CN112730641B - 一种n-甲基哌嗪的离子色谱测定法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种N‑甲基哌嗪的离子色谱测定法，包括如下步骤：各试剂制备；取各试剂进行离子色谱法分析，色谱条件如下:色谱柱：阳离子交换色谱柱；洗脱液：8～20mM甲磺酸水溶液；流速：0.5～1.5ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl；设备：带电导检测器的离子交换色谱仪；抑制器：Dionex CSRS 4‑mm或同等产品；然后外标法测定。优点有：在极低的杂质量范围线性关系好，灵敏度高；分析时间较短，仅需10多分钟即可完成检测；离子色谱法操作简单，系统稳定，重现性较好。

Description

一种N-甲基哌嗪的离子色谱测定法
技术领域
本发明涉及微量分析技术领域，尤其涉及离子色谱法分析杂质的方法。
背景技术
由于一种药品从合成原料药到制备有关的制剂，再经贮藏、运输、使用，要经历一段较为复杂和漫长的过程，在此期间每一过程都可能产生有关的杂质，如生产中可能带入起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等；在贮藏和运输过程中可能产生降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。药品中的杂质泛指在药品的生产与储运过程中产生的工艺杂质或降解产物等。药品在临床使用中产生的不良反应除了与主成分的药理活性有关外，与药品中存在的杂质也有很大关系，药品中杂质的控制是药品研发的一个重要方面，也是临床使用安全性的保障。因此，为了保证药物的安全有效，同时也要考虑到生产实际情况，国内外在药物的研究过程中均将杂质检测作为控制药品质量的重要指标。药品杂质检测研究是目前我国药品研发中的薄弱点之一。要全面提升我国药品研发的水平、切实保证公众用药的安全性，必须重视并加强药品中有关杂质的研究。
枸橼酸西地那非(Sildenafil Citrate)分子式如式I所示，化学名称为“1-[4-乙氧基-3-[5-(6，7-二氢-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4，3d]嘧啶)]苯磺酰]-4- 甲基哌嗪枸橼酸盐”，是pfizer公司开发的一种环磷酸鸟苷(cGMP)特异的5 型磷酸二酯酶(PDE5)的选择性抑制剂，它是西地那非的枸橼酸盐，治疗勃起功能障碍的口服药物。
Figure BDA0002811845750000011
根据EP10.0枸橼酸西地那非的主要杂质如下：
Figure BDA0002811845750000021
西地那非在光照和高温的条件下可产生降解杂质D，同时产生另一降解产物N-甲基哌嗪。西地那非采用高效液相色谱法测定其有关物质，该方法无法对 N-甲基哌嗪进行有效检测。N-甲基哌嗪是可燃液体，对眼睛、皮肤及上呼吸道有刺激性，故对N-甲基哌嗪的含量进行检测，以达到控制药品质量的目的。
已有文献报导的相关内容有：“一种化工中间体中N-甲基哌嗪含量检测方法”，其中滴定法研究了氧氟沙星类、左氧氟沙星类药物合成中间体的“N-甲基哌嗪”的含量检测，主要思路是将“N-甲基哌嗪”置于冰乙酸的介质下，使原本碱性较弱的“N-甲基哌嗪”碱性相对增强，加乙酐除去冰乙酸和样品的水分，用结晶紫做指示剂，然后使用高氯酸滴定液滴定。该方法操作平行性较差，适合浓度较高的样品测定，不适合微量分析。
“气相色谱法测定左氧氟沙星中的N-甲基哌嗪”，采用了气相色谱法测定N- 甲基哌嗪。气相色谱法研究了左氧氟沙星中残留溶剂N-甲基哌嗪的含量测定方法。样品用哌啶溶解，色谱系统以CP-SiL8 CB CP7596(30m×0.32mm×1.0μm) 为色谱柱，采用程序升温模式。取N-甲基哌嗪作为外标物，按外标法以峰面积计算。但该气相色谱法检测的误差较大。
因此，需要针对枸橼酸西地那非原料中N-甲基哌嗪杂质建立起快速、简单、并且有效、可靠的检测分析方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种N-甲基哌嗪的离子色谱测定法，以解决现有检测方法误差大，不能微量分析杂质的问题。
为了达到上述目的本发明采用如下技术方案：
一种N-甲基哌嗪的离子色谱测定法，
包括如下步骤：
(1)各试剂制备：样品溶剂，空白溶液，对照品溶液和供试品溶液的制备；
(2)取步骤(1)各试剂进行离子色谱法分析，色谱条件如下:
色谱柱：阳离子交换色谱柱；
洗脱液：8～20mM甲磺酸水溶液；
流速：0.5～1.5ml/min；
柱温：30℃；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl；
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)；空白溶液；对照品溶液，最低n＝6(即最少进样6针)；供试品溶液；记录色谱图，外标法测定。
进一步地，所述阳离子交换色谱柱是Dionex IonPac SCS 1或IonPac CS17；规格均是250×4mm。
进一步地，步骤(1)试剂配制过程：
样品溶剂：水；
柠檬酸溶液：准确称量约600.0mg无水柠檬酸(或650.0mg一水合柠檬酸)，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度；
N-甲基哌嗪储备液：准确称量约200.0mg N-甲基哌嗪对照品，置100ml 容量瓶，用水稀释至刻度。取上述溶液1.0ml，用水稀释至100ml；
N-甲基哌嗪对照品溶液：取2.0ml柠檬酸溶液和2.0ml N-甲基哌嗪储备液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度；
供试品溶液：准确称量约40.0mg枸橼酸西地那非原料药，至20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度；
空白溶液：取2.0ml柠檬酸溶液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
进一步地，所述流速是1.0ml/min。
进一步地，所述流动相浓度是12mM甲磺酸水溶液。
进一步地，试验过程中洗涤所用的是水。
本发明的优点包括：针对枸橼酸西地那非原料中N-甲基哌嗪杂质建立起快速、简单、并且有效、可靠的检测分析方法。方法专属性良好；定量限可达到 5ng，检测限可达到2.5ng；在限度范围的50％～200％浓度范围内，线性良好；方法重复性良好；在一定范围内改变色谱条件耐用性良好。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明的不当限定，附图说明如下(因供试品中未检出N-甲基哌嗪，所以检测条件和检测方法研究部分采用对照品溶液进行)：
图1所示是采用IonPac CS17的对照品溶液标准图谱；
图2所示是采用IonPac SCS 1的对照品溶液标准图谱。
图3所示是浓度8mM甲磺酸水溶液的对照品溶液标准图谱；
图4所示是浓度12mM甲磺酸水溶液的对照品溶液标准图谱。
图5所示是浓度16mM甲磺酸水溶液的对照品溶液标准图谱；
图6所示是浓度20mM甲磺酸水溶液的对照品溶液标准图谱；
图7所示是流动相流速0.5ml/min的对照品溶液标准图谱；
图8所示是流动相流速1.0ml/min的对照品溶液标准图谱；
图9所示是流动相流速1.5ml/min的对照品溶液标准图谱；
图10所示是样品溶剂(水)的标准图谱；
图11所示是空白溶液(柠檬酸水溶液)的标准图谱；
图12所示是对照品溶液(N-甲基哌嗪)的标准图谱；
图13所示是供试品溶液(枸橼酸西地那非原料)的标准图谱；
图14所示是定量限样品的标准图谱；
图15所示是检测限样品的标准图谱；
图16所示是重复性溶液-1的标准图谱；
图17所示是重复性溶液-2的标准图谱；
图18所示是重复性溶液-3的标准图谱；
图19所示是重复性溶液-4的标准图谱；
图20所示是重复性溶液-5的标准图谱；
图21所示是重复性溶液-6的标准图谱；
图22所示是准确度溶液(限度浓度的50％)的标准图谱；
图23所示是准确度溶液(限度浓度的100％)的标准图谱；
图24所示是准确度溶液(限度浓度的200％)的标准图谱；
图25所示是线性溶液(50％)的标准图谱；
图26所示是线性溶液(80％)的标准图谱；
图27所示是线性溶液(100％)的标准图谱；
图28所示是线性溶液(150％)的标准图谱；
图29所示是线性溶液(200％)的标准图谱。
具体实施方式
下面将结合附图以及具体实施例来详细说明本发明，在此以本发明的示意性实施例及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
N-甲基哌嗪可与水以任意比例互溶，溶于水呈碱性，可采用阳离子色谱柱进行检测。本发明重点研究了色谱柱种类；洗脱液浓度和流速；检测方法学等。
试剂配制：
柠檬酸溶液：准确称量约600.0mg无水柠檬酸(或650.0mg一水合柠檬酸)，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。
N-甲基哌嗪储备液：准确称量约200.0mg N-甲基哌嗪对照品，置100ml 容量瓶，用水稀释至刻度。取上述溶液1.0ml，用水稀释至100ml。
N-甲基哌嗪对照品溶液：取2.0ml柠檬酸溶液和2.0ml N-甲基哌嗪储备液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
供试品溶液：准确称量约40.0mg枸橼酸西地那非原料药，至20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。
空白溶液：取2.0ml柠檬酸溶液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
如无特殊说明，下文实验采用柠檬酸溶液、N-甲基哌嗪储备液、N-甲基哌嗪对照品溶液、供试品溶液、空白溶液均如上述方法配制。
(一)检测条件的选择
1.色谱柱的选择
用N-甲基哌嗪对照品溶液按下面色谱条件进行试验：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪；
流动相：12mM甲磺酸水溶液；
色谱柱：IonPac CS17(250×4mm)；
柱温：30℃；
流动相流速：1.0ml/min；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液，记录色谱图。
如图1所示是采用IonPac CS17的对照品溶液标准图谱；
把色谱柱更换为IonPac SCS 1(250×4mm)，其余色谱条件与色谱柱为 IonPacCS17(250×4mm)试验时相同，进行试验，记录色谱图。
如图2所示是采用IonPac SCS 1的对照品溶液标准图谱。
结论：阳离子色谱柱Dionex IonPac SCS 1和IonPac CS17均可用于N-甲基哌嗪的检测。
2.甲磺酸水溶液的浓度选择
用N-甲基哌嗪对照品溶液按下面色谱条件进行试验：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪；
流动相：8mM甲磺酸水溶液；
色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；
柱温：30℃；
流动相流速：1.0ml/min；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液记录色谱图。
如图3所示是浓度8mM甲磺酸水溶液的对照品溶液标准图谱；
把流动相更换为12mM甲磺酸水溶液，其余色谱条件与8mM甲磺酸水溶液试验时相同，进行试验，记录色谱图。
如图4所示是浓度12mM甲磺酸水溶液的对照品溶液标准图谱。
把流动相更换为16mM甲磺酸水溶液，其余色谱条件与8mM甲磺酸水溶液试验时相同，进行试验，记录色谱图。
如图5所示是浓度16mM甲磺酸水溶液的对照品溶液标准图谱；
把流动相更换为20mM甲磺酸水溶液，其余色谱条件与8mM甲磺酸水溶液试验时相同，进行试验，记录色谱图。
如图6所示是浓度20mM甲磺酸水溶液的对照品溶液标准图谱；
结论：随着洗脱液中甲磺酸离子浓度的增加，N-甲基哌嗪的出峰时间提前，当甲磺酸离子浓度为12mM时，N-甲基哌嗪的的出峰时间约为13min，出峰时间较为合适，出峰时间太长，实验时间延长；出峰时间太短，存在空白峰干扰和分离度不佳的情况。
3.流动相流速的选择
按下面色谱条件进行试验：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪
流动相：12mM甲磺酸水溶液
色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；
柱温：30℃；
流动相流速：0.5ml/min；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液，记录色谱图。
如图7所示是流动相流速0.5ml/min的对照品溶液标准图谱；
把流动相流速更换为1.0ml/min，其余色谱条件与流动相流速为0.5ml/ min试验时相同，进行试验，记录色谱图。
如图8所示是流动相流速1.0ml/min的对照品溶液标准图谱；
把流动相流速更换为1.5ml/min，其余色谱条件与流动相流速为0.5ml/ min试验时相同，进行试验，记录色谱图。
如图9所示是流动相流速1.5ml/min的对照品溶液标准图谱；
结论：随着流动相中甲磺酸水溶液流速的增加，N-甲基哌嗪的出峰时间提前，当甲磺酸水溶液的流速为1.0ml/min时，N-甲基哌嗪的出峰时间约为13min，出峰时间较为合适，出峰时间太长，实验时间延长，且峰形较差；出峰时间太短，存在空白峰干扰和分离度不佳的情况；且流速较大时，柱压升高，影响色谱柱和离子色谱仪使用寿命。
(二)检测方法学研究
1、专属性研究：
分别配制样品稀释溶剂(水)，柠檬酸水溶液(空白溶液)，对照品溶液(N- 甲基哌嗪)；供试品溶液(枸橼酸西地那非原料)，按下面色谱条件进行专属性试验。
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪
流动相：12mM甲磺酸水溶液
色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；
柱温：30℃；
流动相流速：1.0ml/min；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图。
如图10所示是样品溶剂(水)的标准图谱；
如图11所示是空白溶液(柠檬酸水溶液)的标准图谱；
如图12所示是对照品溶液(N-甲基哌嗪)的标准图谱；
如图13所示是供试品溶液(枸橼酸西地那非原料)的标准图谱；
结论：水和柠檬酸水溶液在N-甲基哌嗪出峰位置没有干扰，检测方法的专属性良好。
2、检测限和定量限研究
稀释N-甲基哌嗪对照品溶液至浓度为0.5mg/ml作为定量限样品；稀释N-甲基哌嗪对照品溶液至浓度为0.25mg/ml作为检测限样品。按下面色谱条件进行试验，根据信噪比确定检测限和定量限：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪
流动相：12mM甲磺酸水溶液
色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；
柱温：30℃；
流动相流速：1.0ml/min；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，定量限样品和检测限样品，记录色谱图。
如图14所示是定量限样品的标准图谱；
如图15所示是检测限样品的标准图谱；
结论：检测限样品浓度为0.5mg/ml，进样量为5ng，N-甲基哌嗪峰信噪比为11.8；定量限样品浓度为0.25mg/ml，进样量为2.5ng，N-甲基哌嗪峰信噪比为6.5；该方法检测线和定量限较低，方法灵敏度良好。
3、精密度研究
重复性溶液：准确称量约40.0mg枸橼酸西地那非原料药，至20ml容量瓶中，取2.0ml N-甲基哌嗪储备液，至同一20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。平行配制6份，通过N-甲基哌嗪出峰时间和峰面积评价方法的精密度 (重复性)，色谱试验条件如下：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪
流动相：12mM甲磺酸水溶液
色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；
柱温：30℃；
流动相流速：1.0ml/min；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，重复性溶液(n＝6)，记录色谱图。
如图16所示是重复性溶液-1的标准图谱；
如图17所示是重复性溶液-2的标准图谱；
如图18所示是重复性溶液-3的标准图谱；
如图19所示是重复性溶液-4的标准图谱；
如图20所示是重复性溶液-5的标准图谱；
如图21所示是重复性溶液-6的标准图谱；
结论：重复性溶液平行6份样品，N-甲基哌嗪峰出峰时间的RSD(n＝6)为 0.1％，N-甲基哌嗪峰峰面积的RSD(n＝6)为1.4％，重复性良好。
4、准确度研究
准确度溶液(限度浓度的50％)：准确称量约40.0mg枸橼酸西地那非原料药，至20ml容量瓶中，取1.0ml N-甲基哌嗪储备液，至同一20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。
准确度溶液(限度浓度的100％)：准确称量约40.0mg枸橼酸西地那非原料药，至20ml容量瓶中，取2.0ml N-甲基哌嗪储备液，至同一20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。
准确度溶液(限度浓度的200％)：准确称量约40.0mg枸橼酸西地那非原料药，至20ml容量瓶中，取4.0ml N-甲基哌嗪储备液，至同一20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。
按以下色谱条件做试验：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪
流动相：12mM甲磺酸水溶液
色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；
柱温：30℃；
流动相流速：1.0ml/min；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，准确度溶液(限度浓度的50％)，准确度溶液(限度浓度的100％)和准确度溶液(限度浓度的200％)，记录色谱图。
如图22所示是准确度溶液(限度浓度的50％)的标准图谱；
如图23所示是准确度溶液(限度浓度的100％)的标准图谱；
如图24所示是准确度溶液(限度浓度的200％)的标准图谱；
结论：准确度溶液不同浓度(限度浓度的50％，100％和200％)，N-甲基哌嗪的回收率均在95％～105％范围内，准确度良好。
5、线性和范围研究
线性溶液(50％)：取1.0ml N-甲基哌嗪储备液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
线性溶液(80％)：取1.6ml N-甲基哌嗪储备液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
线性溶液(100％)：取2.0ml N-甲基哌嗪储备液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
线性溶液(150％)：取3.0ml N-甲基哌嗪储备液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
线性溶液(200％)：取4.0ml N-甲基哌嗪储备液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度。按以下色谱条件进行试验：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪
流动相：12mM甲磺酸水溶液
色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；
柱温：30℃；
流动相流速：1.0ml/min；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，线性溶液(50％)，线性溶液(80％)，线性溶液(100％)，线性溶液(150％)和线性溶液(200％)，记录色谱图。
如图25所示是线性溶液(50％)的标准图谱；如图26所示是线性溶液(80％) 的标准图谱；如图27所示是线性溶液(100％)的标准图谱；如图28所示是线性溶液(150％)的标准图谱；如图29所示是线性溶液(200％)的标准图谱；
结论：N-甲基哌嗪在1mg/ml～4mg/ml浓度范围内，线性方程R2为 0.994，浓度和峰面积线性关系良好。
6、耐用性研究
考察小范围内的色谱条件变化方法的耐用性。方法和图谱可参考检测条件的选择：色谱住的选择；甲磺酸水溶液浓度的选择和流动相流速的选择。
结论：色谱条件(包括色谱柱，流动相流速和流动相浓度)在一定范围内改变，方法的耐用性良好。
从以上试验可知，本发明方法针对枸橼酸西地那非原料药中的N-甲基哌嗪有良好的检测效果。针对枸橼酸西地那非原料中N-甲基哌嗪杂质建立起快速、简单、并且有效、可靠的检测分析方法。空白溶液不存在干扰，方法专属性良好；定量限可达到5ng，检测限可达到2.5ng，方法灵敏度高；在限度范围的 50％～200％浓度范围内，线性良好；方法重复性良好；在一定范围内改变色谱条件耐用性良好。
基于上述试验，下面例举7个实施例：
实施例1
色谱条件：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪流动相：12mM甲磺酸水溶液色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；柱温：30℃；流动相流速：1.0ml/min；抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；进样量：10μl；洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液(最低n＝6)和供试品溶液，记录色谱图，外标法测定。
实施例2
色谱条件：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪流动相：12mM甲磺酸水溶液色谱柱：IonPac CS17；250×4mm；柱温：30℃；流动相流速：1.0ml/min；抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；进样量：10μl；洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液(最低n＝6)和供试品溶液，记录色谱图，外标法测定。
实施例3
色谱条件：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪流动相：8mM甲磺酸水溶液色谱柱： IonPacSCS 1；250×4mm；柱温：30℃；流动相流速：1.0ml/min；抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；进样量：10μl；洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液(最低n＝6)和供试品溶液，记录色谱图，外标法测定。
实施例4
色谱条件：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪；流动相：16mM甲磺酸水溶液；色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；柱温：30℃；流动相流速：1.0ml/min；抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；进样量：10μl；洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液(最低n＝6)和供试品溶液，记录色谱图，外标法测定。
实施例5
色谱条件：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪流动相：20mM甲磺酸水溶液色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；柱温：30℃；流动相流速：1.0ml/min；抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；进样量：10μl；洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液(最低n＝6)和供试品溶液，记录色谱图，外标法测定。
实施例6
色谱条件：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪；流动相：12mM甲磺酸水溶液；色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；柱温：30℃；流动相流速：0.5ml/min；抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；进样量：10μl；洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液(最低n＝6)和供试品溶液，记录色谱图，外标法测定。
实施例7
色谱条件：
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪；流动相：12mM甲磺酸水溶液；色谱柱：IonPac SCS 1；250×4mm；柱温：30℃；流动相流速：1.5ml/min；抑制器：Dionex CSRS 4-mm或同等产品；进样量：10μl；洗涤量：最小500μl(水)；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂(水)，空白溶液，对照品溶液(最低n＝6)和供试品溶液，记录色谱图，外标法测定。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (6)

1.一种枸橼酸西地那非原料药中N-甲基哌嗪的离子色谱测定法，其特征在于：
包括如下步骤：
(1)各试剂制备：样品溶剂，空白溶液，对照品溶液和供试品溶液的制备；
(2)取步骤(1)各试剂进行离子色谱法分析，色谱条件如下:
色谱柱：Dionex IonPac SCS 1或IonPac CS17；
流动相：8～20mM甲磺酸水溶液；
流速：0.5～1.5ml/min；
柱温：30℃；
进样量：10μl；
洗涤量：最小500μl；
设备：带电导检测器的离子交换色谱仪；
抑制器：Dionex CSRS 4-mm；
程序：用流动相平衡色谱柱后，进样：样品溶剂；空白溶液；对照品溶液，最低n＝6；和供试品溶液；记录色谱图，外标法测定。
2.根据权利要求1所述的一种枸橼酸西地那非原料药中N-甲基哌嗪的离子色谱测定法，其特征在于：
所述色谱柱的规格是250×4mm。
3.根据权利要求1所述的一种枸橼酸西地那非原料药中N-甲基哌嗪的离子色谱测定法，其特征在于：
步骤(1)试剂配制过程：
样品溶剂：水；
柠檬酸溶液：准确称量约600.0mg无水柠檬酸或650.0mg一水合柠檬酸，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度；
N-甲基哌嗪储备液：准确称量约200.0mg N-甲基哌嗪对照品，置100ml容量瓶，用水稀释至刻度，取上述溶液1.0ml，用水稀释至100ml；
N-甲基哌嗪对照品溶液：取2.0ml柠檬酸溶液和2.0ml N-甲基哌嗪储备液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度；
供试品溶液：准确称量约40.0mg枸橼酸西地那非原料药，至20ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度；
空白溶液：取2.0ml柠檬酸溶液，至20ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
4.根据权利要求1所述的一种枸橼酸西地那非原料药中N-甲基哌嗪的离子色谱测定法，其特征在于：
所述流速是1.0ml/min。
5.根据权利要求1所述的一种枸橼酸西地那非原料药中N-甲基哌嗪的离子色谱测定法，其特征在于：
所述流动相浓度是12mM。
6.根据权利要求1所述的一种枸橼酸西地那非原料药中N-甲基哌嗪的离子色谱测定法，其特征在于：
试验过程中洗涤所用的是水。
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