CN114129628A - 一种酒炙地榆炮制工艺及其检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种酒炙地榆炮制工艺及检测方法，将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的10％～35％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度80℃～180℃，炮制时间为5分钟～25分钟，放凉，筛去灰屑，即得。结合响应面软件分析所得的模型最优解和实际操作，将酒炙地榆的最佳炮制工艺条件定为炮制时间12min、炮制温度120℃、加酒量17％。本发明采用响应面法对酒地榆的炮制工艺进行了优化，为酒炙地榆的炮制工艺提供了参考，解决了酒制地榆生产过程操作参数不稳定及不规范的问题，也为酒地榆质量的稳定性提供了基础。

Description

一种酒炙地榆炮制工艺及其检测方法
技术领域
本发明属于药材炮制工艺领域，尤其是涉及一种酒炙地榆炮制工艺及其检测方法。
背景技术
作为一味常用中药，地榆在《中国药典》2020版(一部)中规定其来源为蔷薇科植物地榆Sanguisorba officinalis L.或长叶地榆Sanguisorba officinalisL.var.longifolia(Bert.)Yüet Li的干燥根，味苦、酸、涩，微寒；归肝、大肠经。具有凉血止血，解毒敛疮的功效，临床常用于治疗便血，痔血，血痢，崩漏，水火烫伤，痈肿疮毒等。其炮制方法有炒炭、酒洗、醋炙和盐炙，明《万科女氏》中记载地榆酒洗后用于妇科崩漏，在贵州省名中医王聘贤的经验方妇科再造丸中使用酒炙地榆。地榆酒炙后可缓和寒性，用于妇科崩漏、淋漓出血等。
目前已有酒地榆质量标准相关的研究，但生产尚缺乏规范的炮制工艺指导，导致生产过程中仍存在如温度控制等过程操作参数不稳定及不规范，一定程度上制约了其生产及应用，所以本发明为了优选出酒制地榆的最佳炮制时间、炮制温度、加酒量，以没食子酸、鞣质含量为综合评价指标，采用CCD响应面法对地榆酒炙过程的炮制时间、炮制温度、加酒量进行考察。结合响应面软件分析所得的模型最优解和实际操作，将酒炙地榆的最佳炮制工艺条件定为炮制时间12min、炮制温度120℃、加酒量17％。本发明采用响应面法对酒地榆的炮制工艺进行了优化，为酒炙地榆的炮制工艺提供了参考，解决了酒制地榆生产过程操作参数不稳定及不规范的问题，也为酒地榆质量的稳定性提供了基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种酒炙地榆炮制工艺。
本发明另一目的是提供一种酒炙地榆炮制工艺的产品的检测方法。
本发明所述的酒炙地榆炮制工艺包括以下步骤：将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的10％～35％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度80℃～180℃，炮制时间为5分钟～25分钟，放凉，筛去灰屑，即得。
优选的，本发明所述黄酒的用量为地榆饮片重量的15％～30％。
优选的，所述黄酒的用量为地榆饮片重量的15％～25％。
优选的，所述黄酒的用量为地榆饮片重量的17％。
优选的，所述炮制温度100℃～160℃。
优选的，所述炮制温度110℃～140℃。
优选的，所述炮制温度120℃。
优选的，所述炮制时间为10min～20min。
优选的，所述炮制时间为12min。
本发明所述酒炙地榆炮制工艺的产品的质量检测方法包括以下步骤：测定没食子酸的含量，测定鞣质的含量；
(一)测定游离没食子酸的含量方法包括以下步骤：
1)色谱条件
色谱柱为WELCH AQ C18柱，4.6mm×250mm，5μm，柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长272nm，流动相0.05％磷酸水溶液(A)-甲醇(B)，进样量10μL，梯度洗脱程序如下；
梯度洗脱程序
Figure BDA0003342757250000021
2)对照品溶液制备
精密称取没食子酸对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取2.5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得每lmL中含没食子酸0.05mg；
3)供试品溶液的制备
取地榆样品粉末0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加10％盐酸溶液10ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用水适量分数次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
4)标准曲线的绘制
精密量取不同体积的上述没食子酸对照品溶液，按上述色谱条件，进样测定；
(二)鞣质的含量测定方法
1)对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取2.5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得每lmL中含没食子酸0.05mg；
2)供试品溶液的制备
取地榆粉末0.4g，精密称定，置250mL棕色量瓶中，加水150mL，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置，滤过，弃去初滤液50mL，精密量取续滤液20mL，置100mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得；
3)标准曲线的绘制
精密量取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL，分别置25mL棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液lmL，再分别加水11.5mL、11mL、10mL、8mL、7mL，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在760nm的波长处测定吸光度；
4)测定法
总酚精密量取供试品溶液2mL，置25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，加水10mL，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算，即得；
不被吸附的多酚精密量取供试品溶液25mL，加至已盛有干酪素0.6g的100mL具塞锥形瓶中，密塞，置30℃水浴中保温1小时，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2mL，置25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，加水10mL，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算，即得；测定时，同时进行干酪素吸附空白试验，计算扣除空白值。
有益效果：
1、本发明在单因素考察的基础上，通过CCD响应面法研究了地榆酒炙的炮制工艺，模型最优解为炮制时间11.58min、炮制温度117.2℃、加酒量16.95％，根据实际操作将炮制工艺定为炮制时间12min、炮制温度120℃、加酒量17％，解决了酒制地榆生产过程操作参数不稳定及不规范的问题。
2、与传统炮制方法相比，酒炙地榆炮制具有工艺指标量化、操作简便、省时省力、效率高等特点，为酒炙地榆的炮制工艺提供了参考，为酒地榆质量稳定性提供了基础，为中药安全有效提供了保障。
3、本发明按照响应面设计优化后得工艺参数，依法测定没食子酸及鞣质的含量，计算综合评分，结果3次实验综合评分为含量分别为75.32、75.12、75.66，平均值为75.37，与预测值(75.48)接近，说明该工艺可靠。
4、本发明通过星点设计响应面实验设计及结果，综合评分最高达到了81.83。
附图说明
图1没食子酸的标准曲线图
图2鞣质的标准曲线图
图3炮制时间和温度对综合评分影响的效应面图和等高线图
图4炮制时间和加酒量对综合评分影响的效应面图和等高线图
图5炮制温度和加酒量对综合评分影响的效应面图和等高线图
具体实施方式
下面通过以下实施例进一步详述酒炙地榆炮制工艺及检测方法，本案所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1酒炙地榆炮制工艺
将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的17％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度120℃，炮制时间为12min，放凉，筛去灰屑，即得。
实施例2酒炙地榆炮制工艺
将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的10％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度80℃，炮制时间为5min，放凉，筛去灰屑，即得。
实施例3酒炙地榆炮制工艺
将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的35％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度180℃，炮制时间为25min，放凉，筛去灰屑，即得。
实施例4酒炙地榆炮制工艺
将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的15％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度100℃，炮制时间为10min，放凉，筛去灰屑，即得。
实施例5酒炙地榆炮制工艺
将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的30％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度160℃，炮制时间为20min，放凉，筛去灰屑，即得。
实施例6酒炙地榆炮制工艺
将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的25％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度110℃，炮制时间为12min，放凉，筛去灰屑，即得。
实施例7酒炙地榆炮制工艺
将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的25％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度140℃，炮制时间为12min，放凉，筛去灰屑，即得。
按实施例1-7工艺产出的产品按实施例8检测方法检测
实施例8
(一)测定没食子酸的含量方法包括以下步骤：
1)色谱条件
色谱柱为WELCH AQ C18柱，4.6mm×250mm，5μm，柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长272nm，流动相0.05％磷酸水溶液(A)-甲醇(B)，进样量10μL，梯度洗脱程序如下。
梯度洗脱程序
Figure BDA0003342757250000051
2)对照品溶液制备
精密称取没食子酸对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取2.5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得每lmL中含没食子酸0.05mg；
3)供试品溶液的制备
取地榆样品粉末(过四号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加10％盐酸溶液10ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用水适量分数次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；；
4)标准曲线的绘制
精密量取不同体积的上述没食子酸对照品溶液，按上述色谱条件，进样测定。
(二)鞣质的含量测定方法
1)对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取2.5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每lmL中含没食子酸0.05mg)。
2)供试品溶液的制备
取地榆粉末0.4g，精密称定，置250mL棕色量瓶中，加水150mL，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置，滤过，弃去初滤液50mL，精密量取续滤液20mL，置100mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
3)标准曲线的绘制
精密量取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL，分别置25mL棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液lmL，再分别加水11.5mL、11mL、10mL、8mL、7mL，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在760nm的波长处测定吸光度，
4)测定法
总酚精密量取供试品溶液2mL，置25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，加水10mL，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算，即得。
不被吸附的多酚精密量取供试品溶液25mL，加至已盛有干酪素0.6g的100mL具塞锥形瓶中，密塞，置30℃水浴中保温1小时，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2mL，置25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，加水10mL，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算，即得。测定时，同时进行干酪素吸附空白试验，计算扣除空白值。
按下式计算鞣质的含量：鞣质含量＝总酚量-不被吸附的多酚量。
为了进一步验证本发明的可行性，发明人进行了以下研究及验证试验：
1仪器与材料
1.1仪器
本次实验所用重要仪器见表1。
表1所用仪器记录表
Figure BDA0003342757250000061
Figure BDA0003342757250000071
1.2对照品和试剂
本次实验所用对照品及试剂见表2。
表2所用对照品及试剂记录表
Figure BDA0003342757250000072
1.3样品来源
地榆购自贵阳太升药材市场，经本校鉴定室教研室刘晓龙老师鉴定确为蔷薇科草本植物长叶地榆Sanguisorba officinalis L.var.longifolia(Bert.)Yüet Li的干燥根。
2方法与结果
2.1没食子酸的含量测定方法
2.1.1色谱条件
色谱柱为WELCH AQ C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长272nm，流动相0.05％磷酸水溶液(A)-甲醇(B)，进样量10μL，梯度洗脱程序见表3。
表3梯度洗脱程序表
Figure BDA0003342757250000073
Figure BDA0003342757250000081
2.1.2对照品溶液制备
精密称取没食子酸对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取2.5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每lmL中含没食子酸0.05mg)。
2.1.3供试品溶液的制备
取地榆样品粉末(过四号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加10％盐酸溶液10ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用水适量分数次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。。
2.1.4标准曲线的绘制
精密量取不同体积的上述没食子酸对照品溶液，按2.1.1项下色谱条件，进样测定，以对照品的质量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行回归处理，得回归方程为Y＝4014400X+12037(r＝0.9999)，表明没食子酸在0.1656～0.8280μg范围内与峰面积呈良好线性关系，结果见表4及图1。
表4没食子酸标准曲线实验结果(n＝6)
Figure BDA0003342757250000082
2.2鞣质的含量测定方法
2.2.1对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取2.5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每lmL中含没食子酸0.05mg)。
2.2.2供试品溶液的制备
取地榆粉末0.4g，精密称定，置250mL棕色量瓶中，加水150mL，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置，滤过，弃去初滤液50mL，精密量取续滤液20mL，置100mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3标准曲线的绘制
精密量取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL，分别置25mL棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液lmL，再分别加水11.5mL、11mL、10mL、8mL、7mL，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在760nm的波长处测定吸光度，以吸光度Y为纵坐标，浓度X为横坐标，进行回归处理，得回归方程为Y＝0.0953X-0.049(r＝0.9983)，表明没食子酸在1.0100～10.0100μg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系，结果见表5及图2。
表5鞣质标准曲线实验结果(n＝5)
Figure BDA0003342757250000091
2.2.4测定法
(1)总酚精密量取供试品溶液2mL，置25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，加水10mL，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算，即得。
(2)不被吸附的多酚精密量取供试品溶液25mL，加至已盛有干酪素0.6g的100mL具塞锥形瓶中，密塞，置30℃水浴中保温1小时，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2mL，置25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，加水10mL，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算，即得。测定时，同时进行干酪素吸附空白试验，计算扣除空白值。
按下式计算鞣质的含量：鞣质含量＝总酚量-不被吸附的多酚量
2.3地榆酒炙单因素考察
将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，闷润至酒尽药透，置炒制容器内，用文火炒至饮片外表棕褐色时取出。放凉，筛去灰屑。每100kg地榆片，用黄酒10kg。
2.3.1炮制时间的确定
称取地榆饮片10份，每份各100g，分别加入20％的黄酒，闷润60min，100-120℃下每两份药材分别炒制0、5、10、15、20、25min。
2.3.2炮制温度的确定
称取地榆饮片10份，每份各100g，分别加入20％的黄酒，闷润60min，每两份分别在80℃～100℃、100℃～120℃、120℃～140℃、140℃～160℃、160℃～180℃下炒制10min。
2.3.3加酒量的确定
称取地榆饮片10份，每份100g，每两份分别在10％、15％、20％、25％、30％、35％的加酒量下闷润60min，100℃～120℃下炒制10min。
2.3.4单因素考察结果
将炮制后的样品照2.1.4、2.2.3项下分别制备没食子酸和鞣质供试品，进行检测，测定结果及综合评分见表6。
表6没食子酸及鞣质综合评分表
Figure BDA0003342757250000101
从表6结果来看，炮制时间、炮制温度、加酒量的峰值分别在：10min、100-140℃、15％，据此使用星点响应面法设计实验进行炮制工艺优化。
2.4地榆酒炙星点响应面实验
2.4.1实验设计
以测得地榆中所含没食子酸(X1)、鞣质(X2)的含量作为综合评价依据指标，对地榆酒炙过程当中的影响因素炮制时间(A)、炮制温度(B)和加酒量(C)的单因素考察结果同星点响应面法结合以设计实验。因素水平见表7，实验设计及结果见表8。
表7星点设计响应面实验因素水平
Figure BDA0003342757250000111
表8星点设计响应面实验设计及结果
Figure BDA0003342757250000112
2.4.2数据处理
采用Design-Exppert V8.0.6软件对数据进行处理，分别以炮制时间(A)、炮制温度(B)和加酒量(C)为自变量，以鞣质和没食子酸含量综合评分为因变量，通过拟合优度分析优选拟合模型为：
Y＝77.15-1.42A-0.24B-0.51C-1.58A*B+0.22A*C-0.42B*C-3.96A2-1.73B2-1.82C2。
F值为6.88，表明该模型极其显著(P＜0.01)。失拟项P值为0.9908(P>0.05)，表明本模型无失拟因素存在，结果见表9。R-Squared与Adj R-Squared较为接近且趋近于1，分别为0.7359和0.7273，模型可靠。
表9酒地榆炮制工艺回归分析结果
Figure BDA0003342757250000121
根据所确立的多项式模型，绘制因素A、B、C对D影响的效应面图和等高线图，见图3、图4、图5。通过响应面软件分析，模型在最优解为炮制时间11.58min、炮制温度1117.44℃、加酒量16.95％。根据实际操作将炮制工艺定为炮制时间12min、炮制温度120℃、加酒量17％。
2.5验证性实验
按照响应面设计优化后得工艺参数，提取3批地榆对预测的最佳工艺条件进行验证。称取地榆饮片10份，每份100g，加入17％的黄酒，闷润60min，120℃下炮制时间12min照2.1及2.2项下依法测定没食子酸及鞣质的含量，计算综合评分，结果3次实验综合评分为含量分别为75.32、75.12、75.66，平均值为75.37，与预测值(75.48)接近说明该工艺可靠。
本实验单因素考察的基础上，采用CCD响应面法方法对炮制时间、炮制温度、加酒量进行考察，与传统炮制方法相比，将传统的经验炮制工艺进行量化，具有工艺稳定、操作简便、省时省力、效率高等特点，还可为酒炙地榆的炮制工艺继续优化提供实验依据，为现代地榆生产的质量安全管控提供新的技术思路，促进大型企业的生产控制。
对于本领域技术人员而言，本发明不限于上述示范性实施例的细节，发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内，因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种酒炙地榆炮制工艺，其特征在于，所述炮制工艺包括以下步骤：将经过净选后的地榆饮片大小分档，加入黄酒拌匀，黄酒的用量为地榆饮片重量的10％～35％，闷润60min，置炒制容器内，炮制温度80℃～180℃，炮制时间为5分钟～25分钟，放凉，筛去灰屑，即得。
2.根据权利要求1所述酒炙地榆炮制工艺，其特征在于，所述黄酒的用量为地榆饮片重量的15％～30％。
3.根据权利要求2所述酒炙地榆炮制工艺，其特征在于，所述黄酒的用量为地榆饮片重量的15％～25％。
4.根据权利要求3所述酒炙地榆炮制工艺，其特征在于，所述黄酒的用量为地榆饮片重量的17％。
5.根据权利要求1所述酒炙地榆炮制工艺，其特征在于，所述炮制温度100℃～160℃。
6.根据权利要求5所述酒炙地榆炮制工艺，其特征在于，所述炮制温度110℃～140℃。
7.根据权利要求6所述酒炙地榆炮制工艺，其特征在于，所述炮制温度120℃。
8.根据权利要求1所述酒炙地榆炮制工艺，其特征在于，所述炮制时间为10min～20min。
9.根据权利要求8所述酒炙地榆炮制工艺，其特征在于，所述炮制时间为12min。
10.一种检测权利要求1-9任一项所述酒炙地榆炮制工艺的产品的质量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：测定游离没食子酸的含量，测定鞣质的含量；
(一)测定游离没食子酸的含量方法包括以下步骤：
1)色谱条件
色谱柱为WELCH AQ C18柱，4.6mm×250mm，5μm，柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长272nm，流动相0.05％磷酸水溶液(A)-甲醇(B)，进样量10μL，梯度洗脱程序如下；
梯度洗脱程序
Figure FDA0003342757240000011
2)对照品溶液制备
精密称取没食子酸对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取2.5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得每lmL中含没食子酸0.05mg；
3)供试品溶液的制备
取地榆样品粉末0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加10％盐酸溶液10ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用水适量分数次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
4)标准曲线的绘制
精密量取不同体积的上述没食子酸对照品溶液，按上述色谱条件，进样测定；
(二)鞣质的含量测定方法
1)对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取2.5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得每lmL中含没食子酸0.05mg；
2)供试品溶液的制备
取地榆粉末0.4g，精密称定，置250mL棕色量瓶中，加水150mL，放置过夜，超声处理10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置，滤过，弃去初滤液50mL，精密量取续滤液20mL，置100mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得；
3)标准曲线的绘制
精密量取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL，分别置25mL棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液lmL，再分别加水11.5mL、11mL、10mL、8mL、7mL，用29％碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30分钟以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在760nm的波长处测定吸光度；
4)测定法
总酚精密量取供试品溶液2mL，置25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，加水10mL，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算，即得；
不被吸附的多酚精密量取供试品溶液25mL，加至已盛有干酪素0.6g的100mL具塞锥形瓶中，密塞，置30℃水浴中保温1小时，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2mL，置25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，加水10mL，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)，计算，即得；测定时，同时进行干酪素吸附空白试验，计算扣除空白值。
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