CN112956702A - 一种增加骨密度的复合制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明属于保健品食品领域,具体涉及一种增加骨密度的复合制剂,由以下配方组成:酶解海洋鱼小分子肽、菊粉、酶解牛骨肽、低聚果糖、L‑乳酸钙、野樱莓果粉、水苏糖、食用香精、酪蛋白磷酸肽、柠檬酸、三氯蔗糖,采用的原料均来源于食品,无毒副作用,处方中含有的酶解海洋鱼小分子肽、等主要原料富含小分子肽,在补充钙质和胶原蛋白同时,有利于钙的有效吸收,不致于钙质的流失而导致的骨骼疏松,用于酶解的小分子专用酶具有极强的分解效率,得到的小分子肽小分子肽平均长度小于10个氨基酸,有助于营养物质的吸收。
Description
技术领域
本发明属于保健品食品领域,具体涉及一种增加骨密度的复合制剂。
背景技术
骨质疏松症(Osteoporosis,OP)是一种全身代谢性骨病,1994年,世界卫生组织将骨质疏松症定义为以骨的微细结构破坏和骨量下降为主要特征,导致骨脆性增加、易发生骨折的一种全身性骨骼疾病2001年美国国立卫生研究院重新定义骨质疏松症为骨强度下降导致骨折危险性升高的一种骨骼疾病。骨质疏松是一种严重影响着老年人群生活质量的静默性疾病,在初期阶段无显著临床症状,难以被发现,多数到骨折发生时才得到干预。全球每年大约有超过2亿的骨质疏松患者,其中约8900万的骨质疏松患者发生骨折。按照目前骨质疏松患病率13%计算,每年由于骨质疏松导致的骨折花费高达10亿美金。随着我国老龄化社会的到来,骨质疏松性骨折防治已经成为重要的社会公共卫生任务。因此,开发防治骨质疏松的食品、保健品有着广阔的市场前景,能够带来良好的社会效益和经济效益。
现代生物代谢研究表明,蛋白质消化后主要是以多肽的形式直接吸收,如海洋鱼小分子肽不仅具有鱼皮蛋白质相同的氨基酸组成,而且其消化吸收比蛋白质态更佳。某些低肽不仅能提供人体生长、发育所需的营养物质,吸收效果明显优于普通的蛋白质,老年人新陈代谢速率较慢,对营养物质的吸收效率低,部分营养物质吸收效果差,导致身体机能不佳,小分子肽的吸收适用于老年人吸收。
发明内容
为解决预防骨质疏松疾病对老年人带来的危害,本发明拟提供一种增加骨密度的复合制剂,本发明是通过以下技术方案实现的:
一种增加骨密度的复合制剂,由以下配方组成:乳矿物盐、酶解海洋鱼小分子肽、酶解牛骨肽、非变性Ⅱ型胶原蛋白、初乳碱性蛋白、低聚果糖、野樱莓果粉、维生素D3、食用香精、酪蛋白磷酸肽、三氯蔗糖、硬脂酸镁。
所述增加骨密度的复合制剂,所述配方的组分按重量份数计:乳矿物盐5-10份、酶解海洋鱼小分子肽5-10份、酶解牛骨肽5-8份、非变性Ⅱ型胶原蛋白0.5-1份、初乳碱性蛋白0.1-0.3份、低聚果糖0.1-0.2份、野樱莓果粉1-3份、维生素D30.05-0.1份、食用香精0.01-0.02份、酪蛋白磷酸肽0.1-0.5份、三氯蔗糖0.2-0.5份、硬脂酸镁0.5-2份。
所述的增加骨密度的复合制剂,酶解海洋鱼小分子肽提取来自深海银鲳鱼。
所述的酶解海洋鱼小分子肽和酶解牛骨肽,由以下步骤制备得到:(1)预处理:按添加深海银鲳鱼肉、牛骨粉重量总量的500%向罐体注入纯化水,加占银鲳鱼肉、牛骨肽粉重量3%的盐酸、5%的磷酸搅拌均匀后,然后通入100摄氏度蒸汽蒸煮10分钟;
(2)超声辅助处理:向超声仪中加入上述搅拌均匀后的液体,控制超声功率为500W、超声时间为60min;
(3)蛋白质溶出:将超声后得到的液体转入超高压提取机中,排空容器,升压至350-400MPa,保持3-7min;加入牛骨肽固体重量10倍的纯化水,升温至60℃,调入食用氨水并调节pH8.5浸泡60分钟;吸附,过滤得滤液;
(4)向步骤(3)的蛋白质滤液中加入小分子专用酶,小分子专用酶与滤液的质量比为1:1000-2000,加入酶质量2%的稳定剂牛血清白蛋白,酶解pH为2-2.5,酶解温度为35-40摄氏度,酶解时间为6h,既得海洋鱼小分子肽和小分子牛骨肽。
所述的小分子专用酶的制备方式为:
(1)酶的制备:
A:种子培养:用接种环在保存的甘油菌中取菌体一环,接种环在含有氨苄的LB固体培养基中划单菌落,置于含有50mL的LB液体培养基的锥形瓶中,在37℃、转速220转摇床中培养12~16小时,然后吸取10ml扩增好的单菌落,接入100mL的LB液体培养基的锥形瓶中,接6瓶,在37℃、转速220转摇床中培养6-8小时,最后将制备好的种子,转移至无菌的补料瓶中;
B:发酵培养:发酵罐进行空消、实消,当种子发酵罐温度降至37℃后,将制备好的种子泵进50L的种子发酵罐,发酵罐配料为优化后的培养基,待种子罐氧、PH上升时,将种子泵进50L的发酵罐中,当溶氧下降至20%以下,转速增加50转,最终至转速到300转后维持低溶氧状态,发酵罐溶氧、PH同时上升时开始补料,补料速率将溶氧控制在20%,每一个小时测OD600,当OD长到30%时,将发酵罐降温至31℃,加入诱导剂IPTG,诱导剂终浓度为0.1mM,诱导10个小时后,降温、放罐;
C:补料培养基制备:按照以下重量份:甘油1-3%,酵母浸粉9-11g/L,胰蛋白胨9-11g/L,MgSO45-7g/L配置2L的培养基。
制备方法为:采用湿法混合制粒,喷雾干燥既得。
本发明的有益效果为:
(1)采用的原料均来源于食品,无毒副作用,处方中含有的酶解海洋鱼小分子肽、酶解牛骨肽等主要原料富含小分子肽,在补充钙质和胶原蛋白同时,有利于钙的有效吸收,不致于钙质的流失而导致的骨骼疏松。
(2)本发明的用于酶解的小分子专用酶具有极强的分解效率,得到的小分子肽平均长度小于10个氨基酸,长度越短吸收效率效果越好。
具体实施方式
以下实施例用于进一步阐述本发明,但不应理解为对本发明权利要求书请求保护范围的限制。
实施例1
增加骨密度的复合制剂配方的组分按重量份数计:乳矿物盐7份、酶解海洋鱼小分子肽7份、酶解牛骨肽6份、非变性Ⅱ型胶原蛋白0.7份、初乳碱性蛋白0.2份、低聚果糖0.15份、野樱莓果粉2份、维生素D30.07份、食用香精0.01份、酪蛋白磷酸肽0.3份、三氯蔗糖0.4份、硬脂酸镁1.5份。
所述的增加骨密度的复合制剂,酶解海洋鱼小分子肽提取来自深海银鲳鱼酶解牛骨肽。
所述的酶解海洋鱼小分子肽和酶解牛骨肽,由以下步骤制备得到:(1)预处理:按添加深海银鲳鱼肉、牛骨肽重量总量的500%向罐体注入纯化水,加占银鲳鱼肉、牛骨肽重量3%的盐酸、5%的磷酸搅拌均匀后,然后通入100摄氏度蒸汽蒸煮10分钟;
(2)超声辅助处理:向超声仪中加入上述搅拌均匀后的液体,控制超声功率为500W、超声时间为60min;
(3)蛋白质溶出:将超声后得到的液体转入超高压提取机中,排空容器,升压至350MPa,保持5min;加入牛骨肽固体重量10倍的纯化水,升温至60℃,调入食用氨水并调节pH8.5浸泡60分钟;吸附,过滤得滤液;
(4)向步骤(3)的蛋白质滤液中加入小分子专用酶,小分子专用酶与滤液的质量比为1:1500,加入酶质量2%的稳定剂牛血清白蛋白,酶解pH为2,酶解温度为35摄氏度,酶解时间为6h,既得海洋鱼小分子肽和小分子牛骨肽。
所述的小分子专用酶的制备方式为:
(1)酶的制备:
A:种子培养:用接种环在保存的甘油菌中取菌体一环,接种环在含有氨苄的LB固体培养基中划单菌落,置于含有50mL的LB液体培养基的锥形瓶中,在37℃、转速220转摇床中培养14小时,然后吸取10ml扩增好的单菌落,接入100mL的LB液体培养基的锥形瓶中,接6瓶,在37℃、转速220转摇床中培养7小时,最后将制备好的种子,转移至无菌的补料瓶中;
B:发酵培养:发酵罐进行空消、实消,当种子发酵罐温度降至37℃后,将制备好的种子泵进50L的种子发酵罐,发酵罐配料为优化后的培养基,待种子罐氧、PH上升时,将种子泵进50L的发酵罐中,当溶氧下降至20%以下,转速增加50转,最终至转速到300转后维持低溶氧状态,发酵罐溶氧、PH同时上升时开始补料,补料速率将溶氧控制在20%,每一个小时测OD600,当OD长到30%时,将发酵罐降温至31℃,加入诱导剂IPTG,诱导剂终浓度为0.1mM,诱导10个小时后,降温、放罐;
C:补料培养基制备:按照以下重量份:甘油2%,酵母浸粉9g/L,胰蛋白胨9g/L,MgSO46g/L配置2L的培养基。
制备方法为:采用湿法混合制粒,喷雾干燥既得。
实施例2
增加骨密度的复合制剂,所述配方的组分按重量份数计:乳矿物盐5份、酶解海洋鱼小分子肽5份、酶解牛骨肽5份、非变性Ⅱ型胶原蛋白0.5份、初乳碱性蛋白0.1份、低聚果糖0.1份、野樱莓果粉1份、维生素D30.05份、食用香精0.01份、酪蛋白磷酸肽0.1份、三氯蔗糖0.2份、硬脂酸镁0.5份。
其余步骤同实施例1。
实施例3
增加骨密度的复合制剂,所述配方的组分按重量份数计:乳矿物盐10份、酶解海洋鱼小分子肽10份、酶解牛骨肽8份、非变性Ⅱ型胶原蛋白1份、初乳碱性蛋白0.3份、低聚果糖0.2份、野樱莓果粉3份、维生素D30.1份、食用香精0.02份、酪蛋白磷酸肽0.5份、三氯蔗糖0.5份、硬脂酸镁2份。
其余步骤同实施例1。
对比例1
本实施例将酶解海洋鱼小分子肽和替换为深海银鲳鱼粉、大豆蛋白粉未经过酶解步骤。
配方为:增加骨密度的复合制剂配方的组分按重量份数计:深海银鲳鱼粉8份、大豆蛋白粉7份、乳矿物盐7份、酶解牛骨肽6份、非变性Ⅱ型胶原蛋白0.7份、初乳碱性蛋白0.2份、低聚果糖0.15份、野樱莓果粉2份、维生素D30.07份、食用香精0.01份、酪蛋白磷酸肽0.3份、三氯蔗糖0.4份、硬脂酸镁1.5份。
制备方法为:采用湿法混合,喷雾干燥制粒既得。
采用日本岛津的PPSQ-21A型蛋白分析仪测量实施例1-3酶解后的海洋鱼小分子肽与酶解后的小分子牛骨肽结果见下表
表1
将50只老年小鼠(80-85周)分为五组,每组10只,1-3组每日喂食实施例1-3的制剂产品,每天0.05g;对比例1的小鼠也喂食0.05g/天,其他条件饮食均相同。
检测方法:
10天用戊巴比妥钠麻醉,途径ip,剂量60mg·kg-1,小鼠麻醉后固定于特制的检测台上,以右后肢为被测对象,pQcT(peripheral quantitative computed tomography),XCTResearchSA(德国Stratec公司生产),检测时先纵向扫描,显示右后肢胫骨近端的形态,以骨骺线为参照线向下1.4mm和4.0mm处作断层测定。计算指标为骨密度(mg/cm3)和面积(mm2)。统计学处理:每组结果以平均值±标准差(±s)表示,用t检验进行两组间比较。结果见下表
表1
Claims (6)
1.一种增加骨密度的复合制剂,其特征在于,由以下配方组成:乳矿物盐、酶解海洋鱼小分子肽、酶解牛骨肽、非变性Ⅱ型胶原蛋白、初乳碱性蛋白、低聚果糖、野樱莓果粉、维生素D3、食用香精、酪蛋白磷酸肽、三氯蔗糖、硬脂酸镁。
2.根据权利要求1所述增加骨密度的复合制剂,其特征在于,所述配方的组分按重量份数计:乳矿物盐5-10份、酶解海洋鱼小分子肽5-10份、酶解牛骨肽5-8份、非变性Ⅱ型胶原蛋白0.5-1份、初乳碱性蛋白0.1-0.3份、低聚果糖0.1-0.2份、野樱莓果粉1-3份、维生素D30.05-0.1份、食用香精0.01-0.02份、酪蛋白磷酸肽0.1-0.5份、三氯蔗糖0.2-0.5份、硬脂酸镁0.5-2份。
3.根据权利要求1所述的增加骨密度的复合制剂,其特征在于:酶解海洋鱼小分子肽提取来自深海银鲳鱼。
4.根据权利要求1所述的酶解海洋鱼小分子肽和酶解牛骨肽,其特征在于,由以下步骤制备得到:
(1)预处理:按添加深海银鲳鱼肉、牛骨肽重量总量的500%向罐体注入纯化水,加占银鲳鱼肉、牛骨肽重量3%的盐酸、5%的磷酸搅拌均匀后,然后通入100摄氏度蒸汽蒸煮10分钟;
(2)超声辅助处理:向超声仪中加入上述搅拌均匀后的液体,控制超声功率为500W、超声时间为60min;
(3)蛋白质溶出:将超声后得到的液体转入超高压提取机中,排空容器,升压至350-400MPa,保持3-7min;加入牛骨肽固体重量10倍的纯化水,升温至60℃,调入食用氨水并调节pH8.5浸泡60分钟;吸附,过滤得滤液;
(4)向步骤(3)的蛋白质滤液中加入小分子专用酶,小分子专用酶与滤液的质量比为1:1000-2000,加入酶质量2%的稳定剂牛血清白蛋白,酶解pH为2-2.5,酶解温度为35-40摄氏度,酶解时间为6h,既得海洋鱼小分子肽和小分子牛骨肽。
5.根据权利要求4所述的有制备方法,其特征在于:所述的小分子专用酶的制备方式为:
(1)酶的制备:
A:种子培养:用接种环在保存的甘油菌中取菌体一环,接种环在含有氨苄的LB固体培养基中划单菌落,置于含有50m L的LB液体培养基的锥形瓶中,在37℃、转速220转摇床中培养12~16小时,然后吸取10ml扩增好的单菌落,接入100m L的LB液体培养基的锥形瓶中,接6瓶,在37℃、转速220转摇床中培养6-8小时,最后将制备好的种子,转移至无菌的补料瓶中;
B:发酵培养:发酵罐进行空消、实消,当种子发酵罐温度降至37℃后,将制备好的种子泵进50L的种子发酵罐,发酵罐配料为优化后的培养基,待种子罐氧、PH上升时,将种子泵进50L的发酵罐中,当溶氧下降至20%以下,转速增加50转,最终至转速到300转后维持低溶氧状态,发酵罐溶氧、PH同时上升时开始补料,补料速率将溶氧控制在20%,每一个小时测OD600,当OD长到30%时,将发酵罐降温至31℃,加入诱导剂IPTG,诱导剂终浓度为0.1m M,诱导10个小时后,降温、放罐;
C:补料培养基制备:按照以下重量份:甘油1-3%,酵母浸粉9-11g/L,胰蛋白胨9-11g/L,MgSO45-7g/L配置2L的培养基。
6.根据权利要求1所述的增加骨密度的复合制剂,制备方法为:采用湿法混合制粒,喷雾干燥既得。
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