CN112789497A - 分析方法、分析基板、分析套件和分析设备 - Google Patents

分析方法、分析基板、分析套件和分析设备 Download PDF

Info

Publication number
CN112789497A
CN112789497A CN202080004773.0A CN202080004773A CN112789497A CN 112789497 A CN112789497 A CN 112789497A CN 202080004773 A CN202080004773 A CN 202080004773A CN 112789497 A CN112789497 A CN 112789497A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lipid
particles
lipid particles
fluorescence
analysis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080004773.0A
Other languages
English (en)
Inventor
小林奈央
石原美津子
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Toshiba Corp
Original Assignee
Toshiba Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Toshiba Corp filed Critical Toshiba Corp
Publication of CN112789497A publication Critical patent/CN112789497A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/47—Scattering, i.e. diffuse reflection
    • G01N21/49—Scattering, i.e. diffuse reflection within a body or fluid
    • G01N21/51—Scattering, i.e. diffuse reflection within a body or fluid inside a container, e.g. in an ampoule
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/502761—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip specially adapted for handling suspended solids or molecules independently from the bulk fluid flow, e.g. for trapping or sorting beads, for physically stretching molecules
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/47—Scattering, i.e. diffuse reflection
    • G01N21/49—Scattering, i.e. diffuse reflection within a body or fluid
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/47—Scattering, i.e. diffuse reflection
    • G01N21/49—Scattering, i.e. diffuse reflection within a body or fluid
    • G01N21/53—Scattering, i.e. diffuse reflection within a body or fluid within a flowing fluid, e.g. smoke
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/06—Fluid handling related problems
    • B01L2200/0647—Handling flowable solids, e.g. microscopic beads, cells, particles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6439—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" with indicators, stains, dyes, tags, labels, marks

Abstract

根据一个实施例，提供一种分析方法，用于确定脂质颗粒群中的包含目标物质的第一脂质颗粒的丰度比。分析方法包括：照射步骤，利用光来照射包含脂质颗粒群的溶液；测量步骤，通过检测散射光，测量溶液中的多个脂质颗粒的总数、第一脂质颗粒的数量和不包含目标物质的第二脂质颗粒的数量中的至少两个数；以及计算步骤，计算第一脂质颗粒的丰度比。

Description

分析方法、分析基板、分析套件和分析设备
相关申请的交叉引用
本申请基于并要求2019年09月10日提交的日本专利申请No.2019-164882的优先权，其全部内容通过援引而加入于此。
领域领域
本文描述的实施例总体上涉及分析方法、分析基板、分析套件和分析设备。
背景技术
在疾病治疗或化妆品领域中，作为用于将目标物质(例如药物、核酸和美容成分)递送至细胞的方法，有一种用于制备在脂质膜中包含目标物质的脂质颗粒并使脂质颗粒与细胞接触的方法。
例如，通过在溶液中混合用作脂质膜材料的脂质和目标物质来制造脂质颗粒。从目标物质的填充率评估制造的颗粒群的质量。通过测量残留在溶液中但不包含在脂质颗粒中的目标物质的量并将其代入下式来获得填充率：填充率＝((目标物质输入的总量)－(残留在溶液中的目标物质的量))/(目标物质输入的总量)。
填充率越高，质量就越高。原因是较高的填充率表示脂质颗粒中包含更多的目标物质。此外，建议执行质量控制以使填充率均匀。
附图说明
图1示出了表示根据一个实施例的脂质颗粒群的示例的示意图。
图2示出了根据第一实施例的分析方法的示例的流程图。
图3示出了表示根据第一实施例的分析方法的示例的示意图。
图4示出了表示根据第一实施例的分析设备的示例的框图。
图5示出了表示根据第一实施例的分析基板的示例的俯视图。
图6示出了表示根据第一实施例的分析基板用检测器的俯视图。
图7示出了根据第一实施例的分析方法的另一示例的流程图。
图8示出了表示根据第一实施例的分析设备的另一示例的框图。
图9示出了根据第二实施例的分析方法的示例的流程图。
图10示出了显示第二实施例中的散射光强度与脂质颗粒的数量之间的关系的示例的图表。
图11示出了显示示例1的实验结果的图表。
图12示出了显示示例2的实验结果的图表。
具体实施方式
总体上，根据一个实施例，提供一种分析方法，该分析方法用于确定脂质颗粒群中的包含目标物质的第一脂质颗粒的丰度比，该脂质颗粒群包含多个脂质颗粒。所述分析方法包括：照射步骤，利用光来照射包含所述脂质颗粒群的溶液；测量步骤，通过检测从所述脂质颗粒群中的所述多个脂质颗粒获得的散射光，测量所述溶液中的所述多个脂质颗粒的总数、所述第一脂质颗粒的数量和第二脂质颗粒的数量中的至少两个数，所述第二脂质颗粒不包含所述目标物质；以及计算步骤，基于从所述测量步骤获得的结果，通过以下算式(I)来计算所述第一脂质颗粒的丰度比，算式(I)：第一脂质颗粒的丰度比＝第一脂质颗粒的数量/脂质颗粒群中的多个脂质颗粒的总数。
在下文中将参考附图描述各种实施例。每个图都是促进对实施例更好理解的示意图。每个图中的形状、尺寸、比率等与实际的不同，并且参照以下描述和已知技术适当地设计。
第一实施例
(分析方法)
第一实施例的分析方法是确定含有目标物质的脂质颗粒在包含脂质颗粒群的溶液中的丰度比。
如图1所示，脂质颗粒群1包括多个脂质颗粒4。脂质颗粒4可以包括在脂质膜3中包含目标物质2的脂质颗粒4a(以下也称为“包封颗粒”或“第一脂质颗粒”)和/或在脂质膜3中不包含目标物质2的脂质颗粒4b(以下也称为“非包封颗粒”或“第二脂质颗粒”)。本文所用的术语“颗粒”和“多个颗粒”可以包括颗粒(单个)和颗粒(多个、多个颗粒)。
脂质膜3是由多个非共价键合的脂质分子形成的脂质膜的大致球形中空体。
目标物质2的示例包括但不限于核酸、蛋白质、肽、糖蛋白、低分子化合物、抗体或抗原结合片段。目标物质2还例如可以是药物(例如治疗药物或诊断药物)、化妆品成分或要递送到细胞中的基因。
脂质颗粒群1中所包括的多个脂质颗粒4中的每一个都期望地具有例如小于1μm的粒径。脂质颗粒的粒径例如通过动态光散射(DLS)或电感应区来测量。
可以通过在液体中混合脂质膜3的材料和目标物质2(以及根据需要包含在脂质膜3中的其他物质)来获得包括脂质颗粒群1的溶液。或者，可以如下获得溶液：从上述液体混合物中分离脂质颗粒群1；并且将分离出的脂质颗粒群1添加到另一溶剂中。
溶液例如可以是用于将目标物质2递送到细胞、药品或化妆品中的含有脂质颗粒的试剂。或者，溶液可以是粗产物，是在生产上述试剂、药品或化妆品的过程中从生产批次中部分地提取的样品。
根据实施例的分析方法例如包括如图2所示的以下步骤：
(S1)混合步骤，将包含脂质颗粒群1的溶液与第一物质混合，该第一物质具有脂质膜渗透性，与目标物质2结合并含有产生荧光的染料；
(S2)照射步骤，利用从染料产生荧光的激发光来照射所得的混合物；
(S3)第一测量步骤，通过检测散射光来测量引起散射光的脂质颗粒4的数量，即多个脂质颗粒的总数；
(S4)第二测量步骤，通过检测荧光来测量引起荧光的脂质颗粒4的数量，即包含目标物质2的脂质颗粒(包封颗粒4a)的数量；以及(S5)计算步骤，通过算式(I)：(包封颗粒4a的丰度比＝包封颗粒4a的数量/脂质颗粒群中的多个脂质颗粒的总数)，基于从测量步骤获得的结果，计算含有目标物质的脂质颗粒的丰度比。
在下文中，将参考图3详细描述每个步骤。
在混合步骤(S1)中与包括脂质颗粒群1的溶液混合的第一物质5例如包括染料以及与目标物质2结合的结合位点。第一物质5可以是两种物质例如染料以及包含结合位点的物质的组合。或者，第一物质5可以是包括结合位点以及染料的单一物质。第一物质5整体上具有脂质膜渗透性。
染料是在未与目标物质2结合时不产生荧光且在与目标物质2结合时产生荧光的物质。或者，如将详细描述的那样，染料可以是根据染料是否与目标物质2结合而产生具有不同波长的荧光的物质。
由于第一物质5具有脂质膜渗透性，因此第一物质5渗透并穿过每个包封颗粒4a和非包封颗粒4b的脂质膜3。在每个包封颗粒4a中，第一物质5和目标物质2结合，这使得染料产生荧光。
接下来，在照射步骤(S2)中，利用激发染料的激发光照射混合物以产生荧光。在照射步骤(S2)中照射的光是激发光，其从脂质颗粒4产生散射光并激发染料产生荧光。
通过光照射，光可以落在脂质颗粒群1中的脂质颗粒4上并且可以被散射。
因此，通过检测从脂质颗粒4获得的散射光并通过对在照射步骤(S2)期间引起散射光6a的多个脂质颗粒4的数量进行计数，获得脂质颗粒的总数(第一测量步骤(S3))。
另外，光照射激发第一物质5中的染料。结果，从包封颗粒4a获得荧光6b，而不是从非包封颗粒4b获得荧光。
因此，通过检测荧光6b并通过测量在照射步骤(S2)期间引起荧光6b的包封脂质颗粒4a的数量，获得包封颗粒4a的数量(第二测量步骤(S4))。接下来，在计算步骤(S5)中，使用多个脂质颗粒4的总数和包封颗粒4a的数量来计算包封颗粒4a的丰度比，例如通过以下算式(I)来计算。
包封颗粒的丰度比＝包封颗粒4a的数量/脂质颗粒群中多个脂质颗粒的总数...(I)
以这种方式，确定包封颗粒4a的丰度比。包封颗粒4a的丰度比是用于评估脂质颗粒群1的质量的新指标。
在现有技术中，填充率用作评估脂质颗粒的质量的指标。通过测量残留在溶液中而不包含在脂质颗粒中的残留目标物质的量来获得填充率。例如，在目标物质2是核酸的情况下，根据溶液的浊度来估计残留核酸的量。换句话说，该方法是通过估计脂质颗粒中所包含的目标物质的总量来评估脂质颗粒群的质量。
另一方面，实施例的分析方法能够直接测量脂质颗粒的总数和包封颗粒4a的数量。本申请发明人发现，根据实施例的包封颗粒4a的丰度比与目标物质2向细胞的递送效率具有高的相关性。反之，根据现有技术的填充率与目标物质2的递送效率之间的相关性低。该发现表明，相比脂质颗粒中所包含的目标物质2的量，包含有目标物质2的颗粒的丰度比对目标物质2的递送效率具有更大的影响。因此，根据实施例的包封颗粒4a的丰度比可以是能够更准确地评估脂质颗粒群1的质量的新指标。
由于上述原因，在生产脂质颗粒群1的过程中，当现有技术中试图基于填充率使质量均匀时，包封颗粒4a的丰度比并非始终恒定，这可能改变对细胞的递送效率。另一方面，当通过根据本实施例的方法基于包封颗粒4a的丰度比来控制质量时，可以生产出向细胞的导入效率更稳定的脂质颗粒群1。
另外，取决于溶液的组分，像现有技术那样对溶液中残留的目标物质的量的测量并非始终准确。然而，根据本实施例的方法，可以直接计数包封颗粒4a的数量，这使得可以获得比现有技术中的方法更准确的信息。
基于以上事实，本实施例的分析方法提供了新指标(包封颗粒4a的丰度比)用以更准确地评估脂质颗粒群1的质量，并提供了一种简单的指标确定方法。
在下文中描述了在该实施例的方法中使用的每种材料和步骤的细节。
用作脂质膜3的材料的脂质分子例如是生物膜的主要成分。脂质分子是磷脂阳离子脂质、胆固醇或鞘脂，例如二酰基磷脂酰胆碱、二酰基磷脂酰乙醇胺、神经酰胺、鞘磷脂、二氢鞘磷脂、脑啡肽、脑苷脂等或其组合。
脂质膜3可以进一步包括其他成分。其他成分的示例包括调节脂质膜3的酸解离常数的成分、控制脂质膜3的粒径的成分、增加所含目标物质2的量的成分、促进脂质膜3与细胞之间的融合的成分、和/或有助于将目标物质2递送到细胞内的成分。
脂质膜3可以是脂质单分子膜或脂质双层膜。此外，脂质颗粒可以是单层膜或多层膜。脂质膜3可以是被称为脂质体、囊泡或胶囊的包括脂质的颗粒。
目标物质2可以包括一种物质或多种物质。
脂质颗粒4可以包含除目标物质2以外的物质，例如使脂质膜3更易于包含目标物质2的药物、增加所包含的目标物质2的量的药物、和/或促进目标物质2进入细胞的药物。
根据目标物质2的类型选择第一物质5的类型。第一物质5不受限制，并且可以是具有与目标物质2结合的结合位点、包括通过结合而产生荧光的染料且具有脂质膜渗透性的任何物质。
作为第一物质5，可以使用具有或被评估为具有上述性质的物质。或者，可以使用这些物质的组合。或者，当不知道第一物质5的候选物质是否具有相对目标物质2的结合性质或具有脂质膜渗透性时，可以通过研究候选物质的性质或渗透性来确定第一物质5。
例如通过电泳、柱色谱、斑点印迹、表面等离振子共振测量或圆二色性光谱测量，研究相对目标物质2的结合性质。
例如通过将作为脂质膜3的材料的脂质应用于人工膜以评估渗透性的平行人工膜渗透性试验，或通过使用活体细胞用以评估向细胞的渗透性的方法，研究脂质膜渗透性。在平行人工膜渗透性试验中，容器中的空间被多孔片材(例如涂有脂质的膜过滤器)隔开。所述空间的一侧填充有包括候选物质的溶液，所述空间的另一侧填充有不包括候选分子的溶液。研究候选物质是否从空间的一侧转移到另一侧，以研究脂质膜渗透性。这里使用的脂质膜优选具有尽可能少的孔，并且脂质优选与脂质膜3中使用的脂质相同。在使用活细胞的方法中，动物细胞例如人类结肠癌来源的细胞系Coco-2与候选物质接触，并用显微镜监控。当在细胞膜中观察到荧光时，确定候选物质具有脂质膜渗透性。
第一物质5的结合位点的类型不受限制。第一物质5可以是具有通过氢键、离子键、范德华力或疏水键中的任一种而与目标物质2结合的结合位点的物质。
例如，当目标物质2是核酸时，第一物质5是核酸结合染色剂。核酸结合染色剂的示例包括(染料名称)PicoGreen、SYBR Green、EvaGreen和AccuBlue。或者，可以将具有与核酸目标物质2杂交的序列的核酸用作第一物质5的结合位点。例如，对该核酸进行调整以使其具有脂质膜渗透性。
当目标物质2是抗原时，第一物质5的结合位点可以是用荧光染料标记的抗原结合蛋白。抗原结合蛋白例如可以是抗体或其片段。抗原结合蛋白被调整和/或具有被调节为具有脂质膜渗透性的大小。
当目标物质2是酶底物时，第一物质5的结合位点可以是具有相应酶的片段或相对该酶的结合位点。
第一物质5的结合位点可以是对应于目标物质2的受体或其具有相对目标物质2的结合位点的片段。
或者，可以颠倒目标物质2和第一物质5的结合位点的上述组合。例如，目标物质2可以是抗原结合蛋白，并且第一物质的结合位点可以是抗原。也可以使用其他组合。
染料的类型不受限制。可以使用具有在标准荧光传感器检测到的范围内的波长的任何染料。
作为染料，还可以使用根据目标物质2和第一物质5是否结合而产生具有不同波长的荧光的物质。例如，可以使用当与目标物质2结合时引起荧光共振能量转移(FRET)并改变荧光波长的染料。在使用具有可变荧光波长的染料的情况下，优选在照射步骤(S2)中使用激发光照射，该激发光照射在通过结合而使波长变化之后激发荧光。因此，在第一测量步骤(S3)中从多个脂质颗粒4获得散射光，并且在第二测量步骤(S4)中从包封颗粒4a获得荧光。
例如可以通过利用在照射步骤(S2)期间检测散射光的检测器(例如照相机和显微镜)捕捉在混合步骤(S1)中获得的混合物的图像，并且通过计数获得散射光的点，来执行第一测量步骤(S3)。或者，可以通过使脂质颗粒群1流过流槽来估算脂质颗粒的数量。该方法包括：利用激发光来照射流槽的特定区域(照射步骤(S2))；通过光学传感器来检测该区域中随时间推移的散射光；以及，按照检测到散射光的次数，对通过流槽的颗粒数进行计数。
除了测量荧光而不是散射光之外，以与第一测量步骤(S3)相似的方式执行第二测量步骤(S4)。在该步骤中使用的检测器可以包括用于检测期望的荧光波长的滤光器。
在第一测量步骤(S3)和第二测量步骤(S4)中，并非始终需要测量整个溶液中脂质颗粒的数量。可以针对部分溶液测量多个脂质颗粒4的总数和包封颗粒4a的数量。使用该值作为代表值，可以计算出丰度比，并且所得的值可以用作整个溶液的丰度比。例如，也可以使用通过捕捉溶液的一部分而获得的图像。另外，例如可以通过基于这些数量的值来计算溶液每单位体积中的多个脂质颗粒4的总数和包封颗粒4a的数量，从而确定丰度比。或者，可以多次测量部分溶液的丰度比，并且可以将平均值用作溶液的丰度比。
照射步骤(S2)、第一测量步骤(S3)和第二测量步骤(S4)可以使用例如能够同时测量散射光和荧光的设备来一起执行。这种设备的示例包括使用纳米颗粒跟踪分析(NTA)的设备。
(分析设备/分析基板)
实施例的分析方法可以由分析设备执行。
如图4所示，分析设备10例如包括分析基板100、存储器20、处理器30、液体供给单元40和显示器50。
首先，将参照图5描述分析基板100。如图5所示，分析基板100包括：基底板101；流槽102，其布置在基底板101上并且具有被分成两个分支的上游侧端部；以及检测器103，其被布置在流槽102的下游侧。根据功能将分析基板100分为三个部分。换句话说，分析基板100具备：混合单元104，其包括流槽102的上游侧端部；检测单元106，其包括流槽102的下游侧端部并包括检测器103；以及分离单元105，其设置在混合单元104与检测单元106之间。
混合单元104包括样品注入口107和试剂注入口108。在其端部具有样品注入口107的流槽102a和在其端部具有试剂注入口108的流槽102b接合在一起并连接到流槽102。
样品注入口107是用于将包含脂质颗粒群1的溶液注入到流槽102中的开口。试剂注入口108是用于将包含第一物质5的溶液注入到流槽102中的开口。
流槽102通向分离单元105。在分离单元105中，流槽102填充有分离剂(未示出)。分离剂是根据粒径来改变经过流槽102的脂质颗粒4的移动速度的材料。分离剂的示例包括纳米柱、凝胶、纳米筛和多孔剂。流槽102进一步通向检测单元106。
检测单元106包括布置在流槽102的第一测量区域R处的检测器103。如图6所示，检测器103包括光源109、散射光检测器111和荧光检测器112。光源109被配置成利用激发光110来照射至少流槽102的第一测量区域R中的脂质颗粒群1。散射光检测器111和荧光检测器112在第一测量区域R中配置在流槽102的侧面。
散射光检测器111包括诸如CMOS图像传感器的散射光传感器(未示出)，该散射光传感器能够检测来自流槽102中的脂质颗粒群1的散射光。
荧光检测器112包括诸如CMOS图像传感器的荧光传感器(未示出)，该荧光传感器能够检测来自流槽102中的脂质颗粒群1的荧光。例如，荧光传感器在靠近流槽102的一侧包括滤光器113。
散射光检测器111和荧光检测器112横过图6中的流槽102地彼此面对，但不限于这种设置。散射光检测器111和荧光检测器112可以布置在任何位置，只要能从流槽102中的脂质颗粒群1检测到每种光即可。例如，两个检测器都可以布置在流槽102的一侧表面上，检测器中的一个可以靠近上游侧布置，而另一个靠近下游侧布置。
如图5所示，流槽102的下游侧端部具有出口114。
分析基板100不必包括分离单元105。但是，分离单元105可以使得能获得与脂质颗粒4的粒径相关的准确信息。
分析基板100例如可拆卸地附接到分析设备10上。
接下来，将参考图4描述分析设备10的其他单元。
存储器20电连接至分析基板100，并且例如包括：从散射光检测器111获得的散射光测量数据21(例如通过捕捉从脂质颗粒群1获得的散射光而得的图像或视频、散射光强度和/或获得散射光的次数)；从荧光检测器112获得的荧光测量数据22(例如通过捕捉从脂质颗粒群1获得的荧光而得的图像或视频、荧光强度和/或获得荧光的次数)；数量运算表达式23，用于基于散射光测量数据21测量颗粒的总数，并基于荧光测量数据22测量包封颗粒4a的总数；颗粒总数数据24；包封颗粒数量数据25；丰度比运算表达式26，用于基于每个数量数据计算包封颗粒4a的丰度比；包封颗粒4a的丰度比27；和/或用于控制每个单元的程序P。
处理器30电连接至存储器20，并且例如包括数量运算单元31和丰度比运算单元32。例如，使用数量运算表达式23，数量运算单元31根据散射光测量数据21测量颗粒的总数，并根据荧光测量数据22测量包封颗粒4a的数量。使用丰度比运算表达式26，丰度比运算单元32例如根据颗粒总数数据24和包封颗粒数数据25计算包封颗粒4a的丰度比。
显示器50电连接至处理器30和存储器20，并且例如可以包括显示器或打印机。
分析设备10还可包括输入单元(未示出)，该输入单元使得操作员能够开始或停止分析设备10的每个操作。输入单元例如包括电连接至处理器30及存储器20的按钮和键盘，处理器30可以基于输入信号向每个单元发送指令。显示器50还可包括触摸屏输入单元。
存储器20、处理器30、显示器50和输入单元可以被配置为计算机。
液体供给单元40例如包括样本容器、试剂容器、管和泵(未示出)。例如，样本容器经由管连接至样本注入口107，并储藏包括脂质颗粒群1的溶液。试剂容器经由另一管与试剂注入口108连接，并储藏包括第一物质5的溶液。泵设置在管中的任何位置，并配置成将溶液从容器递送到相应的注入口。
以下，说明使用分析设备10的分析方法。
首先，将包含待分析的脂质颗粒群1的溶液储藏在样品容器中。另外，将包含第一物质5的溶液储藏在试剂容器中。分析基板100附接至分析设备10。驱动液体供给单元40的泵，使得包含脂质颗粒群1的溶液和包含第一物质5的溶液分别从样品容器和试剂容器向流槽102递送直至到达样品注入口107和试剂注入口108。因此，将包含脂质颗粒群1的溶液和包含第一物质5的溶液混合。
或者，可以预先将包含脂质颗粒群1的溶液与第一物质5混合，并且可以从样品注入口107和/或试剂注入口108注入所得的混合物。在这种情况下，流槽102不必在上游侧分支，可以使用具有一个注入口的分析基板。
接下来，为了将混合物经由分离单元105供给到检测单元106，通过液体供给单元40将另一溶液注入到流槽102中，或者将该溶液从出口114中抽出。已经通过分离单元105的脂质颗粒4以粒径的升序(或降序)流向检测单元106。
接下来，在检测单元106的检测器103中，从光源109照射激发光，并且散射光检测器111测量来自流槽102中的脂质颗粒群1的散射光，从而获得散射光测量数据21。此外，荧光检测器112测量荧光以获得荧光测量数据22。
例如，分析基板100包括连接至散射光检测器111和荧光检测器112中的每一个上的焊盘(未示出)。从每个焊盘获取散射光测量数据21和荧光测量数据22，并且这些条数据被存储在存储器20中。
接下来，处理器30的数量运算单元31从存储器20获取散射光测量数据21和数量运算表达式23，并且基于数量运算表达式23来计算脂质颗粒的总数。颗粒总数数据24被存储在存储器20中。进而，从存储器20获取荧光测量数据22和数量运算表达式23，并且基于数量运算表达式23来计算包封颗粒4a的数量。包封颗粒数量数据25被存储在存储器20中。
接下来，在处理器30的丰度比运算单元32中，从存储器20获取颗粒总数数据24、包封颗粒数量数据25和丰度比运算表达式26，以计算包封颗粒4a的丰度比27。丰度比27被存储在存储器20中，并且丰度比27显示在显示器50上。
每个步骤都可以由程序P自动执行，或者可以由操作员使用设备的输入单元来手动执行。
在完成分析方法之后，可以将分析基板100从分析设备10移除并丢弃。当再次执行分析方法时，可以使用新的分析基板100。
分析设备不必包括分析基板100，并且可以配备有样品容器(例如流槽)、光源、散射光传感器和/或荧光传感器。
(分析套件)
根据第一实施例，提供了一种分析套件，其包括分析基板100和第一物质5。第一物质5例如以液态被提供，并且被包括在期望的溶剂中。根据第一物质5的类型选择溶剂。溶剂的示例包括生理盐水或缓冲溶液。或者，第一物质5可以处于粉末状态。
(用于评估脂质颗粒群的质量的分析方法)
在另一个实施例中，分析方法可以是用于评估脂质颗粒群的质量的方法。根据指标即由算式(I)获得的包封颗粒4a的丰度比，评估脂质颗粒群的质量。
如图7所示，这种分析方法例如包括上述步骤(S1至S5)和评估步骤(S6)。在评估步骤(S6)中，基于作为根据计算步骤(S5)的结果获得的指标的丰度比，评估脂质颗粒群的质量。例如，在评估步骤(S6)中，预先确定丰度比的阈值。当丰度比超过阈值时，脂质颗粒群1的质量被评估为好。当丰度比等于或小于阈值时，脂质颗粒群1的质量被评估为差。阈值不受限制，并且可以根据脂质颗粒群1的用途来确定。
分析设备可以被配置成进一步执行如图7所示的针对脂质颗粒群1的评估步骤。例如，如图8所示，分析设备11设有：存储器20，其还包括丰度比阈值28；以及处理器30，其还包括评估单元33。评估单元33将丰度比27与丰度比阈值28进行比较。当丰度比27高于丰度比阈值28时，评估单元33在显示器50上显示脂质颗粒群1的质量好。当丰度比27低于丰度比阈值28时，评估单元33可以在显示器50上显示脂质颗粒群1的质量差。
在另一个实施例中，分析设备10或分析设备11例如可以附接到产生脂质颗粒群1的装置上。在这种情况下，分析设备10的液体供给单元40可以包括采样系统，该采样系统从生产批次中采样包含脂质颗粒群1的溶液的一部分，并将该溶液注入分析基板100的样品注入口107中。另外，处理器30可以包括基于由分析设备10或分析设备11获得的丰度比或质量评估结果来变更生产参数的变更单元，并且变更单元可以向生产装置发送指令以变更参数。或者，关于基于丰度比或质量评估结果被评估为好的脂质颗粒群1，处理器30可以指示生产装置将脂质颗粒群1作为最终产品递送至用于运输准备的生产线。
上述的分析方法和分析设备可以提供具有更高质量的脂质颗粒群。另外，在即将使用脂质颗粒群之前，通过本实施例的分析方法或利用本实施例的分析设备对脂质颗粒群进行评估，能够根据结果预测细胞导入效率。因此，可以选择并使用更高质量的脂质颗粒群1。
第二实施例
(分析方法)
在根据第二实施例的分析方法中，通过测量散射光而不测量荧光，确定包封颗粒4a的丰度比。如图9所示，分析方法包括以下步骤：
(S11)照射步骤，用光照射包含脂质颗粒群的溶液；
(S12)测量步骤，通过检测从包含在脂质颗粒群中的每个颗粒获得的散射光，测量溶液中的多个脂质颗粒的总数、包封颗粒4a的数量以及未包封颗粒4b的数量中的至少两个；以及
(S13)计算步骤，基于测量步骤的结果，通过算式(I)(包封颗粒4a的丰度比＝包封颗粒4a的数量/脂质颗粒群中多个脂质颗粒的总数))，计算包封颗粒的丰度比。
在下文中，将详细描述每个步骤。
照射步骤(S11)中照射的光没有限制，只要能从脂质颗粒群1中所包含的每个颗粒获得散射光即可。
在测量步骤(S12)中，例如检测从每个脂质颗粒4获得的散射光强度。散射光强度可以随着脂质颗粒4的密度的增加而增加。由于包封颗粒4a具有比未包封颗粒4b更高的密度，因此包封颗粒4a可以具有更高的散射光强度。
例如，当相对于散射光强度绘制脂质颗粒4的数量时，如图10所示，可以获得两个峰值。散射光强度可能大的峰值P1对应于包封颗粒4a。因此，将峰值P1处的颗粒数设定为包封颗粒4a的数量。散射光强度可能小的峰值P2对应于未包封颗粒4b。因此，将峰值P2处的颗粒数设定为未包封颗粒4b的数量。
例如，当使用具有已知的包封颗粒4a的丰度比的参考脂质颗粒群来确定散射光强度的阈值时，测量高于阈值的范围内的颗粒数而将其作为峰值P1处的颗粒数。另一方面，对低于阈值的范围内的颗粒进行计数而将其作为峰值P2处的未包封颗粒4b。
不管散射光强度如何，引起散射光的脂质颗粒4的数量都代表脂质颗粒的总数。
根据如上所述获得的以下三个值(即，脂质颗粒的总数、包封颗粒4a的数量和非包封颗粒4b的数量)中的两个来计算包封颗粒4a的丰度比。因此，测量三个数中的至少两个即可。
测量步骤(S12)例如可以通过纳米颗粒跟踪分析(NTA)来执行。例如，利用NTA的分析可以通过诸如NanoSight(商品名，由Malvern Panalytical制造)的市售测量仪器来执行。
可以按照与第一实施例的计算步骤(S5)相似的方式来执行计算步骤(S13)。
根据该方法，在不检测荧光的情况下，确定包封颗粒4a的丰度比。
第二实施例的分析方法还可以包括类似于评估步骤(S6)的评估步骤。
根据另一实施例，可以在测量步骤(S12)中随时间推移地检测散射光，并且此外，可以测量散射光的布朗动量。散射光的布朗动量随着粒径的增加而增加。由于包封颗粒4a的粒径可以大于未包封颗粒4b的粒径，因此布朗动量等于或大于阈值的颗粒可以算作包封颗粒4a，而布朗动量等于或小于阈值的颗粒可以算作未包封颗粒4b。
根据另一个实施例，可以在照射步骤(S11)之前将包含脂质颗粒群1的溶液和第一物质5混合。之所以优选这种条件，是因为进一步增加了要检测的散射光强度，从而可以以更高的灵敏度检测散射光。
可以利用分析基板和分析设备来执行根据第二实施例的分析方法。分析方法中使用的分析基板可以不包括荧光检测器112，并且其他结构可以类似于根据第一实施例的分析基板中的结构。例如，数量运算单元31被配置成例如根据颗粒的散射光强度和布朗动量来测量包封颗粒4a的数量和未包封颗粒4b的数量。
[示例]
以下，说明使用了本实施例的分析方法的示例。
示例1.测量含DNA的脂质颗粒的数量
将DNA和脂质混合以获得包含脂质颗粒群的溶液。将具有脂质膜渗透性的核酸结合染色剂(PicoGreen)添加到溶液中。通过NTA装置(NanoSight，由Malvern Pnanalytical制造)用激光(波长488nm)照射颗粒。在照射期间，测量来自每个脂质颗粒的散射光和荧光以确定产生每种光的脂质颗粒的数量。制备了粒径和根据散射光或荧光强度以及颗粒的布朗运动的移动速度(扩散系数D)获得的数量的散布图(图11)。
主要是在散射光或荧光强度的轴上获得两个峰值(A和B)。由于荧光强度与颗粒密度相关，因此可以推断出峰值A和B分别代表包封DNA的颗粒和未包封DNA的颗粒。因此，清楚的是，使用具有脂质膜渗透性的核酸结合染色剂能够测量包封DNA的颗粒和未包封DNA的颗粒的数量。
示例2.将实施例的方法与填充率的测量进行比较
从两个批次(批次A和批次B)的每一批次收集三个样品，用以生成含有包含报告基因的DNA的脂质颗粒(样品被称为样品A1、A2、A3、B1、B2和B3)。使用样品A1至A3和B1至B3，研究了i)含核酸的脂质颗粒的丰度比、ii)填充率以及iii)DNA表达比。
关于i)，使用与实施例1相似的装置，由算式(I)计算包封DNA的颗粒的丰度比，将引起散射光的颗粒的数量作为脂质颗粒的总数，并将引起荧光的颗粒的数量作为包封DNA的颗粒的数量。
关于ii)，测量溶液中所保留而非脂质颗粒中所包含的残留核酸的量，并根据以下算式：填充率＝((输入的核酸量)－(残留的核酸量))/(输入的核酸量)，测量填充率。
关于iii)，使每个样品都与细胞(Jurkat细胞)接触以将DNA导入细胞，并测量来自报告基因的荧光值。
表1和图12示出结果。
表1
Figure BDA0002953351040000171
如表1所示，iii)DNA表达比的值在批次A中为2053.3，在批次B中为8678.7，表明批次B的值高于批次A。批次A和批次B中的ii)填充率的值分别为62.3和60.0。它们是基本上相等的值，并且与iii)的结果无关。另一方面，根据i)包封颗粒的丰度比的指标，批次A和批次B中的值分别为28.04和45.63。批次B的值高于批次A，并且与iii)DNA表达比的结果相关。
这些结果表明，ii)填充率(现有技术中的指标)不能准确地评估脂质颗粒的质量(DNA的导入效率)。另一方面，结果清楚地表明，在根据本实施例的方法中，能根据i)包封颗粒的丰度比的指标更准确地评估脂质颗粒的质量。
该事实表明，相比脂质颗粒中包含的核酸的量，脂质颗粒的质量(目标物质的导入效率)受到包封颗粒和非包封颗粒的比率的影响更大。
示例3.研究染料类型
以与实施例1类似的方式，确定出包含脂质颗粒的溶液中的包封颗粒的丰度比。
以与实施例1类似的方式，使用核酸结合染色剂(EvaGreen)代替核酸结合染色剂(PicoGreen)来确定出包封颗粒的丰度比。
表2示出结果。
表2
Figure BDA0002953351040000181
当使用EvaGreen时，与使用PicoGreen的情况相比，包封颗粒的丰度比降低。这是因为在该实验中使用的荧光测量装置中的滤光片不适用于检测EvaGreen的荧光波长。
因此，当使用能够以高灵敏度检测EvaGreen的荧光波长的装置时，丰度似乎等同于使用PicoGreen的情况下的结果。
尽管已经描述了某些实施例，但是这些实施例仅是通过示例的方式给出的，并不旨在限制本发明的范围。实际上，本文描述的新颖的实施例可以以各种其他形式来体现；此外，在不脱离本发明的构思的范围内，可以对本文所述实施例的形式进行各种省略、替换和变更。所附权利要求书及其等同内容旨在覆盖上述落入本发明的范围和构思内的形式或变形。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种分析方法，该分析方法用于确定脂质颗粒群中的包含目标物质的第一脂质颗粒的丰度比，该脂质颗粒群包含多个脂质颗粒，其中，
所述分析方法包括：
照射步骤，利用光来照射包含所述脂质颗粒群的溶液；
测量步骤，通过检测从所述脂质颗粒群中的所述多个脂质颗粒获得的散射光，测量所述溶液中的所述多个脂质颗粒的总数、所述第一脂质颗粒的数量和第二脂质颗粒的数量中的至少两个数，所述第二脂质颗粒不包含所述目标物质；以及
计算步骤，基于从所述测量步骤获得的结果，通过以下算式(I)来计算所述第一脂质颗粒的丰度比，
第一脂质颗粒的丰度比＝第一脂质颗粒的数量/脂质颗粒群中的多个脂质颗粒的总数...(I)。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其中，
在所述测量步骤中，使用所述散射光的强度和/或布朗动量作为指标，测量所述第一脂质颗粒的数量和所述第二脂质颗粒的数量。
3.(修改)根据权利要求1所述的分析方法，其中，
在所述测量步骤中，使用动态光散射(DLS)，测量所述第一脂质颗粒的数量和所述第二脂质颗粒的数量。
4.(修改)根据权利要求1至3中任一项所述的分析方法，其中，
所述分析方法进一步包括：
混合步骤，在所述照射步骤之前，将所述溶液与第一物质混合，该第一物质具有脂质膜渗透性，与所述目标物质结合，并且包括产生荧光或具有可变波长的荧光的染料。
5.(修改)根据权利要求4所述的分析方法，其中，
在所述照射步骤中照射的光是从所述染料产生荧光的激发光，并且
所述测量步骤包括：通过检测所述散射光来测量多个脂质颗粒的数量的第一测量步骤；以及通过检测产生荧光的荧光来测量所述第一脂质颗粒的数量的第二测量步骤，
所述荧光是通过所述激发光的照射而从所述染料产生的。
6.(修改)根据权利要求1至5中任一项所述的分析方法，其中，
所述分析方法还包括：
评估步骤，使用根据所述计算步骤的结果获得的所述丰度比作为指标，评估所述脂质颗粒群的质量。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的分析方法，其中，
所述目标物质是核酸。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的分析方法，其中，
所述多个脂质颗粒的粒径小于1μm。
9.一种分析基板，该分析基板被使用于权利要求1至8中任一项所述的分析方法，其中，
所述分析基板包括：
基底板；
流槽，该流槽设在所述基底板上，该流槽构成为使所述脂质颗粒群从上游流向下游；
样品注入口，该样品注入口设在所述流槽的上游侧，该样品注入口构成为至少将所述脂质颗粒群注入到所述流槽中；
光源，该光源构成为利用光来照射所述流槽中的所述脂质颗粒群；
散射光检测器，该散射光检测器设在所述流槽的下游侧，该散射光检测器构成为检测来自所述流槽中的所述脂质颗粒群的散射光；以及
荧光检测器，该荧光检测器设在所述流槽的下游侧，该荧光检测器构成为检测来自所述流槽中的所述脂质颗粒群的荧光。
10.根据权利要求9所述的分析基板，其中，
所述分析基板还包括：
试剂注入口，该试剂注入口设置在所述流槽的上游侧，所述试剂注入口构成为将所述第一物质注入到所述流槽中。
11.根据权利要求9或10所述的分析基板，其中，
所述分析基板还包括：
分离单元，该分离单元设在所述样品注入口与所述光检测器之间，
所述分离单元变更所述脂质颗粒按粒径顺序流动的顺序。
12.一种分析套件，其中，该分析套件包括：
权利要求9至11中任一项所述的分析基板；以及
第一物质，该第一物质具有脂质膜渗透性，与所述目标物质结合，并且包括产生荧光或具有可变波长的荧光的染料。
13.一种分析设备，该分析设备被使用于权利要求1至8中的任一项所述的分析方法，其中，
所述分析设备包括：
光源，该光源构成为利用光来照射包含脂质颗粒群的溶液，该脂质颗粒群包含多个脂质颗粒；
散射光检测器，该散射光检测器构成为检测从所述多个脂质颗粒获得的散射光；
荧光检测器，该荧光检测器构成为检测从所述多个脂质颗粒获得的荧光；以及
处理器，该处理器构成为基于由所述散射光检测器检测到的光的信息，测量所述溶液中的所述多个脂质颗粒的总数、所述第一脂质颗粒的数量和所述第二脂质颗粒的数量中的至少两个数，并且构成为基于测量结果来计算所述第一脂质颗粒的丰度比。
14.根据权利要求13所述的分析设备，其中，
所述分析设备包括权利要求9至11中任一项所述的分析基板，所述光源、所述散射光检测器和所述荧光检测器被包括在所述分析基板中。
15.(追加)一种评估方法，该评估方法用于评估包含多个脂质颗粒的脂质颗粒群的质量，其中，
所述评估方法包括：
评估步骤，通过使用通过以下算式(I)获得的包含目标物质的第一脂质颗粒的丰度比作为指标，评估所述脂质颗粒群的质量，
第一脂质颗粒的丰度比＝第一脂质颗粒的数量/脂质颗粒群中的多个脂质颗粒的总数...(I)。
16.(追加)根据权利要求15所述的评估方法，其中，
通过权利要求1至8中的任一项所述的分析方法来测量所述第一脂质颗粒的丰度比。

Claims (14)

1.一种分析方法，该分析方法用于确定脂质颗粒群中的包含目标物质的第一脂质颗粒的丰度比，该脂质颗粒群包含多个脂质颗粒，其中，
所述分析方法包括：
照射步骤，利用光来照射包含所述脂质颗粒群的溶液；
测量步骤，通过检测从所述脂质颗粒群中的所述多个脂质颗粒获得的散射光，测量所述溶液中的所述多个脂质颗粒的总数、所述第一脂质颗粒的数量和第二脂质颗粒的数量中的至少两个数，所述第二脂质颗粒不包含所述目标物质；以及
计算步骤，基于从所述测量步骤获得的结果，通过以下算式(I)来计算所述第一脂质颗粒的丰度比，
第一脂质颗粒的丰度比＝第一脂质颗粒的数量/脂质颗粒群中的多个脂质颗粒的总数...(I)。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其中，
在所述测量步骤中，使用所述散射光的强度和/或布朗动量作为指标，测量所述第一脂质颗粒的数量和所述第二脂质颗粒的数量。
3.根据权利要求1或2所述的分析方法，其中，
所述分析方法进一步包括：
混合步骤，在所述照射步骤之前，将所述溶液与第一物质混合，该第一物质具有脂质膜渗透性，与所述目标物质结合，并且包括产生荧光或具有可变波长的荧光的染料。
4.根据权利要求3所述的分析方法，其中，
在所述照射步骤中照射的光是从所述染料产生荧光的激发光，并且
所述测量步骤包括：通过检测所述散射光来测量多个脂质颗粒的数量的第一测量步骤；以及通过检测产生荧光的荧光来测量所述第一脂质颗粒的数量的第二测量步骤，
所述荧光是通过所述激发光的照射而从所述染料产生的。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的分析方法，其中，
所述分析方法还包括：
评估步骤，使用根据所述计算步骤的结果获得的所述丰度比作为指标，评估所述脂质颗粒群的质量。
6.一种分析方法，该分析方法用于评估包含多个脂质颗粒的脂质颗粒群的质量，其中，
所述分析方法包括：
评估步骤，通过使用通过以下算式(I)获得的包含目标物质的第一脂质颗粒的丰度比作为指标，评估所述脂质颗粒群的质量，
第一脂质颗粒的丰度比＝第一脂质颗粒的数量/脂质颗粒群中的多个脂质颗粒的总数...(I)。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的分析方法，其中，
所述目标物质是核酸。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的分析方法，其中，
所述多个脂质颗粒的粒径小于1μm。
9.一种分析基板，该分析基板被使用于权利要求1至8中任一项所述的分析方法，其中，
所述分析基板包括：
基底板；
流槽，该流槽设在所述基底板上，该流槽构成为使所述脂质颗粒群从上游流向下游；
样品注入口，该样品注入口设在所述流槽的上游侧，该样品注入口构成为至少将所述脂质颗粒群注入到所述流槽中；
光源，该光源构成为利用光来照射所述流槽中的所述脂质颗粒群；
散射光检测器，该散射光检测器设在所述流槽的下游侧，该散射光检测器构成为检测来自所述流槽中的所述脂质颗粒群的散射光；以及
荧光检测器，该荧光检测器设在所述流槽的下游侧，该荧光检测器构成为检测来自所述流槽中的所述脂质颗粒群的荧光。
10.根据权利要求9所述的分析基板，其中，
所述分析基板还包括：
试剂注入口，该试剂注入口设置在所述流槽的上游侧，所述试剂注入口构成为将所述第一物质注入到所述流槽中。
11.根据权利要求9或10所述的分析基板，其中，
所述分析基板还包括：
分离单元，该分离单元设在所述样品注入口与所述光检测器之间，
所述分离单元变更所述脂质颗粒按粒径顺序流动的顺序。
12.一种分析套件，其中，该分析套件包括：
权利要求9至11中任一项所述的分析基板；以及
第一物质，该第一物质具有脂质膜渗透性，与所述目标物质结合，并且包括产生荧光或具有可变波长的荧光的染料。
13.一种分析设备，该分析设备被使用于权利要求1至8中的任一项所述的分析方法，其中，
所述分析设备包括：
光源，该光源构成为利用光来照射包含脂质颗粒群的溶液，该脂质颗粒群包含多个脂质颗粒；
散射光检测器，该散射光检测器构成为检测从所述多个脂质颗粒获得的散射光；
荧光检测器，该荧光检测器构成为检测从所述多个脂质颗粒获得的荧光；以及
处理器，该处理器构成为基于由所述散射光检测器检测到的光的信息，测量所述溶液中的所述多个脂质颗粒的总数、所述第一脂质颗粒的数量和所述第二脂质颗粒的数量中的至少两个数，并且构成为基于测量结果来计算所述第一脂质颗粒的丰度比。
14.根据权利要求13所述的分析设备，其中，
所述分析设备包括权利要求9至11中任一项所述的分析基板，所述光源、所述散射光检测器和所述荧光检测器被包括在所述分析基板中。
CN202080004773.0A 2019-09-10 2020-02-28 分析方法、分析基板、分析套件和分析设备 Pending CN112789497A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2019-164882 2019-09-10
JP2019164882A JP7271374B2 (ja) 2019-09-10 2019-09-10 分析方法、分析基体、分析キット及び分析装置。
PCT/IB2020/051714 WO2021048636A1 (en) 2019-09-10 2020-02-28 Analysis method, analysis substrate, analysis kit, and analysis apparatus

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112789497A true CN112789497A (zh) 2021-05-11

Family

ID=70189996

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080004773.0A Pending CN112789497A (zh) 2019-09-10 2020-02-28 分析方法、分析基板、分析套件和分析设备

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20210181216A1 (zh)
EP (1) EP4028754A1 (zh)
JP (1) JP7271374B2 (zh)
CN (1) CN112789497A (zh)
WO (1) WO2021048636A1 (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002012903A1 (es) * 2000-08-04 2002-02-14 Escuela Nacional De Ciencias Biologicas Del I.P.N. Metodos para el diagnostico y/o tratamiento de enfermedades relacionadas con anticuerpos antifosfolipidos, y dispositivos utilizados
JP2003329668A (ja) * 2002-05-16 2003-11-19 Sysmex Corp 骨髄液有核細胞自動分析方法
WO2012132384A1 (ja) * 2011-03-31 2012-10-04 富士フイルム株式会社 局在プラズモン増強蛍光粒子、局在プラズモン増強蛍光検出用担体、局在プラズモン増強蛍光検出装置および蛍光検出方法
WO2013011611A1 (ja) * 2011-07-19 2013-01-24 株式会社 日立ハイテクノロジーズ 核酸分析方法及び核酸分析装置
US20140065640A1 (en) * 2010-11-02 2014-03-06 Vanderbilt University Interferometric Detection Using Nanoparticles
WO2015102475A1 (ko) * 2014-01-06 2015-07-09 서울대학교산학협력단 이동성이 조절된 금속입자 탐침이 결합된 지지형 지질 이중층을 포함하는 인공세포막 및 이를 이용하여 분자 간 상호작용을 분석하는 방법
US20160109471A1 (en) * 2014-10-21 2016-04-21 Health Diagnostic Laboratory, Inc. Lipoprotein particle number from measurements of lipoprotein particle phospholipid concentration in lipoprotein particle membrane bilayer

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH1073699A (ja) * 1996-05-20 1998-03-17 Konica Corp 放射線増感スクリーン及び放射線画像変換パネル
JP2006010630A (ja) * 2004-06-29 2006-01-12 Sysmex Corp 異常細胞の検出装置およびその検出方法
JP2006349592A (ja) * 2005-06-20 2006-12-28 Furuido:Kk マイクロ流体デバイスおよびこれを用いた生体物質検査装置とマイクロ化学リアクター
JP2007101289A (ja) * 2005-10-03 2007-04-19 Furuido:Kk マイクロ流体デバイスおよびこれを用いた生体物質検査装置とマイクロ化学リアクター
JP2007262026A (ja) * 2006-03-29 2007-10-11 Konica Minolta Medical & Graphic Inc リポソームの製造方法
JP2010133720A (ja) * 2008-12-02 2010-06-17 Konica Minolta Holdings Inc 微粒子製剤の体内動態を予測する方法およびそのシステム
US20120100207A1 (en) * 2009-07-02 2012-04-26 Konica Minolta Holdings, Inc. Process for producing liposomes by two-step emulsification method utilizing outer aqueous phase containing specific dispersing agent, process for producing liposome dispersion or dry powder thereof using the process for producing liposomes, and liposome dispersion or dry powder thereof produced thereby
JP5821127B2 (ja) * 2010-12-17 2015-11-24 独立行政法人国立高等専門学校機構 タンパク質結晶化分析装置及びタンパク質結晶化分析方法
JP5853453B2 (ja) * 2011-07-15 2016-02-09 コニカミノルタ株式会社 リポソームを製造する方法
JP5918955B2 (ja) * 2011-09-22 2016-05-18 Ｎｅｃトーキン株式会社 複合磁性体およびその混合状態の評価方法並びにリアクトル
JP6133883B2 (ja) * 2011-11-04 2017-05-24 日東電工株式会社 薬物送達用の脂質ナノ粒子の生成方法
JP6036496B2 (ja) * 2012-07-24 2016-11-30 ソニー株式会社 微小粒子分取方法
JP2014031349A (ja) * 2012-08-06 2014-02-20 Hokkaido Univ 結合剤及びその利用
JP2014114267A (ja) * 2012-12-12 2014-06-26 Hokkaido Univ 脂質膜構造体に対して肝臓血管内皮細胞への移行能を付与および／または増強するペプチド、肝臓血管内皮細胞への移行能を有するまたは肝臓血管内皮細胞への移行能が増強された脂質膜構造体、ならびに脂質膜構造体に対して肝臓血管内皮細胞への移行能を付与および／または増強する剤
JP2017106832A (ja) * 2015-12-10 2017-06-15 アズビル株式会社 微細藻類に含まれる脂質の検出装置及び微細藻類に含まれる脂質の検出方法
JP2017209073A (ja) * 2016-05-26 2017-11-30 アズビル株式会社 粒子検出装置
JP2019164882A (ja) 2016-08-02 2019-09-26 住友電気工業株式会社 レドックスフロー電池、及びレドックスフロー電池の運転方法
US20200308603A1 (en) * 2017-09-29 2020-10-01 Intellia Therapeutics, Inc. In vitro method of mrna delivery using lipid nanoparticles
JP2019184337A (ja) * 2018-04-05 2019-10-24 ソニー株式会社 マイクロチップ、微小粒子測定装置、及び微小粒子測定方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002012903A1 (es) * 2000-08-04 2002-02-14 Escuela Nacional De Ciencias Biologicas Del I.P.N. Metodos para el diagnostico y/o tratamiento de enfermedades relacionadas con anticuerpos antifosfolipidos, y dispositivos utilizados
JP2003329668A (ja) * 2002-05-16 2003-11-19 Sysmex Corp 骨髄液有核細胞自動分析方法
US20140065640A1 (en) * 2010-11-02 2014-03-06 Vanderbilt University Interferometric Detection Using Nanoparticles
WO2012132384A1 (ja) * 2011-03-31 2012-10-04 富士フイルム株式会社 局在プラズモン増強蛍光粒子、局在プラズモン増強蛍光検出用担体、局在プラズモン増強蛍光検出装置および蛍光検出方法
WO2013011611A1 (ja) * 2011-07-19 2013-01-24 株式会社 日立ハイテクノロジーズ 核酸分析方法及び核酸分析装置
WO2015102475A1 (ko) * 2014-01-06 2015-07-09 서울대학교산학협력단 이동성이 조절된 금속입자 탐침이 결합된 지지형 지질 이중층을 포함하는 인공세포막 및 이를 이용하여 분자 간 상호작용을 분석하는 방법
US20160109471A1 (en) * 2014-10-21 2016-04-21 Health Diagnostic Laboratory, Inc. Lipoprotein particle number from measurements of lipoprotein particle phospholipid concentration in lipoprotein particle membrane bilayer

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SUNAMI, T: "Femtoliter compartment in liposomes for in vitro selection of proteins", 《ANALYTICAL BIOCHEMISTRY》, vol. 357, no. 1, pages 128 - 136, XP024942366, DOI: 10.1016/j.ab.2006.06.040 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021048636A1 (en) 2021-03-18
EP4028754A1 (en) 2022-07-20
JP7271374B2 (ja) 2023-05-11
US20210181216A1 (en) 2021-06-17
JP2021043045A (ja) 2021-03-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10670504B2 (en) Fluidic device
JP5617532B2 (ja) 誘電サイトメトリ装置及び誘電サイトメトリによる細胞分取方法
WO2010010858A1 (ja) キャピラリー電気泳動法による分析装置
JP2020098202A (ja) アッセイシステムおよびカートリッジデバイス
Piontek et al. Active probing of the mechanical properties of biological and synthetic vesicles
JP7356891B2 (ja) 粒子分析装置及び粒子分析方法
US20240011884A1 (en) Systems and methods for identifying protein aggregates in biotherapeutics
CN110108885B (zh) 一种程序性死亡受体-配体1的核酸适体检测细胞外囊泡表面pd-l1蛋白的方法
Ren et al. Rapid enrichment and sensitive detection of extracellular vesicles through measuring the phospholipids and transmembrane protein in a microfluidic chip
Kwon et al. Methods to analyze extracellular vesicles at single particle level
Swamy et al. Probing the thermodynamics of protein–lipid interactions by isothermal titration calorimetry
CN112789497A (zh) 分析方法、分析基板、分析套件和分析设备
JP2009162578A (ja) 細胞間相互作用を測定するための方法及び装置
JP2019518938A (ja) 材料の物理化学特性決定のための方法およびデバイス
Wachlmayr et al. Biophysical quantification of unitary solute and solvent permeabilities to enable translation to membrane science
Adhikary et al. Development of color changing polydiacetylene-based biomimetic nanovesicle platforms for quick detection of membrane permeability across the blood brain barrier
RU2106627C1 (ru) Прибор для мониторинга параметров взвешенных частиц
CN115605292A (zh) 适合测定分子相互作用的特征性质的方法、设备、组件和系统
EP3663760A1 (en) Method of determining quality of cell separation and particle separation apparatus
CN107735685B (zh) 传感器设备
Tatarkova et al. Quantitative fluorescence microscopy of macromolecules in gel and biological tissue
Krogseth The Effect of Antimicrobial Peptides on Ion Transport in Model Membranes
Sarangi et al. Evaluation of the passive permeability of antidepressants through pore-suspended lipid bilayer
Chen Methods for the Studies of Drug Dissociation from DNA
McNamara et al. Dynamic analytical chemistry: a kinetic study of the labeling of normal and age fractionated human erythrocytes with monobromobimane

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination