CN113684151B - 表皮葡萄球菌及其发酵培养和应用 - Google Patents

表皮葡萄球菌及其发酵培养和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株表皮葡萄球菌及其发酵培养和应用，所述表皮葡萄球菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO:61626。本发明所述的表皮葡萄球菌的代谢产物能够抑制金黄色葡萄球菌的增殖代谢，并能够稳定传代；同时其代谢产物还能够促进其他葡萄球菌的增殖代谢，从而改善皮肤微生态的菌群平衡，并达到有效改善部分敏感性皮肤的功效。本发明所述表皮葡萄球菌的代谢产物可用于制备抑制金黄色葡萄球菌的产品和/或制备改善敏感肌肤的产品。

Description

表皮葡萄球菌及其发酵培养和应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株表皮葡萄球菌及其发酵培养和应用，尤其涉及一株可生产抑制金黄色葡萄球菌同时促进其他葡萄球菌增殖的代谢产物的表皮葡萄球菌。
背景技术
据不完全统计，约有1/3以上的人罹患过过敏性疾患，女性敏感肌肤者占人群50％以上。肌肤敏感是由多种原因引发皮肤发生变态反应，具有病因不明、病发率高、易诊难治等特点。一般以颜面等皮肤薄嫩部位的瘙痒脱屑为初始症状，逐渐发展为耳、颈甚至全身的轻度水肿、水疱、丘疹、脱屑、浸润性苔藓等。
敏感性皮肤主要表现为受到外界刺激后皮肤容易出现灼热、刺痛、瘙痒及紧绷感等症状。皮肤屏障功能低下，经表皮水分散失值增高的人群更容易发生皮肤敏感。但在关注皮肤屏障修复时，往往最先关注的是角质层屏障，而位于其上的微生态屏障，即和皮肤共生的微生物菌群特别容易被忽视。人体皮肤的基本特性是干燥、凉爽和弱酸性的，这些条件并不是微生物赖以生存的理想生境。但由于皮肤上大量褶皱，毛囊汗腺等的分布，在进化的过程中，皮肤上定植了种类多样的微生物，包括细菌、真菌和寄生虫等。据预测，每平方厘米的皮肤上可能定植最高数以十亿计的微生物。
皮肤上的菌群又可分为常驻共生菌和暂住菌，常驻菌是指在皮肤上生长繁殖，定植于皮肤上的菌种，而暂住菌是指暂时着落于皮肤上的菌种，在一定条件下产生克隆生长、繁殖。后者可能引起皮肤感染甚至疾病的发生。常驻菌和皮肤为友好共生关系，但是当皮肤物理屏障受损后，常驻菌进入皮肤深层，变成致病菌，可以诱发一系列皮肤问题，其中最重要的是皮肤敏感的发生。反之，菌群的紊乱，特定菌群的感染，会引发敏感肌肤的发生。
皮肤的健康状况会影响皮肤屏障中微生态菌群的生长状况，同样，皮肤微生态菌群的生长状况也会影响皮肤的健康。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一株表皮葡萄球菌及其发酵培养和应用。该菌株的代谢产物可有效抑制金黄色葡萄球菌的生长，此外还可调整皮肤微生态的菌群平衡，有效改善敏感肤质。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
第一方面，本发明提供了一株表皮葡萄球菌，所述表皮葡萄球菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO:61626。
优选地，所述表皮葡萄球菌菌株的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。
第二方面，本发明提供了一种表皮葡萄球菌的发酵培养方法，包括以下步骤：
A、将表皮葡萄球菌进行活化，然后将活化好的菌种液接种到TSB培养基中进行培养12-24h；
B、将步骤A培养后得到的发酵液离心，过滤，所得发酵上清液即为代谢产物。
优选地，步骤A中，所述活化的方法为：挑取表皮葡萄球菌的单菌落到TSB培养基中，在37℃下培养24h。
优选地，步骤B中，所述发酵液以3000-5000rpm离心25-30min；过滤采用的是20-25μm的滤膜。
优选地，所述过滤后还包括采用截留分子量小于等于10KDa的滤膜进行超滤获得分子量小于等于10KDa的上清组分的步骤。
优选地，所述超滤采用的是截留分子量小于等于5KDa的滤膜进行超滤获得分子量小于等于5KDa的上清组分的步骤。
第三方面，本发明提供了一种根据前述方法制备的表皮葡萄球菌代谢产物。
第四方面，本发明提供了一种表皮葡萄球菌代谢产物在制备抑制金黄色葡萄球菌的产品和/或制备改善敏感肌肤的产品中的应用。
优选地，所述产品包括化妆品、药品。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明提供一株表皮葡萄球菌菌株，该菌株的代谢产物能够抑制金黄色葡萄球菌的增殖代谢，并能够稳定传代；
(2)本发明菌株的代谢产物尤其是其中的分子量小于等于5kDa组分可以抑制金黄色葡萄球菌同时促进其他葡萄球菌的增殖，从而改变皮肤微生态的菌群平衡；
(3)本发明菌株的代谢产物尤其是其中的分子量小于等于5kDa组分可以有效改善部分敏感性皮肤；
(4)本发明提供了一种获取菌株功效成分的工艺，该工艺可以实现功效成分的生产、分离获取。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为实施例1中筛选分离的单菌落平板结果，筛选平板主要分为两种类型，图1a为有浑浊圈的单菌落和无浑浊圈的单菌落比例接近，图1b为无浑浊圈的单菌落比例比较高(注：表皮葡萄球菌的单菌落有浑浊圈)；
图2为实施例1中不同浓度SLS组和各上清组处理的NHEK-HaCat细胞形态图片，图2a为SLS添加浓度为0的空白对照组，图2b为SLS添加浓度为40ppm组；图2c为SLS添加浓度为80ppm组；图2d为SLS添加浓度为120ppm组；图2e为添加10％的S.e-09上清组；图2f为添加10％的S.e-11上清组；图2g为添加10％的S.e-27上清组；
图3为实施例1中各表皮葡萄球菌发酵上清对金黄色葡萄球菌的抑制情况；
图4为实施例1中添加S.e-09、S.e-11、S.e-27上清的细胞存活率结果；
图5为实施例2中S.e-11的生长曲线；
图6为实施例2中实验前后受试者的正面和侧面Visia对比结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1菌株获取方法
步骤一：样品的获取
选取敏感性皮肤的受试人员，受试人员用清水清洗取样部位(脸颊)，用拭子在敏感皮肤受试者的脸颊部位反复擦拭，获取微生物样本，将拭子放入保护液，封闭，编号、放入-80℃冰箱，备用。共获取11份样品。
步骤二：葡萄球菌的筛选分离
将获取的样品(拭子和保护液)放入盛放5mL TSB培养基的试管中，37℃、摇床200rpm、活化4h，进行梯度稀释，选择稀释梯度为10^4、10^5、10^6的稀释液于葡萄球菌的选择培养基(TSB培养基)上涂布，37℃静置培养24h。选择平板上单菌落数大于15、小于150的平板(如图1a和图1b所示)，将平板置于冰箱4℃保藏24h。
在平板上选取黑色无浑浊带菌落，根据菌落大小进行分类，并分别选取目标菌落；每个平板选出3个单菌落。将选取的单菌落均分为2，取其中一半进行革兰氏阳性菌染色，选取镜检为球菌的菌落，共选出28个单菌落，依次编号为S.e-01、S.e-02……S.e-28。挑取选出的28个单菌落的另一半到盛放TSB培养基的试管中，37℃、摇床转速220rpm、培养24h；镜检(球菌、无杂菌)，在TSB培养基上划平板。37℃、24h培养，平板长好后，备用。
葡萄球菌的选择培养基为：胰蛋白胨17g/L,大豆木瓜蛋白酶消化蛋白胨3g/L，氯化钠5g/L，磷酸氢二钾2.5g/L，葡萄糖2.5g/L，琼脂15g/L；倒平板时每100mL TSB培养基加入5mL卵黄亚碲酸盐。(注：葡萄球菌可将卵黄亚碲酸盐中的碲离子还原成碲单质，碲单质可使得菌落显黑色)
步骤三：表皮葡萄球菌的鉴定
将步骤二中制作的葡萄球菌平板送至第三方进行16S rRNA序列测定。鉴定出17株表皮葡萄球菌。如下表1所示。
表1
菌种 菌株数
1 表皮葡萄球菌 17株
2 迟缓葡萄球菌 3株
3 松鼠葡萄球菌 2株
4 中间葡萄球菌 1株
5 葡萄球菌.SP 3株
6 微球菌 2株
其中表皮葡萄球菌的16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示(约1500bp)：
GGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAACAGACGAGGAGCTTGCTCCTCTGACGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGATAACCTACCTATAAGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAATATATTGAACCGCATGGTTCAATAGTGAAAGACGGTTTTGCTGTCACTTATAGATGGATCCGCGCCGCATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGGCGAAAGCCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTCTTCGGATCGTAAAACTCTGTTATTAGGAGAAGAACAAATGTGTAAGTAACTATGCACGTCTTGACGGTACCTAATCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGAAAACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGAGATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACGCTGATGTGCGAAAGCGTGGGGATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAAATCTTGACATCCTCTGACCCCTCTAGAGATAGAGTTTTCCCCTTCGGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTAAGCTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAAGTTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGATTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAATACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTCAAGCAAATCCCATAAAGTTGTTCTCAGTTCGGATTGTAGTCTGCAACTCGACTATATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGTAGATCAGCATGCTACGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGCCGGTGGAGTAACCATTTGGAGCTAGCCGTCGAAGGTGGGACAAATGATTGGGGTGAAGTCG
步骤四：筛选代谢产物可抑制金黄色葡萄球菌的表皮葡萄球菌
将获取的17株表皮葡萄球菌先进行活化(挑取单菌落到盛放5mL TSB培养基的试管中，37℃培养24h)，将活化好的菌种液接种到含TSB培养基的三角瓶中进行培养16h；然后将所得发酵液以4000rpm离心20min，取发酵上清液，过22μm膜，按10％的比例添加到TSB培养基中(50mL/150mL TSB培养基的三角瓶，接种量1％，37℃，200rpm，培养24h)，并接种金黄色葡萄球菌1％(由华东师范大学提供)，以空白为对照组(加入了10％TSB培养基，保证各组体积相同)，每2h取样跟踪金黄色葡萄球菌的生长曲线。
微生物的发酵过程分为延滞期、对数生长期、稳定期和衰退期，延滞期和对数生长期之间的拐点为微生物的启动点。在本实验中可以用来判断表皮葡萄球菌发酵上清对金黄色葡萄球菌的抑制能力。发酵上清对金黄色葡萄球菌的抑制时间为该样品组的金黄色葡萄球菌对照组的启动时间减去样品组的启动时间。
依据发酵上清对金黄色葡萄球菌的抑制情况，如图3所示，其中对照组的结果为图3中的CM曲线。将表皮葡萄球菌分为三类，第I类对金黄色葡萄球菌没有抑制能力(图3中的I曲线)；第II类对金黄色葡萄球菌有一定的抑制能力，但抑制时间小于8h(图3中的II曲线)；第III类表皮葡萄球菌对金黄色葡萄球菌的启动有较强的抑制能力，抑制时间大于等于8h(图3中的III曲线)。其中S.e-09、S.e-11和S.e-27属于第III类。
步骤五：生物安全性实验
1)溶血性实验：溶血性葡萄球菌可致多种疾病，需进行菌株的溶血性检验。以金黄色葡萄球菌做为对照，挑取S.e-09、S.e-11和S.e-27菌在血琼脂培养基上进行划线培养，分别在24h进行观察，与金黄色葡萄球菌相比，3株表皮葡萄球菌均没有显著透明圈。
2)菌株代谢产物的细胞毒性实验
实验原理：采用人角质细胞(NHEK)HaCaT细胞系，应用中性红摄取(NRU)细胞毒性试验检测受试物的细胞毒性。体外培养的正常细胞不断的分裂增生，毒性物质不论其作用位点和机制如何，都会干扰细胞的分裂增殖过程，导致细胞生长速率下降和数量减少。培养中的正常细胞受试物暴露后，细胞毒性表现为浓度依赖性的中性红摄取降低，据此可以得出有关细胞完整性受损和生长抑制等作用的信息。
实验方案：本实验以SLS为阳性对照物，按0、20ppm、40ppm、60ppm、80ppm、100ppm、120ppm和140ppm进行梯度添加。其中0#组为空白对照组；96孔板进行实验。S.e-09、S.e-11、S.e-27上清以10％添加量进行实验。每组三个平行。S.e-09、S.e-11、S.e-27按步骤四的发酵方法培养24h，离心取发酵上清进行代谢产物毒性实验。测定细胞存活率、并进行拍照。
细胞存活率％＝OD受试物组/OD对照组×100％
如图4所示，三株菌上清10％添加量时，添加S.e-11上清组的细胞存活率为100％，添加S.e-09上清组的细胞存活率接近100％，说明S.e-09和S.e-11对NHEK-HaCat细胞没有毒性；添加S.e-27上清组的细胞存活率为86.6％，是否有毒性还应对照实验过程中细胞形态。
细胞形态图片如图2所示，结果显示：S.e-09和S.e-11组细胞形态良好(图2e和图2f)，S.e-27组细胞有小比例死亡(图2g)。而且不同添加浓度的SLS组(图2a-图2d)结果显示，当SLS添加量在0-80ppm范围时没有表现出对细胞的毒性，当添加量达到120ppm时细胞大量死亡，表现出了毒性。
实验结论：根据抑菌情况、溶血性和细胞毒性实验的数据，选择菌株S.e-11为后续研究菌株，并将其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61626，保藏日期为2021年4月25日，生物材料名称为Staphylococcus epidermidis JK-MIC-STA-001-04-S5，分类学名称为Staphylococcus epidermidis。
实施例2
1.不同发酵时间的发酵液上清的抑菌作用
将菌株S.e-11按照接种量1％，37℃，TSB培养基，三角瓶装样量50/150mL，摇床转速220rpm进行发酵培养；S.e-11的生长曲线如图5所示。
根据S.e-11的生长曲线选择时间点4h、8h、12h、16h和24h对发酵液取样、离心，取发酵上清按照实施例1的步骤四实验条件进行针对金黄色葡萄球菌的抑菌实验。抑菌实验结果如下表2所示：
表2
取样时间点 上清的抑菌时间
4h 0h
8h 0h
12h 小于2h
16h 8h
24h 8-10h
结果显示，发酵液的上清中有效抑制金黄色葡萄球菌的物质主要产生在发酵过程的稳定期。确定发酵周期为24h，且培养16-24h的代谢产物具有显著的抑菌效果。
2.发酵液上清中不同分子量组分的抑菌作用
为进一步进行人体实验，减少无效成分的影响，需对菌株S.e-11的发酵上清液中有效成分进行分离。使用切向流分离设备，将过22μm膜的发酵上清液先后用10kDa和5kDa膜过滤进行筛分，经过筛分对比，获得大于等于10kDa组分、小于10kDa且大于5kDa组分、小于等于5kDa组分；并进行针对金黄色葡萄球菌的抑菌实验，结果如表3所示，只有小于5kDa部分有效。
表3
Figure BDA0003228726790000071
Figure BDA0003228726790000081
3.功效验证
实验样品：S.e-11菌株经发酵24h，离心取上清，先用22μm纤维素膜进行过滤，再用5kDa膜进行过滤，取小于5kDa的组分为A。并进一步用水将A稀释为10倍，该溶液为B。
受试人员：敏感性肌肤人员7例
实验方案：实验前及实验结束后，每位实验人员用拭子取样、进行葡萄球菌菌落计数；并拍Visa照片进行前后对比。受试人员每天早上和晚上各涂抹样品B于脸颊部，周期为30天。
葡萄球菌计数：选用葡萄球菌选择培养基进行培养计数(用TSB培养基进行对比)。结果如表4所示。
表4
Figure BDA0003228726790000082
结果显示，7个受试者中，有5位受试者面部微生物中的葡萄球菌属各菌种丰度发生了显著的变化；具体为金黄色葡萄球菌数量减少，其他葡萄球菌的总量显著增加。
受试者的Visia前后照片对比结果显示，除3号和6号受试者实验结束后Visia图片差异较小外，其余受试者在涂抹样品B的30天后皮肤敏感问题都有了明显的改善(图6为5号受试者的正面和侧面Visia对比结果)。
由此可见：S.e-11上清对敏感性肌肤脸颊部的金黄色葡萄球菌的丰度和比例有显著影响，有效率为70％。金黄色葡萄球菌显著减少同时其他葡萄球菌总量显著升高的受试者的Visia图片显示，皮肤有显著改善。说明本发明的S.e-11上清可调节葡萄球菌的菌群平衡，从而达到有效改善敏感肤质的功效。
本发明具体应用途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出，以上实施例仅用于说明本发明，而并不用于限制本发明的保护范围。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 上海珈凯生物科技有限公司
<120> 表皮葡萄球菌及其发酵培养和应用
<130> P05211111
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1487
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggctcaggat gaacgctggc ggcgtgccta atacatgcaa gtcgagcgaa cagacgagga 60
gcttgctcct ctgacgttag cggcggacgg gtgagtaaca cgtggataac ctacctataa 120
gactgggata acttcgggaa accggagcta ataccggata atatattgaa ccgcatggtt 180
caatagtgaa agacggtttt gctgtcactt atagatggat ccgcgccgca ttagctagtt 240
ggtaaggtaa cggcttacca aggcaacgat gcgtagccga cctgagaggg tgatcggcca 300
cactggaact gagacacggt ccagactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccgca 360
atgggcgaaa gcctgacgga gcaacgccgc gtgagtgatg aaggtcttcg gatcgtaaaa 420
ctctgttatt aggagaagaa caaatgtgta agtaactatg cacgtcttga cggtacctaa 480
tcagaaagcc acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt 540
atccggaatt attgggcgta aagcgcgcgt aggcggtttt ttaagtctga tgtgaaagcc 600
cacggctcaa ccgtggaggg tcattggaaa ctggaaaact tgagtgcaga agaggaaagt 660
ggaattccat gtgtagcggt gaaatgcgca gagatatgga ggaacaccag tggcgaaggc 720
gactttctgg tctgtaactg acgctgatgt gcgaaagcgt ggggatcaaa caggattaga 780
taccctggta gtccacgccg taaacgatga gtgctaagtg ttagggggtt tccgcccctt 840
agtgctgcag ctaacgcatt aagcactccg cctggggagt acgaccgcaa ggttgaaact 900
caaaggaatt gacggggacc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg 960
cgaagaacct taccaaatct tgacatcctc tgacccctct agagatagag ttttcccctt 1020
cgggggacag agtgacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg 1080
ttaagtcccg caacgagcgc aacccttaag cttagttgcc atcattaagt tgggcactct 1140
aagttgactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc 1200
ttatgatttg ggctacacac gtgctacaat ggacaataca aagggcagcg aaaccgcgag 1260
gtcaagcaaa tcccataaag ttgttctcag ttcggattgt agtctgcaac tcgactatat 1320
gaagctggaa tcgctagtaa tcgtagatca gcatgctacg gtgaatacgt tcccgggtct 1380
tgtacacacc gcccgtcaca ccacgagagt ttgtaacacc cgaagccggt ggagtaacca 1440
tttggagcta gccgtcgaag gtgggacaaa tgattggggt gaagtcg 1487

Claims (8)

1.一株表皮葡萄球菌，其特征在于，所述表皮葡萄球菌保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO: 61626。
2.根据权利要求1所述的表皮葡萄球菌，其特征在于，所述表皮葡萄球菌菌株的16SrRNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种根据权利要求1所述的表皮葡萄球菌的发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、将表皮葡萄球菌进行活化，然后将活化好的菌种液接种到TSB培养基中进行培养12-24h；
B、将步骤A培养后得到的发酵液离心，过滤，所得发酵上清液即为代谢产物。
4.根据权利要求3所述的表皮葡萄球菌的发酵培养方法，其特征在于，步骤A中，所述活化的方法为：挑取表皮葡萄球菌的单菌落到TSB培养基中，在37℃下培养24h。
5.根据权利要求3所述的表皮葡萄球菌的发酵培养方法，其特征在于，步骤B中，所述发酵液以3000-5000rpm离心25-30min；过滤采用的是20-45μm的滤膜。
6.根据权利要求5所述的表皮葡萄球菌的发酵培养方法，其特征在于，所述过滤后还包括采用截留分子量小于等于10KDa的滤膜进行超滤获得分子量小于等于10KDa的上清组分的步骤。
7.根据权利要求6所述的表皮葡萄球菌的发酵培养方法，其特征在于，所述超滤采用的是截留分子量小于等于5KDa的滤膜进行超滤获得分子量小于等于5KDa的上清组分的步骤。
8.一种根据权利要求1所述的表皮葡萄球菌及其代谢产物在制备抑制金黄色葡萄球菌的产品和/或制备改善敏感肌肤的产品中的应用。
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CN108753646B (zh) * 2018-06-12 2021-10-22 上海交通大学医学院附属仁济医院 一株对革兰阳性耐药菌具有广谱抗菌活性的人葡萄球菌及其筛选方法和应用
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CN111763630A (zh) * 2019-03-27 2020-10-13 深圳微健康基因科技有限公司 表皮葡萄球菌及其用途
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