CN115177642B - 一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115177642B
CN115177642B CN202210939485.5A CN202210939485A CN115177642B CN 115177642 B CN115177642 B CN 115177642B CN 202210939485 A CN202210939485 A CN 202210939485A CN 115177642 B CN115177642 B CN 115177642B
Authority
CN
China
Prior art keywords
fecal
solution
oligosaccharide
ulcerative colitis
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210939485.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115177642A (zh
Inventor
徐振宇
钱学艺
伍耀
邵慧敏
何连君
何伟杰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
First Affiliated Hospital of Wannan Medical College
Original Assignee
First Affiliated Hospital of Wannan Medical College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Affiliated Hospital of Wannan Medical College filed Critical First Affiliated Hospital of Wannan Medical College
Priority to CN202210939485.5A priority Critical patent/CN115177642B/zh
Publication of CN115177642A publication Critical patent/CN115177642A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115177642B publication Critical patent/CN115177642B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/702—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/733—Fructosans, e.g. inulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明公开了一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物，包括体积比为1:1的粪便菌液和10wt%的益生元复合物溶液，所述益生元复合物包括重量份数比为（1‑10）：（1‑10）：（1‑10）：（1‑10）的低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉和大豆低聚糖。本发明还公开了一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物的制备方法及其应用。本发明通过粪便菌群与益生元复合物的联合使用，具有协同增效的作用；小鼠实验显示，调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物显著改善溃疡性结肠炎肠道菌群结构，并显著改善肠道，增加肠道菌群丰富度和多样性，并且缓解溃疡性结肠炎造成的黏膜损伤。

Description

一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和应用，属于微生物技术领域。
背景技术
随着生活节奏的改变，溃疡性结肠炎成为临床常见的一种疾病，而且复发率也越来越高。目前，溃疡性结肠炎的发病原因还不明确，可能与环境，遗传等因素密切相关。研究表明，肠道菌群在溃疡性结肠炎的发生发展中发挥着重要作用。研究发现溃疡性结肠炎患者肠道菌群发生改变，与健康人的菌群结构存在明显差异。溃疡性结肠炎患者肠道中菌群比例发生改变，拟杆菌、双歧杆菌、真杆菌、消化球菌及乳杆菌数量降低，而小梭菌、肠球菌及肠杆菌数明显上升。此外，肠道菌群还可以利用食物中未被消化吸收的纤维素、低聚糖等物质，经代谢利用产生菌群代谢产物，如短链脂肪酸、吲哚衍生物、烟碱，多胺，尿黄素和丙酮酸等等。菌群代谢产物又可以通过“肝-肠”轴、“肠-脑”轴、“肠-肺”轴分别作用于人体的其他器官，从而影响人体相关疾病的发生发展。
健康人人体肠道中含有大量的细菌，其数量高达10万亿个，其种类多达1000多种。粪便来源于人体肠道的排泄物，因此粪便中也包含了大量的肠道中的菌群，提取人粪便中的细菌可以用于治疗改善肠道疾病。早在古籍中就记载了利用粪便治疗疾病的方法，东晋时期的葛洪在《肘后备急方》中提出用人的粪清治疗腹泻、食物中毒、发热等。近代，国内外研究表明粪便菌群移植对难辨梭状芽孢杆菌感染具有明显治疗效果，2013年，美国医学指南将粪便菌群移植用于治疗复发性艰难梭状芽胞杆菌感染。
肠道菌群移植治疗又称作粪菌移植治疗，是治疗复发性艰难梭菌感染的一种新型方法。肠道菌群移植治疗是从健康人粪便中提取人粪便中细菌，通过肠镜或者胶囊的方式将粪便细菌移植到患者消化道内，通过将健康人粪便细菌定植在患者消化道内重建肠道内细菌稳态环境，从而发挥治疗疾病的作用。肠道菌群移植治疗疾病的疗效与使用的粪便菌群的质量有很大关系。
人体肠道环境是一种低氧环境，肠道中以厌氧菌为主，此外包含少量兼性厌氧菌和需氧菌。肠道菌群移植中使用的粪便多数为新鲜粪便，因此其菌群结构与人体肠道中的菌群结构基本相似。保证人体粪便制备过程中的厌氧菌比例和细菌活性成为粪便菌群制备的一个关键步骤。目前粪便菌群制备方法是选择0.9%NaCl作为稀释剂稀释粪便后进行粪便菌群提取。该方法制备的时间较长，粪便菌群容易暴露在空气中，另外制备过程中容易受到温度变化造成损伤，最终制备获得粪便活菌比例不高，厌氧菌在制备过程损失也较多。因此如何保护粪便菌群制备过程中菌群活性和厌氧菌比例是粪菌移植治疗中一个重要问题。
益生元是一类不能被人体直接吸收利用的小分子物质，例如低聚果糖、低聚半乳糖等。低聚果糖主要由蔗糖经酶解转化而成，具有很好的水溶性，同时具有促进肠道中的双歧杆菌增值的作用。低聚半乳糖通常由乳果糖经酶水解所得，具有很好的水溶性。人乳中富含有大量的乳果糖，能够有效增强婴幼儿的抵抗力。益生元通过肠道后可以保持无损状态进入结肠，并作为结肠中菌群的“食物”，能够被肠道内细菌直接代谢利用，代谢产物可以作为肠壁组织重要能量来源。此外其代谢产物维持肠道酸碱平衡，在维护肠道内稳态发挥着重要作用。动物实验显示服用低聚半乳糖还能够促进钙、镁等微量元素的吸收，从而增加小鼠股骨和胫骨断裂强度。因此，益生元在调节肠道菌群结构中发挥着重要作用，同时不同种类的益生元调节菌群结构的作用不同。
溃疡性结肠炎患者肠道菌群与正常人比存在明显差异，其丰富度明显降低，多样性也降低。目前治疗溃疡性结肠炎主要通过抗炎（如柳氮磺胺吡啶水杨酸制剂）、皮质类固醇、免疫制剂以及外科手术治疗。而针对溃疡性结肠炎患者肠道菌群结构的治疗方法还很少，虽然由文献报道，单纯的肠道菌群移植用于治疗溃疡性结肠炎案例，但对于肠道菌群结构的调节能力有限，此外，目前还没有关于采用粪菌移植联合益生元复合物调节溃疡性结肠炎肠道菌群的报道。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物，该组合物可以有效调节溃疡性结肠炎肠肠道菌群结构，并且该组合物细菌活力高，活菌比例高。
同时，本发明提供一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物的制备方法，该法通过粪便菌群与益生元复合物的联合使用，具有协同增效的作用；小鼠实验显示，调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物显著改善溃疡性结肠炎肠道菌群结构，并显著改善肠道。
同时，本发明提供一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物，包括体积比为1:1的粪便菌液和10wt%的益生元复合物溶液，所述益生元复合物包括重量份数比为（1-10）：（1-10）：（1-10）：（1-10）的低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉和大豆低聚糖。
所述低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、大豆低聚糖均为食品级益生元。
优选地，所述低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、大豆低聚糖按照9:1:1:1的重量比组成。
优选地，所述低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、大豆低聚糖按照9:1:1:5的重量比组成。
所述益生元复合物可以制成一切可以保留其活性的物品。
所述粪便菌液为健康供体的粪便提取菌液。
一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物的制备方法，在厌氧环境下制备，具体包括以下步骤：
步骤一，粪便收集：选择健康人作为供体，使用粪便收集盒收集50-150g粪便；
步骤二，粪便重悬：将步骤一中粪便按照质量比1：（2-5）添加到保护剂中，以100-500转/分钟速度进行搅拌1-20分钟，得到粪便悬液；
步骤三，粪便过滤：将步骤二中粪便悬液传递入厌氧工作台中，分别经过10目、18目、30目、35目筛网进行逐级过滤，最终收集过滤后的菌液；
步骤四，制备粪菌沉淀：将步骤三中收集的菌液以2000-5000转/分钟速度离心10-15分，进行粪菌富集，获得粪菌沉淀；
步骤五，离心和洗涤：在步骤四中收集的粪菌沉淀中加入保护剂，保护剂的加入量为粪便质量的2-5倍，混合均匀后，以2000-5000转/分钟速度离心10-15分，重复2~5次，收集菌泥；
步骤六，粪便菌液的制备：将步骤五获得的菌泥加入保护剂中，保护剂的加入量为粪便质量的2-5倍，混合重悬获得粪便菌液；
步骤七，10wt%的益生元复合物溶液的制备：取低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉和大豆低聚糖共10g，添加无菌水至100mL，充分溶解后，配置成10%的水溶液，经0.22µm滤膜过滤除菌；
步骤八，取等体积的步骤六的粪便菌液和步骤七的10wt%的益生元复合物溶液，混匀，即得调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物。
所述粪便收集盒为一次性粪便收集盒。
所述保护剂包括以下重量份的组分：低聚果糖1-10份；低聚半乳糖1-10份；维生素C 0.1-0.5份；10%醋酸钠1-5份；甘油1-10份和0.9%NaCl 60-100份。
优选地，所述保护剂包括以下重量份的组分：低聚果糖9份；低聚半乳糖1份；维生素C 0.3份；10%醋酸钠1份；甘油1份和0.9%NaCl 87.7份。
所述低聚果糖、低聚半乳糖、维生素C、醋酸钠和甘油均为食品级。
所述保护剂的制法包括以下步骤：
S01，量取50%的0.9%NaCl，灌入到烧杯中，然后按照重量配比称取低聚果糖，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚果糖完全溶解，得A溶液；
S02，称取低聚半乳糖，加入到A溶液中，缓慢搅拌直至低聚半乳糖完全溶解，得B溶液；
S03，称取维生素C，加入到B溶液中，缓慢搅拌直至维生素C完全溶解，得C溶液；
S04，量取10%醋酸钠，加入到C溶液中，缓慢搅拌均匀，得D溶液；
S05，量取甘油，加入到D溶液中，缓慢搅拌，得E溶液；
S06，将剩余0.9%NaCl添加到E溶液中，缓慢搅拌均匀，所得溶液经过0.22µm滤膜过滤，即得。
所述缓慢搅拌的速度为60转/分钟。
所述健康人的定义为：年龄在18-25岁年轻男性或女性在读大学生，最近3个月内未发生肠道疾病且无性活动，无新冠疫情感染者。
所述厌氧环境的氧气浓度控制在0-10%。
优选地，所述厌氧环境氧气浓度控制在0-5%。
步骤六获得的粪便菌液在室温有氧环境条件下，活菌数量大于8.0×109cfu/mL。
步骤六获得的粪便菌液在厌氧条件下，活菌数量大于19.0×1010cfu/mL。
一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
本发明具有以下有益效果：
本发明所述的粪便菌液来源于健康人供体粪便中提取的总细菌，容易取得，成本低，且制备后可冻存，并可储存在超低温冰箱，以便长期使用，此外本发明制备粪便菌液的菌群含量丰富、种类多样、提取方法简单易实施。
本发明所采用的益生元复合物为食品益生元，使用安全无毒副作用。
本发明中的保护剂，其中的低聚果糖、低聚半乳糖作为一种益生元能够被肠道中的细菌代谢，可以作为肠道细菌提供生长代谢的能量；低聚果糖、低聚半乳糖为粪便菌群制备过程中的细菌代谢提供营养和能量，使菌群在制备过程中保持良好活性。维生素C作为一种抗氧化剂，能够清除制备过程中产生的氧自由基，从而达到保护厌氧菌的作用；维生素C消耗粪便菌群制备过程中细菌产生的氧自由基，减伤氧自由基对厌氧菌的伤害。醋酸钠调节粪便菌群制备过程菌液酸碱度，使菌液的pH值保持在偏酸性环境，易于细菌在肠道中存活。甘油保护粪便中细菌，降低对机体造成损伤。低聚果糖、低聚半乳糖、维生素C有利于粪菌制备过程中对粪菌的保护。该保护剂组成成分简单合理，配方原料容易获取，配制工艺简单，保护剂对粪便菌液制备过程中菌液保护效果好，提高粪便菌液中活菌比例，提高粪便菌液中厌氧菌比例。
综上所述，本发明提供的一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和应用，包含了健康人提取的粪便菌群和促进菌群生长代谢的益生元复合物；粪便菌群可以通过胃镜、结肠镜、直肠灌肠方式移植到人体肠道中，通过与有害细菌竞争，增补有益菌来恢复和调节肠道菌群，使溃疡性结肠炎肠道中失调的菌群重新恢复平衡；益生元低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、大豆低聚糖服用后不被人体吸收，但可以被肠道细菌代谢，促进肠道菌群生长；通过粪便菌群与益生元复合物联合使用，具有协同增效的作用；小鼠实验显示，调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物显著改善溃疡性结肠炎肠道菌群结构，并显著改善肠道。
本发明通过将粪便菌群与益生元复合物联合使用，以小鼠为实验对象，建立溃疡性结肠炎模型，从试验小鼠体重改变、小鼠结肠病理学、小鼠肠道菌群丰富度多样性等角度，研究本发明组合物调节溃疡性结肠炎肠道菌群结构的作用；小鼠试验结果表明，本发明组合物比单独使用肠道菌群或益生元效果要好，具有明显改变肠道菌群结构的作用，增加肠道菌群丰富度和多样性，并且缓解溃疡性结肠炎造成的黏膜损伤。
附图说明
图1为本发明中不同组小鼠粪便菌群多样性分析Chao1和Shannon指数图；
图2 为本发明中不同组小鼠粪便菌群属水平（genus）丰度图；
图3为本发明中不同组小鼠肠DAI疾病评分图；
图4为本发明中不同组小鼠结肠组织HE染色的病理切片图；
图5为本发明在室温有氧环境条件下对照组和实验组的溶液PH值（A）、活菌比例（B）和活菌数量（C）（D）的对比图；
图6为本发明在厌氧条件下对照组和实验组的溶液PH值（A）、活菌比例（B）和活菌数量（C）（D）的对比图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作更进一步的说明。
实施例1
一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群结构的组合物，包括粪便菌液和益生元复合物。
粪便菌液制备方法如下：
利用无菌收集盒收取健康供体粪便50g，添加保护剂250mL，以250转/分钟速度进行搅拌10分钟，获得到粪便悬液。将粪便悬液传递入厌氧工作台中，在氧气浓度为1%的条件下，分别经过10目、18目、30目、35目筛网进行逐级过滤，最终收集过滤后的菌液。收集的菌液以2000转/分钟速度进行离心10min，收集，获得粪菌沉淀，在粪菌沉淀中加入250mL保护剂，混合均匀后，以2000转/分钟速度离心10分，重复3次，收集菌泥；将菌泥加入250mL保护剂中，混合重悬获得粪便菌液。
保护剂的组成成分及其重量比为：低聚果糖10g，低聚半乳糖20g，维生素C 1g，10%醋酸钠50g（50mL），甘油100g（80mL）和 0.9%NaCl 819g（819mL）。
保护剂的制法包括以下步骤：
S01，根据所述重量配比量取50%的0.9%NaCl 410mL，灌入到烧杯中，然后按照重量配比称取低聚果糖10g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚果糖完全溶解，得A溶液；
S02，根据所述重量配比称取低聚半乳糖20g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚半乳糖完全溶解，得B溶液；
S03，根据所述重量配比称取维生素C 1g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至维生素C完全溶解，得C溶液；
S04，根据所述重量配比量取10%醋酸钠50g（50mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌均匀，得D溶液；
S05，根据所述重量配比量取甘油100g（80mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌，得E溶液；
S06，将S01中剩余0.9%NaCl溶液409 mL添加到E溶液中，搅拌均匀，所得溶液经过0.22µm滤膜过滤后，所得溶液为所述的一种人粪便菌液制备保护剂。
益生元复合物制备方法：称取质量比为1:1:1:1的低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、大豆低聚糖，各2.5g，共10g，添加无菌水至100mL，充分溶解后，配置成10%的水溶液，经0.22µm过滤除菌。
实施例2
一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群结构的组合物，包括粪便菌液和益生元复合物。
粪便菌液制备方法如下：
利用无菌收集盒收取健康供体粪便50g，添加保护剂250mL，以250转/分钟速度进行搅拌10分钟，获得到粪便悬液。将粪便悬液传递入厌氧工作台中，在氧气浓度为5%的条件下，分别经过10目、18目、30目、35目筛网进行逐级过滤，最终收集过滤后的菌液。收集的菌液以2000转/分钟速度进行离心10min，收集，获得粪菌沉淀，在粪菌沉淀中加入250mL保护剂，混合均匀后，以2000转/分钟速度离心10分，重复3次，收集菌泥；将菌泥加入250mL保护剂中，混合重悬获得粪便菌液。
保护剂的组成成分及其重量比为：低聚果糖90g，低聚半乳糖10g，维生素C 3g，10%醋酸钠10g（10mL），甘油10g（8mL）和 0.9%NaCl 877g（877mL）。
保护剂的制法包括以下步骤：
S01，根据所述重量配比量取50%的0.9%NaCl 440mL，灌入到烧杯中，然后按照重量配比称取低聚果糖90g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚果糖完全溶解，得A溶液；
S02，根据所述重量配比称取低聚半乳糖10g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚半乳糖完全溶解，得B溶液；
S03，根据所述重量配比称取维生素C 3g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至维生素C完全溶解，得C溶液；
S04，根据所述重量配比量取10%醋酸钠10g（10mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌均匀，得D溶液；
S05，根据所述重量配比量取甘油10g（8mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌，得E溶液；
S06，将S01中剩余0.9%NaCl溶液437 mL添加到E溶液中，搅拌均匀，所得溶液经过0.22µm滤膜过滤后，所得溶液为所述的一种人粪便菌液制备保护剂。
益生元复合物制备方法：
称取质量比为9:1:1:1的低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、大豆低聚糖，共10g，添加无菌水至100mL，充分溶解后，配置成10%的水溶液，经0.22µm过滤除菌。
实施例3
一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群结构的组合物，包括粪便菌液和益生元复合物。
粪便菌液制备方法如下：
利用无菌收集盒收取健康供体粪便50g，添加保护剂250mL，以250转/分钟速度进行搅拌10分钟，获得到粪便悬液。将粪便悬液传递入厌氧工作台中，在氧气浓度为10%的条件下，分别经过10目、18目、30目、35目筛网进行逐级过滤，最终收集过滤后的菌液。收集的菌液以2000转/分钟速度进行离心10min，收集，获得粪菌沉淀，在粪菌沉淀中加入250mL保护剂，混合均匀后，以2000转/分钟速度离心10分，重复3次，收集菌泥；将菌泥加入250mL保护剂中，混合重悬获得粪便菌液。
保护剂的组成成分及其重量比为：低聚果糖30g，低聚半乳糖10g，维生素C 5g，10%醋酸钠50g（50mL），甘油100g（80mL）和 0.9%NaCl 805g（805mL）。
保护剂的制法包括以下步骤：
S01，根据所述重量配比量取50%的0.9%NaCl 403mL，灌入到烧杯中，然后按照重量配比称取低聚果糖30g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚果糖完全溶解，得A溶液；
S02，根据所述重量配比称取低聚半乳糖10g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚半乳糖完全溶解，得B溶液；
S03，根据所述重量配比称取维生素C 5g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至维生素C完全溶解，得C溶液；
S04，根据所述重量配比量取10%醋酸钠50g（50mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌均匀，得D溶液；
S05，根据所述重量配比量取甘油100g（80mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌，得E溶液；
S06，将S01中剩余0.9%NaCl溶液402 mL添加到E溶液中，搅拌均匀，所得溶液经过0.22µm滤膜过滤后，所得溶液为所述的一种人粪便菌液制备保护剂。
益生元复合物制备方法：
称取质量比为9:1:1:5的低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、大豆低聚糖，共10g，添加无菌水至100mL，充分溶解后，配置成10%的水溶液，经0.22µm过滤除菌。
测试实验一：
在小鼠动物实验中对该调节溃疡性结肠炎肠道菌群结构的组合物的疗效进行评价：
（一）动物实验小鼠分组和调节溃疡性结肠炎小鼠模型制作：
健康5周龄雄性ICR小鼠40只，平均体重为20g（18-23g），适应饲养1周后，随机分为4组：
空白组（control）：高压灭菌水（ddH2O）。
模型组（UC）：5% DSS（葡聚糖硫酸钠盐）水溶液。
治疗对照组（FMT）：200µL粪便悬液。
实验组（Combination）：200µL组合物，调节溃疡性结肠炎肠道菌群结构的组合物，包含100µL粪便菌液和100µL10%益生元复合物溶液。
溃疡性结肠炎小鼠模型建立：空白对照组的饮水瓶加入高压灭菌水（ddH2O），而其他各组的饮水瓶在治疗开始前加入5%DSS（葡聚糖硫酸钠盐）水溶液，连续7天。所有5%DSS（葡聚糖硫酸钠盐）水溶液为现配现用，各组小鼠摄食饮水均为随机自由。
溃疡性结肠炎疾病模型开始建立后，每日记录小鼠体重，大便性状、大便隐血等情况，然后参考Cooper评分系统方法评定溃疡性结肠炎疾病活动指数（disease activityindex，DAI），以量化溃疡性结肠炎的病情程度。
（二）动物实验处理方案：
模型建立后，各组开始治疗处理，空白组（control）：200µL高压灭菌水（ddH2O）；模型组（UC）：200µL5% DSS（葡聚糖硫酸钠盐）水溶液；治疗对照组（FMT）：200µL粪便悬液；实验组（Combination）：200µL调节溃疡性结肠炎肠道菌群结构的组合物，包含100µL粪便菌液和100µL10%益生元复合物，本次测试实验使用的是实施例1中的组合物。治疗周期为7天，每天各组通过灌胃给药。治疗期间，记录各组小鼠体重，大便性状、大便隐血等情况，然后参考Cooper评分系统方法评定溃疡性结肠炎疾病活动指数（disease activity index，DAI），以量化溃疡性结肠炎的病情程度。
实验结束后，首先，利用腹部刺激法收集各组小鼠粪便，并及时储存于-80℃冰箱，用于16sRNA测序。然后，各组小鼠腹腔注射4%的水合氯醛进行麻醉，利用眼眶取血收集小鼠外周血，在离心机2000rpm转速下离心10min，取上清，用于ELISA检测外周血中免疫细胞因子。紧接着，解剖小鼠，取整段结肠（盲肠末端至肛门），测量结肠长度。最后，获取各组小鼠结肠组织于4％多聚甲醛中固定用于制作石蜡包埋，然后通过病理切片的HE染色观察小鼠结肠病理损伤情况并进行评分。
（三）动物实验结果：
（1）本发明的组合物明显改变溃疡性结肠炎肠道菌群结构：
通过收集4组小鼠粪便并进行16sRNA测序，分析4组小鼠粪便菌群结构变化显示：在模型组（UC）的菌群多样性Chao1指数和Shannon指数明显降低，而在组合物治疗组的菌群多样性Chao1指数和Shannon指数明显增高，与空白组（control）相近，说明本发明的组合物能够增加溃疡性结肠炎肠道菌群多样性，具体如图1所示。
（2）本发明的组合物改变溃疡性结肠炎肠道菌群不同菌种的丰度：
如图2所示，分析4组小鼠粪便菌群丰度变化，从属水平（genus）发现在模型组（UC）中，Lactobacillus的丰度明显降低，而Bacteroides的丰度明显上升。在治疗对照组（FMT）中Lactobacillus的丰度和Bacteroides的丰度有趋于正常对照组的趋势。在实验组（Combination）的Lactobacillus的丰度和Bacteroides的丰度接近正常的空白组（control），较模型组（UC）变化明显。
（3）本发明的组合物缓解小鼠溃疡性结肠炎疾病症状：
DAI评分是评估溃疡性结肠炎小鼠疾病症状的指标，该指标包括了小鼠体重变化，粪便松软程度，便血三个指标。如图3所示，在建模期间，4组中，除了空白组（control）的DAI评分不变之外，模型组（UC）、治疗对照组（FMT）、实验组（Combination）三组的DAI评分均明显下降，说明三组的溃疡性结肠炎动物模型构建成功，在开始治疗时，与模型组（UC）、治疗对照组（FMT）相比，实验组（Combination）的DAI评分明显降低，说明本发明的组合物明显缓解了小鼠溃疡性结肠炎疾病症状。
（4）本发明的组合物缓解溃疡性结肠炎造成黏膜损伤：
如图4所示，比较模型组（UC）、治疗对照组（FMT）和实验组（Combination）小鼠肠道病理组织可以发现，模型组（UC）组织HE染色显示结肠组织破坏严重，存在明显的炎性细胞浸润，而实验组（Combination）组织HE染色显示结肠组织结构回复症状，炎性细胞浸润减少。
测试实验二：
在室温有氧环境条件下，粪便菌液制备对比实验：收集同一个人新鲜粪便100g，均分为两份。
对照组粪便50g，按照质量比添加250g 0.9%NaCl（250mL），经过粪菌制备过程制备获得粪菌悬液1号。（粪便按照质量比1：5添加到无菌生理盐水中，以500转/分钟速度进行搅拌20分钟，得到粪便悬液）。
实验组粪便50g，按照质量比添加250g保护剂（250mL），经过粪菌制备过程制备获得粪菌悬液2号（将粪便按照质量比1：5添加到保护剂中，以500转/分钟速度进行搅拌20分钟，得到粪便悬液；将粪便悬液传递入厌氧工作台中，分别经过10目、18目、30目、35目筛网进行逐级过滤，最终收集过滤后的菌液；将收集的菌液以2000转/分钟速度离心10分，进行粪菌富集，获得粪菌沉淀；在粪菌沉淀中加入250mL保护剂，混合均匀后，以2000转/分钟速度离心10分，重复3次，收集菌泥；将菌泥加入250mL保护剂中，混合重悬获得粪便菌液，即粪菌悬液2号）。
检测粪菌悬液1号和粪菌悬液2号两组的溶液pH值，菌群活性比例，厌氧菌占比例。
试验结果：如图5（A）所示，粪菌悬液1号pH为6.8，粪菌悬液2号pH为6.6。如图5（B）所示，粪菌悬液1号活菌比例为49.6%，粪菌悬液2号活菌比例为68.7%。如图5（C）所示，粪菌悬液1号活菌数量为4.3×109cfu/mL，粪菌悬液2号活菌数量为8.1×109cfu/mL。如图5（D）所示，粪菌悬液2号的活菌数量显著高于粪菌悬液1号的活菌数量。其中，对照组为粪菌悬液1号，实验组为粪菌悬液2号。
测试实验三：
在厌氧条件下，粪菌制备对比实验：收集同一个人新鲜粪便100g，均分为两份。
对照组粪便50g，按照质量比添加250g 0.9%NaCl（250mL），经过粪菌制备过程制备获得粪菌悬液1号。
实验组粪便50g，按照质量比添加250g保护剂（250mL），经过粪菌制备过程制备获得粪菌悬液2号。
检测两组的溶液PH值，菌群活性比例和厌氧菌占比例。
试验结果：如图6（A）所示，对照组pH为6.8，实验组pH为6.6。如图6（B）所示，对照组活菌比例为62.5%，实验组活菌比例为72.5%。如图6（C）所示，对照组活菌数量为8.7×109cfu/mL，实验组活菌数量为19.9×1010cfu/mL。如图6（D）所示，实验组的活菌数量显著高于对照组的活菌数量。
实施例4
一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群结构的组合物，包括粪便菌液和益生元复合物。粪便菌液中菌群均为活菌菌体形式，粪便菌液均由健康人为供体的提供的粪便在厌氧环境下制备的粪便菌液。
粪便菌液制备方法如下：
利用无菌收集盒收取健康供体粪便150g，添加保护剂300mL，以100转/分钟速度进行搅拌20分钟，获得到粪便悬液。将粪便悬液传递入厌氧工作台中，在氧气浓度为2%的条件下，分别经过10目、18目、30目、35目筛网进行逐级过滤，最终收集过滤后的菌液。收集的菌液以5000转/分钟速度进行离心15min，收集，获得粪菌沉淀，在粪菌沉淀中加入300mL保护剂，混合均匀后，以5000转/分钟速度离心15分，重复5次，收集菌泥；将菌泥加入300mL保护剂中，混合重悬获得粪便菌液。粪便菌液可分装在无菌储存瓶中，-80℃储存。
保护剂的组成成分及其重量比为：低聚果糖100g，低聚半乳糖100g，维生素C 2g，10%醋酸钠50g（50mL），甘油50g（40mL）和 0.9%NaCl 698g（698mL）。
保护剂的制法包括以下步骤：
S01，根据所述重量配比量取50%的0.9%NaCl 349mL，灌入到烧杯中，然后按照重量配比称取低聚果糖100g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚果糖完全溶解，得A溶液；
S02，根据所述重量配比称取低聚半乳糖100g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚半乳糖完全溶解，得B溶液；
S03，根据所述重量配比称取维生素C 2g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至维生素C完全溶解，得C溶液；
S04，根据所述重量配比量取10%醋酸钠50g（50mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌均匀，得D溶液；
S05，根据所述重量配比量取甘油50g（40mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌，得E溶液；
S06，将S01中剩余0.9%NaCl溶液349mL添加到E溶液中，搅拌均匀，所得溶液经过0.22µm滤膜过滤后，所得溶液为所述的一种人粪便菌液制备保护剂。
益生元复合物制备方法：称取质量比为1:10:10:10的低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、大豆低聚糖共10g，添加无菌水至100mL，充分溶解后，配置成10%的水溶液，经0.22µm过滤除菌。
实施例5
一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群结构的组合物，包括粪便菌液和益生元复合物。粪便菌液中菌群均为活菌菌体形式，粪便菌液均由健康人为供体的提供的粪便在厌氧环境下制备的粪便菌液。
粪便菌液制备方法如下：
利用无菌收集盒收取健康供体粪便100g，添加保护剂500mL，以500转/分钟速度进行搅拌1分钟，获得到粪便悬液。将粪便悬液传递入厌氧工作台中，在氧气浓度为3%的条件下，分别经过10目、18目、30目、35目筛网进行逐级过滤，最终收集过滤后的菌液。收集的菌液以3000转/分钟速度进行离心12min，收集，获得粪菌沉淀，在粪菌沉淀中加入500mL保护剂，混合均匀后，以3000转/分钟速度离心12分，重复4次，收集菌泥；将菌泥加入500mL保护剂中，混合重悬获得粪便菌液。粪便菌液可分装在无菌储存瓶中，-80℃储存。
保护剂的组成成分及其重量比为：低聚果糖10g，低聚半乳糖10g，维生素C 1g，10%醋酸钠10g（10mL），甘油10g（8mL）和 0.9%NaCl 959g（959mL）。
保护剂的制法包括以下步骤：
S01，根据所述重量配比量取50%的0.9%NaCl 479mL，灌入到烧杯中，然后按照重量配比称取低聚果糖10g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚果糖完全溶解，得A溶液；
S02，根据所述重量配比称取低聚半乳糖10g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚半乳糖完全溶解，得B溶液；
S03，根据所述重量配比称取维生素C 1g，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至维生素C完全溶解，得C溶液；
S04，根据所述重量配比量取10%醋酸钠10g（10mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌均匀，得D溶液；
S05，根据所述重量配比量取甘油10g（8mL），加入到烧杯中，缓慢搅拌，得E溶液；
S06，将S01中剩余0.9%NaCl溶液480mL添加到E溶液中，搅拌均匀，所得溶液经过0.22µm滤膜过滤后，所得溶液为所述的一种人粪便菌液制备保护剂。
益生元复合物制备方法：称取质量比为10:1:1:10的低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、大豆低聚糖共10g，添加无菌水至100mL，充分溶解后，配置成10%的水溶液，经0.22µm过滤除菌。
实施例6
一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。溃疡性结肠炎为临床轻、中度溃疡性结肠炎。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物的制备方法，其特征在于，包括体积比为1:1的粪便菌液和10wt%的益生元复合物溶液，所述益生元复合物包括重量份数比为（1-10）：（1-10）：（1-10）：（1-10）的低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉和大豆低聚糖；
在厌氧环境下制备，具体包括以下步骤：
步骤一，粪便收集：选择健康人作为供体，使用粪便收集盒收集50-150g粪便；
步骤二，粪便重悬：将步骤一中粪便按照质量比1：（2-5）添加到保护剂中，以100-500转/分钟速度进行搅拌1-20分钟，得到粪便悬液；
步骤三，粪便过滤：将步骤二中粪便悬液传递入厌氧工作台中，分别经过10目、18目、30目、35目筛网进行逐级过滤，最终收集过滤后的菌液；
步骤四，制备粪菌沉淀：将步骤三中收集的菌液以2000-5000转/分钟速度离心10-15分，进行粪菌富集，获得粪菌沉淀；
步骤五，离心和洗涤：在步骤四中收集的粪菌沉淀中加入保护剂，保护剂的加入量为粪便质量的2-5倍，混合均匀后，以2000-5000转/分钟速度离心10-15分，重复2~5次，收集菌泥；
步骤六，粪便菌液的制备：将步骤五获得的菌泥加入保护剂中，保护剂的加入量为粪便质量的2-5倍，混合重悬获得pH为6.6的粪便菌液；
步骤七，10wt%的益生元复合物溶液的制备：取低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉和大豆低聚糖共10g，添加无菌水至100mL，充分溶解后，配置成10%的水溶液，经0.22µm滤膜过滤除菌；
步骤八，取等体积的步骤六的粪便菌液和步骤七的10wt%的益生元复合物溶液，混匀，即得调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物；
所述保护剂包括以下重量份的组分：低聚果糖1-10份；低聚半乳糖1-10份；维生素C0.1-0.5份；10%醋酸钠1-5份；甘油1-10份和0.9%NaCl 60-100份；
所述保护剂的制法包括以下步骤：
S01，量取50%的0.9%NaCl，灌入到烧杯中，然后按照重量配比称取低聚果糖，加入到烧杯中，缓慢搅拌直至低聚果糖完全溶解，得A溶液；
S02，称取低聚半乳糖，加入到A溶液中，缓慢搅拌直至低聚半乳糖完全溶解，得B溶液；
S03，称取维生素C，加入到B溶液中，缓慢搅拌直至维生素C完全溶解，得C溶液；
S04，量取10%醋酸钠，加入到C溶液中，缓慢搅拌均匀，得D溶液；
S05，量取甘油，加入到D溶液中，缓慢搅拌，得E溶液；
S06，将剩余0.9%NaCl添加到E溶液中，缓慢搅拌均匀，所得溶液经过0.22µm滤膜过滤，即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述缓慢搅拌的速度为60转/分钟。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述健康人的定义为：年龄在18-25岁年轻男性或女性在读大学生，最近3个月内未发生肠道疾病且无性活动，无新冠疫情感染者。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述厌氧环境的氧气浓度控制在0-10%。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤六获得的粪便菌液在室温有氧环境条件下，活菌数量大于8.0×109cfu/mL。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤六获得的粪便菌液在厌氧条件下，活菌数量大于19.0×1010cfu/mL。
7.根据权利要求1所述的一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物的制备方法获得的组合物在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
CN202210939485.5A 2022-08-05 2022-08-05 一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和应用 Active CN115177642B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210939485.5A CN115177642B (zh) 2022-08-05 2022-08-05 一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210939485.5A CN115177642B (zh) 2022-08-05 2022-08-05 一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115177642A CN115177642A (zh) 2022-10-14
CN115177642B true CN115177642B (zh) 2023-05-30

Family

ID=83524182

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210939485.5A Active CN115177642B (zh) 2022-08-05 2022-08-05 一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115177642B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108567799A (zh) * 2018-08-01 2018-09-25 中国人民解放军总医院 一种全粪菌复合胶囊及其制备方法和应用
CN114231470A (zh) * 2022-01-26 2022-03-25 江南大学 一株可缓解溃疡性结肠炎的嗜酸乳杆菌及其应用
CN114404525A (zh) * 2022-01-28 2022-04-29 浙江工业大学 一种铁皮石斛组合物及其制备方法和应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106480013A (zh) * 2016-07-21 2017-03-08 苏州泽科生物科技有限公司 一种改良型肠道菌群基因组快速提取试剂盒
CN110169983B (zh) * 2019-05-28 2021-07-09 北京科拓恒通生物技术股份有限公司 一种用于治疗肠易激综合征的复合益生菌乳酸菌粉剂及其用途
CN110343640B (zh) * 2019-07-25 2021-04-02 上海交通大学 一种人肠道菌群的发酵方法和应用
CN110448577B (zh) * 2019-09-26 2023-06-23 青岛农业大学 一种溃疡性结肠炎修复益生菌微胶囊制剂

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108567799A (zh) * 2018-08-01 2018-09-25 中国人民解放军总医院 一种全粪菌复合胶囊及其制备方法和应用
CN114231470A (zh) * 2022-01-26 2022-03-25 江南大学 一株可缓解溃疡性结肠炎的嗜酸乳杆菌及其应用
CN114404525A (zh) * 2022-01-28 2022-04-29 浙江工业大学 一种铁皮石斛组合物及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN115177642A (zh) 2022-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2447376C (en) Prebiotic and probiotic compositions and methods for their use in gut-based therapies
CN112370470B (zh) 一种重建肠道微生态的微生态制剂
AU2002342641A1 (en) Prebiotic and probiotic compositions and methods for their use in gut-based therapies
US20230270799A1 (en) Biomaterial comprising bacterial cellulose and probiotics and uses thereof
CN110151771B (zh) 一种用于结肠炎修复的高流变性25-羟基维生素d3制剂
CN114081897B (zh) 一种用于调节肠道细胞治疗结肠炎的硒掺杂普鲁士蓝纳米酶及其制备方法和应用
CN108338984A (zh) 具有清肠作用的组合物及其制备方法和在碳水化合物组件特医配方食品中的应用
JP2016069317A (ja) 腎不全進行抑制剤、腎不全予防剤及びインドキシル硫酸産生阻害剤
CN115177642B (zh) 一种调节溃疡性结肠炎肠道菌群的组合物及其制备方法和应用
JPS62103022A (ja) 化学療法剤の副作用低減化剤
CN109498634A (zh) 褐藻寡糖在制备抗炎症性肠病药物中的应用
CN105343132B (zh) 治疗结肠炎的组合物、药物及其制备方法
CN110721202B (zh) 一种粪菌胶囊及其制备方法
CN112401242B (zh) 一种重建肠道微生态的微生态制剂及其用途
Widjanarko et al. Laxative potential of the konjac flour (Amorphophallus muelleri Blume) in treatment of loperamide induced constipation on Sprague Dawley rats
Mok et al. Stones in common bile duct: non-operative management
CN111317746B (zh) 一种富勒烯结构在制备治疗阿尔茨海默病的药物中的应用
ES2896689T3 (es) Composición para el tratamiento del estreñimiento
CN102068479A (zh) 治疗慢性尿路感染的中药组合物及其制备方法
CN117401684A (zh) 一种硅化钙纳米片材料及其制备方法和应用
ES2955633A1 (es) Composición para la rehabilitación intestinal
De Zoysa et al. Patient with Severe Constipation-Predominant Irritable Bowel Syndrome Successfully Treated With Encapsulated Lyophilized Full Spectrum Microbiota: A Case Study: 2890
CN117442688A (zh) 一种降尿酸的药物组合物及其制备方法
CN117679352A (zh) 一种生物酶基组合物、含有该组合物的降糖牙膏及其制备方法
Hawkins On diseases of the vermiform appendix

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant