶液、50％乙醇水溶液、30％乙醇水溶液、10％乙醇水溶液各25mL，超声处理(功率300W，频率50kHz)30分钟，放冷，离心，上清液蒸干，用相应溶剂定容至10mL量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液进样测定。白薇(白薇)药材指纹图谱不同提取溶剂考察结果见表4，图1。
表4白薇(白薇)药材指纹图谱不同提取溶剂考察结果表
实验结果：通过对比8种提取溶剂的指纹图谱可发现，使用不同溶剂提取对“总峰面积/称样量”具有明显差异，虽使用50％乙醇水溶液和70％甲醇水溶液时，“总峰面积/称样量”最大，但对应的色谱峰峰型不佳，使用50％甲醇水溶液为提取溶剂时，各色谱峰的峰型较好，因此采用50％甲醇水溶液作为白薇(白薇)药材指纹图谱的提取溶剂。
(2)提取方式考察
本次实验分别考察了不同提取方式对白薇(白薇)药材指纹图谱的影响，选取超声处理、加热回流作为提取方式，通过观察暂定的8个特征峰的峰型和分离效果，并计算8个特征峰的“总峰面积/称样量”，比较不同提取方式对白薇(白薇)药材指纹图谱的影响。
取白薇(白薇)药材粉末(过三号筛，批号：BW04)约1.0g，精密称定，平行2组，每组2份，置具塞锥形瓶中，加50％甲醇水溶液25mL，分别超声处理(功率300W，频率50kHz)30分钟、加热回流30分钟，放冷，离心，上清液蒸干，用50％甲醇水溶液定容至10mL量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液进样测定。白薇(白薇)药材指纹图谱不同提取方式考察结果见表5，图2。
表5白薇(白薇)药材指纹图谱不同提取方式考察结果表
实验结果：通过对比超声处理和回流提取发现，不同提取方式对白薇(白薇)药材指纹图谱影响不大，从操作方便考虑，选择超声处理作为提取方式。
(3)提取时间考察
本次实验分别考察了不同超声时间对白薇(白薇)药材指纹图谱的影响，选取考察15分钟、30分钟、45分钟和60分钟三个不同提取时间，通过计算暂定的8个特征峰的“总峰面积/称样量”来比较不同的超声时间对白薇(白薇)药材指纹图谱的影响。
取白薇(白薇)药材粉末(过三号筛，批号：BW04)约1.0g，精密称定，平行3组，每组2份，置具塞锥形瓶中，加50％甲醇水溶液25mL，分别超声处理(功率300W，频率50kHz)15分钟、30分钟、45分钟、60分钟，放冷，离心，上清液蒸干，残渣加50％甲醇水溶液定容至10mL量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液进样测定。白薇(白薇)药材指纹图谱不同提取时间考察结果见表6，图3。
表6白薇(白薇)药材指纹图谱不同提取时间考察结果表
实验结果：通过对比不同提取时间对白薇(白薇)药材指纹图谱影响发现，不同的提取时间对白薇(白薇)药材指纹图谱影响并不大，为保证提取完全，选择超声提取30分钟。
(4)供试品溶液的制备方法的确定
根据上述实验结果，白薇(白薇)药材指纹图谱样品前处理方法可确定为：取白薇(白薇)药材粉末(过三号)筛适量，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50％甲醇水溶液25mL，超声处理(功率300W，频率50kHz)30分钟，放冷，离心，上清液蒸干，残渣加加50％甲醇水溶液定容至10mL量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得。白薇(蔓生白薇)与老瓜头的药材同理。
另外，白薇(白薇)标准汤剂、配方颗粒的提取溶剂为10％乙醇，在该条件下，各色谱峰响应值较高，其余步骤同上。白薇(蔓生白薇)与老瓜头的标准汤剂、配方颗粒同理。
5方法学验证
(1)专属性考察
精密吸取白薇(白薇)药材(BW04)供试品溶液、参照物溶液与空白溶剂各2μl，注入液相色谱仪测定。结果见图4。
结果显示，供试品色谱在与对照品色谱相应的保留时间处有相同的色谱峰，且阴性无干扰，说明该方法专属性良好。
(2)精密度考察
取白薇(白薇)药材(BW04)适量，研细，取约1.0g，精密称定，按确定的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进样分析，同一份供试品溶液连续进样6次，以对羟基苯乙酮峰为参照峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，并计算RSD值。实验结果见表7和表8。
表7白薇(白薇)药材指纹图谱精密度考察结果表(相对保留时间)
表8白薇(白薇)药材指纹图谱精密度考察结果表(相对峰面积)
结果显示，同一份供试品溶液连续进样6次，以对羟基苯乙酮峰为参照峰S，各特征峰与S峰的相对保留时间RSD值在0.02％～0.10％范围内，相对峰面积RSD值在0.18％～1.12％范围内，RSD值小于5％，表明仪器精密度良好。
(3)重复性考察
取白薇(白薇)药材(BW04)适量，研细，取约1.0g，平行6份，精密称定，按确定的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进样分析，以对羟基苯乙酮峰为参照峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，并计算RSD值。实验结果见表9。
表9白薇(白薇)药材指纹图谱重复性考察结果表(相对保留时间)
结果显示，同一批样品重复测定6次，以对羟基苯乙酮色谱峰为参照峰，各特征峰与S峰的相对保留时间RSD值在0.01％～0.07％范围内，RSD值小于5％，说明该方法相对保留时间重复性良好。
(4)稳定性考察
取白薇(白薇)药材(BW04)适量，研细，取约1.0g，精密称定，按确定的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12小时进样分析，以对羟基苯乙酮峰为参照峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，并计算RSD值。实验结果见表10和表11。
表10白薇(白薇)药材指纹图谱稳定性考察结果表(相对保留时间)
表11白薇(白薇)药材指纹图谱稳定性考察结果表(相对峰面积)
结果显示，同一份供试品溶液分别在0、2、4、6、8、10、12小时进行分析，以对羟基苯乙酮峰为参照峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，各特征峰与S峰的相对保留时间RSD值在0.02％～0.30％范围内，相对峰面积RSD值在0.20％～0.94％范围内，RSD值小于5％，表明供试品溶液在12小时内稳定性良好。
(5)中间精密度考察
由不同的分析人员在不同时间于不同的仪器上操作，取白薇(白薇)药材(BW04)适量，研细，取约1.0g，平行6份，精密称定，按确定的供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，进样分析，以对羟基苯乙酮峰为参照峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，并计算RSD值，实验结果见表12，中间精密度考察色谱图见图5。
表12白薇(白薇)药材中间精密度考察结果表(相对保留时间)
结果显示，由不同的分析人员在不同时间于不同的仪器上操作，同一批样品重复测定6次，以对羟基苯乙酮色谱峰为参照峰S，各特征峰与S峰的相对保留时间RSD值在0.01％～0.47％范围内。
(6)耐用性考察
①不同柱温考察
比较不同的柱温，分别为27℃、30℃和33℃对白薇(白薇)药材指纹图谱的影响。
取白薇(白薇)药材(BW04)适量，研细，取约1.0g，精密称定，按确定的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，除柱温分别为27℃、30℃和33℃外，其他色谱条件均同色谱条件项下的规定，进样分析，以对羟基苯乙酮峰为参照峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，并计算RSD值。实验结果见表13、表14、图6。
表13白薇(白薇)药材指纹图谱柱温考察结果表(相对保留时间)
表14白薇(白薇)药材指纹图谱柱温考察结果表(相对峰面积)
实验结果显示，不同柱温时，各色谱峰相对保留时间RSD值在0.10％～0.89％范围内，相对峰面积RSD值在0.47％～3.29％范围内，RSD值小于5％，说明柱温的变化对各特征峰的相对保留时间和相对峰面积耐用性良好；柱温小的变动能满足系统适用性要求。
②不同流速考察
比较不同的流速，分别为0.28mL/min、0.30mL/min和0.32mL/min对白薇(白薇)药材指纹图谱的影响。
取白薇(白薇)药材(BW04)适量，研细，取约1.0g，精密称定，按确定的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，除流速分别为0.28mL/min、0.30mL/min和0.32mL/min外，其他色谱条件均同色谱条件项下的规定，进样分析，以对羟基苯乙酮峰为参照峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，并计算RSD值，实验结果见表15、表16、图7。
表15白薇(白薇)药材指纹图谱流速考察结果表(相对保留时间)
表16白薇(白薇)药材指纹图谱流速考察结果表(相对峰面积)
实验结果显示，不同流速时，各色谱峰相对保留时间RSD值在0.15％～2.83％范围内，相对峰面积RSD值在0.25％～4.49％范围内，RSD值小于5％，说明流速的变化对各特征峰的相对保留时间和相对峰面积耐用性良好。流速小的变动能满足系统适用性要求。
③不同色谱柱考察
比较了4种色谱柱，分别是：Waters BEH C18(2.1mm×150mm，1.7μm，编号：BH-367)、Waters HSS T3(2.1mm×150mm，1.8μm，编号：BH-317、BH-318)、YMC Triart C18(2.1mm×150mm，1.9μm，编号：BH-365)四根色谱柱对白薇(白薇)药材指纹图谱耐用性的影响。
取白薇(白薇)药材(BW04)适量，研细，取约1.0g，精密称定，按确定的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，除色谱柱不同外，其他色谱条件均同色谱条件项下的规定，进样分析，以对羟基苯乙酮峰为参照峰S，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积，并计算RSD值，实验结果见表17、图8。
表17白薇(白薇)药材指纹图谱色谱柱考察结果表(相对保留时间)
实验结果表明，采用不同型号色谱柱，各特征峰的相对保留时间RSD值在0.77％～3.58％范围内，RSD值小于5％，表明不同型号色谱柱各特征峰的相对保留时间耐用性良好。
④耐用性小结
该指纹图谱方法经专属性、精密度、重复性和稳定性验证，均符合规定，经中间精密度和耐用性考察，相对保留时间较稳定。
6指纹图谱测定
取白薇(白薇)药材、白薇(白薇)标准汤剂、白薇(白薇)配方颗粒、白薇(蔓生白薇)药材、白薇(蔓生白薇)标准汤剂、老瓜头药材、老瓜头标准汤剂，按上述供试品制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，然后将获得的色谱图使用《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》，按平均数法(或中位数法)生成对照图谱，建立白薇(白薇)药材指纹图谱、白薇(白薇)标准汤剂指纹图谱、白薇(白薇)配方颗粒指纹图谱、白薇(蔓生白薇)药材指纹图谱、白薇(蔓生白薇)标准汤剂指纹图谱、老瓜头药材指纹图谱、老瓜头标准汤剂指纹图谱，如图9～图22，并对共有峰进行标识。
7、对比研究分析
不同基原白薇对比：由图23(白薇(白薇)药材和白薇(蔓生白薇)药材对比图)和图24(白薇(白薇)标准汤剂和白薇(蔓生白薇)标准汤剂对比图)可知，白薇(白薇)和白薇(蔓生白薇)2个基原指纹图谱色谱图中均呈现相同的8个色谱峰，色谱信号基本一致，但从二者的对比图可发现，二者的主要区别在色谱峰8，白薇(白薇)药材和白薇(白薇)标准汤剂中，色谱峰8(2,4-二羟基苯乙酮)响应值较高，而白薇(蔓生白薇)药材和白薇(蔓生白薇)标准汤剂中，色谱峰8基本上与接近于基线，色谱峰不明显，因此可以通过规定色谱峰8的相对峰面积来区别二者。由于色谱峰5(对羟基苯乙酮)化学成分已知，且该成分稳定性较好，因此以色谱峰5为S峰，计算色谱峰8的相对峰面积(见表18)。根据15批白薇(白薇)药材和15批白薇(白薇)标准汤剂峰8的相对峰面积，取最小值的70％(0.10)为下限，即峰8的相对峰面积不得少于0.10，该条件下能区别白薇(白薇)和白薇(蔓生白薇)2个基原，且在药材和标准汤剂中，该条件均符合。因此，以色谱峰5为S峰，计算峰8的相对峰面积，其相对峰面积≥0.10时，可判断为白薇(白薇)、而相对峰面积＜0.10时，可判断为白薇(蔓生白薇)。
表18白薇以峰5为S峰的峰8的相对峰面积
(2)白薇与伪品老瓜头的对比：由图25(白薇(白薇)药材、白薇(蔓生白薇)药材与老瓜头药材对比图)和图26(白薇(白薇)标准汤剂、白薇(蔓生白薇)标准汤剂与老瓜头标准汤剂对比图)可知，白薇(白薇)、白薇(蔓生白薇)指纹图谱与老瓜头指纹图谱差异明显，在保留时间0～16分钟内，白薇(白薇)、白薇(蔓生白薇)与老瓜头色谱峰基本一致，但16分钟后色谱峰差异明显，老瓜头指纹图谱中不具有白薇(白薇)、白薇(蔓生白薇)指纹图谱中已知成分的色谱峰5(对羟基苯乙酮)和色谱峰8(2,4-二羟基苯乙酮)，因此可通过对照品鉴定是否存在对羟基苯乙酮和2,4-二羟基苯乙酮化合物来区别白薇(白薇)、白薇(蔓生白薇)和伪品老瓜头。
实施例2：
待测药材的鉴定
鉴定步骤1：确定样品是否为老瓜头
上述构建的白薇药材指纹图谱与上述构建的老瓜头药材指纹图谱比较图如图25所示，对比可知，在保留时间0～16分钟内，白薇与老瓜头色谱峰基本一致，但16分钟后色谱峰差异明显，老瓜头指纹图谱中不具有白薇指纹图谱中已知成分的色谱峰5(对羟基苯乙酮)和色谱峰8(2,4-二羟基苯乙酮)，因此可通过对照品鉴定是否存在对羟基苯乙酮和2,4-二羟基苯乙酮化合物来区别白薇和伪品老瓜头。
将待测药材(Y1)的按上述供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并取对羟基苯乙酮对照品、4-甲氧基-3-羟基苯乙酮对照品和2,4-二羟基苯乙酮对照品，制备对照品溶液，按已构建的指纹图谱方法进样测定(见图27)。结果显示，供试品溶液指纹图谱中共检出8个色谱峰，且具有与对羟基苯乙酮对照品和2,4-二羟基苯乙酮对照品相对应的色谱峰；因此，可判断该样品不是老瓜头，而为白薇药材。
鉴定步骤2：确定样品基原
