CN113388018B

CN113388018B - 狗牙根CdWRKY2蛋白及其编码基因在调控植物耐盐性中的应用

Info

Publication number: CN113388018B
Application number: CN202110823542.9A
Authority: CN
Inventors: 傅金民; 邵安
Original assignee: Ludong University
Current assignee: Ludong University
Priority date: 2021-07-21
Filing date: 2021-07-21
Publication date: 2022-08-16
Anticipated expiration: 2041-07-21
Also published as: CN113388018A

Abstract

本发明公开了蛋白质CdWRKY2或调控所述蛋白质编码基因的表达物质或调控所述蛋白质活性或含量的物质的应用。本发明首先从狗牙根的cDNA中扩增克隆得到CdWRKY2的CDS片段，然后利用酶切连接的方法构建CdWRKY2重组表达载体，利用根癌农杆菌介导的拟南芥花序浸花法，将CdWRKY2重组表达载体导入拟南芥Col‑0中。实验结果表明，狗牙根CdWRKY2基因导入拟南芥中，在盐胁迫条件下会增强植株对盐胁迫的敏感性。

Description

狗牙根CdWRKY2蛋白及其编码基因在调控植物耐盐性中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域中狗牙根CdWRKY2蛋白及其编码基因在调控植物耐盐性中的应用。

背景技术

盐碱地是重要的后备耕地资源。在盐碱地种植耐盐草坪能够在较短时间内覆盖表土、增加土壤有机质含量并降低其含盐量，是对盐碱地进行改良与修复的经济有效方式之一。狗牙根(Cynodon dactylon)为耐盐性较强的草坪草兼牧草，其建坪迅速、耐践踏，耐盐品种能在含盐量0.78％的土壤正常生长，在含盐量2.43％的土壤仍可存活。但是，作为具有盐碱地改良潜力的优良草种，目前对狗牙根盐胁迫关键基因的挖掘及其分子机理的研究相对缓慢，严重制约了一批优良品种在高盐土壤上的推广应用(王善仙等,2011；陈静波等,2012)。

在植物中，WRKY转录因子主要通过与下游基因启动子上的W-box元件结合并调控其表达，进而响应多种逆境胁迫(Jiang et al.,2017)。研究发现，在盐胁迫响应过程中，WRKY转录因子既可以依赖ABA也可以不依赖ABA途径来发挥作用。例如，在拟南芥中，AtWRKY46转录因子能够直接结合ABA响应基因ABI4以及生长素共轭相关基因UGT84B2、IAGLU和GH3.1的启动子并抑制其表达，促进生长素在根系的积累，从而维持拟南芥根系在盐胁迫下的生长(Shkolnik-Inbar and Bar-Zvi,2010；Ding et al.,2015)。AtWRK18、AtWRKY60和AtWRKY40转录因子在物理上和功能上相互作用，均能够结合ABA响应基因ABI4、ABI5的启动子并抑制其表达，超表达AtWRK18或AtWRKY60均增强了拟南芥对盐胁迫的敏感性(Chen et al.,2010；Liu et al.,2012)。AtWRKY33超表达后能够通过影响SOS(saltoverly sensitive)通路来提高拟南芥对高盐胁迫的耐受性，同时也增加了转基因植株的ABA敏感性(Jiang and Deyholos,2009)，并且AtWRKY33转录因子能够直接结合乙烯生物合成过程中的关键酶基因ACS2和ACS6的启动子并促进其表达，进而调控盐胁迫下谷胱甘肽诱导的乙烯的生物合成(Datta et al.,2015)。另外一些WRKY基因耐盐功能的发挥则不依赖于ABA途径，例如AtWRKY8转录因子直接结合逆境响应基因RD29A的启动子并促进其表达，并维持拟南芥在高盐胁迫下Na⁺、K⁺的动态平衡，而其互作蛋白VQ9能够拮抗其转录激活功能(Hu et al.,2013)。

