CN112970909A - 青仁黑豆皮有效成分提取方法、组合物、药茶制备方法及应用 - Google Patents

青仁黑豆皮有效成分提取方法、组合物、药茶制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种青仁黑豆皮有效成分提取方法、组合物、药茶制备方法及应用，提取方法，具体为：按料液比1g:(30‑50)mL向干燥颗粒状的青仁黑豆皮中加入蒸馏水混匀，进行均质处理、干燥；采用超临界二氧化方法进行萃取，得到青仁黑豆皮第一提取液；将得到的料渣进行二次提取，得到青仁黑豆皮第二提取液；将所得第一、第二提取液合并收集，减压浓缩，干燥即得。本发明使得有效成分的生物活性得到更好的保护和有效利用，这些成分在机体中相互协同，具有良好的抗氧化及抗肿瘤的作用，工艺简单，成本低，更利于青仁黑豆皮产业化加工。

Description

青仁黑豆皮有效成分提取方法、组合物、药茶制备方法及应用
技术领域
本发明属于豆类加工技术领域，涉及一种青仁黑豆皮有效成分提取方法、组合物、药茶制备方法及应用。
背景技术
现代人工作压力大，身体易出现体恤困乏、肝血不足、血虚盗汗、肝脾不调、贫血等症状。急性恶性肿瘤的发病率及患病人数每年都在不断增加，尤其出现了癌症年轻化，幼儿化等严重现象。目前临床上仅有少数癌症能够治愈，但副作用大，治疗过程极其痛苦，治疗费用昂贵。因此日常调理身体，预防疾病，提高机体的免疫力就显得尤为重要。
青仁黑豆有众多功效，但是由于青仁黑豆的种子蛋白质含量丰富的组织或器官中含有胰蛋白酵素抑制剂，这种物质会抑制生长凝集素和降低碘吸收的甲状腺肿素，因此不宜生食多食，尤其胃肠功能差的人。一般人们采用烹煮的方法破坏青仁黑豆中所含的胰蛋白酵素抑制剂，而在烹煮过程中，大部分营养成分易被高温分解。青仁黑豆皮中没有胰蛋白酵素抑制剂，但是青仁黑豆皮中含有大量的黑色色素导致食用口感发涩，生物活性成分的有效利用率低，解决如何最大程度保留青仁黑豆皮中活性物质及其作用更好地发挥这一问题迫在眉睫。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种青仁黑豆皮有效成分提取方法及其应用，有效成分的生物活性得到更好的保护和有效利用，这些成分在机体中相互协同，具有良好的抗氧化及抗肿瘤的作用，工艺简单，成本低，更利于青仁黑豆皮产业化加工。
本发明的另一目的是，提供一种组合物，提高抗氧化、抗肿瘤活性的同时有效防止了胃酸分泌过多带来的不良反应，具有健脾利水、消肿下气、滋肾阴、润肺燥、活血解毒等多种功能。
本发明的另一目的是，提供一种药茶制备方法。
本发明所采用的技术方案是，一种青仁黑豆皮有效成分提取方法，具体按照以下步骤进行：
S1，按料液比1g:(30-50)mL向干燥颗粒状的青仁黑豆皮中加入蒸馏水混匀，进行均质处理，均质压力100-200MPa，2-4个处理循环，每个循环25-35s；然后在-35℃至-45℃抽真空干燥；
S2，采用超临界二氧化方法，在压力30-50MPa、温度35-45℃条件下进行萃取，萃取时间至少1-2小时，收集提取液和料渣，得到青仁黑豆皮第一提取液；
S3，将得到的料渣进行二次提取，采用减压沸腾法，液料比(150-350)mL∶(1-3)g，水作为溶剂，温度40-50℃条件下提取30-60min，收集提取液，得到青仁黑豆皮第二提取液；
S4，将所得第一、第二提取液合并收集，减压浓缩5-10倍，干燥即得。
进一步的，所述步骤S1中，干燥颗粒状的青仁黑豆皮的处理方法：将称取的青仁黑豆皮清洗2-3遍，采用高压电场干燥仪，在25-35℃、20-40kV高压电场、气流速度1.5-2.5m/s的复合场下烘干至水分少于6-8％。
进一步的，所述步骤S1中，青仁黑豆皮的颗粒度为30-50目。
进一步的，所述步骤S4中，减压浓缩具体为：采用旋转蒸发仪，在40-50℃、0.07-0.09Mpa条件下减压浓缩；放入-40℃冰箱冷冻凝固，通过冷冻干燥机在-40℃抽真空干燥，即得。
一种组合物，其特征在于，包括上述提取物，原料按照质量份数由以下组分组成：青仁黑豆皮70-80份、山楂8-10份、谷芽10-15份，冰糖1份。
进一步的，所述青仁黑豆皮、山楂、谷芽的质量比为15：1：2。
一种药茶的制备方法，以上述提取物为原料，具体按照以下步骤进行：
S1，按照重量配比称取青仁黑豆皮和山楂，将称取的青仁黑豆皮和山楂处理成颗粒状；
S2，按照重量配比称取谷芽，文火炒制或麸炒；
S3，将青仁黑豆皮和山楂的颗粒物和炒后的谷芽混合，得到混合物a；
S4，按料液比1g:(30-50)mL向混合物a中加入蒸馏水混匀，进行均质处理，均质压力100-200MPa，2-4个处理循环，每个循环25-35s；然后在-35℃至-45℃抽真空干燥，干燥得改性后的青仁黑豆皮混合物b；
S5，采用超临界二氧化方法，将混合物b在压力30-50MPa、温度35-45℃条件下进行萃取，萃取时间至少1-2小时，收集提取液和料渣，得到第一提取液；
S6，将得到的料渣进行二次提取，采用减压沸腾法，液料比(150-350)mL∶(1-3)g，水作为溶剂，温度40-50℃条件下提取30-60min，收集提取液，得到第二提取液；
S7，将所得第一、第二提取液合并收集后，与称取的冰糖混合，减压浓缩5-10倍，干燥即得。
进一步的，所述步骤S1中，青仁黑豆皮和山楂处理方法：将称取的青仁黑豆皮和山楂清洗2-3遍，采用高压电场干燥仪，在25-35℃、20-40kV高压电场、气流速度1.5-2.5m/s的复合场下烘干至水分少于6-8％，干燥时间15-20min。
进一步的，所述步骤S1中，青仁黑豆皮和山楂的颗粒度为30-50目。
上述提取方法得到的提取物在制备抗氧化、抗肿瘤活性的药物或食品的应用。
本发明的有益效果是：
青仁黑豆皮中含有丰富的多糖、维生素E和硒等成分，采用本发明的提取方法，使生物活性得到更好的保护和有效利用，这些成分在机体中相互协同，具有良好的抗氧化及抗肿瘤的作用。试验证明获得的青仁黑豆皮提取物的DPPH清除率是58.12±0.26％，肿瘤细胞生长抑制率分别是30％(BGC-823)45％(Hela)，43％(NCI-H460)。
本发明中谷芽、山楂组合物刺激胃酸分泌，使得青仁黑豆中的花青素更容易被人体吸收，此外，谷芽本身具有健脾开胃、促进食欲的功效。加入山楂和谷芽后，DPPH清除率为89.71±0.23％，抗氧化活性、抗肿瘤活性明显增强；将谷芽与山楂合用，提高了青仁黑豆皮提取物抗氧化能力的同时保证pH值在适当范围，既确保了青仁黑豆皮组合物中花青素高效的利用，又有效防止了胃酸分泌过多带来的不良反应。
本发明制备方法简单、可操作性强、成本低、便于大批量工业化生产，采用本发明制备方法得到的活性成分种类多，纯度高，活性好，制备全过程没有加入任何有机溶剂，安全性高，能够直接应用于营养保健品、食品抗氧化剂和中药有效成分提取等生产中。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明中实施例6干燥方式对青仁黑豆皮干燥速率的影响结果；
图2为本发明中实施例6干燥方式对山楂干燥速率的影响结果；
图3为本发明中实施例6干燥方式对青仁黑豆皮组合物中热敏性物质含量的影响；
图4为本发明中实施例8不同均质压对膳食纤维提取率的影响结果；
图5为本发明中实施例10体内抗氧化指标SOD测定结果；
图6为本发明中实施例10体内抗氧化指标GSH测定结果；
图7为本发明中实施例10体内抗氧化指标MDA测定结果；
图8为本发明中实施例10体内抗氧化指标T-AOC测定结果；
图9为本发明中实施例3青仁黑豆皮组合物有效抑制人胃腺癌细胞(BGC-823)增殖的结果；
图10为本发明中实施例3青仁黑豆皮组合物有效抑制人宫颈癌细胞(Hela)增殖的结果；
图11为本发明中实施例3青仁黑豆皮组合物有效抑制人肺癌细胞(NCI-H460)增殖的结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1，
一种青仁黑豆皮有效成分提取方法，具体按照以下步骤进行：
S1，将称取的青仁黑豆皮清洗2-3遍，采用高压电场干燥仪，在25-35℃、20-40kV高压电场、气流速度1.5-2.5m/s的复合场下烘干至水分少于6-8％，干燥时间15-20min，青仁黑豆皮的颗粒度为30-50目；按料液比1g:(30-50)mL向干燥颗粒状的青仁黑豆皮中加入蒸馏水混匀，进行均质处理，均质压力100-200MPa，2-4个处理循环，每个循环25-35s；然后在-35℃至-45℃抽真空干燥；
S2，采用超临界二氧化方法，在压力30-50MPa、温度35-45℃条件下进行萃取，萃取时间至少1-2小时，收集提取液和料渣，得到青仁黑豆皮第一提取液；
S3，将得到的料渣进行二次提取，采用减压沸腾法，液料比(150-350)mL∶(1-3)g，水作为溶剂，温度40-50℃条件下提取30-60min，收集提取液，得到青仁黑豆皮第二提取液；
S4，将所得第一、第二提取液合并收集，减压浓缩5-10倍，采用旋转蒸发仪，在40-50℃、0.07-0.09Mpa条件下减压浓缩；放入-40℃冰箱冷冻凝固，通过冷冻干燥机在-40℃抽真空干燥，即得。
本发明实施例1获得的青仁黑豆皮提取物的DPPH清除率是58.12±0.26％，肿瘤细胞生长抑制率分别是30％(BGC-823)45％(Hela)，43％(NCI-H460)。
实施例2，
一种组合物，原料按照质量份数由以下组分组成：青仁黑豆皮70-80份、山楂4-8份、谷芽10-15份，冰糖1份。
实施例3，
一种药茶的制备方法，具体按照以下步骤进行：
S1，按照重量配比称取青仁黑豆皮和山楂；将称取的青仁黑豆皮和山楂清洗2-3遍，采用高压电场干燥仪，在30℃、35kV高压电场、气流速度2.5m/s的复合场下烘干至水分少于6-8％，干燥时间15min；
S2，将干燥后的青仁黑豆皮和山楂，粉碎成颗粒状，颗粒度为40目；
S3，按照重量配比称取谷芽，用文火进行炒制，炒至表面深黄色，有焦香气后，取出晾凉，筛去灰屑，得到焦谷芽；
S4，将青仁黑豆皮和山楂的颗粒物以及焦谷芽混合，得到青仁黑豆皮混合物a；
S5，将青仁黑豆皮混合物a进行超高压改性，利用超高压均质过程中的高速撞击、高速剪切、激波振荡、空穴现象等一系列作用，使较大分子量的不可溶性膳食纤维如纤维素、半纤维素、木质素等大分子的糖苷键断裂，部分不可溶性膳食纤维(IDF)转化为非消化性的可溶性膳食纤维。按料液比1g:(30)mL加入蒸馏水混匀，进行均质处理，均质压力200MPa，2-4个处理循环，每个循环25-35s；然后-35℃抽真空干燥，干燥得改性后的青仁黑豆皮混合物b；
S6，将混合物b，用超临界二氧化技术，在压力30-50MPa、温度35-45℃条件下进行萃取，萃取时间至少1-2小时，收集提取液和料渣，得到第一提取液；
S7，将得到的料渣进行二次提取，采用减压沸腾法，液料比200mL∶1g，水作为溶剂，温度40℃条件下提取50min，收集提取液，得到第二提取液；
S8，将所述步骤S6和S7所得第一、第二提取液合并收集，然后与称取的冰糖混合，减压浓缩10倍，减压浓缩具体为：采用旋转蒸发仪，在40℃、0.07Mpa条件下减压浓缩；放入-40℃冰箱冷冻凝固，通过冷冻干燥机在-40℃抽真空干燥，得到干粉，既得速溶的青仁黑豆皮组合物。
实施例4，
一种药茶的制备方法，具体按照以下步骤进行：
S1，按照重量配比称取青仁黑豆皮和山楂；将称取的青仁黑豆皮和山楂清洗2-3遍，采用高压电场干燥仪，在25℃、40kV高压电场、气流速度1.5m/s的复合场下烘干至水分少于8％，干燥时间20min；
S2，将干燥后的青仁黑豆皮和山楂，粉碎成颗粒状，颗粒度为30目；
S3，按照重量配比称取谷芽，用文火进行炒制，炒至表面深黄色，有焦香气后，取出晾凉，筛去灰屑，得到焦谷芽；
S4，将青仁黑豆皮和山楂的颗粒物以及焦谷芽混合，得到青仁黑豆皮混合物a；
S5，将青仁黑豆皮混合物a进行超高压改性，按料液比1g:(50)mL加入蒸馏水混匀，进行均质处理，均质压力100MPa，2-4个处理循环，每个循环25-35s；然后-35℃抽真空干燥，干燥得改性后的青仁黑豆皮混合物b；
S6，将混合物b，用超临界二氧化技术，在压力30-50MPa、温度35-45℃条件下进行萃取，萃取时间至少1-2小时，收集提取液和料渣，得到第一提取液；
S7，将得到的料渣进行二次提取，采用减压沸腾法，液料比150mL∶3g，水作为溶剂，温度50℃条件下提取60min，收集提取液，得到第二提取液；
S8，将所述步骤S6和S7所得第一、第二提取液合并收集，然后与称取的冰糖混合，减压浓缩5倍，减压浓缩具体为：采用旋转蒸发仪，在50℃、0.09Mpa条件下减压浓缩；放入-40℃冰箱冷冻凝固，通过冷冻干燥机在-40℃抽真空干燥，得到干粉，既得速溶的青仁黑豆皮组合物。
实施例5，
一种药茶的制备方法，具体按照以下步骤进行：
S1，按照重量配比称取青仁黑豆皮和山楂；将称取的青仁黑豆皮和山楂清洗2-3遍，采用高压电场干燥仪，在35℃、20kV高压电场、气流速度2m/s的复合场下烘干至水分少于6％，干燥时间15min；
S2，将干燥后的青仁黑豆皮和山楂，粉碎成颗粒状，颗粒度为50目；
S3，按照重量配比称取谷芽，用文火进行炒制，炒至表面深黄色，有焦香气后，取出晾凉，筛去灰屑，得到焦谷芽；
S4，将青仁黑豆皮和山楂的颗粒物以及焦谷芽混合，得到青仁黑豆皮混合物a；
S5，将青仁黑豆皮混合物a进行超高压改性，按料液比1g:(40)mL加入蒸馏水混匀，进行均质处理，均质压力150MPa，2-4个处理循环，每个循环25-35s；然后-45℃抽真空干燥，干燥得改性后的青仁黑豆皮混合物b；
S6，将混合物b，用超临界二氧化技术，在压力30-50MPa、温度35-45℃条件下进行萃取，萃取时间至少1-2小时，收集提取液和料渣，得到第一提取液；
S7，将得到的料渣进行二次提取，采用减压沸腾法，液料比350mL∶1g，水作为溶剂，温度45℃条件下提取30min，收集提取液，得到第二提取液；
S8，将所述步骤S6和S7所得第一、第二提取液合并收集，然后与称取的冰糖混合，减压浓缩8倍，减压浓缩具体为：采用旋转蒸发仪，在45℃、0.08Mpa条件下减压浓缩；放入-40℃冰箱冷冻凝固，通过冷冻干燥机在-40℃抽真空干燥，得到干粉，既得速溶的青仁黑豆皮组合物。
在一些实施例中，青仁黑豆皮和山楂还能采用低温冻干(-10℃～-50℃)，的方法，利用低温冰箱或干冰进行预冻，然后抽真空干燥，易挥发易氧化成分得到保护。采用麸炒的方法预处理谷芽，能够增强谷芽的功效。麸炒是指将药物与麦麸拌炒，焦谷芽性温，具有消食止泻，养胃和中，下气除胀等功效；麸炒后，可增强其疗效。本发明中的青仁黑豆皮不能替换，黑豆皮与黄豆皮的营养成分不同，功效不同，青仁黑豆皮中花青素含量和大豆异黄酮含量较普通黑豆皮高，青仁黑豆的豆腥味比其它普通黑豆小。
实施例3-5中干燥速度是传统干燥方法的2-3倍，活性成分损失少，干燥质量高。25-35℃、20-40kV高压电场、气流速度1.5-2.5m/s、烘干至水分少于6-8％，电压超过该范围后，虽然针电极产生的离子风能量大，但是由于其作用范围内的空气分子几乎形成了离子风，离子风的密度不再增加，使原料的干燥速度不再增加。温度过高会过多地导致原料中有效成分的损失。
原料粒度大小可影响提取回收率，减小原料粒度，可增加固体与溶剂的接触面积，从而使萃取速度提高。相反，粒度如过小、过细，会严重堵塞筛孔，造成萃取器出口过滤网的堵塞。
当液料比较小时，溶液黏度大，提取率小；当液料比逐渐升高时，由于有浓度差，因此扩散快，提取率高；当升高到达一定时，由于浓度差变小，提取率趋于平衡。温度过高会过多地导致原料中有效成分的损失。
制备过程中的温度、料液比和压力均与DPPH清除率有关，这些参数显著影响青仁黑豆皮中抗氧化活性成分的有效提取。
实施例6：
采用高压电场干燥青仁黑豆皮和山楂。高压电场干燥是一种非热处理技术，由于其在处理过程中无热效应，故可应用于热敏性食品的加工，在保证食品安全的同时最大限度地保持食品原有的品质，效率高、成本低、能耗小、无污染等绝对优势。具体按以下步骤进行：
取青仁黑豆种皮和山楂清洗2～3遍，取相同质量的青仁黑豆种皮和山楂。在同等温度下，分别采用传统的热风干燥和高压电场干燥(干燥电压20-40kV)进行干燥，在试验中，每隔5min左右用电子天平称出物料的质量，并做出物料的质量随时间变化的曲线，即干燥时间分别为5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min；测定经热风干燥和高压电场干燥处理的青仁黑豆皮混合物中总黄酮、总酚、花青素及蛋白质的含量。芦丁作为标准品，采用Al(NO3)3络合分光光度法测定总黄酮含量，对照没食子酸标准品，采用福林酚法测定总酚含量，用pH示差法测定花青素含量，牛血清蛋白作为标准品，采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量。
图1-2为青仁黑豆皮和山楂的质量随干燥时间变化的曲线图。结果表明高压电场干燥明显比热风干燥速率高。如图3，高压电场干燥法处理后，青仁黑豆皮中总黄酮、总酚、花青素和蛋白质的含量是热风干燥的2倍左右。说明高压电场干燥有效的降低了原材料处理过程中总黄酮、总酚、花青素和蛋白质等热敏性成分的损失。
实施例7：
山楂中含枸橼酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、齐墩果酸、山楂酸、琥珀酸、绿原酸等大量有机酸，山楂的pH值在3.23至3.25之间，它的酸性能够刺激胃产生胃酸。相反山楂过强的酸性极易引起胃酸分泌过多伤及胃、十二指肠黏膜，造成胃溃疡或十二指肠溃疡等疾病。谷芽性温，具有健脾醒胃养胃的作用，促进胃酸的分泌，但不伤胃，本实施例将谷芽与山楂合用，两者的功效互补，既确保了青仁黑豆皮中花青素高效的利用，又有效防止了胃酸分泌过多带来的不良反应。本实施例采用基于遗传算法的多目标优化技术(MATLAB软件)，并结合实验数据(以DPPH清除率为指标衡量抗氧化性)对青仁黑豆皮和辅料(山楂和谷芽)的配比进行优化，获得青仁黑豆皮组合物最佳的配比方案。
青仁黑豆皮75份，加入量不变时，其抗氧化效果随着加入山楂的量增强，如表1所示，加入的山楂质量份数达到8份，青仁黑豆皮的DPPH清除能力最强，但此时二者混合物的pH接近于3，长期食用会导致胃部损伤等问题。谷芽与山楂合用，两者的功效互补，既确保了青仁黑豆皮组合物中花青素高效的利用，又有效防止了胃酸分泌过多带来的不良反应。
表1
山楂(份) DPPH清除率(％)
0 58.12±0.26
2 73.56±0.51
4 80.61±0.19
6 82.01±0.43
8 89.09±0.88
10 89.02±0.56
12 88.98±0.34
根据表1的试验结果及pH，加入山楂的质量份数一定(5份)，随着谷芽质量份数的增加，青仁黑豆皮组合物的DPPH清除能力增强。试验结果如下表2：
表2
谷芽(份) DPPH清除率(％)
5 85.22±0.49
10 89.71±0.23
15 89.15±0.38
20 89.01±0.86
根据上述试验结果，未加入辅料的青仁黑豆皮DPPH清除率为58.12±0.26％，加入5份山楂和10份谷芽后，DPPH清除率为89.71±0.23％，抗氧化活性、抗肿瘤活性明显增强；如果不加入山楂、谷芽，青仁黑豆皮功效不能得到完全发挥，将谷芽与山楂合用，提高青仁黑豆皮组合物的抗氧化能力的同时降低了pH值，既确保了青仁黑豆皮组合物中花青素高效的利用，又有效防止了胃酸分泌过多带来的不良反应；谷芽、山楂与冰糖共同作用有效改善了黑色色素引起的口感差的问题。
实施例8：
使用仪器：超高压均质机；取S4所得的青仁黑豆皮混合物进行均质处理，利用超高压均质过程中强烈剪切、振荡、撞击等作用等一系列作用，使较大分子量的不可溶性膳食纤维如纤维素、半纤维素、木质素等大分子的糖苷键断裂，部分不可溶性膳食纤维(IDF)转化为非消化性的可溶性膳食纤维，同时起到微生物杀灭作用。其处理条件为：均质压力分别为0MPa、50MPa、100MPa、150MPa、200MPa，3个循环处理，每个循环35s或25s。然后分别在-35℃、-40℃、-45℃抽真空干燥，得改性后的青仁黑豆皮混合物，参考GB 5009.88—2014《食品安全国家标准食品中膳食纤维的测定》测定膳食纤维的含量，按下式计算膳食纤维提取率：
Figure BDA0003009104670000101
图4为不同均质压和料液比对膳食纤维提取率的影响。结果表明，随着压力的增加，膳食纤维的提取率呈现先增加后下降的趋势，当料压力达到150MPa后，膳食纤维的提取率开始下降，因此确定处理青仁黑豆皮混合物的最适均质压为150MPa。
实施例9：
本发明原料处理过程中接近室温，有效地防止了热敏性物质的氧化和逸散，减少了原料中活性物质的损耗，同时超高压均质处理，使较大分子量的不可溶性膳食纤维结构中糖苷键断裂，部分不可溶性膳食纤维转化为非消化性的可溶性膳食纤维，提高了膳食纤维的提取率。对实施例6中得到的青仁黑豆皮混合物进行提取。具体实施步骤如下：
1、用超临界二氧化技术，在萃取压力30-50MPa，温度35-45℃条件下进行提取，至少1-2小时，收集提取液和料渣，得到第一提取液；该法提取过程中提取温度接近室温，并在CO2气体笼罩下进行提取，有效地防止了花青素、黄酮类等热敏性物质的氧化和逸散。能把高沸点，低挥发度、易热解的物质在其沸点温度以下萃取出来；同时超临界二氧化碳萃取技术不仅萃取效率高、能耗较少，节约成本，而且安全性好；
2、收集超临界二氧化碳萃取后的料渣进行二次提取，采用减压沸腾法，液料比(150-350)mL∶(1-3)g，水作为溶剂，温度40-50℃条件下提取30-60min，收集提取液，得到第二提取液；二次低压萃取，提高了活性物质的产率，充分利用原料。
3、将上述步骤所得第一、第二提取液合并收集，然后与冰糖按比例混合，减压浓缩5-10倍，放入-40℃冰箱冷冻凝固，然后抽真空冷冻干燥，得干粉，既得速溶的青仁黑豆皮组合物。冰糖能够改善青仁黑豆皮组合物的口感，与山楂的酸味互补，形成一个大众已接受的酸甜口味。
在制备过程中同时采用超临界二氧化碳萃取和二次减压沸腾提取，不仅充分利用原料，增加了青仁黑豆皮组合物中活性物质的总产率，这样既不破坏青仁黑豆皮组合物中热敏性物质，又不会将高温煎煮过程中容易水解而产生的许多大分子杂质如淀粉、糊精、蛋白质、色素、鞣酸、粘液质等大量带到提取液中来。低温低压快速萃取，有效的保护了物质的生物活性，使其生物活性更好，具有更高价值。
表3部分成分的提取率
Figure BDA0003009104670000111
实施例10：
青仁黑豆皮75份、山楂5份、谷芽10份、冰糖1份，比较超临界二氧化碳技术处理前混合物b和处理后成品青仁黑豆皮组合物体内抗氧化活性，其它制备方法与实施例3相同；试验数据如图5、6、7、8，比较发现处理后青仁黑豆皮组合物提高了小鼠血清、肝脏、肾脏组织SOD、GSH含量、T-AOC水平和降低MDA含量的能力明显强于混合物b；以各组小鼠血清、肝脏、肾脏为试验样品，进行SOD、GSH、MDA含量以及T-AOC指标测定。具体操作如下：
将50只ICR小鼠预饲养7d后随机分成5组，即空白对照(BC)组、混合物b组、青仁黑豆皮组合物组、Vc对照组，随机抽取10只/组。其中青仁黑豆皮组合物组小鼠每天灌胃青仁黑豆皮组合物，混合物b组小鼠每天灌胃混合物b冲泡的水，空白和阳性对照组分别灌胃等量体积蒸馏水和Vc。实验期间，小鼠自由摄食和饮水，灌胃30d后，禁食12h。眼球采血，立即37℃静置2h，4℃过夜，3000r/min低温离心10min，分离血清，待测。采血后的小鼠处死解剖，取出肝、肾于预冷的生理盐水漂洗，除去血液，滤纸吸干表面水分，各组织器官与生理盐水按1:9的比例低温匀浆，制备匀浆液，3000r/min离心10min，留上清液，待测。严格按照试剂盒说明书进行SOD、GSH、MDA含量以及T-AOC指标测定。
图5、6、7、8为体内抗氧化指标测定图。实验结果表明，青仁黑豆皮组合物能够提高小鼠血清、肝脏、肾脏组织SOD、GSH含量、T-AOC水平和降低MDA含量，说明青仁黑豆皮组合物具有良好的体内抗氧化作用。
MTT法体外评估了实施例3制备的青仁黑豆皮组合物的抗肿瘤活性。受式细胞有人胃腺癌细胞(BGC-823)、宫颈癌细胞(Hela)和人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)。将对数期生长的癌细胞用胰蛋白酶消化，并用含10％胎牛血清的1640培养基和DMEM培养基制成细胞悬液，接种于96孔板孵育，密度为1×106个/mL，待细胞贴壁后，分别加入待测样品(0.125、0.25、0.50、1.0、2.0mg/mL)，磷酸盐缓冲液PBS作为空白对照组，设置6个复孔，在37℃、5％CO2条件下孵育24h后，加入10μL MTT(5mg/mL)，继续孵育4h。弃去上清液，每孔加入100μL二甲基亚砜，测定并记录570nm处OD值。
图9、图10、图11结果所示，样品在一定质量浓度范围内，肿瘤细胞的增值抑制越加明显。
实施例11，
青仁黑豆皮75份、冰糖1份，调节山楂和谷芽的用量，药茶的制备方法与实施例3相同，受式为人胃腺癌细胞(BGC-823)，测定实施例10.1-10.6制得药茶对肿瘤细胞生长抑制率，见表4；
表4山楂和谷芽的用量对肿瘤细胞生长抑制率的影响
实施例 山楂、谷芽(份数) 抑制率(％)
11.1 1份、1份 32.0％
11.2 2份、1份 30.9％
11.3 3份、2份 34.1％
11.4 4份、6份 36.8％
11.5 5份、10份 45.6％
11.6 6份、14份 41.6％
根据表4可知，青仁黑豆皮药茶的抗氧化活性随着山楂和谷芽的配比不同发生变化，山楂和谷芽的最优比例分别为5份和10份。
本发明高压电场干燥法具有使原材料不升温的优点，很好地保存了青仁黑豆皮中的有效成分，干燥速度是传统干燥的2～3倍；超临界二氧化碳技术有效地防止了花青素、大豆异黄酮等热敏性物质的氧化和逸散，能够有效地萃取出黑豆皮中维生素E等脂溶性抗氧化成分，同时含有的微量元素硒能够参与强性抗癌氨基酸谷胱甘肽及其谷胱甘肽过氧化物酶的组成，协同维生素E具有抗氧化、抗衰老、防癌抗癌、预防心脏病等益处。减压沸腾法二次萃取，将残渣中残留的物质在其沸点温度以下萃取出来。相比于传统的蒸煮等提取方法，本发明大大提高了黑豆皮中挥发性物质、热敏性物质和易氧化物质的提取率，同时极高地保留了提取物的活性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种青仁黑豆皮有效成分提取方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行：
S1，按料液比1g:(30-50)mL向干燥颗粒状的青仁黑豆皮中加入蒸馏水混匀，进行均质处理，均质压力100-200MPa，2-4个处理循环，每个循环25-35s；然后在-35℃至-45℃抽真空干燥；
S2，采用超临界二氧化方法，在压力30-50MPa、温度35-45℃条件下进行萃取，萃取时间至少1-2小时，收集提取液和料渣，得到青仁黑豆皮第一提取液；
S3，将得到的料渣进行二次提取，采用减压沸腾法，液料比(150-350)mL∶(1-3)g，水作为溶剂，温度40-50℃条件下提取30-60min，收集提取液，得到青仁黑豆皮第二提取液；
S4，将所得第一、第二提取液合并收集，减压浓缩5-10倍，干燥即得。
2.根据权利要求1所述一种青仁黑豆皮有效成分提取方法，其特征在于，所述步骤S1中，干燥颗粒状的青仁黑豆皮的处理方法：将称取的青仁黑豆皮清洗2-3遍，采用高压电场干燥仪，在25-35℃、20-40kV高压电场、气流速度1.5-2.5m/s的复合场下烘干至水分少于6-8％。
3.根据权利要求1所述一种青仁黑豆皮有效成分提取方法，其特征在于，所述步骤S1中，青仁黑豆皮的颗粒度为30-50目。
4.根据权利要求1所述一种青仁黑豆皮有效成分提取方法，其特征在于，所述步骤S4中，减压浓缩具体为：采用旋转蒸发仪，在40-50℃、0.07-0.09Mpa条件下减压浓缩；放入-40℃冰箱冷冻凝固，通过冷冻干燥机在-40℃抽真空干燥，即得。
5.一种组合物，其特征在于，包括如权利要求1-4任一项所述一种青仁黑豆皮有效成分提取方法得到的提取物，原料按照质量份数由以下组分组成：青仁黑豆皮70-80份、山楂8-10份、谷芽10-15份，冰糖1份。
6.根据权利要求5所述的一种组合物，其特征在于，所述青仁黑豆皮、山楂、谷芽的质量比为15：1：2。
7.一种药茶的制备方法，其特征在于，以如权利要求1-4任一项所述一种青仁黑豆皮有效成分提取方法得到的提取物为原料，具体按照以下步骤进行：
S1，按照重量配比称取青仁黑豆皮和山楂，将称取的青仁黑豆皮和山楂处理成颗粒状；
S2，按照重量配比称取谷芽，文火炒制或麸炒；
S3，将青仁黑豆皮和山楂的颗粒物和炒后的谷芽混合，得到混合物a；
S4，按料液比1g:(30-50)mL向混合物a中加入蒸馏水混匀，进行均质处理，均质压力100-200MPa，2-4个处理循环，每个循环25-35s；然后在-35℃至-45℃抽真空干燥，干燥得改性后的青仁黑豆皮混合物b；
S5，采用超临界二氧化方法，将混合物b在压力30-50MPa、温度35-45℃条件下进行萃取，萃取时间至少1-2小时，收集提取液和料渣，得到第一提取液；
S6，将得到的料渣进行二次提取，采用减压沸腾法，液料比(150-350)mL∶(1-3)g，水作为溶剂，温度40-50℃条件下提取30-60min，收集提取液，得到第二提取液；
S7，将所得第一、第二提取液合并收集后，与称取的冰糖混合，减压浓缩5-10倍，干燥即得。
8.根据权利要求7所述一种药茶的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，青仁黑豆皮和山楂处理方法：将称取的青仁黑豆皮和山楂清洗2-3遍，采用高压电场干燥仪，在25-35℃、20-40kV高压电场、气流速度1.5-2.5m/s的复合场下烘干至水分少于6-8％。
9.根据权利要求7所述一种药茶的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，青仁黑豆皮和山楂的颗粒度为30-50目。
10.权利要求1-3任一项所述提取方法得到的提取物在制备抗氧化、抗肿瘤活性的药物或食品的应用。
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