CN108410918B - 一种色氨酸发酵培养基及色氨酸发酵方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物及发酵工程技术领域,具体涉及一种色氨酸发酵培养基及色氨酸发酵方法。所述的色氨酸发酵培养基包含如下组分:葡萄糖7~9g/L,柠檬酸2~2.5g/L,硫酸亚铁0.06~0.08g/L,磷酸氢二铵3~5g/L,氯化钾4~6g/L,酵母粉1~2g/L,硫酸镁2~2.5g/L,硫酸锰0.002~0.005g/L,硫酸铜0.00005~0.0002g/L,硫酸锌0.0001~0.0004g/L,生物素0.3~1.4mg/L,八角茴香提取物0.5~4g/L。利用该培养基进行色氨酸发酵,可以使色氨酸的产量提高至55.7g/L,与未使用该方法相比产量提高21.88%,发酵周期缩短至36h。
Description
技术领域
本发明属于微生物及发酵工程技术领域,具体涉及一种色氨酸发酵培养基及色氨酸发酵方法。
背景技术
色氨酸又名氨基吲哚丙酸,分子式:C11H12N2O2,分子量:204.23,为白色或微黄色的叶片状结晶或粉末,无臭或微臭。L-色氨酸对人和动物的生长发育及新陈代谢起重要的作用,被称为第二必需氨基酸,其作用一方面表现在它可以直接影响动物的生长、代谢等生理生化过程,另一方面可以在动物体内代谢转化而成的烟酞胺、烟酸和5-羟色胺(5-HT)等,这些转化产物在体内发挥重要作用。作为必须氨基酸,L-色氨酸是蛋白质合成的重要原料之一。研究表明,L-色氨酸在体内对肝核蛋白合成的促进作用与其在体内分配后与特殊核酸色氨酸受体的结合能力有关。在肝脏蛋白质合成中,Sidransky等证明L-色氨酸能影响肝脏细胞RNA和蛋白质的代谢,它能显著地促进肝脏多核糖体的聚集、细胞质poly(A)-RNA的合成、核标记RNA的释放以及提高核膜核苷三磷酸酶活性。
随着养殖业及医药保健品的发展,色氨酸的市场需求也在不断的增加,色氨酸的生产方法主要有化学合成法、酶法、发酵法。发酵法生产色氨酸具有反应条件温和,成本低,绿色、清洁、环保等优势。因此,在低碳环保的形势下,使用发酵法生产色氨酸,优化色氨酸的发酵工艺,进一步提高色氨酸的产量,具有重要的意义。
发明内容
为了克服现有技术中发酵法生产色氨酸产量较低等缺点和不足,本发明的首要目的在于提供一种色氨酸发酵培养基,该培养基添加生物素和八角茴香提取物为菌体代谢提供缺乏的营养物质,解除营养供应的瓶颈,有利于代谢目标产物的高效合成。
本发明的另一目的在于提供上述色氨酸发酵培养基的应用。
本发明的再一目的在于提供一种色氨酸发酵方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现:
一种色氨酸发酵培养基,按发酵培养基的总体积计,包含如下组分:葡萄糖7~9g/L,柠檬酸2~2.5g/L,硫酸亚铁0.06~0.08g/L,磷酸氢二铵3~5g/L,氯化钾4~6g/L,酵母粉1~2g/L,硫酸镁2~2.5g/L,硫酸锰0.002~0.005g/L,硫酸铜0.00005~0.0002g/L,硫酸锌0.0001~0.0004g/L,生物素0.3~1.4mg/L,八角茴香提取物0.5~4g/L;
所述的色氨酸发酵培养基,按发酵培养基的总体积计,优选包含如下组分:葡萄糖8g/L,柠檬酸2.2g/L,硫酸亚铁0.0756g/L,磷酸氢二铵4g/L,氯化钾5g/L,酵母粉1.5g/L,硫酸镁2.2g/L,硫酸锰0.0035g/L,硫酸铜0.0001g/L,硫酸锌0.00032g/L,生物素0.3~1.4mg/L,八角茴香提取物0.5~4g/L;
所述的生物素的含量优选为0.7~1.2mg/L;
所述的生物素的含量进一步优选为0.7mg/L;
所述的八角茴香提取物的含量优选为2~3g/L;
所述的八角茴香提取物的含量进一步优选为2g/L;
所述的色氨酸发酵培养基,优选还包含消泡剂0.1~0.3mL/L;
所述的色氨酸发酵培养基,进一步优选还包含消泡剂0.2mL/L;
所述的色氨酸发酵培养基在色氨酸发酵领域中的应用;
一种色氨酸发酵方法,包含如下步骤:
采用色氨酸生产菌种利用上述色氨酸发酵培养基进行发酵,得到色氨酸:
所述的色氨酸发酵方法,优选包含如下步骤:
将色氨酸生产菌株活化后,制备种子液,然后发酵培养,得到色氨酸;
所述的色氨酸生产菌种优选为大肠杆菌(Escherichia coli)JLTrP(该微生物已于2015年11月由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记入册,编号CGMCC7.217);
所述的活化的具体操作优选为:
将色氨酸生产菌种接种至活化斜面固体培养基上,35~37℃,培养20~24h;
所述的斜面固体培养基优选包含如下组分:蛋白胨1g/L,酵母粉0.5g/L,NaCl0.5g/L,琼脂2g/L,pH7.0~7.2;
所述的种子液优选通过下述方法制备得到:
将活化后的色氨酸生产菌种接种至种子培养基中,35~37℃,200~700rpm培养9~12h,作为发酵种子液;
所述的种子培养基优选包含如下组分:葡萄糖30g/L,磷酸氢二铵2.5g/L,硫酸铵1.2g/L,酵母粉6g/L,氯化钾1.5g/L,硫酸镁1.6g/L,柠檬酸1.6g/L,VB10.0013g/L,生物素0.0003g/L,硫酸亚铁0.0028g/L,硫酸锰0.0012g/L,消泡剂0.2mL/L;
所述的发酵培养的具体操作优选为:
将种子液按照体积百分比10~15%的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基的发酵罐中,在34~36℃,溶氧量15~30%,pH6.5~7.2的条件下培养35~45h,得到色氨酸;
所述的pH优选采用NH3·H2O调节控制;
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
(1)本发明在色氨酸发酵培养基中添加生物素和八角茴香提取物,可解除营养供应的瓶颈,延长代谢产物的生产时间,提高色氨酸的产量。
(2)与传统的化学法和酶法相比,生产设备简单,绿色污染小,符合当前的低碳环境,成本低,适合大规模生产。
(3)本发明使用的微生物菌株,遗传标记稳定不易丢失,传十代以上转接,产量基本保持稳定。
(4)本发明的方法进行色氨酸的发酵生产,可以使通向色氨酸合成代谢中前体物充足,从而使色氨酸的产量提高至55.7g/L,与未使用该方法相比产量提高21.88%,发酵周期缩短至36h。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例中发酵产物色氨酸含量测定所采用的分析方法如下:
发酵液中产物色氨酸采用仪器Waters 1515型高效液相色谱仪测定(HPLC)。色谱柱为WatersC18(4.6mm×250mm,5μm),柱温39℃,检测器为紫外检测器(278nm),流动相为0.03%(体积百分比)磷酸二氢钾溶液:甲醇=90:10(v:v),流速1.0mL\min,进样量为20μL。精确称取色氨酸的标准品,用去离子水配置成质量浓度为1g/L的标准品溶液;将预处理的待测发酵液样品用去离子水稀释至适当的浓度,并用0.22μm微孔滤膜过滤,作为发酵样品溶液待检测,发酵样品根据峰面积计算色氨酸产量;
色氨酸生产菌种为大肠杆菌(Escherichia coli)JLTrP(购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,编号CGMCC 7.217);
实施例1
(1)以大肠杆菌JLTrP为出发菌株,将稀释好的大肠杆菌JLTrP保藏菌液均匀涂布至活化斜面固体培养基(蛋白胨1g/L,酵母粉0.5g/L,NaCl 0.5g/L,琼脂2g/L,pH7.0)上,37℃培养24h,得到活化后的大肠杆菌JLTrP;
(2)用接种环刮取步骤(1)制得的活化后的大肠杆菌JLTrP接种至种子培养基(葡萄糖30g/L,磷酸氢二铵2.5g/L,硫酸铵1.2g/L,酵母粉6g/L,氯化钾1.5g/L,硫酸镁1.6g/L,柠檬酸1.6g/L,VB1 0.0013g/L,生物素0.0003g/L,硫酸亚铁0.0028g/L,硫酸锰0.0012g/L,消泡剂0.2mL/L)中,35℃,通过调整转速(200~700rpm)、风量、罐压控制溶氧20~30%,培养10h,得到种子液;
(3)将步骤(2)制得的种子液按照体积百分比15%(v/v)的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基(葡萄糖8g/L,柠檬酸2.2g/L,硫酸亚铁0.0756g/L,磷酸氢二铵4g/L,氯化钾5g/L,酵母粉1.5g/L,硫酸镁2.2g/L,硫酸锰0.0035g/L,硫酸铜0.0001g/L,硫酸锌0.00032g/L,生物素0.3mg/L,八角茴香提取物0.5g/L,消泡剂0.2mL/L)的17L发酵罐中,在35℃,溶氧量20~30%,pH7.0(NH3·H2O调节)的条件下,进行发酵,发酵过程中,依据溶氧变化情况,流加葡萄糖使发酵液残糖量维持在0.01%,发酵36h结束。
经HPLC检测,本实施例中色氨酸产量达到48.6g/L。
实施例2
(1)以大肠杆菌JLTrP为出发菌株,将稀释好的大肠杆菌JLTrP保藏菌液均匀涂布至活化斜面固体培养基(蛋白胨1g/L,酵母粉0.5g/L,NaCl 0.5g/L,琼脂2g/L,pH7.0)上,37℃培养24h,得到活化后的大肠杆菌JLTrP;
(2)用接种环刮取步骤(1)制得的活化后的大肠杆菌JLTrP接种至种子培养基(葡萄糖30g/L,磷酸氢二铵2.5g/L,硫酸铵1.2g/L,酵母粉6g/L,氯化钾1.5g/L,硫酸镁1.6g/L,柠檬酸1.6g/L,VB1 0.0013g/L,生物素0.0003g/L,硫酸亚铁0.0028g/L,硫酸锰0.0012g/L,消泡剂0.2mL/L)中,35℃,通过调整转速(200~700rpm)、风量、罐压控制溶氧20~30%,培养10h,得到种子液;
(3)将步骤(2)制得的种子液按照体积百分比15%(v/v)的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基(葡萄糖8g/L,柠檬酸2.2g/L,硫酸亚铁0.0756g/L,磷酸氢二铵4g/L,氯化钾5g/L,酵母粉1.5g/L,硫酸镁2.2g/L,硫酸锰0.0035g/L,硫酸铜0.0001g/L,硫酸锌0.00032g/L,生物素0.5mg/L,八角茴香提取物1g/L,消泡剂0.2mL/L)的17L发酵罐中,在35℃,溶氧量20~30%,pH7.0(NH3·H2O调节)的条件下,进行发酵,发酵过程中,依据溶氧变化情况,流加葡萄糖使发酵液残糖量维持在0.01%,发酵36h结束。
经HPLC检测,本实施例中色氨酸产量达到49.7g/L。
实施例3
(1)以大肠杆菌JLTrP为出发菌株,将稀释好的大肠杆菌JLTrP保藏菌液均匀涂布至活化斜面固体培养基(蛋白胨1g/L,酵母粉0.5g/L,NaCl 0.5g/L,琼脂2g/L,pH7.0)上,37℃培养24h,得到活化后的大肠杆菌JLTrP;
(2)用接种环刮取步骤(1)制得的活化后的大肠杆菌JLTrP接种至种子培养基(葡萄糖30g/L,磷酸氢二铵2.5g/L,硫酸铵1.2g/L,酵母粉6g/L,氯化钾1.5g/L,硫酸镁1.6g/L,柠檬酸1.6g/L,VB1 0.0013g/L,生物素0.0003g/L,硫酸亚铁0.0028g/L,硫酸锰0.0012g/L,消泡剂0.2mL/L)中,35℃,通过调整转速(200~700rpm)、风量、罐压控制溶氧20~30%,培养10h,得到种子液;
(3)将步骤(2)制得的种子液按照体积百分比15%(v/v)的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基(葡萄糖8g/L,柠檬酸2.2g/L,硫酸亚铁0.0756g/L,磷酸氢二铵4g/L,氯化钾5g/L,酵母粉1.5g/L,硫酸镁2.2g/L,硫酸锰0.0035g/L,硫酸铜0.0001g/L,硫酸锌0.00032g/L,生物素0.7mg/L,八角茴香提取物2g/L,消泡剂0.2mL/L)的17L发酵罐中,在35℃,溶氧量20~30%,pH 7.0(NH3·H2O调节)的条件下,进行发酵,发酵过程中,依据溶氧变化情况,流加葡萄糖使发酵液残糖量维持在0.01%,发酵36h结束。
经HPLC检测,本实施例中色氨酸产量达到55.7g/L。
实施例4
(1)以大肠杆菌JLTrP为出发菌株,将稀释好的大肠杆菌JLTrP保藏菌液均匀涂布至活化斜面固体培养基(蛋白胨1g/L,酵母粉0.5g/L,NaCl 0.5g/L,琼脂2g/L,pH7.0)上,37℃培养24h,得到活化后的大肠杆菌JLTrP;
(2)用接种环刮取步骤(1)制得的活化后的大肠杆菌JLTrP接种至种子培养基(葡萄糖30g/L,磷酸氢二铵2.5g/L,硫酸铵1.2g/L,酵母粉6g/L,氯化钾1.5g/L,硫酸镁1.6g/L,柠檬酸1.6g/L,VB1 0.0013g/L,生物素0.0003g/L,硫酸亚铁0.0028g/L,硫酸锰0.0012g/L,消泡剂0.2mL/L)中,35℃,通过调整转速(200~700rpm)、风量、罐压控制溶氧20~30%,培养10h,得到种子液;
(3)将步骤(2)制得的种子液按照体积百分比15%(v/v)的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基(葡萄糖8g/L,柠檬酸2.2g/L,硫酸亚铁0.0756g/L,磷酸氢二铵4g/L,氯化钾5g/L,酵母粉1.5g/L,硫酸镁2.2g/L,硫酸锰0.0035g/L,硫酸铜0.0001g/L,硫酸锌0.00032g/L,生物素1.2mg/L,八角茴香提取物3g/L,消泡剂0.2mL/L)的17L发酵罐中,在35℃,溶氧量20~30%,pH 7.0(NH3·H2O调节)的条件下,进行发酵,发酵过程中,依据溶氧变化情况,流加葡萄糖使发酵液残糖量维持在0.01%,发酵36h结束。
经HPLC检测,本实施例中色氨酸产量达到51.3g/L。
实施例5
(1)以大肠杆菌JLTrP为出发菌株,将稀释好的大肠杆菌JLTrP保藏菌液均匀涂布至活化斜面固体培养基(蛋白胨1g/L,酵母粉0.5g/L,NaCl 0.5g/L,琼脂2g/L,pH7.0)上,37℃培养24h,得到活化后的大肠杆菌JLTrP;
(2)用接种环刮取步骤(1)制得的活化后的大肠杆菌JLTrP接种至种子培养基(葡萄糖30g/L,磷酸氢二铵2.5g/L,硫酸铵1.2g/L,酵母粉6g/L,氯化钾1.5g/L,硫酸镁1.6g/L,柠檬酸1.6g/L,VB1 0.0013g/L,生物素0.0003g/L,硫酸亚铁0.0028g/L,硫酸锰0.0012g/L,消泡剂0.2mL/L)中,35℃,通过调整转速(200~700rpm)、风量、罐压控制溶氧20~30%,培养10h,得到种子液;
(3)将步骤(2)制得的种子液按照体积百分比15%(v/v)的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基(葡萄糖8g/L,柠檬酸2.2g/L,硫酸亚铁0.0756g/L,磷酸氢二铵4g/L,氯化钾5g/L,酵母粉1.5g/L,硫酸镁2.2g/L,硫酸锰0.0035g/L,硫酸铜0.0001g/L,硫酸锌0.00032g/L,生物素1.4mg/L,八角茴香提取物4g/L,消泡剂0.2mL/L)的17L发酵罐中,在35℃,溶氧量20~30%,pH 7.0(NH3·H2O调节)的条件下进行发酵,发酵过程中,依据溶氧变化情况,流加葡萄糖使发酵液残糖量维持在0.01%,发酵36h结束。
经HPLC检测,本实施例中色氨酸产量达到50.1g/L。
实施例6
(1)以大肠杆菌JLTrP为出发菌株,将稀释好的大肠杆菌JLTrP保藏菌液均匀涂布至活化斜面固体培养基(蛋白胨1g/L,酵母粉0.5g/L,NaCl 0.5g/L,琼脂2g/L,pH7.1)上,35℃培养22h,得到活化后的大肠杆菌JLTrP;
(2)用接种环刮取步骤(1)制得的活化后的大肠杆菌JLTrP接种至种子培养基(葡萄糖30g/L,磷酸氢二铵2.5g/L,硫酸铵1.2g/L,酵母粉6g/L,氯化钾1.5g/L,硫酸镁1.6g/L,柠檬酸1.6g/L,VB1 0.0013g/L,生物素0.0003g/L,硫酸亚铁0.0028g/L,硫酸锰0.0012g/L,消泡剂0.2mL/L)中,37℃,通过调整转速(200~700rpm)、风量、罐压控制溶氧20~30%,培养9h,得到种子液;
(3)将步骤(2)制得的种子液按照体积百分比14%(v/v)的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基(葡萄糖9g/L,柠檬酸2.5g/L,硫酸亚铁0.08g/L,磷酸氢二铵5g/L,氯化钾4g/L,酵母粉1g/L,硫酸镁2.5g/L,硫酸锰0.002g/L,硫酸铜0.0002g/L,硫酸锌0.0004g/L,生物素0.7mg/L,八角茴香提取物2g/L,消泡剂0.2mL/L)的17L发酵罐中,在34℃,溶氧量15~25%,pH6.5(NH3·H2O调节)的条件下,进行发酵,发酵过程中,依据溶氧变化情况,流加葡萄糖使发酵液残糖量维持在0.01%,发酵35h结束。
经HPLC检测,本实施例中色氨酸产量达到52.3g/L。
实施例7
(1)以大肠杆菌JLTrP为出发菌株,将稀释好的大肠杆菌JLTrP保藏菌液均匀涂布至活化斜面固体培养基(蛋白胨1g/L,酵母粉0.5g/L,NaCl 0.5g/L,琼脂2g/L,pH7.2)上,36℃培养20h,得到活化后的大肠杆菌JLTrP;
(2)用接种环刮取步骤(1)制得的活化后的大肠杆菌JLTrP接种至种子培养基(葡萄糖30g/L,磷酸氢二铵2.5g/L,硫酸铵1.2g/L,酵母粉6g/L,氯化钾1.5g/L,硫酸镁1.6g/L,柠檬酸1.6g/L,VB1 0.0013g/L,生物素0.0003g/L,硫酸亚铁0.0028g/L,硫酸锰0.0012g/L,消泡剂0.2mL/L)中,36℃,通过调整转速(200~700rpm)、风量、罐压控制溶氧20~30%,培养12h,得到种子液;
(3)将步骤(2)制得的种子液按照体积百分比10%(v/v)的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基(葡萄糖7g/L,柠檬酸2g/L,硫酸亚铁0.06g/L,磷酸氢二铵3g/L,氯化钾6g/L,酵母粉2g/L,硫酸镁2g/L,硫酸锰0.005g/L,硫酸铜0.00005g/L,硫酸锌0.0001g/L,生物素0.7mg/L,八角茴香提取物2g/L,消泡剂0.2mL/L)的17L发酵罐中,在36℃,溶氧量15~25%,pH7.2(NH3·H2O调节)的条件下,进行发酵,发酵过程中,依据溶氧变化情况,流加葡萄糖使发酵液残糖量维持在0.01%,发酵45h结束。
经HPLC检测,本实施例中色氨酸产量达到53.6g/L。
对比实施例1
(1)以大肠杆菌JLTrP为出发菌株,将稀释好的大肠杆菌JLTrP保藏菌液均匀涂布至活化斜面固体培养基(蛋白胨1g/L,酵母粉0.5g/L,NaCl 0.5g/L,琼脂2g/L,pH7.0)上,37℃培养24h,得到活化后的大肠杆菌JLTrP;
(2)用接种环刮取步骤(1)制得的活化后的大肠杆菌JLTrP接种至种子培养基(葡萄糖30g/L,磷酸氢二铵2.5g/L,硫酸铵1.2g/L,酵母粉6g/L,氯化钾1.5g/L,硫酸镁1.6g/L,柠檬酸1.6g/L,VB1 0.0013g/L,生物素0.0003g/L,硫酸亚铁0.0028g/L,硫酸锰0.0012g/L,消泡剂0.2mL/L)中,35℃,通过调整转速(200~700rpm)、风量、罐压控制溶氧20~30%,培养10h,得到种子液;
(3)将步骤(2)制得的种子液按照体积百分比15%(v/v)的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基(葡萄糖8g/L,柠檬酸2.2g/L,硫酸亚铁0.0756g/L,磷酸氢二铵4g/L,氯化钾5g/L,酵母粉1.5g/L,硫酸镁2.2g/L,硫酸锰0.0035g/L,硫酸铜0.0001g/L,硫酸锌0.00032g/L,消泡剂0.2mL/L)的17L发酵罐中,在35℃,溶氧量20~30%,pH7.0(NH3·H2O调节)的条件下,进行发酵,发酵过程中,依据溶氧变化情况,流加葡萄糖使发酵液残糖量维持在0.01%,发酵36h结束。
经检测,本实施例中色氨酸产量为45.7g/L。
综上所述,由实施例1~7和对比实施例1可以看出,在发酵培养基中加入生物素0.3~1.4mg/L,八角茴香提取物0.5~4g/L,可以提高色氨酸的产量,其中,实施例3中添加生物素0.7mg/L、八角茴香提取物2g/L可以显著提高色氨酸的产量,色氨酸含量提高21.88%,这表明生物素和八角茴香提取物的添加弥补了发酵过程中营养物质不足,解除发酵中期营养不足产酸缓慢的问题。通过实施例1~5可以看出,生物素和八角茴香提取物的添加量的不同,对于色氨酸的积累有较大的影响,在发酵罐配料中加入生物素0.7mg/L、八角茴香提取物2g/L可以更好的维持大肠杆菌JLTrP生产色氨酸的能力,使色氨酸的产量达到较高水平。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种色氨酸发酵培养基,其特征在于按发酵培养基的总体积计,由如下组分组成:葡萄糖7~9g/L,柠檬酸2~2.5g/L,硫酸亚铁0.06~0.08g/L,磷酸氢二铵3~5g/L,氯化钾4~6g/L,酵母粉1~2g/L,硫酸镁2~2.5g/L,硫酸锰0.002~0.005g/L,硫酸铜0.00005~0.0002g/L,硫酸锌0.0001~0.0004g/L,生物素0.3~1.4mg/L,八角茴香提取物0.5~4g/L;
所述的色氨酸发酵培养基用于色氨酸生产菌种的发酵;
所述的色氨酸生产菌种为大肠杆菌(Escherichia coli)JLTrP,该微生物已于2015年11月由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记入册,编号CGMCC 7.217。
2.根据权利要求1所述的色氨酸发酵培养基,其特征在于:
所述的色氨酸发酵培养基,按发酵培养基的总体积计,由如下组分组成:葡萄糖8g/L,柠檬酸2.2g/L,硫酸亚铁0.0756g/L,磷酸氢二铵4g/L,氯化钾5g/L,酵母粉1.5g/L,硫酸镁2.2g/L,硫酸锰0.0035g/L,硫酸铜0.0001g/L,硫酸锌0.00032g/L,生物素0.3~1.4mg/L,八角茴香提取物0.5~4g/L。
3.根据权利要求2所述的色氨酸发酵培养基,其特征在于:
所述的生物素的含量为0.7mg/L;
所述的八角茴香提取物的含量为2g/L。
4.根据权利要求1~3任一项所述的色氨酸发酵培养基,其特征在于:
所述的色氨酸发酵培养基,还包含消泡剂0.1~0.3mL/L。
5.权利要求1~4任一项所述的色氨酸发酵培养基在色氨酸发酵中的应用。
6.一种色氨酸发酵方法,其特征在于包含如下步骤:
采用色氨酸生产菌种利用权利要求1~4任一项所述的色氨酸发酵培养基进行发酵,得到色氨酸;
所述的色氨酸生产菌种为大肠杆菌(Escherichia coli)JLTrP,该微生物已于2015年11月由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记入册,编号CGMCC 7.217。
7.根据权利要求6所述的色氨酸发酵方法,其特征在于包含如下步骤:
将色氨酸生产菌种活化后,制备种子液,然后发酵培养,得到色氨酸。
8.根据权利要求7所述的色氨酸发酵方法,其特征在于:
所述的活化的具体操作为:
将色氨酸生产菌种接种至活化斜面固体培养基上,35~37℃,培养20~24h;
所述的种子液通过下述方法制备得到:
将活化后的色氨酸生产菌种接种至种子培养基中,35~37℃,200~700rpm培养9~12h,作为发酵种子液。
9.根据权利要求7所述的色氨酸发酵方法,其特征在于:
所述的发酵培养的具体操作为:
将种子液按照体积百分比10~15%的接种量转接至装有色氨酸发酵培养基的发酵罐中,在34~36℃,溶氧量15~30%,pH6.5~7.2的条件下培养35~45h,得到色氨酸。
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