鉴于WRKY转录因子在响应盐胁迫进而调控植物盐胁迫耐受性方面的重要作用，因此其作为优异的耐盐基因在基因工程育种中日益受到重视。研究发现超量表达耐盐相关WRKY基因可以分别通过激活盐胁迫应答相关基因的表达、影响激素途径以及相应的生理响应方式进而提高转基因植株的耐盐能力(Jiang et al.,2017)。例如，大豆GmWRKY54、小麦TaWRKY2在拟南芥中超表达以及水稻自身OsWRKY45-1超表达后，均会导致逆境响应相关基因的上调表达，显著提高了转基因植株的耐盐能力(Zhou et al.,2008；Tao et al.,2011；Niu et al.,2012)。棉花GhWRKY34超表达在拟南芥中能够通过保护细胞内环境的稳定和离子平衡的方式来提高转基因植株的耐盐能力(Zhou et al.,2015)。烟草NbWRKY79超表达在番茄中能够降低活性氧和丙二醛的积累，增强抗氧化酶的活性，从而提高转基因番茄的耐盐性(Nam et al.,2017)。综上，作为具有盐碱地改良潜力的优良草坪草，挖掘并鉴定狗牙根盐胁迫响应WRKY基因并对其进行功能研究具有重要的科学意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何提高植物对盐胁迫的敏感性。

为了解决以上技术问题，本发明的第一个目的是提供了蛋白质或调控所述蛋白质编码基因的表达物质或调控所述蛋白质活性或含量的物质的应用，所述应用为蛋白质或调控所述蛋白质编码基因的表达物质或调控所述蛋白质活性或含量的物质在调控植物耐盐性中的应用，所述蛋白质是如下任一种的蛋白质：

A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；

A2)将A1)所示的氨基酸序列经过一个以上氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性且具有调控植物耐盐性功能的蛋白质；

A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白标签得到的融合蛋白质。

其中，序列表中的序列1由674个氨基酸残基组成。

上述应用中，所述蛋白质来源于狗牙根(Cynodon dactylon)。

本文中，所述蛋白标签(protein-tag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白质一起融合表达的一种多肽或者蛋白质，以便于目的蛋白质的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白质标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc标签、GST标签和/或SUMO标签等。

本文中，所述同一性是指氨基酸序列或核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambdaratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。

本文中，所述80％以上的同一性可为至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、98％或99％的同一性。

上述应用中，所述调控所述蛋白质活性或含量的物质可为调控所述蛋白质的编码基因表达的物质。

上述应用中，所述调控基因表达的物质可为进行如下6种调控中至少一种调控的物质：1)在所述基因转录水平上进行的调控；2)在所述基因转录后进行的调控(也就是对所述基因的初级转录物的剪接或加工进行的调控)；3)对所述基因的RNA转运进行的调控(也就是对所述基因的mRNA由细胞核向细胞质转运进行的调控)；4)对所述基因的翻译进行的调控；5)对所述基因的mRNA降解进行的调控；6)对所述基因的翻译后的调控(也就是对所述基因翻译的蛋白质的活性进行调控)。

上述应用中，所述调控基因表达可为提高或增加所述基因表达。

所述提高或增加所述基因表达的物质可为与所述蛋白质相关的生物材料，所述生物材料可为下述B1)至B7)中的任一种：

B1)编码上述蛋白质的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；

B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；

B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；

B5)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系；

B6)含有B1)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2)所述表达盒的转基因植物组织；

B7)含有B1)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2)所述表达盒的转基因植物器官。

所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。

上述应用中，所述核酸分子为如下C1)或C2)所示的基因：

C1)编码链的编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；

C2)编码链的核苷酸是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子。

其中，序列表中的序列2由2025个核苷酸组成，编码序列表中的序列1所示的蛋白质。

本发明还提供一种调控耐盐性的方法，包括向受体植物中导入CdWRKY2基因，得到对盐胁迫敏感性强于所述受体植物的目的植物；所述CdWRKY2基因编码CdWRKY2蛋白；所述CdWRKY2蛋白为下述任一种蛋白质：

A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；

上述方法中，所述CdWRKY2基因为如下C1)或C2)所示的基因：

C1)编码链的编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；

C2)编码链的核苷酸是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子。

本发明所述受体植物为单子叶植物或双子叶植物。所述双子叶植物可为十字花科植物，具体可为拟南芥。

本发明还提供上述的CdWRKY2蛋白或上述的生物材料。

本文中，所述转基因植物理解为不仅包含第一代到第二代转基因植物，也包括其子代。对于转基因植物，可以在该物种中繁殖该基因，也可用常规育种技术将该基因转移进入相同物种的其它品种，特别包括商业品种中。所述转基因植物包括种子、愈伤组织、完整植株和细胞。

本发明首先从狗牙根的cDNA中扩增克隆得到CdWRKY2的CDS片段，然后利用酶切连接的方法构建重组表达载体pRI101-AN/CdWRKY2，利用根癌农杆菌介导的拟南芥花序浸花法，将pRI101-AN/CdWRKY2导入拟南芥Col-0中。实验结果表明，狗牙根CdWRKY2基因导入拟南芥中，在盐胁迫条件下会增强植株对盐胁迫的敏感性。

附图说明

图1为实施例1中pRI101-AN载体的结构示意图。

图2为实施例1中野生型(Col-0)、转基因拟南芥(OE10-4和OE6-1)基因CdWRKY2相对表达量。数据表示为平均值±标准差，重复数为3。

图3为实施例1中野生型(Col-0)、转基因拟南芥(OE10-4)在正常(CK，0mM NaCl)和盐胁迫(Salt，100mM NaCl)条件下植株的生长情况照片。

图4为实施例1中野生型(Col-0，标为WT)、转基因拟南芥(OE10-4和OE6-1)在正常(CK，0mM NaCl)和盐胁迫(Salt，100mM NaCl)条件下植株的地上部鲜重。数据表示为平均值±标准差，重复数为3，以One-way ANOVA分析各组显著性差异，不同小写字母表示处理间存在显著差异，P＜0.05。

图5为实施例1中野生型(Col-0，标为WT)、转基因拟南芥(OE10-4和OE6-1)在正常(CK，0mM NaCl)和盐胁迫(Salt，100mM NaCl)条件下植株的侧根数目。数据表示为平均值±标准差，重复数为3，以One-way ANOVA分析各组显著性差异，不同小写字母表示处理间存在显著差异，P＜0.05。

图6为实施例1中野生型(Col-0，标为WT)、转基因拟南芥(OE10-4和OE6-1)在正常(CK，0mM NaCl)和盐胁迫(Salt，100mM NaCl)条件下植株的总侧根长度。数据表示为平均值±标准差，重复数为3，以One-way ANOVA分析各组显著性差异，不同小写字母表示处理间存在显著差异，P＜0.05。

图7为实施例1中野生型(Col-0，标为WT)、转基因拟南芥(OE10-4和OE6-1)在正常(CK，0mM NaCl)和盐胁迫(Salt，100mM NaCl)条件下植株叶片的叶绿素含量。数据表示为平均值±标准差，重复数为3，以One-way ANOVA分析各组显著性差异，不同小写字母表示处理间存在显著差异，P＜0.05。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均为常规生化试剂，可从商业途径得到。

1载体和菌株

下述实施例中pEASY^TM-Blunt载体为全式金公司产品，产品目录号CB501-02。

下述实施例中pRI101-AN载体为TaKaRa公司产品，货号/产品目录号名称D3262。

下述实施例中大肠杆菌感受态细胞(请给出具体菌株名)为北京华越洋公司产品，货号/产品目录号01GC44。

下述实施例中农杆菌GV3101为普如汀生物技术(北京)有限公司产品，产品目录号Biovector-375。

2植物品系

下述实施例中的狗牙根品种“A12359”记载于非专利文献“Comprehensivetranscriptional analysis reveals salt stress-regulated key pathways,hub genesand time-specific response categories in common bermudagrass(Cynodon dactylonL.(Pers.))roots”，公众可以从鲁东大学获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

下述实施例中，如无特殊说明，序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应DNA的5′末端核苷酸，末位均为相应DNA的3′末端核苷酸。

下述实施例中的定量试验，如无特别说明，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1转CdWRKY2拟南芥的获得及表型鉴定

一、转CdWRKY2拟南芥的获得

1、基因(CdWRKY2)的获得

提取狗牙根品种“A12359”的总RNA，用逆转录酶反转录得到狗牙根的全基因组cDNA作为模板，以带有BamHI酶切位点的上游引物F和带有SmaI酶切位点的下游引物R，进行PCR扩增。

上游引物F：5’-GGATCCATGGCGGGAACTAGCAACCGTGGAG-3’(下划线指示的序列为BamHI酶识别位点序列)；

下游引物R：5’-CCCGGGTTAAATCCGAGGACCCTGAGGCAACCTG-3’(波浪线指示的序列为Sma I酶识别位点序列)。

PCR体系共50μl，其中模板cDNA 1μl，KOD-plus-DNA聚合酶(购自TOYOBO公司)1μl，2×PCR buffer for KOD-plus-25μl，dNTPs(2mM each)10μl，上下游引物各20mM，再用双蒸水将反应体系补充至50μl。

PCR反应程序为：98℃2分钟，(98℃30秒，58℃30秒，68℃2分)×35循环，68℃延伸10分钟。

反应结束后，经1％琼脂糖凝胶分离位于2000bp处的扩增产物，PCR产物回切胶回收，回收的PCR产物即为CdWRKY2。CdWRKY2的CDS核苷酸序列如序列表的序列2所示，编码氨基酸序列如序列标序列1所示的蛋白质CdWRKY2)。

将上述回收的PCR产物连接到pEASY^TM-Blunt载体上。反应体系(5μL)：4μL回收的PCR产物，1μLpEASY^TM-BluntVector。反应条件：25℃20分钟。

经测序，得到的重组载体为：用上述回收的PCR产物替换pEASY^TM-Blunt载体的限制性核酸内切酶BamHI和Sma I识别位点间的片段，保持pEASY^TM-Blunt载体的其它序列不变，得到的重组载体。

将-70℃冻存的大肠杆菌感受态细胞在冰上融化；将上述构建的重组载体加入到100μL大肠杆菌感受态细胞中，并轻轻混匀，冰浴25分钟；42℃水浴中热击90秒，迅速置于冰上2分钟；加入600μL LB液体培养基，37℃200转/分钟摇菌1小时，将菌液涂抹于含有50ng/mL Kana(卡那霉素)的LB筛选培养板上，37℃倒置培养过夜。从筛选培养板上挑选单菌落接种于LB液体培养基中，37℃200转/分钟摇菌过夜；以培养过夜的菌液为模板进行重组转化子的PCR检测，反应体系同上。

PCR检测为阳性的菌液再通过Sanger测序法测序，引物对为M13-F和M13-R。

M13-F：5’-GGTAACGCCAGGGTTTTCC-3’；

M13-R：5’-CAGGAAACAGCTATGACC-3’。

结果表明，该PCR产物具有序列表中序列2所示的核苷酸，将该基因命名为CdWRKY2(核苷酸序列如序列表的序列2所示)，该基因编码的蛋白命名为CdWRKY2，其氨基酸序列为序列表中的序列1；将含有该PCR产物载体命名为pEASY^TM-Blunt-CdWRKY2。

2、重组载体的构建

将上述pEASY^TM-Blunt-CdWRKY2载体用BamHI和Sma I进行双酶切，经1％琼脂糖凝胶分离，回收位于2000bp处的CdWRKY2片段，将回收的CdWRKY2片段与经过同样双酶切回收的pRI101-AN载体(结构示意图见图1)片段连接，得到重组载体。

经过测序，该重组载体为以序列表中序列2所示的核苷酸序列替换载体pRI101-AN载体的限制性核酸内切酶BamH I和Sma I识别位点间的片段，保持pRI101-AN载体的其它序列不变，得到的CdWRKY2蛋白的重组表达载体，将该重组载体命名为pRI101-AN/CdWRKY2。该载体中CdWRKY2基因由35S启动子启动，载体具有卡纳抗性基因，可在后续工作中利用硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate)筛选转化植株提供抗性。

3、转CdWRKY2拟南芥的获得

将构建好的重组载体pRI101-AN/CdWRKY2转化至农杆菌GV3101中，得到重组菌GV3101/pRI101-AN/CdWRKY2；提取质粒测序，所含质粒为pRI101-AN/CdWRKY2，说明含有该质粒的重组农杆菌GV3101/pRI101-AN/CdWRKY2为阳性。

培养重组菌GV3101/pRI101-AN/CdWRKY2至OD_600nm值0.8-1.0，得到用于侵染的农杆菌菌液；采用拟南芥花序浸花法将上述重组农杆菌菌液转入野生型拟南芥(品种为Columbia(哥伦比亚)，标为Col-0)中，转化后22℃避光平置培养一天，一天后直立并至于光下正常培养。收获转CdWRKY2拟南芥植株T0代种子，经1％次氯酸钠灭菌10分钟，无菌蒸馏水冲洗5-7遍后，播种于含有40mg/L硫酸卡那霉素的1/2MS培养基上，能够正常生长的植株(kana抗性苗)即为转基因阳性苗T1代。将T1代阳性苗转移至营养土中正常生长至收获得到种子即为T2代。

将不同株系的T2代种子经过上述方法灭菌后，播种在含有40mg/L硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate)的1/2MS培养基上生长，观察kana抗性苗与非kana抗性苗比例为3：1的株系即为CdWRKY2基因插入一个拷贝的株系，这些株系的kana抗性苗所结的种子即为T3代转CdWRKY2拟南芥。T3代kana抗性不分离的即为CdWRKY2基因T3代纯合系，命名为T3代转CdWRKY2拟南芥；后续的表型鉴定均使用此类株系。

4、转CdWRKY2植物的鉴定

用QIAGEN公司的RNeasy PlantMini Kit提取试剂盒提取编号为OE6-1和OE10-4的T3代转CdWRKY2拟南芥的RNA，反转录得到cDNA作为模板，以如下CdWRKY2-RT-F和CdWRKY2-RT-R组成的引物对进行Real-Time PCR扩增；以野生型拟南芥WT(Col-0)为对照。

CdWRKY2-RT-F:5’-GCAGCTTCAGGTGGTCTC-3’；

CdWRKY2-RT-R:5’-CGGATGTCCAGGAATGTA-3’；

内参基因为Actin2，引物为ActinF和ActinR组成的引物对。

ActinF:5'-CCTCGTCTCGACCTTGCTGGG-3'；

ActinR:5'-GAGAACAAGCAGGAGGACGGC-3'；

Real-Time PCR使用的仪器是

eprealplex(Eppendorf，德国)。采用TaKaRa公司

Premix Ex Taq^TMII(Perfect Real Time)试剂盒。

反转录后得到的cDNA稀释到1/10浓度作为Real-Time PCR模板。每个样品设三个重复。

结果如图2所示：编号为OE6-1的T3代转CdWRKY2拟南芥中CdWRKY2的相对表达量为0.542；编号为OE10-4的T3代转CdWRKY2拟南芥中CdWRKY2的相对表达量为0.703；野生型拟南芥(Col-0)中CdWRKY2的相对表达量为0；

上述结果表明，经过RNA水平检测，与野生型拟南芥(Col-0)相比编号为OE6-1和OE10-4的T3代转CdWRKY2拟南芥中CdWRKY2基因转录水平显著提高，野生型拟南芥(Col-0)中几乎检测不到CdWRKY2基因转录。

二、转CdWRKY2拟南芥表型鉴定

将上述得到的编号为OE6-1和OE10-4的T3代转CdWRKY2拟南芥和野生型拟南芥种子按照上述方法灭菌后，在1/2MS培养基上4℃避光放置4天，使种子发芽同步化。之后22℃竖直培养4天，挑选生长一致的野生型拟南芥(Col-0)、编号为OE10-4和OE6-1的T3代转CdWRKY2拟南芥分别转移至含有0mM(CK，正常条件)和100mM NaCl(Salt，盐胁迫)的1/2MS培养基上，继续竖直培养7天，每个株系20个单株。

观察耐盐表型，结果如图3、图4、图5、图6、图7所示，可以看出，在正常培养条件下转基因拟南芥株系(OE10-4和OE6-1)的地上部生物量、侧根数目、总侧根长度及叶绿素含量与野生型(Col-0)相比没有显著差异；而在盐胁迫条件下，转基因拟南芥株系(OE10-4和OE6-1)的地上部生物量、侧根数目、总侧根长度、叶绿素含量明显低于野生型(Col-0)。即狗牙根CdWRKY2基因导入拟南芥中，在盐胁迫条件下会增强植株对盐胁迫的敏感性。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 鲁东大学

<120> 狗牙根CdWRKY2蛋白及其编码基因在调控植物耐盐性中的应用

<130> GNCSY211603

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 674

<212> PRT

<213> Cynodon dactylon

<400> 1

Met Ala Gly Thr Ser Asn Arg Gly Ala Leu Ile Glu Asp Trp Thr Leu

1 5 10 15

Pro Ser Pro Ser Pro Arg Thr Leu Met Ser Ser Phe Trp Asn Glu Glu

20 25 30

Phe Ser Ser Gly Pro Phe Ser Asn Ile Phe Cys Asp Asn Ser Ser Ser

35 40 45

Lys Pro Leu Asp Gly Thr Asp Lys Ser Lys Thr Ser Phe Asp Gly Glu

50 55 60

Glu Thr Val Gln Glu Thr Lys Ala Ser Leu Gln Phe Glu Ser Asn Glu

65 70 75 80

Lys Ser Ala Ser His Gly Gly Leu Ala Glu Arg Met Ala Ala Arg Ala

85 90 95

Gly Phe Gly Val Leu Lys Ile Asp Thr Ser His Ile Ser Ser Cys Ala

100 105 110

Pro Ile Arg Ser Pro Val Thr Ile Pro Pro Gly Val Ser Pro Arg Glu

115 120 125

Leu Leu Glu Ser Pro Val Phe Leu Pro Asn Ala Thr Ala Gln Pro Ser

130 135 140

Pro Thr Thr Gly Lys Leu Pro Phe Leu Ile Pro His Asn Cys Lys Ser

145 150 155 160

Thr Thr Ser Leu Val Gln Lys Lys Thr Glu Asp Arg Leu His Asp Asn

165 170 175

Ser Ala Phe Ser Phe Gln Pro Ile Leu Lys Ser Lys Pro Pro Asn Phe

180 185 190

Leu Thr Ala Glu Lys Gly Ala Ser Val Val His Gln Asn Gln Ser Ser

195 200 205

Glu Asn Tyr Asn Gln Gln Glu Ser Ser Leu Gln Ser Asn Ser Thr Gly

210 215 220

Glu Lys Asp Tyr Thr Asn Leu Ile Arg Pro Lys Thr Cys Asp Ser Met

225 230 235 240

Leu Asp Asn Asp His Pro Ser Pro Ala Asp Glu Arg Glu Glu Ser Glu

245 250 255

Gly Asn Gln Asn Gly Glu Asp Ser Ser Ala Leu Val Thr Ala Pro Ala

260 265 270

Asp Asp Gly Tyr Asn Trp Arg Lys Tyr Gly Gln Lys Gln Val Lys Asn

275 280 285

Ser Glu His Pro Arg Ser Tyr Tyr Lys Cys Thr His Pro Tyr Cys Pro

290 295 300

Val Lys Lys Lys Val Glu Arg Ser Gln Asp Gly Gln Ile Thr Glu Ile

305 310 315 320

Val Tyr Lys Gly Ser His Ser His Pro Leu Pro Pro Pro Asn Arg Arg

325 330 335

Pro Ser Ala Pro Ser Ser His Phe Asn Asp Leu Gln Ala Asp Gly Gln

340 345 350

Glu Asn Val Gly Ser Lys Pro Ala His Asn Val Thr Ile Ser Gln Gly

355 360 365

Ser Thr Pro Asn Gly Leu Val His Asp Arg His Ser Gly Val Leu Glu

370 375 380

Thr Lys Leu Ser Gly Ser Leu Ile Thr Pro Glu Ile Ala Asp Arg Ser

385 390 395 400

Val Met Glu Ser Arg Glu Ala Gly Asp Val Ser Ser Thr Ile Ser Ser

405 410 415

Ser Asp Lys Asp Asp Lys Ala Thr His Gly Cys Ile Pro Ser Thr Phe

420 425 430

Asp Gly Asp Glu Thr Glu Ser Lys Arg Arg Lys Met Asp Val Phe Asp

435 440 445

Thr Thr Asn Thr Thr Ser Ser Thr Phe Asp Val Glu Ala Met Ala Ser

450 455 460

Arg Ala Val Arg Glu Pro Arg Ile Ile Val Gln Thr Met Ser Glu Val

465 470 475 480

Asp Ile Leu Asp Asp Gly Tyr Arg Trp Arg Lys Tyr Gly Gln Lys Val

485 490 495

Val Lys Gly Asn Pro Asn Pro Arg Ser Tyr Tyr Lys Cys Thr His Val

500 505 510

Gly Cys Gly Val Arg Lys His Val Glu Arg Ala Ser Asn Asp Leu Lys

515 520 525

Ser Val Ile Thr Thr Tyr Glu Gly Lys His Asn His Glu Val Pro Ala

530 535 540

Ala Arg Asn Ser Ser Gly His Pro Ser Ser Ser Ala Ala Pro Gln Ala

545 550 555 560

Ser Asn Leu His Gln Lys Ser Gln Pro Ala Gln Ala Gly Ile Ala Glu

565 570 575

Phe Gly Asn Val Ala Ala Tyr Gly Ser Val Cys Leu Pro Pro Leu Leu

580 585 590

Ser Ala Ala Ser Gly Gly Leu Tyr Phe Gly Met Leu Pro Pro Arg Met

595 600 605

Ala Val Gln Val Pro Ser Pro Gly Thr Ala Met Pro Val Tyr Ile Pro

610 615 620

Gly His Pro Pro Ala Met Gln His Tyr Pro Gly Leu Met Leu Pro Arg

625 630 635 640

Gly Glu Met Lys Met Asn Pro Gln Glu Gln Ser Ser Leu Pro Val Ser

645 650 655

Thr Ser Ala Thr Tyr Gln Gln Leu Met Gly Arg Leu Pro Gln Gly Pro

660 665 670

Arg Ile

<210> 2

<211> 2025

<212> DNA

<213> 狗牙根(Cynodon dactylon)

<400> 2

atggcgggaa ctagcaaccg tggagctctg atagaagatt ggacgcttcc ctcacccagc 60

ccaagaacac taatgtcaag cttctggaat gaagaattca gctctggtcc attctccaac 120

attttctgcg acaacagtag tagcaagccc ctggatggaa ctgataagag caaaacttcc 180

tttgatgggg aagaaactgt gcaagaaaca aaagcctccc tccagtttga atccaatgag 240

aaatcagcct cacacggcgg tcttgccgaa aggatggctg caagggctgg ttttggcgtt 300

ctgaaaattg atacatccca tatcagttca tgtgcaccaa ttcgatcacc tgtgaccatt 360

ccccctggtg tgagcccacg agaacttctt gagtcgcctg tttttcttcc caatgccact 420

gcgcaacctt ctcctaccac tggtaaactg ccatttctga tacctcacaa ttgtaaatca 480

acgacatcat tagtccaaaa gaagactgaa gatcgcttac atgacaattc tgcattttcc 540

ttccagccga tattgaagtc taaaccacca aactttctga ctgcagaaaa gggtgcaagt 600

gttgttcacc aaaaccagtc ctcagaaaat tataatcagc aggagtcaag tcttcagtct 660

aactctactg gggaaaagga ttacacaaac cttatcagac ctaagacgtg tgattcaatg 720

ttggacaatg atcatccttc ccctgccgat gaacgagaag aaagcgaggg aaaccaaaat 780

ggggaggact cttcagctct agtcaccgct cctgctgacg atggatataa ctggagaaaa 840

tacggacaaa aacaagttaa gaacagtgag catccaagaa gctactataa atgtactcat 900

ccatattgtc ctgtcaagaa aaaggtcgaa cgttctcaag atggtcaaat aacagagata 960

gtgtacaaag gttctcatag tcaccctttg ccacctccca accgccggcc aagtgcccct 1020

tcgtcacact tcaatgactt gcaagctgat ggccaggaga atgttggttc caaacctgcc 1080

cataacgtaa caatttcaca gggaagcacc ccaaatggcc ttgtccacga taggcacagt 1140

ggagttcttg aaacaaagct gtctggttct cttatcacac cagagattgc tgacagatct 1200

gttatggagt ctcgagaagc tggagatgtt tcctcaacaa tctcctctag tgacaaggat 1260

gacaaggcaa cacacggttg tattccttcg accttcgatg gggatgagac tgagtcaaaa 1320

agaaggaaga tggatgtttt tgacacaacc aacactacca gcagcacctt tgatgtggaa 1380

gctatggcat caagggctgt cagggagcct cggattattg tgcaaaccat gagtgaggtc 1440

gacatccttg atgatggtta ccgctggcgc aagtatgggc aaaaagttgt caaaggaaat 1500

ccaaacccaa ggagctacta caaatgcacg catgtgggat gcggggtgcg caagcatgtg 1560

gagagagctt caaatgatct caaatctgtc atcacgacat atgagggcaa gcacaaccat 1620

gaagttccag ctgctagaaa tagtagcggg catccaagct ccagcgctgc accacaggca 1680

agcaatcttc accagaagtc acaaccggct caagccggca ttgcagagtt cggcaatgtt 1740

gctgcctatg gttcagtttg tctcccacca ctactcagtg cagcttcagg tggtctctac 1800

ttcggaatgc tcccgcctcg catggcagtt caggtaccat ctcctggaac cgccatgcct 1860

gtgtacattc ctggacatcc gccagcaatg cagcattacc cagggcttat gctgccaaga 1920

ggtgagatga agatgaaccc acaggagcag tccagcttgc cagtatcaac ctcggcaaca 1980

taccagcagc tcatgggcag gttgcctcag ggtcctcgga tttaa 2025

Claims

1.蛋白质或与所述蛋白质相关的生物材料在调控植物耐盐性中的应用，其特征在于：所述蛋白质为氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；

所述生物材料为下述B1)至B4)中的任一种：

B1)编码所述蛋白质的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；

所述调控为下调；

所述植物为拟南芥。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核酸分子为编码链的编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子。

3.一种调控耐盐性的方法，其特征在于，包括向受体植物中导入CdWRKY2基因，得到对盐胁迫敏感性强于所述受体植物的目的植物；所述CdWRKY2基因编码CdWRKY2蛋白；所述CdWRKY2蛋白为氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；

所述植物为拟南芥。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述CdWRKY2基因为编码链的编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子。

5.权利要求1中所述的CdWRKY2蛋白或权利要求1中所述的生物材料。