CN105779365B - 一株景天根际促生铜绿假单胞菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一株景天根际促生铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7，该菌株已于2016年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11969。该菌株具有良好的解磷能力，能够成功定殖于景天科多肉植物的根际土壤，并能显著促进景天科多肉植物插叶的根系和幼苗的生长，提高景天的发芽数和冠幅，提高景天科植物成型率，该菌株具有广阔的应用前景。

Description

一株景天根际促生铜绿假单胞菌及其应用
技术领域
本发明属于植物微生物技术领域，具体涉及一株景天根际促生铜绿假单胞菌及其应用。
背景技术
景天科(Crassulaceae)是双子叶植物纲的一科。该科植物为多年生肉质草本，夏秋季开花，花小而繁茂，表皮有腊质粉，气孔下陷，可减少蒸腾，是典型的旱生植物，无性繁殖力强，采叶即能种植生根。景天科植物植株矮小，由于是肉质，耗水肥很少，因此极易种植观赏。近年来，景天科多肉植物市场需求迅速增长，多肉植物仅用于室内装饰的年市场需求量已超过1亿盆、年产值超过5亿元。
插叶繁殖是目前景天科多肉植物繁育的主要方式，这种繁育方式的繁殖系数大，适用于大量繁殖，但成型较慢。促进插叶早生根、幼苗早成型，缩短插叶繁殖的育苗周期，是景天科多肉植物生产的迫切需求。
植物根际促生细菌可分泌植物促生物质，包括植物激素、维生素、氨基酸和其它活性有机小分子及衍生物等；还可改善植物根际的营养环境，有效控制植物病害等。目前，有关于接种植物根际促生细菌提高嫩枝扦插的成活率和苗木质量的研究报道，鲜见有景天科植物PGPR菌株的筛选及其在景天育苗中应用的研究报道。
发明内容
针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供一株景天根际促生铜绿假单胞菌，该菌株具有显著促进景天科植物插叶的根系和幼苗的生长，提高景天成型率的作用。
具体的，本发明涉及以下技术方案：
本发明的一个目的在于提供一株景天根际促生铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)JWP7，该菌株已于2016年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11969。
所述铜绿假单胞菌菌落特征及菌体形态为：LB培养基上菌落形态菌落形状不规则，菌落较小，表面凸起，较湿润，呈黄色，不透明，镜检菌体为球状，不产芽孢。
所述铜绿假单胞菌菌株生理生化特征为：淀粉水解试验阴性，V-P试验阴性，甘露醇试验阴性，葡萄糖产酸试验阴性，阿拉伯糖试验阴性，乳糖试验阴性，接触酶试验阳性。
所述铜绿假单胞菌具有解磷能力，可有效促进景天科植物生长。
所述铜绿假单胞菌的16SrDNA序列分析：将所测16SrDNA序列与GenBank数据库中的序列比对，结果表明：JWP7与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)处于同一分枝，两者相似度达99.93％。结合菌落、菌体形态特征，生理生化特征和16SrDNA序列分析，将JWP7鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。
本发明的另一目的在于提供上述铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7的培养方法，包括：将菌株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7在LB液体培养基中在37℃，180rpm的条件下培养24h，按1％接种量将种子液接种至LB液体培养基中进行发酵，37℃，180rpm培养2d，制得活化菌液；进一步离心可收集铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)JWP7菌体。
LB液体培养基配为：蛋白胨10g；NaCl 10g；酵母浸膏5g；水1000ml；pH 7.0-7.2。
本发明还提供一种菌剂，其包括上述铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7菌体或铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7的培养物。
此外，本发明还提供上述菌株或菌剂在促进景天科植物生长中的应用。
具体的，所述景天科植物为粉月影景天。
本发明具有如下优点：
本发明的景天根际促生铜绿假单胞菌具有良好的解磷能力，能够成功定殖于景天科多肉植物的根际土壤，并能显著促进景天科植物插叶的根系和幼苗的生长，提高景天的发芽数和冠幅，提高景天科植物成型率。
附图说明
图1为菌株JWP7的菌落形态图(LB固体培养基)；
图2为菌株JWP7的光学显微镜镜检图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1 菌株JWP7的筛选及鉴定
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7的筛选分离过程如下：
(1)于山东省青州市黄楼镇景天科多肉植物生产基地的景天科多肉植物根际采集土样12个，分别称取土样10g，加入90ml无菌水，37℃，180r/min，摇床培养30min,梯度稀释后，分别取0.1ml菌液涂布于LB培养基、高氏一号培养基，培养后得单菌落。
(2)挑取单菌落三区划线来纯化菌种，在有机磷培养基(葡萄糖10.0g；(NH4)2SO40.5g；MgSO4·7H2O 0.3g；MnSO4·4H2O 0.03g；KCl0.3g；FeSO4·7H2O 0.03g；NaCl 0.3gCaCO3 5.0g；卵磷脂0.2g；蒸馏水1000ml；pH7.0-7.5)和无机磷培养基(葡萄糖10.0g；(NH4)2SO4 0.5g；MgSO4·7H2O 0.3g；MnSO4·4H2O 0.03g；KCl0.3g：FeSO4·7H2O 0.03g；NaCl0.3g；Ca3(PO4)2 10.0g；蒸馏水1000ml；pH 7.0-7.5)平板上用牙签点接菌种。28℃培养7d后，选取出现透明圈的菌落，测量菌落的直径d和透明圈直径D，定性判断菌种解磷能力。
(3)将待测菌株接于50ml液体LB培养基，37℃，180r/min，摇床培养1d，取1ml LB菌液接于50ml液体磷培养基，28℃，180r/min摇床培养7d，将发酵液导入50ml离心管，超声波粉碎(破碎时间10s,时间间隙9s，50次循环)。4℃冷冻离心(4000rpm)20min。用钼锑抗比色法测定培养液可溶磷含量，720nm处比色，筛选出解磷能力较强的菌株，然后通过景天盆栽实验，确定一株最适宜景天的根际促生细菌，编号为JWP7。
该菌落特征及菌体形态为：LB培养基上菌落形状不规则，菌落较小，表面凸起，较湿润，呈黄色，不透明，镜检菌体为球状，不产芽孢。
该菌株生理生化特征为：淀粉水解试验阴性，V-P试验阴性，甘露醇试验阴性，葡萄糖产酸试验阴性，阿拉伯糖试验阴性，乳糖试验阴性，接触酶试验阳性。
该菌株产解磷能力测定：将所述铜绿假单胞菌JWP7接种于无机磷培养基平板上。28℃培养3d后，测得菌落直径d为6.5mm，透明圈直径D为17.5mm，D/d为2.69。发酵液有效磷含量为0.936％。
该菌株16SrDNA序列分析：将所测16SrDNA序列与GenBank数据库中的序列比对，结果表明：JWP7与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)处于同一分枝，两者相似度达99.93％。结合菌落、菌体形态特征，生理生化特征和16SrDNA序列分析，将JWP7鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。
菌株JWP7的16S rDNA序列如下：
tcccccttgcggttagactagctacttctggagcaacccactcccatggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgtgacattctgattcacgattactagcgattccgacttcacgcagtcgagttgcagactgcgatccggactacgatcggttttatgggattagctccacctcgcggcttggcaaccctttgtaccgaccattgtagcacgtgtgtagccctggccgtaagggccatgatgacttgacgtcatccccaccttcctccggtttgtcaccggcagtctccttagagtgcccacccgaggtgctggtaactaaggacaagggttgcgctcgttacgggacttaacccaacatctcacgacacgagctgacgacagccatgcagcacctgtgtctgagttcccgaaggcaccaatccatctctggaaagttctcagcatgtcaaggccaggtaaggttcttcgcgttgcttcgaattaaaccacatgctccaccgcttgtgcgggcccccgtcaattcatttgagttttaaccttgcggccgtactccccaggcggtcgacttatcgcgttagctgcgccactaagatctcaaggatcccaacggctagtcgacatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgtttgctccccacgctttcgcacctcagtgtcagtatcagtccaggtggtcgccttcgccactggtgttccttcctatatctacgcatttcaccgctacacaggaaattccaccaccctctaccgtactctagctcagtagttttggatgcagttcccaggttgagcccggggatttcacatccaacttgctgaaccacctacgcgcgctttacgcccagtaattccgattaacgcttgcacccttcgtattaccgcggctgctggcacgaagttagccggtgcttattctgttggtaacgtcaaaacagcaaggtattaacttactgcccttcctcccaacttaaagtgctttacaatccgaagaccttcttcacacacgcggcatggctggatcaggctttcgcccattgtccaatattccccactgctgcctcccgtaggagtctggaccgtgtctcagttccagtgtgactgatcatcctctcagaccagttacggatcgtcgccttggtaggcctttaccccaccaactagctaatccgacctaggctcatctgatagcgtgaggtccgaagatcccccactttctccctcaggacgtatgcggtattagcgcccgtttccggacgttatcccccactaccaggcagattcctaggcattactcacccgtccgccgctgaatccaggagcaagctcccttcatccgctcgactgca
该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，已于2016年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.11969。
实施例2 JWP7促景天生长试验
(1)JWP7菌剂制备
将保存在斜面上的JWP7用三区划线的方法活化在LB(蛋白胨10g；NaCl 10g；酵母浸膏5g；琼脂15-20g；水1000ml；pH 7.0-7.2，分装，121℃灭菌20min)平板上。挑取单菌落至相应的10ml液体培养基中，37℃，180rpm培养24h。按1％接种量将种子液接种至相应的50ml液体培养基中进行发酵，37℃，180rpm培养2d得JWP7菌剂。
(2)以粉月影景天为实验材料，扦插基质为草炭与珍珠岩质量比为3:1，选取大小一致的粉月影景天叶片，且在植株上取下后在通风荫凉出放置10天后，将叶片以45°角度插入穴盘基质中，深度为1cm，每穴盘中扦插叶片50片。将JWP7菌液稀释10倍后分别喷施在穴盘中，每100g基质喷施稀释后的菌液150g，以不接种菌液(浇灌相同量的培养基)作为对照组CK，试验验结果见表1，由表1可以看出，接种JWP7可提高景天的发芽数，处理组景天冠幅较CK组亦有显著提高，表明JWP7可显著促进景天的生长。
表1 JWP7促景天生长试验结果
应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (6)

1.一株景天根际促生铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7，该菌株已于2016年1月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.11969。
2.如权利要求1所述的一株景天根际促生铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7的培养方法，其特征在于，将菌株JWP7在LB液体培养基中在37℃，180rpm的条件下培养24h，按1％接种量将种子液接种至LB液体培养基中进行发酵，37℃，180rpm培养2d，制得活化菌液。
3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述LB液体培养基配方为：蛋白胨10g；NaCl 10g；酵母浸膏5g；水1000ml；pH 7.0-7.2。
4.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，还包括进一步离心收集获得铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7。
5.一种微生物菌剂，其特征在于，包括权利要求1所述铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7或铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)JWP7的培养物。
6.权利要求1所述菌株或权利要求5所述菌剂在促进粉月影景天生长中的应用。
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