CN114047279B - 一种高效液相色谱-质谱联用测定药物中间体及原料药中n-甲基哌嗪残留量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高效液相色谱‑质谱联用测定药物中间体及原料药中N‑甲基哌嗪残留量的方法，采用外标法定量。本发明采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲酸铵缓冲液与甲酸的乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱，定量离子对为101.1/58.1，用于测定以N‑甲基哌嗪为起始原料合成的药物中间体及原料药中N‑甲基哌嗪的残留量。本发明所涉及的方法可满足N‑甲基哌嗪快速准确测定的要求，尤其是实现N‑甲基哌嗪的高灵敏度检测，可用于药物中间体及原料药的质量控制。

Description

一种高效液相色谱-质谱联用测定药物中间体及原料药中N- 甲基哌嗪残留量的方法
技术领域
本发明涉及一种高效液相色谱-质谱联用方法，特别是一种高效液相色谱-质谱联用测定药物中间体及原料药中N-甲基哌嗪残留量的方法，属于药物分析检测技术领域。
背景技术
N-甲基哌嗪在医药工业中使用广泛，既可以用于合成抗菌素类药物甲哌利福霉素、抗精神病药三氟拉嗪等，又可以用作氧氟沙星、氯氮平、西地那非、吐立抗、佐匹克隆、甲磺酸伊马替尼等药物合成的起始原料。其结构式为：
N-甲基哌嗪为药物中间体或原料药中引入的有机杂质，为保证药品质量，需测定N-甲基哌嗪的残留量。有文献报道(中国现代应用药学，30(3)：319-321及中国环境监测，19(4):50-51)用直接进样气相色谱法测定氧氟沙星和诺氟沙星中N-甲基哌嗪和哌嗪的残留量，该方法专属性好，准确可靠，可为其它氟喹诺酮类药物中N-甲基哌嗪和哌嗪的检测提供参考。我们曾试验采用直接进样气相色谱法测定，N-甲基哌嗪对照品峰对称性好，连续进样精密度好，但是供试品溶液在N-甲基哌嗪峰处有干扰，不能准确测定其含量；另试验采用衍生试剂衍生后进行气相色谱法测定，经试验表明，N-甲基哌嗪衍生物响应值小，衍生试验操作繁琐，重复性差，且衍生物不稳定，连续进样精密度差。
在本发明中，采用LC-MS/MS法，用MRM扫描模式测定N-甲基哌嗪的残留量。该方法专属性强，灵敏度高，检出限为6.0ng/mL，以供试品溶液的浓度计为0.002％，能准确、快速测定多种药品中间体或原料药中N-甲基哌嗪的残留量，进一步保证了药物中间体或原料药的质量可控，具有现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效液相色谱-质谱联用方法，可满足N-甲基哌嗪痕量检测的需要，具有检测时间短、专属性强、灵敏度高的特点，从而实现对药物中间体及原料药的质量控制。
为了实现上述目的，本发明以伊马替尼中N-甲基哌嗪的残留量检测为例，采用的技术方案是：一种高效液相色谱-质谱联用测定药物中间体及原料药中N-甲基哌嗪残留量的方法，包括如下步骤：
(1)精密称定待测样品适量，加水或甲醇-水溶液溶解并定量稀释制成0.3mg/mL的溶液，即供试品溶液；另取N-甲基哌嗪对照品精密称定，加水或甲醇-水溶液溶解并定量稀释制成0.15μg/mL的溶液，即对照品溶液。
(2)精密量取N-甲基哌嗪对照品溶液1μL注入液相色谱仪，记录色谱图，N-甲基哌嗪峰的信噪比应不小于10，连续进样6次，N-甲基哌嗪峰面积的相对标准偏差不超过10％。另取空白溶剂1μL注入液相色谱仪，记录色谱图，空白溶剂对N-甲基哌嗪的测定无干扰。即该方法符合系统适应性要求，专属性强。
(3)精密量取供试品溶液和对照品溶液各1μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算N-甲基哌嗪的残留量，应不得过0.05％。计算公式如下：
式中Ax为供试品溶液中N-甲基哌嗪峰面积；
AR为对照品溶液的峰面积；
CR为对照品的浓度，mg/mL；
Cx为供试品的浓度，mg/mL。
本发明所述的一种测定N-甲基哌嗪残留量的高效液相色谱-质谱联用方法，选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相流速为0.6mL/min；流动相A:0.01～0.02mol/L甲酸铵缓冲液，pH值为2.0～4.0，流动相B:甲酸:乙腈＝0.06～0.10：100；洗脱梯度为：0～6min，80％流动相A，20％流动相B；6～9min，80～20％流动相A，20～80％流动相B；9～15min，20％流动相A，80％流动相B；ESI离子源，正离子模式，温度600℃，离子对：101.1/58.1，采用MRM方式进行扫描。
本发明所述的一种测定N-甲基哌嗪残留量的高效液相色谱-质谱联用方法，已经进行了方法学验证，结果表明：N-甲基哌嗪对照品浓度在0.04～0.40μg/mL范围内，浓度与峰面积之间线性关系良好，N-甲基哌嗪检测限度为6.0ng/mL，以供试品溶液的浓度计为0.002％；N-甲基哌嗪定量限度为20ng/mL，连续进样6次，峰面积RSD为1.5％；流速、柱温、离子源温度在耐用性范围内变动时，对N-甲基哌嗪的测定无影响，表明该方法耐用性良好。
本发明的突出优点在于：能够改善传统气相色谱方法及衍生化气相色谱法操作繁琐、重复性差、且衍生物不稳定、连续进样精密度差等缺点。该方法专属性强，灵敏度高，能准确、快速测定多种药品中间体或原料药中N-甲基哌嗪的残留量，进一步保证了中间体或原料药的质量可控，具有现实意义。
附图说明
图1 LC-MS/MS法测定空白溶剂图谱(色谱条件1)。
图2 LC-MS/MS法测定对照品溶液图谱(色谱条件1)。
图3 LC-MS/MS法测定供试品溶液图谱(色谱条件1)。
图4 LC-MS/MS法测定对照品溶液图谱(色谱条件2)。
图5 LC-MS/MS法测定供试品溶液图谱(色谱条件2)。
图6 LC-MS/MS法测定对照品溶液图谱(色谱条件3)。
图7 LC-MS/MS法测定供试品溶液图谱(色谱条件3)。
具体实施方式
以下给出的实施例对本发明作进一步的说明，但不限于本实施例的范围。
实施例1系统适应性测定-色谱条件1
1.高效液相色谱工作条件：
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
流动相A：0.01mol/L甲酸铵溶液(甲酸调节pH为4.0)；流动相B：甲酸:乙腈＝0.06：100；洗脱梯度为：0～6min，80％流动相A，20％流动相B；6～9min，80～20％流动相A，20～80％流动相B；9～15min，20％流动相A，80％流动相B；
流动相流速：0.6mL/min；进样体积：1μL；
质谱工作条件：
电喷雾电离源(ESI)，正离子模式检测，离子源温度600℃，去簇电压为59V，扫描方式：多反应监测(MRM)扫描，离子对：101.1/58.1。
2.实验步骤
精密称取N-甲基哌嗪对照品适量，加水溶液溶解并定量稀释制成0.15μg/mL的溶液，作为N-甲基哌嗪对照品溶液；精密量取1μL注入液相色谱仪，N-甲基哌嗪峰的信噪比为50，连续进样6次，N-甲基哌嗪峰面积相对标准偏差为1.8％，小于10％，均符合系统适用性试验要求。取空白溶剂1μL注入液相色谱仪，空白溶剂对N-甲基哌嗪测定无干扰，色谱图见图1。
实施例2 N-甲基哌嗪测定-色谱条件1
1.高效液相色谱工作条件：
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
流动相A：0.01mol/L甲酸铵溶液(甲酸调节pH为4.0)；流动相B：甲酸:乙腈＝0.06：100；洗脱梯度为：0～6min，80％流动相A，20％流动相B；6～9min，80～20％流动相A，20～80％流动相B；9～15min，20％流动相A，80％流动相B；
流动相流速：0.6mL/min；进样体积：1μL；
质谱工作条件：
电喷雾电离源(ESI)，正离子模式检测，离子源温度600℃，去簇电压为59V，扫描方式：多反应监测(MRM)扫描，离子对：101.1/58.1。
2.实验步骤
精密称取N-甲基哌嗪对照品适量，加水溶解并定量稀释制成0.15μg/mL的溶液，作为N-甲基哌嗪对照品溶液。
取原料药适量，用水溶解，加水溶液溶解并定量稀释制成0.3mg/mL的溶液，作为供试品溶液。
精密量取供试品溶液和对照品溶液各1μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算N-甲基哌嗪的含量，N-甲基哌嗪未检出，色谱图见图2～图3。
实施例3 N-甲基哌嗪测定-色谱条件2
1.高效液相色谱工作条件：
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
流动相A：0.02mol/L甲酸铵溶液(甲酸调节pH为2.0)；流动相B：甲酸:乙腈＝0.10：100；洗脱梯度为：0～6min，80％流动相A，20％流动相B；6～9min，80～20％流动相A，20～80％流动相B；9～15min，20％流动相A，80％流动相B；
流动相流速：0.6mL/min；进样体积：1μL；
质谱工作条件：
电喷雾电离源(ESI)，正离子模式检测，离子源温度600℃，去簇电压为59V，扫描方式：多反应监测(MRM)扫描，离子对：101.1/58.1。
2.实验步骤
精密称取N-甲基哌嗪对照品适量，加水溶液溶解并定量稀释制成0.15μg/mL的溶液，作为N-甲基哌嗪对照品溶液。
取原料药适量，用水溶解，加水溶液溶解并定量稀释制成0.3mg/mL的溶液，作为供试品溶液。
精密量取供试品溶液和对照品溶液各1μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算N-甲基哌嗪的含量，N-甲基哌嗪未检出，色谱图见图4～图5。
实施例4 N-甲基哌嗪测定-色谱条件3
1.高效液相色谱工作条件：
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
流动相A：0.01mol/L甲酸铵溶液(甲酸调节pH为4.0)；流动相B：甲酸:乙腈＝0.10：100；洗脱梯度为：0～6min，80％流动相A，20％流动相B；6～9min，80～20％流动相A，20～80％流动相B；9～15min，20％流动相A，80％流动相B；
流动相流速：0.6mL/min；进样体积：1μL；
质谱工作条件：
电喷雾电离源(ESI)，正离子模式检测，离子源温度600℃，去簇电压为59V，扫描方式：多反应监测(MRM)扫描，离子对：101.1/58.1。
2.实验步骤
精密称取N-甲基哌嗪对照品适量，加水溶液溶解并定量稀释制成0.15μg/mL的溶液，作为N-甲基哌嗪对照品溶液。
取原料药适量，用水溶解，加水溶液溶解并定量稀释制成0.3mg/mL的溶液，作为供试品溶液。
精密量取供试品溶液和对照品溶液各1μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算N-甲基哌嗪的含量，N-甲基哌嗪未检出，色谱图见图6～图7。

Claims (2)

1.一种高效液相色谱-质谱联用测定药物中间体及原料药中N-甲基哌嗪残留量的方法，其特征在于，包括以下几个步骤：
（1）取N-甲基哌嗪对照品适量，用水或甲醇-水溶液溶解并稀释制成每1mL中含N-甲基哌嗪0.15μg的溶液，作为对照品溶液；
（2）取药物中间体或原料药适量，用水或甲醇-水溶液溶解并稀释制成每1mL含药物中间体或原料药0.3mg的溶液，作为供试品溶液；
（3）所述液相色谱的工作条件为：选用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相流速为0.6mL/min；流动相A: 0.01~0.02mol/L甲酸铵-甲酸缓冲液，pH值为2.0~4.0，流动相B: 甲酸:乙腈=0.06~0.10：100；洗脱梯度为：0~6min，80%流动相A，20%流动相B；6~9min，80~20%流动相A，20~80%流动相B；9~15min，20%流动相A，80%流动相B；
所述质谱的工作条件为：采用电喷雾电离源(ESI)，正离子模式检测；离子源温度为600℃；去簇电压为59V；多反应监测（MRM）扫描，离子对为101.1/58.1；
（4）取步骤（1）、（2）的对照品溶液及供试品溶液各1μL进样，用外标法计算，完成N-甲基哌嗪残留量的测定。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤（1）对照品溶液中N-甲基哌嗪峰的信噪比应不小于10，连续进样6次，N-甲基哌嗪峰面积相对标准偏差不得过10%。
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