CN111961124A - 一种植物早熟蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种植物早熟蛋白及其编码基因与应用，其中，植物早熟蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；编码基因序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的植物早熟蛋白可应用于培育早熟植物新品种、调控植物抽穗期、成熟期以及使植物小穗发育提前。本发明所述的植物早熟蛋白在小麦中过表达后，使转基因小麦的抽穗及成熟期显著提前。

Description

一种植物早熟蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及冰草B型细胞分裂素响应调节子AcRR-B蛋白及其应用。

背景技术

小麦(Triticum aestivum L.)是世界重要的粮食作物，养活世界近三分之一的人口。我国是世界小麦生产与消费大国，保证小麦产量与品质对国民经济的发展具有非常重要的意义。抽穗期是小麦重要的农艺性状之一，直接反应小麦生育期的长短，也是决定小麦结实粒数的关键时期。小麦抽穗期受光照、温度、生长环境以及内源激素的影响，适宜的抽穗期在维持小麦高产、稳产中发挥重要的作用。

作物早熟有利于农作物多熟制度、耕作制度的实施，也可以帮助小麦避开后期高温、高湿带来的病虫害，使小麦更好地适应气候变化。近年来，抽穗期的调控机制逐渐成为分子生物学家和育种家关注和研究的热点。但由于小麦基因组庞大，重复序列多，遗传背景复杂，小麦抽穗开花相关基因及调控机制的研究报道较少。

冰草(Agropyron cristatum)(PPPP，2n＝4x＝28)是一种多年生、禾本科、冰草属的小麦野生近缘植物，具有多花多粒、多分蘖、抗逆性极强的特性。通过小麦-冰草远缘杂交创制小麦-冰草附加系、易位系、渐渗系和缺失系等种质材料应用到小麦育种中，有助于提高小麦的各类农艺性状，如产量、品质、耐逆性、成熟期等。此外，挖掘冰草中高效优异基因应用到小麦分子育种中，也可实现小麦各类农艺性状的改良。

发明内容

本发明的第一方面提供一种蛋白，所述蛋白来源于冰草转录组的一个B型细胞分裂素响应调节因子，将其命名为AcRR-B蛋白。AcRR-B蛋白可以是：

(1)氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，由622个氨基酸残基组成。且为了便于纯化，可在SEQ ID No.2所示的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1 标签的序列

(2)在SEQ ID No.2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签所得到的融合蛋白质。

(3)对SEQ ID No.2所示的氨基酸序列，进行不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质，可以人工合成该具有相同功能的蛋白质，或者先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

(4)与SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质。

本发明的第二个方面提供了AcRR-B蛋白编码基因AcRR-B的碱基序列，AcRR-B基因可以是：

(1)基因编码序列如SEQ ID No.1所示的序列，由1869个核苷酸组成。

(2)由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸得到编码相同功能蛋白的基因。

(3)与SEQ ID No.1所示的序列具有75％，80％，85％，88％，90％或95％以上同源性的编码相同功能蛋白的基因。本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明编码AcRR-B蛋白的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明分离得到的AcRR-B蛋白的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码AcRR-B蛋白且具有相同功能，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示。

本发明的第三方面是提供包含AcRR-B基因的生物材料，包括表达盒、重组载体、重组微生物和转基因植物细胞系。

含有编码AcRR-B蛋白的核酸分子的表达盒(AcRR-B基因表达盒)，是指能够在宿主细胞中表达AcRR-B的DNA，该DNA不但可包括启动AcRR-B转录的启动子，还可包括终止AcRR-B转录的终止子。

上述生物材料中，所述重组载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。在本发明中，所述重组载体为将AcRR-B基因插入pCAMBIA330载体得到的重组载体，具体为将SEQ IDNo.1自5'端第1-1869位核苷酸所示的DNA片段插入pCAMBIA3300载体的BamH I和Sma I酶切识别位点之间得到的重组载体。

上述生物材料中，所述重组微生物可为酵母、细菌、藻或真菌，如农杆菌。

上述生物材料中，所述转基因植物细胞系均不包括繁殖材料。

本发明第四方面提供AcRR-B蛋白、AcRR-B基因或含AcRR-B基因的生物材料在植物育种、种质资源改良、制种或培育转基因植物中的应用。所述转基因植物理解为不仅包含将所述AcRR-B基因转化受体植物得到的第一代转基因植物，也包括其子代；对于转基因植物，可以在该物种中繁殖该基因，也可用常规育种技术将该基因转移进入相同物种的其它品种，特别包括商业品种；所述转基因植物包括转基因植物产生的种子、愈伤组织、完整植株和细胞。

本发明第五方面提供AcRR-B蛋白、AcRR-B基因或含AcRR-B基因的生物材料在在培育早熟植物新品种中的应用，培育早熟植物新品种具体体现在如下：(1)在正常生长条件下，转基因小麦的抽穗期较对照品种Fielder提前；(2)在正常生长条件下，转基因小麦的成熟期较对照品种Fielder提前。

本发明第六方面提供AcRR-B蛋白、AcRR-B基因或含AcRR-B基因的生物材料在调控抽穗、开花相关基因TaVRNA1、TaVRNB1、TaVRT、TaFT表达量或下调TaSOC表达量中的应用。qRT-PCR结果表明，转基因小麦中抽穗、开花相关基因的表达量显著高于对照，其中抽穗、开花相关基因TaVRNA1、TaVRNB1、TaVRT、TaFT均显著上调表达，而TaSOC显著下调表达，TaPHY-C-1轻微下调表达。

本发明第七方面提供AcRR-B蛋白、AcRR-B基因或含AcRR-B基因的生物材料在调控植物抽穗期、成熟期提前或使植物小穗发育提前中的应用。

本发明第八方面提供AcRR-B蛋白、AcRR-B基因或含AcRR-B基因的生物材料在促进植物成熟中的应用，该应用可以通过调控植物AcRR-B蛋白的过表达来实现。

在上述应用中，所述植物为单子叶植物，单子叶植物具体可为小麦；所述小麦具体可为Fielder、周麦18、济麦22等。

本发明的有益效果在于：本发明的实验证明，将冰草AcRR-B基因导入小麦中得到转基因小麦，正常生长条件下，转基因小麦较未转基因小麦抽穗期和成熟期显著提前。本发明提供的蛋白和基因提供人为控制抽穗期、成熟期相关基因表达的基础，可在培育早熟小麦品种中发挥重要作用。

附图说明

图1为AcRR-B转基因小麦与未转基因小麦的抽穗表型和抽穗期统计；

其中A为AcRR-B转基因小麦与未转基因小麦的抽穗表型对比；B为AcRR-B转基因小麦及未转基因小麦的抽穗期对比。

图2为AcRR-B转基因小麦与为转基因小麦小穗发育进程对比。

图3为AcRR-B转基因小麦中抽穗、开花相关基因表达量分析。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例中使用符号“％”，如无特殊说明，为质量百分含量。

实施例中的普通小麦(Triticum aestivum L.)品种Fielder记载于文献“孙海桃等，小麦TaDREB6转录因子互作蛋白的筛选，中国农业科学，2011,44(22)：4740-4747.”中，公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得；冰草从国家种质库获得，编号Z559。上述生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。

实施例1AcRR-B基因的克隆

1、AcRR-B的扩增

(1)植物材料的处理：

取抽穗期的冰草Z559叶片，用液氮速冻，-80℃保存备用。

(2)总RNA的提取和cDNA的合成：

采用北京庄盟国际生物基因科技有限公司的植物总RNA提取试剂盒，进行冰草叶片总RNA的提取。具体步骤如下：

①取约0.1g样品放至2.0mL离心管中，液氮速冻后用磨样机进行研磨；

②向离心管中加入1mL RNA pure，迅速振荡混匀，并于冰上静置2min；

③向离心管中加入200μL氯仿，迅速剧烈振荡40s，并于冰上静置3min；

④在提前预冷的离心机中4℃，12000rpm离心10min，将上层水相(约600μL)转移至新的2.0mL离心管中；

⑤向新的离心管中加入0.5倍体积的无水乙醇，再加入100μL的结合液，颠倒混匀后转移至吸附柱中，于离心机中4℃，12000rpm离心30s；

⑥向吸附柱中加入700μL的漂洗液进行漂洗，于离心机中4℃，12000rpm离心30s；

⑦重复步骤⑥；

⑧将吸附柱从收集管中取出套在RNase-free的1.5mL离心管中，静置1min晾干漂洗液，向吸附柱的滤膜中央加入60μL的RNase-free ddH2O，使RNA充分溶解；

⑨用分光光度法和1％琼脂糖凝胶电泳分析RNA的完整性；

⑩取1μg RNA进行cDNA的合成，剩余样品保存于-80℃备用。

采用北京全式金生物技术有限公司的EasyScript One-Step gDNA Removal andcDNA Synthesis SuperMix试剂盒进行cDNA的合成，所用反转录的体系见表2。

表2 cDNA合成反转录体系

(3)AcRR-B的PCR扩增

采用高保真酶Primerstar(宝生物工程公司，北京)，以冰草叶片cDNA为模板，设计特异引物进行PCR扩增，扩增体系见表3。

表3 PCR扩增反应体系

将PCR产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳分离，切下大小约为1.9kb的条带进行胶回收，胶回收采用Agarose Gel DNA Purification Kit Ver.2.0(TaKaRa，日本)。具体步骤如下：

①将含有目的片段的琼脂糖凝胶切下，装入2.0mL的离心管中；

②加入约3倍体积的Buffer GM，待胶块充分溶解，溶解程度直接影响回收效率；

③将溶解后的溶液转移至Spin Column中，静置5-10min，离心机中12000rpm离心1min，弃滤液；

④往Spin Column中加入约600μL的漂洗液Buffer WB，12000rpm离心1min，弃滤液；

⑤重复步骤④；

⑥通风橱中静置2min，吹干漂洗液；

⑦将吸附柱转移至新的1.5mL离心管中，向滤膜中央加入50μL ddH2O，待充分溶解后，于离心机中10000rpm离心1min，即为回收产物；

⑧测浓度。

2、AcRR-B的克隆

将得到的胶回收产物连接至零背景克隆载体pEASY-Blunt(全式金，北京)，并用热激法转化入大肠杆菌，37℃培养过夜后挑取单克隆进行测序，结果表明该PCR产物测序结果与SEQ ID No.1完全一致，即为AcRR-B基因，其开放阅读框架为SEQ ID No.1的5′端第1-1869位核苷酸，将该基因编码的蛋白命名为AcRR-B蛋白，该蛋白的氨基酸序列为SEQ IDNo.2，由622个氨基酸残基组成。

实施例2转AcRR-B小麦的获得及其抽穗期、成熟期分析

1、转AcRR-B小麦的获得

(1)重组表达载体的构建：

可用现有的表达载体构建含有所述AcRR-B基因的重组载体。植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。如pAHC25、pBin438、pCAMBIA1302、pCAMBIA2300、pCAMBIA2301、pCAMBIA3300、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pBI121、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb(CAMBIA公司)等。植物表达载体还可包含外源基因的3′端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3′端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂碱合成酶基因Nos)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3′端转录的非翻译区均具有类似功能。使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必须与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、抗生素的标记基因(如赋予对卡那霉素和相关抗生素抗性的nptII基因，赋予对除草剂膦丝菌素抗性的bar基因，赋予对抗生素潮霉素抗性的hph基因，和赋予对氨甲喋呤抗性的dhfr基因，赋予对草甘磷抗性的EPSPS基因)或是抗化学试剂标记基因等(如抗除莠剂基因)、提供代谢甘露糖能力的甘露糖-6-磷酸异构酶基因。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以抽穗期和成熟期筛选转化植株。

在本发明中所采用的重组载体的构建方法为：

①AcRR-B基因的扩增，用植物总RNA提取试剂盒(庄盟生物，北京)提取冰草叶片总RNA，反转录得到cDNA，以cDNA为模板，用引物AcRR-B-CUB-BamH I-F和AcRR-CUB-Sma I-R进行扩增，得到PCR产物。AcRR-B-CUB-BamH I-F和AcRR-CUB-Sma I-R引物分别引入BamH I和Sma I酶切位点，引物序列如下：AcRR-B-CUB-BamH I-F：5'-GCGGATCCATGACCGTGGAGGGGAGG-3'；AcRR-CUB-Sma I-R：5'-TCCCCCGGGTTACCCAATATAACTCTGAA；

②表达载体酶切，表达载体选用pCAMBIA3300，用限制性内切酶BamH I和Sma I(赛默飞公司，美国)进行酶切，37℃，酶切40min，用1.5％琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物，并回收载体骨架，回收方法同上，酶切体系见表4。

表4 pCAMBIA3300酶切体系

③连接与转化

采用In-Fusion HD克隆试剂盒(TaKaRa公司，日本)，将步骤①得到的扩增产物和步骤②得到的载体骨架进行连接，连接体系见表5：

表5 In-Fusion HD连接体系

将连接产物用热击法转化入Trans 10菌株(全式金公司，北京)，37℃过夜培养，挑取阳性克隆提取质粒进行测序。测序结果表明，该质粒为SEQ ID No.1的DNA片段插入pCAMBIA3300载体的BamH I和Sma I酶切位点间得到的载体，并将该质粒载体命名为pCAMBIA3300-AcRR-B。

(2)重组菌的构建：

①将实施例2中步骤(1)获得的重组质粒pCAMBIA3300-AcRR-B通过冻融法导入农杆菌EHA105菌株(全式金公司，北京)，得到重组农杆菌。

②提取重组农杆菌的质粒进行测序，结果表明该质粒为pCAMBIA3300-AcRR-B，证明该重组菌为阳性重组农杆菌，并将其命名为EHA105/pCAMBIA3300-AcRR-B。

(3)转AcRR-B小麦的获得：

转基因小麦的获取采用农杆菌介导法，具体方法参考Ding等的研究方法(Ding etal.2009)。

①将重组农杆菌EHA105/pCAMBIA3300-AcRR-B接种于YEP液体培养基中，28℃、3000rpm培养约30小时；

②将步骤①获得的菌液转至YEP液体培养基(含50μg/ml利福平及卡那)中，28℃、300rpm培养约14小时，使菌液OD600达到1.5-3.0)；

③收集步骤②获得的菌体，4℃、4000g离心10min，用10％蔗糖(含0.02％silwet)稀释至OD600约为1.0；

④超净工作台内，用1ml注射器针头挑取农杆菌菌落，注射受体小麦Fielder幼胚，然后将注射后的幼胚在无菌、高湿条件下培养，组织培养至小麦幼苗长出，将幼苗移至营养土中继续培养至成熟，收获T₀代转AcRR-B小麦种子。

(4)转基因小麦阳性检测：

取T₀代转基因小麦叶片，液氮速冻，用植物基因组DNA提取试剂盒(天根，北京)提取基因组DNA，根据pCAMBIA3300载体多克隆位点两端序列和AcRR-B基因序列设计特异性引物，进行PCR扩增，通过电泳检测阳性目的条带，每次检测都设置受体阴性对照，以避免假阳性条带的出现。

2、转AcRR-B过表达小麦的抽穗期、成熟期分析

(1)转AcRR-B小麦株系表达量分析：

用植物总RNA提取试剂盒(庄盟，北京)提取T₀代转基因小麦叶片总RNA，反转录为cDNA。根据AcRR-B CDS序列设计特异引物，采用实时萦光定量法对转基因株系进行表达量分析。

qRT-PCR检测小麦阳性株系表达量的具体步骤如下：采用美国ABI公司的Step oneplus实时萦光定量PCR仪进行检测，用北京全式金生物技术有限公司TransStart TopGreen qPCR SuperMix(+Dye I)试剂盒进行反应，反应体系如表6：

表6 实时荧光定量PCR反应体系

反应过程包括：94℃，30s；94℃，5s，58℃，15s，72℃，34s，共40个循环，Actin作为内参，计算方法采用2^-ΔΔCT法。

qRT-PCR结果显示，编号为AcRR-B-1、AcRR-B-3和AcRR-B-6的株系表达量较高，繁殖至T₃代，进行后续表型鉴定试验。

(2)种子处理

将编号为AcRR-B-1、AcRR-B-3和AcRR-B-6的T₃代转AcRR-B小麦种子、受体Fielder种子，每个株系取10粒种子，先用1％的双氧水4℃低温处理1天，再换水4℃处理3天，目的是使种子发芽一致。

(3)表型鉴定

将处理后的小麦种子种入营养土中，在正常生长条件(22℃，16h光照/8h黑暗，相对湿度70％)下生长，期间观察表型变化，记录抽穗期、散粉期以及成熟期，并及时拍照。试验重复3次，以保证试验结果可靠性。

试验结果如图1所示。结果表明，在正常生长条件下，转基因小麦抽穗期较对照显著提前，其中AcRR-B-1和AcRR-B-3株系较对照提前13天抽穗，AcRR-B-6株系较对照提前11天抽穗。此外，转基因小麦成熟期也较对照显著提前，其中AcRR-B-1和AcRR-B-3株系较对照提前13天，AcRR-B-6株系较对照提前11天。

为进一步研究转基因小麦提前发育时期，我们对转基因小麦和对照品种的小穗原基分化进程进行了观察。将转基因小麦和对照种子用双氧水和冷处理(方法同上文)后，播种入营养土中，正常生长条件(22℃，16h光照/8h黑暗，相对湿度70％)下生长至第18天(大约为单棱期)时，开始观察小穗原基，每3天观察一次，取样时转基因小麦和对照品种各取至少5株，以确定其发育时期，取样时应注意尽量挑选生长状态均匀一致的苗，以避免试验误差。

试验结果如图2所示。结果表明，在正常生长条件下，转基因小麦从单棱期开始就较对照品种Fielder表现出发育提前，生长至第27天时，对照品种为单棱期，转基因品种为二棱末期；生长至第33天，对照品种为二棱期，而转基因品种已经进入雌雄蕊分化期。

(4)转基因植株中抽穗、开花相关基因的表达量分析

采用实时萦光定量PCR的方法对转基因植株中抽穗、开花相关基因的表达量进行分析，具体步骤如下：

①模板制备：取25天大小的转基因植株和对照小麦叶片，液氮速冻，提取植物总RNA，反转录为cDNA，作为qRT-PCR分析的模板，RNA提取和cDNA合成方法同上文；

②引物设计：从前人研究中查找小麦抽穗、开花相关基因，根据其CDS序列设计特异性引物，作为qRT-PCR分析的引物；

③qRT-PCR分析：qRT-PCR操作步骤同实施例2中步骤。

qRT-PCR结果表明，转基因小麦中抽穗、开花相关基因的表达量显著高于对照，如图3所示。其中抽穗、开花相关基因TaVRNA1、TaVRNB1、TaVRT、TaFT均显著上调表达，而TaSOC显著下调表达，TaPHY-C-1轻微下调表达。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 中国农业科学院作物科学研究所

<120> 一种植物早熟蛋白及其编码基因与应用

<130> KHP201114840.1

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1869

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atgaccgtgg aggggagggt cagcgggggg gacggcggcg gtaaggacaa gttcccggtg 60

ggcatgcgcg tgctcgccgt agacgacgac cccacctgcc tcaaggtcct cgagaacctc 120

ctgcgccgct gcgactacca tgtgacaacc actgggcagg cagccaccgc cctcaggatg 180

ctcagggaga acaaggacca gtttgacctc gtgatcagcg atgtccacat gccggacatg 240

gatggtttca agctcctcga gcttgtcggt ctggagatgg acctcccagt cattatgttg 300

tctgcaaatg gggagacaca gacagtcatg aagggcataa ctcatggagc atgtgactac 360

ctgctaaagc cggtgcgtct tgagcagctg aagacaatat ggcaacatgt gattaggcgg 420

aacaccaaga accgtggtag tgacaacgat gatgccggtc agaaggggcc gaatgctgaa 480

ggtgagaatg gtggcgctaa ccgcaacaag aggcagtcac ggagggatag agatgagaat 540

ggagatgacg gtgacgattc tgatgagaac agtaatgaca acggcgactc gtcatcccag 600

aagaagccta gggttgtgtg gtctgtggag ctgcaccgga agtttgttgc tgctgtcaac 660

cagcttggca ttgacaaggc tgttccaaag aagatattgg acctcatgaa tgtagagaac 720

atcaccaggg agaatgttgc tagtcatctg cagaagtacc ggctgtatct gaaaaggatg 780

agtatggacg caagcagaca ggctaatcta gttgctgcac ttggaggaag gaaccctgct 840

tacagcaata tgaattcaat ggatgtcttc aggcactaca acagcgcgta cggtagatac 900

cgaccagttc caacaagcac ccattcccag tcaaataacc ttgtcgcaag gatgaactcc 960

ccttctgcat acggaatgca tgggttgctg tcttcacagt cgcagccact tcaccttggc 1020

catgcccaga ataatctggg cacttcccta aacgatttgg gtgtcaataa tggtaacctg 1080

atcagggctg cacacatgtc aacgatggtg actggtactt ctggtaactc ttttgcaaac 1140

atatcaaatg gtgcaccatt ggtgcctaca aataggcaag ttcagcctct tgaatcaaac 1200

aaccggcaac accttggtcg tataaattcg tcttcgacag actcatttag ctcattcggt 1260

ggcgattctc cccactttcc agatattgga agaagtagta acacctggca aactgcagtt 1320

ccgtccaaca ttcagcaact tggtcagaat ggcagcatgt cccaagcaag cttgcatgtg 1380

aatggccata ggatggaacc tgtctcaagc tatgcaccac catcaaatca gattacatct 1440

ctgggaaacg agatgcagag ccaagtagca tcactagcta gcaataccct tccaatggca 1500

ttcaatcagg gtgcagcgcc attcaccttt ggaaacagca caaactcgag agatgggctg 1560

aatagcaacc ttgcgttcag caattcaggc atcaacactt cgttgccaaa ccttcgcatt 1620

gacaattcaa ttgtgccaag gcagactctg gatggcggga atacaggcag tgttccctct 1680

ctgcaggatg gcaaggttga tcagcaagct gttggtaatc agctcagtta caacaatgat 1740

ctcgtgggga caagcgggct gcaaagggag ctcagtggtg gtttggatga cattgttgtt 1800

gacatgttta ggccggataa cgataatggt ggtggcattt tcatcgaccc agactggggg 1860

ctggtctag 1869

<210> 2

<211> 622

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Thr Val Glu Gly Arg Val Ser Gly Gly Asp Gly Gly Gly Lys Asp

1 5 10 15

Lys Phe Pro Val Gly Met Arg Val Leu Ala Val Asp Asp Asp Pro Thr

20 25 30

Cys Leu Lys Val Leu Glu Asn Leu Leu Arg Arg Cys Asp Tyr His Val

35 40 45

Thr Thr Thr Gly Gln Ala Ala Thr Ala Leu Arg Met Leu Arg Glu Asn

50 55 60

Lys Asp Gln Phe Asp Leu Val Ile Ser Asp Val His Met Pro Asp Met

65 70 75 80

Asp Gly Phe Lys Leu Leu Glu Leu Val Gly Leu Glu Met Asp Leu Pro

85 90 95

Val Ile Met Leu Ser Ala Asn Gly Glu Thr Gln Thr Val Met Lys Gly

100 105 110

Ile Thr His Gly Ala Cys Asp Tyr Leu Leu Lys Pro Val Arg Leu Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Thr Ile Trp Gln His Val Ile Arg Arg Asn Thr Lys Asn

130 135 140

Arg Gly Ser Asp Asn Asp Asp Ala Gly Gln Lys Gly Pro Asn Ala Glu

145 150 155 160

Gly Glu Asn Gly Gly Ala Asn Arg Asn Lys Arg Gln Ser Arg Arg Asp

165 170 175

Arg Asp Glu Asn Gly Asp Asp Gly Asp Asp Ser Asp Glu Asn Ser Asn

180 185 190

Asp Asn Gly Asp Ser Ser Ser Gln Lys Lys Pro Arg Val Val Trp Ser

195 200 205

Val Glu Leu His Arg Lys Phe Val Ala Ala Val Asn Gln Leu Gly Ile

210 215 220

Asp Lys Ala Val Pro Lys Lys Ile Leu Asp Leu Met Asn Val Glu Asn

225 230 235 240

Ile Thr Arg Glu Asn Val Ala Ser His Leu Gln Lys Tyr Arg Leu Tyr

245 250 255

Leu Lys Arg Met Ser Met Asp Ala Ser Arg Gln Ala Asn Leu Val Ala

260 265 270

Ala Leu Gly Gly Arg Asn Pro Ala Tyr Ser Asn Met Asn Ser Met Asp

275 280 285

Val Phe Arg His Tyr Asn Ser Ala Tyr Gly Arg Tyr Arg Pro Val Pro

290 295 300

Thr Ser Thr His Ser Gln Ser Asn Asn Leu Val Ala Arg Met Asn Ser

305 310 315 320

Pro Ser Ala Tyr Gly Met His Gly Leu Leu Ser Ser Gln Ser Gln Pro

325 330 335

Leu His Leu Gly His Ala Gln Asn Asn Leu Gly Thr Ser Leu Asn Asp

340 345 350

Leu Gly Val Asn Asn Gly Asn Leu Ile Arg Ala Ala His Met Ser Thr

355 360 365

Met Val Thr Gly Thr Ser Gly Asn Ser Phe Ala Asn Ile Ser Asn Gly

370 375 380

Ala Pro Leu Val Pro Thr Asn Arg Gln Val Gln Pro Leu Glu Ser Asn

385 390 395 400

Asn Arg Gln His Leu Gly Arg Ile Asn Ser Ser Ser Thr Asp Ser Phe

405 410 415

Ser Ser Phe Gly Gly Asp Ser Pro His Phe Pro Asp Ile Gly Arg Ser

420 425 430

Ser Asn Thr Trp Gln Thr Ala Val Pro Ser Asn Ile Gln Gln Leu Gly

435 440 445

Gln Asn Gly Ser Met Ser Gln Ala Ser Leu His Val Asn Gly His Arg

450 455 460

Met Glu Pro Val Ser Ser Tyr Ala Pro Pro Ser Asn Gln Ile Thr Ser

465 470 475 480

Leu Gly Asn Glu Met Gln Ser Gln Val Ala Ser Leu Ala Ser Asn Thr

485 490 495

Leu Pro Met Ala Phe Asn Gln Gly Ala Ala Pro Phe Thr Phe Gly Asn

500 505 510

Ser Thr Asn Ser Arg Asp Gly Leu Asn Ser Asn Leu Ala Phe Ser Asn

515 520 525

Ser Gly Ile Asn Thr Ser Leu Pro Asn Leu Arg Ile Asp Asn Ser Ile

530 535 540

Val Pro Arg Gln Thr Leu Asp Gly Gly Asn Thr Gly Ser Val Pro Ser

545 550 555 560

Leu Gln Asp Gly Lys Val Asp Gln Gln Ala Val Gly Asn Gln Leu Ser

565 570 575

Tyr Asn Asn Asp Leu Val Gly Thr Ser Gly Leu Gln Arg Glu Leu Ser

580 585 590

Gly Gly Leu Asp Asp Ile Val Val Asp Met Phe Arg Pro Asp Asn Asp

595 600 605

Asn Gly Gly Gly Ile Phe Ile Asp Pro Asp Trp Gly Leu Val

610 615 620

<210> 3

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gcggatccat gaccgtggag gggagg 26

<210> 4

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tcccccgggt tacccaatat aactctgaa 29

Claims (10)

1.一种蛋白，其特征在于，其为以下任一：

(1)所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；或

(2)SEQ ID No.2所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个氨基酸残基且具有同等活性的由(2)衍生的蛋白质。

2.权利要求1所述蛋白的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列具有：

1)如SEQ ID No.1所示的序列；或

2)SEQ ID No.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸编码相同功能蛋白的基因；

3)与SEQ ID No.1所示的序列具有75％，80％，85％，88％，90％或95％以上同源性的编码相同功能蛋白的基因。

3.含有权利要求2所述的编码基因的生物材料，所述生物材料包括表达盒、重组载体、重组微生物和转基因植物细胞系；

所述重组载体中，载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体；

所述重组微生物中，微生物可为酵母、细菌、藻或真菌；优选地，选用农杆菌；所述转基因植物细胞系不包括繁殖材料。

4.权利要求1所述的蛋白、权利要求2所述的编码基因或权利要求3所述的生物材料在植物育种、种质资源改良、制种或培育转基因植物中的应用。

5.权利要求1所述的蛋白、权利要求2所述的编码基因或权利要求3所述的生物材料在培育早熟植物新品种中的应用。

6.权利要求1所述的蛋白、权利要求2所述的编码基因或权利要求3所述的生物材料在调控抽穗、开花相关基因TaVRNA1、TaVRNB1、TaVRT、TaFT表达量或下调TaSOC表达量中的应用。

7.权利要求1所述的蛋白、权利要求2所述的编码基因或权利要求3所述的生物材料在调控植物抽穗期、成熟期提前或使植物小穗发育提前中的应用。

8.权利要求1所述的蛋白、权利要求2所述的编码基因或权利要求3所述的生物材料在促进植物成熟中的应用。

9.如权利要求4-8任一所述的应用，其特征在于，所述植物为单子叶植物。

10.如权利要求4-8任一所述的应用，其特征在于，使权利要求1所述蛋白在植物中过表达。

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