CN113025531A

CN113025531A - 一株绵羊肺炎支原体及其在抗绵羊肺炎支原体制剂筛选中的应用

Info

Publication number: CN113025531A
Application number: CN202110341915.9A
Authority: CN
Inventors: 刘茂军; 毛立; 李文良; 杨蕾蕾; 张纹纹; 孙敏; 杜改梅; 袁万哲; 马玉忠; 程子龙
Original assignee: Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2021-03-30
Filing date: 2021-03-30
Publication date: 2021-06-25
Anticipated expiration: 2041-03-30
Also published as: CN113025531B

Abstract

本发明公开了一株绵羊肺炎支原体及其在抗绵羊肺炎支原体制剂筛选中的应用，所述绵羊肺炎支原体的分类命名为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)NJ01株，已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020907，保藏日期为2020年12月14日。本发明所提供的菌株NJ01培养生长速度快、滴度高，可达10¹⁰CCU/mL，在特定培养基中经复苏传代培养后，只需要10‑72h即可变色，这为抗绵羊肺炎支原体制剂的测定节约了时间，提高了效率，可用于抗支原体制剂的快速筛选等。

Description

一株绵羊肺炎支原体及其在抗绵羊肺炎支原体制剂筛选中的应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株绵羊肺炎支原体及其在抗绵羊肺炎支原体制剂筛选中的应用。

技术背景

羊支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae of sheep and goat,MPSG)是由绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)引起的一种绵羊和山羊慢性呼吸道传染病。该病主要以气喘为临床特征，在世界范围内广泛流行，山羊和绵羊都较易感，几乎普遍存在，给养羊业造成了重大损失。由于绵羊肺炎支原体疫苗免疫效果不佳，抗支原体药物等制剂的使用成为预防和治疗该病的重要手段。

目前，由于大量使用抗菌药物而造成的细菌耐药、疗效差或无效的现象，已成为困扰临床医生的棘手问题，通过体外药敏试验，获得药物的抗菌活性制剂对临床治疗具有重要的参考价值。从羊传染性胸膜肺炎病例分离的支原体对大环内酯类和四环素类药物产生耐药现象的报道。因此，及时测定支原体对常用抗菌药物的敏感性，对于羊支原体性肺炎的有效治疗和控制具有重要指导意义。

文献“陈朝喜等，山羊源绵羊肺炎支原体的耐药谱型分析，中国畜牧兽医2011年第38卷第1期181页”报道，通过对培养第4日和第6日的支原体分别进行药物敏感性试验，尽管第4日和第6日绵羊肺炎支原体的颜色变化单位(CCU)发生变化，但其MIC50、MIC90、MIC范围均变化不大，表明培养时间对绵羊肺炎支原体药敏试验影响不大，CCU含量在一定范围内对药物敏感性测定试验结果影响不大。文献“宋勤叶等，18种抗菌药物对绵羊肺炎支原体和丝状支原体分离株的抗菌活性，动物医学进展，2011年32卷第6期14-18页”中的第15页报道密封细胞培养板，将其置体积分数为5％CO₂培养箱中37℃培养4-14日，观察试验结果。文献“白永平，绵羊肺炎支原体的分离鉴定与敏感药物试验的研究，四川农业大学，2011”中的23页报道，随着传代的次数增加，绵羊肺炎支原体分离株的生长速度增快，由最初的10日左右缩短到3-5日。

由上述报道可见，由于绵羊肺炎支原体对营养要求苛刻，培养较为困难，且生长变色速度慢，需3-10日，阻碍了抗支原体药物和制剂的快速高效筛选。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一株生长速度快的绵羊肺炎支原体。

本发明还要解决的技术问题是提供上述绵羊肺炎支原体的应用。

为了解决上述第一个技术问题，本发明公开了一株绵羊肺炎支原体，其分类命名为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)NJ01株，已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCC NO：M 2020907，保藏日期为2020年12月14日。该菌株是发明人于2018年12月于南京某羊场自行采集病料，经分离、纯化和鉴定，获得一株绵羊肺炎支原体。

其中，所述绵羊肺炎支原体的热应激蛋白70基因与其他绵羊肺炎支原体相似性达95.76％-98.51％，其核苷酸序列如SEQID NO：1所示。

为了解决上述第二个技术问题，本发明公开了上述绵羊肺炎支原体在评估抗绵羊肺炎支原体制剂效果或筛选抗绵羊肺炎支原体制剂中的应用。

其中，所述应用的方法为将抗绵羊肺炎支原体制剂和绵羊肺炎支原体NJ01株培养物混合后培养，观察颜色变化情况。

其中，所述绵羊肺炎支原体NJ01株培养物用于抗绵羊肺炎支原体制剂的敏感性测定，所述绵羊肺炎支原体NJ01株培养物制备方法包括如下步骤：

(1)将绵羊肺炎支原体NJ01株按照1:3-1:10的体积比接种于支原体液体培养基，在36-38℃下培养12-72h传代，待培养物变成橙黄到-黄色时，得到第一代培养物；

(2)迅速将第一代培养物以1:5以上的体积比接种于支原体液体培养基中，在36-38℃下培养12-72h传代，待培养物变成橙黄-黄色时，得到第二代培养物；

(3)重复第(2)步，继续传代，待培养物变成橙黄-黄色时，收获，即得绵羊肺炎支原体NJ01株培养物。

步骤(1)和步骤(2)中，所述培养优选为静置培养。

步骤(2)中，优选地，将第一代培养物以1:5-1:10的体积比接种支原体液体培养基中。

步骤(2)中，优选地，重复第(2)步，继续传代1-5代。

其中，所述的支原体液体培养基中各组分含量及制备方法为：Eagles液40％-50％v/v，水解乳蛋白0.005-0.02g/mL，pH 7.4的磷酸盐缓冲液28％-40％v/v，0.04g/mL酚红0.15％-0.2％v/v；用NaOH调pH值为7.4-7.6，高压灭菌后，加入无菌血清10％-20％v/v，鲜酵母浸出汁1％-2％v/v；其中，所述的鲜酵母浸出汁为参考“张瑞婷等.酵母浸出液提取方法的改进.中国兽药杂志.1998年02期”的方法制备。

其中，所述绵羊肺炎支原体NJ01株培养物中，菌株含量为10¹⁰-10⁵CCU/mL；其中，当绵羊肺炎支原体NJ01株培养物中菌株含量较高时，用支原体液体培养基进行稀释。

其中，所述绵羊肺炎支原体NJ01株培养物的体积占含有抗绵羊肺炎支原体制剂和绵羊肺炎支原体NJ01株培养物总体积的50％-99.9％。

其中，所述的培养观察时间为在36-38℃下培养12-72h后，观察变色情况，判断抗绵羊肺炎支原体制剂的作用。

其中，所述培养优选为静置培养。

其中，所述的抗绵羊肺炎支原体制剂为药物、化合物、抗体、血清、蛋白中的任意一种或多种组合的复合物的制剂。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优势：

1)在羊源的3种支原体(丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种和绵羊肺炎支原体)中，绵羊肺炎支原体感染率最高，且本发明所提供的菌株绵羊肺炎支原体NJ01在支原体液体培养基中较易培养。

2)本发明所提供的菌株绵羊肺炎支原体NJ01培养生长速度快、滴度高，可达10¹⁰CCU/mL，在特定培养基中经复苏传代培养后，只需要静置培养10-72h即可变色，其他报道药敏测定所需时间为3-14日，或需要振荡培养，本发明方法为抗绵羊肺炎支原体制剂的敏感性测定节约了大量时间，提高了效率，减少了仪器和条件限制，有益于抗支原体制剂的快速筛选等。

3)采用的支原体培养基，其制备简便、成本低、培养支原体变色快且滴度高。

4)本发明的绵羊肺炎支原体及其在抗绵羊肺炎支原体药物或制剂筛选中的应用及其方法，能较好的满足目前抗羊源支原体药物和制剂筛选的迫切需要，易于快速筛选和应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。

图1为基于绵羊肺炎支原体的热应激蛋白70的核苷酸序列的进化树；其中，阴影部分为绵羊肺炎支原体NJ01株。

具体实施方式

下面将结合具体实施例，对本发明作进一步的说明，而非对本发明进行限制。

下述实施例为在一些实施方式中的所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1：绵羊肺炎支原体NJ01株的获得及培养鉴定

1.菌株分离及培养

从南京某羊场有疑似羊支原体肺炎特征的羊中进行筛选，采集羊支原体肺炎特征典型的病羊，无菌采集其肺脏，用支原体液体培养基直接打入细支气管，再从中吸取，获得支气管灌洗液。灌洗液可直接用孔径为0.45μm的滤器进行过滤后，按1:1和1:10稀释接种支原体液体培养基，37℃静置培养，待培养物颜色由红变橙黄色或黄色时，进行传代，如此连续传5代，生长稳定后接种支原体固体培养基进行纯化，克隆纯化后，接种支原体液体培养基，变黄后收获培养物进行特性鉴定。

2.菌株鉴定

培养物瑞氏染色镜检，其形态为环状、球状等多形态微生物，无细胞壁，革兰氏染色阴性。培养物在含0.5％葡萄糖的培养基中培养时，颜色可由红色变成黄色，表明其发酵葡萄糖培养基产酸。培养物在支原体液体培养基上生长良好，37℃培养1-5日，培养物pH下降至6.6-6.8，轻度浑浊。培养物经变色单位测定其浓度可达10¹⁰CCU/mL。培养物接种支原体固体培养基，37℃培养3-7日后，可见乳头状菌落。

3.测序分析

根据报道的绵羊肺炎支原体全基因组序列设计引物扩增热休克蛋白70(heatshock protein 70，Hsp70)基因，进行测序，序列结果见序列SEQID NO：1所示。与已报道序列进行Blast比对，结果见表1。与已报道序列进行Blast比对，相似性达95.76％-98.51％，进化树分析，结果见图1基于绵羊肺炎支原体的热应激蛋白70的核苷酸序列的进化树。

表1 Blast比对结果

4.菌株保藏

菌株送中国典型培养物保藏中心保藏，保藏信息如下：分类命名：绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)NJ01株；地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2020年12月14日；保藏编号为CCTCC NO：M 2020907。

实施例2：绵羊肺炎支原体培养试验

1.材料

绵羊肺炎支原体NJ01株；保藏编号为CCTCC NO：M 2020907。绵羊肺炎支原体Y98株，参考株。

支原体培养基配方及制备方法为：Eagles液50％(v/v)，水解乳蛋白0.02g/mL，磷酸盐缓冲液(pH 7.4)28.8％(v/v)，0.04g/mL酚红0.2％(v/v)；用NaOH调pH值为7.4-7.6，高压灭菌后，加入无菌马血清20％(v/v)，鲜酵母浸出汁1％(v/v)。其中，所述的鲜酵母浸出汁参考“张瑞婷等.酵母浸出液提取方法的改进.中国兽药杂志.1998年02期”的方法制备。

2.方法

(1)把冻存于-20℃的菌株(支原体NJ01株和支原体Y98株)分别取出，解冻后以1:3的体积比接种于支原体液体培养基，37℃静置培养至培养物颜色变黄时，得到第一代培养物；

(2)立即按1:5的体积比，将第一代培养物接种于支原体液体培养基中，在37℃下静置培养至培养物颜色变黄时，得到第二代培养物；

(3)按照步骤(2)的方法再传5代(与步骤(2)的区别在于，接种体积比更换为1:10)，培养物变橙黄-黄色时收获，-20℃以下保存，分别得到绵羊肺炎支原体NJ01株、Y98株的培养物，同时测定培养物的含量(颜色变化单位，CCU)。

(4)取已传5代或7代的培养物，按体积比1:10各接种6支，其中3支37℃静置培养，另3支放置于37℃、160r/min的恒温空气浴摇床中培养，培养物颜色变黄时，测定培养物的含量(颜色变化单位，CCU)。

3.结果

表2 NJ01株复苏传代变色时间及含量

传代

1代

2代

3代

4代

5代

6代

7代

接种比例(V/V)

1:3

1:5

1:10

变色时间(h)

18

12

10

CCU含量(CCU/mL)

10<sup>9</sup>

10<sup>10</sup>

表3 Y98株复苏传代变色时间及含量

表4 NJ01株静置和振荡培养变色时间及含量

由表2和表3结果可见，NJ01株复苏传代2代后可在10-12h内变色，尤其是5代后可在10h变色，含量可到10¹⁰CCU/mL，在生长速度和含量上高于参考株Y98。由表4可见，NJ01株静置培养与振荡培养变色时间和含量无差异。

实施例3：绵羊肺炎支原体药敏试验测定

1.材料

抗菌药：泰乐菌素、多西环素购自Mdbio。

2.培养试验

(1)取-20℃保存的绵羊肺炎支原体NJ01株和Y98株，以1:3的体积比接种于支原体液体培养基，37℃静置培养至培养物颜色变橙黄时，得到第一代培养物；

(2)立即将第一代培养物按1:5的体积比，接种于支原体液体培养基中，在37℃下培养至培养物颜色变黄时，得到第二代培养物；

(3)待第二代培养物变橙色时，按照步骤(1)的方法再传1-5代(与步骤(1)的区别在于接种体积比更换为1:10)，变橙黄-黄色后收获，-20℃以下保存，分别得到绵羊肺炎支原体NJ01株培养物和绵羊肺炎支原体Y98株培养物，同时测定培养物的颜色变化单位，分别为10⁹CCU/mL和10⁸CCU/mL。

3.抗菌药的最小抑菌浓度(MIC)和变色结果测定

将抗菌药泰乐菌素和多西环素分别定量溶解于水中，用0.22μm滤器过滤除菌，备用。

在96孔细胞板上每排的第1孔加100μL支原体液体培养基，作为阴性对照。在每排的第2孔加入190μL用培养基稀释到浓度为10⁵CCU/mL的绵羊肺炎支原体培养物，在每排的3-12孔加入100μL用培养基稀释到浓度为10⁵CCU/mL的绵羊肺炎支原体培养物；在每排的第2孔分别加入待测抗菌药10μL(3.2μg/mL)，混匀后，从第2孔吸取100μL加入第3孔，混匀后以2倍比稀释到第11孔，第11孔混匀后弃去100μL。第12孔作为阳性对照。其中，所述的培养物分别是绵羊肺炎支原体NJ01株和Y98株在步骤2所制备得到的培养物。

加样完毕，加盖用封口膜封口，37℃静置培养，培养约12-48h；(1)进行最小抑菌浓度(MIC)判定：当阴性对照孔不变色、阳性对照孔变为橙黄或黄色时，以试验孔未变色孔的最小抗菌药物浓度为该药物对被试菌株的最小抑菌浓度(MIC)；(2)48h后未变色孔的最小抗菌药物浓度为该药物对被试菌株的最小杀菌浓度(MBC)。

4.结果

测定绵羊肺炎支原体Y98株对泰乐菌素和多西环素的药敏试验结果发现在48-72h内出现变色，再后续未出现变色；绵羊肺炎支原体NJ01株对泰乐菌素和多西环素的药敏试验结果发现在12-18h内出现变色，后续未出现变色。泰乐菌素对两个菌株的最小抑菌浓度相同，多西环素对两个菌株对的最小抑菌浓度接近。可见，NJ01株可用于药敏测定，且变色较快，测定所需时间更短。

表5绵羊肺炎支原体Y98株药敏试验变色结果

表6绵羊肺炎支原体NJ01株药敏试验变色结果

实施例4用绵羊肺炎支原体测定抗血清效价试验

1.材料

清洁级新西兰大白兔，金陵种兔场。

2.兔抗绵羊肺炎支原体高免血清的制备

2.1免疫原制备

(1)取绵羊肺炎支原体Y98株接种于支原体液体培养基中，37℃静置培养，进行复壮和扩大培养，待培养物变黄(pH值6.6-7.0)收获培养物，测定CCU含量。

(2)将步骤(1)所得培养物高速离心，所得沉淀物为浓缩后的菌体，PBS洗涤，浓缩洗涤后菌体，进行超声破碎，测定蛋白含量，蛋白含量达3mg/mL以上，作为蛋白抗原。

(3)将步骤(2)制备的蛋白分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂按说明书进行乳化，制备得到绵羊肺炎支原体Y98株弗氏完全佐剂制剂和绵羊肺炎支原体Y98株弗氏不完全佐剂制剂。

(4)按照步骤(1)-(3)，制备绵羊肺炎支原体NJ01株弗氏完全佐剂制剂和绵羊肺炎支原体NJ01株弗氏不完全佐剂制剂。

2.2高免血清制备

首免当日，新西兰大白兔背部皮下多点注射1mL绵羊肺炎支原体Y98株弗氏完全佐剂制剂；首免后14日，在兔背部皮下多点注射1mL绵羊肺炎支原体Y98株弗氏不完全佐剂制剂；首免后21、28和35日，分别在兔腿部肌肉注射1mL蛋白抗原。首免后42日采血，分离血清，无菌过滤，检验后，制备成兔抗绵羊肺炎支原体Y98株高免血清。

按照上述方法制备兔抗绵羊肺炎支原体NJ01株高免血清。

3.绵羊肺炎支原体培养物的制备

按照实施例2的步骤2分别制备支原体NJ01株和支原体Y98株的培养物，取其第7代，CCU含量分别为10⁹CCU/mL和10⁸CCU/mL。

4.兔抗绵羊肺炎支原体高免血清检测试验

参考文献(孙亚波等不同动物高免血清对猪肺炎支原体的代谢抑制作用研究.中国兽药杂志，2016，50(12):7-11)的方法进行。

将绵羊肺炎支原体培养物用支原体液体培养基进行10倍比稀释至10^-10(具体稀释浓度如表7所示)；将兔抗绵羊肺炎支原体高免血清用支原体液体培养基稀释到1/10，即兔抗绵羊肺炎支原体高免血清占兔抗绵羊肺炎支原体高免血清与支原体液体培养基总体积的10％。

将稀释后的各个绵羊肺炎支原体培养物加入等体积的稀释后的兔抗绵羊肺炎支原体高免血清混匀，作为试验组，于37℃培养；同时，将绵羊肺炎支原体培养物测定CCU含量；另设支原体液体培养基作培养基对照组，于37℃静置培养；2日内无新增变色时判定结果。空白对照应不变色，根据CCU含量测定结果和试验组变色情况即可判定为抗血清的抗绵羊肺炎支原体代谢抑制价(血清变色稀释度/CCU变色稀释度)。

5.结果

兔抗绵羊肺炎支原体高免血清检测试验变色情况见表7。

表7兔抗绵羊肺炎支原体高免血清抗绵羊肺炎支原体代谢抑制价测定结果

由结果可见，培养基对照组不变色，NJ01株的含量为10⁹CCU/mL，NJ01株测定抗血清组种10^-1-10^-6稀释度变色，10^-7-10^-9稀释度未变色，兔抗绵羊肺炎支原体高免血清的代谢抑制价为10³。Y98株的含量为10⁸CCU/mL，试验成立；Y98株测定抗血清10^-1-10^-5稀释度变色，10^-6-10^-8稀释度未变色，兔抗绵羊肺炎支原体高免血清的代谢抑制价为10³。由此可见，绵羊肺炎支原体NJ01株和Y98株测定兔抗绵羊肺炎支原体高免血清的代谢抑制价结果相同，而NJ01株含量高于Y98株，且培养停止变色的时间也较早于Y98株。因此，NJ01株用于评价血清等制剂对绵羊肺炎支原体等抑制作用中准确且省时。

本发明提供了一株绵羊肺炎支原体及其应用的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的实施方式之一，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

序列表

<110> 江苏省农业科学院

<120> 一株绵羊肺炎支原体及其在抗绵羊肺炎支原体制剂筛选中的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1815

<212> DNA

<213> 热应激蛋白70 (HSP70)

<400> 1

atgaaaggaa aacataatat ggcaaaagaa ataattttag gtattgactt aggaacaaca 60

aactcagttg ttgcaattat tgaaaatcaa aaacctgttg ttcttgaaaa tcctaacgga 120

aaaagaacaa ctccttctgt tgttgccttt aaaaatggtg aggaaattgt tggtgatgcg 180

gcaaaacgtc aactagaaac taacccagaa gcaatcgcat ctgttaaaag attaatgggt 240

agcgataaaa ctgttcgtgc taaccaaaga gactataaac ccgaagaaat ttcagcaaaa 300

attcttgctt atttaaaaga atatgctgaa aaaaagattg gtcacaaagt ttcaaaagct 360

gttatcacag ttcctgctta ttttgataat gctcaacgtg aagcgacaaa aaatgccgga 420

aaaatcgcag gattagaagt tgaaagaata attaacgaac caacagctgc cgcacttgca 480

tttggtcttg acaaaaccga aaaagaaatg aaagtgcttg tttatgactt aggtggtgga 540

acttttgacg tttcagttct tgaattatct aacggaactt ttgaagtttt atcaacaagt 600

ggtgataacc atttaggtgg tgatgactgg gataatcaaa ttgttgactg aatggttaaa 660

agaattaaag aagagtacga ttttgatgca aaaagtgaca aaatggcact tactcgtcta 720

aaagaagaag ctgaaaaaac caaaattaac ctatcaaatc aaagtgtttc aacaatttcc 780

ttaccatttt taggtctagg aaaaaatggt ccaattaacg ttgaacttga actaaaaaga 840

tcagactttg aaaaaatgac agctcaccta attgaccgaa caagaaaacc aatcgttgat 900

gccttaaaac aagcaaaaat tgaagcaagt gagcttgacg aggttcttct tgttggtgga 960

tcaacacgta tgccagctgt tcagacaatg attgaacaca ctttaaataa aaagccaaat 1020

cgttcaataa atcctgatga agttgtggca attggagctg caattcaagg tggagttctt 1080

gctggagaaa ttagtgatgt tttattactt gacgttactc ctttaacttt aggaattgaa 1140

accttaggtg gagtttcaac cccgttaatt ccaagaaata caacaattcc ggtaacaaaa 1200

tcacaaattt tctcaacagc tgaagacaat caaaccgaag ttacaatttc tgtagtccaa 1260

ggtgaaagac aacttgctgc tgataacaaa atgttaggtc gctttaatct ttcaggaatc 1320

gagcctgctc ctcgtggtct tccacaaatt gaagttagtt tttcaattga cgtcaacggt 1380

attacaactg tttcagcaaa agataaaaaa actggaaaag aacaaacaat cacaattaaa 1440

aatacttcaa ctttatctga agaagaaatt aacagaatga ttcaagaagc cgaagaaaat 1500

cgtgaagctg atgcaatcaa aaaagataaa attgaaacaa cagttcgtgc cgaaggtctt 1560

attaatcaac ttgaaaaatc aataactgat caaggtgaaa aaattgatcc taaacaaaaa 1620

gaacttcttg aaaaacaaat tcaagaactc aaagatcttt taaaagaaga aaaaattgac 1680

gaactaaaaa caaaattaga ccaaattgag caagcagccc aagcttttgc ccaagcaagc 1740

gctcaacaag ctaacagtgc aagtgaaact gattcagatt caaacacaat tgatgctgaa 1800

atcaaacaaa attaa 1815

Claims

1.一株绵羊肺炎支原体，其特征在于，所述绵羊肺炎支原体的分类命名为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)NJ01株，已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020907，保藏日期为2020年12月14日。

2.根据权利要求1所述的绵羊肺炎支原体，其特征在于，所述绵羊肺炎支原体的热应激蛋白70的核苷酸序列与其他绵羊肺炎支原体相似性为95.76％-98.51％。

3.权利要求1或2所述的绵羊肺炎支原体在评估抗绵羊肺炎支原体制剂效果或筛选抗绵羊肺炎支原体制剂中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用的方法为将抗绵羊肺炎支原体制剂和绵羊肺炎支原体NJ01株培养物混合后培养，观察变色情况。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述绵羊肺炎支原体NJ01株培养物的制备方法包括如下步骤：

(1)将绵羊肺炎支原体NJ01株按照1:3-1:10的体积比接种于支原体液体培养基，在36-38℃下培养12-72h传代，待培养物变成橙黄-黄色时，得到第一代培养物；

(2)将第一代培养物以1:5以上的体积比接种于支原体液体培养基中，在36-38℃下培养12-72h传代，待培养物变成橙黄-黄色时，得到第二代培养物；

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述支原体液体培养基中各组分含量及制备方法为：Eagles液40％-50％v/v，水解乳蛋白0.005-0.02g/mL，pH 7.4的磷酸盐缓冲液28％-40％v/v，0.04g/mL酚红0.15％-0.2％v/v；用NaOH调pH值为7.4-7.6，高压灭菌后，加入无菌血清10％-20％v/v，鲜酵母浸出汁1％-2％v/v。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述绵羊肺炎支原体NJ01株培养物中，菌株含量为10¹⁰-10⁵CCU/mL。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述绵羊肺炎支原体NJ01株培养物的体积占含有抗绵羊肺炎支原体制剂和绵羊肺炎支原体NJ01株培养物总体积的50％-99.9％。

9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的培养为于36-38℃下培养12-72h后，观察变色。

10.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的抗绵羊肺炎支原体制剂为抗支原体类的药物、化合物、抗体、血清、蛋白中的任意一种或多种组合的复合物。