CN116606777A - 一种植物乳杆菌菌株及其饲料添加剂与饲料 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SR2菌株，其保藏号为GDMCC No.62431。该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的生长均具有一定的抑制作用，且在胆盐、强酸环境下也能存活较长时间，通过动物实验发现其能有效促进畜禽的生产性能，可作为宠物饲料添加剂，同时可以与白乌鱼胶原肽搭配，协调提高抑菌能力，促进宠物吸收钙，有助于提高宠物免疫力、促进钙质吸收，并且有一定促进宠物创伤后愈合的功能，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物益生菌应用技术领域，具体涉及一种植物乳杆菌SR2新菌株及其在饲料添加剂与饲料的应用。
背景技术
近年来，人们对宠物的需求不断增长，宠物数量也日益增多，数据显示中国已经是仅次于美国的世界第二大宠物市场，其中，宠物食品作为饲养宠物的刚性需求，在宠物行业发展飞速。而目前市面上的一些宠物饲料，存在营养不均衡且不易于被吸收消化的问题，针对于宠物的保健功能性食品很少，尤其在宠物术后可帮助其恢复的产品市面上非常少见。并且家养宠物所长期食用的狗粮、猫粮等均为加工食品，加工食品中多含有各种食品添加剂，但由于长期使用甚至滥用，表现出药物残留和毒性等问题；扰乱了畜禽体内微生物系统的微生态平衡，导致消化功能素乱，引起各种消化道疾病并且降低了动物的免疫功能。
通过研究发现，益生菌饲料添加剂是一种十分理想的抗生素替代品，而且益生菌饲料添加剂具有天然无公害、无污染、质量稳定及效果明显等优点。特别是乳酸菌做为益生菌，其在生长代谢过程能产生多种酸，有效调节动物肠道健康，并且某些优良菌株还具有抑制有害菌的作用。但是，目前益生菌的研究和开发最关键的问题是优良菌株的选育，特别是优良乳酸菌的分离和筛选。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
为解决背景技术中所提到的技术问题，本发明提供了一种植物乳杆菌SR2菌株、菌粉及其在宠物饲料添加剂与宠物粮中的应用。本发明提供的使用植物乳杆菌SR2菌株制得的宠物饲料有助于提高宠物免疫力、促进钙质吸收，并且有促进宠物创伤后愈合的功能。
本发明通过下述技术方案实现：
本发明提供了一株植物乳杆菌，该菌株从腊肉中分离经过初筛复筛得到。
利用细菌通用引物对筛选出的菌株进行16Sr DNA PCR扩增后鉴定，测序结果与GenBank基因数据库中16Sr DNA序列进行同源性比较分析，鉴定微生物种类。由此鉴定出菌株SR2为植物乳杆菌。
将该菌株命名为植物乳杆菌SR2(Lactiplantibacillus plantarum SR2)，于2022年8月11日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省研究院微生物研究所，保藏编号为：GDMCC No.62431。植物乳杆菌SR2的基因序列如SEQ ID No：1。
本发明还提供一种含有前述菌株的菌粉。
进一步的，所述菌粉的制备方法步骤如下：
a. 将植物乳杆菌SR2接入MRS肉汤培养基，35~37℃温度条件下培养18~24h，得到发酵液；
b. 将发酵液浓缩，向浓缩后的液体中添加脱脂奶粉和蔗糖，得到浓缩液；
c.. 再将浓缩液在真空低温条件下进行干燥，进行喷雾方式干燥处理得到菌粉。
进一步的，步骤b中，按浓缩液重量百分比计，所述脱脂奶粉含量为2~4%、蔗糖含量为1~3%。
一种如前述的菌粉通过微胶囊包埋方法制备得到的多层微胶囊植物乳杆菌粉。
进一步的，所述多层微胶囊植物乳杆菌粉从里到外依次为菌粉、胶原蛋白质层和多糖体层，按质量份数计，多层微胶囊植物乳杆菌粉包括菌粉45~55份、胶原蛋白质10~20份、多糖体15~20份。
进一步的，所述多层微胶囊植物乳杆菌粉的直径为10~90μm。
一种含有如前述的植物乳杆菌的宠物饲料添加剂。
一种如前述的宠物饲料添加剂，按重量份计，包括：白乌鱼胶原肽粉15~25份，菌粉45~55份，所述植物乳杆菌的活菌数大于1×108cfu/g。
进一步的，如前述的宠物饲料添加剂，按重量份计，还包括柠檬酸5~10份、维生素2-3份，所述维生素为维生素A、维生素C、维生素E、维生素K、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、泛酸、烟酸、叶酸中任意一种或多种。
进一步的，一种如前述的宠物饲料添加剂在宠物粮中的应用，所述宠物饲料添加剂占宠物量重量百分比的3%~5%。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
一、本发明中，分离得到的植物乳杆菌SR2菌可用于宠物饲料添加剂中，添加至各种宠物的饲料中，可以促进宠物的食物营养消化和吸收，改善宠物肠道菌群，提高宠物食欲，增加宠物体重。
二、本发明中，采用分离筛选得到的植物乳杆菌SR2与白乌鱼胶原肽粉配合使用，在植物乳杆菌SR2与白乌鱼胶原肽粉之间具有协同作用，白乌鱼胶原肽粉对植物乳杆菌的生长有显著的促进作用，可以促进宠物的食物营养消化和吸收，改善宠物肠道菌群，提高宠物食欲，增加宠物体重。植物乳杆菌粉与白乌鱼胶原肽粉共同作用时，有助于提高宠物免疫力、促进钙质吸收，并且有一定促进宠物创伤后愈合的功能。
三、本发明中，通过运用多层微胶囊包埋技术制得多层微胶囊植物乳杆菌粉，使得植物乳杆菌SR2可以在常温下进行保存，可广泛应用于市场，解决了乳酸菌（植物乳杆菌SR2）在常温下难以保持其活性造成保存条件要求高的问题。
四、本发明中，白乌鱼胶原肽粉的提取方法利用了白乌鱼加工过程中产生的剩料，以鱼鳞、鱼皮、鱼头和鱼骨等作为提取的原料，实现了将白乌鱼加工剩料提取出胶原蛋白肽，即可处理部分剩料，解决环保问题的同时，获得更有经济效益的产品。
附图说明
图1是 SR2系统发育树。
图2是白乌鱼胶原肽粉对植物乳杆菌SR2的促生长试验。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
植物乳杆菌的筛选
1.1菌株分离纯化
从四川多家市场购买腊肉，然后对该批样品进行菌株的筛选。在无菌条件下，从腊肉中取样25g，剪碎，放入无菌均质袋中，加入225ml无菌生理盐水，于拍打式均质器中拍打3min；作10倍倍比稀释，选择2-3个合适的稀释浓度，均匀涂布于含2%碳酸钙的MRS培养基，35℃培养48h。
将具有明显溶钙圈的菌落接种于MRS培养基，划线纯化直到出现单菌落且整个平板和镜下观察菌落形态一致，然后测定菌株的生理生化指标：挑取革兰氏阳性、不产H2S、不产气、不产黏液、氨基酸脱羟酶阴性的细菌，于-4℃条件下进行斜面保存备用。
1.2抗氧化性特性筛选
在MRS肉汤培养基中分别加入H2O2溶液，使培养基中H2O2的起始浓度分别为0.4、0.7、1.0mmol/L，然后将1.1中筛选得到的菌株按2%分别接种于含有各H2O2浓度的MRS肉汤培养基，35℃恒温培养，期间每隔2h取一次样液，测定其OD值，记录不同起始浓度下的生长曲线，筛选出具有高过氧化氢耐受性的菌株。最终筛选得到菌株SR2。
1.3 分子生物学鉴定：
细菌基因组DNA提取：用TSINGKE植物DNA提取试剂盒（通用型）提取细菌DNA；
提取产物经过PCR扩增，扩增体系：1×TSE101 金牌 mix 45μL，27 F 2μL，1492 R2 L，Template 1μL；
PCR扩增反应条件：98℃ 4min预变性；98℃ 10s，55℃ 15s，72℃ 15s，38个循环；72℃修复延伸10min，4℃终止。
PCR产物由北京擎科生物科技有限公司成都分公司进行测序，测序结果与GenBank基因数据库中16Sr DNA序列进行同源性比较分析，鉴定微生物种类，并进行系统发育树的构建，如图1所示。由此鉴定出菌株SR2为植物乳杆菌。
将植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SR2于2022年8月11日于广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为GDMCC No.62431，于2022年8月11日于广东省微生物菌种保藏中心保藏。
植物乳杆菌SR2益生菌特性测定
抑菌活性：菌株接种于MRS液体培养基中静置培养16h后，取菌液用牛津杯法测其抑菌活性。选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌进行试验。将待测乳酸菌悬液10000r/min离心15min，将牛津杯放入病原菌平板上，取200uL乳酸菌上清液加入牛津杯中，每个菌株做３个重复，对照组添加200uL无菌蒸馏水，将平板放入恒温培养箱中37℃培养48h，用游标卡尺测量抑菌圈直径。结果如表1：
表1 植物乳杆菌SR2的抑菌作用
胆盐耐受性试验：菌株接种于MRS液体培养基中静置培养16h后，取1mL接种于9 mL含0.1%、0.3%、0.5%胆盐的MRS肉汤中，37℃静置培养，12h和24h取样。对所有样品进行10倍倍比稀释，稀释至合适倍数，取200uL点涂于MRS平板，每个样品3次重复，统计菌株在不同胆盐浓度下的生长和存活情况。结果如表2：
表2 植物乳杆菌SR2耐胆盐试验分析
耐酸试验：将活化的菌种以2％的接种量分别接种pH3.0、pH4.0的MRS培养基中，37℃静置培养。取接种1、2、3和4h的培养液，对所有样品进行10倍倍比稀释，稀释至合适倍数，200μL点涂于MRS平板，每个样品3次重复，观察生长情况并计数。结果如表3:
表3 植物乳杆菌SR2耐酸试验分析
由上述表1-3可知，植物乳杆菌SR2对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有一定的抑制作用，且在在不同浓度的胆盐、强酸环境下均能存活一定时间。
实施例2
一种植物乳杆菌SR2的发酵和菌粉的制备，所述植物乳杆菌粉采用实施例1中得到的植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SR2菌株，所述植物乳杆菌于2022年8月11日保藏至广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.62431。
本发明中，植物乳杆菌粉的制备方法，包含以下步骤：
将植物乳杆菌SR2菌株接入MRS肉汤培养基，35~37℃培养18~24h，得到发酵液；将发酵液浓缩，向浓缩后的液体中添加脱脂奶粉和蔗糖，得到浓缩液；以及对浓缩液在真空低温干燥的条件下，进行喷雾方式干燥处理。其中，按浓缩液重量百分比计，所述脱脂奶粉为2~4%、蔗糖1~3%。
为了使植物乳杆菌SR2菌粉在常温下即可保存，作为另一种优选实施方式，将所述植物乳杆菌SR2菌粉通过微胶囊包埋技术制备为多层微胶囊植物乳杆菌粉。
优选的，制备为三层微胶囊植物乳杆菌粉，从里到外依次是植物乳杆菌粉、胶原蛋白质层、多糖体层，按照重量份数计，植物乳杆菌粉45~55份、胶原蛋白质10~20份、多糖体15~20份。
本实施例中，考虑包埋率及乳酸菌活性等因素，所述多层微胶囊植物乳杆菌粉的直径为10~90μm，小于10μm，包埋率较低且乳酸菌在肠道中的抗逆能力（耐胃酸、耐胆盐）大大降低；大于90μm，外层壁材过厚、乳酸菌在肠道中的定殖量不足。
实施例3-5是考察植物乳杆菌SR2制备得到宠物饲料添加剂对宠物生产情况、免疫能力、伤口愈合情况的影响。
白乌鱼又名白甲乌鳣，是四川省内江市水产所拥有自主知识产权的特色淡水鱼鱼种，肉质细嫩、营养价值高且具有去瘀生新、生肌补血、滋补调养之功效，深受消费欢迎。目前，白乌鱼主要以生鲜销售为主，出现鱼体加工利用率不高、浪费较大。在鱼类的精深加工方面，鱼鳞、鱼骨等通常被作为废弃物处理，而鱼骨占鱼体重量约20%~50%，造成了大量资源浪费。尤其鱼骨中含有大量的Ca、Fe、Zn等元素，是制作高钙产品的良好原料。而胶原肽主要是利用动物的皮、骨或明胶通过水解降解为小分子肽段制得，当其单条肽链的组成在两个氨基酸以上且分子量小于10kDa时，即为胶原肽。因此，可将白乌鱼的鱼鳞、鱼骨等余料制备得到白乌鱼胶原肽，再进一步应用到其他领域中。经研究发现，适量白乌鱼胶原肽可以有效的促进植物乳杆菌的生长，对宠物肠道内病原菌起到一定抑制作用。
益生菌因其对宿主动物有多方面的积极作用，包括改善免疫系统、促进消化改善肠道菌群、防止感染、提高生长性能等被应用于宠物食品。乳酸菌为最常见的益生菌，具有改善肠道菌群结构和提高机体免疫力的作用，还能将食品中的糖类、蛋白质、维生素和脂肪降解为肽和氨基酸等易吸收营养物质，促进机体消化。
本发明通过分离筛选出具有抗氧化性能的植物乳杆菌SR2菌株，与白乌鱼胶原蛋白肽共同作用，可以促进宠物吸收钙，有助于提高宠物免疫力、促进钙质吸收，并且有一定促进宠物创伤后愈合的功能。
本发明中，采用白乌鱼胶原肽粉与植物乳杆菌粉制备得到宠物饲料添加剂，宠物饲料添加剂具有改善肠道菌群结构和提高机体免疫力的作用，具有丰富营养的同时，具有一定的促进宠物创伤后愈合的功能。所述按重量份计，所述宠物饲料添加剂包含白乌鱼胶原肽粉15~25份和植物乳杆菌粉45~55份，其中，所述植物乳杆菌的活菌数均大于1×107cfu/g。
本发明中，所述白乌鱼胶原肽粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）原料预处理：取新鲜白乌鱼的鱼头、鱼皮、鱼骨和鱼鳞，进行清水冲洗，去除泥沙等杂质；
（2）原料熟化：将清洗后的原料放入容器加入水浸没，100℃蒸煮15~20min，将熟化的原料在缸内捣碎，降温至50℃~55℃并保持；
（3）原料酶解：在步骤（2）获得的捣碎料中加入少量醋酸，调节pH为6.2~6.7，加入酶解剂搅拌均匀，酶解7~9h得混合溶液；
（4）过滤：先使用滤布将混合溶液中明显的渣物过滤，再精密过滤，进行多层滤布加压过滤，离心得上清液为含胶原蛋白肽溶液；
（5）干燥浓缩：将胶原蛋白溶液蒸发浓缩6~7h至20%~45%，将浓缩液进行喷雾式干燥，得到白乌鱼胶原肽粉。
优选的，步骤（3）中酶解剂为动物蛋白酶和骨蛋白酶的复合酶解剂，动物蛋白酶和骨蛋白酶按质量比例计为1.5：0.5，添加量以白乌鱼原料质量计，添加2%。
优选的，所述步骤（3）、（4）、（5）的温度条件均为50~55℃。
优选的，所述宠物饲料添加剂还包含柠檬酸5份~10份、维生素2-3份。其中，所述维生素包括维生素A、维生素C、维生素E、维生素K、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、泛酸、烟酸、叶酸中任一种或多种。
实施例3
一种宠物饲料添加剂，按质量份数计，包括：白乌鱼胶原肽粉20份，柠檬酸8份、多层微胶囊植物乳杆菌粉45份，维生素2份。
本实施例中，所述多层微胶囊乳酸菌粉采用三层微胶囊包埋技术制成，从里到外依次是植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SR2粉、胶原蛋白质层、多糖体层，在多层微胶囊植物乳杆菌粉中各组分重量份比例是：植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SR2粉45份、胶原蛋白质10份、多糖体15份，制备得到的多层微胶囊植物乳杆菌粉直径为30~50μm。其中胶原蛋白质、多糖体均购于上海源叶生物科技有限公司。
按前述配比取各组分，再将白乌鱼胶原肽粉、柠檬酸、多层微胶囊植物乳杆菌粉、维生素混合搅拌均匀，得到含有白乌鱼胶原肽的宠物饲料添加剂。
其中，白乌鱼胶原肽粉和高活植物乳杆菌菌粉制备方法如下：
（1）白乌鱼胶原肽粉制备方法包括以下步骤：
a. 原料预处理：取新鲜白乌鱼的鱼头、鱼皮、鱼骨和鱼鳞，进行清水冲洗，去除泥沙等杂质；
b. 原料熟化：将清洗后的原料放入容器加入水浸没，100℃蒸煮20min，将熟化的原料在缸内捣碎，降温至55℃并保持；
c. 原料酶解：在捣碎料中加入少量醋酸，调节pH为6.5，加入动物蛋白酶和骨蛋白酶的复合酶解剂，比例为1.5：0.5，添加量以白乌鱼原料质量计，添加2%，搅拌均匀，酶解8h得混合溶液；
d. 过滤：先使用滤布将混合溶液中明显的渣物过滤：再精密过滤，进行多层滤布加压过滤，离心得上清液为含胶原蛋白肽溶液；
e. 干燥浓缩：将胶原蛋白溶液蒸发浓缩6h至35%，将浓缩液进行喷雾式干燥，得到白乌鱼胶原肽粉；
以上步骤温度条件均为55℃。
（2）高活性植物乳杆菌，活菌数为1×108cfu/g，制备方法包括以下步骤：
I. 将植物乳杆菌接入MRS肉汤培养基，35℃培养24h，获得3种菌株的发酵液；
II. 发酵结束，对发酵液进行浓缩得到浓缩液，在浓缩液中添加4%脱脂奶粉和1.5%蔗糖；
III. 所得浓缩液在真空低温干燥的条件下，进行喷雾方式干燥处理，制得植物乳杆菌粉剂。
实施例4
一种宠物饲料添加剂，按质量份数计，包括：白乌鱼胶原肽粉25份，柠檬酸10份、多层微胶囊植物乳杆菌粉50份，维生素3份。
本实施例中，多层微胶囊乳酸菌粉采用三层微胶囊包埋技术制成，从里到外依次是植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SR2粉、胶原蛋白质层、多糖体层，在多层微胶囊植物乳杆菌粉中各组分重量份比例是：植物乳杆菌SR2粉50份、胶原蛋白质20份、多糖体20份，制备得到的多层微胶囊植物乳杆菌粉直径为60~90um。其中，胶原蛋白质、多糖体均购于上海源叶生物科技有限公司。
按前述配比取各组分，再将白乌鱼胶原肽粉、柠檬酸、多层微胶囊植物乳杆菌粉、维生素混合搅拌均匀，得到含有白乌鱼胶原肽的宠物饲料添加剂。
其中，白乌鱼胶原肽粉和高活植物乳杆菌菌粉制备方法同实施例3。
实施例5
一种宠物饲料添加剂，按质量份数计，包括：白乌鱼胶原肽粉15份，柠檬酸5份、多层微胶囊植物乳杆菌粉55份，维生素2份。
本实施例中，多层微胶囊乳酸菌粉采用三层微胶囊包埋技术制成，从里到外依次是植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SR2粉、胶原蛋白质层、多糖体层，在多层微胶囊植物乳杆菌粉中各组分重量份比例是：植物乳杆菌SR2粉55份、胶原蛋白质10份、多糖体15份。多层微胶囊植物乳杆菌粉直径为10~40um。其中胶原蛋白质、多糖体均购于上海源叶生物科技有限公司。
按前述配比取各组分，再将白乌鱼胶原肽粉、柠檬酸、多层微胶囊植物乳杆菌粉、维生素混合搅拌均匀，得到含有白乌鱼胶原肽的宠物饲料添加剂。其中，白乌鱼胶原肽粉和高活植物乳杆菌菌粉制备方法同实施例3。
对比例1
与实施例3相比，区别在于，将植物乳杆菌SR2替换为公开号为CN112342160 A的专利文献中实施例中的植物乳杆菌（CGMCC NO.16942），并等量添加植物乳杆菌（CGMCCNO.16942），活菌数均为1×108CFU/g，其余步骤、参数条件等同实施例3，得到饲料添加剂。
对比例2
与实施例3相比，区别仅在于，将植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SR2菌粉替换为添加等量的干酪乳杆菌（购于北京万佳标准物质研发中心编号BWCC61730），干酪乳杆菌活菌数为1×108CFU/g，其余步骤、参数条件等同实施例3，得到饲料添加剂。
对比例3
与实施例3相比，区别仅在于，取消植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）SR2菌粉的添加。
对比例4
与实施例3相比，不同之处仅在于取消白乌鱼胶原肽粉的添加。
将实施例3-5、对比例1-4制备的宠物饲料添加剂进行性能检测。
实验例1 白乌鱼胶原肽粉对植物乳杆菌SR2的促生长试验
将活化好的SR2菌株按照1%比例分别接种于添加了0%、5%、10%、15%、20%、25%、30%白乌鱼胶原肽粉的100mL的MRS液体培养基；同时将活化的干酪乳杆菌按照1%接种于含白乌鱼胶原肽粉0%、15%的100mL的MRS液体培养基中，分别记为LC0、LC组。35℃，200 r/min的摇床培养，以无菌培养基作为对照，在培养时间为0、3、6、8、10、12、14、16、20、24、30h取样，分别测定发酵液的OD600值，结果如图2。
由图2结果可知，低量白乌鱼胶原肽粉对SR2的生长促进作用不明显，在15%-25%范围内SR2的生长较空白组有明显的增强；且LC0和LC两组变化不显著，可见添加白乌鱼胶原肽粉与否对干酪乳杆菌的生长没有影响。
动物试验
1、试验动物及分组
选用健康状况类似、体重相近、健康活泼的8月龄左右的宠物狗120只，按实施例3、实施例4、实施例5、对比例1、对比例2、对比例3和对比例4分为7组实验组以及1组对照组，每组15只，进行饲养试验，结果取平均值。
2.试验日粮
对照组饲喂基础日粮，实验组饲喂基础日粮+由（实施例3和对比例1-4）制得的宠物饲料添加剂，以基础日粮质量计，添加宠物饲料添加剂3%。其中，基础日粮为市售某狗粮，其基本配方为：鸡肉粉、玉米、胡罗卜、牛肝、燕麦、食用油、各种维生素及矿物质。
3.饲养管理。
控制变量使其他喂养条件均相同。试验开始前用基础日粮饲养3d，使其适应试验日粮和饲养环境后进入正式试验，饲期60天，每天早、中、晚三餐，给食以吃饱为原则，保证充足清洁饮水。
4.试验结果
（1）生长性能测试
分别于60天前后测量宠物狗的体重，计算宠物狗的增重。同时，每天观察狗狗的食欲、采食情况、饮水、排泄、毛发和精神情况，并做好相应的记录。其中，食欲10分制计量，采食量越多则分数越高；试验结束后检查宠物狗的毛发外观，通过观察和触摸感受毛发的柔顺度和光亮度断判，宠物狗的毛发外观均以10分制计，被毛越亮、越柔顺则分数越高；以及在饲养60天期间宠物狗出现患病、腹泻或消化不良数量，试验结果见表4。
表4宠物狗投喂不同宠物饲料添加剂的生长性能测定表
由表4可知，实施例3-5组在饲养期间显著提高宠物的体重且未出现患病的情况；毛色情况7组之间差异并不显著；在食欲考察项中，实施例3分值最高，对宠物狗更具适口性；实施例3-5组未出现消化不良和腹泻的情况，可以看出实施例3-5相比对照组以及对比例1-4的饲养效果更好且抵抗力更高，使宠物食欲大大提升。
（2）免疫球蛋白检测和钙含量检测
分别于60天后对试验狗进行采血，使用酶联生物免疫球蛋白ELISA检测试剂盒进行检测，使用金克隆血钙浓度检测试剂盒进行检测，数据如表5。
表5宠物狗投喂不同宠物饲料添加剂的免疫球蛋白、血钙含量测定表
免疫球蛋白存在于血液、淋巴液、组织液等体液中以及某些细胞表面的一类具有免疫功能的球蛋白分子，可保护身体免受外界的病原体或其他有害分子的攻击。IgA是体内分泌的主要免疫球蛋白，排除到粘膜表面并发挥抗菌作用，抗病毒的免疫球蛋白IgG中和毒素使其失去毒性，尤其是参与到体液免疫中，IgM在体内感染后由病原体通过补体结合溶解起到抗病原体感染的作用。
由表5可知，实施例3-5中宠物狗血液中免疫球蛋白IgA、IgG以及血钙含量与对照组和对比例1-4相比差异较为显著，而免疫球蛋白IgG与对照组和对比例1-4相比差异不显著，但仍高于其他组，可以看出实施例3-5添加剂的使用在宠物饲养期间有更好的效果。
（3）小鼠伤口愈合试验
伤口造模：对小鼠腹腔注射1.5%戊巴比妥钠麻醉，背部朝上，四肢用胶带固定。手术刀经消毒后，从距小鼠尾根部0.5cm处全层刮取1cm×0.3cm皮肤组织。将伤口造模后的小鼠设置正常饮食小鼠为对照组，在正常饮食中分别添加3%上述实施例3、对比例1、对比例2、对比例3和对比例4饲料添加剂的5组小鼠为试验组，每组3只小鼠，共计18只小鼠，饲期20天。控制小鼠周龄、饲养环境等其他条件均相同，小鼠购于成都达硕实验动物有限公司。
伤口面积测量：在伤口造模后第0、3、7、14、20天对未愈合伤口面积进行测量，结果用百分比表示，并设定造模当天为100%，取平均值，结果如表6。
表6 小鼠伤口面积比较（面积/%）
由表6可知，实施例3-5中小鼠伤口愈合速度明显大于对照组以及对比例1-4组，可以判断实施例2饲料添加剂有助于小鼠伤口愈合。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种植物乳杆菌SR2菌株，其保藏号为GDMCC No.62431。
2.一种含有权利要求1所述菌株的菌粉。
3.如权利要求2所述的菌粉，其特征在于，其制备方法步骤如下：
a. 将植物乳杆菌SR2接入MRS肉汤培养基，35~37℃温度条件下培养18~24h，得到发酵液；
b. 将发酵液浓缩，向浓缩后的液体中添加脱脂奶粉和蔗糖，得到浓缩液；
c.. 再将浓缩液在真空低温条件下进行干燥，进行喷雾方式干燥处理得到菌粉。
4.如权利要求3所述的菌粉，其特征在于：步骤b中，按浓缩液重量百分比计，所述脱脂奶粉含量为2~4%、蔗糖含量为1~3%。
5.一种如权利要求2所述的菌粉通过微胶囊包埋方法制备得到的多层微胶囊植物乳杆菌粉。
6.如权利要求5所述的多层微胶囊植物乳杆菌粉，其特征在于：多层微胶囊植物乳杆菌粉从里到外依次为菌粉、胶原蛋白质层和多糖体层，按质量份数计，多层微胶囊植物乳杆菌粉包括菌粉45~55份、胶原蛋白质10~20份、多糖体15~20份。
7.如权利要求5所述的多层微胶囊植物乳杆菌粉，其特征在于：所述多层微胶囊植物乳杆菌粉的直径为10~90μm。
8.一种含有如利要求2所述的植物乳杆菌的宠物饲料添加剂。
9.如权利要求8所述的宠物饲料添加剂，其特征在于，按重量份计，包括：白乌鱼胶原肽粉15~25份，菌粉45~55份，所述植物乳杆菌的活菌数大于1×108cfu/g。
10.一种如权利要求9所述的宠物饲料添加剂在宠物粮中的应用，所述宠物饲料添加剂占宠物量重量百分比的3%~5%。
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|---|---|---|---|---|
| CN117603890A (zh) * | 2024-01-24 | 2024-02-27 | 山东大益生物科技集团有限公司 | 一种植物乳杆菌lp23菌株及其应用 |
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