CN116448909A - 吴茱萸或石虎的uplc特征图谱构建方法及其应用 - Google Patents
吴茱萸或石虎的uplc特征图谱构建方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116448909A CN116448909A CN202310357089.6A CN202310357089A CN116448909A CN 116448909 A CN116448909 A CN 116448909A CN 202310357089 A CN202310357089 A CN 202310357089A CN 116448909 A CN116448909 A CN 116448909A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- evodia rutaecarpa
- tiger
- peak
- solution
- uplc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241001078983 Tetradium ruticarpum Species 0.000 title claims abstract description 127
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 title claims abstract description 60
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 51
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 35
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- ACVGWSKVRYFWRP-UHFFFAOYSA-N Rutecarpine Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(CCC=3C4=CC=CC=C4NC=33)C3=NC2=C1 ACVGWSKVRYFWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 20
- TXDUTHBFYKGSAH-SFHVURJKSA-N Evodiamine Chemical compound C1=CC=C2N(C)[C@@H]3C(NC=4C5=CC=CC=4)=C5CCN3C(=O)C2=C1 TXDUTHBFYKGSAH-SFHVURJKSA-N 0.000 claims abstract description 19
- HMXRXBIGGYUEAX-SFHVURJKSA-N Evodiamine Natural products CN1[C@H]2N(CCc3[nH]c4ccccc4c23)C(=O)c5ccccc15 HMXRXBIGGYUEAX-SFHVURJKSA-N 0.000 claims abstract description 19
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 claims abstract description 18
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims abstract description 18
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 claims abstract description 18
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000001100 (2S)-5,7-dihydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)chroman-4-one Substances 0.000 claims abstract description 13
- QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N Hesperidine Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(COC4C(C(O)C(O)C(C)O4)O)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N Hyperin Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N 0.000 claims abstract description 13
- FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N Hyperosid Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC=C(O)C(O)=C1 FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- QUQPHWDTPGMPEX-UTWYECKDSA-N aurantiamarin Natural products COc1ccc(cc1O)[C@H]1CC(=O)c2c(O)cc(O[C@@H]3O[C@H](CO[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]4O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)cc2O1 QUQPHWDTPGMPEX-UTWYECKDSA-N 0.000 claims abstract description 13
- APSNPMVGBGZYAJ-GLOOOPAXSA-N clematine Natural products COc1cc(ccc1O)[C@@H]2CC(=O)c3c(O)cc(O[C@@H]4O[C@H](CO[C@H]5O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]5O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]4O)cc3O2 APSNPMVGBGZYAJ-GLOOOPAXSA-N 0.000 claims abstract description 13
- VXHNSVKJHXSKKM-UHFFFAOYSA-O dehydroevidiamine Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2[N+](C)=C2N1CCC1=C2NC2=CC=CC=C21 VXHNSVKJHXSKKM-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims abstract description 13
