CN112342219A

CN112342219A - 木薯基因MeSCL30及其在抗干旱胁迫中的应用

Info

Publication number: CN112342219A
Application number: CN202011330540.8A
Authority: CN
Inventors: 顾进宝; 王振宇; 李聪; 陈衍行
Original assignee: Institute of Bioengineering of Guangdong Academy of Sciences
Current assignee: Institute of Bioengineering of Guangdong Academy of Sciences
Priority date: 2020-11-24
Filing date: 2020-11-24
Publication date: 2021-02-09
Anticipated expiration: 2040-11-24
Also published as: CN112342219B

Abstract

本发明公开了一种木薯MeSCL30基因和相关蛋白及其应用。所述MeSCL30基因编码的剪接因子其氨基酸序列如SEQ ID：No.2所示；所述MeSCL30基因包含的核苷酸序列如SEQ ID：No.1所示。过表达所述木薯MeSCL30基因能提高植物对干旱胁迫的适应性，因此该基因具有广阔的应用前景。

Description

木薯基因MeSCL30及其在抗干旱胁迫中的应用

技术领域

本发明属于遗传工程技术领域，具体地，是涉及木薯MeSCL30基因在抗干旱胁迫中的应用。

背景技术

干旱严重影响作物的生长发育、产量及品质。提高植物的抗旱能力已经成为现代植物研究工作中的关键问题之一。抗旱机理的研究是抗旱育种的基础，也是育种的关键因素之一。经历了几十年的努力，对植物抗旱的研究已从抗旱指标的表观因素分析，进入到分子及基因水平的探索。

近年来，随着分子生物学和基因组学研究的深入，抗旱基因的发掘成为目前作物抗逆遗传资源与品种改良研究的热点，越来越多的抗旱相关基因相继被克隆和鉴定。按照抗旱基因的功能，可以把植物抗旱相关基因分为两大类:第一类基因为功能基因，主要在植物抗性中起保护作用。这一类基因主要包括渗透调节基因如:海藻糖合成酶基因TPSlJf氨酸合成酶基因P5CS、甘露醇合成基因 mtlD、甜菜碱合成酶级以内BADH、及多按合成基因Odc等；保护生物大分子的活性基因如:脱水蛋白基因BDN1、水通道蛋白基因AQP和晚期胚胎发生丰富蛋白 LEA等。第二类基因为调节基因，主要在信号传导和逆境基因表达过程中起调节作用，主要包括一些转录因子基因如:DREB、MYB、bZIP、WRKY、NAC等，以及一些剪接因子如SR45a、HAI1等。剪接因子是一类参与RNA前体剪接过程的蛋白质因子。根据其功能作用，可以分为核小核糖核蛋白颗粒(snRNP)蛋白因子和非 snRNP蛋白因子，但是目前对应激信号调控选择性剪接的信息知之甚少，对其功能应用也有待进一步开发利用。

木薯是我国重要的淀粉来源，具有重要的经济价值，干旱可以影响木薯的产量。归纳起来主要有以下几个方面:第一，干旱对木薯生理的影响，主要表现在:(1)干旱胁迫影响了叶绿素的合成，促进了叶绿素的分解，从而影响了叶片的光合效率；(2)干旱胁迫导致植株氮素代谢关键酶-硝酸还原酶(NR)的活性降低，而蛋白水解酶活性增强引起脯氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺和缬氨酸等大量积累；(3)干旱胁迫导致叶片膜脂过氧化作用增强，膜透性增加，丙二醛(MDA) 含量升高，出现电解质外渗。抗氧化保护酶S0D、P0D、CAT等酶活性显著下降。第二，干旱对木薯生长发育的影响，主要表现在:(I)干旱胁迫降低了幼苗的成活；(2)抑制了根系的生长，从而影响了矿质营养的吸收。这些研究较好地阐明了干旱对木薯生长、发育及代谢影响的生理生化基础，但缺乏对木薯抗旱分子遗传机理的研究。

本发明旨在提供一种新的能够提高植物耐干旱胁迫的基因，以增强植物对干旱胁迫的耐性。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种木薯MeSCL30基因，该基因可以提高植物干旱胁迫的耐性。

实现上述目的的技术方案如下。

一种木薯MeSCL30基因，其编码序列如SEQ ID No.1所示，或为SEQ ID No.1 的完全互补序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的序列，或为SEQ ID No.1所示序列具有90％以上同源性但活性不变的序列。

所述活性是指对植物的抗干旱胁迫。

本发明另一目的是提供一种木薯MeSCL30剪接因子，该剪接因子的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，或为在SEQ ID NO.2所示序列基础上进行末端修饰或经取代、缺失或增加一个或多个氨基酸，且具有相同功能的氨基酸序列。

本发明的另一目的是提供上述木薯MeSCL30基因或木薯MeSCL30剪接因子的应用。

实现上述目的的技术方案如下。

上述木薯MeSCL30基因或木薯MeSCL30剪接因子在提高植物干旱胁迫耐性中的应用。

上述木薯MeSCL30基因或木薯MeSCL30剪接因子在植物育种中提高植物抗干旱胁迫的应用。

本发明的另一目的还提供一种提高植物抗干旱胁迫的方法。

一种提高植物干旱胁迫耐性的方法，包括在植物中转入木薯MeSCL30基因。

在其中一些实施例中，所述植物既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：烟草、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草或苜宿等。

本发明的另一目的是提供含有上述木薯MeSCL30基因的重组表达载体、重组菌、转基因细胞系。

一种重组表达载体，其为插入有上述的木薯MeSCL30基因的表达载体。

一种转入有上述重组表达载体的重组菌或转基因细胞系。

上述重组表达载体或上述的重组菌或转基因细胞系在提高提高植物干旱胁迫耐性中的应用。

本发明的另一目的是提供上述重组表达载体的制备方法。

所述的重组表达载体的制备方法，所述方法包括以下步骤：

将包括上述木薯MeSCL30基因的序列作为模板，用含有gateway接头序列的引物进行PCR扩增，扩增产物纯化后，经过BP反应插入到中间载体中。将构建好的重组中间载体通过LR反应将MeSCL30基因片段置换到pGWB514载体中，所述含有gateway接头序列的引物如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

上述木薯MeSCL30基因的序列的制备方法，包括以下步骤：

(1)木薯叶片cDNA合成：提取木薯叶片总RNA，反转录得到第一链cDNA；

(2)MeSCL30基因的PCR扩增：以木薯叶片cDNA为模板，根据MeSCL30基因序列设计引物，进行PCR扩增，回收和纯化PCR扩增产物，并测序，所述引物序列如SEQ ID No.3和SEQID No.4所示。

本发明发明人发现所述的MeSCL30基因编码的多肽可能是植物抗干旱(包括渗透)胁迫路径的关键因子，因此，可以将所述的抗干旱胁迫相关基因MeSCL30 应用于在植物抗干旱(以及渗透)胁迫领域，具有广阔的应用前景和巨大的经济效益潜力。

附图说明

图1 ：MeSCL30的PCR产物电泳图；其中，M-分子量标记；1-PCR产物。

图2 ：pDONR207载体图。

图3 ：MeSCL30基因植物表达载体pGWB514图。

图4：转MeSCL30基因过表达载体的拟南芥株系表达水平柱状图；

其中，野生型Col-0(对照)；OX6-16基因异位过表达的拟南芥株系。

图5： MeSCL30基因异位过表达拟南芥植株对渗透胁迫处理的生长表型；

图中，野生型Col-0(对照)；OX8及OX11基因异位过表达拟南芥株系。

图6 ：MeSCL30基因过量表达拟南芥植株对渗透胁迫处理后的表型统计柱状图；

图7 ：MeSCL30基因过量表达拟南芥植株干旱处理的生长表型，其中，野生型-Col-0(对照)；OX8及OX11基因过表达拟南芥株系。

图8 ：MeSCL30基因过量表达拟南芥植株对干旱胁迫处理后的存活率及花青素含量柱状图，其中，野生型-Col-0(对照)；OX8及OX11基因过表达拟南芥株系。

具体实施方式

本发明为了便于理解，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明公开内容的理解更加透彻全面。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如 Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。

本申请实施例的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。

在本文中提及的“多个”是指两个或两个以上。“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。

本发明所述的一种木薯剪接因子MeSCL30，所述多肽包括的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。所述多肽还可能为由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加而形成，但对干旱胁迫耐受的活性不变。

本发明所述木薯剪接因子基因MeSCL30包含的核苷酸序列如SEQ ID：No.1 所示，或者在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID No：1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；或者与序列表中SEQ ID No：1限定的DNA序列具有70％以上、或80％以上、或90％以上、或95％以上的同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA 序列(SEQ ID No.2)。

SEQ ID No.1

ATGAGGAGGTACAGTCCACCATATTATAGTCCTCCAAGGAGAGGCTATGGAGGCCGAGCAAGAA GCCCACCAAGGAGGGGATATGGAGGTGGTGGGGGTTATGGGAGACGCAAGGAGCAGAATCATGGAAGC CTACTGGTTCGAAATATCCCTCTTGATTGCAGACCAGAAGAACTTCGAGTTCCATTTGAGAGGTTTGG AGTTGTAAGGGACGTATATATTCCAAAGGACTATTACACAGGGGAACCTCGTGGGTTTGCATTTGTGC AGTTTGTGGATTCATATGATGCAATGGAAGCGCAGCATCGCATGAATGGACAAATTTTTGCTGGGAGG GAAATATCCGTGGTGGTTGCAGCAGAGACAAGGAAAAGGCCTGAGGAGATGCGGCAAAAGTCTAGGGT TAGAGGACCATCAGGTTATGGAGGGCGGTCATCATATTATGGACGTTCTCGCTCTCGATCACTCTCCC GATCACGTTCCCCTCGCCATCATTTGAGTTCTCGGTCTCGATATCGTTCAAGGTCATATTCTCCTGCC TCAAGGCGGCGGGACTACTCTGCTTCCCCAGGTAGAAGGCATGTTGACCATCTAAGGTCTCCTAGGGG TCCTCCACCAGGGCAAGATGGTGATCGCATTCGCAGATCATACTCTCCTGGTTATGGTGTGGATGAAA ATGGCCATGGTTATACCGAGAAACCTCAATATGAGTCCGAGGAAGCAAGAGCATGGAGGCCATCGCCT GGTAGAGCTTCAAGGTCACCCTCTGGATCTCGATCTAGATCAGCTGATATATCACCCAGGCGCAGCAG ATGA

SEQ ID No.2

MRRYSPPYYSPPRRGYGGRARSPPRRGYGGGGGYGRRKEQNHGSLLVRNIPLDCRPEELRVPFE RFGVVRDVYIPKDYYTGEPRGFAFVQFVDSYDAMEAQHRMNGQIFAGREISVVVAAETRKRPEEMRQK SRVRGPSGYGGRSSYYGRSRSRSLSRSRSPRHHLSSRSRYRSRSYSPASRRRDYSASPGRRHVDHLRS PRGPPPGQDGDRIRRSYSPGYGVDENGHGYTEKPQYESEEARAWRPSPGRASRSPSGSRSRSADISPR RSR

本发明所述的木薯剪接因子的克隆方法，包括以下步骤：

(2)MeSCL30基因的PCR扩增：以木薯叶片cDNA为模板，根据MeSCL30基因序列设计引物，进行PCR扩增，回收和纯化PCR扩增产物，并测序。

作为本发明的一种优选，所述引物为

正向引物：5’-AAAAAGCAGGCTTAATGAGGAGGTACAGTCCACC-3’，SEQ ID No.3；

反向引物：5’-AGAAAGCTGGGTATCTGCTGCGCCTGGG-3’，SEQ ID No.4。

本发明的MeSCL30基因在构建到植物表达载体中时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强子。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所使用的载体进行加工，如加入植物可选择性标记(GUS基因、萤光素酶基因等)或具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素，卡那霉素等)。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：烟草、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草或苜宿等。

含有本发明所述MeSCL30基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系和重组菌等基因工程产品均属于本发明的保护范围。

下面将结合具体实施例，对本发明进行进一步的说明。

实施例1：克隆MeSCL30基因

以木薯叶片cDNA为模板，根据木薯基因组数据库信息设计引物，进行 MeSCL30基因的PCR扩增，得到PCR扩增产物。设计引物如下所示：

正向引物：5’-AAAAAGCAGGCTTAATGAGGAGGTACAGTCCACC-3’SEQ ID No.3；

反向引物：5’-AGAAAGCTGGGTATCTGCTGCGCCTGGG-3’SEQ ID No.4。

PCR反应体系和扩增条件如表1所示。

表1 PCR反应体系与扩增条件

将扩增获得的PCR产物在0.8％的琼脂糖凝胶电泳，凝胶电泳结果如图1所示。电泳结束后，采用Qiagen公司PCR产物纯化试剂盒，按照产品说明回收纯化所述的PCR产物，并送Invitrogen测序，验证序列结果。

实施例2:构建过表达载体

(1)以实施例1中MeSCL30全长片段为模板，用含有gateway接头序列的引物进行PCR扩增，扩增产物经纯化后，经过BP反应插入到invitrogen公司 pDONR-207(图2)载体中。将构建好的BP反应载体通过LR反应将MeSCL30片段置换到pGWB514(图3)载体中。gateway反应引物序列如下：

MeSCL30_attB1_F：5'-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTA-3'SEQ ID No.5

MeSCL30_attB1_R：5'-GGGGACCACTTTGTAC AAGAAAGCTGGGTA-3'SEQ ID No.6

(2)PCR反应均采用Phusion高保真聚合酶进行PCR克隆。

PCR反应体系与条件与实施例1相同。

(3)BP反应：

(a)在200μL离心管中准备8μL的反应体系，包括：1-7μL的attB-PCR 产物(约15～150ng，浓度≥10ng/μL)、1μL的pDONR-207载体(150ng/μL) 和适量的TE缓冲液(pH 8.0)，在室温下混匀；

(b)将BP Clonase^TM II酶混合物在冰上静置2min融化，轻轻震荡2次，混匀待用；

(C)向(1)准备的样品中加入2μL的BP Clonase^TM II酶混合物，轻轻地将体系混匀；

(d)将BP Clonase^TM II酶混合物放回到-20℃℃或者-80℃保存；

(e)将反应体系放在25℃温浴1h；

(f)向反应体系中加入1μL的蛋白酶K溶液，轻轻震荡，然后将样品放在37℃温浴10min，以便终止BP反应；

(g)将混合液转化大肠杆菌后，取转化菌液涂在含SPC抗性的LB平板上，挑取菌落至含相应抗生素培养基溶液中摇菌培养，确认后提取阳性克隆的质粒备用。

(4)LR反应：

(a)在200μL离心管中准备8μL的反应物，包括：1-7μL获得的 pDONR-207质粒(50-150ng)、1μL的目的载体(150ng/μl)和适量的TE 缓冲液(pH 8.0)，在室温下混匀；

(b)将LR Clonase^TM II酶混合物静置在冰上2min融化，轻轻震荡2次以混匀；

(c)加入2μL的LR Clonase^TM II酶混合物，轻轻震荡将体系混匀；

(d)将LR Clonase^TM II酶混合物放回到-20℃或者-80℃冰箱保存；

(e)将反应体系放在25℃温浴反应1h；

(f)向反应体系中加入1μL的蛋白酶K溶液以终止LR反应，轻轻震荡后，将样品放在37℃静置10min；得到pGWB514重组载体。

(g)将LR反应产物转化大肠杆菌后涂板、筛选阳性克隆、提取质粒，然后进行酵母双杂和农杆菌转化等实验。

实施例3：农杆菌介导的拟南芥转化及转基因植株的鉴定

(1)冻融法转化农杆菌

将1μg(200ng/μL)pHellsgate12重组载体加入到100μL感受态农杆菌LBA4404中，混匀后在冰上静置5min，放入液氮中冷冻5min，然后从液氮中取出，放入37℃水浴锅中水浴5min，再在冰上静置5min后，加入500μL LB溶液，在28℃、充分震荡条件下恢复培养4h，最后将菌液均匀涂抹于选择性平板培养基上，28℃下培养48h。

pGWB514重组载体的转化方法同上。

将上述农杆菌菌液在5000rpm下离心，弃去上清后，用100ml 5％蔗糖和 0.5％L-77混合溶液重悬沉淀，得到农杆菌转化溶液；将拟南芥开花的花序浸入农杆菌转化溶液中，静置30sec，用黑色塑料袋包裹处理过的植株，避光24h，然后除去塑料袋，在正常条件下培养至成熟，收获种子。

提取野生型植株和8株转MeSCL30基因T0代植株的总RNA,进行Real time-PCR分析，内参基因为Ubiquitin，分析不同株系的表达情况。选取表达量最高的两株OX8及OX11(图4)。单株收取种子分别播种，用潮霉素抗生素筛选Tl代植株的分离情况，如此重复直至T3代获得遗传稳定的转基因株系。

MeSCL30 qRT引物

MeSCL30_qRT_F：5’-GGAGACGCAAGGAGCAGAAT-3’SEQ ID No.7；

MeSCL30_qRT_R：5’-CGTCCCTTACAACTCCAAACC-3’SEQ ID No.8。

内参基因引物

Ubiquitin_F：5’-GCCTCCCAAGGTAGCTTTCA-3’SEQ ID No.9；

Ubiquitin_R：5’-GGTTAATGCAGGGCTCCACT-3’SEQ ID No.10。

实施例4：转基因拟南芥皿上抗旱胁迫鉴定

将野生型拟南芥植株和2个转基因系OX8及OX11过表达拟南芥种子均匀点到1/2MS板上，垂直放在植物培养箱中生长，4天后将长势一致的拟南芥苗移到浓度为300mM山梨糖醇及普通MS培养基上，置于光照培养室中培养10天。观察过表达植株与野生型的性状。可以明显的看出在普通MS培养基上野生型Col-0 与OX8、OX11长势相似，而在300mM山梨糖醇的MS培养基上，过表达MeSCL30 的植株(OX8、OX11)根系更长(图5，图6)，同时存活率以及鲜重都要比非转基因植株要好(图6)。

实施例5：转基因拟南芥土培条件下抗旱表型鉴定

将野生型拟南芥植株和2个转基因系OX8及OX11过表达拟南芥种子均匀点到MS培养基上，待4天后移苗，置于光照培养室中培养10天后进行失水处理。观察过表达植株与野生型的性状。可以明显的看出在浇水情况下野生型Col-0 与过表达MeSCL30的植株OX8、OX11长势相似，而在干旱处理情况下转基因植株的存活率较高，同时过表达株系的花青素(anthocyan)含量更低，叶绿素 (chlorophyll)含量更高，表明过表达株系更能耐受干旱胁迫(图7，图8)。

由此可见，本发明所述MeSCL30基因在植物抗旱以及抗渗透胁迫领域将有着广阔的应用前景。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 广东省科学院生物工程研究所

<120> 木薯基因MeSCL30及其在抗干旱胁迫中的应用

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 816

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atgaggaggt acagtccacc atattatagt cctccaagga gaggctatgg aggccgagca 60

agaagcccac caaggagggg atatggaggt ggtgggggtt atgggagacg caaggagcag 120

aatcatggaa gcctactggt tcgaaatatc cctcttgatt gcagaccaga agaacttcga 180

gttccatttg agaggtttgg agttgtaagg gacgtatata ttccaaagga ctattacaca 240

ggggaacctc gtgggtttgc atttgtgcag tttgtggatt catatgatgc aatggaagcg 300

cagcatcgca tgaatggaca aatttttgct gggagggaaa tatccgtggt ggttgcagca 360

gagacaagga aaaggcctga ggagatgcgg caaaagtcta gggttagagg accatcaggt 420

tatggagggc ggtcatcata ttatggacgt tctcgctctc gatcactctc ccgatcacgt 480

tcccctcgcc atcatttgag ttctcggtct cgatatcgtt caaggtcata ttctcctgcc 540

tcaaggcggc gggactactc tgcttcccca ggtagaaggc atgttgacca tctaaggtct 600

cctaggggtc ctccaccagg gcaagatggt gatcgcattc gcagatcata ctctcctggt 660

tatggtgtgg atgaaaatgg ccatggttat accgagaaac ctcaatatga gtccgaggaa 720

gcaagagcat ggaggccatc gcctggtaga gcttcaaggt caccctctgg atctcgatct 780

agatcagctg atatatcacc caggcgcagc agatga 816

<210> 2

<211> 271

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Arg Arg Tyr Ser Pro Pro Tyr Tyr Ser Pro Pro Arg Arg Gly Tyr

1 5 10 15

Gly Gly Arg Ala Arg Ser Pro Pro Arg Arg Gly Tyr Gly Gly Gly Gly

20 25 30

Gly Tyr Gly Arg Arg Lys Glu Gln Asn His Gly Ser Leu Leu Val Arg

35 40 45

Asn Ile Pro Leu Asp Cys Arg Pro Glu Glu Leu Arg Val Pro Phe Glu

50 55 60

Arg Phe Gly Val Val Arg Asp Val Tyr Ile Pro Lys Asp Tyr Tyr Thr

65 70 75 80

Gly Glu Pro Arg Gly Phe Ala Phe Val Gln Phe Val Asp Ser Tyr Asp

85 90 95

Ala Met Glu Ala Gln His Arg Met Asn Gly Gln Ile Phe Ala Gly Arg

100 105 110

Glu Ile Ser Val Val Val Ala Ala Glu Thr Arg Lys Arg Pro Glu Glu

115 120 125

Met Arg Gln Lys Ser Arg Val Arg Gly Pro Ser Gly Tyr Gly Gly Arg

130 135 140

Ser Ser Tyr Tyr Gly Arg Ser Arg Ser Arg Ser Leu Ser Arg Ser Arg

145 150 155 160

Ser Pro Arg His His Leu Ser Ser Arg Ser Arg Tyr Arg Ser Arg Ser

165 170 175

Tyr Ser Pro Ala Ser Arg Arg Arg Asp Tyr Ser Ala Ser Pro Gly Arg

180 185 190

Arg His Val Asp His Leu Arg Ser Pro Arg Gly Pro Pro Pro Gly Gln

195 200 205

Asp Gly Asp Arg Ile Arg Arg Ser Tyr Ser Pro Gly Tyr Gly Val Asp

210 215 220

Glu Asn Gly His Gly Tyr Thr Glu Lys Pro Gln Tyr Glu Ser Glu Glu

225 230 235 240

Ala Arg Ala Trp Arg Pro Ser Pro Gly Arg Ala Ser Arg Ser Pro Ser

245 250 255

Gly Ser Arg Ser Arg Ser Ala Asp Ile Ser Pro Arg Arg Ser Arg

260 265 270

<210> 3

<211> 34

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

aaaaagcagg cttaatgagg aggtacagtc cacc 34

<210> 4

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

agaaagctgg gtatctgctg cgcctggg 28

<210> 5

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctt a 31

<210> 6

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggta 30

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

ggagacgcaa ggagcagaat 20

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

cgtcccttac aactccaaac c 21

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

gcctcccaag gtagctttca 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ggttaatgca gggctccact 20

Claims

1.一种木薯MeSCL30基因，其特征是，其编码序列如SEQ ID No.1所示，或为SEQ IDNo.1的完全互补序列，或为编码氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，或为SEQ IDNo.1所示序列具有90％以上同源性但活性不变的序列。

2.一种木薯MeSCL30剪接因子，其特征是，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，或为在SEQ ID NO.2所示序列基础上进行末端修饰或者经取代、缺失、增加一个或多个氨基酸，且具有相同功能的氨基酸序列。

3.权利要求1所述的木薯MeSCL30基因或权利要求2所述的木薯MeSCL30剪接因子在提高植物干旱胁迫耐性中的应用。

4.权利要求1所述的木薯MeSCL30基因或权利要求2所述的木薯MeSCL30剪接因子在植物育种中提高所述植物干旱胁迫耐性的应用。

5.一种提高植物干旱胁迫耐性的方法，其特征是，包括在植物中转入权利要求1所述的木薯MeSCL30基因。

6.根据权利要求3或4的应用，或权利要求5所述的方法，其特征是，所述植物是烟草、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草或苜宿。

7.一种重组表达载体，其特征是，其为插入有权利要求1所述的木薯MeSCL30基因的表达载体。

8.一种转入有权利要求7所述重组表达载体的重组菌或转基因细胞系。

9.权利要求7所述重组表达载体或权利要求8所述的重组菌或转基因细胞系在提高植物干旱胁迫耐性中的应用。

10.权利要求7所述的重组表达载体的制备方法，其特征是，所述方法包括以下步骤：将包括权利要求1所述木薯MeSCL30基因的序列作为模板，用含有gateway接头序列的引物进行PCR扩增，扩增产物纯化后，经过BP反应插入到中间载体中；将构建好的重组中间载体通过LR反应将MeSCL30基因片段置换到pGWB514载体中，所述含有gateway接头序列的引物如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。