CN103127273B - 一种治疗慢性肝病的复方药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗慢性肝病的复方药物及其制备方法，该复方药物是由茵陈蒿、一枝蒿、毛菊苣、玫瑰花、大黄、甘草药材为原料及药用辅料，采用溶剂提取、除杂、浓缩、干燥方法制成口服制剂、糖浆剂、颗粒剂、硬胶囊剂、片剂。该复方药物根据维吾尔医药理论，结合民族医药用药特点，依据维吾尔族在长期的民间临床实践，采用合理提取方法溶出该复方药物中有效成分，增强药效，提高了生物利用度。经动物实验证明：对肝损伤具有保护作用。经药效学实验表明：所述方法得到的提取物可不同程度的降低肝损伤模型小鼠血清中ALT、AST水平，各给药组病理学症状均有所减轻，对肝损伤具有保护作用。急性毒性实验表明：所述方法获得的提取物经对小鼠灌胃单次给药毒性试验，最大给药量相当于临床人拟用剂量的337倍，无毒安全。

Description

一种治疗慢性肝病的复方药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗慢性肝病复方药物及制备方法，属于维吾尔医药及民族医药技术领域。

背景技术

慢性肝病是由肝发生炎症及肝细胞坏死和急性肝炎(乙型或丙型)迁延不愈，病程超过半年者，有的肝炎起病隐袭，待临床发现疾病时，已经成为慢性肝炎。而随着慢性肝炎的继续发展，往往会加大肝脏损伤的损伤程度，从而引起肝细胞炎症、坏死，并继发纤维化的病理过程，肝纤维化是向肝硬化甚至原发性肝癌发展的一个中间环节。作为肝病感染大国，我国约有1亿2千万的慢性感染者。其中，慢性肝炎感染者就达到2000万。据统计显示，每年约有30万人因肝病及其所致的并发症导致死亡，而每年对于肝病的治疗废用更是达到300-500亿元人民币。目前，慢性肝炎及肝纤维化已逐渐成为我国人民必须严肃对待的一个健康问题。我国现有酒民3亿多，酒精性肝病的发病率为20%左右。统计显示，60%的嗜酒者患有脂肪肝；30%的酒精性脂肪肝可演变为肝纤维化；10%以上可转化为肝硬化。

因此，寻找防治慢性肝病及肝纤维化的有效方法和有效药物，是当前的迫切要求，具有深远的意义和重大的社会价值。目前，针对多个途径及环节所开发的治疗药物，在临床上已取得一定疗效。如针对慢性肝炎的药物有a一干扰素、p一干扰素、强力新、熊去氧胆酸及病毒哇等；针对肝纤维化的药物则有皮质类固醇、肿瘤坏死因子Q、Y一干扰素、白细胞介质素一2、秋水仙碱等。但是，尽管已有药物已在临床上被广泛应用，但其效果仍然未能达到理想，而且其毒副作用一般大，因此在临床应用的受到极大限制。

维吾尔医药对肝病的认识有着几千年的历史，因此，利用维医维药防治慢性肝炎、肝纤维化的研究正不断进行当中。目前，不管在单味药，还是复方药物及有效成分的研究方面均已取得令人瞩目的成果。其作用机理不像西药，只是单一，片面的，而是通过多靶点、多环节、多途径调节来实现的，具有复合和全面的治疗特点。因开发“安全、有效、价廉”的新型抗慢性肝病、肝纤维化的药物，对传染源的控制及疾病的转归具有极其重要的社会意义和经济价值，已成为我国抗肝病中药发展的必然趋势。

发明内容

本发明涉及一种治疗慢性肝病的复方药物及其制备方法，该复方药物是由原料茵陈蒿、一枝蒿、毛菊苣、玫瑰花、大黄、甘草6味药材为原料及医学上常用的辅料，采用溶剂提取、除杂、浓缩、干燥方法制成口服制剂、糖浆剂、颗粒剂、硬胶囊剂或片剂。所述的慢性肝病包括慢性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、酒精性肝病、自身免疫性肝病、肝硬化。主要以保肝降酶、调节免疫、抑制肝病毒之功能，治疗病毒性肝炎、酒精性肝炎所引起的肝损伤、肝纤维化、肝硬化。该复方药物根据维吾尔医药理论，结合民族医药用药特点，依据维吾尔族在长期的民间临床实践，采用合理提取方法溶出该复方药物中有效成分，增强药效，提高了生物利用度，经动物实验证明：对肝损伤具有保护作用。经药效学实验结果表明：通过本发明所述方法得到的提取物可不同程度的降低肝损伤模型小鼠血清中ALT、AST水平，各给药组病理学症状均有所减轻，提示对肝损伤具有保护作用。急性毒性实验表明：本发明所述方法获得的提取物经对小鼠灌胃单次给药毒性试验，最大给药量相当于临床人拟用剂量的337倍，无毒安全。

本发明所述的一种治疗慢性肝病复方药物，是由原料药为茵陈蒿5-50份，一枝蒿5-70份，毛菊苣5-50份，玫瑰花5-50份，大黄5-30份，甘草5-30份，辅料为甜菊素、山梨酸、蔗糖、乳糖、淀粉、糊精、聚维酮、硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠或微晶纤维素10-50份制成。

所述的治疗慢性肝病复方药物，是由原料药为茵陈蒿5-25份，一枝蒿5-35份，毛菊苣5-25份，玫瑰花5-25份，大黄5-15份，甘草5-15份，辅料为甜菊素、山梨酸、蔗糖、乳糖、淀粉、糊精、聚维酮、硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠或微晶纤维素10-45%制成。

所述治疗慢性肝病复方药物的制备方法，具体操作按下列步骤进行：

a、将经筛选好的茵陈蒿，一枝蒿，毛菊苣，玫瑰花，大黄，甘草混合粉碎至10-80目，用4-20倍量的水或浓度为10-95%的乙醇提取1-4次，温度30-100℃，每次提取时间为1-4小时，得到水提取液或乙醇提取液；

b、将步骤a水提取液，过滤分离药渣与药液，将药液减压浓缩，用乙醇沉淀，滤过上清液，上清液减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到水提液浸膏；

或将步骤a醇提液，过滤分离药渣与药液，将药液合并，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到醇提液浸膏；

c、将步骤b的水提液浸膏或醇提液浸膏分别加入辅料甜菊素、山梨酸、蔗糖、乳糖、淀粉、糊精、聚维酮、硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠或微晶纤维素按常规方法制成口服液、糖浆剂、颗粒剂、胶囊或片剂。

步骤b中用乙醇沉淀，醇沉浓度为40-80%。

本发明所述的一种治疗慢性肝病复方药物及其制备方法，所述复方药物的药理特性为：维吾尔医认为本处方由维吾尔医常用补肝类、胆液质调节类、清热消炎类、粘液质清除类、胆液质成熟类等维吾尔药组成的临床经验方，方中茵陈蒿、毛菊苣、一枝蒿为主要药，大黄、玫瑰花辅助药，甘草为调节药。所述制备方法制成的制剂具有调节异常胆液质，清除异常粘液质，增强肝脏功能，消肝肿，通肝阻，利胆囊，祛除黄疸，软肝硬，降低肝火，利尿退肿，清热退烧，消炎止痛,凉血解毒等。主治慢性肝脏病，肝脏有阻，肝脏硬化，肝炎、肝脾肿大、黄疸等。现代医学具有保肝降酶，调节免疫，抑制乙肝病毒之功能，主治乙型病毒性肝炎、酒精性肝炎所引起的肝损伤、肝纤维化、肝硬化等疾病的治疗用途。

本发明所述的一种治疗慢性肝病复方药物中各组分的药理特性为：

茵陈蒿：维吾尔名西瓦合，别名西白。为菊科植物茵陈蒿Artemisia capillaris Thunb.或滨蒿Artemisia scoparia Waldst.etKitag.的嫩苗补肝类药具有增强肝脏功能，消肝肿，通肝阻，利胆囊，除黄疸，软肝硬，退腹水等作用。用于肝脏功能虚弱，肝脏炎肿，肝区疼痛，面目黄疸，肝硬腹水等病证。功能生干生热，开通肝阻，软肝消炎,通利经水等。主治湿寒性或粘液质性疾病，如慢性肝脏病,肝脏有阻,肝脏硬化,子宫炎肿及各种慢性炎肿和经水不下等，内服3-6g。

毛菊苣：维吾尔药物名卡森，别名卡斯尼。为菊科植物毛菊苣。Cichorium glandulosum Boiss.et Huet干燥全草。胆液质调节药，具有降低过盛的胆液质，恢复胆液质的正常状态，平衡体液，调整气质的作用。一般用于胆液质的轻度异常或单纯性异常而发生的疾病。本类药物的药性多为湿寒。本品性湿寒，味苦。功能生湿生寒，调节异常胆液质，降低肝火，清胃之热，祛除黄疸，利尿退肿等。主治干热性或胆液质性疾病，如热性肝炎、胃炎、脾肿大、黄疸、尿闭水肿等，内服5-10g。

一枝蒿：维吾尔名一孜伙艾密尼。为菊科植物一枝蒿Artemisiarupestris L.的全草。清热消炎药，具有清热、消炎、退肿、凉血、清肺、除疫、通淋、止痢、解毒等作用。用于各种热性炎肿、发热、肺痨、温疫、热淋、热痢、痈肿、毒疮、毒虫伤等病证。本品性寒，味辛苦。功能清热退烧，消炎止痛，凉血解毒等。主治热性或胆液质性或血液质性疾病，如热性感冒、发烧、头痛、胃痛、腹胀、肝炎,荨麻疹、毒虫咬伤等，内服6-15g。

大黄：维吾尔名热瓦尼。粘液质清除药，粘液质清除药，一般具有被已成熟的异常粘液质清除到体外，恢复粘液质的正常状态，平衡体液，调整气质的作用。功能生干生热，清除异常粘液质，祛寒通便，燥湿止泻，消炎退肿，止咳平喘，除脓愈疡，开通肝阻、脾阻、肠阻，通经、通尿、除黄等。主治湿寒性或粘液质性疾病，如寒性便秘，湿性腹泻，各种炎肿，各种水肿，咳嗽哮喘，肺部结核，肠道脓疡，肝脾肿大，腹胀，闭经，闭尿，黄疸等，内服3-6g。

玫瑰花：维吾尔名克孜丽古丽，胆液质成熟药，具有成熟异常胆液质，顺利清除异常胆液质创造必有条件，有平衡体液，调整气质的作用。功能成熟异常胆液质和异常粘液质，芳香开窍，安神止痛，软肠通便，滋补肠胃，改善消化，驱风消炎，润肤生辉等。主治胆液质性疾病，如干热性肝炎、神经衰弱、头晕脑胀、心悸失眠、心肌炎、结核引起消耗性疾病、大便不通等，或粘液质性疾病，如胃纳不佳、消化不良，各种风湿疼痛、面色苍白等，内服5-7g。

甘草：维吾尔名曲曲克布亚，别名比合苏斯，补肺药，具有止咳化痰，祛痰平喘等作用。用于肺虚、咳嗽、痰多、顽痰、气喘等病证。本品性湿热，味甘。功能生湿生热，稀化浓性体液，湿润胸肺，生湿化痰，润喉清音，利咽止痒，祛寒平喘，止咳，解毒愈疮，祛风止痒，调和药性等。主治干寒性或黑胆性疾病，如干性胸部疾病、顽痰不化、失音、咽喉奇痒，寒性哮喘、咳嗽，各种肺病及淋病，创伤，皮肤瘙痒等，内服3-6g。

本发明所述的治疗慢性肝病复方药物在维吾尔医传统理论的指导下组方，并在临床上用于多年，疗效确切。

附图说明

图1为本发明治疗慢性肝病复方药物肝损伤保护作用药效评价实验病理组织标本图，其中1为对照组，器官：肝脏，病变：未见异常，染色：H.E，

倍数：10х；2为模型组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；3为阳性药组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；4为水提小剂量组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；5为水提大剂量组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；6为醇提小剂量组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在少量脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；7为醇提大剂量组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；

图2为治疗慢性肝病复方药物提取物对BCG+LPS诱导的小鼠急性肝损伤模型的影响图，其中1为对照组，器官：肝脏，病变：未见异常，染色：H.E，倍数：10х；2为模型组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；3为阳性药组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；4为水提大剂量组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；5为水提小剂量组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；6为醇提大剂量组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在少量脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х；7为醇提小剂量组，器官：肝脏，病变：肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，散在脂质空泡，染色：H.E，倍数：10х。

具体实施方式

实施例1(以制备1000ml为基数，制备口服制剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿20份，一枝蒿70份，毛菊苣50份，玫瑰花5份，大黄5份，甘草30份混合粉碎至10目，用4倍量的水提取1次，温度30℃，提取时间为4小时，得到水提取液；

b、将水提取液，过滤分离药渣与药液，将药液减压浓缩，用乙醇沉淀，醇沉浓度为40%，滤过，滤液将减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到水提液浸膏；

c、将水提液浸膏加纯净水，加5份甜菊素、5份山梨酸，板框过滤，分装每瓶或每支10ml、20ml、100ml或200ml，灭菌，按常规方法制成口服液制剂。

实施例2(以制备1000ml为基数，制备口服制剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿20份，一枝蒿70份，毛菊苣50份，玫瑰花5份，大黄5份，甘草30份混合粉碎至10目，用浓度为10%的乙醇4提取1次，温度30℃，提取时间为4小时，得到乙醇提取液；

b、将醇提液过滤分离药渣与药液，合并药液，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到醇提液浸膏；

c、将步骤b醇提液浸膏加纯净水，加5份甜菊素、5份山梨酸，板框过滤，分装每瓶或每支10ml、20ml、100ml或200ml，灭菌，按常规方法制成口服液制剂。

实施例3(以制备1000ml为基数，制备糖浆剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿50份，一枝蒿30份，毛菊苣5份，玫瑰花50份，大黄30份，甘草10份混合粉碎至50目，用8倍量的浓度为10%的乙醇提取2次，温度50℃，每次提取时间为2小时，得到乙醇提取液；

b、将乙醇提取液，过滤分离药渣与药液，将药液合并，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到醇提取液浸膏；

c、将步骤b醇提取液浸膏加纯净水，再加40份蔗糖溶解均匀，过滤，分装每瓶或每支10ml、20ml、100ml、200ml或300ml，灭菌，按常规方法制成糖浆剂。

实施例4(以制备1000ml为基数，制备糖浆剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿50份，一枝蒿30份，毛菊苣5份，玫瑰花50份，大黄30份，甘草10份混合粉碎至50目，用10倍量的水提取2次，温度50℃，每次提取时间为2小时，得到水提取液；

b、将水提取液，过滤分离药渣与药液，将药液减压浓缩，用乙醇沉淀，醇沉浓度为50%滤过上清液，上清液减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到水提液浸膏；

c、将水提取液浸膏加纯净水，再加40份蔗糖溶解均匀，过滤，分装每瓶或每支10ml、20ml、100ml、200ml或300ml，灭菌，按常规方法制成糖浆剂。

实施例5(制备1000g为基数，制备颗粒剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿5份，一枝蒿10份，毛菊苣20份，玫瑰花20份，大黄8份，甘草8份，混合粉碎至60目，用20倍量的浓度为50%的乙醇提取3次，温度60℃，每次提取时间为1小时，得到乙醇提取液；

b、将乙醇提取液，过滤分离药渣与药液，将药液合并，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到醇提液浸膏；

c、将醇提液浸膏，用温度30℃真空干燥，时间24h，得到干浸膏，将干浸膏粉碎得到干浸膏粉，再将干浸膏粉与乙醇为粘合剂，与辅料蔗糖30份，糊精15份，充分混匀，按常规制药方法制成颗粒剂。

实施例6(制备1000g为基数，制备颗粒剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿5份，一枝蒿10份，毛菊苣20份，玫瑰花20份，大黄8份，甘草8份，混合粉碎至60目，用15倍量的水提取3次，温度60℃，每次提取时间为1小时，得到水提取液；

b、将水提取液，过滤分离药渣与药液，将药液减压浓缩，用乙醇沉淀，醇沉浓度为60%，滤过，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到水提液浸膏；

c、将水提取液浸膏，用温度30℃真空干燥，时间24h，得到干浸膏，将干浸膏粉碎得到干浸膏粉，再将干浸膏粉与乙醇为粘合剂，与辅料蔗糖30份，糊精15份，充分混匀，按常规制药方法制成颗粒剂。

实施例7(制备1000g为基数，制备片剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿25份，一枝蒿35份，毛菊苣20份，玫瑰花15份，大黄10份，甘草15份，混合粉碎至40目，用15倍量的浓度为70%的乙醇提取3次，温度60℃，每次提取时间为2小时，得到乙醇提取液；

b、将乙醇提取液，过滤分离药渣与药液，将药液合并，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到醇提液浸膏；

c、将醇提液浸膏，用温度50℃真空干燥，时间36h，得到干浸膏，将干浸膏粉碎得到干浸膏粉，再将干浸膏粉与聚维酮为粘合剂，与辅料淀粉15份、糊精10份、硬脂酸镁5份、羧甲基淀粉钠8份和微晶纤维素2份充分混匀，按常规制药方法制成每片0.3g、0.4g、0.45g或0.5g的片剂。

实施例8(制备1000g为基数，制备片剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿25份，一枝蒿35份，毛菊苣20份，玫瑰花15份，大黄10份，甘草15份，混合粉碎至40目，用20倍量的水提取3次，温度60℃，每次提取时间为2小时，得到水提取液；

b、将水提取液，过滤分离药渣与药液，将药液减压浓缩，用乙醇沉淀，醇沉浓度为70%，滤过，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到水提液浸膏；

c、将水提液浸膏，用温度50℃真空干燥，时间36h，得到干浸膏，将干浸膏粉碎得到干浸膏粉，再将干浸膏粉与聚维酮为粘合剂，与辅料淀粉15份、糊精10份、硬脂酸镁5份、羧甲基淀粉钠8份和微晶纤维素2份充分混匀，按常规制药方法制成每片0.3g、0.4g、0.45g或0.5g的片剂。

实施例9(制备1000g为基数，制备硬胶囊剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿30份，一枝蒿40份，毛菊苣25份，玫瑰花25份，大黄30份，甘草30份，混合粉碎至70目，用20倍量的浓度为95%的乙醇提取4次，温度100℃，每次提取时间为2小时，得到乙醇提取液；

b、将乙醇提取液，过滤分离药渣与药液，将药液合并，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到醇提液浸膏；

c、将醇提液浸膏，用温度80℃真空干燥，时间48h，得到浸膏，将浸膏粉碎得到干浸膏粉，再将干浸膏粉与乙醇为粘合剂，与辅料淀粉10份、糊精5份、硬脂酸镁5份、羧甲基淀粉钠5份和微晶纤维素5份充分混匀，按常规制药方法制成每粒0.25g、0.3g、0.35g或0.4g的硬胶囊。

实施例10(制备1000g为基数，制备硬胶囊剂)

a、将经筛选好的茵陈蒿30份，一枝蒿40份，毛菊苣25份，玫瑰花25份，大黄30份，甘草30份，混合粉碎至70目，用8倍量的水提取4次，温度100℃，每次提取时间为2小时，得到水提取液；

b、将水提取液，过滤分离药渣与药液，将药液减压浓缩，用乙醇沉淀，醇沉浓度为80%，滤过，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到水提液浸膏；

c、将水提液浸膏，用温度80℃真空干燥，时间48h，得到浸膏，将浸膏粉碎得到干浸膏粉，再将干浸膏粉与乙醇为粘合剂，与辅料淀粉10份、糊精5份、硬脂酸镁5份、羧甲基淀粉钠5份和微晶纤维素5份充分混匀，按常规制药方法制成每粒0.25g、0.3g、0.35g或0.4g的硬胶囊。

实施例11

本发明所述的治疗慢性肝病复方药物肝损伤保护作用药效评价：

1、材料和方法

1.1材料

1.1.1药品及试剂

本发明提供治疗慢性肝病复方药物水提物，棕褐色浸膏，1g浸膏相当于6.47g生药，批号为20110914，有效期为18个月；治疗慢性肝病复方药物醇提物，棕褐色浸膏，1g浸膏相当于3.33g生药，批号为20110908，有效期为18个月，治疗慢性肝病复方药物临床拟用量为10g（生药）/天；

联苯双酯滴丸，黄色糖衣滴丸，1.5mg/粒，临床用量7.5-15mg/次，3次/天，（小鼠口服本品150-200mg/kg，可减轻因CCl₄所致肝损伤），北京协和药厂生产，批号为：101120108，有效期至2013年11月；CCL₄：分析纯，天津市化学试剂三厂，批号：061028；卡介苗：由新疆疾病预防控制中心提供，批号200912a073-3；脂多糖：Sigma，L-2880；ALT试剂盒：中生北控生物科技股份有限公司，批号：111721；AST试剂盒：中生北控生物科技股份有限公司，批号：110831；

1.1.2仪器设备SABA-18全自动生化分析仪，意大利生产；Sigma3K30高速低温离心机，美国生产；

1.1.3实验动物昆明种小鼠，140只，雌雄各半，体重18-22g，新疆维吾尔自治区疾病控制中心新疆实验动物中心提供，试验动物许可证号SCXK（X2003-0001）；

1.2方法：

1.2.1四氯化碳（CCl₄）诱导的小鼠急性肝损伤模型的建立及剂量分组

昆明种小鼠70只，雌雄各半，按性别体重分为7组，分别为：空白对照组和模型组，给予0.1ml/10g的蒸馏水；阳性对照（联苯双酯滴丸）组，灌胃给予0.4g/kg联苯双酯；治疗慢性肝病复方药物水提物组（0.2g/kg、0.4g/kg）、治疗慢性肝病复方药物醇提物组（0.4g/kg、0.8g/kg）；各组灌胃给药，连续7d。末次给药前13小时，除空白对照组外其他各组动物腹腔注射0.1%的CCl₄（橄榄油配制）0.2ml/只。禁食不禁水，末次给药后1h，颈动脉采血分离血清测定生化指标，同时剖取肝脏，计算脏器系数，并用10%甲醛溶液固定，制作切片，HE染色，进行病理学检查；

1.2.2卡介苗（BCG）+脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肝损伤模型的建立及剂量分组：

昆明种小鼠70只，雌雄兼用，按性别体重分为7组，分别为：空白对照组和模型组，给予0.1ml/10g的蒸馏水；阳性对照（联苯双酯滴丸）组，灌胃给予0.4g/kg联苯双酯；治疗慢性肝病复方药物水提物组（0.2g/kg、0.4g/kg）、治疗慢性肝病复方药物醇提物组（0.4g/kg、0.8g/kg）；各组灌胃给药，连续10d。首次给药前各组小鼠尾静脉注射BCG0.2ml/只，末次给药前15h，各鼠尾静脉注射LPS0.2ml/只(8ug)诱导肝损伤，对照组小鼠均尾静脉注射同等体积的生理盐水。末次给药后1h，颈动脉采血分离血清测定生化指标，同时剖取肝脏，计算脏器系数，并用10%甲醛溶液固定，制作切片，HE染色，进行病理学检查；

1.2.3血清酶活性测定小鼠颈动脉取血，放入Eppendorf管中，3500r/min离心10min，分离血清。用全自动生化仪测定ALT和AST活性。

1.2.4肝脏系数小鼠脱椎处死，立即取肝脏称重。（肝脏系数=肝重/体重）

1.2.5数据处理数据输入SPSS11.5软件中，统计结果以均数±标准差（X±SD）表示，进行组间均数的t检验。p<0.05表示统计学差异，p<0.01表示具有显著性差异；

2、结果：

2.1治疗慢性肝病复方药物提取物对CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤模型的保护作用：

实验结果表明：模型组与对照组比较血清中ALT、AST显著升高，有显著性统计学差异；各给药组与模型组比较，联苯双酯滴丸及各治疗慢性肝炎的复方药物提取物均能不同程度的降低血清ALT和AST活性，其中联苯双酯滴丸组、治疗慢性肝病复方药物醇提物高剂量组与模型组比较统计有统计学差异，模型组肝脏系数明显大于对照组，有显著统计学差异（见表1）；病理结果表明：模型组及给药组小鼠肝脏都出现不同程度的急性肝损伤反应，表现为：肝细胞坏死、变性（水肿），脂质空泡（脂变），纤维化。各给药组小鼠肝脏病变程度、范围上较模型组有部分减轻。醇提物给药组与水提物给药组比较在减轻肝细胞坏死、变性（水肿）方面，醇提物给药组优于水提物给药组（见图1），结果提示治疗慢性肝病复方药物提取物对CCl₄所致的肝损伤有一定的保护作用；

表1慢性肝病复方药物提取物对CCl₄肝损伤小鼠血清ALT、AST和肝脏系数的影响（）

注：治疗慢性肝病复方药物水提物1g浸膏相当于6.47g生药，0.2g/kg折合1.3g生药/kg，0.2g/kg折合2.6g生药/kg，分别相当于临床人拟用剂量（0.167g生药/kg）的8倍、16倍；治疗慢性肝病复方药物醇提物1g浸膏相当于3.33g生药，0.4g/kg折合1.3g生药/kg，0.8g/kg折合2.7g生药/kg，分别相当于临床人拟用剂量（0.167g生药/kg）的8倍、16倍；

⁺⁺与空白组比较p<0.01;*与模型组比较p<0.05，**与模型组比较<0.05；

2.2治疗慢性肝病复方药物提取物对BCG+LPS诱导的小鼠急性肝损伤模型的保护作用：

实验结果表明：模型组与对照组比较血清中AST显著升高，肝脏脏器系数明显高于对照组，结果有显著统计学差异；各给药组与模型组比较：联苯双酯滴丸及各治疗慢性肝病复方药物提取物能不同程度的降低血清ALT和AST活性，其中治疗慢性肝病复方药物醇提物高剂量组与模型组比较AST有统计学差异，联苯双酯滴丸组与模型组比较ALT有显著统计学差异，联苯双酯滴丸组、治疗慢性肝病复方药物醇提物大剂量组与模型组比较肝脏脏器系数降低，有统计学差异（结果见表2）；病理结果表明：模型组及给药组小鼠肝脏都出现不同程度的急性肝损伤反应，表现为：肝细胞变性、坏死，脂质空泡（脂变）。各给药组小鼠肝脏病变程度、范围上较模型组有部分减轻，各给药组之间没有明显的差异（见图2）。结果提示治疗慢性肝病复方药物醇提取物对BCG+LPS诱导的小鼠急性肝损伤模型有一定的保护作用；

表1慢性肝病复方药提取物对BCG+LPS肝损伤小鼠血清ALT、AST和肝脏系数的影响（）

注：治疗慢性肝病复方药物水提物1g浸膏相当于6.47g生药，0.2g/kg折合1.3g生药/kg，0.2g/kg折合2.6g生药/kg，分别相当于临床人拟用剂量（0.167g生药/kg）的8倍、16倍；治疗慢性肝病复方药物醇提物1g浸膏相当于3.33g生药，0.4g/kg折合1.3g生药/kg，0.8g/kg折合2.7g生药/kg，分别相当于临床人拟用剂量（0.167g生药/kg）的8倍、16倍；

⁺⁺与空白组比较p<0.01;*与模型组比较p<0.05，**与模型组比较<0.05；

3、讨论

CCl₄肝损伤主要机制为自由基的形成及引发的链式过氧化反应，CCl₄的代谢产物能迅速与细胞成分发生不可逆的共价结合而导致细胞死亡，从而导致急性化学性肝损伤；BCG+LPS肝损伤的主要机制为预先给小鼠注射BCG，激活致敏T淋巴细胞，使其聚集于肝脏，而后用LPS攻击注射，可激发这些细胞因子释放对肝细胞有毒性作用的可溶性因子，从而导致免疫性肝损伤。以上两种肝损伤模型均可不同程度的升高血清中ALT、AST，并造成相应的肝脏病理学的改变；

本实验通过测定给予等同生药剂量下治疗慢性肝病复方药物水、醇提取物的肝损伤小鼠血清中ALT、AST水平及病理学检查，从而观察受试物对以上两种肝损伤模型的保护作用；实验结果表明：治疗慢性肝病复方药物不同剂量、不同提取物可不同程度的降低肝损伤模型小鼠血清中ALT、AST水平，各给药组病理学症状均有所减轻，提示治疗慢性肝病复方药对肝损伤具有一定的保护作用；

4、治疗慢性肝病复方药物肝损伤保护作用药效评价实验病理组织标本检查报告单：

4.1治疗慢性肝病复方药物对CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤模型的影响：

受检小鼠70只，昆明种，取肝脏组织做病理学检查；

空白组可见肝细胞形态基本正常，偶见肝细胞胞浆疏松化，个别可见散在脂质空泡；

模型组均可见肝小叶中央静脉周围肝细胞部分坏死变性（6/10轻度、3/10中度、1/10重度），肝细胞胞浆疏松化，部分可见散在脂质空泡，偶见纤维间隔；

阳性药组个别动物可见肝小叶中央静脉周围肝细胞部分坏死变性（4/10轻度、1/10中度），肝细胞胞浆疏松化，可见少量散在脂质空泡，偶见纤维间隔；

水提小剂量组个别动物可见肝小叶中央静脉周围肝细胞部分坏死变性（5/10轻度、1/10中度），肝细胞胞浆疏松化，可见散在脂质空泡，偶见纤维间隔。

水提大剂量组个别动物可见肝小叶中央静脉周围肝细胞部分坏死变性（4/10轻度、1/10中度），肝细胞胞浆疏松化，可见少量散在脂质空泡，偶见纤维间隔；

醇提小剂量组个别动物偶见肝小叶中央静脉周围肝细胞部分坏死变性（3/10轻度、1/10中度），肝细胞胞浆疏松化，可见散在脂质空泡，偶见纤维间隔；

醇提大剂量组个别动物偶见肝小叶中央静脉周围肝细胞少量坏死变性（3/10轻度、1/10中度），肝细胞胞浆疏松化，可见散在脂质空泡，偶见纤维间隔；

表3小鼠肝脏组织病理观察统计表

小结：本次试验中，模型组及给药组小鼠肝脏都出现不同程度的急性肝损伤反应，表现为：肝细胞坏死、变性（水肿），脂质空泡（脂变），纤维化。各给药组小鼠肝脏病变程度、范围上较模型组有部分减轻。醇提物给药组与水提物给药组比较在减轻肝细胞坏死、变性（水肿）方面，醇提物给药组优于水提物给药组；

4.2治疗慢性肝病复方药物提取物对BCG+LPS诱导的小鼠急性肝损伤模型的影响：

受检小鼠70只，昆明种，取肝脏组织做病理学检查；

空白组可见肝细胞形态基本正常，未见肝细胞萎缩，偶见肝小叶周边肝细胞脂肪样变性；

模型组可见肝小叶周边区肝细胞轻度水样变性，可见散在少量嗜酸性小体，部分可见散在脂质空泡；

阳性药组肝细胞形态大致正常，偶见肝小叶周边肝细胞点状坏死、脂质空泡，偶见少量嗜酸性小体；

水提小剂量组个别小鼠肝小叶周边肝细胞点状坏死、变性、脂质空泡，偶见少量嗜酸性小体；

水提大剂量组个别可见肝小叶周边肝细胞点状坏死、变性、脂质空泡，偶见少量嗜酸性小体；

醇提小剂量组可见肝小叶周边肝细胞点状坏死、变性、脂质空泡，偶见少量嗜酸性小体；

醇提大剂量组组可见肝小叶周边肝细胞点状坏死、变性、脂质空泡；

小鼠肝脏组织病理观察统计表

小结：本次试验中，模型组及给药组小鼠肝脏都出现不同程度的急性肝损伤反应，表现为：肝细胞变性、坏死，脂质空泡（脂变）；各给药组小鼠肝脏病变程度、范围上较模型组有部分减轻，各给药组之间没有明显的差异。

实施例7治疗慢性肝病复方药物醇提物急性毒性试验

材料：

受试药物  治疗慢性肝病复方药物提取物，棕褐色浸膏，1g浸膏相当于3.33g生药，临床拟用量为10g（生药）/天，人体重按照60kg计算，折合0.17g/kg。批号为20110908，有效期为18个月，由中国科学院新疆理化技术研究所提供。溶剂及配制方法：溶剂为蒸馏水，称取适量的治疗慢性肝病复方药物提取物，先加入少量蒸馏水在乳钵内充分研磨，然后定容至所需体积。本实验中配制的治疗慢性肝病复方药物提取物最大可灌胃浓度为0.43g/ml；

实验动物  昆明种小鼠，清洁级，40只，雌雄各半，体重18-22g，新疆维吾尔自治区疾病控制中心新疆实验动物中心提供，试验动物许可证号SCXK（X2003-0001）；

饲养和试验条件清洁级动物房，实验室空气定时排风净化，12h/12h人工控制明暗交替，湿度为40-70%，温度为18-25℃；

方法：

预试验取健康昆明种小鼠4只（雌、雄各2只），禁食不禁水14h后，单次灌胃给药治疗慢性肝病复方药物提取物混悬液，药物配制最大给药浓度为0.43g/ml，给药量为0.4ml/10g。药后动物可见一过性活动减少，未见其他明显异常，故正式实验采用最大给药量法进行；

给药剂量及体积药物配制最大给药浓度为0.43g/ml，给药体积为0.4ml/10g，故给药剂量为17.2g/kg治疗慢性肝病复方药物醇提物（57.3g生药/kg），约相当于临床人拟用剂量的337倍；

观测指标及观测时间给药当日持续观察药后4h动物反应：包括动物外观、活动状态、精神状态、瞳孔、眼睑、皮毛、呼吸、口眼鼻耳分泌物、大、小便等情况，以后每日观察1次，连续观察14天。药后第15天处死动物，进行大体解剖，观察各脏器有无体积、颜色、质地的异常，当出现肉眼可见的变化，对改变的器官取材进行病理组织学检查；

试验结果：

治疗慢性肝病复方药物提取物灌胃给药后部分小鼠活动减少，大约药后2h恢复正常，此后在14天的观察期内给药组动物外观、活动状态、精神状态、皮毛、呼吸、口眼鼻耳分泌物、大、小便均未异常，对照组动物也未见异常；

与对照组比较，给药组小鼠药后第7天、第14天体重增长变化未见异常（见表4）。

表4 治疗慢性肝病复方药物提取物急性毒性试验动物体重变化

结论：

在本实验条件下，治疗慢性肝病复方药物提取物小鼠灌胃单次给药毒性试验，最大给药量为17.2g/kg治疗慢性肝病复方药物提取物（57.3g生药/kg），约相当于临床人拟用剂量的337倍。给药后动物可见一过性活动减少，较快恢复。

Claims (1)

1.一种治疗慢性肝病的复方药物，其特征在于，由原料药茵陈蒿5-25份，一枝蒿5-35份，毛菊苣5-25份，玫瑰花5-25份，大黄5-15份，甘草5-15份；辅料甜菊素、山梨酸、蔗糖、乳糖、淀粉、糊精、聚维酮、硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠或微晶纤维素制成，所述辅料用量为10-50份；所述复方药物的制备方法，其特征在于，具体操作按下列步骤进行：

a、将经筛选好的茵陈蒿，一枝蒿，毛菊苣，玫瑰花，大黄，甘草混合粉碎至10-80目，用浓度为10-95%的乙醇提取1-4次，温度30-100℃，每次提取时间为1-4小时，得到乙醇提取液；

b、将步骤a乙醇提取液过滤，分离药渣与药液，将药液合并，减压浓缩成相对密度1.10-1.40的浸膏，滤过，得到醇提液浸膏；

c、将步骤b的醇提液浸膏分别加入辅料甜菊素、山梨酸、蔗糖、乳糖、淀粉、糊精、聚维酮、硬脂酸镁、羧甲基淀粉钠或微晶纤维素按常规方法制成口服液、糖浆剂、颗粒剂、胶囊或片剂。