CN113350382A - 一种肠道粪菌微胶囊及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肠道粪菌微胶囊及其制备方法，内层包埋层和外层包埋层，内层包埋层包括包埋剂和粪菌沉淀物；包埋剂按质量份数包括：甘油1‑10份、乳糖5‑15份、脱脂奶粉5‑20份、谷氨酸钠1‑5份、维生素E 1‑5份、蔗糖脂肪酸酯1‑10份、低聚果糖1‑10份、甘露醇1‑10份、蛋白胨1‑5份、酵母提取物1‑5份、谷胱甘肽1‑5份；粪菌沉淀物与包埋剂的质量比为1‑10：90‑99。本发明的肠道粪菌微胶囊对消化道内的胃酸、胆盐、以及各种消化酶耐受性好。保存时间长，服用方便，适合各种病患服用。
Description
技术领域
本发明涉及粪菌移植领域，具体为一种肠道粪菌微胶囊及其制备方法。
背景技术
粪菌移植疗法，指的是将健康人粪便中的功能菌群移植到功能性便秘患者的肠道内，帮助患者重新建立正常的肠道菌群平衡，能够有效治疗或改善多种肠道相关的临床疾病。粪菌移植是一种广义的微生态制剂治疗方法，能够重建便秘患者的肠道功能菌群，将健康人的肠道菌群移植到患者的肠道内，从而使得优势菌大量繁殖，减少致病菌所占数量，从而改善胃肠道的菌群，提高胃肠动力。
该疗法的成败关键因素之一就在于如何提高微生物的定植率，使得优质菌群在肠道内的停留时间延长并且能够均匀分布在整个肠道。但由于大多数肠道菌群对消化道内的胃酸、胆盐、以及各种消化酶耐受性较差，致使菌群在经过胃肠道时存活率较低。所以需要对菌群进行技术包埋。
但是现代粪菌移植技术主要是器械介入的方法，患者有一定痛苦。且粪菌无法室温保存时间较短，长期保存需加入无菌甘油后置于-80℃冰冻，使用不便。
发明内容
本发明为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种对消化道内的胃酸、胆盐、以及各种消化酶耐受性好，保存方便的肠道粪菌微胶囊及其制备方法。
本发明首先提供一种肠道粪菌微胶囊，内层包埋层和外层包埋层，内层包埋层包括包埋剂和粪菌沉淀物；包埋剂按质量份数包括：甘油1-10份、乳糖5-15份、脱脂奶粉5-20份、谷氨酸钠1-5份、维生素E1-5份、蔗糖脂肪酸酯1-10份、低聚果糖1-10份、甘露醇1-10份、蛋白胨1-5份、酵母提取物1-5份、谷胱甘肽1-5份；粪菌沉淀物与包埋剂的质量比为1-10:90-99；
外层包埋层按质量份数包括：聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯0.5-2份、海藻酸钠1-5份、食用明胶1-3份、聚酰胺0.5-1份、氯化钙1-3份。
本发明还公开了一种上述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
S1粪菌沉淀物的制备
S11收集健康人的粪便样本，加入到无菌生理盐水中；
S12使用磁力搅拌器将样本搅拌均匀至无明显大颗粒，制成粪便悬液；
S13将粪便悬液分别使用不同孔径的筛网过滤一次，收集滤液；
S14将上步收集到的过滤液再使用滤膜过滤一次，收集滤液；
S15将上步收集到的过滤液离心，去除上清，得到粪菌沉淀物；
S2内层包埋层的制备
S21包埋剂的制备：将甘油1-10份、乳糖5-15份、脱脂奶粉5-20份、谷氨酸钠1-5份、维生素E1-5份、蔗糖脂肪酸酯1-10份、低聚果糖1-10份、甘露醇1-10份、蛋白胨1-5份、酵母提取物1-5份、谷胱甘肽1-5份用水溶解后，进行高温灭菌，冷却至室温后待用；
S22包埋保护剂和粪菌沉淀物按比例进行配比，包埋保护剂与粪菌沉淀物的重量比为90-99：1-10，使用磁力搅拌器搅拌均匀得到混合液；
S23先将上步的混合液置于-20℃冰箱中预冻后，在-40～-60℃真空冷冻干燥机中干燥，得到内层包埋层；
S3外层包埋层的制备
将制备得到的内层包埋层，内外包埋层质量比大概为1:2，置放于质量份数为0.5-2份的聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯、1-5份海藻酸钠、1-3份食用明胶、0.5-1份聚酰胺的水溶液中混合均匀得到混合物；然后将所得的混合物加入到含1-3％的氯化钙溶液中静置及以上捞出混合物自然干燥，得到肠道粪菌微胶囊。
本发明还提供如下优化方案：
优选的，S12步骤中粪便悬液终浓度为0.5-0.8g/ml。
优选的，S13步骤中分别使用孔径120目、300目的滤网过滤。
优选的，S14步骤中使用孔径为10um的滤膜过滤。
优选的，S15步骤中离心参数为4℃，5000g，20min。
优选的，S23步骤中预冻24h。
优选的，S23步骤中干燥24h。
优选的，S3步骤中氯化钙溶液中静置30min及以上。
本发明的有益效果是：
本发明的肠道粪菌微胶囊对消化道内的胃酸、胆盐、以及各种消化酶耐受性好。保存时间长，服用方便，适合各种病患服用。
本发明中使用的成分及配比具有良好的抗胃酸性、耐贮存性、耐热稳定性和抗压防碎性：
1、抗胃酸性：在ph＝2.1的人工胃酸环境下，浸泡3h，包埋的粪菌存活率超过90％，而未包埋的粪菌存活率不到0.001％。
2、耐贮存性：包埋的粪菌在常温下贮存一年，菌体存活率在25％以上，在2-8℃冷藏环境下贮存一年，菌体存活率可达50％以上，而未包埋的粪菌存活率仅为0.05％。
3、耐热稳定性：将包埋的粪菌置于100℃烘箱中5min，菌体存活率为90％以上，而未包埋的粪菌存活率仅为1％。
4、抗压防碎性：在压力孔径面积5cm2、50kg、压力时间3min条件下，微胶囊样品的破碎率大约在5％。
附图说明
图1为本发明实施例的粪菌存活率-时长图；
图2为本发明实施例的常温耐贮存性-时长图；
图3为本发明实施例的冷藏耐贮存性-时长图；
图4为本发明实施例的耐热稳定性-时长图；
图5为本发明实施例的破碎率图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
本发明的肠道粪菌微胶囊，内层包埋层和外层包埋层，内层包埋层包括包埋剂和粪菌沉淀物；包埋剂按质量份数包括：甘油1-10份、乳糖5-15份、脱脂奶粉5-20份、谷氨酸钠1-5份、维生素E1-5份、蔗糖脂肪酸酯1-10份、低聚果糖1-10份、甘露醇1-10份、蛋白胨1-5份、酵母提取物1-5份、谷胱甘肽1-5份；粪菌沉淀物与包埋剂的质量比为1-10：90-99；
本发明的包埋保护是在粪菌的内层包埋层需有效保护和提升粪便菌群的稳定性和活力，本发明中应用的甘油使其既可适用于冷藏保存、多种糖类和蛋白等等可在菌群外形成蛋白膜对细胞加以保护，既减少细胞损伤又可有效提升微胶囊中粪菌的活性，因此可潜在提高肠道菌群制剂的使用效果。
外层包埋层按质量份数包括：聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯0.5-2份、海藻酸钠1-5份、食用明胶1-3份、聚酰胺0.5-1份、氯化钙1-3份。氯化钙不作为外层包埋剂成分，作为包埋步骤中的最后一步使用：将具有内层包埋层的活性粪菌置于外包埋层溶液混合均匀后，将所得混合物置于1～3％氯化钙溶液中静置30min以上。
外层包埋层主要用于抵抗胃酸降解的生物大分子聚合物，同时需要考虑肠溶性，使得微胶囊达到肠道后可以将粪菌释放出来。本发明中应用的明胶与海藻酸钠等等混合溶液，在所设定的浓度范围内可提高微胶囊对胃酸的缓冲作用，同时提高微胶囊的机械强度，解决其易破碎的问题。
明胶水溶液与海藻酸钠水溶液的等体积混合溶液，在所设定的胶体浓度范围内高浓度明胶水溶液与低浓度海藻酸钠水溶液或高浓度海藻酸钠水溶液与低浓度明胶水溶液进行相互混合搭配，利用海藻酸钠的成膜性能好和明胶的支持性能好的特点，解决了微胶囊抗压易破碎的问题。
本发明还公开了一种上述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
S1粪菌沉淀物的制备
S11收集健康人的粪便样本，加入到无菌生理盐水中；
S12使用磁力搅拌器将样本搅拌均匀至无明显大颗粒，制成粪便悬液；
S13将粪便悬液分别使用不同孔径的筛网过滤一次，收集滤液；
S14将上步收集到的过滤液再使用滤膜过滤一次，收集滤液；
S15将上步收集到的过滤液离心，去除上清，得到粪菌沉淀物；
S2内层包埋层的制备
S21包埋剂的制备：将甘油1-10份、乳糖5-15份、脱脂奶粉5-20份、谷氨酸钠1-5份、维生素E1-5份、蔗糖脂肪酸酯1-10份、低聚果糖1-10份、甘露醇1-10份、蛋白胨1-5份、酵母提取物1-5份、谷胱甘肽1-5份用水溶解后，进行高温灭菌，冷却至室温后待用；
S22包埋保护剂和粪菌沉淀物按比例进行配比，包埋保护剂与粪菌沉淀物的重量比为90-99：1-10，使用磁力搅拌器搅拌均匀得到混合液；
S23先将上步的混合液置于-20℃冰箱中预冻后，在-40～-60℃真空冷冻干燥机中干燥，得到内层包埋层；
S3外层包埋层的制备
将制备得到的内层包埋层置放于质量份数为0.5-2份的聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯、1-5份海藻酸钠、1-3份食用明胶、0.5-1份聚酰胺的水溶液中混合均匀得到混合物；水溶液优选为100的质量份数，然后将所得的混合物加入到含1-3％的氯化钙溶液中静置及以上捞出混合物自然干燥，得到肠道粪菌微胶囊。
本发明还提供如下优化方案：
优选的，S12步骤中粪便悬液终浓度为0.5-0.8g/ml。
优选的，S13步骤中分别使用孔径120目、300目的滤网过滤。
优选的，S14步骤中使用孔径为10um的滤膜过滤。
优选的，S15步骤中离心参数为4℃，5000g，20min。
优选的，S23步骤中预冻24h。
优选的，S23步骤中干燥24h。
优选的，S3步骤中氯化钙溶液中静置30min及以上。
上述为本发明的详细阐述，下面为本发明实施例。
实施例一
本实施例的肠道粪菌微胶囊，内层包埋层和外层包埋层，内层包埋层包括包埋剂和粪菌沉淀物；包埋剂按质量份数包括：甘油1份、乳糖5份、脱脂奶粉5份、谷氨酸钠1份、维生素E1份、蔗糖脂肪酸酯1份、低聚果糖1份、甘露醇1份、蛋白胨1份、酵母提取物1份、谷胱甘肽1份；粪菌沉淀物与包埋剂的质量比为10：90；
外层包埋层按质量份数包括：聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯0.5份、海藻酸钠1份、食用明胶1份、聚酰胺0.5份。
上述肠道粪菌微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
S1粪菌沉淀物的制备
S11收集健康人的粪便样本，加入到无菌生理盐水中；
S12使用磁力搅拌器将样本搅拌均匀至无明显大颗粒，制成粪便悬液；粪便悬液终浓度为0.5-0.8g/ml。
S13将粪便悬液分别使用不同孔径的筛网过滤一次，收集滤液；分别使用孔径120目、300目的滤网过滤。
S14将上步收集到的过滤液再使用滤膜过滤一次，收集滤液；使用孔径为10um的滤膜过滤。
S15将上步收集到的过滤液离心，去除上清，得到粪菌沉淀物；离心参数为4℃，5000g，20min。
S2内层包埋层的制备
S21包埋剂的制备：将甘油1份、乳糖5份、脱脂奶粉5份、谷氨酸钠1份、维生素E1份、蔗糖脂肪酸酯1份、低聚果糖1份、甘露醇1份、蛋白胨1份、酵母提取物1份、谷胱甘肽1份用水溶解后，进行高温灭菌，冷却至室温后待用；
S22包埋保护剂和粪菌沉淀物按比例进行配比，包埋保护剂与粪菌沉淀物的重量比为90：10，使用磁力搅拌器搅拌均匀得到混合液；
S23先将上步的混合液置于-20℃冰箱中预冻24h后，在-40℃真空冷冻干燥机中干燥24h，得到内层包埋层；
S3外层包埋层的制备
将制备得到的内层包埋层置放于质量份数为0.5份的聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯、1份海藻酸钠、1份食用明胶、0.5份聚酰胺的加入100质量份的水溶液中混合均匀得到混合物；然后将所得的混合物加入到含1％的氯化钙溶液中静置30min捞出混合物自然干燥，得到肠道粪菌微胶囊。
实施例二
本实施例的肠道粪菌微胶囊，内层包埋层和外层包埋层，内层包埋层包括包埋剂和粪菌沉淀物；包埋剂按质量份数包括：甘油10份、乳糖15份、脱脂奶粉20份、谷氨酸钠5份、维生素E 5份、蔗糖脂肪酸酯10份、低聚果糖10份、甘露醇10份、蛋白胨5份、酵母提取物5份、谷胱甘肽5份；粪菌沉淀物与包埋剂的质量比为1：99；
外层包埋层按质量份数包括：聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯2份、海藻酸钠5份、食用明胶3份、聚酰胺1份。
上述肠道粪菌微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
S1粪菌沉淀物的制备
S11收集健康人的粪便样本，加入到无菌生理盐水中；
S12使用磁力搅拌器将样本搅拌均匀至无明显大颗粒，制成粪便悬液；粪便悬液终浓度为0.8g/ml。
S13将粪便悬液分别使用不同孔径的筛网过滤一次，收集滤液；分别使用孔径120目、300目的滤网过滤。
S14将上步收集到的过滤液再使用滤膜过滤一次，收集滤液；使用孔径为10um的滤膜过滤。
S15将上步收集到的过滤液离心，去除上清，得到粪菌沉淀物；离心参数为4℃，5000g，20min。
S2内层包埋层的制备
S21包埋剂的制备：将甘油10份、乳糖15份、脱脂奶粉20份、谷氨酸钠5份、维生素E5份、蔗糖脂肪酸酯10份、低聚果糖10份、甘露醇10份、蛋白胨5份、酵母提取物5份、谷胱甘肽5份用水溶解后，进行高温灭菌，冷却至室温后待用；
S22包埋保护剂和粪菌沉淀物按比例进行配比，包埋保护剂与粪菌沉淀物的重量比为99：1，使用磁力搅拌器搅拌均匀得到混合液；
S23先将上步的混合液置于-20℃冰箱中预冻24h后，在-60℃真空冷冻干燥机中干燥24h，得到内层包埋层；
S3外层包埋层的制备
将制备得到的内层包埋层置放于质量份数为2份的聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯、5份海藻酸钠、3份食用明胶、1份聚酰胺的100质量份的水溶液中混合均匀得到混合物；然后将所得的混合物加入到含3％的氯化钙溶液中静置30min捞出混合物自然干燥，得到肠道粪菌微胶囊。
实施例三
本实施例的肠道粪菌微胶囊，内层包埋层和外层包埋层，内层包埋层包括包埋剂和粪菌沉淀物；包埋剂按质量份数包括：甘油5份、乳糖10份、脱脂奶粉10份、谷氨酸钠3份、维生素E 3份、蔗糖脂肪酸酯5份、低聚果糖5份、甘露醇5份、蛋白胨3份、酵母提取物3份、谷胱甘肽3份；粪菌沉淀物与包埋剂的质量比为10：90；
外层包埋层按质量份数包括：聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯1份、海藻酸钠3份、食用明胶2份、聚酰胺0.8份。
上述肠道粪菌微胶囊的制备方法，包括如下步骤：
S1粪菌沉淀物的制备
S11收集健康人的粪便样本，加入到无菌生理盐水中；
S12使用磁力搅拌器将样本搅拌均匀至无明显大颗粒，制成粪便悬液；粪便悬液终浓度为0.5-0.8g/ml。
S13将粪便悬液分别使用不同孔径的筛网过滤一次，收集滤液；分别使用孔径120目、300目的滤网过滤。
S14将上步收集到的过滤液再使用滤膜过滤一次，收集滤液；使用孔径为10um的滤膜过滤。
S15将上步收集到的过滤液离心，去除上清，得到粪菌沉淀物；离心参数为4℃，5000g，20min。
S2内层包埋层的制备
S21包埋剂的制备：将甘油5份、乳糖10份、脱脂奶粉10份、谷氨酸钠3份、维生素E 3份、蔗糖脂肪酸酯5份、低聚果糖5份、甘露醇5份、蛋白胨3份、酵母提取物3份、谷胱甘肽3份用水溶解后，进行高温灭菌，冷却至室温后待用；
S22包埋保护剂和粪菌沉淀物按比例进行配比，包埋保护剂与粪菌沉淀物的重量比为90：10，使用磁力搅拌器搅拌均匀得到混合液；
S23先将上步的混合液置于-20℃冰箱中预冻24h后，在-50℃真空冷冻干燥机中干燥24h，得到内层包埋层；
S3外层包埋层的制备
将制备得到的内层包埋层置放于聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯1份、海藻酸钠3份、食用明胶2份、聚酰胺0.8份到100质量份的水溶液中混合均匀得到混合物；然后将所得的混合物加入到含2％的氯化钙溶液中静置30min捞出混合物自然干燥，得到肠道粪菌微胶囊。
活菌存活时长实验
1、准备模拟胃液：2g氯化钠，3.2g胃蛋白酶，36.5％浓盐酸7ml，加水至1L，滤膜过滤除菌。
2、将按实施例三制备好的肠道粪菌微胶囊置于模拟胃液中2h，检测粪菌包埋胶囊在1天、10天、20天后的若干主要菌群的活菌数
3、对照组将等量粪便样本收集到的粪菌沉淀物置于模拟胃液中2h，检测粪菌沉淀物在1天、10天、20天后的若干主要菌群的活菌数
4、比较消化前后各种菌群的存活率，存活率＝消化后活菌数/消化前活菌数
将实施例一至三的肠道粪菌微胶囊进行抗胃酸性、耐贮存性、耐热稳定性、抗压防碎性方向的性能测试，得到以下表中的实验数据。
1、抗胃酸性：在ph＝2.1的人工胃酸环境下，浸泡3h，得到抗胃酸性的粪菌存活率的趋线图1。
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 未包埋粪菌 | |
| 粪菌存活率 | 88％ | 85％ | 92％ | <0.0001％ |
2、耐贮存性：包埋的粪菌在常温下或2-8℃冷藏环境下贮存一年，得到耐贮存性的粪菌存活率的趋线图2和趋线图3。
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 未包埋粪菌 | |
| 常温粪菌存活率 | 26％ | 25％ | 31％ | 0.08％ |
| 冷藏粪菌存活率 | 51％ | 54％ | 57％ | 0.05％ |
3、耐热稳定性：将包埋的粪菌置于100℃烘箱中5min，得到耐热稳定性的粪菌存活率的趋线图4。
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 未包埋粪菌 | |
| 粪菌存活率 | 82％ | 84％ | 93％ | 1％ |
4、抗压防碎性：在压力孔径面积5cm2、50kg、压力时间3min条件下，得到耐贮存性的粪菌存活率的趋线图5。
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | |
| 破碎率 | 8.1％ | 7.5％ | 5％ |
由上述的实验数据可以得知，本发明的肠道粪菌微胶囊在ph＝2.1的人工胃酸环境下，浸泡3h，包埋的粪菌存活率超过90％。本发明的肠道粪菌微胶囊在常温下贮存一年，菌体存活率在25％以上，在2-8℃冷藏环境下贮存一年，菌体存活率可达50％以上。本发明的肠道粪菌微胶囊置于100℃烘箱中5min，菌体存活率为90％以上。在压力孔径面积5cm2、50kg、压力时间3min条件下，本发明的肠道粪菌微胶囊的破碎率大约在5％。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种肠道粪菌微胶囊，内层包埋层和外层包埋层，其特征在于：
内层包埋层包括包埋剂和粪菌沉淀物；包埋剂按质量份数包括：甘油1-10份、乳糖5-15份、脱脂奶粉5-20份、谷氨酸钠1-5份、维生素E1-5份、蔗糖脂肪酸酯1-10份、低聚果糖1-10份、甘露醇1-10份、蛋白胨1-5份、酵母提取物1-5份、谷胱甘肽1-5份；粪菌沉淀物与包埋剂的质量比为1-10：90-99；
外层包埋层按质量份数包括：聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯0.5-2份、海藻酸钠1-5份、食用明胶1-3份、聚酰胺0.5-1份；
所述外层包埋层经氯化钙溶液浸泡后干燥制备。
2.根据权利要求1所述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1粪菌沉淀物的制备
S11收集健康人的粪便样本，加入到无菌生理盐水中；
S12使用磁力搅拌器将样本搅拌均匀至无明显大颗粒，制成粪便悬液；
S13将粪便悬液分别使用不同孔径的筛网过滤一次，收集滤液；
S14将上步收集到的过滤液再使用滤膜过滤一次，收集滤液；
S15将上步收集到的过滤液离心，去除上清，得到粪菌沉淀物；
S2内层包埋层的制备
S21包埋剂的制备：将甘油1-10份、乳糖5-15份、脱脂奶粉5-20份、谷氨酸钠1-5份、维生素E1-5份、蔗糖脂肪酸酯1-10份、低聚果糖1-10份、甘露醇1-10份、蛋白胨1-5份、酵母提取物1-5份、谷胱甘肽1-5份用水溶解后，进行高温灭菌，冷却至室温后待用；
S22包埋保护剂和粪菌沉淀物按比例进行配比，包埋保护剂与粪菌沉淀物的重量比为90-99：1-10，使用磁力搅拌器搅拌均匀得到混合液；
S23先将上步的混合液置于-20℃冰箱中预冻后，在-40～-60℃真空冷冻干燥机中干燥，得到内层包埋层；
S3外层包埋层的制备
将制备得到的内层包埋层置放于质量份数为0.5-2份的聚氧乙烯木糖醇酐单硬脂酸酯、1-5份海藻酸钠、1-3份食用明胶、0.5-1份聚酰胺的水溶液中混合均匀得到混合物；然后将所得的混合物加入到含1-3％的氯化钙溶液中静置及以上捞出混合物自然干燥，得到肠道粪菌微胶囊。
3.根据权利要求2所述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，其特征在于：S12步骤中粪便悬液终浓度为0.5-0.8g/ml。
4.根据权利要求2所述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，其特征在于：S13步骤中分别使用孔径120目、300目的滤网过滤。
5.根据权利要求2所述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，其特征在于：S14步骤中使用孔径为10um的滤膜过滤。
6.根据权利要求2所述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，其特征在于：S15步骤中离心参数为4℃，5000g，20min。
7.根据权利要求2所述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，其特征在于：S23步骤中预冻24h。
8.根据权利要求2所述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，其特征在于：S23步骤中干燥24h。
9.根据权利要求2所述的肠道粪菌微胶囊的制备方法，其特征在于：S3步骤中氯化钙溶液中静置30min及以上。
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|---|---|
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114196543A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-18 | 天津大学浙江绍兴研究院 | 一种粪菌冷冻保护剂及其在粪菌保藏中的应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1658948A (zh) * | 2002-06-12 | 2005-08-24 | 创普太克公司 | 包封的活性颗粒及其制备和使用方法 |
| US20110189145A1 (en) * | 1999-11-08 | 2011-08-04 | Ganeden Biotech, Inc. | Inhibition of Pathogens by Probiotic Bacteria |
| CN104096089A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-10-15 | 哈尔滨圣泰生物制药有限公司 | 一种治疗缺血性中风的中药组合物及其胶囊剂和制法 |
| CN105748501A (zh) * | 2016-03-31 | 2016-07-13 | 成都仕康美生物科技有限公司 | 一种miRNA-182抑制剂及其在制备防治心脏移植免疫排斥反应药物中的应用 |
| CN106511380A (zh) * | 2016-10-25 | 2017-03-22 | 重庆市畜牧科学院 | 一种粪菌组合物及其制备方法和用途 |
| CN109679877A (zh) * | 2019-01-17 | 2019-04-26 | 广州承葛生物科技有限公司 | 一种高活性粪菌胶囊的制备方法 |
| TWM603763U (zh) * | 2020-04-10 | 2020-11-11 | 杏昌醫藥科技股份有限公司 | 一種含有益生菌與益生質組合的膠囊結構 |
-
2021
- 2021-06-02 CN CN202110616201.4A patent/CN113350382A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110189145A1 (en) * | 1999-11-08 | 2011-08-04 | Ganeden Biotech, Inc. | Inhibition of Pathogens by Probiotic Bacteria |
| CN1658948A (zh) * | 2002-06-12 | 2005-08-24 | 创普太克公司 | 包封的活性颗粒及其制备和使用方法 |
| CN104096089A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-10-15 | 哈尔滨圣泰生物制药有限公司 | 一种治疗缺血性中风的中药组合物及其胶囊剂和制法 |
| CN105748501A (zh) * | 2016-03-31 | 2016-07-13 | 成都仕康美生物科技有限公司 | 一种miRNA-182抑制剂及其在制备防治心脏移植免疫排斥反应药物中的应用 |
| CN106511380A (zh) * | 2016-10-25 | 2017-03-22 | 重庆市畜牧科学院 | 一种粪菌组合物及其制备方法和用途 |
| CN109679877A (zh) * | 2019-01-17 | 2019-04-26 | 广州承葛生物科技有限公司 | 一种高活性粪菌胶囊的制备方法 |
| TWM603763U (zh) * | 2020-04-10 | 2020-11-11 | 杏昌醫藥科技股份有限公司 | 一種含有益生菌與益生質組合的膠囊結構 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| PANCHAL P等: "Global disparities and new indications in fecal microbiota transplantation research:a survey and systematic review of clinical trials around the world", GASTROENTEROLOGY * |
| 吉鹤立: "中国食品添加剂及配料使用手册", vol. 2016, 30 June 2016, 中国质检出版社, pages: 8 * |
| 张宇: "乳杆菌对肠道微生态及口服免疫效应的影响", 中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑 * |
| 汪多仁: "有机食品营养强化剂", vol. 2008, 31 August 2008, 科学技术文献出版社, pages: 78 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114196543A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-18 | 天津大学浙江绍兴研究院 | 一种粪菌冷冻保护剂及其在粪菌保藏中的应用 |
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