CN113391005A - 地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法及其鉴别方法 - Google Patents
地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法及其鉴别方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测法及其鉴别方法，包括以下步骤：取地榆饮片0.5g或地榆对照提取物0.1g或地榆配方颗粒0.1g或地榆炭饮片0.5g或地榆炭对照提取物0.1g或地榆炭配方颗粒0.1g，加入供试品提取溶剂，提取，冷却，过滤，取续滤液；取鞣花酸、没食子酸和5‑羟甲基糠醛对照品适量，加参照物提取溶剂制成对照品参照物溶液；十八烷基硅烷键合硅胶为填料，二极管阵列检测器，柱温：25°；流速：1mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1%磷酸/水混合液，梯度脱洗；分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪。
Description
技术领域
本发明属于中药检测技术领域，具体涉及地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法及其鉴别方法。
背景技术
地榆，为蔷薇科植物地榆或长叶地榆的干燥根。后者习称“绵地榆”。春季将发芽时或秋季植株枯萎后采挖，除去须根，洗净，干燥，或趁鲜切片，干燥。地榆炭：取净地榆片置锅内，用武火加热，炒至表面焦黑色、内部棕褐色，喷淋清水少许，灭尽火星，取出凉透。目前关于地榆炭药材指纹图谱的研究几乎没有，而对地榆炭配方颗粒的研究文献也只有薄层色谱鉴别及HPLC含量测定等，缺少地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法及其鉴别方法。
发明内容
为解决前述问题，本发明提供了地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法及其鉴别方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、供试品溶液的制备：取地榆饮片0.5g或地榆对照提取物0.1g或地榆配方颗粒0.1g或地榆炭饮片0.5g或地榆炭对照提取物0.1g或地榆炭配方颗粒0.1g，加入供试品提取溶剂，称定重量，提取，冷却，再称定重量，用供试品提取溶剂补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液；
(2)、参照物溶液的制备：取鞣花酸、没食子酸和5-羟甲基糠醛对照品适量，加参照物提取溶剂制成对照品参照物溶液；
(3)、色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为220-360nm；柱温：20—30°；流速：0.8—1.2mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸/水混合液，梯度脱洗；
(4)、测试：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到地榆饮片或地榆对照提取物或地榆配方颗粒或地榆炭饮片或地榆炭对照提取物或地榆炭配方颗粒的高效液相色特征图谱。
优选的，步骤(1)中，所述供试品提取溶剂为甲醇或50％甲醇或70％甲醇或水或2％盐酸。
优选的，步骤(1)中，所述供试品提取溶剂加入量为25mL或50mL或100mL。
优选的，步骤(1)中，所述提取方式为回流提取或超声提取。
优选的，步骤(1)中，所述提取时间为10min或20min或30min。
优选的，步骤(2)中，步骤(2)中，取鞣花酸对照品适量，加60％甲醇分别制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液。
优选的，步骤(3)中，所述色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
地榆和地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取取地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒粉末制备供试品溶液；
(2)按权利要求7项所述的高效液相色谱法检测；
(3)分析检测结果。
优选的，所述的高效液相色谱法检测的地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的图谱呈现9个特征峰。
优选的，所述的高效液相色谱法检测的地榆饮片、对照提取物、配方颗粒的图谱呈现7个特征峰。
本技术方案的有益效果如下：
(1)本发明的HPLC特征图谱检测方法，可以比较全面地反映地榆饮片、地榆对照提取物、地榆配方颗粒、地榆炭饮片、地榆炭对照提取物、地榆炭配方颗粒所含化学成分的种类和数量，确保地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒整体质量的稳定，且方法操作简单，精密度高，稳定性好，重复性好，准确度高。
(2)本发明可以有效对比和分析地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒特征图谱的差异与变化，可以深入认识地榆炭药效物质基础在从原料到配方颗粒成品的工艺过程的传递情况，从而整体评价和控制从地榆药材到配方颗粒成品的工艺过程。因此，建立统一的地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒特征图谱测定方法，有利于整体评价地榆与地榆炭相关工艺过程的科学性、合理性，更能整体控制地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的内在质量，确保地榆炭的临床疗效。
(3)地榆和地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的鉴别方法，可以对地榆与地榆炭炒炭前后进行质量控制，还能有效辨识炒炭前后饮片差异、对照提取物的差异、配方颗粒的差异。可为地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒及相关制剂的质量控制提供参考，避免在临床应用的上的混淆。
附图说明
图1为没食子酸紫外吸收光谱图；
图2为鞣花酸紫外吸收光谱图；
图3为5-羟甲基糠醛紫外吸收光谱图；
图4为地榆炭对照提取物不同波长的色谱图；
图5为地榆炭对照提取物不同柱温时的色谱图；
图6为地榆炭对照提取物不同流速时的色谱图；
图7为地榆炭对照提取物采用不同提取溶剂时的色谱图；
图8为地榆炭对照提取物采用不同提取方式时的色谱图；
图9为地榆炭对照提取物采用不同提取时间时的色谱图；
图10为地榆炭对照提取物采用不同提取溶剂量时的色谱图；
图11为地榆炭对照提取物特征图谱色谱峰指认；
图12为地榆炭对照提取物采用不同仪器时的色谱图；
图13为地榆炭对照提取物采用不同色谱柱时的色谱图；
图14为15批地榆炭对照提取物特征图谱验证图；
图15为地榆炭对照提取物对照特征图谱；
图16为3批地榆炭配方颗粒特征图谱验证图；
图17为地榆炭配方颗粒对照特征图谱；
图18为15批地榆饮片特征图谱；
图19为地榆饮片对照特征图谱；
图20为15批地榆炭饮片特征图谱；
图21为地榆炭饮片对照图谱；
图22为15批地榆对照提取物特征图谱验证图；
图23为地榆对照提取物对照特征图谱；
图24为3批地榆配方颗粒特征图谱验证图；
图25为地榆配方颗粒对照特征图谱；
图26为地榆饮片、地榆炭饮片对照图谱叠加图；
图27为地榆对照提取物、地榆炭对照提取物对照图谱叠加图；
图28为地榆配方颗粒、地榆炭配方颗粒对照图谱叠加图；
图29为地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒对照特征图谱叠加图。
具体实施方式
1、实验仪器及材料
高效液相色谱仪：岛津LC20-AD型高效液相色谱仪、安捷伦1260型高效液相色谱仪、Waters2695-e2998型高效液相色谱仪；
电子天平：ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒-托利多仪器有限公司)；
超纯水机：细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司)；
超声波清洗器：KQ600-DB型(600W，40KHz；昆山市超声仪器有限公司)；
色谱柱：Waters XBridge C18 5μm 4.6×250mm
甲醇、盐酸为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
没食子酸(中国食品药品检定研究员，批号：110831-201605，含量以90.8％计)；
鞣花酸(中国食品药品检定研究员，批号：111959-201602，含量以89.3％计)；
5-羟甲基糠醛(成都普菲生物技术有限公司，批号：17011104)；
地榆(地榆)对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：121286-201703)；
地榆饮片(批号：DY180801、DY180802、DY180803、DY180804、DY180805、DY180806、DY180807、DY180808、DY180809、DY180810、DY180811、DY180812、DY180821、DY180822、DY180824)；
地榆炭饮片(批号：DYT180801、DYT180802、DYT180803、DYT180804、DYT180805、DYT180806、DYT180807、DYT180808、DYT180809、DYT180810、DYT180811、DYT180812、DYT180821、DYT180822、DYT180824)。
地榆对照提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备，批号：DYBT180801、DYBT180802、DYBT180803、DYBT180804、DYBT180805、DYBT180806、DYBT180807、DYBT180808、DYBT180809、DYBT180810、DYBT180811、DYBT180812、DYBT180821、DYBT180822、DYBT180824)；
地榆炭对照提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备，批号：DYTBT180801、DYTBT180802、DYTBT180803、DYTBT180804、DYTBT180805、DYTBT180806、DYTBT180807、DYTBT180808、DYTBT180809、DYTBT180810、DYTBT180811、DYTBT180812、DYTBT180821、DYTBT180822、DYTBT180824)；
地榆配方颗粒(四川新绿色药业科技发展有限公司制备，批号：SY1808004、SY1808005、SY1808006)；
地榆炭配方颗粒(四川新绿色药业科技发展有限公司制备，批号：SY1808001、SY1808002、SY1808003)。
2、拟定高效液效检测方法
2.1、供试品溶液的制备
取地榆炭对照提取物0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。
2.2、参照物溶液的制备
取鞣花酸对照品适量，加60％甲醇分别制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液。
2.3、色谱条件如下
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
2.4测试：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到地榆炭对照提取物的高效液相色特征图谱。
3、色谱条件考察
3.1、波长考察
在以上拟定的实验条件基础上，利用二极管阵列检测器分别对没食子酸、鞣花酸、5-羟甲基糠醛、供试品溶液进行全波段扫描，并分别提取供试品溶液在220nm、250nm、272nm、300nm、320nm、360nm波长下的色谱图。
如图1—图4所示，结果表明，在检测波长为272nm时色谱峰信息量较大，色谱图基线更平稳，故检测波长确定为272nm。
3.2、柱温考察
在以上拟定的实验条件基础上，分别对柱温为25℃、30℃、35℃时进行考察。表1为：柱温考察—特征峰相对保留时间比值；表15为：柱温考察—特征峰相对峰面积比值。
表1柱温考察—特征峰相对保留时间比值
表2柱温考察—特征峰相对峰面积比值
如图5所示，结果表明，各特征峰相对保留时间RSD值为0.22％-4.52％，柱温对色谱峰的相对保留时间影响不大，柱温在25℃时，色谱图峰形均较为对称，分离度均好，故最终选择25℃作为地榆炭对照提取物特征图谱方法学的后续考察柱温。
3.3、流速考察
在以上拟定的实验条件基础上，分别对流速为0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min时进行了考察。表3为：流速考察—特征峰相对保留时间比值；表4为：流速考察—特征峰相对峰面积。
表2流速考察—特征峰相对保留时间比值
表4流速考察—特征峰相对峰面积
如图6所示，结果表明，流速分别为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min时，各特征峰的相对保留时间RSD为0.99％～12.96％，在流速为1.0ml/min时，色谱图峰形较好，分离度适中。故流速确定为1.0ml/min。
综上所述，地榆炭对照提取物特征图谱色谱条件与系统适应性试验确定为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
4、供试品溶液的制备考察
4.1、提取溶剂考察
取本品(批号DYTBT180801)0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别对供试品提取溶剂为甲醇、50％甲醇、70％甲醇、水、2％盐酸50ml时进行考察，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
如图7所示，结果表明，提取溶剂中水作为提取溶剂时色谱峰信息量大，故供试品提取溶剂确定为水。
4.2、提取方式考察
取本品(批号：DYTBT180801)0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，分别对供试品提取方法为回流、超声时进行考察，提取时间20min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
如图8所示，结果表明，对供试品分别进行超声提取与回流提取时效果一致。因超声提取操作更为简便，故供试品提取方法确定为超声提取。
4.3、提取时间考察
取本品(批号DYTBT180801)0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)，分别对供试品提取时间为10min、20min、30min时进行考察，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
如图9所示，结果表明，在提取时间为30min时，即可充分提取。故供试品提取时间确定为30min。
4.4、提取溶剂量考察
取本品(批号DYTBT180801)0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml、50ml、100ml ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)，分别对供试品提取时间为30min时进行考察，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
如图10所示，结果表明，提取溶剂为50ml时，即可充分提取，故溶剂量选择50mL。
综上所述，地榆炭对照提取物特征图谱供试品溶液的制备方法确定为：取本品0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5、方法学考察
5.1、色谱峰指认
供试品溶液的制备：按以上拟定的实验条件，制备地榆炭对照提取物供试品溶液。
参照物溶液的制备：地榆(地榆)对照药材0.5g，置具塞锥形瓶中，加入水50ml，超声处理20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。取鞣花酸对照品适量，加60％甲醇分别制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液。
阴性对照溶液的制备：按以上拟定的实验条件，制备缺地榆炭对照提取物阴性对照溶液。
如图11所示，对地榆炭对照提取物特征图谱峰进行定位。
5.2、精密度试验
取地榆炭对照提取物(批号：DYTBT180801)供试品溶液，按拟定实验方法连续进样6次，每次10μl，计算各特征峰的相对保留时间及相对峰面积。表5为：精密度考察-保留时间。表6为：精密度考察-峰面积。
表5精密度考察-保留时间
表6精密度考察-峰面积
结果表明，各特征峰保留时间和峰面积的RSD值符合要求，该仪器精密度良好。
5.3、重复性考察
精密称取地榆炭对照提取物(批号：DYTBT180801)6份，按拟定实验方法进行制备及测定。表7为：重复性考察-相对保留时间。表8为：重复性考察-相对峰面积。
表7重复性考察-相对保留时间
表8重复性考察-相对峰面积
结果表明，各特征峰相对保留时间和相对峰面积的RSD值符合要求，表明该方法重复性良好。
5.4、中间精密度考察
5.41、不同仪器考察
在以上拟定的实验条件基础上，分别精密称取地榆炭对照提取物(批号：DYTBT180801)两份，制备供试品溶液，分别在岛津LC20-AD、Waters2695-e2998、安捷伦1260型高效液相色谱仪上进行测定。表9为：仪器耐用性考察-相对保留时间。表10为：仪器耐用性考察-相对峰面积。
表9仪器耐用性考察-相对保留时间
表10仪器耐用性考察-相对峰面积
如图12所示，结果表明，用上述3种仪器对供试品进行检测时，各特征峰相对保留时间的RSD在0.15％～2.63％之间，故3个品牌仪器耐用性良好。
5.42、不同人员和时间考察
在以上拟定的实验条件基础上，由不同人员(A、B)在不同时间(T1、T2)分别精密称取地榆炭对照提取物(批号：DYTBT180801)各两份，制备供试品，进行测定。表11为：人员和时间考察-相对保留时间。表12为：人员和时间考察-相对峰面积。
表11人员和时间考察-相对保留时间
表12人员和时间考察-相对峰面积
结果表明，由不同的人员在不同的时间对同一个样品进行测定，方法稳定性较好。
5.5、耐用性考察
5.51、色谱柱耐用性考察
在以上拟定的实验条件基础上，分别对色谱柱批号为0180362731(色谱柱1)、0174353301(色谱柱2)、0180362642(色谱柱3)的Waters XBridge C18 5μm 4.6×250mm色谱柱进行考察。表13为：色谱柱耐用性考察-相对保留时间。表14为：色谱柱耐用性考察-相对峰面积。
表13色谱柱耐用性考察-相对保留时间
表14色谱柱耐用性考察-相对峰面积
如图13所示，用上述3种色谱柱对样品进行检测，特征峰相对保留时间的RSD在0.11％～0.94％，特征峰相对峰面积的RSD在0.68％～15.53％。不同批次的Waters品牌色谱柱耐用性较好。
5.52、稳定性考察
在以上拟定的实验条件基础上，取同一供试品溶液，分别于0h，3h，6h，9h，12h，24h时测定。表15为：稳定性考察-保留时间。表16为：稳定性考察-峰面积。
表15稳定性考察-保留时间
表16稳定性考察-峰面积
结果表明，其相对应的特征峰保留时间的RSD在0.14％～1.52％，样品溶液在24小时内较稳定。
综上所述，各特征峰相对保留时间的RSD在以上各项考察中均符合要求，该方法良好。将上述9个特征峰纳入后续考察。
下面通过几个具体的实施例来进一步说明实现本发明目的技术方案，需要说明的是，本发明要求保护的技术方案包括但不限于以下实施例。
实施例1
地榆炭对照提取物特征图谱的建立
供试品溶液的制备：取地榆炭对照提取物0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液
参照物溶液的制备：取鞣花酸对照品适量，加60％甲醇分别制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液；
色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
测试：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到地榆炭对照提取物的高效液相色特征图谱。
如图14所示，采用上述方法对本品15批样品进行特征图谱的测定，计算相对保留时间、相对峰面积。表17为：15批地榆炭对照提取物相对保留时间。表18为：15批地榆炭对照提取物相对峰面积。
表17 15批地榆炭对照提取物相对保留时间
表18 15批地榆炭对照提取物相对峰面积
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了9个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，15批次地榆炭对照提取物特征峰相对峰面积RSD在20.79％～84.09％，15批次地榆炭对照提取物9个特征峰相对保留时间RSD均小于1.0％。表19为：方法学各项目结果RSD(％)汇总标准—相对保留时间。表20为：方法学各项目结果RSD(％)汇总标准—相对峰面积。
表19方法学各项目结果RSD(％)汇总标准—相对保留时间
表20方法学各项目结果RSD(％)汇总标准—相对峰面积
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，由上表可知流速对相对保留时间的影响较大，故流速定为1ml/min，为了增加方法的重现性和适用性，规定值范围定为±10％。
最终规定：供试品色谱中应呈现9个特征峰，其中峰1、峰3～峰9应与对照药材参照物色谱中的8个特征峰相对应，与鞣花酸参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内。规定值为：0.198(峰1)、0.265(峰2)、0.404(峰3)、0.686(峰4)、0.719(峰5)、0.826(峰6)、1.105(峰8)、1.241(峰9)。
如图15所示，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对15批地榆炭对照提取物特征图谱进行合成，建立了地榆炭对照提取物特征图谱的对照图谱。
实施例2
地榆炭配方颗粒特征图谱的建立
供试品溶液的制备：取地榆炭配方颗粒0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液
参照物溶液的制备：取鞣花酸对照品适量，加60％甲醇分别制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液；
色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
测试：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到地榆炭配方颗粒的高效液相色特征图谱。
如图16所示，采用拟定的方法对本品3批样品进行特征图谱的测定，计算相对保留时间、相对峰面积。表21为：3批地榆炭配方颗粒相对保留时间。表22为：3批地榆炭配方颗粒相对峰面积。
表21 3批地榆炭配方颗粒相对保留时间
表22 3批地榆炭配方颗粒相对峰面积
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了9个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，当峰7作为S峰时，3批次地榆炭配方颗粒特征峰相对保留时间RSD均小于1％，3批次地榆炭配方颗粒9个特征峰相对保留时间RSD均小于3％。表23为：方法学各项目结果RSD(％)汇总标准—相对保留时间。表24为：方法学各项目结果RSD(％)汇总标准—相对峰面积。
表23方法学各项目结果RSD(％)汇总标准—相对保留时间
表24方法学各项目结果RSD(％)汇总标准—相对峰面积
由上表可知流速对特征峰的相对保留时间影响最大，故将流速定为1ml/min，为了增加方法的重现性和适用性，故将各峰的相对保留时间规定值暂定为10％。
最终规定：供试品特征图谱中应呈现9个特征峰，其中峰1、峰3～峰9应与对照药材参照物色谱中的8个特征峰相对应，与鞣花酸参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内。规定值为：0.199(峰1)、0.265(峰2)、0.405(峰3)、0.686(峰4)、0.720(峰5)、0.826(峰6)、1.000(峰7(S))、1.104(峰8)、1.241(峰9)。
如图17所示，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对15批地榆炭配方颗粒特征图谱进行合成，建立了地榆炭配方颗粒的对照特征图谱。
实施例3
地榆饮片特征图谱的建立
供试品溶液的制备：取地榆饮片粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
参照物溶液的制备：取鞣花酸对照品适量，加60％甲醇分别制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液；
色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
测试：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到地榆饮片的高效液相特征图谱。
如图18所示，采用上述方法对本品15批样品进行特征图谱的测定，计算相对保留时间、相对峰面积。表25为：15批地榆饮片相对保留时间。表26为：15批地榆饮片相对峰面积。
表25 15批地榆饮片相对保留时间
表26 15批地榆饮片相对峰面积
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了7个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，当峰6作为S峰时，15批次地榆饮片特征峰相对峰面积RSD太大，因此不列入质量标准正文，特征峰相对保留时间RSD均小于2.0％。最终规定：供试品色谱中应呈现7个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的7个特征峰保留时间相对应，与鞣花酸参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内。规定值为：0.194(峰1)、0.397(峰2)、0.661(峰3)、0.683(峰4)、0.710(峰5)、1.102(峰7)。
如图19所示，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对15批地榆饮片特征图谱进行合成，建立了地榆饮片特征图谱的对照图谱。
实施例4
地榆炭饮片特征图谱的建立
供试品溶液的制备：取地榆炭饮片粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
参照物溶液的制备：取鞣花酸对照品适量，加60％甲醇分别制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液；
色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
测试：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到地榆炭对照提取物的高效液相色特征图谱。
如图20所示，采用上述方法对本品15批样品进行特征图谱的测定，计算相对保留时间、相对峰面积。表27为：15批地榆炭饮片相对保留时间。表28为：15批地榆炭饮片相对峰面积。
表27 15批地榆炭饮片相对保留时间
表28 15批地榆炭饮片相对峰面积
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了9个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，15批地榆炭饮片各特征峰相对峰面积RSD太大，因此不列入质量标准正文，15批地榆炭饮片9个特征峰相对保留时间RSD均小于2.0％。最终规定：供试品特征图谱中应呈现9个特征峰，其中与鞣花酸参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％之内。规定值为：0.198(峰1)、0.265(峰2)、0.405(峰3)、0.685(峰4)、0.719(峰5)、0.825(峰6)、1.000(峰7(S))、1.104(峰8)、1.240(峰9)。
如图21所示，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对15批地榆炭饮片特征图谱进行合成，建立了地榆炭饮片特征图谱的对照图谱。
实施例5
地榆对照提取物特征图谱的建立
供试品溶液的制备：取地榆对照提取物约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
参照物溶液的制备：取鞣花酸对照品适量，加60％甲醇分别制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液；
色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
测试：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到地榆炭对照提取物的高效液相色特征图谱。
如图22所示，采用上述方法对本品15批样品进行特征图谱的测定，计算相对保留时间、相对峰面积。表29为：15批地榆对照提取物相对保留时间。表30为：15批地榆对照提取物相对峰面积。
表29 15批地榆对照提取物相对保留时间
表30 15批地榆对照提取物相对峰面积
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了7个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，15批次地榆对照提取物特征峰相对峰面积的RSD差异较大，因此不列入质量标准正文，15批次地榆对照提取物7个特征峰相对保留时间RSD均小于2.0％。最终规定：供试品色谱中应呈现7个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的7个特征峰保留时间相对应，与鞣花酸参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内。规定值为：0.194(峰1)、0.397(峰2)、0.663(峰3)、0.683(峰4)、0.711(峰5)、1.103(峰7)。
如图23所示，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对15批次地榆对照提取物特征图谱进行合成，建立了地榆对照提取物特征图谱的对照特征图谱。
实施例6
地榆配方颗粒特征图谱的建立
供试品溶液的制备：取地榆配方颗粒0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液
参照物溶液的制备：取鞣花酸对照品适量，加60％甲醇分别制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液；
色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250mm，内径为4.6mm，硅胶粒径为5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
测试：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到地榆配方颗粒的高效液相色特征图谱。
如图24所示，采用拟定的方法对本品3批样品进行特征图谱的测定，计算相对保留时间、相对峰面积。表31为：3批地榆配方颗粒相对保留时间。表32为：3批地榆配方颗粒相对峰面积。
表30 3批地榆配方颗粒相对保留时间
表31 3批地榆配方颗粒相对峰面积
根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了7个重复性较好的峰作为特征峰。结果表明，3批次地榆配方颗粒特征峰相对峰保留时间RSD均小于2.0％。最终规定：供试品色谱中应呈现7个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的7个特征峰保留时间相对应，与鞣花酸参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内。规定值为：0.194(峰1)、0.397(峰2)、0.665(峰3)、0.683(峰4)、0.710(峰5)、1.106(峰7)。
如图25所示，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对3批次地榆配方颗粒特征图谱进行合成，建立了地榆配方颗粒特征图谱的对照图谱。
实施例7
地榆饮片与地榆炭饮片鉴别
采用上述地榆炭饮片特征图谱拟定方法分别对地榆饮片、地榆炭饮片样品进行特征图谱测定，记录图谱。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)分别将地榆饮片特征图谱合成一张对照图谱；地榆炭饮片特征图谱合成一张对照图谱。将以上地榆饮片和地榆炭饮片对照图谱进行对比，结果见图26。
结果表明：地榆饮片5-羟甲基糠醛峰不能检出，说明地榆在炒炭过程中化学成分发生了改变。地榆炭饮片与地榆饮片特征图谱有显著差异性，此方法可以作为控制地榆/地榆炭饮片质量标准指标之一。
实施例8
地榆对照提取物与地榆炭对照提取物鉴别
采用上述地榆炭对照提取物特征图谱拟定方法分别对地榆对照提取物、地榆炭对照提取物样品进行特征图谱测定，记录图谱。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)分别将地榆对照提取物特征图谱合成一张对照图谱；地榆炭对照提取物特征图谱合成一张对照图谱。将以上地榆对照提取物和地榆炭对照提取物对照图谱进行对比，结果见图27。
结果表明：地榆对照提取物5-羟甲基糠醛峰不能检出，说明地榆在炒炭过程中化学成分发生了改变，并将其传递至相应的对照提取物。地榆炭对照提取物与地榆对照提取物特征图谱有显著差异性，此方法可以作为控制地榆/地榆炭对照提取物质量标准指标之一。
实施例9
地榆配方颗粒与地榆炭配方颗粒鉴别
采用上述地榆炭配方颗粒特征图谱拟定方法分别对地榆配方颗粒、地榆炭配方颗粒样品进行特征图谱测定，记录图谱。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)分别将地榆配方颗粒特征图谱合成一张对照图谱；地榆炭配方颗粒特征图谱合成一张对照图谱。将以上地榆配方颗粒和地榆炭配方颗粒对照图谱进行对比，结果见图28。
结果表明：地榆配方颗粒5-羟甲基糠醛峰不能检出，说明地榆在炒炭过程中化学成分发生了改变，并将其传递至相应的配方颗粒。地榆炭配方颗粒与地榆配方颗粒特征图谱有显著差异性，此方法可以作为控制地榆/地榆炭配方颗粒质量标准指标之一。
实施例10
地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的鉴别
如图29所示，采用拟定方法分别对15批地榆饮片、15批地榆炭饮片、15批地榆对照提取物、15批地榆炭对照提取物、3批地榆配方颗粒、3批地榆炭配方颗粒样品进行特征图谱测定，记录图谱，并分别用相似度软件合成其对照特征图谱。
结果表明：地榆饮片在经过炒炭炮制成地榆炭饮片后，成分发生变化，至少多出5-羟甲基糠醛峰。同时地榆炭对照提取物、配方颗粒特征图谱中均比地榆对照提取物和地榆配方颗粒多出该特征峰。
进一步研究发现，因地榆中含有多糖及各种氨基酸，在炒炭的过程，会因为受高热发生美拉德反应(Millard Reaction)而产生5-羟甲基糠醛(5-HMP)，故以此为鉴别点，可用于区分地榆与地榆炭饮片、对照提取物以及配方颗粒。
综上所述，该方法能有效的对地榆与地榆炭饮片、对照提取物以及配方颗粒进行鉴别，防止临床上将地榆和地榆炭饮片、配方颗粒混用，保证用药安全。
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、供试品溶液的制备：取地榆饮片0.5g或地榆对照提取物0.1g或地榆配方颗粒0.1g或地榆炭饮片0.5g或地榆炭对照提取物0.1g或地榆炭配方颗粒0.1g，加入供试品提取溶剂，称定重量，提取，冷却，再称定重量，用供试品提取溶剂补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液；
（2）、参照物溶液的制备：取鞣花酸、没食子酸和5-羟甲基糠醛对照品适量，加参照物提取溶剂制成对照品参照物溶液；
（3）、色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250 mm， 内径为4.6mm，硅胶粒径为5 μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为220-360nm；柱温：20—30°；流速：0.8—1.2mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1%磷酸/水混合液，梯度脱洗；
（4）、测试：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到地榆饮片或地榆对照提取物或地榆配方颗粒或地榆炭饮片或地榆炭对照提取物或地榆炭配方颗粒的高效液相色特征图谱。
2.根据权利要求1所述的地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法，其特征在于：步骤（1）中，所述供试品提取溶剂为甲醇或50%甲醇或70%甲醇或水或2%盐酸。
3.根据权利要求1所述的地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法，其特征在于：步骤（1）中，所述供试品提取溶剂加入量为25mL或50mL或100mL。
4.根据权利要求1所述的地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法，其特征在于：步骤（1）中，所述提取方式为回流提取或超声提取。
5.根据权利要求1所述的地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法，其特征在于：步骤（1）中，所述提取时间为10min或20min或30min。
6.根据权利要求1所述的地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法，其特征在于：步骤（2）中，取鞣花酸对照品适量，加60%甲醇制成每1ml含100μg的鞣花酸对照品溶液；取没食子酸对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的没食子酸对照品溶液；取5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含30μg的5-羟甲基糠醛对照品溶液。
7.根据权利要求6所述的地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的高效液相检测方法，其特征在于：步骤（3）中，所述色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料，柱长为250 mm，内径为4.6 mm，硅胶粒径为5 μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为272nm，理论板数按鞣花酸峰计算应不低于5000；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1%磷酸溶液，梯度脱洗；梯度洗脱程序为：
0-15min，流动相A由5％(v/v)升至20％(v/v)；
15-25min，流动相A由20％(v/v)升至30％(v/v)；
25-55min，流动相A由30％(v/v)升至75％(v/v)。
8.地榆和地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取地榆与地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒粉末制备供试品溶液；
(2)按权利要求7项所述的高效液相色谱法检测；
(3)分析检测结果。
9.根据权利要求8所述的地榆和地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的鉴别方法，其特征在于：所述的高效液相色谱法检测的地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的图谱呈现9个特征峰。
10.根据权利要求8所述的地榆和地榆炭饮片、对照提取物、配方颗粒的鉴别方法，其特征在于：所述的高效液相色谱法检测的地榆饮片、对照提取物、配方颗粒的图谱呈现7个特征峰。
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Citations (4)
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| KR20160133873A (ko) * | 2015-05-13 | 2016-11-23 | 한국과학기술연구원 | 고속 액체 크로마토그래피 장치 및 이를 이용한 물질 스크리닝 방법 |
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| 向萍等: "RP-HPLC 法同时测定广枣中5种活性成分含量", 《中药新药与临床药理》 * |
| 李永生等: "高效液相色谱法同时测定地榆炭中8种成分的含量", 《中南药学》 * |
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