CN112760344A - 酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸 - Google Patents

酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸 Download PDF

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Abstract

本发明属于牡蛎中硒代蛋氨酸提取技术领域，具体涉及一种酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，包括以下步骤：(1)制备牡蛎冻干粉样品；(2)制备硒代蛋氨酸提取液：称取牡蛎冻干粉样品，与酶解液混合进行酶解，并震荡，然后在温度105℃下保温1h得到提取液；(3)将提取液进行离心处理，取上清液加过饱和的硫氨酸，放在4℃冰箱里静置过夜；再对上清液进行离心处理得到沉淀；(4)将沉淀转移到透析袋中进行透析，对透析后的透析液进行冷冻干燥，即可得到含硒蛋白粉；用高效液相原子荧光法测硒代蛋氨酸的含量。本发明的酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，可以有效提取出牡蛎中的硒代蛋氨酸，具有较好的市场应用前景。

Description

酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸
技术领域
本发明属于牡蛎中硒代蛋氨酸提取技术领域，具体涉及一种酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸。
背景技术
牡蛎属双壳贝类，牡蛎肉中含有丰富的蛋白质、氨基酸、糖原、微量元素及维生素等。牡蛎是一种高蛋白质的生物而且蛋白质种类非常的多，营养含量高于一般的水产物，因此有“海中牛奶”和“海之玄米”的美誉。不仅牡蛎肉受到人们的喜欢，牡蛎壳也可以对人们有很大的用处，可以当作一味药材使用，牡蛎壳含有的钙离子是有着明显的补钙作用。牡蛎是我国首批药食同源的保健食品之一，它具有平肝固涩、降血压、潜阳敛阴的作用。牡蛎其中含有多种的蛋白质成分，对于人们的研究是有很大的利用价值，高营养的牡蛎给人们的健康带来保健作用。我国牡蛎资源丰富，人工养殖量大，大多数作为水产食品食用，利用价值与经济效益不高。因此，将牡蛎中的高营养成分提取出来，开发更有价值的产品具有重要意义。
牡蛎肉中含有丰富的硒等微量元素，牡蛎中的硒是以无毒的有机硒的形式存在。硒元素是人体中不可缺少的元素之一，涉及的生理功能范围也比较广泛。硒在人体发挥功能的形式主要是硒蛋白。人们对于硒蛋白的不断的探索，逐渐硒蛋白的作用功能被人们了解，现在已经发现了近25种硒蛋白在人体中扮演了重要的角色，其作用非常之大。硒蛋白能够增强人们的免疫系统，防止病毒进入人体中，同时也提高了细胞抗体的合成，提高了杀菌能力。硒蛋白还参与冠心病、神经系统疾病、肿瘤等人体疾病发生发展中发挥着重要的作用，以及对抗癌、防癌、提高免疫力、医治心脏病和增强组织再生能力等也起到作用。
硒对人体而言十分重要，所涉及的生理功能范围较广，而且也是人机体的必需元素，硒元素发挥生物学功能则是主要以硒蛋白为主。由于很多的地方缺乏硒元素的摄取，但依靠着普通食物远远不能满足人类生长发育的硒含量需求，寻找适宜的硒源是人体补硒的关键问题。目前关于生物体对硒转化作用的研究，大部分都集中于微生物、植物及家畜，关于水生动物对硒的转化研究少见报道。因此，提取牡蛎硒蛋白中硒代蛋氨酸具有很大的意义。但目前，提取硒蛋白的方法有酶水解法、盐提法及碱溶法等，关于酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸的报道还没有。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本发明的目的是在于提供一种酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，并通过多组对照实验，以得到提取牡蛎硒蛋白中硒代蛋氨酸的最优方案。
为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，包括以下步骤：
(1)制备牡蛎冻干粉样品：清洗新鲜牡蛎，滤水、预冻并冷冻干燥，粉碎即得牡蛎冻干粉，冷藏保存备用；
(2)制备硒代蛋氨酸提取液：称取牡蛎冻干粉样品，与酶解液混合进行酶解，并震荡，然后在温度105℃下保温1h得到提取液；
(3)将提取液进行离心处理，取上清液加过饱和的硫氨酸，放在4℃冰箱里静置过夜；再对上清液进行离心处理得到沉淀；
(4)将步骤(3)得到的沉淀转移到透析袋中进行透析，对透析后的透析液进行冷冻干燥，即可得到含硒蛋白粉；用高效液相原子荧光法测硒代蛋氨酸的含量。
作为优选，步骤(2)中牡蛎冻干粉样品与酶解液混合的料液比为1:40。
作为优选，步骤(2)中酶解液中添加的酶的种类包括：木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶以及胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶。
作为优选，步骤(2)中的酶解液的pH值为6.5-8.5。
作为优选，步骤(2)中的酶解时间为2.5-5.5h。
作为优选，步骤(2)中的酶解液中酶的添加量为0.5-2.5％。
作为优选，步骤(2)中的酶解温度为40-60℃。
作为优选，步骤(3)中提取液在温度为4.00℃、转速为10000r/min的情况下进行离心处理，离心处理的时间为10.00min。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明的酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，在不同酶的种类、酶添加量、酶解时间、酶解温度、pH值的情况下，提取牡蛎中硒代蛋氨酸，测量不同情况下的硒代蛋氨酸的提取量并进行比较，得出在使用1:1的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶、pH值为7.5、酶解时间为3.0h、酶添加量为1.5％和酶解温度为45℃的情况下，可以有效提取出牡蛎中含硒蛋白质中的硒代蛋氨酸，并且可以得到最佳的硒代蛋氨酸提取量。
具体实施方式
下面对本发明专利的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域所属的技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
一种酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，包括以下步骤：
(1)制备牡蛎冻干粉样品：清洗新鲜牡蛎，滤水、预冻并冷冻干燥，粉碎即得牡蛎冻干粉，冷藏保存备用；
(2)制备硒代蛋氨酸提取液：称取牡蛎冻干粉样品，与酶解液混合进行酶解，并震荡，牡蛎冻干粉样品与酶解液混合的料液比为1:40；然后在温度 105℃下保温1h得到提取液；其中，酶解液中添加的是1:1的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶，胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶的添加量为1.5％；酶解液 pH值为7.5，酶解时间为3.0h，酶解温度为45℃；
(3)将提取液进行离心处理，取上清液加过饱和的硫氨酸，放在4℃冰箱里静置过夜；再对上清液进行离心处理得到沉淀；
(4)将步骤(3)得到的沉淀转移到透析袋中进行透析，对透析后的透析液进行冷冻干燥，即可得到含硒蛋白粉；用高效液相原子荧光法测硒代蛋氨酸的含量。
实验例1
分别称取5.0g的牡蛎冻干粉样品，参考本发明实施例的方法考察不同种类的酶对牡蛎中硒代蛋氨酸的提取率的影响。与实施例的区别在于酶解液pH 值为7.0，酶解液中酶的添加量为2.0％。针对不同种类的酶，从现有技术了解到其最佳酶解温度并在其最佳酶解温度下分别与牡蛎冻干粉样品混合进行反应，酶解时间为4.0h，结果见表1。
表1不同种类的酶对牡蛎中硒代蛋氨酸的提取量的影响
Figure RE-GDA0002990370950000041
结果表明，酶解液中添加胰蛋白酶对牡蛎中硒代蛋氨酸的提取率大于酶解液中添加中性蛋白酶，酶解液中添加木瓜蛋白酶对牡蛎中硒代蛋氨酸的提取率大于酶解液中添加胰蛋白酶，酶解液中添加1:1的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶对牡蛎中硒代蛋氨酸的提取率大于酶解液中添加木瓜蛋白酶。得出结论，酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸的最佳的酶是1:1的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶。
实验例2
分别称取5.0g的牡蛎冻干粉样品，参考本发明实施例的方法考察酶解液在不同的pH值的情况下对牡蛎中硒代蛋氨酸的提取率的影响。与实施例的区别在于酶解温度为55℃，酶解时间为4h，酶解液中酶的添加量为2.0％。结果见表2。
表2酶解液pH值对牡蛎中硒代蛋氨酸提取率的影响
Figure RE-GDA0002990370950000051
结果表明，以提取含硒蛋白质中硒代蛋氨酸的提取量为考察指标，酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸的最佳的酶解液pH值为7.5。
实验例3
分别称取5.0g的牡蛎冻干粉样品，参考本发明实施例的方法考察不同的酶解时间对牡蛎中硒代蛋氨酸提取率的影响。与实施例的区别在于酶解温度为55℃，酶解液中酶的添加量为2.0％。结果见表3。
表3酶解时间对牡蛎中硒代蛋氨酸提取率的影响
Figure RE-GDA0002990370950000052
Figure RE-GDA0002990370950000061
结果表明，以提取含硒蛋白质中硒代蛋氨酸的提取量为考察标准，酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸的最佳的酶解时间为3.0h。
实验例4
分别称取5.0g的牡蛎冻干粉样品，参考本发明实施例的方法考察酶解液中酶的不同添加量对牡蛎中硒代蛋氨酸提取率的影响。与实施例的区别在于酶解温度为55℃。结果见表4。
表4酶的添加量对牡蛎中硒代蛋氨酸提取率的影响
Figure RE-GDA0002990370950000062
结果表明，以提取含硒蛋白质中硒代蛋氨酸的提取量为考察指标，酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸的最佳的酶添加量为1.5％。
实验例5
分别称取5.0g的牡蛎冻干粉样品，参考本发明实施例的方法考察不同的酶解温度对牡蛎中硒代蛋氨酸提取率的影响，结果见表5。
表5酶解温度对牡蛎中硒代蛋氨酸提取率的影响
Figure RE-GDA0002990370950000071
结果表明，以提取含硒蛋白质中硒代蛋氨酸的提取量为考察指标，酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸的最佳的酶解温度为45℃。
对比多组实验例的数据结果，以提取含硒蛋白质中硒代蛋氨酸的提取量为考察指标，得出酶解法提取牡蛎中硒蛋白中硒代蛋氨酸的最优方案为：酶解液中添加1:1的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶，在酶解液pH值为7.5、酶添加量为1.5％、酶解时间为3.0h以及酶解温度为45℃的情况下与牡蛎冻干粉样品混合进行反应。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (8)

1.一种酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备牡蛎冻干粉样品：清洗新鲜牡蛎，滤水、预冻并冷冻干燥，粉碎即得牡蛎冻干粉，冷藏保存备用；
(2)制备硒代蛋氨酸提取液：称取牡蛎冻干粉样品，与酶解液混合进行酶解，并震荡，然后在温度105℃下保温1h得到提取液；
(3)将提取液进行离心处理，取上清液加过饱和的硫氨酸，放在4℃冰箱里静置过夜；再对上清液进行离心处理得到沉淀；
(4)将步骤(3)得到的沉淀转移到透析袋中进行透析，对透析后的透析液进行冷冻干燥，即可得到含硒蛋白粉；用高效液相原子荧光法测硒代蛋氨酸的含量。
2.根据权利要求1所述的酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，其特征在于，步骤(2)中牡蛎冻干粉样品与酶解液混合的料液比为1:40。
3.根据权利要求1所述的酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，其特征在于，步骤(2)中酶解液中添加的酶的种类包括：木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶以及胰蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶。
4.根据权利要求1所述的酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，其特征在于，步骤(2)中的酶解液的pH值为6.5-8.5。
5.根据权利要求1所述的酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，其特征在于，步骤(2)中的酶解时间为2.5-5.5h。
6.根据权利要求1所述的酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，其特征在于，步骤(2)中的酶解液中的酶添加量为0.5-2.5％。
7.根据权利要求1所述的酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，其特征在于，步骤(2)中的酶解温度为40-60℃。
8.根据权利要求1所述的酶解法提取牡蛎中硒代蛋氨酸，其特征在于，步骤(3)中提取液在温度为4.00℃、转速为10000r/min的情况下进行离心处理，离心处理的时间为10.00min。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1586312A (zh) * 2004-08-27 2005-03-02 宁波大学 牡蛎生物活性物质的制备方法及其产品
CN102443618A (zh) * 2011-12-07 2012-05-09 深圳海王药业有限公司 一种从牡蛎提取物酶解产生多肽的方法
CN104086471A (zh) * 2014-07-25 2014-10-08 恩施土家族苗族自治州农业科学院 从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法
CN108484717A (zh) * 2018-05-14 2018-09-04 安徽过湾农业科技有限公司 一种碎米荠植物硒蛋白的提取方法
CN110269130A (zh) * 2019-05-22 2019-09-24 浙江国际海运职业技术学院 富硒牡蛎小分子蛋白肽的制备方法
CN111700149A (zh) * 2020-06-29 2020-09-25 广西壮族自治区农业科学院 一种从紫色粉葛中提取含硒抗氧化活性成分的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1586312A (zh) * 2004-08-27 2005-03-02 宁波大学 牡蛎生物活性物质的制备方法及其产品
CN102443618A (zh) * 2011-12-07 2012-05-09 深圳海王药业有限公司 一种从牡蛎提取物酶解产生多肽的方法
CN104086471A (zh) * 2014-07-25 2014-10-08 恩施土家族苗族自治州农业科学院 从聚硒植物碎米荠中提取硒代胱氨酸和硒代蛋氨酸的方法
CN108484717A (zh) * 2018-05-14 2018-09-04 安徽过湾农业科技有限公司 一种碎米荠植物硒蛋白的提取方法
CN110269130A (zh) * 2019-05-22 2019-09-24 浙江国际海运职业技术学院 富硒牡蛎小分子蛋白肽的制备方法
CN111700149A (zh) * 2020-06-29 2020-09-25 广西壮族自治区农业科学院 一种从紫色粉葛中提取含硒抗氧化活性成分的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QIHUA ZHANG等: "Selenium speciation in bay scallops by high performance liquidchromatography separation and inductively coupled plasma massspectrometry detection after complete enzymatic extraction", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *
顾浩峰: "食品中硒元素的形态分析研究进展", 《食品与发酵科技》 *

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