CN113388634A

CN113388634A - 大豆耐逆性相关蛋白GsCK468及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN113388634A
Application number: CN202010122790.6A
Authority: CN
Inventors: 张劲松; 陈受宜; 吴春梅; 张万科; 韦伟; 陶建军; 阴翠翠; 林晴
Original assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Current assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Priority date: 2020-02-27
Filing date: 2020-02-27
Publication date: 2021-09-14
Anticipated expiration: 2040-02-27
Also published as: CN113388634B

Abstract

本发明公开了大豆耐逆性相关蛋白GsCK468及其编码基因与应用。本发明所提供的如下1)‑3)中任一种物质在调控植物耐盐性中的应用；1)蛋白GsCK468；2)编码蛋白GsCK468的核酸分子；3)含有编码蛋白GsCK468的核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌。本发明所提供的GsCK468编码基因GsCK468能够显著提高植物的耐盐性。本发明对于培育耐盐植物品种，特别是培育耐耐盐作物、林草等新品种具有重要价值，可用于农牧业和生态环境治理所需的耐盐性植物品种的培育和鉴定，对提高农作物产量具有重要意义。

Description

大豆耐逆性相关蛋白GsCK468及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及大豆耐逆性相关蛋白GsCK468及其编码基因与应用。

背景技术

环境中物理化学因素的变化,如干旱、盐碱、冷害、冻害、水涝等胁迫因素以及病虫害等生物因素对植物的生长发育具有重要影响，严重时会造成农作物大规模减产，培育耐逆性作物是种植业的主要目标之一。提高作物的耐逆性，可以利用传统的育种方法和分子遗传育种方法。目前，分子遗传育种已经成为科技工作者所关注的领域之一。在非生物或生物逆境的胁迫下，高等植物细胞有多种途径感受和应答外界环境中物化参数的变化，将胞外信号变为胞内信号，经过一系列磷酸化级联反应将信号传递到细胞核，经转录因子调控相关的功能基因，可以启动逆境应答基因的表达，提高植物的耐逆性。

植物耐非生物胁迫相关的基因已有很多报道，包括效应分子基因和调控基因。大豆作为重要的油脂和植物蛋白来源的作物，改善其耐逆性，具有重要的理论及现实意义。

发明内容

本发明一个目的是提供如下1)-3)中任一种物质的用途。

本发明提供的如下1)-3)中任一种物质在调控植物耐盐性中的应用；

1)蛋白GsCK468；

2)编码蛋白GsCK468的核酸分子；

3)含有编码蛋白GsCK468的核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌；

所述蛋白GsCK468为如下(1)或(2)或(3)：

(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(2)由序列表中序列2所示的氨基酸序列的末端添加标签序列组成的蛋白质；

(3)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)或(2)衍生的蛋白质。

上述序列表中的序列2由468个氨基酸残基组成。

上述应用中，所述编码蛋白GsCK468的核酸分子是如下1)-3)中任一种的DNA分子：

1)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子；

3)与1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码具有相同功能蛋白质的DNA分子。

上述严格条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

上述序列表中的序列1由1407个脱氧核糖核苷酸组成，自5’末端的第1至1404位脱氧核糖核苷酸为GsCK468的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)，自5’端的第1至3位脱氧核糖核苷酸为GsCK468的起始密码子ATG,自5’端的第1405至1407位脱氧核糖核苷酸为GsCK468的终止密码子TAA。

上述重组植物表达载体pBin438-GsCK468为将含有GsCK468基因的PCR扩增产物同源重组到pBin438载体中，得到重组植物表达载体；

其中，含有GsCK468基因的PCR扩增产物的核苷酸序列为在序列1所示的GsCK468基因的5’端添加序列ACTATTTACAATTACTGCAG，且在序列1所示的GsCK468基因的3’端添加序列CTCGAGGGTACCGATTACAA得到的序列。

扩增所述与植物耐逆性相关蛋白的编码基因全长或其任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。

所述引物对中，一条引物序列如序列表中序列3所示，另一条引物序列如序列表中序列4所示。

上述应用中，所述调控植物耐盐性为提高植物耐盐性。

上述应用中的物质在培育高耐盐性植物或耐盐性植物中的应用也是本发明保护的范围。

上述应用中的物质在培养耐盐性提高的植物中的应用也是本发明保护的范围。

本发明另一个目的是提供一种培育耐盐性提高的转基因植物的方法。

本发明提供的方法，为如下1)或2)：

1)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中蛋白GsCK468的含量和/或活性，得到转基因植物；

2)所述的方法包括如下步骤：提高目的植物中编码蛋白GsCK468的核酸分子的表达，得到转基因植物；

所述转基因植物的耐盐性高于所述目的植物；

所述蛋白GsCK468为如下(1)或(2)或(3)：

(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

上述方法中，所述提高目的植物中蛋白GsCK468的含量和/或活性，或，所述提高目的植物中编码蛋白GsCK468的核酸分子的表达，均是将所述编码蛋白GsCK468的核酸分子导入所述目的植物中。

上述编码蛋白GsCK468的核酸分子通过重组植物表达载体pBin438-GsCK468导入目的植物中；上述重组植物表达载体pBin438-GsCK468为将含有GsCK468基因的PCR扩增产物同源重组到pBin438载体中，得到重组植物表达载体；

含有GsCK468基因的PCR扩增产物为以大豆ZYD7幼苗的RNA反转录的cDNA为模板，用序列3和序列4所示的引物扩增，得到的PCR产物。

上述中，所述植物为双子叶植物或单子叶植物，其中双子叶植物在本发明的实施例中举例为大豆。

本发明的实验证明，将GsCK468基因导入大豆毛状根，获得了过量表达GsCK468基因的转基因嵌合体植株，在盐胁迫后，转GsCK468基因嵌合体植株的生长状态都要明显好于转空载体K599毛状根嵌合体对照，说明GsCK468基因能够显著提高植物的耐盐。本发明对于培育耐盐植物品种具有重要价值，可用于农牧业和生态环境治理所需的耐盐植物品种的培育，对农作物稳产具有重要意义。

附图说明

图1为野生大豆ZYD7比栽培大豆HN44具有更强的耐盐性；

图2为植物表达载体pBin438-GsCK468的示意图；

图3为转基因毛状根及对照中GsCK468的表达量检测；

图4为GsCK468在毛状根中过表达提高了植株的耐盐性；

图5为盐胁迫下GsCK468过表达嵌合体植株的叶绿素含量和相对离子渗透率检测。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的％，如无特殊说明，均为质量百分含量。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，数据为三次重复实验的平均值或平均值±标准差。

大豆材料：大豆黑农44(HN44)，记载在如下文献中：满为群等，大豆新品种黑农44的选育及不同种植方式对其产量和品种的影响，黑龙江农业科学2004年5期，1-5；2006年获自黑龙江农业科学院大豆研究所；由黑龙江农业科学院大豆研究所2002年经黑龙江省农作物品种审定委员会审定的大豆品种，第一育成人为杜维广研究员，专利号为：CNA20020216.2，审定号为：黑审豆2002003。

野生大豆ZYD7，记载在如下文献中：Xiang Lu,Qing Xiong,Tong Cheng,Qing-Tian Li,Xin-Lei Liu,Ying-Dong Bi,Wei Li,Wan-Ke Zhang,Biao Ma,Yong-Cai Lai,Wei-Guang Du,Wei-Qun Man*,Shou-Yi Chen,*and Jin-Song Zhang*,A PP2C-1 AlleleUnderlying a Quantitative Trait Locus Enhances Soybean 100-Seed Weight,Molecular Plant 2017,10,670–684。

大豆科丰1号(Glycine max L.Merr.Kefeng 1)记载在W.K.Zhang,Y.J.Wang,G.Z.Luo,J.S.Zhang,C.Y.He,X.L.Wu,J.Y.Gai,S.Y.Chen,QTL mapping of ten agronomictraits on the soybean(Glycine max L.Merr.)genetic map and their associationwith EST markers,Theor.Appl.Genet,2004,108:1131-1139中，公众可以从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得；

发根农杆菌K599，记载在如下文献中：Attila Kereszt,et al.,Agrobacteriumrhizogenes-mediaded transformation of soybean to study of root biology,NatureProtocols,2007,2(4),549-552)中，公众可从Peter M Gressnon教授，The University ofQueensland,St Lucia,Queensland 4072,Australia,获得，或经Peter M Gressnon教授同意(书面同意书)后由中科院遗传与发育生物学研究所获得。

pBin438载体，中国科学院微生物所方荣祥院士赠送，记载过该材料的非专利文献是：李太元,田颖川,秦晓峰,等.高效抗虫转基因烟草的研究,中国科学(B辑),1994,24(3):276-282.)

实施例1、野生大豆耐逆性相关蛋白GsCK468编码基因GsCK468的筛选及其cDNA的克隆

1、GsCK468的克隆

野生大豆ZYD7为耐盐材料，黑农44(HN44)为盐敏材料(图1)，上述材料各15株在150mM NaCl处理下，ZYD7叶中叶绿素含量显著高于HN44，而离子渗透率显著低于HN44，表明，在盐胁迫下ZYD7，特别是细胞膜受到的损伤低于HN44。以上述材料为亲本构建了含900多个单株的重组自交系群体，对耐盐性做了QTL定位。将位于3号染色体的QTL区间与大豆Williams82基因组序列比对，其中包含一个酪蛋白激酶，其蛋白/基因序列登记在数据库中(Glyma03g164700)。根据Williams82基因组序列，设计引物从野生大豆ZYD7中克隆了目的基因，命名为GsCK468。

GsCK468基因的核苷酸序列为序列表中序列1，该基因编码的蛋白命名为GsCK468蛋白，该蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2。序列表中序列1由1407个核苷酸组成，序列表中序列2由468个氨基酸残基组成。

实施例2、转GsCK468大豆毛状根嵌合体的获得

1、GsCK468过表达载体pBin438-GsCK468的构建

大豆ZYD7幼苗培养至两周，采用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提方法提取RNA。取5μg总RNA用MMLV逆转录酶进行逆转录，获得cDNA一链。

以上述cDNA作为模板，所用引物如下，进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。

所用引物如下：

正向GsCK468-F：5’-ACTATTTACAATTACTGCAGATGTCTTCTTTGATGATGGATCATGT-3’(序列表中序列3)，

反向GsCK468-R：5’-TTGTAATCGGTACCCTCGAGTTACTTCCTGATAGAGAGGAGCTCAAAAC-3’(序列表中序列4)。

上述两个引物中的前20个碱基为载体pBin438的同源序列。

上述PCR反应体系为25μl，包含：PCR缓冲液、0.2mmol/L dNTPs、两个引物各0.8mmol/L、5μl稀释的cDNA混合液及1单位LA Taq DNA聚合酶(Takara)，PCR的条件为：94℃,30s；58℃,1min；72℃,3min；35个循环。

得到PCR扩增产物，经过测序，该PCR扩增产物的核苷酸序列为在序列1所示的GsCK468基因的5’端添加序列ACTATTTACAATTACTGCAG，且在序列1所示的GsCK468基因的3’端添加序列CTCGAGGGTACCGATTACAA得到的序列。

应用同源重组的原理，将上述PCR扩增产物同源重组到pBin438载体中，得到重组植物表达载体，同源重组采用的试剂盒为Seamless Assembly Cloning Kit(中美泰和生物技术(北京)有限公司)。

经过测序，重组植物表达载体中的该PCR产物具有序列表中序列1所示的GsCK468基因，将上述重组植物表达载体命名为pBin438-GsCK468(图2)。

2、重组农杆菌的获得

将上述重组载体pBin438-GsCK468，用电击法导入发根农杆菌K599，得到重组农杆菌K599/pBin438-GsCK468，测序，表明重组菌构建正确。挑取重组农杆菌，将该重组农杆菌命名为K599/GsCK468。

将空载体pBin438转入发根农杆菌K599，得到K599/pBin438。

3、转K599/GsCK468毛状根的获得及鉴定

用注射器将上述重组农杆菌K599/pBin438-GsCK468接种在生长6天且含两片真叶的大豆科丰1号(以下也称为野生型大豆)幼苗,接种量为OD₆₀₀1.0，保湿生长：光照16小时，温度25℃，湿度50％。2周后，长出毛状根即为转化的毛状根。获得70个转pBin438-GsCK468毛状根,标记为GsCK468-OE,可进一步作转基因鉴定和耐盐性检测。

以相同的方法将含空载体pBin438的K599/pBin438转入大豆科丰1号幼苗，得到70个转K599/pBin438毛状根根系，以作为实验对照。

4、转基因毛状根分子鉴定

转pBin438-GsCK468毛状根和转pBin438毛状根浸泡在100mM NaCl水溶液处理6小时后，分别提取转pBin438-GsCK468毛状根和转pBin438毛状根的总RNA，将其反转录为cDNA。以cDNA为模板，用GsCK468-F和GsCK468-R作为引物分析GsCK468表达量。Real-TimePCR反应使用TOYOBO公司的RealTime PCR Master Mix试剂盒，并按照说明进行操作。所用引物同上。

大豆GmTubulin基因为内标，所用引物为Primer-TF和Primer-TR。

Primer-TF：5’-AACTCCATTTCGTCCATTCCTTC-3’

Primer-TR：5’-TTGAGTGGATTCCCAACAACG-3’

实验重复三次，结果取平均值±标准差。

图3为Real Time PCR检测在100mM NaCl处理6小时部分转pBin438-GsCK468毛状根(记作GsCK468-OE)和转pBin438毛状根(记作K599)中GsCK468的表达，从图中看出，以大豆GmTubulin基因为内标，5个GsCK468-OE毛状根中GsCK468的相对表达量分别为15、27、32、51和59％；5个转pBin438毛状根中GsCK468的相对表达量是大豆原有的GsCK468的表达，受盐胁迫诱导，分别为7、9、11、12和17％。图中所示为每个样本5个毛状根的统计数据。

从上述结果可以看出，高盐胁迫下，大部分转pBin438-GsCK468毛状根中，GsCK468的表达量高于转空载体根系中GsCK468的表达量。

实施例3、过量表达GsCK468植株的表型的鉴定

将实施例2得到转pBin438-GsCK468毛状根(记作GsCK468-OE)和转pBin438毛状根(记作K599)继续培养，生长两周后得到转pBin438-GsCK468大豆嵌合体植株和转pBin438大豆嵌合体植株。由于此时的大豆植株中仅仅毛状根中转基因的，地上部分不是转基因的，因此该植株为嵌合体植株。由于毛状根含有过表达的目的基因，增加了其耐盐性，所以地上部分也显示了更强的耐盐性。

实验样本为转pBin438大豆嵌合体植株(K599-对照)和转pBin438-GsCK468大豆嵌合体植株(GsCK468-OE)。

1、NaCl处理表型观察

NaCl处理组：将转pBin438大豆嵌合体植株(K599-对照)和转pBin438-GsCK468大豆嵌合体植株(GsCK468-OE)各取10株浸入150mM NaCl水溶液中，25℃处理3天；

对照组：将转pBin438大豆嵌合体植株(K599-对照)和转pBin438-GsCK468大豆嵌合体植株(GsCK468-OE)各取10株在水中25℃生长3天。

实验重复三次，结果取平均值±标准差。

拍照观察，结果如图4所示，在150mM NaCl处理3天后，转pBin438大豆嵌合体植株及转pBin438-GsCK468大豆嵌合体植株叶均呈现萎蔫，但是GsCK468-OE植株仅老叶出现萎蔫，而对照整株表现萎蔫。

2、NaCl处理叶绿素含量检测

大豆叶片叶绿素含量使用叶绿素测定器(Konica MinoltΛ)测定。将大豆叶片夹在叶绿素测定器的探头夹片之间，记录测定器的读数，每片大豆叶片测定5个点，每个样品测定20片叶片。

检测上述1NaCl处理组和对照组大豆的叶绿素含量，结果如图5左图所示，可以看出，水培时，GsCK468-OE和对照地上部分叶绿素含量(SPAD)均约为27，无明显差异；盐处理后，GsCK468-OE和对照地上部分叶绿素含量(SPAD)分别约为22和12，GsCK468-OE嵌合体植株极显著高于对照。

3、NaCl处理离子渗透率检测

当植物组织受到逆境胁迫伤害时，细胞膜功能受损或结构破坏，透性增大，从而使细胞内各种水溶性物质包括电解质外渗。将植物组织浸入无离子水中，水的电导会因电解质的外渗而变大。伤害越重，细胞膜破坏越严重，外渗就越厉害，而水的电导率就越大。所以可以用电导仪测定外渗液电导率的变化情况，间接反映出植物组织受到的伤害程度。因此电导率的检测可计算相对离子渗透率，相对离子渗透率表示植物细胞膜受损伤的程度。

测定方法为，将大豆的叶片剪下，放置到干净的螺口玻璃瓶中，用去离子水漂洗3遍。之后加80mL去离子水将叶片完全浸泡，抽真空45min。室温静置30min后用电导仪(DDC-308A型，上海博取仪器有限公司)测定电导率E1。将叶片煮沸15min，待温度降到室温后，混匀用电导仪测定电导率E2。

相对离子渗透率EL(％)＝E1/E2 X 100，其中E1和E2为电导率。

检测上述1NaCl处理组和对照组大豆的相对离子渗透率，结果如图5右图所示，可以看出，水培时，GsCK468-OE和对照的相对离子渗透率约为7％，无差异；盐处理后相对离子渗透率分别增至42％和82％，表明转基因嵌合体植株细胞膜所受的损伤远小于对照。

因此，过表达GsCK468提高了植株的耐盐性。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120>大豆耐逆性相关蛋白GsCK468及其编码基因与应用

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1407

<212> DNA

<213>大豆属野生大豆（Glycine soja Sieb. Et Zucc.）

<400> 1

atgtcttctt tgatgatgga tcatgttatt ggtgggaagt ttaaactggg aaggaaaatt 60

gggagtgggt cttttgggga gctttatata gctgttaata tacaaaccgg agaggaggtg 120

gctgtcaagc tggaacctgt gaagaccaag catccccagc ttcactatga gtcaaaattg 180

tatatgcttc ttcaaggagg aacggggatt ccccatctca agtggtttgg agtagaggga 240

gactacaatg tcatggcaat cgatcttctt ggaccaagtc tggaagattt gttcaattat 300

tgcaaccgga agttaacatt gaagacagtg ttaatgcttg ctgatcaatt aattaacaga 360

gttgaatata tgcattctag aggtttcctt caccgtgaca tcaagccaga caatttttta 420

atgggcctag gacgtaaagc aaaccaggtg tacatcattg actatggcct tgcaaaaaaa 480

tatagggatc ttcagactca taggcacata ccatacaggg aaaacaagaa ccttacaggc 540

acagcccggt atgcaagtgt caacacccat cttggaattg aacaaagcag aagggatgat 600

ctggaatctc ttggttatgt gctcatgtac ttcttaagag gaagtcttcc ctggcaggga 660

ctgaaggctg gcaccaaaaa acaaaaatat gataaaatca gtgagaagaa aatgtcaact 720

tcgttagagg ggctctgcaa gtcatatccc tcagagtttg tatcatattt tcaatattgc 780

cgaacattgc gatttgaaga caagcctgat tattcatatt taaagaggct gtttcgagat 840

ttatttatta gagaaggcta tcaatttgac tatgtttttg attggactat attgaagtat 900

ccgcagattg gcggcagcag ctctagaggg cggcatgaaa gtggcaaggc agctatgcat 960

gcaggaccat ctgtacaaaa gccagaaaaa gtatcagttg ggaaagagat tcgagaaaaa 1020

ttctctggtg ctgttgaagc tttctcccgg aggaacccaa caagtcctag tcctcgtggt 1080

gatcactcca aacgtaggag ttttgaggaa gtagcagtac acaaagatgt gtatcatgat 1140

caagagaagg gacgcaattc gtcccgatat ggcagcagtt caagaagacc cataatctca 1200

tcgtcaacca ggccaagttc ctctggtgat catactgaca gtcgtactgg ccggctaacc 1260

tcaagtggaa gccgacaatc tgccacacat agaaatattc aacctatgca cgagacaaaa 1320

caaccaactt acacacgctc tggatccacc agaggcaacc gtgatgatcc tctgcggagt 1380

tttgagctcc tctctatcag gaagtaa 1407

<210> 2

<211> 468

<212> PRT

<213> 大豆属野生大豆（Glycine soja Sieb. Et Zucc.）

<400> 2

Met Ser Ser Leu Met Met Asp His Val Ile Gly Gly Lys Phe Lys Leu

1 5 10 15

Gly Arg Lys Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Glu Leu Tyr Ile Ala Val

20 25 30

Asn Ile Gln Thr Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Leu Glu Pro Val Lys

35 40 45

Thr Lys His Pro Gln Leu His Tyr Glu Ser Lys Leu Tyr Met Leu Leu

50 55 60

Gln Gly Gly Thr Gly Ile Pro His Leu Lys Trp Phe Gly Val Glu Gly

65 70 75 80

Asp Tyr Asn Val Met Ala Ile Asp Leu Leu Gly Pro Ser Leu Glu Asp

85 90 95

Leu Phe Asn Tyr Cys Asn Arg Lys Leu Thr Leu Lys Thr Val Leu Met

100 105 110

Leu Ala Asp Gln Leu Ile Asn Arg Val Glu Tyr Met His Ser Arg Gly

115 120 125

Phe Leu His Arg Asp Ile Lys Pro Asp Asn Phe Leu Met Gly Leu Gly

130 135 140

Arg Lys Ala Asn Gln Val Tyr Ile Ile Asp Tyr Gly Leu Ala Lys Lys

145 150 155 160

Tyr Arg Asp Leu Gln Thr His Arg His Ile Pro Tyr Arg Glu Asn Lys

165 170 175

Asn Leu Thr Gly Thr Ala Arg Tyr Ala Ser Val Asn Thr His Leu Gly

180 185 190

Ile Glu Gln Ser Arg Arg Asp Asp Leu Glu Ser Leu Gly Tyr Val Leu

195 200 205

Met Tyr Phe Leu Arg Gly Ser Leu Pro Trp Gln Gly Leu Lys Ala Gly

210 215 220

Thr Lys Lys Gln Lys Tyr Asp Lys Ile Ser Glu Lys Lys Met Ser Thr

225 230 235 240

Ser Leu Glu Gly Leu Cys Lys Ser Tyr Pro Ser Glu Phe Val Ser Tyr

245 250 255

Phe Gln Tyr Cys Arg Thr Leu Arg Phe Glu Asp Lys Pro Asp Tyr Ser

260 265 270

Tyr Leu Lys Arg Leu Phe Arg Asp Leu Phe Ile Arg Glu Gly Tyr Gln

275 280 285

Phe Asp Tyr Val Phe Asp Trp Thr Ile Leu Lys Tyr Pro Gln Ile Gly

290 295 300

Gly Ser Ser Ser Arg Gly Arg His Glu Ser Gly Lys Ala Ala Met His

305 310 315 320

Ala Gly Pro Ser Val Gln Lys Pro Glu Lys Val Ser Val Gly Lys Glu

325 330 335

Ile Arg Glu Lys Phe Ser Gly Ala Val Glu Ala Phe Ser Arg Arg Asn

340 345 350

Pro Thr Ser Pro Ser Pro Arg Gly Asp His Ser Lys Arg Arg Ser Phe

355 360 365

Glu Glu Val Ala Val His Lys Asp Val Tyr His Asp Gln Glu Lys Gly

370 375 380

Arg Asn Ser Ser Arg Tyr Gly Ser Ser Ser Arg Arg Pro Ile Ile Ser

385 390 395 400

Ser Ser Thr Arg Pro Ser Ser Ser Gly Asp His Thr Asp Ser Arg Thr

405 410 415

Gly Arg Leu Thr Ser Ser Gly Ser Arg Gln Ser Ala Thr His Arg Asn

420 425 430

Ile Gln Pro Met His Glu Thr Lys Gln Pro Thr Tyr Thr Arg Ser Gly

435 440 445

Ser Thr Arg Gly Asn Arg Asp Asp Pro Leu Arg Ser Phe Glu Leu Leu

450 455 460

Ser Ile Arg Lys

465

<210> 3

<211> 46

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 3

actatttaca attactgcag atgtcttctt tgatgatgga tcatgt 46

<210> 4

<211> 49

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400> 4

ttgtaatcgg taccctcgag ttacttcctg atagagagga gctcaaaac 49

Claims

1.如下1)-3)中任一种物质在调控植物耐盐性中的应用；

1)蛋白GsCK468；

2)编码蛋白GsCK468的核酸分子；

所述蛋白GsCK468为如下(1)或(2)或(3)：

(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

所述编码蛋白GsCK468的核酸分子是如下1)-3)中任一种的DNA分子：

1)编码区为序列表中序列1所示的DNA分子；

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述调控植物耐盐性为提高植物耐盐性。

4.权利要求1-3任一中的所述物质在培育高耐盐性植物或耐盐性植物中的应用。

5.权利要求1-3任一中的所述物质在培养耐盐性提高的植物中的应用。

6.一种培育耐盐性提高的转基因植物的方法，为如下1)或2)：

所述转基因植物的耐盐性高于所述目的植物；

所述蛋白GsCK468为如下(1)或(2)或(3)：

(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：

所述提高目的植物中蛋白GsCK468的含量和/或活性，或，所述提高目的植物中编码蛋白GsCK468的核酸分子的表达，均是将所述编码蛋白GsCK468的核酸分子导入所述目的植物中。

8.根据权利要求4或5所述的应用或权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述植物为双子叶植物或单子叶植物。

9.根据权利要求4或5所述的应用或权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述植物为双子叶植物或单子叶植物，所述双子叶植物为大豆。