上述构建的白薇(白薇)药材指纹图谱与上述构建的白薇(蔓生白薇)药材指纹图谱比较图如图23所示，确定鉴别不同基原白薇条件为：以色谱峰5为S峰，计算峰8的相对峰面积，其相对峰面积≥0.10时，可判断为白薇(白薇)、而相对峰面积＜0.10时，可判断为白薇(蔓生白薇)。
选择与对羟基苯乙酮相对应的色谱峰5为S峰，计算所测定药材(Y1)指纹图谱中的色谱峰8的相对峰面积，其计算值为0.062(相对峰面积＜0.10)，因此，可判断该样品为白薇(蔓生白薇)。
综合分析，待测药材(Y1)为白薇(蔓生白薇)药材。
实施例3
取白薇(白薇)药材(G1912153、G1905027)、白薇(蔓生白薇)药材(G1911129、G1911131)、老瓜头药材(G1904230、G1904231)按上述供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并取对羟基苯乙酮对照品和2,4-二羟基苯乙酮对照品，制备对照品溶液，按中国专利CN108872411A实施例中的“2.3色谱条件”进样测定(见图28～图32)。由图28可知，该色谱条件下白薇(白薇)药材中具有与对羟基苯乙酮和2,4-二羟基苯乙酮相一致的色谱峰，但对羟基苯乙酮相对应的色谱峰峰型较差，存在其他化合物峰干扰，难以判断该化合物为对羟基苯乙酮；由图29可知，该色谱条件下白薇(蔓生白薇)药材中具有与对羟基苯乙酮和2,4-二羟基苯乙酮相一致的色谱峰，但色谱峰峰型较差，存在其他化合物峰干扰，难以判断该化合物为对羟基苯乙酮和2,4-二羟基苯乙酮，特别是与2,4-二羟基苯乙酮相对应的色谱峰，接近于基线，难以确定该化合物为一个专属化合物；由图31可区分白薇(白薇)和老瓜头，但是对比图32可发现，白薇(蔓生白薇)和老瓜头具有相一致的色谱峰，说明该方法无法区别白薇(蔓生白薇)和老瓜头。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (9)

1.一种不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
取对羟基苯乙酮对照品、2,4-二羟基苯乙酮对照品和4-甲氧基-3-羟基苯乙酮对照品，以第一溶剂溶解，制备对照品溶液；
取不同基原白薇或老瓜头的样品，以第二溶剂提取，制备供试品溶液；所述第二溶剂为体积浓度为45%~55%的甲醇水溶液或体积浓度为5%~15%的乙醇水溶液；
对所述对照品溶液和供试品溶液进行超高效液相色谱检测，构建所述不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱；
其中，所述超高效液相色谱检测的条件包括：
流动相A为甲醇、流动相B为体积浓度0.08%~0.12%的磷酸水溶液，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱包括如下洗脱程序：
0~3min，流动相A的体积百分比由3%变化至5%；
3~8min，流动相A的体积百分比由5%变化至12%；
8~13min，流动相A的体积百分比由12%变化至20%；
13~21min，流动相A的体积百分比由20%变化至25%；
21~26min，流动相A的体积百分比保持在25%；
26~33min，流动相A的体积百分比由25%变化至40%；
33~35min，流动相A的体积百分比保持在40%；
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
检测波长为305nm~315nm；
所述不同基原白薇的样品包括：白薇药材、白薇标准汤剂、白薇配方颗粒、蔓生白薇药材、蔓生白薇标准汤剂和蔓生白薇配方颗粒中的一种或多种；所述老瓜头的样品包括老瓜头药材、老瓜头标准汤剂和老瓜头配方颗粒中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述色谱柱的规格包括：柱长为100mm或150mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm~1.9μm。
3.根据权利要求1所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：流速为0.28~0.32mL/min；柱温为27℃~33℃。
4.根据权利要求1所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法，其特征在于，以第二溶剂提取的方法具有如下所示特征中的至少一项：
（1）提取的方式为超声处理或回流提取；
（2）提取的时间为15min~60min；
（3）所述第二溶剂与不同基原白薇或老瓜头的样品的体积质量比为20~30mL/g。
5.根据权利要求1所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述第一溶剂选自醇类溶剂中的一种或多种。
6.一种不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：
取待测样品，以第二溶剂提取，制备待测品溶液；所述第二溶剂为体积浓度为45%~55%的甲醇水溶液或体积浓度为5%~15%的乙醇水溶液；
对所述待测品溶液进行超高效液相色谱检测，根据检测获得的色谱图中的特征峰进行鉴别；
其中，所述超高效液相色谱检测的条件包括：
流动相A为甲醇、流动相B为体积浓度0.08%~0.12%的磷酸水溶液，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱包括如下洗脱程序：
0~3min，流动相A的体积百分比由3%变化至5%；
3~8min，流动相A的体积百分比由5%变化至12%；
8~13min，流动相A的体积百分比由12%变化至20%；
13~21min，流动相A的体积百分比由20%变化至25%；
21~26min，流动相A的体积百分比保持在25%；
26~33min，流动相A的体积百分比由25%变化至40%；
33~35min，流动相A的体积百分比保持在40%；
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
检测波长为305nm~315nm；
根据检测获得的色谱图中的特征峰进行鉴别是指根据对羟基苯乙酮的特征峰和2,4-二羟基苯乙酮的特征峰进行鉴别，包括如下一项或两项：
（1）若检测获得的色谱图中包括对羟基苯乙酮的特征峰和2,4-二羟基苯乙酮的特征峰，所述待测样品为白薇；若检测获得的色谱图中不包括对羟基苯乙酮的特征峰和2,4-二羟基苯乙酮的特征峰，所述待测样品为老瓜头；
（2）以对羟基苯乙酮的特征峰为S峰，计算2,4-二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积，若所述2,4-二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积≥0.10，所述待测样品为白薇；若所述2,4-二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积＜0.10，所述待测样品为蔓生白薇。
7.根据权利要求6所述的不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法，其特征在于，所述色谱柱的规格包括：柱长为100mm或150mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm~1.9μm。
8.根据权利要求6所述的不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法，其特征在于，所述超高效液相色谱检测的条件还包括：流速为0.28~0.32mL/min；柱温为27℃~33℃。
9.根据权利要求6所述的不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法，其特征在于，以第二溶剂提取的方法具有如下所示特征中的至少一项：
（1）提取的方式为超声处理或回流提取；
（2）提取的时间为15min~60min；
（3）所述第二溶剂与待测样品的体积质量比为20~30mL/g。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108845040A (zh) * 2018-03-26 2018-11-20 山东省食品药品检验研究院 一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法
CN108872411A (zh) * 2018-03-26 2018-11-23 山东省食品药品检验研究院 一种鉴别白薇中是否混有老瓜头的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108845040A (zh) * 2018-03-26 2018-11-20 山东省食品药品检验研究院 一种女金丸是否含有白薇伪品老瓜头的鉴别方法
CN108872411A (zh) * 2018-03-26 2018-11-23 山东省食品药品检验研究院 一种鉴别白薇中是否混有老瓜头的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王元书 等.HPLC法测定直立白薇中对羟基苯乙酮和2,4-二羟基苯乙酮的含量.天然产物研究与开发.2010,第22卷(第06期),1073-1076. *
白薇（白薇）配方颗粒.http://gdidc.gd.gov.cn/attachment/0/490/490716/3944368.pdf.2022,1-3. *
苏允思 等.白薇化学成分及药理作用研究进展.中华中医药学刊.2021,第39卷(第11期),171-177. *

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