CN112640782A - 橙黄玉凤花的组织培养方法 - Google Patents

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Abstract

本申请提供一种橙黄玉凤花的组织培养方法。上述的橙黄玉凤花的组织培养方法包括如下步骤：获取橙黄玉凤花的外植体；对外植体进行消毒处理；对消毒处理后的外植体进行刮皮处理；对刮皮处理后的外植体进行接种培养操作，得到外植体丛生芽；对外植体丛生芽进行增殖生根培育操作，得到无菌瓶苗；对无菌瓶苗进行驯化栽培操作，获得橙黄玉凤花。上述的橙黄玉凤花的组织培养方法提高了橙黄玉凤花的增殖效率以及确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。

Description

橙黄玉凤花的组织培养方法
技术领域
本发明涉及组织培养技术领域，特别是涉及一种橙黄玉凤花的组织培养方法。
背景技术
橙黄玉凤花属兰科玉凤花属多年生草本植物，产江西、福建、湖南、广东等地，生于海拔300米～1500米的山坡或沟谷林下阴处地上或岩石上覆土中，橙黄玉凤花株型优雅，花型优美，花色新奇，花极美丽，具有很好的观赏价值。除观赏价值外，橙黄玉凤花对治疗肺热咳嗽、疮疡肿毒、跌打损伤有一定药效，具有清热解毒、活血止痛的药用价值。
在我国，极少栽培橙黄玉凤花，人们过度采摘野生资源，使橙黄玉凤花日见枯竭。《濒危野生动植物种国际贸易公约》已经将橙黄玉凤花作为保护物种，中国《野生植物保护名录》中也将橙黄玉凤花划为保护植物。且橙黄玉凤花野生种群的繁育能力低下，橙黄玉凤花的种子细小，野外萌发率极低，实生苗少，使得橙黄玉凤花的种子对种群的更新和维持贡献较小，自然繁殖系数较低，当橙黄玉凤花的母株受到侵害时，直接影响到橙黄玉凤花种群数量的稳定性，使得橙黄玉凤花中较小的种群存在随时灭绝的可能性。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足之处，提供一种能提高橙黄玉凤花的增殖效率和能确保橙黄玉凤花的种群数量稳定性的橙黄玉凤花的组织培养方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种橙黄玉凤花的组织培养方法，包括如下步骤：
获取橙黄玉凤花的外植体；
对所述外植体进行消毒处理；
对消毒处理后的所述外植体进行刮皮处理；
对刮皮处理后的所述外植体进行接种培养操作，得到外植体丛生芽；
对所述外植体丛生芽进行增殖生根培育操作，得到无菌瓶苗；
对所述无菌瓶苗进行驯化栽培操作，获得橙黄玉凤花。
在其中一个实施例中，在所述获取橙黄玉凤花的外植体的步骤中，所述橙黄玉凤花的所述外植体为处于生长期的橙黄玉凤花的球茎。
在其中一个实施例中，所述对所述外植体进行消毒处理，包括如下步骤：
对所述外植体进行污物清洗操作；
对清洗操作后的所述外植体进行超声操作；
对超声操作后的所述外植体进行杀菌操作。
在其中一个实施例中，所述对所述外植体进行污物清洗操作为在流水条件下，对所述外植体表面的土壤和杂质进行清除。
在其中一个实施例中，所述对清洗操作后的所述外植体进行超声操作为采用杀菌剂对所述外植体进行超声清洗，且采用无菌水对超声清洗后的所述外植体进行冲洗。
在其中一个实施例中，所述对超声操作后的所述外植体进行杀菌操作为分别采用酒精和升汞对所述外植体进行消毒，并采用无菌水对消毒后的所述外植体进行冲洗。
在其中一个实施例中，在温度25℃～30℃和光照强度1800Lux～2300Lux的条件下，对所述外植体丛生芽进行增殖生根培育操作。
在其中一个实施例中，在对所述外植体丛生芽进行增殖生根培育操作步骤中，所述外植体丛生芽的光培养时间为12h/d～15h/d，剩余时间进行暗培养。
在其中一个实施例中，在相对湿度60％～80％和光照强度1000Lux～3000Lux的条件下，对所述无菌瓶苗进行驯化栽培操作。
在其中一个实施例中，在所述对所述无菌瓶苗进行驯化栽培操作的步骤之后，且在所述获得橙黄玉凤花的步骤之前，所述橙黄玉凤花的组织培养方法还包括如下步骤：在林分郁闭度为0.4～0.8的条件下，对所述无菌瓶苗进行野外栽培定植操作。
与现有技术相比，本发明至少具有以下优点：
本发明橙黄玉凤花的组织培养方法中，采用橙黄玉凤花的外植体进行增殖培养，避免了橙黄玉凤花的通过种子培育得到的橙黄玉凤花植株存在或多或少的变异，使得野生橙黄玉凤花的优良品种逐渐消逝的问题，维持了橙黄玉凤花母体的优良性能，并且对外植体进行消毒处理和刮皮处理，有效地减少了橙黄玉凤花外植体上的微生物的数量，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明一实施方式的橙黄玉凤花的组织培养方法的流程图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施方式。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明的公开内容理解的更加透彻全面。
需要说明的是，当元件被称为“固定于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的，并不表示是唯一的实施方式。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本申请提供一种橙黄玉凤花的组织培养方法。上述的橙黄玉凤花的组织培养方法包括如下步骤：获取橙黄玉凤花的外植体；对外植体进行消毒处理；对消毒处理后的外植体进行刮皮处理；对刮皮处理后的外植体进行接种培养操作，得到外植体丛生芽；对外植体丛生芽进行增殖生根培育操作，得到无菌瓶苗；对无菌瓶苗进行驯化栽培操作，获得橙黄玉凤花。
上述的橙黄玉凤花的组织培养方法中，采用橙黄玉凤花的外植体进行增殖培养，避免了橙黄玉凤花的通过种子培育得到的橙黄玉凤花植株存在或多或少的变异，使得野生橙黄玉凤花的优良品种逐渐消逝的问题，维持了橙黄玉凤花母体的优良性能，并且对外植体进行消毒处理和刮皮处理，有效地减少了橙黄玉凤花外植体上的微生物的数量，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
为了更好地理解本申请的橙黄玉凤花的组织培养方法，以下对本申请的橙黄玉凤花的组织培养方法作进一步的解释说明，请一并参阅图1，本申请的橙黄玉凤花的组织培养方法包括如下步骤：
S100、获取橙黄玉凤花的外植体。可以理解，橙黄玉凤花的种子的成熟期为秋季，并且由于秋季成熟的橙黄玉凤花的种子在长期贮存过程中容易受到附着的微生物的影响会失去活性，因此，若采用橙黄玉凤花的种子进行组织培养，则需要在橙黄玉凤花的种子的成熟期秋季进行，可选的繁殖培育时间较短，限制了橙黄玉凤花的繁殖培育时间，进而限制了橙黄玉凤花的规模化生产，因此，在本申请中采用橙黄玉凤花的外植体进行增殖分化得到橙黄玉凤花幼苗，橙黄玉凤花的外植体一年四季均可采摘，并且使用橙黄玉凤花的外植体进行增殖分化得到橙黄玉凤花幼苗，减少了橙黄玉凤花种子增殖分化成原球茎的时间，缩短了橙黄玉凤花幼苗的繁殖培育周期，并且橙黄玉凤花的外植体进行增殖分化得到橙黄玉凤花幼苗具备野外橙黄玉凤花的遗传性能，提高了得到橙黄玉凤花幼苗的质量，克服了橙黄玉凤花野外萌发率极低的现状，实现了橙黄玉凤花的规模化生产。
S200、对外植体进行消毒处理。可以理解，橙黄玉凤花的增殖分化能力较强的部分埋植于土壤中，土壤中存在较多的微生物，使得埋植于土壤中的橙黄玉凤花的外植体上附着有较多的微生物，而橙黄玉凤花的外植体上附着的微生物对切有开口的橙黄玉凤花的外植体的生殖分化具有较大的影响，会造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低，因此，在本申请中对外植体进行消毒处理，有效地减少了橙黄玉凤花外植体表皮上的微生物，降低了橙黄玉凤花的外植体表皮附着的微生物对橙黄玉凤花的外植体的影响，避免了造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
S300、对消毒处理后的外植体进行刮皮处理。可以理解，虽然对橙黄玉凤花的外植体进行消毒处理有效减少了橙黄玉凤花外植体表皮上的微生物数量，但是并不能将橙黄玉凤花的外植体的微生物数量控制在不对橙黄玉凤花的外植体的增殖分化产生影响的数量区间，因此，在对橙黄玉凤花的外植体进行消毒处理后，继续对橙黄玉凤花进行刮皮处理除去橙黄玉凤花外植体的表皮，进一步减少了橙黄玉凤花外植体上附着的微生物的数量，有效地降低了橙黄玉凤花的外植体表皮附着的微生物对橙黄玉凤花的外植体的影响，有效地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而有效提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保橙黄玉凤花的种群数量稳定性。还可以理解，若直接对橙黄玉凤花的外植体进行刮皮处理，则未经消毒处理的橙黄玉凤花外植体的表皮上还附着有大量的微生物，使得橙黄玉凤花的外植体在刮皮处理过程中，橙黄玉凤花的外植体表皮上附着的大量微生物重新附着在除去表皮后的橙黄玉凤花外植体上，无法达到有效地减少了橙黄玉凤花外植体上附着的微生物的数量的目的，进而无法解决橙黄玉凤花外植体表面附着的微生物造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题。
S400、对刮皮处理后的外植体进行接种培养操作，得到外植体丛生芽。可以理解，刮皮处理后的外植体上附着的微生物数量较少，在对外植体进行接种培养操作过程中，外植体上附着的微生物对外植体的切开处的褐化能力较弱，进而降低了橙黄玉凤花的外植体表皮附着的微生物对橙黄玉凤花的外植体的影响，并在对刮皮处理后的外植体进行接种培养操作使得橙黄玉凤花的外植体接种至适宜的增殖分化环境条件中，提高了橙黄玉凤花外植体的增殖分化存活率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
S500、对外植体丛生芽进行增殖生根培育操作，得到无菌瓶苗。可以理解，不同分化阶段的橙黄玉凤花的外植体所需的营养物质和要求的生长环境有所差别，因此，在橙黄玉凤花的外植体增殖分化形成外植体丛生芽时，对外植体丛生芽进行增殖生根培育操作而为植体丛生芽提供生长分化所需的营养物质和适宜的生长环境，提高了橙黄玉凤花的外植体的生长分化速度，进一步减短了橙黄玉凤花的增殖生长周期，并且提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
S600、对无菌瓶苗进行驯化栽培操作，获得橙黄玉凤花。可以理解，经过接种培养操作和增殖生根培育操作得到的无菌瓶苗均在营养成分充足和生长环境适宜的条件下增殖分化得到，对外界环境的抗性较差，若将无菌瓶苗继续在营养成分充足和生长环境适宜的条件下进行生长，将会导致无菌瓶苗较难在野外条件下存活，无法较好地实现野生橙黄玉凤花的种群数量稳定，因此，在本申请中将对无菌瓶苗进行驯化栽培操作，提高无菌瓶苗的野外适应性，确保了野生橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
上述的橙黄玉凤花的组织培养方法中，采用橙黄玉凤花的外植体进行增殖培养，避免了橙黄玉凤花的通过种子培育得到的橙黄玉凤花植株存在或多或少的变异，使得野生橙黄玉凤花的优良品种逐渐消逝的问题，维持了橙黄玉凤花母体的优良性能，并且对外植体进行消毒处理和刮皮处理，有效地减少了橙黄玉凤花外植体上的微生物的数量，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
可以理解，橙黄玉凤花种子细小，野外萌发率极低，受生长环境丧失、生长环境破坏以及过度采挖等的影响，使得橙黄玉凤花的生存和种群数量受到严重的影响，为了恢复橙黄玉凤花的野外种群数量与规模，确保橙黄玉凤花的野外种群数量的稳定性和野外橙黄玉凤花的优良遗传性能，通过组织培养技术手段规模化繁育野外橙黄玉凤花幼苗，通过驯化栽培操作模拟橙黄玉凤花的野外适宜生长环境，最终获得橙黄玉凤花的野外回归植株和提高了橙黄玉凤花的野外种群数量与规模。
还可以理解，对橙黄玉凤花外植体进行刮皮操作，提高了橙黄玉凤花外植体与微生物的接触面积，加大了橙黄玉凤花外植体的的外植体表皮附着的微生物对橙黄玉凤花的外植体的影响，使得橙黄玉凤花的外植体更容易发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致刮皮后的橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低，因此，若采用刮皮后的橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株，则需要严格控制橙黄玉凤花的外植体上附着的微生物的数量，使得橙黄玉凤花的外植体上附着的微生物的数量小于使得橙黄玉凤花的外植体切口发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活的微生物的数量，在本申请中，对橙黄玉凤花外植体进行消毒处理和刮皮处理使得橙黄玉凤花的外植体上附着的微生物的数量小于使得橙黄玉凤花的外植体切口发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活的微生物的数量，避免了造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，在获取橙黄玉凤花的外植体的步骤中，橙黄玉凤花的外植体为处于生长期的橙黄玉凤花的球茎。可以理解，橙黄玉凤花母体的球茎具有较好的增殖分化能力，故选择处于生长期的橙黄玉凤花的球茎作为橙黄玉凤花的外植体，确保了橙黄玉凤花母体的外植体的增殖能力和效率。还可以理解，橙黄玉凤花母体的球茎埋植于土壤中，且橙黄玉凤花母体的球茎上具有细密的绒毛，绒毛适宜微生物的附着和生存，使得橙黄玉凤花的母体的块茎上附着有大量的微生物，而这些附着的微生物对切有开口的橙黄玉凤花的母体的球茎的生殖分化具有较大的影响，会造成橙黄玉凤花的母体的球茎切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的球茎失活，导致直接使用橙黄玉凤花的母体的球茎进行分株组织培养形成的植株存活率低，因此，橙黄玉凤花一般通过种子萌发生成原球茎后，再将生成的原球茎进行分株组织培养，这种情况下的原球茎的绒毛中含有的微生物数量较少，使得微生物对原球茎的生殖分化的影响较小，提高了原球茎进行分株组织培养形成的植株存活率，还可以理解，虽然种子也存在微生物感染失活的问题，但是种子并未埋植于土壤中，使得种子携带的微生物的数量较少，并且种子受到微生物的影响较切有开口的橙黄玉凤花母体的球茎的影响小，常规的橙黄玉凤花增殖培养均会采用橙黄玉凤花的种子进行。但是橙黄玉凤花的种子细小，繁育能力低下，并且橙黄玉凤花的通过种子培育得到的橙黄玉凤花植株存在或多或少的变异，使得野生橙黄玉凤花的优良品种逐渐消逝，因此，在本申请的橙黄玉凤花的组织培养方法中，使用野生橙黄玉凤花母体的球茎进行增殖分化，避免了橙黄玉凤花的通过种子培育得到的橙黄玉凤花植株存在或多或少的变异，使得野生橙黄玉凤花的优良品种逐渐消逝的问题，并且通过分别对外植体进行消毒处理和刮皮处理，较好地除去野生橙黄玉凤花球茎所携带的微生物，避免了野生橙黄玉凤花球茎上附着的微生物对切有开口的橙黄玉凤花的母体的球茎的生殖分化具有较大的影响，造成橙黄玉凤花的母体的球茎切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的球茎失活，导致直接使用橙黄玉凤花的母体的球茎进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，橙黄玉凤花的球茎无病虫害且外表皮完好无腐烂，确保了球茎未切有开口，避免了采摘得到的橙黄玉凤花的球茎已经被微生物污染而发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的球茎失活，导致直接使用橙黄玉凤花的母体的球茎进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，橙黄玉凤花的球茎的长度为4cm～10cm，确保了橙黄玉凤花的球茎的增殖分化能力，进而确保了橙黄玉凤花的增殖效率，以及确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，对外植体进行消毒处理，包括如下步骤：
首先，对外植体进行污物清洗操作。外植体上残留的土壤等污物中含有大量的微生物，对橙黄玉凤花外植体的增殖分化具有较大的影响，因此，在将橙黄玉凤花进行接种培养操作之前，先将橙黄玉凤花外植体上附着的土壤等污物进行洗清，以使橙黄玉凤花外植体上附着的土壤等污物被分离出去，较简单且较有效地除去了橙黄玉凤花外植体上附着的微生物的数量，降低了橙黄玉凤花的外植体表皮附着的微生物对橙黄玉凤花的外植体的影响，避免了造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
然后，对清洗操作后的外植体进行超声操作。可以理解，对橙黄玉凤花外植体洗清只能除去橙黄玉凤花外植体上大部分的土壤等污物，还有残留的土壤等污物较难从橙黄玉凤花外植体上除去，因此，本申请中对清洗操作后的外植体进行超声操作，更好地将残留的土壤等污物从橙黄玉凤花外植体上去除，降低了橙黄玉凤花的外植体表皮附着的微生物对橙黄玉凤花的外植体的影响，避免了造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
最后，对超声操作后的外植体进行杀菌操作。可以理解，对橙黄玉凤花的外植体进行超声操作后使得橙黄玉凤花的外植体上的土壤等污物去除效果较佳，有效地去除了橙黄玉凤花的外植体上的大部分微生物，但是超声操作和污物清洗操作均是通过物理方法去除附着在橙黄玉凤花的外植体上的微生物，经过超声操作和污物清洗操作后的橙黄玉凤花的外植体上的微生物的数量对橙黄玉凤花的外植体的增殖分化依旧具有较大的影响，无法解决橙黄玉凤花外植体表面附着的微生物造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，因此，在本申请中对经过超声操作和污物清洗操作后的橙黄玉凤花的外植体进行杀菌操作，进一步降低橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
上述的对外植体进行消毒处理的步骤中，分别对橙黄玉凤花的外植体进行污物清洗操作、超声操作和杀菌操作，较好地降低了橙黄玉凤花的外植体表皮附着的微生物对橙黄玉凤花的外植体的影响，避免了造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，对外植体进行污物清洗操作的清洗时间为3.5h～5h，使得橙黄玉凤花外植体上附着的土壤等污物具有较好的去除效果，有效地除去了橙黄玉凤花外植体上附着的微生物的数量，降低了橙黄玉凤花的外植体表皮附着的微生物对橙黄玉凤花的外植体的影响，避免了造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，对清洗操作后的外植体进行超声操作的超声清洗时间为25min～40min，使得橙黄玉凤花外植体上附着的残留的土壤等污物具有较好的去除效果，有效地除去了橙黄玉凤花外植体上附着的微生物的数量，降低了橙黄玉凤花的外植体表皮附着的微生物对橙黄玉凤花的外植体的影响，避免了造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，对超声操作后的外植体进行杀菌操作的杀菌时间为5min～16min，降低了橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，对外植体进行污物清洗操作为在流水条件下，对外植体表面的土壤和杂质进行清除。可以理解，橙黄玉凤花的外植体上附着的土壤等污物包括土壤和杂质，采用流水，即采用不间断流动状态下的自来水对外植体表面的土壤和杂质进行清除，简单快捷地实现了橙黄玉凤花的外植体上附着的土壤和杂质的初步去除，且自来水的成本较低，进而更好地降低了橙黄玉凤花的组织培养成本。
在其中一个实施例中，对清洗操作后的外植体进行超声操作为采用杀菌剂对外植体进行超声清洗，且采用无菌水对超声清洗后的外植体进行冲洗。可以理解，超声清洗以震动的方式有效地使橙黄玉凤花的外植体与橙黄玉凤花外植体上附着的土壤和杂质分离，并同时采用杀菌剂对橙黄玉凤花的外植体上附着的微生物进行消毒处理，有效地降低了橙黄玉凤花外植体上附着的具有活性的微生物的数量，有效地减少了橙黄玉凤花外植体上的具有活性的微生物的数量，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，杀菌剂为灭菌净，确保了降低橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性的降低，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。在本实施例中，杀菌剂的质量百分比为0.2％，减少了杀菌剂对橙黄玉凤花的外植体的影响，并有效降低了橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，采用无菌水对超声清洗后的外植体进行冲洗的次数为5～8次，确保了微生物被充分从橙黄玉凤花的外植体上冲洗下来，有效降低了橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，对超声操作后的外植体进行杀菌操作为分别采用酒精和升汞对外植体进行消毒，并采用无菌水对消毒后的外植体进行冲洗。可以理解，采用酒精对橙黄玉凤花的外植体进行消毒，有效减少了橙黄玉凤花的外植体上的具有活性的微生物数量，进一步采用升汞对橙黄玉凤花的外植体进行消毒，进一步减少了橙黄玉凤花的外植体上的具有活性的微生物数量，并且与刮皮处理协同进一步降低了橙黄玉凤花的外植体上的具有活性的微生物数量，避免了造成橙黄玉凤花的外植体切开处发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，导致直接使用橙黄玉凤花的外植体进行分株组织培养形成的植株存活率低的问题，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，分别采用酒精和升汞对外植体进行消毒的步骤中，采用酒精对外殖体进行消毒的时间为30s～60s，减少了酒精对橙黄玉凤花的外植体的影响，并有效降低了橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，分别采用酒精和升汞对外植体进行消毒的步骤中，采用升汞对外殖体进行消毒的时间为5min～15min，减少了升汞对橙黄玉凤花的外植体的影响，并有效降低了橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，对超声操作后的外植体进行杀菌操作为分别采用酒精和升汞对外植体进行消毒中的酒精的体积百分浓度为75％，减少了酒精对橙黄玉凤花的外植体的影响，并有效降低了橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，对超声操作后的外植体进行杀菌操作为分别采用酒精和升汞对外植体进行消毒中的升汞的重量体积百分浓度为0.1％，减少了升汞对橙黄玉凤花的外植体的影响，并有效降低了橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
需要说明的是重量体积百分浓度表示每单位体积溶剂中溶质的多少。
在其中一个实施例中，采用无菌水对消毒后的外植体进行冲洗的次数为5～8次，确保了微生物被充分从橙黄玉凤花的外植体上冲洗下来，有效降低了橙黄玉凤花的外植体上残留的微生物的活性，较好地提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，在对刮皮处理后的外植体进行接种培养操作的步骤中，外植体的培养基的成分包括：1/2～2/3MS培养基、0.6mg/L～1.5mg/L6-BA、0.2mg/L～1.0mg/LNAA、0.2％～0.4％活性碳、25gL-1～30gL-1蔗糖和5.0gL-1～6.0gL-1琼脂，更好地提高了外植体丛生芽的生长速度和存活率，进而缩短了橙黄玉凤花幼苗的繁殖培育周期，提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
需要说明的是，MS培养基是植物组织培养中常用的一种培养基。6-BA为植物细胞分裂素中的一种。NAA为植物生长素中的一种。
在其中一个实施例中，在温度25℃～30℃和光照强度1800Lux～2300Lux的条件下，对外植体丛生芽进行增殖生根培育操作，提高了外植体丛生芽的生长速度和存活率，进而缩短了橙黄玉凤花幼苗的繁殖培育周期，提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，在对外植体丛生芽进行增殖生根培育操作步骤中，外植体丛生芽的光培养时间为12h/d～15h/d，剩余时间进行暗培养，提高了外植体丛生芽的生长速度和存活率，进而缩短了橙黄玉凤花幼苗的繁殖培育周期，提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，在对外植体丛生芽进行增殖生根培育操作步骤中，外植体丛生芽的培养基的成分包括：1/2～2/3MS培养基、0.1mg/L～1.0mg/LNAA、0.5mg/L～3.5mg/LZT、0.2％～0.4％活性碳、25gL-1～35gL-1蔗糖和5.0gL-1～6.0gL-1琼脂，更好地提高了外植体丛生芽的生长速度和存活率，进而缩短了橙黄玉凤花幼苗的繁殖培育周期，提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。其中，ZT为植物细胞分裂素中的一种。
在其中一个实施例中，在对外植体丛生芽进行增殖生根培育操作步骤中，外植体丛生芽的培养基的成分包括：1/2～2/3MS培养基、0.5mg/L～2.0mg/L6-BA、0.1mg/L～0.5mg/LNAA、0.2％～0.4％活性碳、25gL-1～35gL-1蔗糖和5.0gL-1～6.0gL-1琼脂，更好地提高了外植体丛生芽的生长速度和存活率，进而缩短了橙黄玉凤花幼苗的繁殖培育周期，提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，在相对湿度60％～80％和光照强度1000Lux～3000Lux的条件下，对无菌瓶苗进行驯化栽培操作，提高了外植体丛生芽的生长速度和存活率，进而缩短了橙黄玉凤花幼苗的繁殖培育周期，提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，在对无菌瓶苗进行驯化栽培操作的步骤之后，且在获得橙黄玉凤花的步骤之前，橙黄玉凤花的组织培养方法还包括如下步骤：在林分郁闭度为0.4～0.8的条件下，对无菌瓶苗进行野外栽培定植操作，提高了外植体丛生芽的存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，在对无菌瓶苗进行野外栽培定植操作的步骤中，将无菌瓶苗移栽于排水的沙壤土的林下坡地处，提高了外植体丛生芽的存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，无菌瓶苗的苗高为3cm～8cm，且无菌瓶苗包括至少两片小叶和至少两个基部根茎，确保了无菌瓶苗的存活率，进而确保了橙黄玉凤花的增殖效率，以及确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，在获取橙黄玉凤花的外植体的步骤之前，橙黄玉凤花的组织培养方法还包括如下步骤：对橙黄玉凤花进行预消毒处理。可以理解，土壤中含有大量的微生物，微生物对未含有切口或伤口的橙黄玉凤花的外植体的影响较小，但是采用对橙黄玉凤花的外植体进行组织培养的过程中需要将橙黄玉凤花的外植体进行切片处理，切有开口的橙黄玉凤花外植体受到微生物的影响容易发生褐化并进一步使得橙黄玉凤花的外植体失活，所以需要将橙黄玉凤花的外植上附着的微生物除去，对获取后的橙黄玉凤花外植体进行消毒处理过程中，附着在橙黄玉凤花外植体上的微生物的数量较大，较难达到较好的去除效果，并且将橙黄玉凤花外植体采摘之后，橙黄玉凤花的生命力较差，采用大量的杀菌剂且长时间地对橙黄玉凤花外植体进行消毒处理，使得橙黄玉凤花的外植体的存活率降低，因此，在本申请中，在获取橙黄玉凤花的外植体的步骤之前，对橙黄玉凤花进行预消毒处理，即在橙黄玉凤花具有较好的生命力的情况下，对橙黄玉凤花母体进行消毒，有效降低了消毒对橙黄玉凤花外植体的影响，提高了橙黄玉凤花外植体进行组织培养过程中的存活率，进而确保了橙黄玉凤花的增殖效率，以及确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，对橙黄玉凤花进行预消毒处理，包括如下步骤：采用杀菌剂对橙黄玉凤花进行杀菌消毒操作，有效降低了消毒对橙黄玉凤花外植体的影响，确保了橙黄玉凤花外植体进行组织培养过程中的存活率，进而确保了橙黄玉凤花的增殖效率，以及确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，杀菌剂为多菌灵。有效降低了消毒对橙黄玉凤花外植体的影响，确保了橙黄玉凤花外植体进行组织培养过程中的存活率，进而确保了橙黄玉凤花的增殖效率，以及确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，进行对橙黄玉凤花进行预消毒处理的步骤与进行获取橙黄玉凤花的外植体的步骤的间隔时间为7d～9d。可以理解，微生物的繁殖速度较快，几天时间便可以得到大量的繁殖体，因此，在获取橙黄玉凤花的外植体之前的7d～9d对橙黄玉凤花进行预消毒处理，有效地抑制了细菌的生长繁殖，进而有效地减少了获取的橙黄玉凤花的外植体上附着的微生物的数量，并且提高了橙黄玉凤花外植体进行组织培养过程中的存活率，进而确保了橙黄玉凤花的增殖效率，以及确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，在对外植体丛生芽进行增殖生根培育操作的步骤中，将外植体丛生芽移植至无菌瓶中，其中无菌瓶中含有水草和水苔，水草夹设在水苔之间，更好地提高了外植体丛生芽的生长速度和存活率，进而确保了橙黄玉凤花的增殖效率，以及确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
在其中一个实施例中，水草的高度为3cm～5cm，更好地提高了外植体丛生芽的生长速度和存活率，进而确保了橙黄玉凤花的增殖效率，以及确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
与现有技术相比，本发明至少具有以下优点：
本发明橙黄玉凤花的组织培养方法中，采用橙黄玉凤花的外植体进行增殖培养，避免了橙黄玉凤花的通过种子培育得到的橙黄玉凤花植株存在或多或少的变异，使得野生橙黄玉凤花的优良品种逐渐消逝的问题，维持了橙黄玉凤花母体的优良性能，并且对外植体进行消毒处理和刮皮处理，有效地减少了橙黄玉凤花外植体上的微生物的数量，提高了橙黄玉凤花的增殖分化存活率，进而提高了橙黄玉凤花的增殖效率，确保了橙黄玉凤花的种群数量稳定性。
以下列举一些具体实施例，若提到％，均表示按重量百分比计。需注意的是，下列实施例并没有穷举所有可能的情况，并且下述实施例中所用的材料如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
(1)外植体消毒
首先用手术剪剪去橙黄玉凤花的地上部分，在流水下使用毛刷仔细清洗干净根茎表层土壤与杂质，然后在流水下冲洗4h，之后放入超声波清洗机中用0.2％(W/V)灭菌净清洗30min，最后用无菌水冲洗5次备用。在超净工作台上用体积百分浓度为75％的酒精消毒30s后，再用0.1％(W/V)的升汞消毒5min，之后用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干备用。
(2)种苗繁育
将(1)中处理的根茎用灭菌后的手术刀切去外表皮，之后将除去外表皮的根茎切成长0.5cm，宽0.5cm，厚0.2cm的正方形薄片接种至诱导培养基(1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+AC0.2％+30gL-1蔗糖+5.0gL-1琼脂)中培养，培养24d即产生原球茎，35d即长出外植体丛生芽；将外植体丛生芽转接至增殖培养基(1/2MS+NAA0.1mg/L+ZT0.5mg/L+AC0.2％+30gL-1蔗糖+5.0gL-1琼脂)中培养，培养36d后产生大量外植体丛生芽，增殖系数10.2；将外植体丛生芽转接至生根培养基(1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+AC0.2％+30gL-1蔗糖+5.0gL-1琼脂)中培养，培养55d后获得大量生长健壮且有2片小叶，高度约3cm-5cm的幼苗，即无菌瓶苗。培养条件为：培养温度25℃，光照光强2000Lux，光照时间14h·d-1，暗培养10h·d-1。
(3)种苗的移栽驯化
待无菌瓶苗长至4cm-6cm高，基部长出2个根茎，顶端长出2片小叶，选择健壮的瓶苗，打开瓶盖放置5d-7d，用勺子轻轻的取出无菌瓶苗，放入清水中洗净无菌瓶苗根部的培养基。将洗净的无菌瓶苗移栽至装有基质(腐殖质：沙子：珍珠岩体积比1:1:1)的育苗盘中，在温室大棚进行驯化栽培，温室大棚空气湿度控制在60％，散射光强度控制在1000Lux。移栽成活率97.6％。
(4)回归生境选择与栽植
4月12日，选择在温室大棚驯化栽培2年后(具体规格为：苗高≥6cm，叶片数≥4片，球茎＝2个)的回归苗，于原生境相似或邻近的林分环境，林分郁闭度0.4-0.8，排水良好，通风良好，沙壤土的林下坡地进行野外栽培定植。栽植前，首先清除杂灌、草、残渣、石块、树根等，按15cm×20cm株行距进行栽植，起穴，将驯化苗连同原驯化栽培基质同时放入穴中，注意避免伤根。每隔20d定期到野外回归栽植点进行查看，对受病虫侵害的植株及时清理，被雨水冲出球茎的幼苗应及时培土。
表1不同林分郁闭度下橙黄玉凤花野外回归栽植后的生长统计
Figure BDA0002871695650000171
实施例2
(1)外植体消毒
首先用手术剪剪去橙黄玉凤花的地上部分，在流水下使用毛刷仔细清洗干净根茎表层土壤与杂质，然后在流水下冲洗4h，之后放入超声波清洗机中用0.2％灭菌净清洗30min，最后用无菌水冲洗5次备用。在超净工作台上用体积百分浓度为75％的酒精消毒45s后，再用0.1％(W/V)的升汞消毒10min，之后用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干备用。
(2)种苗繁育
将(1)中处理的根茎用灭菌后的手术刀切去外表皮，之后将除去外表皮的根茎切成长0.5cm，宽0.5cm，厚0.2cm的正方形薄片接种至诱导培养基(1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.2％+30gL-1蔗糖+5.0gL-1琼脂)中培养，培养15d即产生原球茎，32d即长出外植体丛生芽；将外植体丛生芽转接至增殖培养基(1/2MS+NAA0.5mg/L+ZT2.0mg/L+AC0.2％+30gL-1蔗糖+5.0gL-1琼脂)中培养，培养27d后产生大量外植体丛生芽，增殖系数12.6；将丛生芽转接至生根培养基(1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.2％+30gL-1蔗糖+5.0gL-1琼脂)中培养，培养48d后获得大量生长健壮且有2片小叶，高度约3cm-5cm的无菌瓶苗。培养条件为：培养温度25℃，光照光强2000Lux，光照时间14h·d-1，暗培养10h·d-1。
(3)种苗的移栽驯化
待无菌瓶苗长至4cm-6cm高，基部长出2个根茎，顶端长出2片小叶，选择健壮的无菌瓶苗，打开瓶盖放置5d-7d，用勺子轻轻的取出无菌瓶苗，放入清水中洗净无菌瓶苗根部的培养基。将洗净的无菌瓶苗移栽至装有基质(腐殖质：沙子：珍珠岩体积比1:1:1)的育苗盘中，在温室大棚进行驯化栽培，温室大棚空气湿度控制在70％，散射光强度控制在2000Lux。移栽成活率98.2％。
(4)回归生境选择与栽植
4月16日，选择在温室大棚驯化栽培2年后(具体规格为：苗高≥6cm，叶片数≥4片，球茎＝2个)的回归苗，于原生境相似或邻近的林分环境，林分郁闭度0.4-0.8，排水良好，通风良好，沙壤土的林下坡地进行野外栽培定植。栽植前，首先清除杂灌、草、残渣、石块、树根等，按15cm×20cm株行距进行栽植，起穴，将驯化苗连同原驯化栽培基质同时放入穴中，注意避免伤根。每隔20d定期到野外回归栽植点进行查看，对受病虫侵害的植株及时清理，被雨水冲出球茎的幼苗应及时培土。
表2不同林分郁闭度下橙黄玉凤花野外回归栽植后的生长统计
Figure BDA0002871695650000191
实施例3
(1)外植体消毒
首先使用多菌灵对橙黄玉凤花进行喷洒消毒，七天后用手术剪剪去橙黄玉凤花的地上部分，在流水下使用毛刷仔细清洗干净根茎表层土壤与杂质，然后在流水下冲洗4h，之后放入超声波清洗机中用0.2％灭菌净清洗30min，最后用无菌水冲洗5次备用。在超净工作台上用体积百分浓度为75％的酒精消毒60s后，再用0.1％(W/V)的升汞消毒15min，之后用无菌水冲洗5次，用无菌滤纸吸干备用。
(2)种苗繁育
将(1)中处理的根茎用灭菌后的手术刀切去外表皮，之后将除去外表皮的根茎切成长0.5cm，宽0.5cm，厚0.2cm的正方形薄片接种至诱导培养基(1/2MS+6-BA1.5mg/L+NAA1.0mg/L+AC0.2％+30gL-1蔗糖+5.0gL-1琼脂)中培养，培养18d即产生原球茎，36d即长出外植体丛生芽；将外植体丛生芽转接至增殖培养基(1/2MS+NAA1.0mg/L+ZT3.5mg/L+AC0.2％+30gL-1蔗糖+5.0gL-1琼脂)中培养，培养26d后产生大量外植体丛生芽，增殖系数9.3；将外植体丛生芽转接至生根培养基(1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L+AC0.2％+30gL-1蔗糖+5.0gL-1琼脂)中培养，培养55d后获得大量生长健壮且有2片小叶，高度约3cm-5cm的无菌瓶苗。培养条件为：无菌瓶内设置有水草和水苔，培养温度25℃，光照光强2000Lux，光照时间14h·d-1，暗培养10h·d-1。
(3)种苗的移栽驯化
待无菌瓶苗长至4cm-6cm高，基部长出2个根茎，顶端长出2片小叶，选择健壮的无菌瓶苗，打开瓶盖放置5d-7d，用勺子轻轻的取出无菌瓶苗，放入清水中洗净无菌瓶苗根部的培养基。将洗净的无菌瓶苗移栽至装有基质(腐殖质：沙子：珍珠岩体积比1:1:1)的育苗盘中，在温室大棚进行驯化栽培，温室大棚空气湿度控制在80％，散射光强度控制在3000Lux。移栽成活率94.7％。
(4)回归生境选择与栽植
4月19日，选择在温室大棚驯化栽培2年后(具体规格为：苗高≥6cm，叶片数≥4片，球茎＝2个)的回归苗，于原生境相似或邻近的林分环境，林分郁闭度0.4-0.8，排水良好，通风良好，沙壤土的林下坡地进行野外栽培定植。栽植前，首先清除杂灌、草、残渣、石块、树根等，按15cm×20cm株行距进行栽植，起穴，将驯化苗连同原驯化栽培基质同时放入穴中，注意避免伤根。每隔20d定期到野外回归栽植点进行查看，对受病虫侵害的植株及时清理，被雨水冲出球茎的幼苗应及时培土。
表3不同林分郁闭度下橙黄玉凤花野外回归栽植后的生长统计
Figure BDA0002871695650000201
从实施例1～实施例3中可以看出，先对橙黄玉凤花进行预消毒处理后以及在无菌瓶中设置水草和水苔，使得橙黄玉凤花外植体的存活率更高，且具有较高的开花率。
以上实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
获取橙黄玉凤花的外植体；
对所述外植体进行消毒处理；
对消毒处理后的所述外植体进行刮皮处理；
对刮皮处理后的所述外植体进行接种培养操作，得到外植体丛生芽；
对所述外植体丛生芽进行增殖生根培育操作，得到无菌瓶苗；
对所述无菌瓶苗进行驯化栽培操作，获得橙黄玉凤花。
2.根据权利要求1所述的橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，在所述获取橙黄玉凤花的外植体的步骤中，所述橙黄玉凤花的所述外植体为处于生长期的橙黄玉凤花的球茎。
3.根据权利要求1所述的橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，所述对所述外植体进行消毒处理，包括如下步骤：
对所述外植体进行污物清洗操作；
对清洗操作后的所述外植体进行超声操作；
对超声操作后的所述外植体进行杀菌操作。
4.根据权利要求3所述的橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，所述对所述外植体进行污物清洗操作为在流水条件下，对所述外植体表面的土壤和杂质进行清除。
5.根据权利要求3所述的橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，所述对清洗操作后的所述外植体进行超声操作为采用杀菌剂对所述外植体进行超声清洗，且采用无菌水对超声清洗后的所述外植体进行冲洗。
6.根据权利要求3所述的橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，所述对超声操作后的所述外植体进行杀菌操作为分别采用酒精和升汞对所述外植体进行消毒，并采用无菌水对消毒后的所述外植体进行冲洗。
7.根据权利要求1所述的橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，在温度25℃～30℃和光照强度1800Lux～2300Lux的条件下，对所述外植体丛生芽进行增殖生根培育操作。
8.根据权利要求1所述的橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，在对所述外植体丛生芽进行增殖生根培育操作步骤中，所述外植体丛生芽的光培养时间为12h/d～15h/d，剩余时间进行暗培养。
9.根据权利要求1所述的橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，在相对湿度60％～80％和光照强度1000Lux～3000Lux的条件下，对所述无菌瓶苗进行驯化栽培操作。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的橙黄玉凤花的组织培养方法，其特征在于，在所述对所述无菌瓶苗进行驯化栽培操作的步骤之后，且在所述获得橙黄玉凤花的步骤之前，所述橙黄玉凤花的组织培养方法还包括如下步骤：在林分郁闭度为0.4～0.8的条件下，对所述无菌瓶苗进行野外栽培定植操作。
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CN202011611025.7A Active CN112640782B (zh) 2020-12-30 2020-12-30 橙黄玉凤花的组织培养方法

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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101099451A (zh) * 2007-08-09 2008-01-09 贵州省生物技术研究所 鹅毛玉凤花的组织培养繁殖方法
CN107593443A (zh) * 2017-10-18 2018-01-19 广东省农业科学院环境园艺研究所 一种小花山奈的组织培养快速繁殖方法
CN109548655A (zh) * 2019-01-07 2019-04-02 惠州市林业科学研究所(广东省林业区域性试验(惠州)中心) 苦郎树的组织培养方法

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Title
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黄立华: "兰科植物组织培养研究进展", 《现代农业科技》 *

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