CN113842468A - 用于配制抗体药物缀合物组合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于配制包含抗体药物缀合物(“ADC”)的治疗性组合物的降低各批ADC之间的效能可变性的改进方法，并且提供在狭窄预定范围内所述治疗性组合物的施用。本发明提供用于基于药物浓度来配制包含抗体药物缀合物(“ADC”)的治疗性组合物的新型方法，由此缩小各批ADC之间在效能方面的可变性、使毒性最小化以及增加根据该方法配制的药物的功效。

Description

用于配制抗体药物缀合物组合物的方法
本申请是申请号为201580047269.8，申请日为2015年9月2日，申请人为伊缪诺金公司，发明创造名称为“用于配制抗体药物缀合物组合物的方法”的发明专利申请的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求2014年9月2日提交的美国临时专利申请序列No.62/044,592的优先权和权益，所述美国临时专利申请以引用的方式整体并入本文。
发明背景
特异性结合肿瘤表面抗原的抗体用于以抗体药物缀合物(ADC)形式递送细胞毒性药物。通常使细胞毒性药物在半胱氨酸或赖氨酸残基处缀合至抗体。每个抗体缀合的药物分子的数目，也被称为药物与抗体比率(“DAR”)，通常是在0-8的范围内的种类分布。使用分光光度测量结果凭经验确定制造批次的ADC的DAR，并且ADC治疗性组合物通常含有在药物载荷方面不同的ADC种类的混合物。因此，ADC批次的DAR代表所述批次内ADC种类的平均DAR。
ADC癌症治疗剂和抗体癌症治疗剂均基于标称抗体蛋白质浓度来配制，并且必须符合规格。尽管药品标签给出关于“标称”或目标蛋白质浓度的信息，但小瓶中的药物浓度可相对于目标抗体浓度而变化，原因是即使当符合接受标准时，在DAR方面允许变化。ADC的效能通常相对于浓度呈线性。不同于抗体，ADC由于DAR而具有额外效能可变潜力。当患者给药是基于标称抗体浓度时，抗体浓度和DAR的典型规格使ADC产品小瓶中的细胞毒性药物的浓度在批次与批次之间稍微变化。
重要的是患者接受安全且有效的ADC剂量。配制ADC组合物的改进方法将有利地降低在批次之间在效能、功效和/或毒性方面的可变性，并且确保患者接受在预定治疗范围内的ADC。
发明概要
本发明提供一种用于基于药物浓度来配制包含抗体药物缀合物(“ADC”)的治疗性组合物的新型方法，由此缩小各批ADC之间在效能方面的可变性、使毒性最小化以及增加根据这个方法配制的药物的功效。
本发明至少部分地基于发现一些ADC的功效和毒性完全或主要由施用的药物的浓度而非由抗体浓度驱动。配制含有包括ADC的基于抗体的治疗剂的药物组合物的常规方法已依赖于基于抗体浓度来对患者给药。尽管这可能有利于仅含有抗体的组合物，但使用抗体浓度配制ADC可导致药物浓度变化，并且可能落在所需范围的外部。ADC的效能通常关于连接的药物的浓度呈线性，所述浓度可受抗体浓度与DAR两者影响，如由公式[药物]＝DAR*[抗体]所说明。DAR、抗体和药物各自在如由给定ADC规格所限定的给定和可接受范围内变化。然而，因为药物和抗体相连接，所以一种组分的可变性会影响另一组分。举例来说，在抗体浓度方面在根据行业标准可接受范围内的±10-20％的可变性将导致在药物浓度方面变化±10-20％，此可导致小瓶中药品的效能具有±20-40％可变性。在DAR方面变化±15％将增添在效能方面的进一步变化，因为这将使药物浓度增高或降低15％。对于其中已证明药物浓度是主要毒性和功效驱动因素的一子组特定ADC，这个效应可为特别相关的。
ADC中连接有细胞毒性剂，也称为“药物”分子，并且每个抗体分子缀合的药物分子数目由术语‘药物与抗体’比率(“DAR”)表示。使用分光光度测量结果，通过获得药物浓度与抗体浓度的比率来凭经验确定制造批次的ADC的DAR。特定批次的ADC的DAR代表那个批次内连接于各抗体分子的平均药物数目。临床开发的典型DAR规格在±10-15％的范围内。按照惯例，在配制ADC时的初始步骤在于确定药物与抗体两者的摩尔浓度，并且计算DAR。接着配制ADC以获得目标抗体浓度，从而如下使药物浓度根据制造DAR值而变化：
[药物]＝DAR*[抗体]。
相比之下，本发明基于发现通过基于在固定抗体浓度和固定DAR下确定的目标药物浓度来配制ADC组合物，可使在效能和毒性方面的可变性最小。因此，在其中已证明ADC的效能、功效和/或毒性主要由施用的药物的量驱动的情况下，用于降低细胞毒性药物浓度的可变性的改进方法将为有益的。因此，下述配制方法包括在固定抗体浓度和固定DAR下确定目标药物浓度，以及配制抗体药物缀合物组合物以获得所述目标药物浓度。所述改进配制方法确保在狭窄预定药物范围内对患者给药，而无额外批次失败风险。
在一个方面，本发明大体上提供一种使抗体药物缀合物组合物的效能可变性降低(例如至少约5％、10％、20％或更多)的方法，所述方法涉及在固定抗体浓度和药物抗体比率下确定目标药物浓度；以及配制所述抗体药物缀合物组合物以获得所述目标药物浓度，由此使所述组合物的效能可变性降低。在一个实施方案中，在药物浓度方面的可变性是约±10％。在各种实施方案中，可变性小于约±5、6、7、8或9％。在一个实施方案中，方法使批次与批次间效能变化降低(例如至少约5％、10％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多)。应注意当变化表示为±时，意图其描述比指定值高或低特定％的变化。当变化表示为单一总值(例如至少10％)时，意图其代表最大潜在值与最小潜在值之间的差异。在另一实施方案中，组合物是成品药品。在另一实施方案中，药物浓度在抗体规格浓度内变化。在一个实施方案中，抗体浓度等于目标抗体浓度±小于约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10％。在另一实施方案中，抗体浓度等于目标抗体浓度±小于约10％、12％、15％或20％。
在另一不同方面，本发明提供一种降低包含抗体药物缀合物的组合物的效能可变性的方法。方法涉及通过以可变药物浓度为目标来配制抗体药物缀合物，所述可变药物浓度落在其中抗体浓度规格范围和药物浓度规格范围重叠的范围的中点，由此降低组合物的效能可变性。就此而言，本发明提供一种降低含有抗体药物缀合物的组合物的效能可变性的方法，其涉及：(a)测量所述抗体药物缀合物组合物的DAR；(b)确定抗体规格上限和抗体规格下限，其中所述抗体规格上限是目标抗体浓度加上由规格允许的最大变化，并且所述抗体规格下限是目标抗体浓度减去由规格允许的最大变化；(c)确定限定的药物规格上限和限定的药物规格下限，其中所述限定的药物规格上限是目标药物浓度加上由规格允许的最大变化，并且所述限定的药物规格下限是目标药物浓度减去由规格允许的最大变化；(d)如下确定计算药物规格上限(USL(药物))：
Figure BDA0003152556340000041
(e)如下确定计算的药物规格下限(LSL(药物))：
Figure BDA0003152556340000042
(f)将步骤(d)的所述计算的USL(药物)与步骤(c)的所述限定的药物规格上限进行比较，以及选择两个值中的较低值作为有效药物规格上限；(g)将步骤(e)的所述计算的LSL(药物)与步骤(c)的所述限定的药物规格下限进行比较，以及选择两个值中的较高值作为有效药物规格下限；和(h)配制所述抗体药物缀合物组合物至为所述有效药物规格上限与所述有效药物规格下限之间的中点的目标药物浓度，由此降低所述组合物的效能可变性。在一个实施方案中，方法使药物的规格上限和下限的范围缩小至约±3-9％。在另一实施方案中，方法使药物的规格上限和下限的范围缩小至约±4％。在一个实施方案中，步骤(b)中由规格允许的最大变化是约±15％。在另一实施方案中，步骤(b)中由规格允许的最大变化小于约±10、11、12、13或14％。在一个实施方案中，步骤(c)中由规格允许的最大变化是约±15％。在另一实施方案中，步骤(c)中由规格允许的最大变化小于约±10、11、12、13或14％。在各种实施方案中，抗体是非功能性抗体。在各种实施方案中，DAR处于DAR规格的下限或处于DAR规格的上限。在各种实施方案中，DAR规格的下限是2.3、2.4或2.5。在各种实施方案中，DAR规格的上限是2.9、3.0或3.1。
在一相关方面，例如当抗体是功能性抗体时，本发明也提供一种通过以可变抗体浓度为目标来配制抗体药物缀合物的方法，所述可变抗体浓度落在其中抗体浓度规格范围和药物浓度规格范围重叠的范围的中点，由此以当配制ADC时将使在药物浓度方面的波动最小的抗体浓度为目标。这允许更严密控制ADC制剂中的抗体浓度。
在另一方面，本发明提供一种配制抗体药物缀合物组合物的方法，所述方法涉及在固定抗体浓度和药物抗体比率下确定目标药物浓度；以及配制所述抗体药物缀合物组合物以获得所述目标药物浓度。
在另一方面，本发明提供一种降低包含抗体类美登素(maytansinoid)缀合物的组合物的效能可变性的方法，所述方法涉及在固定抗体浓度和类美登素与抗体比率下确定目标类美登素浓度；以及配制所述抗体类美登素缀合物组合物以实现所述目标类美登素浓度，由此降低所述组合物的效能可变性。
在另一方面，本发明提供一种配制抗体类美登素缀合物组合物的方法，所述方法涉及在固定抗体浓度和类美登素与抗体比率下确定目标类美登素浓度；以及配制所述抗体类美登素缀合物组合物以实现所述目标类美登素浓度。
在另一方面，本发明提供一种配制抗体苯并二氮杂草(例如吡咯并苯并二氮杂草或吲哚啉并苯并二氮杂草)缀合物组合物的方法，所述方法涉及在固定抗体浓度和苯并二氮杂草与抗体比率下确定目标苯并二氮杂草浓度；以及配制所述抗体苯并二氮杂草缀合物组合物以实现所述目标苯并二氮杂草浓度。
在另一不同方面，本发明提供一种降低含有抗体苯并二氮杂草(例如吡咯并苯并二氮杂草或吲哚啉并苯并二氮杂草)缀合物的组合物的效能可变性的方法，其涉及：(a)测量所述抗体苯并二氮杂草(例如吡咯并苯并二氮杂草或吲哚啉并苯并二氮杂草)缀合物组合物的DAR；(b)确定抗体规格上限和抗体规格下限，其中所述抗体规格上限是目标抗体浓度加上由规格允许的最大变化，并且所述抗体规格下限是目标抗体浓度减去由规格允许的最大变化；(c)确定限定的苯并二氮杂草规格上限和限定的苯并二氮杂草规格下限，其中所述限定的苯并二氮杂草规格上限是目标苯并二氮杂草浓度加上由规格允许的最大变化，并且所述限定的苯并二氮杂草规格下限是目标苯并二氮杂草浓度减去由规格允许的最大变化；(d)如下确定计算苯并二氮杂草规格上限(USL(药物))：
Figure BDA0003152556340000061
(e)如下确定计算苯并二氮杂草规格下限(LSL(药物))：
Figure BDA0003152556340000062
(f)将步骤(d)的所述计算的USL(药物)与步骤(c)的所述限定的苯并二氮杂草规格上限进行比较，以及选择两个值中的较低值作为有效苯并二氮杂草规格上限；(g)将步骤(e)的所述计算的LSL(药物)与步骤(c)的所述限定的苯并二氮杂草规格下限进行比较，以及选择两个值中的较高值作为有效苯并二氮杂草规格下限；和(h)配制所述抗体苯并二氮杂草缀合物组合物至为所述有效苯并二氮杂草规格上限与所述有效苯并二氮杂草规格下限之间的中点的目标苯并二氮杂草浓度，由此降低所述组合物的效能可变性。
在另一方面，本发明提供一种用于在狭窄预定范围内对受试者给药的方法，所述方法涉及提供根据任何先前方面的方法配制的抗体药物缀合物组合物，以及向所述受试者施用所述组合物。
在另一方面，本发明提供一种根据先前方面的方法配制的含有抗体药物缀合物的药物组合物，其中在标签上提供标称药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀(auristatin))浓度。
在本文所述的本发明的任何先前方面或任何其它方面的各种实施方案中，药物是细胞毒性剂。细胞毒性剂包括不限于微管蛋白(tubulin)抑制剂、DNA损害剂、DNA交联剂、DNA烷基化剂和细胞周期或有丝分裂破坏剂。细胞毒性剂的非限制性实例包括类美登素；苯并二氮杂草化合物，诸如吡咯并苯并二氮杂草和吲哚啉并苯并二氮杂草；和澳瑞他汀。在先前方面的特定实施方案中，方法使批次与批次间效能变化降低(例如至少约5％、10％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％或更多)。在其它实施方案中，组合物是成品药品。在其它实施方案中，抗体浓度在抗体规格浓度内变化。在先前方面的其它实施方案中，在产生抗体类美登素缀合物时，方法使批次与批次间效能可变性降低。在先前方面的各种实施方案中，允许组合物在效能方面变化约10-40％(例如10、15、20、25、30、35、40％)。在先前方面的其它实施方案中，允许组合物在效能方面变化约10-20％(例如10、12、15、18、20％)。在以上方面的其它实施方案中，抗体浓度规格等于目标±小于约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10％。在其它实施方案中，抗体浓度规格等于目标±小于约10％、12％、15％或20％。在先前方面的各种实施方案中，相对于当基于抗体浓度来配制抗体药物缀合物组合物时，在组合物效能方面的可变性得以降低。在先前方面的各种实施方案中，通过分光光度测量来确定抗体浓度和缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度。在先前方面的各种实施方案中，通过尺寸排阻色谱法(SEC)或通过SEC-质谱测定法(SEC-MS)来确定药物与抗体比率。在先前方面的其它实施方案中，组合物的功效或毒性不取决于药物与抗体比率或抗体浓度，而是取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)的总施用剂量。在先前方面的其它实施方案中，组合物的功效不取决于或基本上不取决于药物与抗体比率。在先前方面的各种实施方案中，组合物的毒性不取决于或基本上不取决于药物与抗体比率。在先前方面的各种实施方案中，功效或毒性取决于或基本上取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度。在先前方面的各种实施方案中，功效取决于、大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度。在先前方面的各种实施方案中，毒性取决于、大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度。在先前方面的各种实施方案中，功效不取决于，大致上不取决于或至少部分地不取决于抗体浓度。在先前方面的各种实施方案中，毒性不取决于、大致上不取决于或至少部分地不取决于抗体浓度。在先前方面的各种实施方案中，功效和毒性取决于、大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度和抗体浓度。在先前方面的各种实施方案中，相比于取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度，功效和毒性在较小程度上取决于抗体浓度。在先前方面的各种实施方案中，功效取决于、大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度和抗体浓度。在先前方面的各种实施方案中，毒性取决于、大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度和抗体浓度。在先前方面的各种实施方案中，功效取决于、大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度和抗体浓度，并且毒性取决于，大致上取决于，或至少部分地取决于缀合药物浓度。在先前方面的各种实施方案中，功效取决于、大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度和抗体浓度，并且毒性取决于，大致上取决于，或至少部分地取决于抗体浓度。在先前方面的各种实施方案中，毒性取决于、大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度和抗体浓度，并且功效取决于，大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度。在先前方面的各种实施方案中，毒性取决于，大致上取决于或至少部分地取决于抗体浓度，并且功效取决于、大致上取决于或至少部分地取决于缀合药物(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀)浓度。在先前方面的各种实施方案中，配制抗体药物缀合物组合物以进行输注。在先前方面的各种实施方案中，将抗体药物缀合物与药学上可接受的胃肠外媒介物一起配制。在先前方面的各种实施方案中，以单位剂量可注射形式配制抗体药物缀合物。
在本文描绘的本发明的任何先前方面或任何其它方面的各种实施方案中，方法包括确定规格上限(USL)和规格下限(LSL)。在某些实施方案中，使用下式确定计算的USL和LSL：
Figure BDA0003152556340000091
Figure BDA0003152556340000092
在任何以上方面的其它实施方案中，细胞毒性化合物或药物是微管蛋白抑制剂、DNA损害剂、DNA交联剂、DNA烷基化剂或细胞周期或有丝分裂破坏剂。
在任何以上方面的其它实施方案中，药物包括但不限于类美登素和类美登素类似物、苯并二氮杂草化合物(例如吡咯并苯并二氮杂草和吲哚啉并苯并二氮杂草；也参见表1：化合物D1-D10和DGN462)、类紫杉烷(taxoid)、CC-1065和CC-1065类似物、倍癌霉素(duocarmycin)和倍癌霉素类似物、烯二炔(诸如卡奇霉素(calicheamicin))、多拉司他汀(dolastatin)和多拉司他汀类似物(包括澳瑞他汀)、托马霉素(tomaymycin)衍生物、来普霉素(leptomycin)衍生物、甲氨蝶呤(methotrexate)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、柔红霉素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、长春新碱(vincristine)、长春花碱(vinblastine)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)和吗啉代-多柔比星。
在先前方面的各种实施方案中，类美登素是DM1、DM3或DM4。先前方面的各种实施方案中，苯并二氮杂草化合物选自下表1中所列的代表性细胞毒性剂D1-D10和DGN462。
表1.苯并二氮杂草化合物
Figure BDA0003152556340000101
Figure BDA0003152556340000111
应注意表1中所列的化合物的其它变化形式(例如磺化形式)也被涵盖，并且将易于为本领域技术人员显而易知。
在先前方面的各种实施方案中，抗体可为功能性抗体或非功能性抗体。非功能性抗体包括例如huDS6和仅具有效应物介导的细胞杀灭性的抗体，诸如huMov19(M9346A)、huAnti-CD123、huMy9-6(Z4681A)和huB4。功能性抗体包括例如huEGFR-7R和huCD37-3。在某些实施方案中，药物是苯并二氮杂草化合物，并且抗体是非功能性抗体。在某些实施方案中，药物是类美登素，并且抗体是非功能性抗体。
在先前方面的各种实施方案中，接头是可裂解接头，诸如3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-丁二酰亚胺酯(SPDP)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸N-丁二酰亚胺酯(SPDB)、4-(2-吡啶基二硫代)2-磺基丁酸N-丁二酰亚胺酯(磺基-SPDB)或4-(2-吡啶基二硫代)戊酸N-丁二酰亚胺酯(SPP)。在先前方面的各种实施方案中，接头是非可裂解接头，诸如2-亚氨基硫杂环戊烷、乙酰基丁二酸酐、4-(顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷甲酸丁二酰亚胺酯(SMCC)。通用接头2-亚氨基硫杂环戊烷和乙酰基丁二酸酐可用作可裂解或非可裂解接头。
在先前方面的各种实施方案中，接头抗体药物缀合物是huMov19-磺基-SPDB-DM4、huMov19-磺基-SPDB-D1、huMov19-D2、huMov19-磺基-SPDB-D10、huMov19-磺基-SPDB-DGN462、huMy9-6-磺基-SPDB-D1、huMy9-6-D2、huMy9-6-磺基-SPDB-D10、huMy9-6-磺基-SPDB-DGN462、huAnti-CD123-磺基-SPDB-D1、huAnti-CD123-D2、huAnti-CD123-磺基-SPDB-D10、huAnti-CD123-磺基-SPDB-DGN462、huB4-SPDB-DM4、huDS6-SPDB-DM4、huCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-50-SMCC-DM1或huEGFR-7R-SMCC-DM1。
本发明的其它特征和优势将根据详细描述以及根据权利要求而显而易知。
定义
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有由本发明所属领域中的技术人员通常理解的含义。以下参考书目提供技术人员本发明中使用的许多术语的一般性定义：Singleton等,Dictionary of Microbiology and Molecular Biology(第2版1994)；The Cambridge Dictionary of Science and Technology(Walker编,1988)；TheGlossary of Genetics,第5版,R.Rieger等(编),Springer Verlag(1991)；以及Hale和Marham,The Harper Collins Dictionary of Biology(1991)。除非另外指定，否则如本文所用，以下术语具有以下所归于它们的含义。
术语“调整理想体重(AIBW)”是指虑及性别、总体重和身高的身材描述词。AIBW可例如使用公式AIBW＝IBW+0.4(以千克计的重量-IBW)计算，其中：
理想体重(IBW)
1.IBW1(男性)＝0.91-88
2.IBW1(女性)＝0.9H1-92.
(1H＝以cm计的身高；W＝以kg计的重量)
IBW、LBW和ADJ更详细讨论于Green和Duffull,British Journal of ClinicalPharmacology 58:119-133(2004)中，所述文献以引用的方式整体并入本文。
就“细胞毒性剂”来说，其意指对细胞具有毒性的小分子化合物、肽或核酸分子。在本文所述的一些实施方案中，为便于引用，术语“药物”用于指代细胞毒性剂。举例来说，在抗体药物缀合物(ADC)的情况下，术语“药物”可与术语“细胞毒性剂”互换使用。在特定实施方案中，使细胞毒性剂(或“药物”)缀合至抗体。在一个特定实施方案中，细胞毒性剂是类美登素，诸如DM1、DM3或DM4。在其它实施方案中，细胞毒性剂包括但不限于苯并二氮杂草化合物(例如吡咯并苯并二氮杂草和吲哚啉并苯并二氮杂草；也参见表1：化合物D1-D10和DGN462)、类紫杉烷、CC-1065和CC-1065类似物、倍癌霉素和倍癌霉素类似物、烯二炔(诸如卡奇霉素)、多拉司他汀和多拉司他汀类似物(包括澳瑞他汀)、托马霉素衍生物、来普霉素衍生物、甲氨蝶呤、顺铂、卡铂、柔红霉素、多柔比星、长春新碱、长春花碱、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥和吗啉代-多柔比星。
就“药物与抗体比率(DAR)”来说，其意指每个抗体缀合的平均“药物”(即细胞毒性剂)分子数目。使用本领域中已知的任何方法来表征DAR，所述方法包括但不限于波谱法、动态光散射、尺寸排阻色谱法(SEC)、尺寸排阻色谱法与质谱测定法联用(SEC-MS)和质谱测定法。
就“类美登素与抗体比率(MAR)”来说，其意指每个抗体缀合的平均类美登素分子数目。
就“目标抗体浓度”来说，其意指所需抗体浓度。
就“目标药物浓度”或“目标细胞毒性剂浓度”来说，其意指所需药物或细胞毒性剂浓度。应注意主要基于药物的缀合形式来计算药物或细胞毒性剂的浓度，但可包括见于样品中的少量游离或未缀合药物。
就“目标类美登素浓度”来说，其意指所需类美登素浓度。
就“效能可变性”来说，其意指存在于不同批次的药品中的不同效能。合乎需要的是使效能可变性降低至少约5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％或更多。
就“药品”来说，其意指含有活性药物成分的成品剂型。在一个实施方案中，成品药品是含有单独或与赋形剂组合的本发明的抗体药物缀合物的容器(例如小瓶)。
就“规格”来说，其意指药物或药品必须符合以可为它的预定用途所接受的一组准则。规格通常由制造商提出，并且由管理机构(例如FDA)同意。
如本文所用，“功能性抗体”意图指代通过直接细胞杀灭机理(诸如凋亡或坏死)来影响细胞死亡的抗体。功能性抗体在不缀合至药物(“裸露抗体”)下在体内具有直接细胞杀灭活性。功能性抗体的非限制性实例包括huEGFR-7R抗体和huCD37-3抗体。如本文所用，“非功能性抗体”意图指代以下抗体：(i)在体内不具有已知细胞杀灭活性(例如作为裸露抗体不具有直接或间接细胞杀灭性，例如huDS6)或(ii)由于例如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖性细胞毒性(CDC)的效应物功能而具有间接细胞杀灭活性，或(iii)当效应物功能增加时在体内具有增加的缀合物活性，或(i)、(ii)和(iii)的任何组合。非功能性抗体可具有抗增殖活性，例如通过阻断增殖剂(例如生长因子)的结合。具有间接细胞杀灭活性的非功能性抗体的非限制性实例包括huMov19、huMy9-6和huB4。
就“huB4”来说，其意指特异性结合诸如人CD19的CD19的人源化抗体或其表位结合片段。本发明的一示例性huB4抗体可包括以下CDR(以粗体和下划线显示)或以下轻链(LC)和重链(HC)序列：
huB4 LC(SEQ ID NO:1)
Figure BDA0003152556340000151
huB4HC(SEQ ID NO:2)
Figure BDA0003152556340000152
Figure BDA0003152556340000161
就“huB4-SPDB-DM4”来说，其意指包括特异性结合CD19的huB4抗体通过接头4-(2-吡啶基二硫代)丁酸N-丁二酰亚胺酯(SPDB)缀合至细胞毒性类美登素N2-脱乙酰基-N2’-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)美登素(DM4)的抗体药物缀合物。huB4-SPDB-DM4例如描述于美国专利No.8,435,528和国际专利申请公布NoWO2004/103272中，所述专利以引用的方式整体并入本文。
就“huMov19”(也被称为“M9346A”)来说，其意指特异性结合叶酸受体α(在本文中也称为叶酸受体1或“FOLR1”)的人源化抗体或其表位结合片段。huMov19的详细序列描述于美国专利No.8,557,966和8,709,432以及国际专利申请公布No.:WO2011/106528中，所述专利以引用的方式整体并入本文。本发明的示例性huMOV19抗体可包括以下CDR(以粗体和下划线显示)或以下轻链(LC)和重链(HC)序列：
huMovl9 LC vl.00(SEQ ID NO:3)
Figure BDA0003152556340000162
Figure BDA0003152556340000171
huMovl9 LC vl.60(SEQ ID NO:4)
Figure BDA0003152556340000172
huMovl9 HC(SEQ ID NO:5)
Figure BDA0003152556340000173
就“huMov19-磺基-SPDB-DM4”(也被称为“IMGN853”)来说，其意指包含特异性结合FOLR1的huMov19抗体通过含二硫接头4-(2-吡啶基二硫代)-2-磺基丁酸N-丁二酰亚胺酯(sSPDB)缀合至细胞毒性类美登素N2'-脱乙酰基-N2'-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)美登素(DM4)的抗体药物缀合物。ADC huMov19-磺基-SPDB-DM4例如由Ab等,AACR；Cancer Res2011；71(8增刊):摘要编号4576以及美国专利No.8,557,966和8,709,432以及国际专利申请公布No.:WO2011/106528描述，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
就“huDS6”来说，其意指特异性结合由癌性细胞表达的Muc1粘蛋白受体(例如人Muc1)上的CA6唾液糖表位的人源化抗体或其表位结合片段。huDS6的示例性序列描述于美国专利No.7,834,155以及国际专利申请公布No.:WO2005/009369和WO2007/024222中，所述专利以引用的方式整体并入本文。本发明huDS6抗体可包括以下CDR(以粗体和下划线显示)或以下轻链(LC)和重链(HC)序列或由其组成：
huDS6 LC(SEQ ID NO:6)
Figure BDA0003152556340000181
huDS6 HC(SEQ ID NO:7)
Figure BDA0003152556340000182
就“huMy9-6”(也被称为“Z4681A”)来说，其意指特异性结合诸如人CD33的白细胞分化抗原CD33的人源化抗体或其表位结合片段。huMy9-6重链可变区部分的示例性序列描述于以引用的方式整体并入本文的美国专利公布No.20060177455中。huMy9-6轻链可变区部分的示例性序列在本领域中是已知的，并且描述于以引用的方式整体并入本文的美国专利No.7,557,189、7,342,110、8,119,787和8,337,855中。本发明的一示例性huMy9-6抗体可包括以下CDR(以粗体和下划线显示)或以下轻链(LC)和重链(HC)序列或由其组成：
huMy9-6LC(SEQ ID NO:8)
Figure BDA0003152556340000191
huMy9-6HC(SEQ ID NO:9)
Figure BDA0003152556340000192
就“huMy9-6-磺基-SPDB-DGN462”(也被称为“IMGN779”)来说，其意指通过可裂解二硫醚接头缀合至被称为DGN462的含有单亚胺部分的吲哚啉并苯并二氮杂草二聚体的抗huCD33抗体。
Figure BDA0003152556340000201
就“huEGFR-7R”(也被称为“J2898A”)来说，其意指特异性结合诸如人EGFR的EGFR的人源化抗体或其表位结合片段。例性huEGFR-7R抗体可包括以下CDR(以粗体和下划线显示)或以下轻链(LC)和重链(HC)序列或由其组成：
huEGFR-7R LC v1.0(SEQ ID NO:10)
Figure BDA0003152556340000202
huEGFR-7R LC vl.01(SEQ ID NO:11)
Figure BDA0003152556340000203
huEGFR-7R HC(SEQ ID NO:12)
Figure BDA0003152556340000204
Figure BDA0003152556340000211
就“huEGFR-7R-SMCC-DM1”(也被称为“IMGN289”)来说，其意指包含特异性结合EGFR的huEGFR-7R抗体通过接头4-(顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷甲酸N-丁二酰亚胺酯(SMCC)缀合至类美登素N(2')-脱乙酰基-N(2')-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素(DM1)的抗体药物缀合物。ADC huEGFR-7R-SMCC-DM1例如描述于美国专利No.8,790,649和国际专利申请公布No.WO2012/058588中，所述专利以引用的方式整体并入本文。
就“huCD37-3”来说，其意指特异性结合诸如人CD37的CD37的人源化抗体或其表位结合片段。huCD37-3的示例性序列描述于美国专利No.8,765,917和国际专利申请公布No.WO2011/112978中，所述专利以引用的方式整体并入本文。本发明的一示例性huCD37-3抗体可包括以下CDR(以粗体和下划线显示)或以下轻链(LC)和重链(HC)序列或由其组成：
huCD37-3 LC(SEQ ID NO:13)
Figure BDA0003152556340000212
huCD37-3 HC v1.0(SEQ ID NO:14)
Figure BDA0003152556340000221
huCD37-3 HC v1.1(SEQ ID NO:15)
Figure BDA0003152556340000222
就“huCD37-3-SMCC-DM1”(也被称为“IMGN529”)来说，其意指包含特异性结合CD37的人源化IgG1抗体K7153A通过顺丁烯二酰亚胺衍生的基于硫醚的不可裂解接头4-[N-顺丁烯二酰亚胺基甲基]环己烷-1-甲酸丁二酰亚胺酯(SMCC)共价连接于类美登素N(2')-脱乙酰基-N(2')-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素(DM1)的抗体药物缀合物。
就“huCD37-50”来说，其意指特异性结合诸如人CD37的CD37的人源化抗体或其表位结合片段。huCD37-50的示例性序列描述于美国专利No.8,765,917和国际专利申请公布No.WO2011/112978中，所述专利以引用的方式整体并入本文。本发明的一示例性huCD37-50抗体可包括以下CDR(以粗体和下划线显示)或以下轻链(LC)和重链(HC)序列或由其组成：
huCD37-50 LC(SEQ ID NO:16)
Figure BDA0003152556340000231
huCD37-50 HC(SEQ ID NO:17)
Figure BDA0003152556340000232
就“huAnti-CD123”来说，其意指特异性结合诸如人CD123的CD123的人源化抗体或其表位结合片段。示例性huAnti-CD123抗体描述于以引用的方式整体并入本文的美国临时申请序列号62/186,161中。
术语“抗体”意指通过免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点来识别和特异性结合靶标的免疫球蛋白分子，所述靶标诸如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或前述各物的组合。如本文所用，术语“抗体”涵盖完整多克隆抗体；完整单克隆抗体；表位结合抗体片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)；单链Fv(scFv)突变体；免疫球蛋白新型抗原受体抗体(IgNAR)，其包括单一可变新型抗原受体结构域抗体片段(VNAR或VNAR结构域)；单抗体，其中铰链区已被移除；纳米体；由单一单体可变抗体结构域组成的抗体片段(Ablynx)；微型抗体，其是包含连接于CH结构域的scFv的工程改造抗体片段(Hu等,Cancer Res.56:3055-3061,1996)；
Figure BDA0003152556340000241
其是包括(i)不容许体内Fab臂交换的稳定铰链区和(ii)被修饰以容许体内Fab臂交换的IgG4样CH3结构域的双特异性修饰IgG1抗体(参见例如WO2008/119353和WO2011/131746)；多特异性抗体，诸如由至少两个完整抗体产生的双特异性抗体；蛋白水解激活抗体，其是在健康组织中保持惰性，但在疾病微环境中被特异性活化(例如由在疾病微环境中富集或特有的蛋白酶裂解)的重组掩蔽单克隆抗体(参见Desnoyers等,Sci Transl Med 5:207ra144,2013)；嵌合抗体；人源化抗体；人抗体；包含抗体的抗原决定部分的融合蛋白以及包含抗原识别位点的任何其它修饰免疫球蛋白分子，只要抗体展现所需生物活性即可。基于抗体的分别被称为α、δ、ε、γ和μ的重链恒定结构域的身份，抗体可具有免疫球蛋白的5个主要类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM或其子类(同种型)(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)中的任一个。不同类别的免疫球蛋白具有不同和熟知亚单位结构以及三维构型。抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链可变区或抗体重链可变区。重链和轻链的可变区各自由通过3个也称为高变区的互补决定区(CDR)连接的4个框架区(FR)组成。各链中的CDR通过FR紧密邻近固持在一起，并且与来自另一链的CDR一起促进形成抗体的抗原结合位点。存在至少两种用于确定CDR的技术：(1)基于跨物种序列可变性的方法(即Kabat等Sequences of Proteins of Immunological Interest,(第5版,1991,National Institutes of Health,Bethesda Md.))；和(2)基于对抗原-抗体复合物的结晶学研究的方法(Al-lazikani等(1997)J.Molec.Biol.273:927-948)。此外，这两种方法的组合有时在本领域中用于确定CDR。
术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分，并且是指完整抗体的抗原决定可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段、线性抗体、单链抗体和由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物的其中细胞群体的特征在于细胞生长不受调控的生理病状。癌症可包括血液学癌症或实体肿瘤。更具体来说，癌症是白血病(例如急性骨髓性白血病(AML)、急性单核细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、嗜酸粒细胞性白血病、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)(诸如急性B淋巴母细胞性白血病(B-ALL))、慢性骨髓源性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL))或淋巴瘤(例如非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma))、骨髓发育不良综合征(MDS)、黑素瘤、肺癌(例如非小细胞肺癌；NSCLC)、卵巢癌、子宫内膜癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、头颈部鳞状细胞癌和子宫颈癌。
就“类似物”来说，其意指不相同，但具有类似功能或结构特征的分子。举例来说，多肽类似物保留相应天然存在的多肽的生物活性，同时相对于天然存在的多肽，具有增强类似物的功能的某些生物化学修饰。所述生物化学修饰可增加类似物的蛋白酶抗性、膜可渗透性或半衰期，而不改变例如配体结合。类似物可包括非天然氨基酸。
术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列源于两个或更多个物种的抗体。通常，轻链与重链两者的可变区均对应于源于一个哺乳动物物种(例如小鼠、大鼠、兔等)，具有所需特异性、亲和力和能力的抗体的可变区，而恒定区与源于另一物种(通常是人)的抗体中的序列同源以避免在那个物种中引发免疫应答。
在本公开中，“包含(comprises/comprising)”、“含有”和“具有”等可具有美国专利法中归于它们的含义，并且可意指“包括(includes/including)”等；“基本上由…组成(consisting essentially of/consists essentially)”同样具有美国专利法中所归于的含义，并且所述术语是开端的，从而允许存在多于所叙述物，只要所叙述物的基本或新型特征不因存在多于所叙述物而改变即可，但排除先前技术实施方案。
“检测”是指鉴定待检测分析物的存在性、不存在性或量。
就“疾病”来说，其意指损害或干扰细胞、组织或器官的正常功能的任何病状或病症。疾病的实例包括待用本发明的组合物治疗的赘瘤形成和癌症。
就“有效量”来说，其意指药剂的为相对于未治疗患者，改善疾病的症状所需的量。用于实施本发明以治疗性治疗疾病的活性剂(例如抗体药物缀合物(ADC)或药物)的有效量视施用方式、受试者的年龄、体重和总体健康而变化。最终，主治医师或兽医将决定适当量和剂量方案。所述量被称为“有效”量。
术语“表位”或“抗原决定簇”在本文中可互换使用，并且是指抗原的能够被特定抗体识别和特异性结合的那个部分。当抗原是多肽时，表位可由连续氨基酸与通过蛋白质的三级折叠而毗邻的非连续氨基酸两者形成。由连续氨基酸形成的表位在蛋白质变性后通常得以保留，而通过三级折叠形成的表位在蛋白质变性后通常丧失。表位通常包括至少3个、并且更通常至少5个或8-10个呈独特空间构象的氨基酸。
就“配制”来说，其意指用于产生药品的过程。
术语“人源化抗体”是指各种形式的非人(例如鼠类)抗体，其是特定免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其含有最小非人(例如鼠类)序列的片段。通常，人源化抗体是人免疫球蛋白，其中来自互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种(例如小鼠、大鼠、兔、仓鼠)的CDR的具有所需特异性、亲和力和能力的残基替换(Jones等,1986,Nature,321:522-525；Riechmann等,1988,Nature,332:323-327；Verhoeyen等,1988,Science,239:1534-1536)。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被来自非人物种，具有所需特异性、亲和力和能力的抗体中的相应残基替换。人源化抗体可通过取代Fv框架区中和/或替换的非人残基内的额外残基来进一步修饰以细化和优化抗体特异性、亲和力和/或能力。一般来说，人源化抗体将包含大致上全部至少一个，并且通常两个或三个可变结构域，所述可变结构域含有全部或大致上全部对应于非人免疫球蛋白的CDR区，而全部或大致上全部FR区是具有人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体也可包含至少一部分免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)，通常是人免疫球蛋白的至少一部分恒定区或结构域。用于产生人源化抗体的方法的实例描述于美国专利No.5,225,539中。
人源化的目标是降低诸如鼠类抗体的异种抗体的免疫原性以引入人中，同时维持抗体的完全抗原结合亲和力和特异性。
可使用诸如表面重塑和CDR移植的若干技术来产生人源化抗体。如本文所用，表面重塑技术使用分子建模、统计分析和诱变的组合来改变抗体可变区的非CDR表面以类似于目标宿主的已知抗体的表面。
用于抗体表面重塑的策略和方法以及用于降低抗体在不同宿主内的免疫原性的其它方法公开于美国专利No.5,639,641(Pedersen等)中，所述专利据此以引用的方式整体并入本文。简要来说，在一优选方法中，(1)产生一池抗体重链和轻链可变区的位置比对以给出一组重链和轻链可变区框架表面暴露位置，其中比对位置对于所有可变区是至少约98％同一的；(2)确定啮齿动物抗体(或其片段)的一组重链和轻链可变区框架表面暴露氨基酸残基；(3)鉴定与这组啮齿动物表面暴露氨基酸残基最接近同一的一组重链和轻链可变区框架表面暴露氨基酸残基；(4)用步骤(3)中鉴定的这组重链和轻链可变区框架表面暴露氨基酸残基替代步骤(2)中确定的这组重链和轻链可变区框架表面暴露氨基酸残基，例外之处是在啮齿动物抗体的互补决定区的任何残基的任何原子的5埃内的那些氨基酸残基；和(5)产生具有结合特异性的人源化啮齿动物抗体。
可使用多种其它技术使抗体人源化，所述技术包括CDR移植(EP 0 239 400；WO91/09967；美国专利No.5,530,101；和5,585,089)、镶饰或表面重塑(EP 0 592 106；EP 0519 596；Padlan E.A.,1991,Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnicka G.M.等,1994,Protein Engineering 7(6):805-814；Roguska M.A.等,1994,PNAS 91:969-973)和链改组(美国专利No.5,565,332)。可通过本领域中已知的多种方法(包括噬菌体展示方法)来制备人抗体。也参见美国专利No.4,444,887、4,716,111、5,545,806和5,814,318；以及国际专利申请公布No.:WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741(所述参照案以引用的方式整体并入本文)。
术语“人抗体”意指由人产生的抗体或使用本领域中已知的任何技术制备的具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列的抗体。人抗体的这个定义包括完整或全长抗体、其片段和/或包含至少一个人重链和/或轻链多肽的抗体，诸如像包含鼠类轻链和人重链多肽的抗体。
如本文所用的术语“抗体药物缀合物”或“ADC”是指连接于细胞结合剂(即抗体或其片段)的化合物。通常，细胞结合剂(例如抗体)通过接头共价结合于药物。
术语“分离的”、“纯化的”或“生物纯”是指物质在不同程度上不含如在它的天然状态下所见的通常伴随它的组分。“分离”表示从原始来源或周围环境的分开程度。“纯化”表示高于分离的分开程度。“纯化的”或“生物纯”蛋白质充分不含其它物质以致任何杂质都不实质上影响所述蛋白质的生物性质或导致其它不利后果。也就是说，如果本发明的核酸或肽大致上不含细胞物质、病毒物质、或当通过重组DNA技术产生时的培养基、或当化学合成时的化学前体或其它化学物质，那么它是纯化的。通常使用分析化学技术例如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法来测定纯度和均质性。术语“纯化的”表示核酸或蛋白质在电泳凝胶中产生基本上一个条带。对于可经受例如磷酸化或糖基化的修饰的蛋白质，不同修饰可产生不同分离的蛋白质，其可被单独纯化。
“接头”是能够使化合物连接于蛋白质的任何化学部分。在一个实施方案中，接头以稳定共价方式使诸如类美登素的药物连接于诸如抗体或其片段的细胞结合剂。在化合物或抗体保持活性所处的条件下，接头可易受酸诱导裂解、光诱导裂解、肽酶诱导裂解、酯酶诱导裂解和二硫键裂解或大致上对所述裂解具有抗性。适合接头在本领域中是熟知的，并且包括例如二硫醚基团、硫醚基团、酸不稳定基团、光不稳定基团、肽酶不稳定基团和酯酶不稳定基团。接头也包括带电荷接头及其亲水性形式，如本文所述和本领域中所知。
示例性可裂解接头包括但不限于3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-丁二酰亚胺酯(SPDP)、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸N-丁二酰亚胺酯(SPDB)、4-(2-吡啶基二硫代)2-磺基丁酸N-丁二酰亚胺酯(磺基-SPDB)和二硫醚4-(2-吡啶基二硫代)戊酸N-丁二酰亚胺酯(SPP)。示例性非可裂解接头包括但不限于：2-亚氨基硫杂环戊烷、乙酰基丁二酸酐和4-[N-顺丁烯二酰亚胺基甲基]环己烷-1-甲酸丁二酰亚胺酯(SMCC)。通用接头2-亚氨基硫杂环戊烷和乙酰基丁二酸酐可用作可裂解或非可裂解接头。
“单克隆抗体”是指涉及高度特异性识别和结合单一抗原决定簇或表位的同质性抗体群体。这不同于通常包括针对不同抗原决定簇的不同抗体的多克隆抗体。术语“单克隆抗体”涵盖完整和全长单克隆抗体以及抗体片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链(scFv)突变体、包含抗体部分的融合蛋白和包含抗原识别位点的任何其它修饰的免疫球蛋白分子两者。此外，“单克隆抗体”是指以许多方式制备的所述抗体，所述方式包括但不限于通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达和转基因动物。
就“特异性结合”来说，其意指化合物或抗体识别和结合目标多肽，但不实质上识别和结合天然包括本发明的多肽的样品例如生物样品中的其它分子。
适用于本发明方法中的核酸分子包括编码目标多肽或其片段的任何核酸分子。所述核酸分子无需与内源性核酸序列100％同一，但将通常展现大致上同一性。与内源性序列具有“大致上同一性”的多核苷酸通常能够与双链核酸分子的至少一个链杂交。适用于本发明方法中的核酸分子包括编码本发明的多肽或其片段的任何核酸分子。所述核酸分子无需与内源性核酸序列100％同一，但将通常展现大致上同一性。与内源性序列具有“大致上同一性”的多核苷酸通常能够与双链核酸分子的至少一个链杂交。
就“大致上同一”来说，其意指多肽或核酸分子与参照氨基酸序列(例如任一本文所述的氨基酸序列)或核酸序列(例如任一本文所述的核酸序列)展现至少50％同一性。优选地，这种序列在氨基酸水平上或在核酸的情况下与用于比较的序列至少60％，更优选80％或85％，并且更优选90％、95％或甚至99％同一。
通常使用序列分析软件(例如Genetics Computer Group的序列分析软件包(University of Wisconsin Biotechnology Center,1710 University Avenue,Madison,Wis.53705)、BLAST、BESTFIT、GAP或PILEUP/PRETTYBOX程序)测量序列同一性。所述软件通过对各种取代、缺失和/或其它修饰指定同源性程度来匹配同一或类似序列。保守性取代通常包括以下各组内的取代：甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；和苯丙氨酸、酪氨酸。在一用以确定同一性程度的示例性方法中，可使用BLAST程序，其中在e-3与e-100之间的概率评分指示密切相关序列。
就“受试者”来说，其意指哺乳动物，包括但不限于人或非人哺乳动物，诸如牛科动物、马科动物、犬科动物、羊科动物或猫科动物。
术语“治疗有效量”是指抗体或其它药物的有效“治疗”受试者或哺乳动物的疾病或病症的量。在癌症的情况下，治疗有效量的药物可降低癌细胞的数目；降低肿瘤尺寸；抑制(即在一定程度上减缓或终止)癌细胞浸润至外周器官中；抑制(即在一定程度上减缓或终止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻一种或多种与癌症相关的症状。参见本文中对“治疗”的定义。就药物可阻止生长和/或杀灭存在的癌细胞来说，它可为细胞抑制性的和/或细胞毒性的。“防治有效量”是指在必要剂量下以及持续必要时期，有效实现所需防治结果的量。通常但非必定，因为防治剂量在疾病之前或较早阶段用于受试者中，所以防治有效量将小于治疗有效量。
本文提供的范围应理解为是范围内所有值的简写形式。举例来说，1至50的范围应理解为包括来自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50组成的组的任何数字、数字组合或子范围。
如本文所用，术语“治疗(treat/treating/treatment)”等是指减轻或改善病症和/或与其相关的症状。应了解，尽管不排除，但治疗病症或病状不要求所述病症、病状或与其相关的症状被完全消除。
除非明确陈述或根据上下文显而易知，否则如本文所用，术语“或”应理解为是包括性的。除非明确陈述或根据上下文显而易知，否则如本文所用，术语“一(a/an)”和“所述”应理解为是单数性的或复数性的。
除非明确陈述或根据上下文显而易知，否则如本文所用，术语“约”应理解为在本领域中的正常容许偏差的范围内，例如在平均值的2个标准偏差内。“约”可理解为在陈述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％内。除非另外根据上下文明晰，否则本文提供的所有数值都用术语约修饰。
在对本文变量的任何定义中叙述一列化学基团包括将那个变量定义为任何单一基团或所列基团的组合。对本文变量或方面的实施方案的叙述包括那个实施方案呈任何单一实施方案形式或与任何其它实施方案或其部分组合。
本文提供的任何组合物或方法都可与一种或多种本文提供的任何其它组合物和方法组合。
附图简述
图1是说明huMov19-磺基-SPDB-DM4的细胞毒性效能对类美登素与抗体比率(MAR)的依赖性的图，所述huMov19-磺基-SPDB-DM4是包括针对FOLR1的人源化单克隆抗体(huMov19)通过磺基-SPDB接头缀合至细胞毒性类美登素DM4的免疫缀合物。相对于具有3.4的MAR的huMov19-磺基-SPDB-DM4参照标准物测量细胞毒性效能。效能百分比＝参照物EC50/试验品EC50*100％。
图2是显示细胞毒性效能对huMov19-磺基-SPDB-DM4的浓度的依赖性的图。
图3提供模拟药物与抗体比率(DAR)对眼睛毒性(“眼毒性”)的可能影响的两个散点图和表格。AIBW是指调整理想体重。基于药物给药水平计算DAR。
图4提供模拟药物与抗体比率(DAR)和浓度对眼睛毒性的可能影响的散点图和表格。计算DAR，并且未向患者实际施用相应ADC。
图5包括两个图，其显示当在相同DM4剂量下施用huMov19-磺基-SPDB-DM4缀合物时，DAR对KB和IGROV-1鼠类异种移植模型中的中值肿瘤体积缺乏影响。用huMov19-sSPDB-DM4对小鼠给药。所有缀合物都在25μg/kg DM4和可变抗体剂量(对于低DAR缀合物而言较高，而对于高DAR缀合物而言较低)下给药。无论可变DAR和抗体剂量如何，观察到类似抗肿瘤活性。
图6是显示对于具有9.0DAR的缀合物相较于具有3.6DAR的缀合物，当施用的DM4剂量相同时，DM4剂量对鼠类体重具有类似影响的图。所有缀合物都在1.4mg/kg DM4和可变抗体剂量(对于低DAR缀合物而言较高，而对于高DAR缀合物而言较低)下给药。
图7是显示对于具有各种类美登素与抗体比率的缀合物，当施用的DM1剂量相同时，DM1剂量对平均体重变化具有类似影响的图。所有缀合物都在3.0mg/kg DM1和可变抗体剂量(对于低DAR缀合物而言较高，而对于高DAR缀合物而言较低)下给药。无论DAR如何，所有缀合物的毒性都类似。
图8是显示在接受具有各种DAR的抗体-SPDB-DM4缀合物的小鼠中进行的体内毒性研究的图，所述缀合物包括ADC huDS6-SPDB-DM4(“huDS6-DM4”)；huB4-SPDB-DM4(“huB4-DM4”)；和huMy9-6-SPDB-DM4(“huMy9-6-DM4”)。
图9A和9B是显示基于DM4浓度制备ADC组合物的优势的表格。图9A显示当在目标抗体浓度(5.0±1.0mg/ml)和DAR 3.4±0.5(圈出)下配制抗体药物缀合物时的可允许DM4浓度(以μg/ml那个结果计)。在5.0mg/mL目标抗体浓度下和3.4DAR目标(框示)，DM4浓度是91.1。通过基于具有±10％规格的DM4浓度来配制，使得效能变化较低(DM4浓度的框示区域)。框示目标DAR、抗体和DM4浓度。在图9B中，在高-低DAR极端下，抗体浓度规格失效(框示区域)。框示目标DAR、抗体和DM4浓度。
图10A-10C是显示通过改变抗体浓度以实现目标药物(DGN462)浓度来配制抗体药物缀合物(ADC)批次的影响的图。“USL”和“LSL”表示抗体浓度的规格上限和下限。DGN462是一示例性药物。垂直线(伸长的“I”)表示药物浓度的上限和下限。“DAR”表示药物与抗体比率。
图11A-11C是显示相对于仅改变抗体规格以获得目标药物浓度(灰色菱形)，通过改变抗体和药物浓度(空心椭圆形)来配制ADC组合物使抗体与药物两者的容许规格范围缩小的图。
发明详述
本发明提供用于配制包含抗体药物缀合物(“ADC”)的治疗性组合物的改进方法，由此缩小各批ADC之间在效能方面的可变性和/或历经较宽泛药物与抗体比率(DAR)缩小。
在一个方面，本发明至少部分地基于发现一些ADC的功效和毒性完全或部分地由施用的药物的剂量而非抗体的剂量驱动。基于目标药物浓度来配制ADC组合物有利地使成品药品的效能变化最小，并且确保在狭窄预定范围内对患者给药。
按照惯例，已基于抗体浓度来配制抗体药物缀合物治疗性组合物。一定可变性为基于抗体浓度来配制抗体药物缀合物所固有，即使当保持在给定规格的可允许范围内时。特别地，在ADC制造过程结束时，测量缀合物中抗体的浓度，并且基于固定抗体浓度稀释缀合物以达到目标药物浓度。在实践中，允许成品药品中的抗体浓度从目标浓度变化。在一个实例中，制剂规格允许基于抗体的浓度变化±20％(例如对于5.0mg/mL的目标抗体浓度，允许4.0-6.0mg/mL)。因此，视DAR而定，成品药品的ADC效能可变化多达±35％，并且可能落在所需范围的外部。
本文在以下报道的配制方法涉及在固定抗体浓度和固定药物与抗体比率下确定药物浓度，以及配制抗体药物缀合物组合物以实现所需药物浓度。简要来说，基于药物浓度来配制ADC组合物以及增添例如±10％的药物浓度规格使存在于成品药品中的效能显著缩小至目标药物浓度的±10％(±10％规格)。通过基于药物浓度来配制ADC以及允许在药物浓度方面变化至多10％，仅容许效能变化±10％。因此，本发明的新型配制方法通过配制以获得狭窄药物浓度范围来消除DAR效能依赖性。这个配制策略仅略微增加抗体浓度将在规格外部的风险，并且因此批次未能符合规格的风险是相当低的。所述改进配制方法确保在狭窄预定范围内对患者给药，而不实质上增添一批ADC将未能符合规格的风险。
在另一方面，本发明提供一种降低包含抗体药物缀合物的组合物的效能可变性的方法。方法涉及通过以在其中两种规格重叠的范围内的可变药物浓度与可变抗体浓度两者为目标(即通过在两个浓度值方面均具有小变化(±4-9％)而非在一个浓度方面具有大变化(±10-15％))来配制抗体药物缀合物，由此降低组合物的效能可变性。在一个实施方案中，小变化是约4、5、6、7、8或9％。在其它实施方案中，大变化是约10、11、12、13、14或15％。
在另一方面，本发明提供一种降低包含抗体药物缀合物的组合物的效能可变性的方法。方法涉及通过以在其中两种规格重叠的范围内的可变药物浓度或可变抗体浓度为目标来配制抗体药物缀合物，由此降低组合物的效能可变性。
抗体药物缀合物配制
类似于抗体癌症治疗剂来配制ADC癌症治疗剂；也就是说，基于抗体蛋白质浓度。尽管药品标签给出关于作为给药基础的“标称”或目标浓度(例如基于mg/kg或mg/m2)的信息，但抗体浓度的典型规格是目标±10-20％。ADC的效能通常关于浓度呈线性，因此药品的效能可变化±20％。不同于抗体，ADC由于药物与抗体比率(DAR)而具有额外效能可变潜力。早期临床开发的典型DAR规格是目标±15％，对于给定抗体浓度，此将使连接的细胞毒性剂的量变化。对于大多数ADC，可证明的是在DAR与效能之间存在线性关系，从而指示效能部分地或完全受施用的缀合药物的浓度支配。
对于许多ADC，可在啮齿动物中证明的是毒性完全取决于施用的缀合药物的剂量，而与抗体的剂量无关。因此，只要缀合药物的施用剂量相同，毒性就不取决于DAR。对于其中抗体不具有固有抗肿瘤活性的一些ADC，功效完全取决于药物的剂量。在所述情况下，只要缀合药物的施用剂量相同，功效就相同，而与DAR无关。然而，抗体浓度和DAR的典型规格使缀合药物的浓度稍微变化。对于即使其中抗体具有固有抗肿瘤活性或例如被视为功能性抗体的一些ADC，ADC功效可仍然更多地由药物的剂量而非由抗体驱动。
在其中可证明ADC的功效和毒性主要由施用的缀合药物的量驱动的情况下，缩小缀合药物而非抗体的浓度的规格可被证明是有益的。因此，本发明提供用于基于药物的浓度而非抗体的浓度来配制治疗性组合物的方法。药物的目标浓度将为在固定抗体浓度和固定DAR下计算的药物浓度。接近于目标缀合药物浓度设置的规格将支配药品小瓶中的可允许效能变化。因此，±10％的药物浓度规格将使可允许效能变化缩小至±10％。
在其它实施方案中，可通过基于DAR和抗体规格的用以实现ADC治疗性组合物的可变药物浓度为目标来配制治疗性组合物，所述可变药物浓度落在抗体浓度和药物浓度的其中药物浓度与抗体浓度两者重叠的有效规格范围的中心内。在目标的±5％内的DAR下，通过以可变药物浓度为目标实现的有效范围的中心可大致上类似于如果使用静态药物浓度的最终配制产品。当DAR在目标DAR的±5-15％之间变化时，实现改进。在这些DAR上限和下限下，相对于以将使抗体浓度变化约±15％的静态药物浓度为目标，通过以可变药物浓度为目标来配制治疗性组合物可提供关于药物浓度(例如约±4％)与抗体浓度(例如约±10％)两者的较小可变性。所述范围适用于配制ADC组合物，其实例包括huMy9-6-磺基-SPDB-DGN462。在一个实施方案中，本发明的特征在于使用本文所述的方法来配制huMy9-6-磺基-SPDB-DGN462，其是包含DGN462通过可裂解二硫醚接头s-SPDB缀合至抗CD33抗体huMy9-6的抗体药物缀合物。适用于本发明中的其它药物包括苯并二氮杂草，诸如表1中表示的那些或其变化形式，并且由以下结构式表示：
Figure BDA0003152556340000371
抗体药物缀合物
本发明涉及用于配制ADC的改进方法，所述ADC包含如本文公开的抗体(例如结合肿瘤抗原的抗体)或抗体片段和它们的功能性等效物连接或缀合至细胞毒性剂(例如药物或前药)。多种抗体可用于本发明方法中。在特定实施方案中，抗体特异性结合抗原或配体，诸如FOLR1(也称为FRα)、CD33、CD123、CD19、MUC1、CA6、CD37、EGFR以及任何以上所列的多肽的片段。在特定实施方案中，本发明包括但不限于包括任何以下抗体的ADC：huMov19、huMy9-6、huAnti-CD123、huB4、huDS6、huCD37-50、huCD37-3和huEGFR-7R。
适合药物或前药在本领域中是已知的。药物或前药可为细胞毒性的。用于本发明的ADC中的细胞毒性药物可为导致细胞(例如癌细胞)死亡，或诱导细胞死亡，或以某一方式降低细胞活力的任何化合物，并且包括例如微管蛋白抑制剂、DNA损害剂、DNA交联剂、DNA烷基化剂和细胞周期破坏剂。在特定实施方案中，适合细胞毒性药物包括类美登素和类美登素类似物。其它适合细胞毒性药物包括例如苯并二氮杂草(例如吡咯并苯并二氮杂草和吲哚啉并苯并二氮杂草；也参见表1：化合物D1-D10和DGN462)、类紫杉烷、CC-1065和CC-1065类似物、倍癌霉素和倍癌霉素类似物、烯二炔(诸如卡奇霉素)、多拉司他汀和多拉司他汀类似物(包括澳瑞他汀)、托马霉素衍生物、来普霉素衍生物、甲氨蝶呤、顺铂、卡铂、柔红霉素、多柔比星、长春新碱、长春花碱、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥和吗啉代-多柔比星。
可通过使用连接基团以使药物或前药连接于抗体或功能性等效物来制备ADC。适合连接基团在本领域中是熟知的，并且包括例如二硫醚基团、硫醚基团、酸不稳定基团、光不稳定基团、肽酶不稳定基团和酯酶不稳定基团。
可例如通过二硫键使药物或前药连接于抗体或其片段。接头分子或交联剂可包括可与抗体或其片段反应的反应性化学基团。用于与细胞结合剂反应的反应性化学基团可为例如N-丁二酰亚胺酯和N-磺基丁二酰亚胺酯。另外，接头分子包含与药物反应以形成二硫键的反应性化学基团，诸如二硫吡啶基接头分子包括例如3-(2-吡啶基二硫代)丙酸N-丁二酰亚胺酯(SPDP)(参见例如Carlsson等,Biochem.J.,173:723-737(1978))、4-(2-吡啶基二硫代)丁酸N-丁二酰亚胺酯(SPDB)(参见例如美国专利No.4,563,304)、4-(2-吡啶基二硫代)2-磺基丁酸N-丁二酰亚胺酯(磺基-SPDB)(参见美国公布No.20090274713)、4-(2-吡啶基二硫代)戊酸N-丁二酰亚胺酯(SPP)(参见例如CAS登记号341498-08-6)、2-亚氨基硫杂环戊烷、或乙酰基丁二酸酐、4-[N-顺丁烯二酰亚胺基甲基]环己烷-1-甲酸丁二酰亚胺酯(SMCC)。举例来说，可用交联试剂修饰抗体或细胞结合剂，并且接着使由此获得的含有游离或受保护硫醇基团的抗体或细胞结合剂与含二硫或硫醇的类美登素反应以产生缀合物。可通过色谱法(包括但不限于HPLC、尺寸排阻、吸附、离子交换和亲和捕集)、透析或切向流过滤来纯化缀合物。
在本发明的一个方面，通过二硫键和增强ADC的效能、溶解性或功效的聚乙二醇间隔体使抗体连接于细胞毒性药物。所述可裂解亲水性接头例如描述于WO2009/0134976中。这个接头设计的额外益处是抗体-药物缀合物具有所需高单体比率和最小聚集。在这个方面明确涵盖通过携带聚乙二醇间隔体((CH2CH2O)n＝1-14)的二硫代团(-S—S—)连接的细胞结合剂和药物的具有2-8的狭窄药物载荷范围的缀合物，其被描述对癌细胞显示相对较高强力生物活性，并且具有高缀合产率和高单体比率以及最小蛋白质聚集的所需生物化学性质。
本文公开的许多接头详述于美国专利No.7,989,598；8,163,888；8,198,417；8,236,319；8,563,509；美国专利公布No.:US20130029900以及国际专利申请公布No.WO2009/0134976；WO2009/134977；和WO2012/177837中；以上提及的专利和申请各自的内容以引用的方式整体并入本文。
本发明包括以下方面：其中使约2至约8个药物分子(例如类美登素、苯并二氮杂草化合物、澳瑞他汀、DNA烷基化剂或其它目标化合物)连接于抗体或其片段，相较于更少或更高数目的药物连接于相同细胞结合剂的药物载荷，缀合物的抗肿瘤效应有效许多。
在一个方面，药物与抗体比率平均是约2至约8(例如1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1)。实际上，任何细胞毒性药物都可用于ADC中。在某些实施方案中，适用于本发明中的细胞毒性剂是类美登素和类美登素类似物。适合类美登素的实例包括美登醇的酯和美登醇类似物。包括抑制微管形成以及对哺乳动物细胞具有高度毒性的任何药物，如同美登醇和美登醇类似物一样。
在特定实施方案中，本发明的ADC包含类美登素。适用于本发明中的类美登素包括但不限于N2’-脱乙酰基-N2’-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素(DM1)、N2’-脱乙酰基-N2’(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(被称为DM3)和N2’-脱乙酰基-N2’-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)美登素(DM4)。
DM1由以下结构式表示：
Figure BDA0003152556340000401
也参见美国专利公布No.20130156796。
DM4由以下结构式表示：
Figure BDA0003152556340000411
也参见美国专利公布No.20130156796。
适合美登醇酯的实例包括具有改性的芳族环的那些和在其它位置处具有改性的那些。所述适合类美登素公开于美国专利No.4,424,219；4,256,746；4,294,757；4,307,016；4,313,946；4,315,929；4,331,598；4,361,650；4,362,663；4,364,866；4,450,254；4,322,348；4,371,533；5,208,020；5,416,064；5,475,092；5,585,499；5,846,545；6,333,410；7,276,497和7,473,796中。
另一包含含有空间位阻化硫醇键的侧链的类美登素是N2’-脱乙酰基-N2’(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(被称为DM3)，由以下结构式(V)表示：
Figure BDA0003152556340000421
美国专利No.5,208,020和7,276,497中教导的各类美登素也可用于本发明的缀合物中。就此而言，美国专利No.5,208,020和美国专利No.7,276,697的整个公开内容以引用的方式并入本文。以下提供一示例性类美登素结构的碳位置：
Figure BDA0003152556340000422
类美登素上的许多位置可充当用以化学连接连接部分的位置。举例来说，具有羟基的C-3位置、用羟甲基改性的C-14位置、用羟基改性的C-15位置和具有羟基的C-20位置全都预期是适用的。在一些实施方案中，C-3位置充当用以化学连接连接部分的位置，而在一些特定实施方案中，美登醇的C-3位置充当用以化学连接连接部分的位置。
用于产生所述抗体-类美登素缀合物的若干描述提供于美国专利No.6,333,410、6,441,163、6,716,821和7,368,565中，所述专利各自整体并入本文。
一般来说，可使抗体于水性缓冲液中的溶液与摩尔过量的具有携带反应性基团的二硫醚部分的类美登素一起孵育。可通过添加过量胺(诸如乙醇胺、牛磺酸等)来猝灭反应混合物。可接着通过凝胶过滤来纯化类美登素-抗体缀合物。
可通过以下方式来确定每个抗体分子结合的平均类美登素分子数目：以分光光度方式在252nm和280nm下测量吸光度以及确定抗体的摩尔浓度和药物的摩尔浓度。本文在以下显示对huMov19-磺基-SPDB-DM4的一示例性计算。接着通过用药物的摩尔浓度除以抗体的摩尔浓度来计算每个抗体的平均类美登素分子数目。类美登素分子/抗体的平均数目可为例如1-10或2-5。在一些实施方案中，类美登素分子/抗体的平均数目是3.4。
在特定实施方案中，本发明的ADC包含苯并二氮杂草。适用于本发明中的苯并二氮杂草包括例如吡咯并苯并二氮杂草和吲哚啉并苯并二氮杂草(也参见表1：化合物D1-D10和DGN462)。在先前方面的各种实施方案中，苯并二氮杂草化合物选自表1中所列的代表性细胞毒性剂D1-D10和DGN462。DGN462例如描述于以引用的方式整体并入本文的美国专利No.8,765,740中。化合物D2例如描述于美国临时申请序列号：62/045,236以及“Antibody-Drug Conjugates(ADCs)of Indolino-Benzodiazepine DNA-Alkylating Agents”,2015AACR,摘要编号652中。化合物D2例如描述于美国临时申请序列号：62/045,248以及“Antibody-Drug Conjugates(ADCs)of Indolino-Benzodiazepine DNA-AlkylatingAgents”,2015 AACR,摘要编号652中。
药物组合物
本发明进一步提供包含一种或多种本文所述的ADC的药物组合物。在某些实施方案中，药物组合物进一步包含药学上可接受的媒介物。这些药物组合物适用于抑制肿瘤生长和治疗人患者的癌症。
用于本发明的药物组合物中的示例性抗体药物缀合物包括不限于：huMov19-磺基-SPDB-DM4、huMov19-磺基-SPDB-D1、huMov19-D2、huMov19-磺基-SPDB-D10、huMov19-磺基-SPDB-DGN462、huMy9-6-磺基-SPDB-D1、huMy9-6-D2、huMy9-6-磺基-SPDB-D10、huMy9-6-磺基-SPDB-DGN462、huAnti-CD123-磺基-SPDB-D1、huAnti-CD123-D2、huAnti-CD123-磺基-SPDB-D10、huAnti-CD123-磺基-SPDB-DGN462、huB4-SPDB-DM4、huDS6-SPDB-DM4、huCD37-3-SMCC-DM1、huCD37-50-SMCC-DM1或huEGFR-7R-SMCC-DM1。
在某些实施方案中，通过组合本发明的纯化ADC与药学上可接受的媒介物(例如载体、赋形剂)来制备制剂以进行储存和使用(Remington,The Science and Practice ofPharmacy第20版Mack Publishing,2000)。本发明提供基于药物浓度来配制所述组合物。在一些实施方案中，将本发明的ADC提供于适合载体、稀释剂和/或赋形剂，诸如0.9％盐水(0.9％w/v NaCl)、5％(w/v)右旋糖中；并且也可含有诸如吐温20(Tween 20)的稳定剂。在特定实施方案中，将ADC提供于IV袋中或药物小瓶中。
其它适合药学上可接受的媒介物包括但不限于无毒缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、丁二酸盐和其它有机酸；盐，诸如氯化钠；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；碳水化合物，诸如单糖、二糖、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇。
可以许多方式施用本发明的药物组合物以达成局部或全身性治疗施用可为胃肠外施用，包括静脉内、动脉内或输注；口服施用；经皮施用；或颅内(例如鞘内或室内)施用。
包括抗体药物缀合物的试剂盒
本发明提供包括可用于进行本文所述的方法的抗体药物缀合物(ADC)的试剂盒。在某些实施方案中，试剂盒包括于一个或多个容器中的ADC，其中ADC的量基于药物浓度，并且其中ADC的量从规格变化至多±10％。本领域技术人员将易于认识到可易于将公开的ADC并入一种本领域中熟知的确定试剂盒形式中。必要时，试剂盒可包括使用ADC来达成患者治疗的说明书。说明书可直接印刷在容器上(当存在时)，或呈贴于容器的标签形式，或呈提供在容器中或与容器一起提供的单独纸张、小册子、卡片或折叠式印刷品形式。
除非另外指示，否则本发明的实施采用完全在熟练技术人员的见识内的常规分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学技术。所述技术充分说明于文献中，诸如“Molecular Cloning:A Laboratory Manual”,第2版(Sambrook,1989)；“Oligonucleotide Synthesis”(Gait,1984)；“Animal Cell Culture”(Freshney,1987)；“Methods in Enzymology”“Handbook of Experimental Immunology”(Weir,1996)；“GeneTransfer Vectors for Mammalian Cells”(Miller和Calos,1987)；“Current Protocolsin Molecular Biology”(Ausubel,1987)；“PCR:The Polymerase Chain Reaction”,(Mullis,1994)；“Current Protocols in Immunology”(Coligan,1991)。这些技术可应用于产生本发明的多核苷酸和多肽，并且因此，可在进行和实施本发明时加以考虑。将在随后章节中讨论用于特定实施方案的特别适用技术。
提出以下实施例以便向本领域普通技术人员提供对如何进行和使用本发明的的测定、筛选和治疗方法的完整公开和描述，并且以下实施例不意图限制发明者所视为的他们的发明的范围。
实施例
实施例1：ADC体外效能取决于向细胞或受试者递送的药物的量
huMov19-磺基-SPDB-DM4的抗FOLR1单克隆抗体部分靶向并结合至细胞表面抗原FOLR1(也称为FRα)。在抗体-抗原相互作用和内化之后，免疫缀合物释放DM4，其结合至微管蛋白并且破坏微管组装/折卸动力学，由此抑制FOLR1表达性肿瘤细胞的细胞分裂和细胞生长。作为叶酸受体家族成员的FOLR1在多种上皮源性癌细胞上过度表达。
抗体药物缀合物(ADC)的体外效能与也被称为类美登素与抗体比率(MAR)的药物抗体比率(DAR)线性相关(图1)。使用huMov19-磺基-SPDB-DM4作为示例性ADC来产生图1和2中显示的数据。实际上，历经一个DAR(即，2.9-3.9)存在由在DM4的剂量方面的29％计算的差异所致的31％效能变动。图2显示细胞毒性效能对huMov19-磺基-SPDB-DM4浓度的一般性依赖性。当将缀合物浓度稀释至参照标准物的浓度的一半时，细胞毒性效能是参照标准物的细胞毒性效能的一半。同样，当缀合物的起始浓度两倍于参照标准物的浓度时，相对于参照标准物，细胞毒性效是双倍的。本文在以下于实施例6中提供特异性细胞毒性测定的细节。
在3.4的目标DAR下，可接受的可变性范围允许存在于成品药品中的实际DAR在2.9与3.9之间变化(图3)。
实施例2：DM4剂量驱动体内毒性和功效
对于huMov19-磺基-SPDB-DM4，可合乎需要的是在不接近眼毒性阈值下获得尽可能较高的ADC水平以实现功效。如图3中所示，当huMov19-磺基-SPDB-DM4 DAR是约3.4并且剂量在3.3与7mg/kg之间的范围内时，发现32％的患者高于眼毒性水平。当huMov19-磺基-SPDB-DM4 DAR是2.9并且剂量在3.3与7mg/kg之间的范围内时，13％的患者将被预期高于眼毒性水平。当huMov19-磺基-SPDB-DM4 DAR是3.4并且剂量在3.3与7mg/kg之间的范围内时，基于他们将接受降低的DM4剂量，预期32％的患者高于眼毒性水平。当huMov19-磺基-SPDB-DM4 DAR是3.9并且剂量在3.3与7mg/kg之间的范围内时，基于他们将接受增加的DM4剂量，预期48％的患者高于眼毒性水平。
在5mg/kg huMov19-磺基-SPDB-DM4(调整的理想体重)下，当DAR是2.9时，患者都不超过眼毒性阈值。然而，当DAR是3.4或3.9时，在5mg/kg huMov19-磺基-SPDB-DM4下，分别有14％和57％的患者超过眼毒性阈值。在图4中显示3.4DAR群组的实际临床数据(图上的闭合圆圈)。其余数据反映模拟剂量分析。
图4说明确保患者接受在狭窄预定范围内的剂量的重要性。理想地，为确保最大功效和安全性，患者将接受huMov19-磺基-SPDB-DM4的接近但不超过眼毒性阈值的剂量。
如实施例3和4中所讨论，对于huMov19-磺基-SPDB-DM4，毒性取决于施用的DM4的量。用huMov19-磺基-SPDB-DM4进行的临床前功效研究显示当DM4剂量相同时，不存在DAR依赖性。此外，用huMov19-磺基-SPDB-DM4和许多其它缀合物进行的临床前毒性研究显示毒性由连接的DM4剂量驱动而与DAR无关。
实施例3：huMov19-磺基-SPDB-DM4的抗肿瘤活性不取决于DAR
在KB和IGROV-1鼠类异种移植模型中进行分析huMov19-磺基-SPDB-DM4活性的体内研究(图5)。KB细胞系从肿瘤细胞的HeLa细胞污染物产生。它被用作肿瘤模型，因为它在裸小鼠中形成具有可重现特征的肿瘤并且过度表达叶酸受体。IGROV-1肿瘤模型源于人卵巢癌。
在25μg/kg的DM4剂量和可变抗体剂量下向携带KB或IGROV-1肿瘤异种移植物的小鼠施用具有在2.5至4.1的范围内的不同DAR的HuMov19-磺基-SPDB-DM4。如图5中所示，只要施用相同DM4剂量，DAR就不影响功效。这个分析的结果指示DM4剂量决定在FOLR1-阳性KB和IGROV-1肿瘤模型中的功效，而与DAR无关。
实施例4：毒性不取决于药物抗体比率
进行体内研究以评估药物抗体比率对huMov19-磺基-SPDB-DM4的最大耐受剂量(MTD)的影响(图6)。小鼠在1400μg/kg的固定DM4剂量下接受huMov19-磺基-SPDB-DM4，其中抗体剂量不同。监测鼠类体重作为毒性的量度。施用的ADC在药物与抗体比率方面相差很大(例如DAR 9.0对比DAR 3.6)。引起关注的是，只要施用相同的DM4剂量，DAR在3.6-9.0的范围内就不影响毒性。因此，毒性不取决于DAR。
在另一>体内毒性分析中，在3.0mg/kg的固定DM1剂量下施用ADC huEGFR-7R-SMCC-DM1。DAR不同(例如2.3、3.5、6.3、10.1)，但DM1剂量保持恒定。监测平均体重(BW)变化作为毒性的指标。对于不同DAR缀合物，体重减轻类似，指示毒性不取决于DAR，只要DM1剂量保持恒定即可(图7)。
将这个体内分析延伸至抗体-SPDB-DM4缀合物，包括huDS6-SPDB-DM4、huB4-SPDB-DM4和huMy9-6-SPDB-DM4(图8)。ADC huDS6-SPDB-DM4(也称为“huDS6-DM4”)是通过可裂解二硫醚交联剂4-2-吡啶基二硫代丁酸N-丁二酰亚胺酯(SPDB)连接至强力细胞毒性类美登素DM4的人源化单克隆抗体huDS6。ADC huDS6-SPDB-DM4靶向实体肿瘤，诸如卵巢癌、乳腺癌、子宫颈癌、肺癌和胰腺癌。ADC huB4-SPDB-DM4(也称为“huB4-DM4”)是由通过可裂解二硫醚交联剂4-2-吡啶基二硫代丁酸N-丁二酰亚胺酯(SPDB)连接至DM4的人源化单克隆IgG1抗CD19抗体(huB4)组成的新型抗体-药物缀合物。ADC huMy9-6-SPDB-DM4(也称为“huMy9-6-DM4”)是特异性结合主要在骨髓细胞上表达的唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素(siglec)家族抗原CD33的ADC。ADC huMy9-6-SPDB-DM4已经受关于治疗急性骨髓性白血病的临床评价。
如图8中所示，在3-4种不同剂量下施用指定的缀合物，并且测量小鼠存活率作为毒性的指标。4种缀合物的DAR范围是狭窄的(在3.49至4.0的范围内)；因此，LD50范围(对50％的动物具有致死性的剂量)也是狭窄的(DM4剂量在1.6-2mg/kg之间)。在80mg/kg抗体剂量下施用具有不同DAR的缀合物，并且测量小鼠存活率作为毒性的指标(图8)。无论DAR如何，所有缀合物的类似结果指示毒性由施用的总DM4剂量驱动。也就是说，在2.1至5.1的DAR范围内，毒性不受不同DAR影响。
实施例5：基于药物浓度配制ADC治疗性组合物使由DAR变化所致的效能变化最小。
按照惯例，已基于抗体浓度来配制抗体药物缀合物治疗性组合物。图9A显示为基于抗体浓度来配制抗体药物缀合物所固有的可变性，即使当保持在规格的可允许范围内时。特别地，在ADC制造过程结束时，测量抗体的浓度，并且稀释抗体以达到对于huMov19-磺基-SPDB-DM4来说是5.0mg/ml的目标抗体浓度。在图9A中，对于huMov19-磺基-SPDB-DM4，框示目标抗体浓度(5.0mg/ml)，并且圈出目标DAR(3.4)。在这个目标抗体浓度下，DM4浓度是91.1μg/ml。在实践中，允许成品药品中的抗体浓度从目标浓度变化。成品产品中的抗体浓度可低至4.0mg/ml或高达6.0mg/ml。因此，如由DM4浓度的框示区域所示，视DAR而定，成品药品中的DM4浓度可低至62.1μg/ml或高达125.4μg/ml。
基于DM4浓度来配制ADC组合物以及增添+/-10％的DM4浓度规格使存在于成品药品中的效能显著缩小至目标DM4浓度的+/-10％(以加亮显示；+/-10％规格)。
批次未能符合规格的倾向性显示在图9B下，其中将目标DM4浓度和DAR加亮。DM4浓度显示在顶部，DAR显示在左侧，并且所得抗体浓度显示在加亮框内(5.0mg/ml)。当抗体浓度相对于目标变化超过±20％时，那个批次脱离规格。存在于未能符合规格的批次中的抗体的浓度以粗体显示(图9B)。批次未能符合规格的风险是相当低的。
总之，当前制剂规格允许在基于抗体的浓度方面变化±20％(4.0-6.0mg/mL)。因此，视DAR而定，ADC效能可变化多达±35％。通过基于DM4浓度来配制ADC以及允许在DM4浓度方面变化至多±10％，仅容许效能变化±10％。因此，新型配制方法通过配制以获得狭窄DM4浓度范围来消除DAR效能依赖性。这种配制策略仅略微增加批次由于抗体浓度在它的规格之外而未能符合规格的风险。
实施例6：DAR缀合物配制
包含huMov19抗体、SPDB接头和细胞毒性药物DM4的ADC huMov19-磺基-SPDB-DM4是其中体外效能、体内>功效和体内毒性不取决于DAR而是完全由施用的DM4浓度驱动的ADC的一个实例。因此，huMov19-磺基-SPDB-DM4是用于根据DM4而非huMov19浓度配制的良好候选物。为测试这将使药品效能缩小的假设，制造一系列具有一定范围的DAR的huMov19-磺基-SPDB-DM4缀合物。将缀合物纯化至基础配制缓冲液(10mM乙酸钠、9％(w/v)蔗糖，pH5.0)中，并且以分光光度方式分别在波长252nm和280nm下测量各样品的DM4和huMov19抗体浓度。如下计算构成缀合物的DM4和huMov19抗体的摩尔浓度：
Figure BDA0003152556340000501
Figure BDA0003152556340000502
以两种不同方式配制各种DAR缀合物中的每一个：一种方式是用基础配制缓冲液稀释以达到在5.0mg/mL±20％的规格范围内的目标huMov19抗体浓度。此外，配制各种DAR缀合物以获得在91.1μg/mL±10％的提出规格内的目标DM4浓度。使所有样品都经受特异性细胞毒性测定。
特异性细胞毒性测定涉及在具有透明底部的无菌96孔平底黑色组织培养板的一式两份孔中在含有稀释系列的huMov19-磺基-SPDB-DM4药物缀合物的培养基存在下孵育叶酸受体1(FOLR1)阳性细胞(KB)。各测定板在具有KB细胞和培养基空白的孔中含有具有同一稀释度的参照物、对照物和试验品系列。在37℃±2℃下的4天孵育时期之后，将板从孵育器移除，并且使其平衡至室温持续1小时，随后添加CellTiter-GloTM发光细胞活力试剂。将板再孵育2小时，随后在Victor III读板器上分析和记录发光信号。CellTiter-GloTM使用独特稳定形式的荧光素酶来测量ATP作为活细胞的指标。产生的发光信号与存在于孔中的活细胞的数目成正比，并且同样与那个孔中的药物的细胞毒性成反比。因为荧光素酶反应需要ATP，所以已创建各种条件以使产生的光的量与反映活细胞的数目的存在的ATP的量成比例。将3个板数据文件输入PLA 2.0软件中，并且使用各样品的所有6个平行测定，由约束的4参数逻辑曲线拟合确定参照物和试验品的EC50值。对于通过斜率差和平行性的验收标准的样品，根据由约束4PL曲线拟合获得的IC50报道试验品的相对效能％。如下计算效能百分比。
Figure BDA0003152556340000511
如果试验品EC50低于参照标准物EC50，这指示试验品比参照标准物具有更大效能，并且计算的效能％将大于100％。相反，如果试验品EC50大于参照标准物EC50，这指示试验品比参照标准物具有更小效能，并且计算的效能％将小于100％。
这些计算的结果显示于表2和表3(以下)中。表2中用于效能测定的参照标准物是样品A，而表3中用于效能测定的参照标准物是样品F。假设5mg/mL的标称huMov19浓度产生各样品的稀释系列以模拟在临床环境中用ADC给药的方式。当配制huMov19-磺基-SPDB-DM4ADC来以5mg/mL的huMov19浓度为目标时(表2)，如所预期存在广泛范围的效能：59.8-124.6％，在最高效能ADC与最低效能ADC之间达成总计约2倍差异。这与±35％的预期范围良好一致。相比之下，当配制具有各种DAR的huMov19-磺基-SPDB-DM4 ADC来以91.0mg/mL的DM4浓度为目标时，所得相对效能范围窄得多：80.9-106.5％，总计约1倍。这与±10％的预期范围良好一致。大多数测量效能在基于DM4浓度的预期值的15％内。这在效能测量测定与浓度测量测定两者的组合实验误差内。总之，这些结果显示配制以获得DM4浓度目标而非如对于ADC是典型的huMov19浓度目标具有优势。
表2.在各种DAR(±15％)下制造以及配制来以各种huMov19浓度(±20％)为目标的huMov19-磺基-SPDB-DM4缀合物。
Figure BDA0003152556340000521
表3.在各种DAR(±15％)下制造以及配制来以各种DM4浓度(±10％)为目标的huMov19-磺基-SPDB-DM4缀合物。
Figure BDA0003152556340000522
Figure BDA0003152556340000531
实施例7：以可变抗体和药物浓度为目标历经较宽泛DAR范围使规格窗收紧。
在一些情况下，可合乎需要的是使目标药物浓度变化以达成药物浓度与抗体浓度两者均较小变化，而非在非目标浓度(例如抗体浓度)方面大幅变化。通过以其中在特定DAR值下抗体浓度与药物浓度两者重叠的范围的中点为目标，使用所述方法配制ADC组合物使规格范围最大。在实践中，药物规格比抗体规格更紧密(例如±10％(对于药物)对比±15％(对于抗体))。因此，允许在抗体浓度和药物浓度方面的较小变化提供用以实现较紧密药物浓度规格(而非绝对目标)的额外控制策略，同时使尽管不符合规格、但对于使用将是完全安全的批次的风险最小化。
显示对于huMy9-6-磺基-SPDB-DGN462而言，使用上述方法配制ADC的合乎需要性，所述huMy9-6-磺基-SPDB-DGN462是包含经由可裂解二硫醚接头磺基-SPDB缀合至新型DNA烷基化剂DGN462的抗体huMy9-6的CD33靶向抗体药物缀合物。
在图10A、10B和10C的每一个中，抗体规格范围的上限和下限由虚线指示，X轴指示一批药物的DAR，其中目标DAR是2.7；垂直线显示在给定DAR下DGN462规格上限和下限，并且各垂直线上的暗灰色菱形指示在特定DAR下DGN462规格范围与抗体规格范围之间的重叠。在图11A中，当批次的DAR是2.7时，DGN462规格范围的中心正好落在抗体范围的中心内。在图10B中，当批次的DAR接近于目标DAR时，为实现固定DGN462目标浓度所需的抗体浓度正好落在抗体的规格上限和下限内。在图10C中，当批次的DAR接近DAR规格上限和下限(分别是3.0-3.1和2.3-2.4)时，固定的DGN462浓度接近或超出限定的抗体浓度规格，因为为获得DGN462目标浓度所需的抗体的量接近抗体浓度的规格上限和下限。因此，改进的配制方法可合乎需要。
图11A-11C显示通过使DGN462浓度与抗体浓度两者变化所获得的改进—特别是当DAR接近DAR规格上限和下限(例如3.0-3.1和2.3-2.4)时。以可变药物浓度为目标鉴定其中抗体浓度规格范围和药物浓度规格范围重叠的范围的中点(图11A)。总药物的有效范围的中心远低于抗体规格上限。因此，在DAR规格上限和下限下，以可变DGN462为目标的方法使目标抗体浓度限于从目标变化+/-10％，而非完全±15％，从而产生更一致产品。相比之下，对于其中DAR接近上限和下限的批次，改变抗体浓度以实现固定的DGN462目标浓度导致从目标抗体浓度较大的偏离，并且增加效能和毒性可变性的风险(图11A和11B)。图11C说明相较于其中抗体浓度用于获得目标药物浓度(灰色菱形)(其中在2.3的DAR下，固定的目标总药物超过抗体的规格上限)，在DAR规格上限和下限下由以可变药物浓度为目标的方法提供的改进，其中DGN462浓度和抗体浓度被维持在4％的较窄限度(空心椭圆形)之间。
以下等式可用于计算药物的规格上限和规格下限。
Figure BDA0003152556340000541
Figure BDA0003152556340000551
表4说明用于计算DGN462的规格上限和下限(USL DGN462、LSL DGN462)的方法。抗体浓度规格上限是恒定的。凭经验确定一批抗体药物缀合物的DAR。如下进行根据所需规格上限和下限的计算：
Figure BDA0003152556340000552
Figure BDA0003152556340000553
值“2.30”和“1.70”限定抗体规格上限和下限。分母是抗体的分子量。
表4.基于抗体规格界限的计算DGN462浓度
Figure BDA0003152556340000554
根据DGN462配制(基于可变目标)
Figure BDA0003152556340000555
Figure BDA0003152556340000561
-当在某些点下计算LSL和USL时，这些界限将落在提出的规格之外
-这些离群值可使用>或<规则设为LSL(34.0mg/mL)或USL(41.5mg/mL)
-出于配制目的，提议是报道达到第二小数位的DAR
在以下实施例中，通过以可变药物浓度为目标来配制ADC。此处ADC包括缀合至D2(MW 961.05g/mol)的非功能性抗体huMov19(MW 145676g/mol)，具有2.7的目标DAR，2.0mg/mL的抗体浓度和39.2μg/mL的细胞毒性剂浓度。配制ADC来以可变药物浓度为目标以使从抗体浓度的目标的偏移最小化。如图11A中所示，相对于当利用静态药物浓度时的±15％，以可变药物浓度为目标使所得抗体浓度变化±10％(1.8-2.2)(图11A；参见例如表4-7)。以可变药物为目标鉴定其中抗体规格范围和药物规格范围重叠的范围的中点(图11A；参见例如表4-7)
下表5说明用于计算D2的规格上限和下限(USL D2、LSL D2)的方法。抗体浓度规格上限和下限是恒定的，并且凭经验确定DAR。
表5.
基于抗体规格界限的计算的D2浓度
Figure BDA0003152556340000562
根据D2配制(基于可变目标)
Figure BDA0003152556340000571
在另一实施例中，通过以可变细胞毒性剂浓度为目标来配制ADC。此处ADC包括缀合至D1(MW 838g/mol)的功能性抗体huEGFR-7R(MW 144975g/mol)，具有2.7的目标DAR、2.0mg/mL的抗体浓度和34.3μg/mL的细胞毒性剂浓度。配制ADC来以可变细胞毒性剂浓度为目标以使从抗体浓度的目标的偏移最小化。
下表6说明用于计算D1的规格上限和下限(USL D1、LSL D1)的方法。抗体浓度规格上限和下限是恒定的，并且凭经验确定DAR。
表6.
基于抗体规格界限的计算的D1浓度
Figure BDA0003152556340000572
根据D1配制(基于可变目标)
Figure BDA0003152556340000573
Figure BDA0003152556340000581
在另一实施例中，通过以可变细胞毒性剂浓度为目标来配制ADC。此处ADC包括缀合至D10(MW 1062.22g/mol)的功能性抗体huMy9-6(MW 146192g/mol)，具有2.7的目标DAR、2.0mg/mL的抗体浓度和44.0μg/mL的细胞毒性剂浓度。配制ADC来以可变细胞毒性剂浓度为目标以使从抗体浓度的目标的偏移最小化。
下表7说明用于计算D1的规格上限和下限(USL D1、LSL D1)的方法。抗体浓度规格上限和下限是恒定的，并且凭经验确定DAR。
表7.
基于抗体规格界限的计算的D10浓度
Figure BDA0003152556340000582
根据D10配制(基于可变目标)
Figure BDA0003152556340000583
Figure BDA0003152556340000591
其它实施方案
根据先前描述，将显而易知的是可对本文所述的本发明进行变化和修改以使它适于各种用途和情况。所述实施方案也在以下权利要求的范围内。
在对本文变量的任何定义中叙述一列要素包括将那个变量定义为任何单一要素或所列要素的组合(或亚组合)。对本文实施方案的叙述包括那个实施方案呈任何单一实施方案形式或与任何其它实施方案或其部分组合。
本说明书中提及的所有专利和出版物都以引用的方式并入本文，所述引用的程度就如同特定地和个别地指示将各独立专利和出版物以引用的方式并入一般。
序列表
<110> 伊缪诺金公司
<120> 用于配制抗体药物缀合物组合物的方法
<130> 365738.1009WO1 (00022)
<140> PCT/US2015/048152
<141> 2015-09-02
<150> 62/044,592
<151> 2014-09-02
<160> 17
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 211
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 1
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Gly Val Asn Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Arg Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Arg Gly Ser Tyr Thr Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
100 105 110
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
115 120 125
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
130 135 140
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
145 150 155 160
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
180 185 190
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
195 200 205
Gly Glu Cys
210
<210> 2
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
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Gln Val Gln Leu Val Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Asn
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Asn Pro Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 3
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Lys Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Ser
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 4
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 4
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Lys Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
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100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
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Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 5
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 人工序列的描述: 合成多肽
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1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile His Pro Tyr Asp Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala His
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Tyr Asp Gly Ser Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
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Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
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Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
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Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
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Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
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Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala His Ser Ser Val Ser Phe Met
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Gly Tyr Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Ala Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
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Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Ile Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asp Ser Val Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 8
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 8
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Phe Phe Ser
20 25 30
Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Ser Ser Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 9
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Tyr Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Val Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
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Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
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Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
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His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 10
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
His Tyr Thr Ser Thr Leu His Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Tyr
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 11
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Lys Leu Leu Ile
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His Tyr Thr Ser Thr Leu His Pro Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Leu Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
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195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 12
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Cys Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Thr Tyr Thr Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Ala Pro Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
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225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 13
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 13
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Arg Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Asn Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Trp Gly Thr Thr Trp
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
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195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 14
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 14
Gln Val Gln Val Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser
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Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Lys Lys Asp His Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
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Lys Gly Gly Tyr Ser Leu Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
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115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
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Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
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Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 15
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 15
Gln Val Gln Val Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Ser Ser Leu Lys
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Ser Arg Leu Ser Ile Lys Lys Asp His Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
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Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
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Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
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Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
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Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
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Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
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Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
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340 345 350
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Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
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385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
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420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440
<210> 16
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 16
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
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100 105 110
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115 120 125
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165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
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195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 17
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成多肽
<400> 17
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Leu Lys Pro Ser Gln
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Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly
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50 55 60
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65 70 75 80
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Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly

Claims (10)

1.一种降低抗体药物缀合物组合物的效能可变性的方法，所述方法包括：
(a)在固定抗体浓度和固定药物抗体比率(DAR)下确定目标药物浓度；和
(b)配制所述抗体药物缀合物组合物以获得所述目标药物浓度，由此降低所述组合物的效能可变性。
2.一种降低包含抗体药物缀合物的组合物的效能可变性的方法，所述方法包括：
(a)在目标抗体浓度和固定药物抗体比率(DAR)下确定药物浓度；
(b)以鉴定其中抗体浓度规格范围和药物浓度规格范围重叠的范围的中点的可变药物浓度为目标；
(c)配制所述抗体药物缀合物组合物以获得所述目标可变药物浓度，由此降低所述组合物的效能可变性。
3.一种降低包含抗体药物缀合物的组合物的效能可变性的方法，所述方法包括：
(a)测量所述抗体药物缀合物组合物的DAR；
(b)确定抗体规格上限和抗体规格下限，其中所述抗体规格上限是目标抗体浓度加上由所述规格允许的最大变化，并且所述抗体规格下限是目标抗体浓度减去由所述规格允许的最大变化；
(c)确定限定的药物规格上限和限定的药物规格下限，其中所述限定的药物规格上限是目标药物浓度加上由所述规格允许的最大变化，并且所述限定的药物规格下限是目标药物浓度减去由所述规格允许的最大变化；
(d)如下确定计算的药物规格上限(USL(药物))：
Figure FDA0003152556330000021
(e)如下确定计算的药物规格下限(LSL(药物))：
Figure FDA0003152556330000022
(f)将步骤(d)的所述计算的USL(药物)与步骤(c)的所述限定的药物规格上限进行比较，以及选择两个值中的较低值作为有效药物规格上限；
(g)将步骤(e)的所述计算的LSL(药物)与步骤(c)的所述限定的药物规格下限进行比较，以及选择两个值中的较高值作为有效药物规格下限；和
(h)配制所述抗体药物缀合物组合物至为所述有效药物规格上限与所述有效药物规格下限之间的中点的目标药物浓度，由此降低所述组合物的效能可变性。
4.一种配制抗体药物缀合物组合物的方法，所述方法包括：
(a)在固定抗体浓度和固定药物抗体比率下确定目标药物浓度；和
(b)配制所述抗体药物缀合物组合物以实现步骤(a)的所述目标药物浓度。
5.一种降低包含抗体类美登素缀合物的组合物的效能可变性的方法，所述方法包括：
(a)在固定抗体浓度和固定类美登素与抗体比率下确定目标类美登素浓度；和
(b)配制所述抗体类美登素缀合物组合物以实现所述目标类美登素浓度，由此降低所述组合物的效能可变性。
6.一种配制抗体类美登素缀合物组合物的方法，所述方法包括：
(a)在固定抗体浓度和固定类美登素与抗体比率下确定目标类美登素浓度；和
(b)配制所述抗体类美登素缀合物组合物以实现所述目标类美登素浓度。
7.一种降低包含抗体苯并二氮杂草缀合物的组合物的效能可变性的方法，所述方法包括：
(a)测量所述抗体苯并二氮杂草缀合物组合物的DAR；
(b)确定抗体规格上限和抗体规格下限，其中所述抗体规格上限是目标抗体浓度加上由所述规格允许的最大变化，并且所述抗体规格下限是目标抗体浓度减去由所述规格允许的最大变化；
(c)确定限定的苯并二氮杂草规格上限和限定的苯并二氮杂草规格下限，其中所述限定的苯并二氮杂草规格上限是目标苯并二氮杂草浓度加上由所述规格允许的最大变化，并且所述限定的苯并二氮杂草规格下限是目标苯并二氮杂草浓度减去由所述规格允许的最大变化；
(d)如下确定计算的苯并二氮杂草规格上限(USL(药物))：
Figure FDA0003152556330000041
(e)如下确定计算苯并二氮杂草规格下限(LSL(药物))：
Figure FDA0003152556330000042
(f)将步骤(d)的所述计算的USL(药物)与步骤(c)的所述限定的苯并二氮杂草规格上限进行比较，以及选择两个值中的较低值作为有效苯并二氮杂草规格上限；
(g)将步骤(e)的所述计算的LSL(药物)与步骤(c)的所述限定的苯并二氮杂草规格下限进行比较，以及选择两个值中的较高值作为有效苯并二氮杂草规格下限；和
(h)配制所述抗体苯并二氮杂草缀合物组合物至为所述有效苯并二氮杂草规格上限与所述有效苯并二氮杂草规格下限之间的中点的苯并二氮杂草浓度，由此降低所述组合物的效能可变性。
8.一种用于在狭窄预定范围内对受试者给药的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据如权利要求1-7中任一项所述的方法配制的抗体药物缀合物组合物。
9.一种药物组合物，其包含根据如权利要求1至7中任一项所述的方法配制的huMov19-磺基-SPDB-DM4抗体药物缀合物，其中在标签上提供标称类美登素浓度。
10.一种药物组合物，其包含根据如权利要求1-7中任一项所述的方法配制的huMy9-6-磺基-SPDB-DGN462抗体药物缀合物，其中在标签上提供标称DGN462浓度。
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE036172T2 (hu) 2011-04-01 2018-06-28 Immunogen Inc Eljárások a hatékonyság növelésére a FOLR1 rákkezelésénél
KR102585409B1 (ko) 2013-08-30 2023-10-05 이뮤노젠 아이엔씨 엽산 수용체 1의 검출을 위한 항체 및 분석
KR102626976B1 (ko) 2014-09-02 2024-01-18 이뮤노젠 아이엔씨 항체 약물 컨쥬게이트 조성물의 제형화 방법
LT3313845T (lt) 2015-06-29 2020-12-10 Immunogen, Inc. Cisteino inžinerijos antikūnų konjugatai
EP3463477A4 (en) 2016-06-07 2020-03-04 NanoPharmaceuticals LLC NON-CLeavable POLYMER CONJUGATED WITH THYROID ANTAGONISTS OF avß3 INTEGRIN
WO2018085359A1 (en) * 2016-11-02 2018-05-11 Immunogen, Inc. Combination treatment with antibody-drug conjugates and parp inhibitors
TWI755450B (zh) 2016-11-23 2022-02-21 美商伊繆諾金公司 苯二氮平衍生物之選擇性磺化
AU2019206587A1 (en) * 2018-01-12 2020-08-06 Immunogen, Inc. Methods for antibody drug conjugation, purification, and formulation
US10328043B1 (en) 2018-04-11 2019-06-25 Nanopharmaceuticals, Llc. Composition and method for dual targeting in treatment of neuroendocrine tumors
US11351137B2 (en) 2018-04-11 2022-06-07 Nanopharmaceuticals Llc Composition and method for dual targeting in treatment of neuroendocrine tumors
JP7232925B2 (ja) 2019-02-15 2023-03-03 ウーシー バイオロジクス アイルランド リミテッド 改善された均一性を有する抗体薬物コンジュゲートの調製するプロセス
SG11202111109UA (en) 2019-04-29 2021-11-29 Immunogen Inc Biparatopic fr-alpha antibodies and immunoconjugates
US10961204B1 (en) 2020-04-29 2021-03-30 Nanopharmaceuticals Llc Composition of scalable thyrointegrin antagonists with improved blood brain barrier penetration and retention into brain tumors
US11723888B2 (en) 2021-12-09 2023-08-15 Nanopharmaceuticals Llc Polymer conjugated thyrointegrin antagonists

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101193916A (zh) * 2004-12-09 2008-06-04 森托科尔公司 抗整联蛋白免疫缀合物、方法和用途
US20090163698A1 (en) * 2007-05-11 2009-06-25 John Joseph Grigsby Method for Preparing Antibody Conjugates
US20110123554A1 (en) * 2009-05-06 2011-05-26 Frank Osterroth Uses of immunoconjugates targeting cd138
US20120244171A1 (en) * 2011-02-15 2012-09-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
CN102940889A (zh) * 2003-05-14 2013-02-27 伊缪诺金公司 药物缀合物组合物
US8557966B2 (en) * 2010-02-24 2013-10-15 Immunogen, Inc. Folate receptor 1 antibodies and immunoconjugates and uses thereof

Family Cites Families (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
DE69120146T2 (de) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
ES2149768T3 (es) 1992-03-25 2000-11-16 Immunogen Inc Conjugados de agentes enlazantes de celulas derivados de cc-1065.
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
ES2304786T3 (es) 1995-04-27 2008-10-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos anti-il-8 humanos, derivados a partir de xenoratones inmunizados.
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
DK1500329T3 (da) 1996-12-03 2012-07-09 Amgen Fremont Inc Humane antistoffer, der specifikt binder TNF-alfa
WO1998046645A2 (en) 1997-04-14 1998-10-22 Micromet Gesellschaft Für Biomedizinische Forschung Mbh Method for the production of antihuman antigen receptors and uses thereof
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US6995145B1 (en) * 1999-06-04 2006-02-07 Au Jessie L-S Methods and compositions for modulating drug activity through telomere damage
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
GB0202319D0 (en) 2002-02-01 2002-03-20 Calex Electronics Ltd Apparatus
IL163668A0 (en) * 2002-02-22 2005-12-18 New River Pharmaceuticals Inc Use of peptide-drug conjugation to reduce inter-subject variability ofdrug serum levels
US20090068178A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
MXPA05004712A (es) 2002-11-07 2005-11-23 Immunogen Inc Anticuerpos anti-cd33 y metodo para tratamiento de leucemia mieloide aguda utilizando los mismos.
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
CA2525130C (en) 2003-05-20 2014-04-15 Immunogen, Inc. Improved cytotoxic agents comprising new maytansinoids
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
US7834155B2 (en) 2003-07-21 2010-11-16 Immunogen Inc. CA6 antigen-specific cytotoxic conjugate and methods of using the same
AU2004258955C1 (en) 2003-07-21 2012-07-26 Immunogen, Inc. A CA6 antigen-specific cytotoxic conjugate and methods of using the same
NZ551180A (en) 2004-06-01 2009-10-30 Genentech Inc Antibody drug conjugates and methods
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
US8156876B2 (en) 2005-06-23 2012-04-17 Georgia Tech Research Corporation Systems and methods for integrated plasma processing of waste
EP1917034A4 (en) 2005-08-22 2009-04-29 Immunogen Inc CA6 ANTIGEN-SPECIFIC CYTOTOXIC CONJUGATE AND METHOD OF ITS APPLICATION
AU2006283726C1 (en) * 2005-08-24 2015-05-07 Immunogen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
SI1813614T1 (sl) * 2006-01-25 2012-01-31 Sanofi 174 Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomajmicinske derivate
AU2007212147A1 (en) * 2006-02-03 2007-08-16 Medimmune, Llc Protein formulations
AR060978A1 (es) * 2006-05-30 2008-07-23 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados y sus usos
EP2626372B1 (en) 2007-03-29 2018-03-21 Genmab A/S Bispecific antibodies and methods for production thereof
US7576505B2 (en) * 2007-06-21 2009-08-18 Jack Chen Device for finding a home position for a moveable member
US20090208979A1 (en) * 2008-02-14 2009-08-20 Technion Research And Development Foundation Ltd. Method for identifying antipsychotic drug candidates
SG189817A1 (en) 2008-04-30 2013-05-31 Immunogen Inc Potent conjugates and hydrophilic linkers
US8236319B2 (en) 2008-04-30 2012-08-07 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
AR078470A1 (es) * 2009-10-02 2011-11-09 Sanofi Aventis Anticuerpos que se unen especificamente al receptor epha2
CN102971012B (zh) 2010-03-12 2016-05-04 伊缪诺金公司 Cd37结合分子及其免疫缀合物
US9150663B2 (en) 2010-04-20 2015-10-06 Genmab A/S Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof
CN103298489A (zh) 2010-10-29 2013-09-11 伊缪诺金公司 新型egfr结合分子及其免疫偶联物
HUE036172T2 (hu) 2011-04-01 2018-06-28 Immunogen Inc Eljárások a hatékonyság növelésére a FOLR1 rákkezelésénél
CN103596590A (zh) * 2011-04-01 2014-02-19 伊缪诺金公司 Cd37结合分子及其免疫缀合物
US20120282282A1 (en) 2011-04-04 2012-11-08 Immunogen, Inc. Methods for Decreasing Ocular Toxicity of Antibody Drug Conjugates
WO2012177837A2 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Immunogen, Inc. Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof
EP2550975A1 (en) * 2011-07-29 2013-01-30 Sanofi Combination therapy for the treatment of CD19+ B-cell malignancies symptoms comprising an anti-CD19 maytansinoid immunoconjugate and rituximab
MX353958B (es) 2011-09-22 2018-02-07 Amgen Inc Proteinas de union al antigeno cd27l.
KR20140105765A (ko) 2011-11-21 2014-09-02 이뮤노젠 아이엔씨 EGfr 항체 세포독성제 접합체에 의한 EGfr 치료에 내성을 나타내는 종양의 치료 방법
NZ707091A (en) * 2012-10-04 2018-12-21 Immunogen Inc Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
WO2014079886A1 (en) * 2012-11-20 2014-05-30 Sanofi Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof
MX2015010682A (es) * 2013-02-22 2016-05-31 Stemcentrx Inc Nuevos conjugados de anticuerpos y usos de los mismos.
CN105592861A (zh) * 2013-08-02 2016-05-18 赛诺菲 抗Muc1类美登素免疫偶联抗体用于治疗实体瘤的用途
KR102626976B1 (ko) 2014-09-02 2024-01-18 이뮤노젠 아이엔씨 항체 약물 컨쥬게이트 조성물의 제형화 방법
US10988531B2 (en) * 2014-09-03 2021-04-27 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
ES2815353T3 (es) * 2014-09-03 2021-03-29 Immunogen Inc Derivados de benzodiazepina citotóxicos
JP2017527562A (ja) * 2014-09-03 2017-09-21 イミュノジェン・インコーポレーテッド 細胞毒性ベンゾジアゼピン誘導体
JP2016052860A (ja) 2014-09-04 2016-04-14 株式会社東海理化電機製作所 タイヤ位置登録システム

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102940889A (zh) * 2003-05-14 2013-02-27 伊缪诺金公司 药物缀合物组合物
CN101193916A (zh) * 2004-12-09 2008-06-04 森托科尔公司 抗整联蛋白免疫缀合物、方法和用途
US20090163698A1 (en) * 2007-05-11 2009-06-25 John Joseph Grigsby Method for Preparing Antibody Conjugates
US20110123554A1 (en) * 2009-05-06 2011-05-26 Frank Osterroth Uses of immunoconjugates targeting cd138
US8557966B2 (en) * 2010-02-24 2013-10-15 Immunogen, Inc. Folate receptor 1 antibodies and immunoconjugates and uses thereof
US20120244171A1 (en) * 2011-02-15 2012-09-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PETER D SENTER ET AL: "Potent antibody drug conjugates for cancer therapy", 《CURRENT OPINION IN CHEMICAL BIOLOGY》, vol. 13, no. 3, pages 235 - 244, XP026285196, DOI: 10.1016/j.cbpa.2009.03.023 *
WHITEMAN KR ET AL: "IMGN779: A CD33-TARGETED ANTIBODY-DRUG CONJUGATE (ADC) UTILIZING A NOVEL DNA ALKYLATOR, DGN462, IS HIGHLY ACTIVE IN VITRO AGAINST PRIMARY PATIENT AML CELLS AND IN VIVO AGAINST AML XENOGRAFTS IN MICE", 《THE HEMATOLOGY JOURNAL: OFFICIAL ORGAN OF THE EUROPEAN HEMATOLOGY ASSOCIATION》, pages 293 *
WILLIAM J. GALUSH ET AL.: "Formulation Development of Antibody–Drug Conjugates", 《ANTIBODY-DRUG CONJUGATES》, vol. 1045, pages 217 - 233, XP055628643, DOI: 10.1007/978-1-62703-541-5_13 *

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