CN114404525A - 一种铁皮石斛组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种铁皮石斛组合物及其制备方法和应用，由下述重量份的药物组分组成：铁皮石斛10～50份、天冬5～30份，将药物组分混合后粉碎，加入一定量的水，浸泡一段时间，回流提取，提取液过滤后，滤液减压浓缩，得到中药组合物提取物。本发明的组合物对溃疡性结肠炎具有较好的防治作用，可显著降低溃疡性结肠炎小鼠疾病活动评分(DAI评分)，增加结肠长度，改善结肠黏膜损伤、炎症细胞浸润及杯状细胞和黏液减少等组织学病变，其发挥溃疡性结肠炎防治作用的途径之一是增加肠道菌群中UCG‑007菌的丰度。该中药组合物具有组方简单、疗效确切的特点，中药组合物比单用铁皮石斛效果更好、成本更低，市场开发应用前景良好。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种铁皮石斛组合物及其制备方法和应用。
背景技术
溃疡性结肠炎(UC)是一种慢性炎症性肠病(IBD)，特征是结肠粘膜存在炎性细胞浸润，临床症状主要表现为体重减轻、腹泻、腹痛、血便等，严重影响患者的正常工作和生活。流行病学研究表明炎症性肠病患者患结肠癌风险显著增加。近年来，UC发病率在世界范围内迅速上升，对30-40岁的成年人影响日益增大。因其病因复杂、复发风险高、预后差，现已成为临床治疗的一大挑战。
目前，临床用于治疗UC的药物主要有氨基水杨酸、糖皮质激素、免疫调节剂和抗菌药物等。但存在治愈率低、易复发等不足，且长期使用会产生一些不良反应，如不耐受或过敏反应等，亟需研发出疗效确切、毒副作用小的药物治疗UC。近年，从天然资源和功能性食品中寻找可以替代的天然药物疗法成为人们关注的热点。
随着对UC研究的不断深入，发现UC的发生发展与肠黏膜损伤和肠道菌群紊乱密切相关。研究发现肠道菌群的组成(有益菌丰度降低、有害菌丰度升高)和其代谢状态的失调会导致肠黏膜损伤，诱发炎症，从而促进UC的发生发展。中药复方可以有效改善UC的症状，而调节肠道菌群紊乱是中药复方治疗UC的重要潜在靶点。UCG-007为肠道有益菌，有研究表明益生菌灌胃给药可通过增加肠道UCG-007菌群丰度，发挥治疗肾结石的作用。目前未见有药物包括中药可通过增加肠道UCG-007菌群丰度，改善肠道菌群紊乱，防治UC的相关报道。
铁皮石斛是兰科植物铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥茎，具有益胃生津、滋阴清热之功效，研究表明铁皮石斛可明显改善葡聚糖硫酸钠(DSS)致UC小鼠的结肠炎症损伤，但其是否与增加UCG-007菌群丰度，改善肠道菌群紊乱有关并不清楚。此外，单用铁皮石斛成本较高，是否可以使用铁皮石斛中药组合物获得同等药效，尚未可知。
公开号为CN106266612A的发明，公开了以石斛、天冬、枇杷叶、熟地、生地、麦冬、枳实、茵陈、甘草、黄芩为主料的药物组合物，表明其具有清热解毒的作用，用于口腔溃疡、咽喉炎等疾病，但对溃疡性结肠炎的治疗效果未进行研究表述。一些用于治疗胃热、胃炎的药物对溃疡性结肠炎可能并无治疗效果，甚至具有加重溃疡性结肠炎患者症状的副作用，如仝小林院士临床常用以直折胃热的中药组合物，并未应用于溃疡性结肠炎的治疗过程中；用于预防腐蚀性胃炎的西咪替丁常见有腹泻的副作用，甚至可引起慢性消化性溃疡穿孔，使溃疡性结肠炎患者症状加重。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于提供一种通过增加肠道菌群中UCG-007的丰度用于预防和治疗溃疡性结肠炎的铁皮石斛组合物及其制备方法和应用。
为达到上述目的，提出以下技术方案：
一种铁皮石斛组合物，由下述重量份的药物组分组成：铁皮石斛10～50份、天冬5～30份。
进一步地，所述组合物的药效成分包括多糖和黄酮类物质，所述黄酮类物质为柚皮苷。
一种铁皮石斛组合物的制备方法，包括如下步骤：将药物组分混合后粉碎，加入药物组分总质量的5～50倍水，浸泡2～12h，回流提取1～5次，提取温度为80～100℃，提取时间1～6h，提取液过滤后，滤液减压浓缩，浓缩温度为35～80℃，得到中药组合物提取物。
一种铁皮石斛组合物的应用，所述应用为在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用，组合物通过增加肠道UCG-007菌的丰度而达到防治溃疡性结肠炎的目的。
溃疡性结肠炎与如下指标失常相关：
1)疾病活动评分(DAI评分)增加，或者
2)结肠长度减短，或者
3)结肠黏膜损伤、炎症细胞浸润及杯状细胞和黏液减少等组织学病变。
该中药组合物在制备预防和治疗溃疡性结肠炎的药品或食品中的应用：药品制备该中药组合物可与药学上认可的辅料组合以制得片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂或口服液，食品制备该中药组合物可以小剂量添加在各种允许添加量的保健食品中。
本发明的有益效果在于：组合物对溃疡性结肠炎具有较好的防治作用，可显著降低溃疡性结肠炎小鼠疾病活动评分(DAI评分)，增加结肠长度，改善结肠黏膜损伤、炎症细胞浸润及杯状细胞和黏液减少等组织学病变，其发挥溃疡性结肠炎防治作用的途径之一是增加肠道菌群中UCG-007菌的丰度；该中药组合物具有组方简单、疗效确切的特点，且同等总用量条件下，该中药组合物比单用铁皮石斛效果更好、成本更低，市场开发应用前景良好。
附图说明
图1为本发明不同中药成分对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织病理的影响示意图；
图2为本发明不同中药成分对溃疡性结肠炎小鼠肠道中UCG-007丰度增量的影响示意图。
图3为本发明不同剂量的铁皮石斛组合物对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织病理的影响示意图；
图4为本发明不同剂量的铁皮石斛组合物对溃疡性结肠炎小鼠肠道中UCG-007丰度增量的影响示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和说明书附图对本发明做进一步地说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1
称取铁皮石斛10份、天冬5份，两种药材混合，加入药材总重量50倍的水，浸泡2h，回流提取5次，提取温度为100℃，提取时间6h，提取液过滤后，滤液减压浓缩，浓缩温度80℃，得到中药组合物提取物。
实施例2
称取铁皮石斛5份、天冬20份，两种药材混合，加入药材总重量5倍的水，浸泡1h，回流提取1次，提取温度为70℃，提取时间1h，提取液过滤后，滤液减压浓缩，浓缩温度35℃，得到中药组合物提取物。
实施例3
称取铁皮石斛50份，加入药材总重量10倍的水，浸泡12h，回流提取2次，提取温度为80℃，提取时间2h，提取液过滤后，滤液减压浓缩，浓缩温度60℃，得到中药组合物提取物。
实施例4
称取铁皮石斛20份、天冬30份，两种药材混合，加入药材总重量10倍的水，浸泡12h，回流提取2次，提取温度为80℃，提取时间2h，提取液过滤后，滤液减压浓缩，浓缩温度60℃，得到中药组合物提取物。
实施例5
称取天冬30份，加入药材总重量10倍的水，浸泡12h，回流提取2次，提取温度为80℃，提取时间2h，提取液过滤后，滤液减压浓缩，浓缩温度60℃，得到中药组合物提取物。
实施例1到实施例5中的中药的每一份的重量相同。
实施例6
不同药物成分的药效学试验
提取物可以与各种药学上认可的辅料制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂或口服液，每天用量选择在0.3～10g提取物/kg小鼠体重。
动物分组：ICR小鼠，雄性，随机分为：正常对照组、模型对照组、实施例1组(提取物0.6g/kg)、实施例2组(提取物0.6g/kg)、实施例3组(提取物0.6g/kg)、实施例4组(提取物0.6g/kg)、实施例5组(提取物0.6g/kg)，每组10只。
病理模型：除正常对照组外，其余各组小鼠预防性给药2周，第3周给予4％DSS溶液自由饮水造模，边造模边给药。
给药方式：各组动物每日灌胃一次，灌胃容积均为1mL/100g，连续21天；正常对照组和模型对照组给予相应体积的水，其它组别给予药液。
指标测定：试验末期，对各组小鼠进行DAI评分，末次给药后禁食12h，解剖各组小鼠并进行组织病理评分、结肠长度测量及肠道微生物群分析。
表1不同给药成分对溃疡性结肠炎小鼠DAI评分、组织病理评分和结肠长度的影响
| 组别 | DAI评分 | 组织病理评分 | 结肠长度 |
| 正常对照组 | 0.20±0.42 | 0.90±0.32 | 8.74±0.66 |
| 模型对照组 | 6.90±1.66<sup>##</sup> | 6.50±1.35<sup>##</sup> | 6.48±0.36<sup>##</sup> |
| 实施例1组 | 2.70±0.82<sup>**</sup> | 1.40±0.52<sup>**</sup> | 7.86±0.82<sup>**</sup> |
| 实施例2组 | 6.40±1.65 | 5.90±1.66 | 6.56±0.73 |
| 实施例3组 | 4.60±1.07<sup>*</sup> | 5.20±1.03<sup>*</sup> | 7.01±0.70<sup>*</sup> |
| 实施例4组 | 3.50±1.22<sup>**</sup> | 2.56±0.53<sup>**</sup> | 7.58±0.91<sup>**</sup> |
| 实施例5组 | 5.00±0.58 | 5.40±1.07 | 6.81±0.62 |
注：与正常组比较，##p<0.01，#p<0.05；与模型组比较，**p<0.01，*p<0.05。
综合表1和图1～2可以看出本发明的中药组合物和铁皮石斛单味药均可有效降低模型小鼠的DAI和组织病理评分，显著改善模型小鼠结肠萎缩及病理损伤，通过增加肠道UCG-007菌的丰度，提高模型小鼠肠道菌落丰富度和多样性，从而具有抗溃疡性结肠炎的作用。其中，同等用量条件下，本发明的中药组合物作用效果明显优于铁皮石斛单味药，而且该中药组合物具有成本低的优势特色。各单味药配比或提取方式不在本发明所述范围内的组别和不含铁皮石斛的组别则无上述效果，提示铁皮石斛在该中药组合物中的重要性以及存在的必要性。
图1中，A中的a1为正常对照组的结肠病理切片HE染色结果，b1为模型对照组的结果，c1为实施例1的结果，d1为实施例2的结果，e1为实施例3的结果，f1为实施例4的结果，g1为实施例5的结果；B中a2正常对照组的结肠病理切片PAS染色结果，b2为模型对照组的结果，c2为实施例1的结果，d2为实施例2的结果，e2为实施例3的结果，f2为实施例4的结果，g2为实施例5的结果。
HE染色结果表明，与正常对照组相比，模型对照组小鼠结肠黏膜损伤严重，大量炎症细胞浸润，隐窝及腺体结构破坏严重；与模型对照组相比，含铁皮石斛的中药提取物各组可显著改善模型小鼠结肠黏膜损伤、炎症细胞浸润、隐窝及腺体结构破坏等结肠组织病理改变，且相同药材总量条件下，中药组合物效果优于铁皮石斛单味药；药材配比或提取方式超出要求范围的组别和不含铁皮石斛的组别无明显改善作用。
PAS染色结果表明，正常对照组小鼠结肠杯状细胞形态饱满、圆润，黏液分泌丰富，黏膜表面覆盖混合性黏液。与正常对照组相比，模型对照组小鼠杯状细胞出现不同程度萎缩，黏膜表面黏液覆盖减少。与模型对照组相比，含铁皮石斛的中药提取物各组小鼠肠黏膜层上皮细胞和杯状细胞的萎缩均有不同程度的恢复，黏液分泌增多，且相同药材总量条件下，该中药组合物效果优于铁皮石斛单味药；药材配比或提取方式超出本发明要求范围的组别和不含铁皮石斛的组别无明显改善作用。
实施例7
不同剂量下的药效学试验
动物分组：ICR小鼠，雄性，随机分为：正常对照组、模型对照组、不同剂量组(分别采用实施例4制备的中药组合物提取物0.3、0.6、2.4g/kg)，每组10只。
病理模型：除正常对照组外，其余各组小鼠预防性给药2周，第3周给予4％DSS溶液自由饮水造模，边造模边给药。
给药方式：各组动物每日灌胃一次，灌胃容积均为1mL/100g，连续21天；正常对照组和模型对照组给予相应体积的水，其它组别给予药液。
指标测定：试验末期，对各组小鼠进行DAI评分，末次给药后禁食12h，解剖各组小鼠并进行组织病理评分、结肠长度测量及肠道微生物群分析。
表2不同给药量对溃疡性结肠炎小鼠DAI评分、组织病理评分和结肠长度的影响
| 组别 | DAI评分 | 组织病理评分 | 结肠长度 |
| 正常对照组 | 0.30±0.48 | 0.80±0.42 | 8.56±0.68 |
| 模型对照组 | 6.56±1.51<sup>##</sup> | 7.00±1.15<sup>##</sup> | 6.29±0.50<sup>##</sup> |
| 0.3g/kg | 4.20±0.92<sup>**</sup> | 3.90±0.88<sup>**</sup> | 7.11±0.55<sup>**</sup> |
| 0.6g/kg | 3.22±1.09<sup>**</sup> | 3.10±0.74<sup>**</sup> | 7.48±0.81<sup>**</sup> |
| 2.4g/kg | 2.40±0.70<sup>**</sup> | 2.40±0.52<sup>**</sup> | 8.14±0.83<sup>**</sup> |
注：与正常组比较，##p<0.01，#p<0.05；与模型组比较，**p<0.01，*p<0.05。
综合表2和图3～4可以看出本发明的中药组合物低、中、高剂量均可有效降低模型小鼠的DAI和组织病理评分，显著改善模型小鼠结肠萎缩及病理损伤，通过增加肠道UCG-007菌的丰度，提高模型小鼠肠道菌落丰富度和多样性，从而发挥抗溃疡性结肠炎的作用，且具有剂量依赖性。
图3中，A中的a3为正常对照组的结肠病理切片HE染色结果，b3为模型对照组的结果，c3为剂量为0.3g提取物/kg小鼠体重的结果，d3为0.6g提取物/kg小鼠体重的结果，e3为2.4g提取物/kg小鼠体重的结果；B中的a4为正常对照组的结肠病理切片PAS染色结果，b4为模型对照组的结果，c4为剂量为0.3g提取物/kg小鼠体重的结果，d4为0.6g提取物/kg小鼠体重的结果，e4为2.4g提取物/kg小鼠体重的结果。
HE染色结果表明，与正常对照组相比，模型对照组小鼠结肠黏膜损伤严重，大量炎症细胞浸润，隐窝及腺体结构破坏严重；与模型对照组相比，各组不同剂量的中药组合物提取物均可显著改善模型小鼠结肠黏膜损伤、炎症细胞浸润、隐窝及腺体结构破坏等结肠组织病理改变，且剂量越高，改善效果越好。
PAS染色结果表明，与正常对照组相比，模型对照组小鼠杯状细胞出现不同程度萎缩，黏膜表面黏液覆盖减少。与模型对照组相比，不同剂量的中药组合物各组小鼠肠黏膜层上皮细胞和杯状细胞的萎缩均有不同程度的恢复，黏液分泌增多，且剂量越高，恢复效果越好。
可见，本发明中药组合物能通过改善肠道菌群，尤其是增加UCG-007的丰度，显著降低模型小鼠DAI评分、增加模型小鼠结肠长度、降低模型小鼠组织病理评分，可以治疗溃疡性结肠炎，疗效确切。若将铁皮石斛从该中药组合物中去除则无此疗效。此外，相同用量条件下，该中药组合物作用效果优于铁皮石斛单味药，因此具有效果好、成本低的优势。
综上所述，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (8)
1.一种铁皮石斛组合物，其特征在于，由下述重量份的药物组分组成：铁皮石斛10～50份、天冬5～30份。
2.如权利要求1所述的一种铁皮石斛组合物，其特征在于，所述组合物的药效成分包括多糖和黄酮类物质，所述黄酮类物质为柚皮苷。
3.一种如权利要求1或2所述的铁皮石斛组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将药物组分混合后粉碎，加入一定量的水，浸泡一段时间，回流提取，提取液过滤后，滤液减压浓缩，得到中药组合物提取物。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，水的加入量是药物组分总质量的5～50倍。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，浸泡2～12h，回流提取1～5次，提取温度为80～100℃，提取时间1～6h。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，浓缩温度为35～80℃。
7.一种如权利要求1或2所述的铁皮石斛组合物的应用，其特征在于，所述应用为在制备防治溃疡性结肠炎药物中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，组合物通过增加肠道UCG-007菌的丰度而达到防治溃疡性结肠炎的目的。
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