- VXHNSVKJHXSKKM-UHFFFAOYSA-N dehydroevodiamine Natural products C1CN2C(=O)C3=CC=CC=C3N(C)C2=C2C1=C1C=CC=CC1=N2 VXHNSVKJHXSKKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- VUYDGVRIQRPHFX-UHFFFAOYSA-N hesperidin Natural products COc1cc(ccc1O)C2CC(=O)c3c(O)cc(OC4OC(COC5OC(O)C(O)C(O)C5O)C(O)C(O)C4O)cc3O2 VUYDGVRIQRPHFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- QUQPHWDTPGMPEX-QJBIFVCTSA-N hesperidin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@H]4[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 QUQPHWDTPGMPEX-QJBIFVCTSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229940025878 hesperidin Drugs 0.000 claims abstract description 13
- ARGKVCXINMKCAZ-UHFFFAOYSA-N neohesperidine Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)OC3C(C(O)C(O)C(C)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 ARGKVCXINMKCAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N quercetin 3-O-beta-D-galactopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N 0.000 claims abstract description 13
- BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N quercetin-7-o-galactoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- BCPAKGGXGLGKIO-UHFFFAOYSA-N Pseudorutaecarpin Natural products C1=CC=C2C(=O)N(CCC3=C4C5=CC=CC=C5N3)C4=NC2=C1 BCPAKGGXGLGKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- GWTUHAXUUFROTF-UHFFFAOYSA-N pseudochlorogenic acid Natural products C1C(O)C(O)C(O)CC1(C(O)=O)OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 GWTUHAXUUFROTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N trans-5-O-caffeoyl-D-quinic acid Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)C[C@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-NXLLHMKUSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 108
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 74
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 49
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 37
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 17
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000000513 principal component analysis Methods 0.000 claims description 8
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N hyperoside Natural products OC[C@H]1O[C@@H](OC2=C(Oc3cc(O)cc(O)c3[C@H]2O)c4ccc(O)c(O)c4)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N 0.000 claims description 7
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 238000012567 pattern recognition method Methods 0.000 claims description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 claims description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 4
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 11
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 30
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 18
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 16
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 4
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 4
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 241001312741 Gekko swinhonis Species 0.000 description 2
- 241001093501 Rutaceae Species 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010019909 Hernia Diseases 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010067171 Regurgitation Diseases 0.000 description 1
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000916 dilatatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 229930005303 indole alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000002475 indoles Chemical class 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000012847 principal component analysis method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 150000007660 quinolones Chemical class 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000010971 suitability test Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 201000004647 tinea pedis Diseases 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/36—Control of physical parameters of the fluid carrier in high pressure liquid systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了一种吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，包括如下步骤：取新绿原酸、绿原酸、金丝桃苷、橙皮苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱与吴茱萸次碱对照品，制备混合对照品溶液；取吴茱萸药材或石虎药材，制备吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液；将所述吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液，以及所述混合对照品溶液进行超高效液相色谱测定。该特征图谱构建方法专属性强、耗时短、峰识别数目多，极大地节省了检测成本，并提高了分析效率。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法及其应用。
背景技术
吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.、石虎Euodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang或疏毛吴茱萸Euodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果实，又名食茱萸、吴萸、茶辣与漆辣子等，始载于《神农本草经》，列为中品。其味辛、苦，热，有小毒。归肝、脾、胃、肾经。具有温脾止泻、散寒止痛与降逆止呕等功效，常用于厥阴头痛、寒疝腹痛、寒湿脚气、经行腹痛、脘腹胀痛、呕吐吞酸以及五更泄泻等。吴茱萸的主要活性成分为吲哚生物碱类、喹诺酮生物碱类与内酯类等。有文献报道吴茱萸生物碱类成分具有强心、保护心脏与舒张血管的作用，其对血压的影响呈先降后升，还能松弛胃肠平滑肌，具有较好的抗肿瘤作用。
吴茱萸原植物以栽培为主，全国各地都有大面积的栽种，主产于江西、广西、安徽与重庆等地区，但由于各地采收季节差异、异地引种及基原多样等现象，导致各地吴茱萸药材的质量差异非常大。中国药典规定吴茱萸的基原为芸香科植物吴茱萸、石虎或疏毛吴茱萸。目前吴茱萸商品药材流通情况调查显示其主要以原植物来源的吴茱萸的各种栽培品种为主，吴茱萸在我国分布广，适应性强，变种多，石虎来源次之，疏毛吴茱萸在市场上所占比例很小，且疏毛吴茱萸产地较少，种植面积较小。但是，三种基原的吴茱萸植物形态特征较为相似，很难实现吴茱萸药材基原的鉴别。
现代学者对吴茱萸的研究多集中成分分析及含量测定。由于吴茱萸中药其植物形态特征的相似性、有效成分的多样性及复杂性，中药指纹图谱或特征图谱能够提供更全面、丰富的信息，常用于中药材得到质量控制研究。特征图谱是利用现代信息采集技术和质量分析手段得到的能够显现中药材或其他剂型性质的图像、光谱的图谱及数据，能比较全面地反映中药所含化学成分的种类与数量，评价整体性质量，能为吴茱萸的药材质量评价提供一定参考。然而，尽管关于不同基原的吴茱萸质量差异的比较已有多篇报道，但研究结论并不一致，并且目前建立的鉴别方法存在样品批次少、耗时长或色谱峰少等问题，无法全面表征吴茱萸的化学成分类型。
发明内容
基于此，本发明提供了一种吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其专属性强、耗时短、峰识别数目多，极大地节省了检测成本，并提高了分析效率。
本发明通过如下技术方案实现。
一种吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，包括如下步骤：
取新绿原酸、绿原酸、金丝桃苷、橙皮苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱与吴茱萸次碱对照品，制备混合对照品溶液；
取吴茱萸药材或石虎药材，制备吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液；
将所述吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液，以及所述混合对照品溶液进行超高效液相色谱测定；
超高效液相色谱测定的条件包括：流动相A为乙腈，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序包括：0min～9min，流动相A的体积百分数为8％，9min～18min，流动相A的体积百分数从8％变化至30％，18min～28min，流动相A的体积百分数从30％变化至80％，28min～33min，流动相A的体积百分数从80％变化至100％。
在其中一个实施例中，所述磷酸水溶液中，磷酸的体积分数为0.05％～0.2％。
在其中一个实施例中，超高效液相色谱测定的条件还包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温为30℃±2℃；流速为0.3mL/min±0.1mL/min；波长为254nm±20nm。
在其中一个实施例中，所述吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法所构建的特征图谱中，共有特征峰的数量为18；其中，峰4为新绿原酸的色谱峰，峰6为绿原酸的色谱峰，峰9为金丝桃苷的色谱峰，峰11为橙皮苷的色谱峰，峰12为去氢吴茱萸碱的色谱峰，峰14为吴茱萸碱的色谱峰，峰15为吴茱萸次碱的色谱峰。
在其中一个实施例中，制备混合对照品溶液包括如下步骤：
将新绿原酸、绿原酸、金丝桃苷、橙皮苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品与第一甲醇水溶液混合。
在其中一个实施例中，制备吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液包括如下步骤：
将吴茱萸药材或石虎药材与第二甲醇水溶液混合，超声提取，然后过滤，取滤液。
在其中一个实施例中，所述第一甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为60％～80％；所述第二甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为60％～80％。
在其中一个实施例中，还包括如下步骤：
采用化学模式识别法对所述吴茱萸供试品溶液与石虎供试品溶液的图谱进行分析。
在其中一个实施例中，所述化学模式识别法包括相似度分析、聚类分析与主成分分析中的一种或多种。
本发明还提供一种如上所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法在鉴别吴茱萸与石虎中的应用。
与现有技术相比较，本发明的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法具有如下有益效果：
本发明采用超高效液相色谱法建立吴茱萸或石虎的特征图谱，通过筛选流动相分别为乙腈与磷酸水溶液，并限定梯度洗脱方式，最终构建的吴茱萸或石虎的特征图谱具有18个共有特征峰，以对照品为参照，指认了7个成分，所建立的特征图谱能较全面地反映出吴茱萸或石虎的整体信息。此外，本发明提供的供试品溶液的制备过程简单，特征图谱构建方法专属性强、耗时短、峰识别数目多，极大地节省了检测成本，并提高了分析效率，可作为吴茱萸或石虎药材质量控制的一种有效、可行的方法。
附图说明
图1为本发明提供的梯度条件1对应的色谱图；
图2为本发明提供的梯度条件2对应的色谱图；
图3为本发明提供的梯度条件3对应的色谱图；
图4为本发明提供的梯度条件4对应的色谱图；
图5为本发明提供的3D扫描图；
图6为本发明提供的不同波长对应的色谱图；
图7为本发明提供的不同色谱柱对应的色谱图；
图8为本发明提供的不同水相对应的色谱图；
图9为本发明提供的不同磷酸浓度对应的色谱图；
图10为本发明提供的不同有机相对应的色谱图；
图11为本发明提供的不同柱温对应的色谱图；
图12为本发明提供的不同流速对应的色谱图；
图13为本发明提供的不同提取溶剂对应的色谱图；
图14为本发明提供的不同提取时间对应的色谱图；
图15为本发明提供的吴茱萸色谱峰指认图；
图16为本发明提供的吴茱萸药材UPLC特征图谱；
图17为本发明提供的18批吴茱萸药材聚类分析图；
图18为本发明提供的碎石图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施方式。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。在本发明的描述中，“若干”的含义是至少一个，例如一个，两个等，除非另有明确具体的限定。
本发明中的词语“优选地”、“更优选地”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本发明的范围之外。
当本文中公开一个数值范围时，上述范围视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。
除非另外指明，所有百分比、分数和比率都是按本发明组合物的总质量计算的。除非另外指明，有关所列成分的所有质量均给予活性物质的含量，因此它们不包括在可商购获得的材料中可能包含的溶剂或副产物。本文术语“质量百分比含量”可用符号“％”表示。除非另外指明，在本文中所有的分子量都是以道尔顿为单位表示的重均分子量。除非另外指明，在本文中所有配制和测试发生在25℃的环境。本文中“包括”、“包含”、“含”、“含有”、“具有”或其它变体意在涵盖非封闭式包括，这些术语之间不作区分。术语“包含”是指可加入不影响最终结果的其它步骤和成分。本发明的组合物和方法/工艺包含、由其组成和基本上由本文描述的必要元素和限制项以及本文描述的任一的附加的或任选的成分、组份、步骤或限制项组成。本文中术语“效能”、“性能”、“效果”、“功效”之间不作区分。
本发明实施例说明书中所提到的相关成分的重量不仅仅可以指代各组分的具体含量，也可以表示各组分间重量的比例关系，因此，只要是按照本发明实施例说明书相关组分的含量按比例放大或缩小均在本发明实施例说明书公开的范围之内。具体地，本发明实施例说明书中所述的重量可以是ug、mg、g、kg等化工领域公知的质量单位。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明提供了一种吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，包括如下步骤：
取新绿原酸、绿原酸、金丝桃苷、橙皮苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱与吴茱萸次碱对照品，制备混合对照品溶液；
取吴茱萸药材或石虎药材，制备吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液；
将吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液，以及混合对照品溶液进行超高效液相色谱测定；
超高效液相色谱测定的条件包括：流动相A为乙腈，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱；梯度洗脱的程序包括：0min～9min，流动相A的体积百分数为8％，9min～18min，流动相A的体积百分数从8％变化至30％，18min～28min，流动相A的体积百分数从30％变化至80％，28min～33min，流动相A的体积百分数从80％变化至100％。
在一个具体的示例中，磷酸水溶液中，磷酸的体积分数为0.05％～0.2％。
可以理解地，在本发明中，磷酸水溶液中，磷酸的体积分数包括但不限于0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％、0.16％、0.18％、0.2％。优选地，磷酸的体积分数为0.08％～0.12％。
在一个具体的示例中，超高效液相色谱测定的条件还包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温为30℃±2℃；流速为0.3mL/min±0.1mL/min；波长为254nm±20nm。
可以理解地，在本发明中，柱温包括但不限于28℃、29℃、30℃、31℃、32℃；
流速包括但不限于0.2mL/min、0.22mL/min、0.24mL/min、0.26mL/min、0.28mL/min、0.29mL/min、0.3mL/min、0.31mL/min、0.32mL/min、0.34mL/min、0.36mL/min、0.38mL/min、0.4mL/min。优选地，流速为0.3mL/min±0.05mL/min；
波长包括但不限于234nm、236nm、238nm、240nm、245nm、250nm、251nm、252nm、253nm、254nm、255nm、256nm、257nm、258nm、259nm、260nm、265nm、270nm、272nm、274nm；优选地，波长为254±10nm。
在一个具体的示例中，色谱柱的规格为2.1×100mm，1.9μm。在一个更为具体的示例中，色谱柱的型号为YMC Triart C18。
在一个具体的示例中，吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法所构建的特征图谱中，共有特征峰的数量为18；其中，峰4为新绿原酸的色谱峰，峰6为绿原酸的色谱峰，峰9为金丝桃苷的色谱峰，峰11为橙皮苷的色谱峰，峰12为去氢吴茱萸碱的色谱峰，峰14为吴茱萸碱的色谱峰，峰15为吴茱萸次碱的色谱峰。
在一个具体的示例中，制备混合对照品溶液包括如下步骤：
将新绿原酸、绿原酸、金丝桃苷、橙皮苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品与第一甲醇水溶液混合。
在一个具体的示例中，第一甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为60％～80％。
可以理解地，在本发明中，第一甲醇水溶液中，甲醇的体积分数包括但不限于60％、62％、64％、66％、68％、69％、70％、71％、72％、74％、76％、78％、80％。优选地，第一甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为70％。
在一个具体的示例中，制备吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液包括如下步骤：
将吴茱萸药材或石虎药材与第二甲醇水溶液混合，超声提取，然后过滤，取滤液。
在一个具体的示例中，第二甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为60％～80％。
可以理解地，在本发明中，第二甲醇水溶液中，甲醇的体积分数包括但不限于60％、62％、64％、66％、68％、69％、70％、71％、72％、74％、76％、78％、80％。优选地，第二甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为70％。
在一个具体的示例中，超声提取的条件包括：功率为300W，频率为40kHz。
在一个具体的示例中，超声提取的时间为40min±10min。
在一个更为具体的示例中，制备吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液包括如下步骤：
取吴茱萸药材，过筛，称定，加入70％甲醇，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
在一个具体的示例中，还包括如下步骤：
采用化学模式识别法对吴茱萸供试品溶液与石虎供试品溶液的图谱进行分析。
在一个具体的示例中，化学模式识别法包括相似度分析、聚类分析与主成分分析中的一种或多种。
在一个具体的示例中，相似度分析是将吴茱萸供试品溶液与石虎供试品溶液的图谱中的峰面积，通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012B)软件进行匹配，以平均数法进行共有峰标识。
更具体地，吴茱萸的相似度为0.993～0.984，石虎的相似度为0.531～0.816。
在一个具体的示例中，聚类分析是将吴茱萸供试品溶液与石虎供试品溶液的图谱中的峰面积，通过SPSS 20.0版软件进行系统聚类，采用组间连接法，选用平方欧氏距离为样品间距离计算方法。
在一个具体的示例中，主成分分析是采用SPSS 20.0软件对吴茱萸供试品溶液与石虎供试品溶液的图谱峰面积进行分析，进行标准化处理后进行主成分分析，得出相关矩阵的特征值及其方差。
本发明还提供一种上述吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法在鉴别吴茱萸与石虎中的应用。
以下结合具体实施例对本发明的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法做进一步详细的说明。以下实施例中所用的原料，如无特别说明，均为市售产品。
实施例1
本实施例提供一种吴茱萸与石虎的UPLC特征图谱构建方法，具体如下：
1UPLC特征图谱的构建
1.1仪器、试剂与试药
仪器：Waters高效液相色谱仪(Waters H-Class，沃特世公司)；YMC Triart C18色谱柱(100mm×2.1mm，1.9μm)；万分之一分析天平(ME204E，梅特勒-托利多公司)；百万分之一分析天平(XP26，梅特勒-托利多公司)；数控超声波清洗器(KQ500D，昆山市超声仪器有限公司)；恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司，型号：HWS28型)；超纯水系统(默克股份有限公司，Milli-Q Direct)。
试剂：乙醇(天津市富宇精细化工有限公司，分析纯)；甲醇(天津市富宇精细化工有限公司，分析纯)；磷酸(天津市富宇精细化工有限公司，色谱纯)；乙腈(默克股份有限公司，色谱纯)；水为超纯水(实验室自制)。
试药：新绿原酸(批号：wkq18030107，含量98％，四川维克奇生物科技有限公司)；绿原酸(批号：110753-202018，含量96.1％)；金丝桃苷(批号：111521-201809，含量94.9％)；橙皮苷(批号：110721-202019，含量95.3％)；去氢吴茱萸碱(批号：112075-202101，含量99.6％)；吴茱萸碱(批号：110802-201710，含量99.6％；吴茱萸次碱(批号：110801-201608，含量99.7％)均购自中国食品药品检定研究院；10批吴茱萸基原药材主要来源为广东、重庆、广西、江西；8批石虎基原药材主要来源为江西。
表1吴茱萸药材来源信息
1.2色谱方法考察
1.2.1不同梯度条件考察
(1)梯度条件1
采用YMC Triart C18(2.1×100mm，1.9μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按表2中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为30℃；进样量为1μl；波长为254nm。
所获得的UPLC图谱如图1所示，图中标识部分峰型及分离度较差。
表2梯度洗脱表
(2)梯度条件2
采用YMC Triart C18(2.1×100mm，1.9μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按表3中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为30℃；进样量为1μl；波长为254nm。
表3梯度洗脱表
所获得的UPLC图谱如图2所示，图中标识部分的峰型仍需改善。
(3)梯度条件3
采用YMC Triart C18(2.1×100mm，1.9μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按表4中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为30℃；进样量为1μl；波长为254nm。
表4梯度洗脱表
所获得的UPLC图谱如图3所示，图中标识部分峰型仍需改善。
(4)梯度条件4
采用YMC Triart C18(2.1×100mm，1.9μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按表5中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为30℃；进样量为1μl；波长为254nm。
表5梯度洗脱表
所获得的UPLC图谱如图4所示，各色谱峰峰型及分离度均较好。
1.2.2不同波长考察
在梯度条件4的基础上，全波长扫描，考察吴茱萸药材不同色谱波长的峰情况，选择最优波长。如图5与图6可知，210nm和254nm峰信息量较为丰富，210nm基线波动较大，故选择254nm作为吴茱萸药材特征图谱检测波长。
1.2.3不同色谱柱考察
在梯度条件4的基础上，设置检测波长为254nm，分别考察Agilent SB C18(2.1×100mm，1.8μm)，YMC Triart C18(2.1×100mm，1.9μm)，Waters HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)，对色谱峰的分离效果。由图7可知，YMC Triart C18色谱柱峰响应及峰型效果最优，故选择YMC Triart C18色谱柱作为吴茱萸药材特征图谱色谱柱。
1.2.4水相考察
(1)不同水相种类考察
在梯度条件4的基础上，设置检测波长为254nm，以色谱柱为YMC Triart C18(2.1×100mm，1.9μm)，分别考察水、0.1％磷酸溶液、0.1％乙酸溶液与0.1％甲酸溶液对色谱峰的影响。由图8可知，不同水相对吴茱萸药材特征图谱影响较大，0.1％磷酸溶液分离效果及峰型最优，故选择0.1％磷酸溶液作为吴茱萸药材特征图谱构建条件中的水相。
(2)不同磷酸浓度考察
在梯度条件4的基础上，设置检测波长为254nm，以色谱柱为YMC Triart C18(2.1×100mm，1.9μm)，分别考察0.05％磷酸溶液、0.1％磷酸溶液、0.2％磷酸溶液对色谱峰的影响。由图9可知，不同磷酸浓度对吴茱萸药材特征色谱图影响较小，以0.1％磷酸溶液对色谱峰优化较好，故选择0.1％磷酸溶液作为吴茱萸药材特征图谱水相。
(3)有机相考察
在梯度条件4的基础上，设置检测波长为254nm，以色谱柱为YMC Triart C18(2.1×100mm，1.9μm)，对有机相进行考察。分别考察甲醇-0.1％磷酸溶液和乙腈-0.1％磷酸溶液对色谱峰的影响。由图10可知，整体以乙腈-0.1％磷酸溶液的分离效果优于甲醇-0.1％磷酸溶液。故选择乙腈-0.1％磷酸溶液作为流动相。
1.2.5柱温考察
在梯度条件4的基础上，以检测波长为254nm，以乙腈-0.1％磷酸溶液作为流动相，分别考察30℃、35℃、40℃对特征图谱的影响，选择最优柱温。由图11可知，以柱温为30℃时，色谱峰分离效果最好，故选择30℃作为吴茱萸药材特征色谱条件柱温。
1.2.6流速考察
在梯度条件4的基础上，以检测波长为254nm，以乙腈-0.1％磷酸作为流动相，分别考察0.25ml/min、0.30ml/min与0.35ml/min对特征图谱的影响，选择最优流速。由图12可知，当流速为0.3ml/min时整体分离度较好，因此选择0.3ml/min作为吴茱萸药材特征色谱条件流速。
1.2.7色谱条件的确认
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.9μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按表6中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为30℃；检测波长为254nm；进样量为1μl。
表6梯度洗脱表
1.3参照物溶液的制备
取新绿原酸对照品、绿原酸对照品、金丝桃苷对照品、橙皮苷对照品、去氢吴茱萸碱对照品、吴茱萸碱对照品与吴茱萸次碱对照品适量，精密称定，加70％甲醇溶液制成每1ml各含5μg的混合溶液，即得。
1.4供试品溶液的制备方法考察
对吴茱萸供试品进行提取溶剂、提取时间的前处理考察，确定吴茱萸药材的特征图谱的样品前处理方法。
1.4.1提取溶剂考察
考察了不同提取溶剂对吴茱萸药材特征图谱的影响，以50％甲醇、70％甲醇、甲醇与稀乙醇为提取溶剂，通过观察与标准汤剂特征峰保留时间相一致的18个特征峰的峰型和分离度，并计算18个特征峰的“总峰面积/称样量”比较不同提取溶剂对吴茱萸药材特征图谱的影响，选择最佳提取溶剂。
取吴茱萸药材(S1)粉末(过四号筛)，约0.3g，平行4组，每组2份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入50％甲醇、70％甲醇、甲醇与稀乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，按“1.2.7”项下色谱条件进样分析，结果见图13与表7。
表7吴茱萸药材特征图谱提取溶剂考察结果表
结果显示，采用不同的提取溶剂，以70％甲醇为提取溶剂时，各特征峰的“总峰面积/称样量”最大，因此选择70％甲醇为提取溶剂。
1.4.2提取时间考察
考察超声时间对吴茱萸药材特征图谱的影响，通过计算与标准汤剂特征峰保留时间相一致的18个特征峰的“总峰面积/称样量”来比较不同的超声时间对吴茱萸药材特征图谱的影响。
取吴茱萸药材(S1)粉末(过四号筛)，约0.3g，精密称定，平行3组，每组2份，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，分别超声处理(功率300W，频率40kHz)25分钟、40分钟、55分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。按“1.2.7”项下色谱条件进样分析，实验结果见图14与表8。
表8吴茱萸药材特征图谱提取时间考察结果表
结果显示，分别超声25分钟、40分钟、55分钟，18个特征峰的峰型、分离效果及“总峰面积/称样量”无明显差别，为保证提取完全，选择超声提取时间为40分钟。
1.4.3供试品溶液制备方法的确定
根据上述实验结果，吴茱萸药材特征图谱样品前处理方法确定为：取吴茱萸药材(过四号筛)约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率40kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
1.5方法学验证
1.5.1色谱峰指认
取吴茱萸药材(S1)粉末(过四号筛)，约0.3g，精密称定，按“1.3”项下制备方法制备参照物溶液，按“1.4.3”项下确定的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别进行进样分析，结果见图15，通过与对照品比对，分别指认出7个共有峰，分别为：峰4为新绿原酸、峰6为绿原酸、峰9为金丝桃苷、峰11为橙皮苷、峰12为去氢吴茱萸碱、峰14为吴茱萸碱、峰15为吴茱萸次碱，其中，吴茱萸碱(峰14)出峰位置适宜，色谱峰较稳定、响应值高，故定为参照峰S。
1.5.2稳定性考察
取吴茱萸药材(S1)粉末(过四号筛)，约0.3g，精密称定，按“1.4.3”项下确定的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按“1.2.7”项下色谱条件，分别在0h，2h，4h，6h，8h，12h进样分析，以峰14色谱峰为参照峰S，计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积，并计算RSD值。实验结果见表9和表10。
表9吴茱萸药材特征图谱稳定性考察结果表(相对保留时间)
表10吴茱萸药材特征图谱稳定性考察结果表(相对峰面积)
2药材样品测定
按“1.2.7”项下色谱条件的规定，对18批吴茱萸药材特征图谱进行分析，以14号峰为参照峰S，计算各特征峰与S峰的相对保留时间及相对峰面积并计算RSD值，见表11和表12，以及图16。
表11 18批吴茱萸药材特征图谱(相对保留时间)
/>
表12 18批吴茱萸药材特征图谱(相对峰面积)
/>
3相似度分析
对18批样品的指纹图谱峰面积，通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012B)软件进行匹配，以平均数法进行共有峰标识，分别得到不同来源样品相似度计算结果，见表13。
表13 18批吴茱萸样品指纹图谱相似度结果
从上述相似度结果来看，结合基原差异，得到18批样品与对照模式相似度为：吴茱萸基原相似度在0.993～0.984，石虎基原相似度在0.531～0.816，整体来看，以吴茱萸基原样品相似度较高。
4聚类分析
对18批吴茱萸药材指纹图谱峰面积进行分析，通过SPSS 20.0版软件进行系统聚类，采用组间连接法，选用平方欧氏距离为样品间距离计算方法，得到聚类分析结果见图17。
从图17可知，可将吴茱萸药材分为2类，其中S1～S10为第一类，均为吴茱萸基原药材，S11～S18为第二类，均为石虎基原药材，说明不同基原吴茱萸药材差异显著，结果同相似度分析。
5主成分分析
采用SPSS 20.0软件对不同产地的吴茱萸药材指纹图谱峰面积进行分析，进行标准化处理后进行主成分分析，得出相关矩阵的特征值及其方差，抽样适合性检验系数KMO值＝0.624>0.6，巴特利特球形度P＝0.00<0.05，主成分分析结果见表14与图18。由表14可知，前2个成分的特征值大于1，对总方差的累积贡献率达88.737％，故选择上述两个成分作为第1和第2主成分，且碎石图中前2个特征值的变化曲线陡峭，表明这2个主成分因子可作为吴茱萸药材整体质量评价指标。
表14解释的总方差
成分矩阵见表15，由表15可见，峰主成分峰1～3、9、11、13～16与18在主成分1上载荷绝对值最大，峰12主成分3上的载荷量最大。说明包括峰14(吴茱萸碱)、峰15(吴茱萸次碱)等在内的生物碱类成分及其他有机酸类成分对吴茱萸药材整体质量影响较大。
表15主成分矩阵
运用主成分分析方法，根据因子得分系数矩阵及特征向量法，得综合评价函数Y综合得分表达式为：Y＝0.079528×Y1+0.009209×Y2，其中Y1、Y2为各批次样品与2个主成分得分，得到18批样品的主成分得分表见表16，从结果可知相较于石虎，吴茱萸基原的综合得分较高，药材质量总体上较好。
表16样品得分表
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。
Claims (10)
1.一种吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
取新绿原酸、绿原酸、金丝桃苷、橙皮苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱与吴茱萸次碱对照品，制备混合对照品溶液；
取吴茱萸药材或石虎药材，制备吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液；
将所述吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液，以及所述混合对照品溶液进行超高效液相色谱测定；
超高效液相色谱测定的条件包括：流动相A为乙腈，流动相B为磷酸水溶液；采用梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序包括：0min～9min，流动相A的体积百分数为8％，9min～18min，流动相A的体积百分数从8％变化至30％，18min～28min，流动相A的体积百分数从30％变化至80％，28min～33min，流动相A的体积百分数从80％变化至100％。
2.根据权利要求1所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述磷酸水溶液中，磷酸的体积分数为0.05％～0.2％。
3.根据权利要求1所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，超高效液相色谱测定的条件还包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温为30℃±2℃；流速为0.3mL/min±0.1mL/min；波长为254nm±20nm。
4.根据权利要求1所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法所构建的特征图谱中，共有特征峰的数量为18；其中，峰4为新绿原酸的色谱峰，峰6为绿原酸的色谱峰，峰9为金丝桃苷的色谱峰，峰11为橙皮苷的色谱峰，峰12为去氢吴茱萸碱的色谱峰，峰14为吴茱萸碱的色谱峰，峰15为吴茱萸次碱的色谱峰。
5.根据权利要求1所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，制备混合对照品溶液包括如下步骤：
将新绿原酸、绿原酸、金丝桃苷、橙皮苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品与第一甲醇水溶液混合。
6.根据权利要求1所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，制备吴茱萸供试品溶液或石虎供试品溶液包括如下步骤：
将吴茱萸药材或石虎药材与第二甲醇水溶液混合，超声提取，然后过滤，取滤液。
7.根据权利要求5～6任一项所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述第一甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为60％～80％；所述第二甲醇水溶液中，甲醇的体积分数为60％～80％。
8.根据权利要求1所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，还包括如下步骤：
采用化学模式识别法对所述吴茱萸供试品溶液与石虎供试品溶液的图谱进行分析。
9.根据权利要求8所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法，其特征在于，所述化学模式识别法包括相似度分析、聚类分析与主成分分析中的一种或多种。
10.权利要求1～9任一项所述的吴茱萸或石虎的UPLC特征图谱构建方法在鉴别吴茱萸与石虎中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310357089.6A CN116448909A (zh) | 2023-04-04 | 2023-04-04 | 吴茱萸或石虎的uplc特征图谱构建方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310357089.6A CN116448909A (zh) | 2023-04-04 | 2023-04-04 | 吴茱萸或石虎的uplc特征图谱构建方法及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116448909A true CN116448909A (zh) | 2023-07-18 |
Family
ID=87133112
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310357089.6A Pending CN116448909A (zh) | 2023-04-04 | 2023-04-04 | 吴茱萸或石虎的uplc特征图谱构建方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116448909A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116990420A (zh) * | 2023-09-27 | 2023-11-03 | 江西中医药大学 | 一种基于特征图谱的蜜麸枳壳综合质量评价方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109212120A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-01-15 | 湖南省中医药研究院 | 一种吴茱萸药材特征图谱的构建方法和吴茱萸药材质量检测方法 |
| CN114705779A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-07-05 | 赣江中药创新中心 | 一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法 |
| CN114755328A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-07-15 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用 |
-
2023
- 2023-04-04 CN CN202310357089.6A patent/CN116448909A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109212120A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-01-15 | 湖南省中医药研究院 | 一种吴茱萸药材特征图谱的构建方法和吴茱萸药材质量检测方法 |
| CN114705779A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-07-05 | 赣江中药创新中心 | 一种建立吴茱萸标准汤剂定量指纹图谱的方法 |
| CN114755328A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-07-15 | 四川新绿色药业科技发展有限公司 | 一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 张崇佩 等: "不同年份吴茱萸 UPLC 指纹图谱及多成分化学模式识别研究", 中草药, vol. 50, no. 11, 30 June 2019 (2019-06-30), pages 2700 - 2707 * |
| 杨文惠 等: "UPLC指纹图谱结合多元统计分析的吴茱萸与制吴茱萸成分变化研究", 天然产物研究与开发, vol. 34, no. 08, 31 December 2022 (2022-12-31), pages 1301 - 1310 * |
| 邓李红 等: "吴茱萸和制吴茱萸的饮片、水煎液、配方颗粒UPLC特征图谱研究", 中国药房, vol. 31, no. 14, 31 December 2020 (2020-12-31), pages 1739 - 1745 * |
| 邢菊玲 等: "不同基原吴茱萸药材中质量标志物预测分析：基于网络药理学和指纹图谱", 亚太传统医药, vol. 19, no. 06, 30 June 2023 (2023-06-30), pages 147 - 154 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116990420A (zh) * | 2023-09-27 | 2023-11-03 | 江西中医药大学 | 一种基于特征图谱的蜜麸枳壳综合质量评价方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113702541B (zh) | 茯苓药材特征图谱构建方法以及茯苓三萜类成分检测方法 | |
| CN116448909A (zh) | 吴茱萸或石虎的uplc特征图谱构建方法及其应用 | |
| CN114778739B (zh) | 一种炒鸡内金标准汤剂质量检测方法 | |
| CN109374786B (zh) | 杭菊药材的uplc特征图谱的构建方法、质量检测方法 | |
| CN111487347A (zh) | 枳术颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN115541756B (zh) | 车前科中药药材或制剂的指纹图谱的构建方法、检测方法和鉴别方法 | |
| CN109884219A (zh) | 白术药材uplc特征图谱的构建方法和检测方法 | |
| CN110806457A (zh) | 四君甘露饮指纹图谱的检测方法 | |
| CN115639297A (zh) | 苍耳子与炒苍耳子中药配方颗粒的指纹图谱构建、鉴别与检测方法 | |
| CN113759037B (zh) | 南葶苈子和/或北葶苈子配方颗粒特征图谱及其构建方法和鉴别方法 | |
| CN111272905B (zh) | 茺蔚子药材的特征图谱构建方法和检测方法 | |
| CN115266975A (zh) | 一种鸡内金及其炮制品饮片、标准汤剂、配方颗粒中染料木苷的含量测定方法 | |
| Wang et al. | HPLC fingerprint combined with quantitation of main effective components and chemometrics as an efficient method for quality evaluation of Oviductus Ranae | |
| CN112964805A (zh) | 一种用于白术药材中白术内酯ⅱ和白术内酯ⅲ的含量测定方法 | |
| CN109358120B (zh) | 一种槐角制剂的特征图谱检测方法 | |
| CN107894466B (zh) | 一种金桑芪抗毒制剂hplc指纹图谱的测定方法及金桑芪抗毒制剂质量控制方法 | |
| CN113686982B (zh) | 姜黄药材特征图谱构建方法及鉴别方法 | |
| CN115541746B (zh) | 不同基原白薇、老瓜头的指纹图谱的构建方法和鉴别方法 | |
| CN113671067B (zh) | 小果蔷薇根药材的质量控制方法 | |
| CN114295757B (zh) | 一种鼠妇虫hplc特征图谱构建方法 | |
| CN113484428B (zh) | 桃核承气汤特征图谱的构建方法 | |
| CN114720602B (zh) | 石见穿药材或其标准汤剂的特征图谱构建方法和检测方法 | |
| CN115032308B (zh) | 一种通草药材及其饮片、标准汤剂、干膏粉、中药配方颗粒的特征图谱构建方法和鉴别方法 | |
| CN115372503B (zh) | 决明子的指纹图谱构建与检测方法、基础鉴定的构建方法及其应用 | |
| CN114235996B (zh) | 鲜益母草药材及其标准汤剂和中药配方颗粒特征图谱构建及检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |