CN113462751A - 一种新型探针标记方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新型探针标记方法。本发明提供的新型探针标记方法，是在切口平移法的基础上进行改进，先将BAC克隆的质粒进行DNA酶1消化，使其片段化处理，处理后的质粒用过柱纯化也可以直接进行下一步标记。然后对片段化的质粒进行末端转移酶标记，将dUTP‑荧光素插入到DNA片段的5’端，标记好的探针无需纯化，可以直接配制探针溶液进行杂交。整个流程在一小时内即可完成，并且中间过程损耗量少，探针得率高。试验证明，切口平移法标记探针每2μg的质粒可以得到10‑20人份的探针，而本发明的方法每2μg的质粒可以得到40‑50人份的探针，极大的提高了生产效率。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种新型探针标记方法。
背景技术
目前主要的荧光标记方法依然是切口平移法，随机引物法，聚合酶链式反应法等，每种方法都各有其优缺点，随机引物法产量低，操作复杂；聚合酶链式反应法得率较高，但方法不稳定，批间差比较大；切口平移法发展最早，最为成熟，但标记时间长，得率低。常规的切口平移法标记探针是将DNase I，DNA polymerase I，BAC质粒加入一个体系中进行反应，DNase I首先对质粒产生切口，DNA polymerase I在切口处进行延伸，在延伸的过程中通过错配的方式将dUTP-荧光素插入到新合成的DNA分子中，从而获得标记的探针。但此方法反应时间比较长，2.5h左右，且反应结束后需要酒精沉淀纯化，有时需过夜沉淀，大大限制了探针生产的效率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型探针标记方法，该方法对常规切口平移法进行改进，既缩短了标记时间又提高了标记效率。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种新型探针标记方法，包括如下步骤：
1)用DNA酶I消化BAC克隆质粒，形成大小不一的DNA片段；
2)用TdT末端转移酶对DNA片段进行末端标记；
3)配制探针溶液。
优选的，步骤1)中DNA片段的长度为200-500bp。
优选的，步骤1)用DNA酶I消化BAC克隆质粒的酶切体系如下：BAC克隆2μg，DNase I1μL，10×DNase buffer 2μL，ddH2O补足20μL。进一步优选的，酶切程序为：37℃5-10min，75℃10min。
优选的，步骤2)中先对DNA片段进行纯化再进行末端标记。进一步优选的，采用PCR产物纯化试剂盒对DNA片段进行纯化。
优选的，步骤2)中标记体系如下：DNA片段700ng，Terminal DeoxynucleotidylTransferase 0.5μL，5×Reaction Buffer 2μL，Aminoallyl-dUTP-xx-AF555 0.5μL，ddH2O补足10μL，其中Terminal Deoxynucleotidyl Transferase的浓度为20U/μL。进一步优选的，标记程序如下：37℃25min，70℃5min。
优选的，步骤3)中按照杂交缓冲液：标记溶液：Human Cot-1DNA：1×TE buffer＝7：1：1：1比例配制，获得探针溶液。进一步优选的，所述杂交缓冲液由水和甲酰胺、硫酸葡聚糖、氯化钠、柠檬酸组成，其中，甲酰胺的体积百分含量为30％，硫酸葡聚糖的质量百分含量为28％，氯化钠的终浓度为8.75g/L，柠檬酸的终浓度为4.4g/L。
本发明取得的有益效果：
本发明提供的新型探针标记方法，是在切口平移法的基础上进行改进，先将BAC克隆的质粒进行DNA酶1消化，使其片段化处理，处理后的质粒用过柱纯化也可以直接进行下一步标记。然后对片段化的质粒进行末端转移酶标记，将dUTP-荧光素插入到DNA片段的5’端，标记好的探针无需纯化，可以直接配制探针溶液进行杂交。整个流程在一小时内即可完成，并且中间过程损耗量少，探针得率高。试验证明，切口平移法标记探针每2μg的质粒可以得到10-20人份的探针，而本发明的方法每2μg的质粒可以得到40-50人份的探针，极大的提高了生产效率。
附图说明
图1为切口平移法标记的探针结果；
图2为本发明提供的新型标记方法制备的探针结果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。实施例及试验例中所用的仪器设备如无特别说明，均为市售常规仪器设备；所用试剂材料，如无特别说明，均为市售常规试剂材料；其中，Terminal DeoxynucleotidylTransferase购自碧云天生物，试剂盒包含Reaction buffer(反应缓冲液)、TdT末端转移酶；Recombinant DNase I(RNase-free)购自takara，试剂盒包含10×DNase I buffer(10×DNA酶I缓冲液)、Recombinant DNase I(RNase-free)(重组DNA酶I(无RNA酶))；DNAPolymerase I(E.coli)购自takara，试剂盒包含DNA polymerase I DNA聚合酶I。Aminoallyl-dUTP-xx-AF555(荧光素)和DTT(二硫苏糖醇)市售可得。
取同一批次质粒DNA(以HER2探针BAC克隆CTD-2019C10为例)2μg，分别采用常规切口平移法和本发明提供的新型标记方法标记探针，具体实施如下：
实施例 新型探针标记法
本实施例的新型探针标记方法，包括如下步骤：
1.探针的标记
配制酶切反应体系如下：
配置完毕后，用移液器吹打混匀，离心后，放在PCR仪上反应，程序如下：37℃，10min；75℃，10min；4℃，∞。
配制标记体系，如下：
配置完毕后，用移液器吹打混匀后离心，放在PCR仪上反应，程序如下：37℃，25min；70℃，5min，4℃，∞。
反应完毕后，即得探针溶液。
2.探针的配制
其中，杂交缓冲液由水和甲酰胺、硫酸葡聚糖、氯化钠、柠檬酸组成，其中，甲酰胺的体积百分含量为30％，硫酸葡聚糖的质量百分含量为28％，氯化钠的终浓度为8.75g/L，柠檬酸的终浓度为4.4g/L。
上述试验中，TdT末端转移酶购自翊圣生物，货号：10302ES76，Aminoallyl-dUTP-xx-AF555购自Jena；封闭剂Cot-1DNA购自Invitrogen，货号1996778。
对比例切口平移标记法
本对比例的切口平移标记法，包括如下步骤：
1.探针的标记
配制反应体系如下：
其中10*nick translation Buffer配方为1M Tris-HCl(PH7.8)，500mM MgCl2,0.5mg/mlBSA；DTT购自sigma，DNA polymerase I和Recombinant DNase I购自takara。
配置完毕后，用移液器吹打混匀，离心后，放在PCR仪上反应，程序如下：16℃，2h20min；80℃，10min，4℃，∞。
2.探针的纯化
A)将PCR产物转入到新的1.5ml EP管中，加入等体积的无菌去离子水和0.1倍的3MNaAC(PH＝5.2)后混匀，
B)再加入2.5倍体积的无水乙醇(提前预冷)，混匀；
C)置于-20℃冰箱沉淀过夜或-80℃冰箱沉淀2h；
D)取出离心管，4℃12000rpm离心20min；
E)弃上清，加入700μl 70％乙醇，4℃12000rpm离心10min；
F)重复上述步骤一次；
G)弃上清，4℃12000rpm离心10min；
H)室温放置5～10min，以使乙醇挥发完全；
I)加入10μl 1*TE(pH8.0)溶解沉淀即得探针溶液。
3.探针的配制：
试验例 探针检测
1.样本收集及玻片制备：
1)样本于常温下在10％中性福尔马林缓冲液中固定6～48小时，为了达到最佳的和均匀的固定与石蜡包埋效果，样本大小不宜超过0.5cm3。
2)标准操作和石蜡包埋，使用高质量的石蜡。渗透和包埋应在低于65℃下进行。
3)切成3μm厚度的切片。
2.玻片预处理程序：
1)56-65℃左右烤片三小时以上(过夜)。
2)提前预热胃蛋白酶处理液，使其温度达到37℃保温备用。
3)二甲苯中室温放置切片10分钟，重复该步骤两次。
4)无水乙醇中室温放置切片5分钟，重复该步骤一次。
5)依次85％、70％乙醇中室温处理切片3分钟。
6)去离子水洗2分钟，重复3次。
7)用微波炉将适量的预处理缓冲液煮沸后，然后使其处于保温状态，放入切片修复20分钟，或是在高压锅内加入适量的预处理缓冲液，高压修复5分钟。
8)取出玻片，用去离子水洗涤三次。将切片直接放入蛋白酶消化液中，消化15±10分钟。
注：根据不同的组织(细胞)类型及切片厚度，消化时间有所不同，一般来讲，建议预实验找到样本的最佳消化时间。
9)去离子水清洗2分钟，三次。
10)脱水：70％，85％，100％乙醇溶液中依次处理各2分钟，晾干。
3.FISH操作步骤
警告和预防:荧光基团遇强光会产生光漂白现象。将含有荧光基团的试剂与玻片避光有助于减少此效应。所有需避光的步骤均在暗处进行。FISH实验操作过程中请注意防护，试剂勿与皮肤直接接触。
a)标本变性与杂交
1)将配制好的探针的杂交液从冰箱取出，瞬时离心，用移液器取10μl至各个样本。滴加至目标区域；
2)样本盖上盖玻片，避免气泡；封片胶封片；
3)将玻片放入杂交仪，80℃(±2℃)变性6分钟，40℃过夜杂交(建议使用82℃变性6分钟，40℃杂交过夜)。
注意：杂交期间片子不能干！
b)杂交后的处理
1)提前30分钟将洗涤液I水浴加热到73±1℃，小心除去封片胶；
2)将切片置于洗涤液II溶液中，放置5-10分钟，除去盖玻片；
3)将切片置于洗涤液I洗液(水浴加热到73±1℃)中，上下提拉切片1-3s，放置分钟；
4)室温条件下，将切片置于洗涤液II洗液中，上下提拉1-3s，处理切片2分钟；
5)在70％、85％的乙醇溶液中依次放置2分钟。
6)避光晾干样本。
注：考普林缸中每次最好同时放置4张切片，当最后一张玻片放入考普林缸时开始计时。
c)观察
1)滴加10μl DAPI复染液到切片组织上，盖上盖玻片，避免气泡，暗处-20℃处理15分钟。
2)于荧光显微镜下观察计数。
3)长期保存应放于-20℃。
4.结果分析
1)探针产量对比
2μg质粒用对比例1的切口平移法共获得探针100μl，即10人份探针；而用本专利提供新型标记方法(参见实施例)共获得探针476μl，约为47人份探针。
2)标记时间对比
对比例的切口平移法标记共计需要工作时间4h左右(不计过夜时间)；而本发明实施例的新型标记方法共计工作时长1h左右。
3)标记结果对比
图1-2为切口平移法和新型标记法对比，图1为对比例切口平移法标记探针，图2为本发明实施例提供的新型标记方法制备的探针。
4)标记效率分析
切口平移法标记的1人份探针包含200ng质粒DNA，而本发明提供的新型标记方法标记的1人份探针包含42ng质粒DNA，从结果看出两者信号亮度相当，可得知两个探针中荧光素的总量相当，而后者质粒总量较少，由此可知，本发明的新型探针标记法的荧光素插入率要显著高于切口平移法，即是说，本发明方法标记探针效率要远远高于传统的切口平移法。
Claims (9)
1.一种新型探针标记方法，包括如下步骤：
1)用DNA酶I消化BAC克隆质粒，形成DNA片段；
2)用TdT末端转移酶对DNA片段进行末端标记；
3)配制探针溶液。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤1)中DNA片段的长度为200-500bp。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤1)中用DNA酶I消化BAC克隆质粒的酶切体系如下：BAC克隆2μg，DNase I 1μL，10×DNase buffer 2μL，ddH2O补足20μL。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，酶切程序为：37℃5-10min，75℃10min。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤2)中先对DNA片段进行纯化再进行末端标记。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤2)中标记体系如下：DNA片段700ng，Terminal Deoxynucleotidyl Transferase 0.5μL，5×Reaction Buffer 2μL，Aminoallyl-dUTP-xx-AF555 0.5μL，ddH2O补足10μL，其中Terminal DeoxynucleotidylTransferase的浓度为20U/μL。
7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，标记程序如下：37℃25min，70℃5min。
8.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述步骤3)中按照杂交缓冲液：标记溶液：Human Cot-1 DNA：1×TE buffer＝7：1：1：1比例配制，获得探针溶液。
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述杂交缓冲液由水和甲酰胺、硫酸葡聚糖、氯化钠、柠檬酸组成，其中，甲酰胺的体积百分含量为30％，硫酸葡聚糖的质量百分含量为28％，氯化钠的终浓度为8.75g/L，柠檬酸的终浓度为4.4g/L。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114231595A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-03-25 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种用于标记高灵敏度寡拷贝基因荧光探针的试剂盒和方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0122614A2 (en) * | 1983-04-13 | 1984-10-24 | Enzo Biochem, Inc. | Kit for terminally chemically labeling DNA |
| CN102399772A (zh) * | 2010-09-15 | 2012-04-04 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 乳腺癌分子标志物相关探针的制备方法及其应用 |
| CN102925553A (zh) * | 2012-09-07 | 2013-02-13 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 一种子宫颈癌荧光原位杂交检测试剂盒及其制备方法 |
| CN107868814A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-04-03 | 威海威仕泰医疗科技有限公司 | 一种用于检测HER2基因的Dig标记探针的制备方法 |
| CN109055505A (zh) * | 2018-09-07 | 2018-12-21 | 广东菲鹏生物有限公司 | 用于测定末端转移酶活性的方法及试剂盒 |
| CN111471678A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-07-31 | 河南赛诺特生物技术有限公司 | 一种人8号染色体着丝粒探针及其制备方法、试剂盒 |
-
2021
- 2021-07-15 CN CN202110801565.XA patent/CN113462751A/zh not_active Withdrawn
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0122614A2 (en) * | 1983-04-13 | 1984-10-24 | Enzo Biochem, Inc. | Kit for terminally chemically labeling DNA |
| CN102399772A (zh) * | 2010-09-15 | 2012-04-04 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 乳腺癌分子标志物相关探针的制备方法及其应用 |
| CN102925553A (zh) * | 2012-09-07 | 2013-02-13 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 一种子宫颈癌荧光原位杂交检测试剂盒及其制备方法 |
| CN107868814A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-04-03 | 威海威仕泰医疗科技有限公司 | 一种用于检测HER2基因的Dig标记探针的制备方法 |
| CN109055505A (zh) * | 2018-09-07 | 2018-12-21 | 广东菲鹏生物有限公司 | 用于测定末端转移酶活性的方法及试剂盒 |
| CN111471678A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-07-31 | 河南赛诺特生物技术有限公司 | 一种人8号染色体着丝粒探针及其制备方法、试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 北京天恩泽: "90605TdT法标记试剂盒使用手册V1.0", pages 3 - 5, Retrieved from the Internet <URL:https://www.sogou.com/link?url=hedJjaC291PpP0LsqQrO3pbLvcm2-Pkfv5Y8Tdn6ht0ejT1EQ3JIm-JnPgbwyq-ymkkUH5yTzDg> * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114231595A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-03-25 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种用于标记高灵敏度寡拷贝基因荧光探针的试剂盒和方法 |
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