CN114755328A - 一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用 - Google Patents

一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114755328A
CN114755328A CN202210338604.1A CN202210338604A CN114755328A CN 114755328 A CN114755328 A CN 114755328A CN 202210338604 A CN202210338604 A CN 202210338604A CN 114755328 A CN114755328 A CN 114755328A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peak
mobile phase
medicinal
evodia
evodia rutaecarpa
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202210338604.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114755328B (zh
Inventor
周厚成
周靖惟
张开元
梅国荣
胡昌江
罗莹
朱彦西
陈蓉
黄美华
徐红应
余荣平
黄宇
孙纪元
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan New Green Pharmaceutical Technology Development Co ltd
Original Assignee
Sichuan New Green Pharmaceutical Technology Development Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan New Green Pharmaceutical Technology Development Co ltd filed Critical Sichuan New Green Pharmaceutical Technology Development Co ltd
Priority to CN202210338604.1A priority Critical patent/CN114755328B/zh
Publication of CN114755328A publication Critical patent/CN114755328A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114755328B publication Critical patent/CN114755328B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/065—Preparation using different phases to separate parts of sample
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法，包括以下步骤：分别精密吸取参照物溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，建立高效液相特征图谱；所述测定的色谱柱为Agilent TC‑C18，以乙腈为流动相A，以0.05wt％～0.15wt％的磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为250nm～260nm，理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。与现有技术相比，本发明建立了高效液相特征图谱方法用于吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的检测，不仅可用于吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片的质量控制，还可用于吴茱萸药材及其炮制品的基原鉴定，并且稳定性好、精密度高、重现性好、便捷且易于掌握。

Description

一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，更具体地说，是涉及一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用。
背景技术
盐吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth、疏毛吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang或石虎Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth var.offi cinalis(Dode)Huang干燥近成熟果实的加工炮制品。盐吴茱萸味辛、苦、咸，具有散寒止痛，降逆止呕，助阳止泻的功效。用于寒疝腹痛，厥阴头痛，寒湿脚气，经行腹痛，呕吐吞酸，脘腹胀痛，五更泄泻等症状[3]。盐炙品引药下行，增强疗效；缓和辛燥之性，增强滋阴降火作用[4]。其化学成分类型较多，包括生物碱、苦味素、挥发油、黄酮、酚酸及其衍生物、蒽醌等类成分，其中生物碱、苦味素类含量较高，为其主要活性成分[5]。现代药效学研究表明，盐吴茱萸具有抗炎、镇痛、抗菌、强心、舒张血管、增加组织器官血流量、保护胃黏膜、抗肿瘤等作用，且广泛用于复发性口疮、慢性肾功能衰竭、梅尼埃病等疾病的治疗[6-8]。
《中国药典》2000版[9]中吴茱萸的炮制品仅收录了甘草制吴茱萸和除去杂质的吴茱萸，《全国中药炮制规范》中收载了盐吴茱萸[10]，文献报道对炮制品盐吴茱萸及其相关制剂的质量控制方法进行研究较少[11-13]，且并未对其特征图谱进行深入研究。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在构建一种高效液相特征图谱方法，全面反映盐吴茱萸及其相关制剂的质量水平，对盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物、盐吴茱萸配方颗粒及其相关制剂的质量评价、吴茱萸药材基原鉴别及资源开发利用提供依据。
本发明提供了一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法，包括以下步骤：
分别精密吸取参照物溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，建立高效液相特征图谱；
所述测定的色谱柱为Agilent TC-C18，以乙腈为流动相A，以0.05wt％～0.15wt％的磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为250nm～260nm，理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。
优选的，所述参照物溶液的制备方法具体为：
取吴茱萸对照药材0.1g～1g，置具塞锥形瓶中，加水10ml～100ml加热回流提取10min～60min，取出，放冷，摇匀，离心，取上清液挥干，残渣加1ml～10ml50wt％～90wt％乙醇水溶液超声处理10min～30min，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材的参照物溶液；
取吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、金丝桃苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸对照品，精密称定，加50wt％～90wt％乙醇水溶液制成每1ml各含40μg～60μg的溶液，作为对照品参照物溶液。
优选的，所述供试品溶液的制备方法具体为：
取供试品0.1g～1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50wt％～90wt％乙醇水溶液5ml～15ml，密塞，超声处理10min～60min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
优选的，所述参照物溶液和供试品溶液的体积比为(2～8)：1；所述供试品溶液的用量为1μl～5μl。
优选的，所述梯度洗脱的过程具体为：
0～10min，流动相A：8wt％，流动相B：92wt％→89wt％；
10min～25min，流动相A：8wt％→15wt％，流动相B：89wt％→84wt％；
25min～40min，流动相A：15wt％→25wt％，流动相B：80wt％→75wt％；
40min～48min，流动相A：25wt％→32wt％，流动相B：75wt％→52wt％；
48min～60min，流动相A：32wt％→60wt％，流动相B：52wt％→30wt％；
60min～70min，流动相A：60wt％→95wt％，流动相B：30wt％→5wt％；
70min～80min，流动相A：95wt％→100wt％，流动相B：5wt％→0wt％。
本发明还提供了一种吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的检测方法，应用上述技术方案所述的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法实现。
优选的，用于盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的特征图谱检测，有15个共有特征峰，8个指标成分，用于吴茱萸药材及盐吴茱萸饮片的特征图谱检测，有20个共有特征峰，8个指标成分。
本发明还提供了一种吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的质量控制方法，其特征在于，应用上述技术方案所述的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法实现。
本发明还提供了一种吴茱萸药材及其炮制品的基原鉴定方法，其特征在于，应用上述技术方案所述的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法实现。
优选的，进行所述基原鉴定时，峰a为石虎的特有峰，峰b为石虎和吴茱萸的共有峰，若供试品色谱峰出现峰a和峰b，则为石虎；只出现峰b，则为吴茱萸；均不出现峰a和峰b，则为疏毛吴茱萸。
本发明与现有技术相比，具有以下优越性：
戚华文[1]等针对29批3种基原吴茱萸药材，建立吴茱萸HPLC定量指纹图谱，并通过HPLC-ESI-MS技术对指纹图谱中的色谱峰进行鉴定，标定13个共有峰，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》计算相似度，同时运用化学模式识别技术对3种基原吴茱萸药材进行区分，见图1。
本发明与其的区别在于在同样可以对吴茱萸药材进行基原鉴别的基础上，更加适用于盐吴茱萸提取物、盐吴茱萸配方颗粒等相关制剂的应用。盐吴茱萸作为温里药处方中的常用药，其用法多为随处方加水煎煮，而吴茱萸药材中极性较小的生物碱类成分在水中的溶出度较小，该报道中提到的峰11即吴茱萸卡品碱、峰12即1-甲基-2-[(6Z,9Z)-6,9-十五碳二烯]-4-(1H)-喹诺酮、峰13即二氢吴茱萸卡品碱在水提物中的含量极少。
本发明在仅针对吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片的检测中有20个共有峰，较报道方法的共有峰更多，指认的色谱峰成分也与该报道有所不同。
图2所示为吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物、盐吴茱萸配方颗粒在本发明考察时的色谱条件下的色谱图对比，色谱条件如下：
色谱柱Agilent TC-C18(250×4.6mm，5μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm，理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000。
Figure BDA0003577763130000041
如图2所示，前15个峰为4种供试品的共有峰，峰16～20的5个峰为吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片的共有峰，但水提取物及配方颗粒中含量极少，参考后续延迟性考察。
同时，本发明同样可以运用于吴茱萸药材的基原鉴别。采用本发明特征图谱的构建方法及对照药材参照物溶液制备方法对3种不同基原的27批吴茱萸药材进行特征图谱的测定，其中4批为石虎Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth var.offi cinalis(Dode)Huang，7批为疏毛吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang，15批为吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth，结果如图3所示。
如图3所示，峰a为石虎的特有峰，峰b为石虎和吴茱萸的共有峰，若供试品色谱峰出现峰a和峰b，则为石虎；只出现峰b，则为吴茱萸；均不出现峰a和峰b，则为疏毛吴茱萸。
本发明除了可以应用于吴茱萸药材、盐炙品的盐吴茱萸饮片的基原鉴别及相关检测，在盐吴茱萸提取物、盐吴茱萸配方颗粒及其相关制剂的质量控制方面则更有优势。
邓李红[2]等建立了吴茱萸和制吴茱萸饮片、水煎液、配方颗粒的超高效液相色谱(UPLC)特征图谱，吴茱萸样品和制吴茱萸样品(饮片、水煎液和配方颗粒)的特征图谱中分别均含有共有特征峰16、17个，并对4个峰进行指认。
制吴茱萸作为吴茱萸的炮制品，加辅料甘草汁进行炒制得到，特征图谱侧重于对辅料甘草的鉴别。对本发明对该报道的优势在于作为不同炮制品的特征图谱方法，指认了更多的色谱峰，且本方法可以用于吴茱萸药材的基原鉴别。
附图说明
图1为吴茱萸HPLC指纹图谱共有模式；
图2为本发明吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物、盐吴茱萸配方颗粒色谱图对比；其中，峰4：新绿原酸；峰6：绿原酸；峰7：隐绿原酸；峰8：咖啡酸；峰11：金丝桃苷；峰12：去氢吴茱萸碱；峰14：吴茱萸碱；峰15：吴茱萸次碱；
图3为本发明3种不同基原的27批吴茱萸药材特征图谱；其中，从下向上S1～S27依次为S1～S4为石虎；S5～S12为疏毛吴茱萸；S13～S27为吴茱萸；峰4：新绿原酸；峰6：绿原酸；峰7：隐绿原酸；峰8：咖啡酸；峰11：金丝桃苷；峰12：去氢吴茱萸碱；峰14：吴茱萸碱；峰15：吴茱萸次碱；
图4为实施例中不同流动相条件下对比特征图谱；
图5为实施例中柱温考察；
图6为实施例中流速考察；
图7为实施例中检测波长考察；
图8为实施例中提取方法考察；
图9为实施例中提取溶剂考察；
图10为实施例中提取时间考察；
图11为实施例中特征峰指认图；其中，峰4：新绿原酸；峰6(S)：绿原酸；峰7：隐绿原酸；峰8：咖啡酸；峰11：金丝桃苷；峰12：去氢吴茱萸碱；峰14：吴茱萸碱；峰15：吴茱萸次碱；
图12为实施例中延迟性考察色谱图；
图13为实施例中盐吴茱萸提取物对照特征图谱；其中，峰4：新绿原酸；峰6(S)：绿原酸；峰7：隐绿原酸；峰8：咖啡酸；峰11：金丝桃苷；峰12：去氢吴茱萸碱；峰14：吴茱萸碱；峰15：吴茱萸次碱；
图14为实施例中盐吴茱萸配方颗粒对照特征图谱；其中，峰4：新绿原酸；峰6(S)：绿原酸；峰7：隐绿原酸；峰8：咖啡酸；峰11：金丝桃苷；峰12：去氢吴茱萸碱；峰14：吴茱萸碱；峰15：吴茱萸次碱；
图15为实施例中盐吴茱萸饮片对照特征图谱；其中，峰4：新绿原酸；峰6(S)：绿原酸；峰7：隐绿原酸；峰8：咖啡酸；峰11：金丝桃苷；峰12：去氢吴茱萸碱；峰14：吴茱萸碱；峰15：吴茱萸次碱。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法，包括以下步骤：
分别精密吸取参照物溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，建立高效液相特征图谱；
所述测定的色谱柱为Agilent TC-C18(250×4.6mm，5μm)，以乙腈为流动相A，以0.05wt％～0.15wt％的磷酸水溶液为流动相B，优选以0.1wt％的磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为250nm～260nm，优选为254nm，理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。
在本发明中，所述参照物溶液的制备方法优选具体为：
取吴茱萸对照药材0.1g～1g，优选为0.5g，置具塞锥形瓶中，加水10ml～100ml，优选为50ml，加热回流提取10min～60min，优选为30min，取出，放冷，摇匀，离心，取上清液挥干，残渣加1ml～10ml 50wt％～90wt％乙醇水溶液，优选为5ml 70wt％乙醇水溶液，超声处理10min～30min，优选为20min，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材的参照物溶液；
取吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、金丝桃苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸对照品，精密称定，加50wt％～90wt％乙醇水溶液，优选为70wt％乙醇水溶液，制成每1ml各含40μg～60μg的溶液，优选为每1ml各含50μg的溶液，作为对照品参照物溶液。
在本发明中，所述供试品溶液的制备方法优选具体为：
取供试品0.1g～1g，优选为0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50wt％～90wt％乙醇水溶液5ml～15ml，优选为70wt％乙醇水溶液10ml，密塞，超声处理10min～60min，优选为30min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。所述超声处理的功率优选为500W～700W，更优选为600W，频率优选为30kHz～50kHz，更优选为40kHz。检测吴茱萸药材和盐吴茱萸饮片供试品时的供试品制备方法同上述对照药材参照物溶液的制备方法。
在本发明中，所述参照物溶液和供试品溶液的体积比优选为(2～8)：1，更优选为5：1；所述供试品溶液的用量优选为1μl～5μl，更优选为2μl。
在本发明中，所述梯度洗脱的过程优选具体为：
0～10min，流动相A：8wt％，流动相B：92wt％→89wt％；
10min～25min，流动相A：8wt％→15wt％，流动相B：89wt％→84wt％；
25min～40min，流动相A：15wt％→25wt％，流动相B：80wt％→75wt％；
40min～48min，流动相A：25wt％→32wt％，流动相B：75wt％→52wt％；
48min～60min，流动相A：32wt％→60wt％，流动相B：52wt％→30wt％；
60min～70min，流动相A：60wt％→95wt％，流动相B：30wt％→5wt％；
70min～80min，流动相A：95wt％→100wt％，流动相B：5wt％→0wt％。
本发明还提供了一种吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的检测方法，应用上述技术方案所述的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法实现。
在本发明中，用于盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的特征图谱检测，有15个共有特征峰，8个指标成分，用于吴茱萸药材及盐吴茱萸饮片的特征图谱检测，有20个共有特征峰，8个指标成分。
本发明还提供了一种吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的质量控制方法，应用上述技术方案所述的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法实现。
本发明还提供了一种吴茱萸药材及其炮制品的基原鉴定方法，应用上述技术方案所述的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法实现。
在本发明中，进行所述基原鉴定时，峰a为石虎的特有峰，峰b为石虎和吴茱萸的共有峰，若供试品色谱峰出现峰a和峰b，则为石虎；只出现峰b，则为吴茱萸；均不出现峰a和峰b，则为疏毛吴茱萸。
本发明公开了一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用，该方法运用于盐吴茱萸提取物、盐吴茱萸配方颗粒及其相关制剂，指认了8个指标成分，确认了15个共有特征峰，并对其相对保留时间和相对峰面积进行了研究，规定其相对保留时间，建立对照特征图谱，充分展示盐吴茱萸的化学成分特征，全面地反映化盐吴茱萸的质量信息，从而能够达到全面、有效地控制盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物、盐吴茱萸配方颗粒及其相关制剂的质量保证了其化学组成稳定性和使用安全性；该方法运用于盐吴茱萸饮片、吴茱萸药材及其炮制品，指认了8个指标成分，确认了20个共有特征峰，除了可以进行质量控制，还可用于吴茱萸药材及其炮制品的基原鉴定，在进行基原鉴定时，拥有20个共有特征峰，指认了8个指标成分，指认峰a为石虎的特有峰，峰b为石虎和吴茱萸的共有峰，若供试品色谱峰出现峰a和峰b，则为石虎；只出现峰b，则为吴茱萸；均不出现峰a和峰b，则为疏毛吴茱萸。并且，本发明除了可以应用于吴茱萸药材、盐炙品的盐吴茱萸饮片的基原鉴别及相关检测，在盐吴茱萸提取物、盐吴茱萸配方颗粒及其相关制剂的质量控制方面则更有优势。
为了进一步说明本发明，下面通过以下实施例对本发明提供的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用进行详细说明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或按照产品说明书进行；所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
实施例
1、仪器与试药
1.1仪器
高效液相色谱仪：安捷伦1260型高效液相色谱仪、岛津20AD型高效液相色谱仪、Waters e2695型高效液相色谱仪；
电子天平：ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒-托利多仪器有限公司)；
超纯水机：细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司)；
超声波清洗器：KQ5200DB型(600W，40KHz；昆山市超声仪器有限公司)；
色谱柱：Agilent 5TC-C18(250×4.6mm，5μm)。
1.2试剂
磷酸(天津市科密欧化学试剂有限公司)、三氟乙酸(成都市科隆化学品有限公司)、甲酸(成都市科隆化学品有限公司)、冰乙酸(成都市科隆化学品有限公司)，水为超纯水(实验室自制)，其余试剂均为分析纯。
1.3试药
吴茱萸碱(中国食品药品检定研究院，批号：110802-201710，含量以98.0％计)；
吴茱萸次碱(中国食品药品检定研究院，批号：110801-201709，含量以99.3％计)；
去氢吴茱萸碱(四川省维克奇生物科技有限公司，批号：wkq21051003，含量以98％计)；
金丝桃苷(中国食品药品检定研究院，批号：111521-201809，含量以94.9％计)；
绿原酸(中国食品药品检定研究院，批号：110753-202018，含量以96.1％计)；
新绿原酸(北京世纪奥科生物技术有限公司，批号：190124-015，含量以98％计)；
隐绿原酸(北京世纪奥科生物技术有限公司，批号：190824-035，含量以98％计)；
咖啡酸(中国食品药品检定研究院，批号：110885-201703，含量以99.7％计)；
吴茱萸对照药材(中国食品药品检定研究院，批号120909-201510)；
吴茱萸药材(批号：WZY001、WZY002、WZY003、WZY004、WZY005、WZY006、WZY007、WZY008、WZY009、WZY010、WZY011、WZY012、WZY013、WZY014、WZY015、WZY016、WZY017、WZY018、WZY019、WZY020、WZY021、WZY022、WZY023、WZY024、WZY025、WZY026、WZY027)；
盐吴茱萸饮片(四川新绿色药业科技发展有限公司制备，批号：YWZY-210801、YWZY-210802、YWZY-210803、YWZY-210804、YWZY-210805、YWZY-210806、YWZY-210807、YWZY-210808、YWZY-210809、YWZY-210810、YWZY-210811、YWZY-210812、YWZY-210813、YWZY-210814、YWZY-210815)；
盐吴茱萸提取物冻干粉(四川新绿色药业科技发展有限公司制备，批号：YWZY-BT-210801、YWZY-BT-210802、YWZY-BT-210803、YWZY-BT-210804、YWZY-BT-210805、YWZY-BT-210806、YWZY-BT-210807、YWZY-BT-210808、YWZY-BT-210809、YWZY-BT-210810、YWZY-BT-210811、YWZY-BT-210812、YWZY-BT-210813、YWZY-BT-210814、YWZY-BT-210815)；
盐吴茱萸配方颗粒(四川新绿色药业科技发展有限公司制备，批号：211101、211102、211103)。
2、特征图谱方法建立
色谱柱为Agilent TC-C18(250×4.6mm，5μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm，理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000。
Figure BDA0003577763130000101
参照物溶液的制备取吴茱萸对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加水50ml加热回流提取30分钟，取出，放冷，摇匀，离心，取上清液挥干，残渣加5ml70％乙醇超声处理20分钟，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。
取吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、金丝桃苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml各含50μg的溶液，作为对照品参照物溶液。
供试品溶液的制备取盐吴茱萸提取物冻干粉粉末约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加70％乙醇溶液10ml，密塞，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定分别精密吸取参照物溶液10μl、供试品溶液2μl，注入液相色谱仪，测定，建立高效液相特征图谱。
2.1色谱条件及供试品制备考察
2.1.1流动相考察
按上述色谱条件，分别考察了乙腈-冰乙酸、乙腈-甲酸、乙腈-磷酸、乙腈-三氟乙酸对色谱峰分离效果的影响，结果如图4所示。
结果表明，以上流动相比例对供试品均有较好的分离程度。
综合考虑，暂定检测方法为：以乙腈-0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱，柱温30℃，流速0.8ml/min，检测波长254nm。
2.1.2柱温考察
在以上拟定的实验条件基础上，分别对柱温为25℃、30℃、35℃、40℃时进行考察。见图5。
柱温考察结果表明，在柱温为25℃～40℃时，色谱图峰形均较好，分离度适中，拟以柱温30℃进行后续考察。
2.1.3流速考察
在以上拟定的实验条件基础上，分别对流速为0.6ml/min、0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min时进行了考察。见图6。
结果表明，在流速为0.6ml/min～1.2ml/min时，色谱图峰形均较好，分离度适中。拟以流速0.8ml/min进行后续考察。
2.1.4检测波长考察
按上述色谱条件，分别在检测波长210nm、230nm、254nm、280nm、300nm、330nm、360nm条件下检测。见图7。
结果表明，检测波长为210nm、230nm时基线有所漂移，但程度并不严重，检测波长为330nm、360nm时，色谱峰信息较少，不能完全反映供试品色谱峰信息，故选择检测波长为254nm。
2.2供试品制备考察
2.2.1提取方式考察
取本品(批号：YWZY-BT-210801)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加70％乙醇溶液10ml，分别对供试品提取方法为回流、超声(功率600W，频率40kHz)时进行考察，提取时间30min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，检测结果如图8。
结果表明，对供试品分别进行超声提取与回流提取时色谱峰信息一致，因超声提取操作更为简便，故供试品提取方法确定为超声提取。
2.2.2提取溶剂考察
取本品(批号YWZY-BT-210801)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入10ml的水、30％甲醇、70％甲醇、甲醇、30％乙醇、70％乙醇、无水乙醇，超声提取(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，检测结果如图9。
结果表明，70％甲醇、甲醇、30％乙醇、70％乙醇作为提取溶剂时色谱峰信息量大，综合考虑，供试品提取溶剂选用为70％乙醇。
2.2.3提取时间考察
取本品(批号YWZY-BT-210801)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入70％乙醇10ml，超声处理(功率600W，频率40kHz)，分别对供试品提取时间为20分钟、30分钟、40分钟时进行考察，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，检测结果如图10。
结果表明，在提取时间为20分钟、30分钟、40分钟时色谱峰信息无明显差异，表明提取时间为20分钟即可充分提取，故供试品提取时间确定为20分钟。
2.2.4小结
根据上述结果，确定供试品制备方法为：取供试品0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入70％乙醇10ml，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
2.3方法学考察
2.3.1色谱峰指认
参照物溶液的制备取吴茱萸对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加水50ml加热回流提取30分钟，取出，放冷，摇匀，离心，取上清液挥干，残渣加5ml70％乙醇超声处理20分钟，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。
取吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、金丝桃苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml各含50μg的溶液，作为对照品参照物溶液。
供试品溶液的制备取供试品0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入70％乙醇10ml，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
阴性对照溶液的制备按供试品溶液制备方法同法制备阴性对照溶液，即得。
对特征峰进行指认，所得结果见图11，其中峰4为新绿原酸，峰6为绿原酸，峰7为隐绿原酸，峰8为咖啡酸，峰11为金丝桃苷，峰12为去氢吴茱萸碱，峰14为吴茱萸碱，峰15为吴茱萸次碱，以绿原酸对照品参照物相应的峰为S峰，在后续的方法学考察中，对供试品图谱中的15个峰进行考察。
2.3.2延迟性考察
取供试品粉末，色谱条件保留时间为前述特征图谱的构建方法保留时间的两倍，进样10μl，所得结果如图12。
结果表明，本特征图谱方法可充分表现完整的色谱信息。
2.3.3精密度试验
取供试品粉末，按前述的特征图谱的构建方法连续进样六次，每次10μl，计算相对保留时间及相对峰面积，所得结果如下表1-表2。
表1 精密度特征峰相对保留时间
Figure BDA0003577763130000131
Figure BDA0003577763130000141
表2 精密度特征峰相对峰面积
Figure BDA0003577763130000142
结果表明，各特征峰相对保留时间的RSD为0.00％～0.11％，各特征峰相对峰面积的RSD为0.00％～1.69％，表明该方法精密度试验符合要求。
2.3.4重复性考察
取供试品六份，按前述的特征图谱的构建方法进行供试品溶液制备及测定，所得结果如下表3-表4。
表3 重复性考察特征峰相对保留时间
Figure BDA0003577763130000143
Figure BDA0003577763130000151
表4 重复性考察特征峰相对峰面积
Figure BDA0003577763130000152
结果表明，各特征峰相对保留时间的RSD为0.00％～0.11％，各特征峰相对峰面积的RSD为0.00％～2.79％，表明该方法重复性良好。
2.3.5中间精密度考察(不同人员和时间)
基于前述的特征图谱的构建方法，分别在不同人员(A、B)、不同时间(T1、T2、T3)和不同仪器(C1、C2)条件下称取供试品各两份，制备供试品溶液，测定，所得结果如下表5-表6。
表5 中间精密度特征峰相对保留时间
Figure BDA0003577763130000153
Figure BDA0003577763130000161
表6 中间精密度特征峰相对峰面积
Figure BDA0003577763130000162
结果表明，由不同的人员在不同的时间对同一个样品进行测定，各特征峰相对保留时间的RSD为0.00％～1.88％，各特征峰相对峰面积的RSD为0.00％～22.13％，表明该方法中间精密度较好。
2.3.6稳定性考察
基于前述的特征图谱的构建方法，取同一供试品溶液，分别于0h、3h、6h、12h、18h、24h时测定，所得结果如下表7-表8所示。
表7 稳定性特征峰相对保留时间
Figure BDA0003577763130000163
表8 稳定性特征峰相对峰面积
Figure BDA0003577763130000171
结果表明，其相对应的特征峰相对保留时间的RSD在0.00％～0.11％，各特征峰相对峰面积的RSD为0.00％～3.70％，表明样品溶液在24小时内较稳定。
综上所述，各特征峰相对保留时间的RSD在以上各项考察中均符合要求，中间精密度相对保留面积RSD超过规定要求，将上述15个特征峰纳入后续考察。
2.3.7样品特征图谱验证及方法建立
2.3.7.1提取物
采用前述的特征图谱的构建方法，对15批盐吴茱萸提取物(SFC001～SFC015)采用前述的特征图谱的构建方法及供试品制备方法对15批盐吴茱萸提取物进行特征图谱的测定，计算相对保留时间、相对峰面积，规定各特征峰保留时间，建立对照特征图谱。验证结果如下表9-表10所示。
表9 15批盐吴茱萸提取物验证批特征峰相对保留时间
Figure BDA0003577763130000172
Figure BDA0003577763130000181
表10 15批盐吴茱萸提取物验证批特征峰相对峰面积
Figure BDA0003577763130000182
Figure BDA0003577763130000191
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了15个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，以峰1为S峰时，15批盐吴茱萸提取物供试品特征峰相对保留时间RSD为0.00％～0.20％，予以纳入标准；相对峰面积RSD为0.00％～31.78％，波动范围较大，不予以纳入标准。
因此，最终规定：供试品色谱中应呈现15个特征峰，其中峰4、峰6、峰7、峰8、峰11、峰12、峰16、峰17应分别与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品参照物保留时间相对应。以绿原酸对照品参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间；各峰的相对保留时间应在规定值的±10％之内。规定值为：0.48(峰1)、0.55(峰2)、0.62(峰3)、0.68(峰4)、0.91(峰5)、1.03(峰7)、1.20(峰8)、1.40(峰9)。1.53(峰10)、2.04(峰11)、2.45(峰12)、3.41(峰13)、3.52(峰14)、3.57(峰15)。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对15批供试品进行合成，建立了盐吴茱萸提取物特征图谱的对照特征图谱，可以较为准确地整体控制供试品的质量，如图13所示。
2.3.7.2配方颗粒
对3批盐吴茱萸配方颗粒(211101、211102、211103)采用前述的特征图谱的构建方法及供试品制备方法对3批盐吴茱萸配方颗粒进行特征图谱的测定，计算相对保留时间。验证结果如下表11所示。
表11 3批盐吴茱萸配方颗粒特征峰相对保留时间
Figure BDA0003577763130000192
Figure BDA0003577763130000201
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了15个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，当峰6作为S峰时，3批次盐吴茱萸配方颗粒15个特征峰相对保留时间RSD为0.00％～0.13％。最终规定：供试品色谱中应呈现15个特征峰，其中峰4、峰6、峰7、峰8、峰11、峰12、峰14、峰15应分别与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品参照物保留时间相对应。以绿原酸对照品参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间；各峰的相对保留时间应在规定值的±10％之内。规定值为：0.48(峰1)、0.55(峰2)、0.62(峰3)、0.68(峰4)、0.91(峰5)、1.03(峰7)、1.19(峰8)、1.40(峰9)。1.52(峰10)、2.05(峰11)、2.44(峰12)、3.41(峰13)、3.52(峰14)、3.57(峰15)。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对3批供试品进行合成，建立了盐吴茱萸配方颗粒特征图谱的对照特征图谱。见图14。
2.3.7.3饮片
对15批基原为吴茱萸的盐吴茱萸饮片(YWZY-2108001～YWZY-2108015)采用前述的特征图谱的构建方法及供试品溶液制备方法对15批盐吴茱萸饮片进行特征图谱的测定，计算相对保留时间。验证结果如下表12所示。
表12 15批盐吴茱萸饮片特征峰相对保留时间
Figure BDA0003577763130000202
Figure BDA0003577763130000211
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了20个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，当峰6作为S峰时，15批次盐吴茱萸饮片20个特征峰相对保留时间RSD为0.00％～0.30％。最终规定：供试品色谱中应呈现20个特征峰，其中峰4、峰6、峰7、峰8、峰11、峰12、峰14、峰15应分别与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品参照物保留时间相对应。以绿原酸对照品参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间；各峰的相对保留时间应在规定值的±10％之内。规定值为：0.48(峰1)、0.55(峰2)、0.62(峰3)、0.68(峰4)、0.91(峰5)、1.03(峰7)、1.20(峰8)、1.40(峰9)。1.52(峰10)、2.04(峰11)、2.44(峰12)、3.41(峰13)、3.52(峰14)、3.57(峰15)、3.80(峰16)、4.15(峰17)、4.22(峰18)、4.29(峰19)、4.50(峰20)。
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对15批供试品进行合成，建立了盐吴茱萸饮片特征图谱的对照特征图谱。见图15。
2.3.7.3药材
采用本发明特征图谱的构建方法及供试品溶液制备方法对3种不同基原的27批吴茱萸药材进行特征图谱的测定，计算相对保留时间。其中4批为石虎Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth var.offi cinalis(Dode)Huang，7批为疏毛吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang，15批为吴茱萸Euodia rutaecarpa(Juss.)Benth。验证结果如下表13所示。
表13 27批盐吴茱萸饮片特征峰相对保留时间
Figure BDA0003577763130000221
Figure BDA0003577763130000231
本发明可进行吴茱萸药材特征图谱的验证，并且27批吴茱萸药材呈现3种不同的特征图谱，可对基原进行明显区分。峰a为石虎的特有峰，峰b为石虎和吴茱萸的共有峰，若供试品色谱峰出现峰a和峰b，则为石虎；只出现峰b，则为吴茱萸；均不出现峰a和峰b，则为疏毛吴茱萸。27批吴茱萸药材特征图谱对比结果见图3。
综上所述，相对于现有技术，本发明具有以下优势：
(1)本发明建立了高效液相特征图谱方法用于吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的检测。
(2)本发明用于盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的特征图谱检测，有15个共有特征峰，8个指标成分，用于吴茱萸药材及盐吴茱萸饮片的特征图谱检测，有20个共有特征峰，8个指标成分，克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷，可以从整体上、宏观上控制盐吴茱萸及其相关制剂的内在质量，保证了药物的疗效，使其相关制剂得到了更为正规的质量控制。
(3)本发明不仅可用于吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片的质量控制，还可用于吴茱萸药材及其炮制品的基原鉴定，在进行基原鉴定时，峰a为石虎的特有峰，峰b为石虎和吴茱萸的共有峰，若供试品色谱峰出现峰a和峰b，则为石虎；只出现峰b，则为吴茱萸；均不出现峰a和峰b，则为疏毛吴茱萸。
(4)本发明方法稳定性好、精密度高、重现性好、便捷且易于掌握。
所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
参考文献：
[1]戚华文,徐鑫,高德嵩,王引,金红利,王超然,刘艳芳,梁鑫淼.吴茱萸HPLC指纹图谱的建立及基原鉴别研究[J].中草药,2021,52(14):4341-4347.
[2]邓李红,张志鹏,田清清,程学仁,鲁云,刘燎原.吴茱萸和制吴茱萸的饮片、水煎液、配方颗粒UPLC特征图谱研究[J].中国药房,2020,31(14):1739-1745.
[3]吉林省卫生厅.吉林省中药饮片炮制规范2020年版[M].长春:吉林省卫生厅，2020.
[4]肖洋,段金芳,刘影,李浩,窦志英.吴茱萸炮制方法和功能主治历史沿革[J].中国实验方剂学杂志,2017,23(03):223-228.DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2017030223.
[5]刘丽,张笑敏,许浚,张纪红,张铁军,陈常青,刘昌孝.吴茱萸化学成分和药理作用及质量标志物(Q-marker)的预测分析[J].中草药,2020,51(10):2689-2702.
[6]黄冬艳.中药汤剂配合蜂蜜含服吴茱萸粉外敷治疗复发性口疮34例[J].内蒙古中医药,2012,31(05):70.
[7]杨丽萍.温脾汤合吴茱萸汤加减联合常规西药治疗早中期慢性肾功能衰竭99例临床研究[J].江苏中医药,2020,52(09):22-24.
[8]关锦贞,曾纪超,陈瑶.吴茱萸汤加减治疗梅尼埃病(痰浊上蒙型)50例的临床研究[J].中外医学研究,2021,19(13):61-63.
[9]国家药典委员会.中国药典,2020年版,一部[S].北京:中国医药科技出版社.
[10]中华人民共和国卫生部药政管理局.全国中药炮制规范[S].北京:人民卫生出版社,1988:154.
[11]石典花,孙立立.盐吴茱萸质量标准研究[C]//中华中医药学会中药炮制分会2011年学术年会论文集.,2011:379-383.
[12]石典花,孙立立,张军.市售盐吴茱萸质量考察[J].时珍国医国药,2014,25(05):1199-1201.
[13]刘铎,鲁建美,吕露阳.吴茱萸炮制品的质量标准研究[J].中药与临床,2016,7(02):32-35。

Claims (10)

1.一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法，其特征在于，包括以下步骤：
分别精密吸取参照物溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，建立高效液相特征图谱；
所述测定的色谱柱为Agilent TC-C18，以乙腈为流动相A，以0.05wt％～0.15wt％的磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为250nm～260nm，理论板数按绿原酸峰计算不低于3000。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述参照物溶液的制备方法具体为：
取吴茱萸对照药材0.1g～1g，置具塞锥形瓶中，加水10ml～100ml加热回流提取10min～60min，取出，放冷，摇匀，离心，取上清液挥干，残渣加1ml～10ml50wt％～90wt％乙醇水溶液超声处理10min～30min，取出，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材的参照物溶液；
取吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、金丝桃苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸对照品，精密称定，加50wt％～90wt％乙醇水溶液制成每1ml各含40μg～60μg的溶液，作为对照品参照物溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法具体为：
取供试品0.1g～1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50wt％～90wt％乙醇水溶液5ml～15ml，密塞，超声处理10min～60min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述参照物溶液和供试品溶液的体积比为(2～8)：1；所述供试品溶液的用量为1μl～5μl。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的过程具体为：
0～10min，流动相A：8wt％，流动相B：92wt％→89wt％；
10min～25min，流动相A：8wt％→15wt％，流动相B：89wt％→84wt％；
25min～40min，流动相A：15wt％→25wt％，流动相B：80wt％→75wt％；
40min～48min，流动相A：25wt％→32wt％，流动相B：75wt％→52wt％；
48min～60min，流动相A：32wt％→60wt％，流动相B：52wt％→30wt％；
60min～70min，流动相A：60wt％→95wt％，流动相B：30wt％→5wt％；
70min～80min，流动相A：95wt％→100wt％，流动相B：5wt％→0wt％。
6.一种吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的检测方法，其特征在于，应用权利要求1～5任一项所述的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法实现。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，用于盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的特征图谱检测，有15个共有特征峰，8个指标成分，用于吴茱萸药材及盐吴茱萸饮片的特征图谱检测，有20个共有特征峰，8个指标成分。
8.一种吴茱萸药材、盐吴茱萸饮片、盐吴茱萸提取物及盐吴茱萸配方颗粒的质量控制方法，其特征在于，应用权利要求1～5任一项所述的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法实现。
9.一种吴茱萸药材及其炮制品的基原鉴定方法，其特征在于，应用权利要求1～5任一项所述的构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法实现。
10.根据权利要求9所述的基原鉴定方法，其特征在于，进行所述基原鉴定时，峰a为石虎的特有峰，峰b为石虎和吴茱萸的共有峰，若供试品色谱峰出现峰a和峰b，则为石虎；只出现峰b，则为吴茱萸；均不出现峰a和峰b，则为疏毛吴茱萸。
CN202210338604.1A 2022-04-01 2022-04-01 一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用 Active CN114755328B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210338604.1A CN114755328B (zh) 2022-04-01 2022-04-01 一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210338604.1A CN114755328B (zh) 2022-04-01 2022-04-01 一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114755328A true CN114755328A (zh) 2022-07-15
CN114755328B CN114755328B (zh) 2023-06-23

Family

ID=82329118

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210338604.1A Active CN114755328B (zh) 2022-04-01 2022-04-01 一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114755328B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116448909A (zh) * 2023-04-04 2023-07-18 广东一方制药有限公司 吴茱萸或石虎的uplc特征图谱构建方法及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107132291A (zh) * 2017-05-22 2017-09-05 河北中医学院 一种超高效液相质谱联用测定吴茱萸配方颗粒中10种成分的定量方法
CN110824086A (zh) * 2019-11-12 2020-02-21 江西中医药大学 吴茱萸及其炮制品中成分含量的测定方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107132291A (zh) * 2017-05-22 2017-09-05 河北中医学院 一种超高效液相质谱联用测定吴茱萸配方颗粒中10种成分的定量方法
CN110824086A (zh) * 2019-11-12 2020-02-21 江西中医药大学 吴茱萸及其炮制品中成分含量的测定方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘珊珊;周兴清;梁彩霞;张启伟;闫利华;王智民;: "吴茱萸水提取物化学成分研究", 中国实验方剂学杂志, no. 08, pages 58 - 64 *
张崇佩;张依欣;李潮;袁小平;于欢;龚千锋;: "不同年份吴茱萸UPLC指纹图谱及多成分化学模式识别研究", 中草药, no. 11, pages 2700 - 2707 *
张崇佩;龚千锋;于欢;郭怡敬;吴建雄;李苏运;: "UPLC同时测定吴茱萸及其炮制品中12种成分含量", 中药材, no. 08, pages 1781 - 1784 *
曾金祥;朱继孝;黄碧涛;王劭华;杨雅琴;王晓云;: "吴茱萸中7种活性成分的含量测定", 安徽农业科学, no. 26, pages 15988 - 15990 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116448909A (zh) * 2023-04-04 2023-07-18 广东一方制药有限公司 吴茱萸或石虎的uplc特征图谱构建方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN114755328B (zh) 2023-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109709251A (zh) 苓桂术甘汤指纹图谱的检测方法
CN108918735B (zh) 一种检测荷叶药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱的高效液相方法
CN103330758A (zh) 一种芍药甘草汤配方颗粒及其制备方法和检测方法
CN106822203B (zh) 一种独活颗粒及其制备方法和质量控制方法
CN102274401B (zh) 一种治疗胃病的中药制剂及其制备方法和检测方法
CN114755328A (zh) 一种构建盐吴茱萸高效液相特征图谱的方法及其应用
CN110031564A (zh) 基于hplc指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法
CN102507834B (zh) 一种八味沉香制剂的检测方法
CN113759035A (zh) 小承气汤指纹图谱的构建方法
CN110658282B (zh) 鲜鱼腥草标准汤剂的uplc特征图谱的构建方法和鲜鱼腥草制剂的检测方法
CN114942291B (zh) 潜阳育阴颗粒的质量检测方法
CN106018647B (zh) 一种建立葵花盘hplc标准指纹图谱的方法
CN112730671B (zh) 一种丝瓜络标准汤剂的超高效液相色谱检测方法及其应用
CN106596759A (zh) 一种红豆杉枝叶提取物及其制剂的hplc分析方法
CN112763639A (zh) 刺五加对照提取物的制备工艺及其质量控制方法
CN113484429A (zh) 桃核承气汤物质基准的建立方法
CN113759023A (zh) 一种当归四逆汤的制备工艺及其评价方法
CN114689766B (zh) 一种枇杷清肺饮对照提取物及制备方法和质量控制方法
CN100534469C (zh) 一种芙朴感冒颗粒及其制备方法
CN112505173B (zh) 一种陈皮中辛弗林含量的测定方法
CN112630324B (zh) 一种柏子仁药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱的构建及检测方法
CN109464478A (zh) 一种沙棘配方颗粒、制备方法及其检测方法
CN114689776B (zh) 一种乌药汤高效液相特征图谱的构建方法
CN101926883A (zh) 一种治疗口腔溃疡的中药组合物的制备方法及质量控制方法
CN113484428B (zh) 桃核承气汤特征图谱的构建方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant