CN113249261A - 一种枯草芽孢杆菌及其在生产核黄素中的应用 - Google Patents
一种枯草芽孢杆菌及其在生产核黄素中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113249261A CN113249261A CN202110579808.XA CN202110579808A CN113249261A CN 113249261 A CN113249261 A CN 113249261A CN 202110579808 A CN202110579808 A CN 202110579808A CN 113249261 A CN113249261 A CN 113249261A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- riboflavin
- fermentation
- seed
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P25/00—Preparation of compounds containing alloxazine or isoalloxazine nucleus, e.g. riboflavin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种枯草芽孢杆菌及其在生产核黄素中的应用,属于生物技术领域。本发明通过诱变筛选到了一株枯草芽孢杆菌,所述枯草芽孢杆菌在较低的溶氧条件(5%~15%)下发酵后,发酵液中维生素B2产量提高了25.6%。与对照菌株相比,本发明所述枯草芽孢杆菌对溶氧的需求显著降低,副产物含量下降,维生素B2产生量显著提高,提高了生产效率和转化率,适于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种枯草芽孢杆菌及其在生产核黄素中的应用,属于生物技术领域。
背景技术
维生素B2又名核黄素,为体内黄酶类辅基的组成部分(黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用),当缺乏时,就影响机体的生物氧化,使代谢发生障碍。主要用于防治核黄素缺乏症,如口角炎、唇炎、舌炎和眼结膜炎等。近年来,也有研究表明,核黄素还具有利尿、降血脂和改善心脏功能等作用。
核黄素的合成主要有化学合成法和微生物发酵法,由于化学合成法较为复杂而且生产成本较高,目前核黄素主要采用微生物发酵法进行生产,比如枯草芽孢杆菌。但是目前的发酵法存在以下问题:(1)发酵过程对溶氧要求高,搅拌和空压机的能耗高;(2)菌株的糖转化率不高,发酵后期易生成乙酸等副产物,影响核黄素产量。
专利CN110699413A公开了一种利用氧载体提高核黄素产量的方法,通过添加一定量的正十二烷或正己烷作为氧载体,从而增加培养基溶氧能力。但这一方法会增加额外的生产成本和后处理环节,在实际生产过程中难以应用。
发明内容
本发明提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),已于2021年03月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏编号为CGMCCNO.21870。
在本发明的一种实施方式中,所述枯草芽孢杆菌是由诱变筛选得到的:将出发菌株枯草芽孢杆菌CGMCC NO.21228(2020年11月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心),经ARTP诱变后,通过底物类似物和贫氧环境的复合筛选方法,最终筛选得到一株对溶氧要求低、糖转化率高的枯草芽孢杆菌菌株NHU-HWS591。
在本发明的一种实施方式中,所述的ARTP诱变条件为;所用气源为氦气,气体流量设定为30SLM(StandardLiterperMinute,公升/分钟),功率为50W,处理时间为20s,照射距离为2mm。
在本发明的一种实施方式中,所述底物类似物为8-氮鸟嘌呤,浓度为50mg/L;
在本发明的一种实施方式中,所述贫氧环境,氧气浓度为5%~10%。
本发明提供了一种生产核黄素的方法,利用所述枯草芽孢杆菌NHU-HWS591发酵生产核黄素。
在本发明的一种实施方式中,将所述枯草芽孢杆菌NHU-HWS591在种子培养基中培养得到种子液,将种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养。
在本发明的一种实施方式中,将所述枯草芽孢杆菌NHU-HWS591的单菌落先接种至新鲜种子培养基培养20~28h;然后将培养后的菌液以1~5mL/100mL的量转接至新鲜种子培养基培养20~28h后得到种子液。
在本发明的一种实施方式中,在种子培养基中的培养温度为35~39℃,转速为180~220rpm。
在本发明的一种实施方式中,所述种子培养基的组分为蛋白胨10g/L、酵母抽提物5g/L、NaCl 10g/L,pH 7.0。
在本发明的一种实施方式中,将种子液以1~5mL/100mL的量接种至发酵培养基中。
在本发明的一种实施方式中,发酵培养的温度为35~42℃。
在本发明的一种实施方式中,发酵过程中控制溶氧量为5%~15%。
在本发明的一种实施方式中,反应时转速为200~900rpm,体系中pH为6~8,发酵时间为48~72h。
在本发明的一种实施方式中,所述发酵培养基的组分为葡萄糖10~50g/L,生物氮素5~30g/L,蛋白胨2~10g/L,玉米浆5~40g/L,硫酸镁0.5~5g/L,磷酸盐0.5~5g/L。
本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌NHU-HWS591在制备核黄素,或核黄素衍生物,或含有核黄素的产品中的应用。
本发明的有益效果:本发明所述枯草芽孢杆菌在较低的溶氧条件(5~15%)下发酵后,发酵液中维生素B2产量提高了25.6%。与对照菌株相比,本发明所述枯草芽孢杆菌对溶氧的需求显著降低,副产物含量下降,维生素B2产生量大幅提高,即本发明所述枯草芽孢杆菌提高了维生素B2生产效率,降低了生产成本,适合于维生素B2大规模工业化生产。
生物材料保藏
本发明中所提供的枯草芽孢杆菌(NHU-HWS591),分类学命名为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,已于2021年03月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏编号为CGMCC NO.21870,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所。
本发明中所使用的出发菌株枯草芽孢杆菌CGMCC NO.21228,分类学命名为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,已于2020年11月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏编号为CGMCC NO.21228,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所。
具体实施方式
(1)残糖测定
使用高效液相色谱仪测定残糖,条件为:
色谱柱:Carbomix-Ca-NP5:8(5μm,7.8x 300mm);
流动相:纯水;
柱温:80℃;
进样量:20μL;
流速:0.5mL/min。
(2)核黄素含量测定
取适量发酵液,用0.05mol/L NaOH将其稀释50倍后,混匀,12000rpm转速下离心5min,取上清液用水稀释适当倍数后以水做空白在444nm下测定吸光度(显示值控制在0.2~0.8之间)。(注:避光操作)按以下公式计算核黄素的含量:FB(mg/L)=(稀释倍数*吸光度)/0.0321。
(3)种子培养基的组分:蛋白胨10g/L、酵母抽提物5g/L、NaCl 10g/L,pH 7.0。固体培养基/斜面培养基在种子培养基的组分基础上再加20g/L的琼脂。
(4)发酵培养基的组分:葡萄糖50g/L,生物氮素30g/L,蛋白胨6g/L,玉米浆10g/L,硫酸镁0.5g/L,磷酸二氢钾1g/L,pH 7.0。
实施例1:菌株的诱变筛选
(1)出发菌株活化:将保藏于甘油管中的枯草芽孢杆菌CGMCC NO.21228于固体培养基上划线,在37℃下培养24h,挑取单菌落于新鲜种子培养基,37℃培养20h后,按10%接种量转接新鲜种子培养基,37℃培养20h;
(2)ARTP诱变处理:用无菌生理盐水洗涤菌体3次后再重悬菌体,适当稀释菌体浓度至106~109个/mL,取15μL均匀涂于无菌载片上,置于处理源下2mm,进行诱变处理;(条件如下:所用气源为氦气,气体流量设定为30SLM(StandardLiterperMinute,公升/分钟),功率为50W,处理时间为20s,照射距离为2mm。)
(3)突变株的后培养:将诱变后的菌液均匀涂布于含有50mg/L的8-氮鸟嘌呤底物类似物的新鲜固体培养基的平板上,置于三气培养箱(德国Binder)中,调节氧气浓度为5~10%,37℃培养20h;
(4)96孔板初筛:分别挑取平板上的单菌落接种于含有500uL种子培养基的96孔板中(每个孔板上包含6株原始菌株),37℃、800rpm、80%湿度振荡培养18h后,按10%(v/v)接种量转接含有450uL发酵培养基的96孔板中,37℃、800rpm、80%湿度条件下振荡培养24h后检测核黄素产量。
(5)核黄素产量的检测:发酵液混匀,用0.05mol/L NaOH将其稀释50倍后,混匀,12000rpm转速下离心5min,取上清液用水稀释适当倍数后以水做空白在444nm下测定吸光度(显示值控制在0.1~0.8之间)。将ARTP诱变后,与原始菌株相比核黄素产量提升最高的前10株菌进行摇瓶发酵复筛。
(6)摇瓶发酵复筛:分别挑取新鲜活化的单菌落接种斜面培养基,37℃培养48h。刮取1/3斜面上的菌苔接种含有70mL发酵培养基的500mL挡板三角瓶中(每株菌3个平行),37℃、200rpm振荡培养41h。
发酵液混匀,用0.05mol/L NaOH将其稀释50倍后,混匀,12000rpm转速下离心5min,取上清液用水稀释适当倍数后以水做空白在444nm下测定吸光度(显示值控制在0.2~0.8之间),按以下公式计算核黄素的含量:FB(mg/L)=(稀释倍数*吸光度)/0.0321。发酵结果如下表所示,NHU-HWS591菌株核黄素产量为7.9g/L,较原始菌株产量提高了21.5%。
表1突变菌株的核黄素产量
菌株 | 核黄素产量(g/L) |
原始菌株 | 6.5 |
NHU-HWS087 | 6.6 |
NHU-HWS112 | 6.8 |
NHU-HWS179 | 6.7 |
NHU-HWS295 | 7.0 |
NHU-HWS345 | 6.9 |
NHU-HWS367 | 6.8 |
NHU-HWS384 | 6.6 |
NHU-HWS426 | 7.1 |
NHU-HWS548 | 7.2 |
NHU-HWS591 | 7.9 |
实施例2:溶氧(DO)条件对NHU-HWS591菌株核黄素合成量的影响
挑取枯草芽孢杆菌NHU-HWS591单菌落接种至种子液培养基中,37℃、200rpm培养24h,以5mL/100mL的量转接至500mL种子液培养基中,转速为200rpm,37℃培养24h,得种子液;然后把上述方法制得的四份种子液分别接种至四个相同含有5L无菌发酵培养基的10L发酵罐中,培养温度为37℃,通过控制转速和通气量控制四个发酵罐的溶氧量分别为1%、5%、15%和25%,发酵48h后取样检测,发酵液核黄素含量分别为30.2g/L,35.3g/L,34.6g/L,31.9g/L。实验结果显示5%DO条件下NHU-HWS591菌株发酵核黄素含量最高,说明NHU-HWS591菌株能够在较低DO条件下合成核黄素。
实施例3:NHU-HWS591菌株与原始菌株在相同溶氧条件(DO)下发酵生产核黄素
采用实施例2的种子扩大培养方法和发酵工艺,用NHU-HWS591菌株和原始菌株分别培养在5%溶氧和原始溶氧(25%)条件下发酵生产核黄素,发酵48h后取样检测,结果发现NHU-HWS591菌株在5%溶氧和原始溶氧(25%)条件下的发酵液核黄素产量分别为35.3g/L和31.9g/L,乙酸含量分别为0.51g/L和0.84g/L,原始菌株分别培养在5%溶氧和原始溶氧(25%)条件下发酵液核黄素产量分别为20.2g/L和28.1g/L,乙酸含量分别为3.37g/L和1.85g/L,从中可以发现NHU-HWS591菌株比原始菌株在5%较低的DO条件下合成核黄素能力更强,而且副产物乙酸少,糖酸转化率高。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),已于2021年03月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.21870。
2.一种生产核黄素的方法,其特征在于,利用权利要求1所述枯草芽孢杆菌发酵生产核黄素。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,将权利要求1所述枯草芽孢杆菌在种子培养基中培养得到种子液,将种子液接种至发酵培养基中进行发酵培养。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,将所述枯草芽孢杆菌的单菌落接种至种子培养基培养20~28h;然后将培养后的菌液以1~5mL/100mL的量转接至种子培养基培养20~28h后得到种子液。
5.根据权利要求3或4所述的方法,其特征在于,在种子培养基中的培养温度为35~39℃,转速为180~220rpm。
6.根据权利要求5所述的方法,将种子液以1~5mL/100mL的量接种至发酵培养基中。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,发酵培养的温度为35~42℃。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,发酵过程中控制溶氧量为5%~15%。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述发酵培养基的组分为葡萄糖10~50g/L,生物氮素5~30g/L,蛋白胨2~10g/L,玉米浆5~40g/L,硫酸镁0.5~5g/L,磷酸盐0.5~5g/L。
10.权利要求1所述枯草芽孢杆菌在制备核黄素,或核黄素衍生物,或含有核黄素的产品中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110579808.XA CN113249261B (zh) | 2021-05-26 | 2021-05-26 | 一种枯草芽孢杆菌及其在生产核黄素中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110579808.XA CN113249261B (zh) | 2021-05-26 | 2021-05-26 | 一种枯草芽孢杆菌及其在生产核黄素中的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113249261A true CN113249261A (zh) | 2021-08-13 |
CN113249261B CN113249261B (zh) | 2023-03-24 |
Family
ID=77184685
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110579808.XA Active CN113249261B (zh) | 2021-05-26 | 2021-05-26 | 一种枯草芽孢杆菌及其在生产核黄素中的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113249261B (zh) |
Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1504565A (zh) * | 2002-12-05 | 2004-06-16 | Gj��ʽ���� | 生产核黄素的微生物和利用其生产核黄素的方法 |
CN1504564A (zh) * | 2002-12-05 | 2004-06-16 | Gj��ʽ���� | 生产核黄素的微生物和利用其生产核黄素的方法 |
KR20050055174A (ko) * | 2003-12-05 | 2005-06-13 | 씨제이 주식회사 | 리보플라빈을 생산하는 미생물 및 이를 이용한리보플라빈의 생산방법 |
KR20050055175A (ko) * | 2003-12-05 | 2005-06-13 | 씨제이 주식회사 | 리보플라빈을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 리보플라빈의 생산방법 |
CN1891814A (zh) * | 2006-05-17 | 2007-01-10 | 天津大学 | 产核黄素的工程菌株及其生产核黄素的方法 |
CN102816823A (zh) * | 2012-09-18 | 2012-12-12 | 江南大学 | 利用多阶段转速调控策略提高Bacillus subtilis发酵生产核黄素产量的方法 |
CN106434819A (zh) * | 2016-12-22 | 2017-02-22 | 广济药业(孟州)有限公司 | 一种提高枯草芽孢杆菌发酵生产核黄素的产量的方法 |
CN107475344A (zh) * | 2016-06-07 | 2017-12-15 | 上海希迈医药科技有限公司 | 一种利用枯草芽孢杆菌发酵生产维生素b2的方法 |
CN108277189A (zh) * | 2017-01-05 | 2018-07-13 | 上海创诺医药集团有限公司 | 一种生产核黄素的工程菌株及其应用 |
CN108913747A (zh) * | 2018-07-28 | 2018-11-30 | 广济药业(孟州)有限公司 | 一种高密度发酵维生素b2的方法 |
CN110564804A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-13 | 河南巨龙生物工程股份有限公司 | 一种用于生产核黄素的清液发酵培养基及发酵方法 |
CN110777184A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-02-11 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种发酵核黄素的发酵培养基及其使用方法 |
-
2021
- 2021-05-26 CN CN202110579808.XA patent/CN113249261B/zh active Active
Patent Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1504565A (zh) * | 2002-12-05 | 2004-06-16 | Gj��ʽ���� | 生产核黄素的微生物和利用其生产核黄素的方法 |
CN1504564A (zh) * | 2002-12-05 | 2004-06-16 | Gj��ʽ���� | 生产核黄素的微生物和利用其生产核黄素的方法 |
KR20050055174A (ko) * | 2003-12-05 | 2005-06-13 | 씨제이 주식회사 | 리보플라빈을 생산하는 미생물 및 이를 이용한리보플라빈의 생산방법 |
KR20050055175A (ko) * | 2003-12-05 | 2005-06-13 | 씨제이 주식회사 | 리보플라빈을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 리보플라빈의 생산방법 |
CN1891814A (zh) * | 2006-05-17 | 2007-01-10 | 天津大学 | 产核黄素的工程菌株及其生产核黄素的方法 |
CN102816823A (zh) * | 2012-09-18 | 2012-12-12 | 江南大学 | 利用多阶段转速调控策略提高Bacillus subtilis发酵生产核黄素产量的方法 |
CN107475344A (zh) * | 2016-06-07 | 2017-12-15 | 上海希迈医药科技有限公司 | 一种利用枯草芽孢杆菌发酵生产维生素b2的方法 |
CN106434819A (zh) * | 2016-12-22 | 2017-02-22 | 广济药业(孟州)有限公司 | 一种提高枯草芽孢杆菌发酵生产核黄素的产量的方法 |
CN108277189A (zh) * | 2017-01-05 | 2018-07-13 | 上海创诺医药集团有限公司 | 一种生产核黄素的工程菌株及其应用 |
CN108913747A (zh) * | 2018-07-28 | 2018-11-30 | 广济药业(孟州)有限公司 | 一种高密度发酵维生素b2的方法 |
CN110564804A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-13 | 河南巨龙生物工程股份有限公司 | 一种用于生产核黄素的清液发酵培养基及发酵方法 |
CN110777184A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-02-11 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 一种发酵核黄素的发酵培养基及其使用方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
祝金山等: "常压室温等离子体诱变选育核黄素高产突变株", 《发酵科技通讯》 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113249261B (zh) | 2023-03-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2017071529A1 (zh) | 基于在线氧消耗速率和电导率协同控制的辅酶q10发酵生产工艺 | |
JP6444419B2 (ja) | スポロラクトバチルス・テラエおよびその使用 | |
CN113430151B (zh) | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-缬氨酸中的应用 | |
CN109082448B (zh) | 一种大肠杆菌及其在发酵生产1,5-戊二胺中的应用 | |
CN101486976B (zh) | 一种吸水链霉菌及其应用 | |
CN112239738B (zh) | 一株产琥珀酸的大肠杆菌及其应用 | |
CN113980828A (zh) | 一株高产绿原酸的栗褐芽孢杆菌诱变菌株 | |
CN112094789A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其在制备1-脱氧野尻霉素中的应用 | |
CN113637607B (zh) | 一株拟无枝酸菌及其应用 | |
CN101338291B (zh) | 一种制备冠菌素的方法及其专用菌株 | |
CN108410918B (zh) | 一种色氨酸发酵培养基及色氨酸发酵方法 | |
CN113249261B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌及其在生产核黄素中的应用 | |
CN113337432B (zh) | 一种产吡咯喹啉醌的食甲基菌及其应用 | |
WO2023016387A1 (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其在制备1-脱氧野尻霉素中的应用 | |
CN114854630B (zh) | 一种耐硒芽孢杆菌及其选育方法和应用 | |
CN103468606B (zh) | 一株产酸克雷伯氏菌及其在生产蒜糖醇中的应用 | |
CN113604390B (zh) | 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-鸟氨酸中的应用 | |
CN115466685A (zh) | 藤仓镰刀菌及其发酵生产赤霉素a4+7的方法及运用 | |
CN112746026B (zh) | 一株维斯假丝酵母及其应用 | |
WO2008092297A1 (fr) | Nouveau procédé de préparation d'acide abscissique naturel | |
CN113717892A (zh) | 一种发酵产他克莫司的筑波链霉菌株及其应用 | |
CN113337433B (zh) | 一种产吡咯喹啉醌的假单胞菌及其应用 | |
CN105296379A (zh) | 一株假诺卡氏菌及其应用 | |
CN116004467B (zh) | 一株耐高温的大肠杆菌及其在生产d-乳酸中的应用 | |
CN113215064B (zh) | 一株产美沙达唑类化合物的黏细菌及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |