CN108276481B

CN108276481B - 陆地棉GhLEA3基因及其在抗低温胁迫方面的应用

Info

Publication number: CN108276481B
Application number: CN201810030680.XA
Authority: CN
Inventors: 王俊娟; 叶武威; 陆许可; 阴祖军; 陈修贵; 王德龙; 王帅; 穆敏; 郭丽雪; 樊伟丽; 陈超
Original assignee: Institute of Cotton Research of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Cotton Research of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2018-01-12
Filing date: 2018-01-12
Publication date: 2021-05-28
Anticipated expiration: 2038-01-12
Also published as: CN108276481A

Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体公开了陆地棉GhLEA3基因及其在抗低温胁迫方面的应用。所述陆地棉GhLEA3基因编码一种与植物抗低温胁迫相关的蛋白质，是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与植物抗低温胁迫相关的由(a)衍生的蛋白质。所述蛋白可以在植物中(如拟南芥)表达，并使转基因植物具有较好的耐低温性，对于农作物改良和培育耐低温品种具有重要意义。

Description

陆地棉GhLEA3基因及其在抗低温胁迫方面的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及陆地棉GhLEA3基因及其在抗低温胁迫方面的应用。

背景技术

低温胁迫是制约棉花生产的主要逆境因子。植物在长期的进化过程中，形成了各种不同的生理生化机制，在遭遇低温等胁迫时细胞内会发生一系的生理、生化以及基因表达的变化(Thomashow等，2003)，会产生一系列具有保护功能的蛋白来维持其正常代谢活动。

胚胎发育晚期丰富蛋白(Late Embryogenesis Abundant，LEA蛋白)就是其中的一类(Shinozaki K等，2007；Hundertmark M等，2008)，挖掘这些与棉花非生物逆境胁迫相关功能基因，研究其编码蛋白的功能，对开展棉花抗冷分子育种具有重要意义。

胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是一类重要的植物细胞脱水保护蛋白，是一种亲水性蛋白，根据其蛋白保守结构域的不同可以将其分为不同的家族，其中第3组LEA蛋白家族(LEA3)是具有多拷贝的11个氨基酸重复基元序列(TAQAAKEKAGE)特征的一类蛋白(Dure III L et al.，1989)；大量研究表明，LEA3蛋白在植物响应各种逆境胁迫中起着重要作用(Ndong等，2002；Chakrabortee等，2007)。

本发明中提到的植物抗逆相关蛋白GhLEA3及其编码基因，目前为止，仍是一个未知功能的蛋白和基因。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种来自于陆地棉的与抗低温胁迫相关的蛋白质及其编码基因与应用。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明首先提供一种与植物抗低温胁迫相关的蛋白质，是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与植物抗低温胁迫相关的由(a)衍生的蛋白质。

所述蛋白可以在植物中(如拟南芥)表达，并使转基因植物具有较好的耐低温性，对于农作物改良和培育耐低温品种具有重要意义。

本发明还提供了一种与植物抗低温胁迫相关的基因，所述基因可为如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)编码区如SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且编码植物抗低温胁迫相关蛋白的DNA分子；

3)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码与植物抗低温胁迫相关蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA杂交实验中65℃下杂交并洗膜。

本发明还提供了一种表达盒，包含在有效连接的调控序列调控下的前述基因。

本发明还提供了一种包含前述基因或前述表达盒的重组载体。

进一步地，本发明还提供了一种构建抗低温胁迫植物的方法，包括：将前述基因、或前述表达盒、或前述重组载体导入植物。

本发明还提供了一种赋予植物低温耐受性的方法，包括：将前述基因、或前述表达盒、或前述重组载体导入植物，使导入后的植物产生足够量的蛋白质以赋予其低温耐受性。

所述植物包括但不限于拟南芥、高粱、玉米、大豆、棉花、水稻或小麦。

进一步地，本发明还提供了一种增加植物产量的方法，包括：在可产生低温环境的区域种植耐低温植物，所述耐低温植物为由前述任一方法所产生的植物，其与种植不具有低温耐受性的同种植物相比使单位面积内的植物产量增加。

所述植物同样包括但不限于拟南芥、高粱、玉米、大豆、棉花、水稻或小麦。

最后，本发明提供了前述蛋白质或基因在提高植物抗低温胁迫性方面的应用。

本发明的有益效果在于：

本发明克隆了棉花GhLEA3基因，并分析其编码蛋白的结构特性；检测其在受低温胁迫前后叶片中的表达量；构建植物表达载体，研究其亚细胞定位，并对转GhLEA3基因拟南芥后代的抗冷性进行研究，预测其可能的功能，为棉花抗逆种质资源创新提供新的基因源。

GhLEA3基因响应低温胁迫，属于低温诱导型基因，转基因试验证明GhLEA3可以提高拟南芥在低温条件的萌发能力及叶片的抗冷能力，推测GhLEA3基因可能对细胞膜起保护作用，是棉花适应低温环境的重要调控因子。可以作为重要的候选基因进培育棉花抗逆材料特别是抗冷材料，有利于对该基因在棉花对非生物胁迫适应性中的可能的作用机制进一步深入研究。

附图说明

图1为陆地棉中GhLEA3基因的PCR扩增产物；其中，M：DL2000；1：TM-1中GhLEA3基因的PCR产物。

图2为pBI121-GhLEA3::GFP表达载体酶切验证；其中，1：载体质粒；2：BglⅡ和EcoRⅠ酶切载体；M：1kB ladder。

图3为棉花GhLEA3蛋白的亚细胞定位；其中，蓝光下的照片为A、D；明场下的照片为B、E；蓝光和明场下叠加的照片为C、F；A-C:PBI121::GFP，D-F:PBI121-GhLEA3::GFP。

图4为低温胁迫条件下GhLEA3基因在棉花叶片中实时荧光定量分析。

图5为卡那霉素对转GhLEA3基因拟南芥的有效筛选。

图6为转GhLEA3基因拟南芥T₃代植株的外源基因的PCR产物；其中，M：DNA LadderMarker 2000；1：野生型Col-0拟南芥；2：拟南芥内标基因Atactin2在转基因拟南芥T₃-1株系中的扩增产物；3-6：转基因拟南芥株系T₃-1、T₃-2、T₃-3、T₃-7；M：DNA LadderMarker2000；7：转基因拟南芥株系T₃-9；8：含GhLEA3基因的质粒；9：转基因拟南芥株系T₃-11。

图7为转GhLEA3基因拟南芥T₃代叶片受低温处理后电导率测定。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的解释说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

1、CDS全长的克隆：

获取棉花总RNA，利用PrimeScript RT reagent kit with gDNA Eraser(PerfectReal Time)试剂盒(TaKaRa,China)将RNA反转录合成第一链cDNA，以反转录获得的棉花cDNA为模板，利用上游引物GhLEA3-F：5′-ATGGCGACAAGGCAAGAGAA-3′，下游引物GhLEA3-R：5′-TCACAGATTGGTTTTGTCCGA-3′，扩增GhLEA3全长cDNA序列。

所用的PCR程序为94℃，预变性5min；94℃，40s，54℃，40s，72℃，40s，30个循环；72℃，10min。

扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳(1％)进行检测。PCR产物采用Omega PCR产物纯化试剂盒进行纯化。然后将目的基因与PMD-19载体连接，转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α，倒置培养过夜，挑取白色单克隆，进行PCR检测，并且测序进行验证。测序由苏州金唯智科技有限公司北京分公司完成。其他试验均在国家棉花生物学重点实验室完成。

2、利用在线蛋白质翻译程序(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html)对获得的GhLEA3的CDS序列翻译出来，得到GhLEA3所编码的蛋白质序列。

3、pBI121-GhLEA3::GFP荧光瞬时表达载体的构建及洋葱表皮细胞中的亚细胞定位分析。

pBI121-GhLEA3::GFP荧光瞬时表达载体的构建：

利用http://bioinfo.clontech.com/infusion在线设计In-Fusion引物(上游引物为InGhLEA3-F：5′-CACGGGGGACTCTAGAATGGCGACAAGGCAAGAGAA-3′，下游引物为InGhLEA3-R：5′-AGGGACTGACCACCCGGGTCACAGATTGGTTTTGTCCGA-3′，下划线为酶切位点)，以GhLEA3质粒为模板进行扩增。选择的酶切位点为XbaⅠ和SmaⅠ，对植物表达载体pBI121::GFP进行双酶切，采用In-Fusion连接技术构建融合蛋白瞬时表达载体pBI121-GhLEA3::GFP，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆进行测序，同时选用限制性内切酶BglⅡ和EcoRⅠ验证插入位点后提取质粒。

洋葱表皮细胞中的亚细胞定位分析：

将洋葱切成1～2cm的小块，用基因枪GDS-80(购自美国Wealtec Corp)活体转化技术将pBI121::GFP质粒和pBI121-GhLEA3::GFP质粒分别轰入洋葱内表皮细胞，把转化后的洋葱贴在MS培养基上，暗处室温过夜培养。用镊子轻轻撕下转化后的洋葱内表皮放在载玻片上，在激光共聚焦显微镜FV1000(日本Olympus)下观察。

4、三叶期棉花幼苗低温胁迫后GhLEA3的实时荧光定量分析：

利用PrimerPremier5.0设计GhLEA3的荧光定量引物(上游引物为GhLEA3-F：5′-TGGAATTGGGTTTGGAGCCG-3′，下游引物为GhLEA3-R：5′-TCGCATGGTAATCGCCTCAC-3′)，以Gossypium hirsutum Histone-3(Accession No.：AF024716)作为反应中的内参基因进行实时荧光定量PCR，PCR程序设定为94℃30s；94℃5s，55℃34s，72℃34s，共40个循环，所用仪器为7500Real Time PCRSystem。实时荧光定量PCR结果分析参考AFRIN等(2015)中所报道2^–ΔΔCt方法，每处理3个生物学重复，3个技术重复，结果用于平均数统计和方差分析。

5、转GhLEA3的基因拟南芥的遗传转化、后代检测和低温逆境处理。

转GhLEA3的基因拟南芥的遗传转化及卡那霉素检测：采用农杆菌介导的花序浸染法，将外源基因表达载体pBI121-GhLEA3::GFP转化拟南芥，以野生型哥伦比亚0型为受体，取含有目的质粒的农杆菌菌株LBA4404接种于1ml新鲜LB液体培养基(50μg/ml Kan，50μg/ml Rif和100μg/ml Stre)中，28℃、200rpm摇荡培养至OD值0.6-0.8；上述菌液50μl接种至50mL新鲜LB液体培养基，培养基中加入50μg/ml卡那，28℃、200rpm培养，使OD值达到0.6-0.8；将拟南芥植株平放，使花序浸泡入菌液中40s，转化后的植株做好标记；平放拟南芥植株，避光保湿24h；生长一周后待长出新花序后再转化一次。待拟南芥成熟后按单株收种子，加干燥剂后4℃条件下保存一周以上，再按单株种植并收获，利用含有卡那霉素1/2MS培养基种植筛选纯化转基因种子，得到转GhLEA3基因拟南芥T₃代种子。种子的一部分进行转基因检测，另外一部分进行抗逆性实验。

转GhLEA3的基因拟南芥的后代分子检测：采用CTAB法提取转基因拟南芥植株DNA进行PCR扩增，所用程序为94℃，5min；94℃45s，58℃45s，72℃30s，40个循环；72℃10min。

转GhLEA3的基因拟南芥种子和苗的低温逆境处理：

T₃代拟南芥种子分别进行4℃低温条件下时进行低温萌发实验。对照为野生型拟南芥。每个处理均为30粒拟南芥种子，3个重复，分别点播在1/2MS培养基的培养基中，密封，放置4℃医用冰箱中，20d后调查萌发情况。拟南芥萌发标准以露白为准。

转基因拟南芥苗期叶片细胞膜透性测定：转基因GhLEA3拟南芥T₃代和野生型拟南芥(对照)正常育苗。拟南芥苗移载后20℃条件下正常生长14d，此时尚未抽苔。对其进行低温处理，CK：处理0h，低温胁迫：4℃处理24h，取全部叶片，剪碎，称2克左右，放到5ml离心管中，加入2ml去离子水，混匀，25℃恒温条件下放置24h后测其电导率。

实验例1

1、GhLEA3基因的克隆

以棉花TM-1叶片的cDNA为模板，扩增GhLEA3基因的完整CDS序列(图1)。得到的阅读框架共有1218bp，测序结果正确。

2、pBI121-GhLEA3::GFP荧光表达载体的酶切验证

利用pBI121作为瞬时表达载体，利用限制内切酶XbaⅠ和SmaⅠ，将GhLEA3插入植物表达载体pBI121::GFP中，构建融合蛋白瞬时表达载体，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑选阳性克隆进行测序，序列比对结果正确。选用限制性内切酶BglⅡ和EcoRⅠ酶切验证插入位点正确(图2)，表明表达载体构建成功，命名为pBI121-GhLEA3::GFP。

3、棉花GhLEA3蛋白的亚细胞定位分析

通过瞬时表达系统分析GhLEA3蛋白在洋葱表皮中的亚细胞定位，对照PBI121::GFP的绿色荧光分布在整个细胞中(图3A-图3C)，而PBI121-GhLEA3::GFP融合蛋白的绿色荧光信号大都分布在液泡和小泡里(图3D-图3F)，推测GhLEA3蛋白主要在液泡和小泡里发挥作用。该基因所编码的蛋白质在洋葱表皮中得到了表达，证明了该基因能够正常表达功能蛋白，为下一步使用基因枪活体转化技术获得转基因拟南芥和转基因棉花材料提供理论依据。

4、低温胁迫条件下GhLEA3基因在棉花叶片的表达

实时荧光定量分析(图4)表明，GhLEA3基因有受4℃低温24h胁迫后，与处理前(CK)相比，在叶片中上调表达倍数高达近10倍，说明GhLEA3基因在响应低温胁迫过程中，在叶片中起正调控作用。

5、T₃代转GhLEA3基因拟南芥的筛选与分子检测

对转GhLEA3基因的拟南芥苗的各代进行抗卡那霉素筛选，T₁代共收获20个阳性植株，对这些单株分别进行抗卡那霉素筛选，至T₂时黄化苗已占很少比例，到T₃代时已无黄化苗，表明得到了纯合的阳性植株(图5)，同时得到T₃代阳性植株6株，利用获得的阳性植株可以进行下一步的分子检测和抗逆性试验。

在35S启动子序列设计上游引物(35S-F：5′-CCGGAAACCTCCTCGGATTC-3′)，利用GhLEA3基因设计下游引物(GhLEA3-R：5′-TGGTTTTGTCCGATCGATCA-3′)，对转GhLEA3基因拟南芥T₃代单株进行PCR扩增，野生型拟南芥(WT)作为阴性对照，含有GhLEA3基因片段的质粒作为阳性对照，同时利用拟南基因Atactin2为内标基因(上游引物AtACTIN2-F：5′-TTCCTCATGCCATCCTCCGTCTT-3′，下游引物AtACTIN2-R：5′-CAGCGATACCTGAGAACATAGTGG-3′)对转GhLEA3基因的拟南芥进行扩增并检测，琼脂糖凝胶电泳(图5)显示有明显大于1200bp特异的扩增条带从转基因植株T₃-1，T₃-2，T₃-3，T₃-9，T₃-11均强表达，在单株T₃-8中也正常表达GhLEA3基因，与阳性对照质粒中扩增出的目标条带相一致，在阴性对照野生型拟南芥植株中则无GhLEA3基因条带，表明获得了稳定的转GhLEA3基因的阳性拟南芥植株，该分子检测结果与抗卡那霉素筛选的结果相一致。

6、T₃代转GhLEA3基因拟南芥在低温条件下的萌发实验

表1转GhLEA3基因拟南芥及其野生型在4℃条件下20d发芽率

由表1可以看出，转GhLEA3基因拟南芥在正常温度下(25℃)下与野生型发芽率没有差异，均为100％发芽，说明种子活力正常；经过4℃处理20d后转GhLEA3基因拟南芥的萌发率显著大于野生型的萌发率，说明转GhLEA3基因提高了拟南芥在低温条件的萌发能力。

7、T₃代转GhLEA3基因拟南芥苗期叶片细胞膜透性测定

对转GhLEA3基因拟南芥T₃代和野生型苗期分别进行4℃低温24h胁迫处理，测定其叶片的电导率，结果表明(图7)，野生型拟南芥(WT)叶片受低温胁迫后，电导率比处理前极显著上升，说明其叶片受低温胁迫后细胞膜破裂，电解质大量渗漏；而转GhLEA3基因拟南芥叶片电导率与处理前相比差异不显著，说明其细胞膜在低温胁迫条件下受到了保护。由此可以推测，GhLEA3基因所表达的蛋白在低温胁迫条件下有可能对叶片细胞膜起保护作用。

应当理解的是，对上述实施例所用试剂或原料的用量进行等比例扩大或者缩小后的技术方案，与上述实施例的实质相同。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 中国农业科学院棉花研究所

<120> 陆地棉GhLEA3基因及其在抗低温胁迫方面的应用

<141> 2018-01-05

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 405

<212> PRT

<213> Gossypium hirsutum Linn

<400> 1

Met Ala Thr Arg Gln Glu Lys Glu Gln Arg Ala Glu Ala Ala Ala Arg

1 5 10 15

Gln Ala Ala Asp Glu Leu Arg Asp Val Asn Arg Glu Arg Asp Tyr Glu

20 25 30

Glu Arg Val Ala Tyr Lys Glu Glu Trp Asp Gln Ser Pro Pro Gln Gln

35 40 45

Gln Gln Arg Pro Gly Val Ile Gly Ser Met Leu Arg Ala Val Gln Asp

50 55 60

Thr Phe Gly His Ala Lys Glu Ala Val Val Gly Asn Lys Gly His Glu

65 70 75 80

Ala Glu Asp Phe Thr Gly Arg Gly Thr Glu Lys Thr Trp Glu Met Lys

85 90 95

Asp Lys Ala Gly Glu Tyr Lys Asp Tyr Ala Thr Asp Lys Thr Lys Asp

100 105 110

Ala Ala Glu Arg Ala Lys Glu Ala Thr Asp Ala Thr Lys Glu Lys Ala

115 120 125

Ser Glu Tyr Thr Asp Tyr Ala Ala His Lys Ala Lys Glu Thr Arg Asp

130 135 140

Ser Thr Ala His Lys Ala Lys Glu Ser Lys Asp Ser Val Thr Gly Lys

145 150 155 160

Ala Ser Glu Tyr Gly Asp Tyr Val Ala Gln Lys Ala Lys Glu Ser Lys

165 170 175

Asp Ala Ala Thr Gly Lys Ala Ala Asp Tyr Ala Asp Tyr Ala Ser Gln

180 185 190

Lys Ala Lys Glu Thr Arg Asp Ser Ala Ser Gln Lys Ala Lys Glu Ala

195 200 205

Lys Asp Asn Ile Thr Gly Lys Ala Ser Glu Tyr Lys Asp Tyr Ala Ala

210 215 220

Glu Lys Ala Lys Glu Ala Lys Asp Met Thr Ala Glu Lys Ala Lys Glu

225 230 235 240

Ala Ala Gly Lys Ala Arg Glu Gly Thr Glu Tyr Ala Ala Glu Lys Ala

245 250 255

Lys Glu Gly Arg Asp Ala Thr Val Glu Lys Thr Lys Glu Tyr Thr Asn

260 265 270

Tyr Thr Val Asp Lys Ala Lys Glu Gly Lys Asp Thr Gly Val Ser Lys

275 280 285

Leu Gly Glu Leu Lys Asp Ser Ala Ala Asp Ala Ala Arg Lys Ala Met

290 295 300

Gly Phe Leu Thr Gly Lys Thr Glu Glu Thr Lys His Thr Ala Ser Glu

305 310 315 320

Thr Ala Asp Arg Thr Lys Glu Lys Leu Ser Glu Thr Thr Glu Ser Ala

325 330 335

Arg Gln Lys Met Glu Glu Met Lys Leu Lys Gly Asn Asp Gly Gly Arg

340 345 350

Gly Val Ser Glu Arg Val Val Val Lys Val Glu Asp Thr Arg Pro Gly

355 360 365

Ala Phe Ala Ser Thr Leu Lys Ala Ser Asp Gln Met Ser Gly Gln Thr

370 375 380

Phe Asn Asp Val Gly Arg Val Asn Asp Glu Gly Val Tyr Asp Arg Ser

385 390 395 400

Asp Lys Thr Asn Leu

405

<210> 2

<211> 1218

<212> DNA

<213> Gossypium hirsutum Linn

<400> 2

atggcgacaa ggcaagagaa ggagcaaagg gccgaggcgg cagcaagaca agcggcggac 60

gaacttaggg atgttaatag agaaagagat tatgaagaaa gagttgctta taaggaggaa 120

tgggatcaat ctccgccgca acagcaacag aggcccggag ttattgggag catgttgagg 180

gcggtgcaag acacgttcgg gcatgccaaa gaggccgtcg taggtaataa gggccacgag 240

gcggaggatt tcactggtcg aggtacagag aagacatggg agatgaaaga taaagctggt 300

gagtacaaag actatgcaac tgacaagaca aaggacgccg cagagagggc gaaagaggca 360

acggatgcta ccaaggaaaa ggcttctgag tatacagatt atgctgctca caaggcaaag 420

gaaaccaggg actccaccgc ccacaaggcc aaagaatcaa aggattcagt aacaggtaaa 480

gcttccgagt atggagatta tgttgcccag aaggcgaagg aatccaagga tgcggcgacc 540

ggtaaggcgg ctgattatgc agattatgct tctcagaagg ccaaggaaac tagggactcg 600

gcttcccaga aggcgaaaga agccaaggat aatatcacag ggaaggcttc cgagtataaa 660

gactatgcag cagagaaagc caaggaagca aaggacatga cagccgagaa ggcgaaggaa 720

gcggcgggga aggcaagaga ggggacggaa tatgcggcag agaaggctaa agaaggaaga 780

gatgctacag tggagaagac gaaggaatac acaaattata ccgtggataa agcaaaggaa 840

ggcaaggata ccggtgttag taagcttggg gagctgaaag actcagctgc tgatgctgct 900

aggaaggcca tgggcttcct cactggaaaa actgaagaaa cgaagcacac ggcatccgaa 960

actgcagata gaaccaagga aaagttgagc gaaacaacgg agtcagctag acagaaaatg 1020

gaagagatga agctgaaagg taatgatggt ggtcgtgggg tttcagagag ggtggtggtg 1080

aaagttgaag atacgcgacc aggagctttt gcttctacac tgaaagcatc tgatcagatg 1140

agtggccaaa ctttcaacga cgtggggcgt gtgaatgatg aaggtgttta tgatcgatcg 1200

gacaaaacca atctgtga 1218

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 3

atggcgacaa ggcaagagaa 20

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 4

tcacagattg gttttgtccg a 21

<210> 5

<211> 36

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 5

cacgggggac tctagaatgg cgacaaggca agagaa 36

<210> 6

<211> 39

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 6

agggactgac cacccgggtc acagattggt tttgtccga 39

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 7

tggaattggg tttggagccg 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 8

tcgcatggta atcgcctcac 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 9

ccggaaacct cctcggattc 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 10

tggttttgtc cgatcgatca 20

<210> 11

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 11

ttcctcatgc catcctccgt ctt 23

<210> 12

<211> 24

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 12

cagcgatacc tgagaacata gtgg 24

Claims

1.一种构建抗低温胁迫植物的方法，其特征在于，包括：将与植物抵抗低温胁迫相关的基因、或包含在有效连接的调控序列调控下的所述基因的表达盒、或包含所述基因或所述表达盒的重组载体导入植物；

所述与植物抵抗低温胁迫相关的基因的编码蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物为拟南芥、高粱、玉米、大豆、棉花、水稻或小麦。

3.一种增加植物产量的方法，其特征在于，包括：在可产生低温环境的区域种植耐低温植物，所述耐低温植物为由权利要求1或2所述的方法所产生的植物，其与种植不具有低温耐受性的同种植物相比使单位面积内的植物产量增加。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述植物为拟南芥、高粱、玉米、大豆、棉花、水稻或小麦。

5. 序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白质或序列如SEQ ID NO.2所示的基因在提高植物抗低温胁迫性方面的应用。