CN112538474A - 一种稳定保存血液中游离dna的采血管的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法，包括以下步骤：1）制备血液游离DNA稳定剂；2）从Z个空的塑料采血管中随机抽取至少U个空的塑料采血管抽真空，并进行空管性能测试；3）判断所述至少U个空管性能测试的结果是否合格，若是，则进行步骤4），当所述保水性测试和所述保气性测试结果均合格，表示所述空管性能测试的结果是合格；4）将制备完成的血液游离DNA稳定剂分别注入所述Z个空的塑料采血管后抽真空。塑料采血管的材质为塑料，通过本方法制备的采血管，可有效防止人静脉血中有核细胞破裂，释放基因组DNA以及游离DNA的降解，为血浆游离DNA提供稳定环境。克服了玻璃采血管运输易碎，保气保水性不足，可支持高速离心。

Description

一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法
技术领域
本发明涉及一种医疗用具技术领域，尤其涉及一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法。
背景技术
随着高通量测序技术的快速发展，基于血液中游离DNA的检测项目逐渐开展起来，如无创产前DNA筛查、肿瘤早筛、靶向用药指导等。相较于普通人群，孕妇的外周血内含有胎儿的游离DNA、肿瘤患者外周血内含有肿瘤细胞释放的游离DNA，使得游离DNA检测成为了极其重要的检测手段，因此，保持血液中游离DNA的稳定是检测准确的先决条件。
目前，市场上普片采用进口游离DNA保存管Streck管，并且Streck管价格昂贵平均售价15美元/支；此外，目前国内外90%以上使用的游离DNA采血管为玻璃管，其中玻璃采血管存在主要问题如下：①玻璃为易碎品，不便于长途运输，不耐低温；②实验流程耗时过多；原因：实验中由于玻璃高速离心易碎，故针对玻璃管首先要低速1600g/min离心10min，进行第一步将血浆分离，然后将血浆放入EP管中进行第二步离心16000g/min。
此外，市场上现有少数游离DNA保存塑料管均存在保气性，保水性，溶血等问题。
发明内容
本发明提供一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法，通过这种方法可以得到塑料的稳定保存血液中游离DNA的采血管，且成本较低。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）制备血液游离DNA稳定剂，所述血液游离DNA稳定剂包括以6类试剂：一种或多种核酸酶抑制剂，一种或多种生长代谢抑制剂，一种或多种防降解的试剂，一种或多种防止细胞凝集的试剂，一种或多种维持细胞渗透压平衡的试剂，一种或多种调节试剂PH值的试剂；
2）从Z个空的塑料采血管中随机抽取至少U个空的塑料采血管抽真空，并进行空管性能测试，所述空管性能测试包括保水性测试和保气性测试；
3）判断所述至少U个空管性能测试的结果是否合格，若是，则Z个空的塑料采血管进行步骤4），当所述保水性测试和所述保气性测试结果均合格，表示所述空管性能测试的结果是合格；
4）将制备完成的血液游离DNA稳定剂注入所述空的塑料采血管后抽真空。
进一步地，所述空管性能测试中测试时间根据如下公式确定：测试时间=实际天数/老化因子[（老化温度—实际温度）/10]。
进一步地，所述老化因子为2，所述老化温度为45，所述实际温度为25，所述实际天数为365。
进一步地，所述保水性测试包括：
取Y支抽真空后的所述空的塑料采血管，依次贴上标签样本1，样本2，至样本Y，Y≥U；
用万分天平依次称量抽真空后空的所述样本1至样板Y采血管的质量并记录An，n为序号；
依次给所述样本1至样板Y采血管中注入300ul纯水，所述纯水温度为18℃～25℃；
放入老化箱中，在所述测试时间内进行保水性测试。
进一步地，每间隔15天将所述样本1至样本Y从所述老化箱中取出，用万分天平依次称量质量并记录，直至达到所述测试时间为止；将每次记录的数据与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量An相减，得到质量差；将每个样本获得的多个质量差求平均值，样本质量差平均值Bn，n为序号；根据相对偏差Nn=（Bn-m）/m*100%，n为序号，m为300ul，得到每个样本的相对偏差N1至Nn；所述相对偏差值Nn（n取1至Y）小于等于±10%，则证明保水性测试合格。
进一步地，所述保气性测试包括：
取J支抽真空后的所述空的塑料采血管，放入老化箱中；每间隔15天重复以下操作，直至达到所述测试时间为止：
从所述老化箱中任意取出W支空的样本采血管（W≥2），用万分天平依次称量质量并记录为Cn，n为序号；在取出的W支空的样本采血管中注入纯水，直至无法注入为止，所述纯水的温度为18℃～25℃，用万分天平依次称量质量并记录为Dn，n为序号；将每次记录的数据Dn与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量Cn相减，得到每个样本采血管中水的质量En, n为序号；根据相对偏差Mn=（En-X）/X*100%，X为标准水质量，n为序号；所述相对偏差值Mn（n取1至J）小于等于±10%，则证明保气性测试合格；
15*J≥测试天数*W。
进一步地，所述核酸酶抑制剂可以是：焦磷酸二乙酯，和/或异硫氰酸胍，和/或氧钒核糖核昔复合物，和/或十二烷基磺酸钠，和/或尿素，和/或硅藻土；
所述生长代谢抑制剂可以是：金精三羧酸，和/或嘌呤霉素，和/或放线菌酮，和/或放线菌素D，和/或D-甘油醛，和/或道诺红菌素，和/或氟化钠，和/或亚得里亚霉素，和/或L-甘油醛，和/或DL-甘油醛，和/或氟化钠；
进一步地，所述防降解的试剂可以是：苯甲酸钠，和/或山梨酸钠，和/或山梨酸钾，和/或对羟基苯甲酸甲酯，和/或乙酯，和/或丙酯，和/或丁酯，和/或硫酸铵，和/或咪唑烷基脲，和/或重氮咪唑烷基脲，和/或羟甲基甘氨酸钠，和/或二羟甲基脲，和/或碘代丙炔基丁基甲氨酸酯，和/或1，3-二甲羟甲基二甲基乙内酰脲，和/或对羟基苯甲酸甲酯，和/或硫酸铵；
进一步地，所述防止细胞凝集的试剂可以是：柠檬酸，和/或柠檬酸三钠，和/或柠檬酸二钠，和/或乙二胺四乙酸，和/或乙二胺四乙酸三钾，和/或乙二胺四乙酸二钾，和/或肝素钠，和/或枸橼酸钠，和/或草酸钠，和/或水蛭素，和/或氟化钾，和/或葡萄糖；
进一步地，所述维持细胞渗透压平衡的试剂可以是：氯化钙，和/或氯化钠，和/或氯化钾，和/或磷酸二氢钾，和/或磷酸二氢钠，和/或磷酸氢二钾，和/或磷酸氢二钠；
进一步地，所述调节试剂PH值的试剂可以是：浓盐酸，和/或浓硫酸，和/或氢氧化钠。
进一步地，所述制备血液游离DNA稳定剂包括：
依次称量所述6类试剂，放入试剂瓶并搅拌均匀，配置完成后用真空泵进行过滤纯化，质检后得到制备完成的血液游离DNA稳定剂。
进一步地，步骤2)中，所述塑料采血管的材质为塑料材质，是通过聚氯乙烯或者聚对笨二甲酸乙二醇酯材料制作而成。
本发明的有益效果如下：本发明提供了一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法，通过本方法制备的采血管，可有效防止人静脉血中有核细胞破裂，释放基因组DNA以及游离DNA的降解，为血浆游离DNA提供稳定环境。克服了玻璃采血管运输易碎，保气性，保水性不足之处，可支持高速离心。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1是根据本发明实施例提供的制备方法的流程图。
图2是72小时后A采血管中细胞图。
图3是72小时后B采血管中细胞图。
图4是72小时后C采血管中细胞图。
图5是72小时后I采血管中细胞图。
图6是72小时后D采血管中细胞图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清晰、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参考图1，一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法，包括以下步骤：
1）制备血液游离DNA稳定剂，所述血液游离DNA稳定剂包括以6类试剂：一种或多种核酸酶抑制剂，一种或多种生长代谢抑制剂，一种或多种防降解的试剂，一种或多种防止细胞凝集的试剂，一种或多种维持细胞渗透压平衡的试剂，一种或多种调节试剂PH值的试剂；
2）从Z个空的塑料采血管中随机抽取至少U个空的塑料采血管抽真空，并进行空管性能测试，所述空管性能测试包括保水性测试和保气性测试；
3）判断所述至少U个空管性能测试的结果是否合格，若是，则进行步骤4），当所述保水性测试和所述保气性测试结果均合格，表示所述空管性能测试的结果是合格；
4）将制备完成的血液游离DNA稳定剂分别注入所述Z个空的塑料采血管后抽真空。
所述空管性能测试中测试时间根据如下公式确定：
测试时间=实际天数/老化因子[（老化温度—实际温度）/10]。
在本发明实施例中，所述老化因子为2，所述老化温度为45，所述实际温度为25，所述实际天数为365。因此，带入公式可得：
测试时间=365÷2（45-25）÷10=365÷4=91.25天
我们求得的测试天数为91.25天，采用进一的方式，测试时间曲92天，最大化提高测试强度。
在步骤2）中，所述保水性测试包括：取Y支抽真空后的所述空的塑料采血管，依次贴上标签样本1，样本2，至样本Y，Y≥U；用万分天平依次称量抽真空后空的所述样本1至样板Y采血管的质量并记录An，n为序号；依次给所述样本1至样板Y采血管中注入300ul纯水，所述纯水温度为18℃～25℃；放入老化箱中，在所述测试时间内进行保水性测试。
每间隔15天将所述样本1至样本Y从所述老化箱中取出，用万分天平依次称量质量并记录，直至达到所述测试时间为止；将每次记录的数据与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量An相减，得到质量差；将每个样本获得的多个质量差求平均值，样本质量差平均值Bn，n为序号；根据相对偏差Nn=（Bn-m）/m*100%，n为序号，m为300ul，得到每个样本的相对偏差N1至Nn；所述相对偏差值Nn（n取1至Y）小于等于±10%，则证明保水性测试合格。
具体，在本发明实施例中，以Y取10为例进行阐述，取10支抽真空后的所述空的塑料采血管，依次贴上标签样本1，样本2，至样本10；用万分天平依次称量抽真空后空的所述样本1至样板10采血管的质量并记录An，n为序号，即A1、A2…An；依次给所述样本1至样板10采血管中注入300ul纯水，所述纯水温度为18℃～25℃；放入老化箱中，在所述测试时间内进行保水性测试。每间隔15天将所述样本1至样本10从所述老化箱中取出，用万分天平依次称量质量并记录，直至达到所述测试时间为止；需要说明的是，在本发明实施例中，所述测试时间为92天，每隔15天测试一次，当测试6次后，相当于过了90天；那么第7次测试可以安排在第6次测试后的2天，即在测试实验到的那天完成最后一次测试，无需等到15天。同理，当测试时间为其他天数时，也可以采取相同的方式测试，本发明并不以此为限。当然，如果希望延长测试时间，检验采血管是否有更高的性能也可以再最后一次测试时，将时间延长至15天。将每次记录的数据与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量An相减，得到质量差；将每个样本获得的多个质量差求平均值，样本质量差平均值Bn，n为序号，即B1、B2…B10，我们以样本1为例进行阐述，样本1抽真空后空的采血管质量A1，经过15天后第一次测试时，样本1采血管的质量假设为F1，经过第二个15天后第二次测试时，样本1采血管的质量假设为F1`，,经过第三个15天后第三次测试时，样本1采血管的质量假设为F1``…直至第七次测试得到F1```````,
B1=[(F1-A1)+(F1`-A1) +(F1``-A1) +(F1```-A1) +…+(F1``````-A1)]/7；根据相对偏差Nn=（Bn-m）/m*100%，n为序号，即N1、N2…N10，m为300ul，得到每个样本的相对偏差N1至N10；每个样板的所述相对偏差值Nn都小于等于±10%，即在本实施例中，N1至N10都小于等于±10%，则证明保水性测试合格。
通过下表可以发现，10个样本的相对偏差均在±10%的范围内，保水性测试测试合格。
指标 样本1 样本2 样本3 样本4 样本5 样本6 样本7 样本8 样本9 样本10
平均值Bn 0.2990 0.3006 0.2862 0.2984 0.2972 0.3040 0.2972 0.2996 0.2985 0.3017
Bn-m 0.0010 -0.0006 0.0138 0.0016 0.0028 0.0040 0.0028 0.0004 0.0015 -0.0017
相对偏差Nn -0.33% 0.19% -4.61% -0.52% -0.94% 1.33% -0.92% -0.12% -0.49% 0.57%
在步骤2）中，所述保气性测试包括：
取J支抽真空后的所述空的塑料采血管，放入老化箱中；每间隔15天重复以下操作，直至达到所述测试时间为止：
从所述老化箱中任意取出W支空的样本采血管（W≥2），用万分天平依次称量质量并记录为Cn，n为序号；在取出的W支空的样本采血管中注入纯水，直至无法注入为止，所述纯水的温度为18℃～25℃，用万分天平依次称量质量并记录为Dn，n为序号；将每次记录的数据Dn与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量Cn相减，得到每个样本采血管中水的质量En, n为序号；根据相对偏差Mn=（En-X）/X*100%，X为标准水质量，n为序号；所述相对偏差值Mn（n取1至J）小于等于±10%，则证明保气性测试合格；
15*J≥测试天数*W。
需要说明的是，在本发明实施例中，以W取2，测试天数为92天为例进行阐述，因此J≥92*2/15，J≥12.26，我们求得的J为12.26个，采用进二的方式，即，当J不为整数时，我们舍掉小数后在整数的各位上加W，因此在本实施例中，J取12+2=14，如此可以保证每一次（包括最后一次）实验均有W支试管进行实验。同理，在其他实施例中，也可以采取相同的原理。
取14支抽真空后的所述空的塑料采血管，放入老化箱中；每间隔15天重复以下操作，直至达到所述测试时间为止：从所述老化箱中任意取出2支空的样本采血管,用万分天平依次称量质量并记录为Cn，n为序号；在取出的2支空的样本采血管中注入纯水，直至无法注入为止，所述纯水的温度为18℃～25℃，用万分天平依次称量质量并记录为Dn，n为序号；将每次记录的数据Dn与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量Cn相减，得到每个样本采血管中水的质量En, n为序号, 我们以第一次取出的2个样本1和样本2为例进行阐述，E1=D1-C1,E2=D2-C2，同理，第二次取出的2个样本即为样本3和样本4，可得到E3、E4；根据相对偏差Mn=（En-X）/X*100%，X为标准水质量，n为序号；在本发明实施例中，所述标准水质量X为10g，此处所述标准水质量指的是理论上该真空采血管可以采集的液体量，我们要测的是经过老化后，所述样本采血管是否还具有良好的气密性，可以采集到理论上应得的液体。
所述相对偏差值Mn（n取1至10）小于等于±10%，则证明保气性测试合格；通过下表可以发现，14个样本的相对偏差均在±10%的范围内，保水性测试测试合格。
Figure 48897DEST_PATH_IMAGE002
在步骤1）中，所述核酸酶抑制剂可以是：焦磷酸二乙酯，和/或异硫氰酸胍，和/或氧钒核糖核昔复合物，和/或十二烷基磺酸钠，和/或尿素，和/或硅藻土；所述核酸酶抑制剂在所述血液游离DNA稳定剂中的占比为0.03%—2.5%，在本发明实施例中，所述核酸酶抑制剂选择异硫氰酸胍，且每升所述血液游离DNA稳定剂中异硫氰酸胍的加入量在0.5g—0.7g。需要说明的是，在本发明其他实施例中，可以同时选择多种所述核酸酶抑制剂加入稳定剂中。
所述生长代谢抑制剂可以是：金精三羧酸，和/或嘌呤霉素，和/或放线菌酮，和/或放线菌素D，和/或D-甘油醛，和/或道诺红菌素，和/或氟化钠，和/或亚得里亚霉素，和/或L-甘油醛，和/或DL-甘油醛，和/或氟化钠；所述生长代谢抑制剂在所述血液游离DNA稳定剂中的占比为0.5%—10%，在本发明实施例中，所述生长代谢抑制剂选择氟化钠，且每升所述血液游离DNA稳定剂中氟化钠的加入量在5g—6g。需要说明的是，在本发明其他实施例中，可以同时选择多种所述生长代谢抑制剂加入稳定剂中。
所述防降解的试剂可以是：苯甲酸钠，和/或山梨酸钠，和/或山梨酸钾，和/或对羟基苯甲酸甲酯，和/或乙酯，和/或丙酯，和/或丁酯，和/或硫酸铵，和/或咪唑烷基脲，和/或重氮咪唑烷基脲，和/或羟甲基甘氨酸钠，和/或二羟甲基脲，和/或碘代丙炔基丁基甲氨酸酯，和/或1，3-二甲羟甲基二甲基乙内酰脲，和/或对羟基苯甲酸甲酯，和/或硫酸铵；所述防降解的试剂在所述血液游离DNA稳定剂中的占比为10%—60%，在本发明实施例中，所述防降解的试剂选择硫酸铵或咪唑烷基脲，且每升所述血液游离DNA稳定剂中氟化钠的加入量在300g—400g。需要说明的是，在本发明其他实施例中，可以同时选择多种所述防降解的试剂加入稳定剂中。
所述防止细胞凝集的试剂可以是：柠檬酸，和/或柠檬酸三钠，和/或柠檬酸二钠，和/或乙二胺四乙酸，和/或乙二胺四乙酸三钾，和/或乙二胺四乙酸二钾，和/或肝素钠，和/或枸橼酸钠，和/或草酸钠，和/或水蛭素，和/或氟化钾，和/或葡萄糖；所述防止细胞凝集的试剂在所述血液游离DNA稳定剂中的占比为2.5%—12.5%，在本发明实施例中，所述防止细胞凝集的试剂选择二胺四乙酸三钾，且每升所述血液游离DNA稳定剂中二胺四乙酸三钾的加入量在70g—85g。在又一实施例中，所述防止细胞凝集的试剂选择乙二胺四乙酸，且每升所述血液游离DNA稳定剂中乙二胺四乙酸的加入量在7g—8g。在另一实施例中，所述防止细胞凝集的试剂选择柠檬酸，且每升所述血液游离DNA稳定剂中柠檬酸的加入量在7g—8g。需要说明的是，在本发明其他实施例中，可以同时选择多种所述防止细胞凝集的试剂加入稳定剂中。
所述维持细胞渗透压平衡的试剂可以是：氯化钙，和/或氯化钠，和/或氯化钾，和/或磷酸二氢钾，和/或磷酸二氢钠，和/或磷酸氢二钾，和/或磷酸氢二钠；所述维持细胞渗透压平衡的试剂在所述血液游离DNA稳定剂中的占比为0.5%—1%，在本发明实施例中，所述维持细胞渗透压平衡的试剂选择氯化钠或氯化钾，且每升所述血液游离DNA稳定剂中氯化钠或氯化钾的加入量在8g—10g。需要说明的是，在本发明其他实施例中，可以同时选择多种所述维持细胞渗透压平衡的试剂加入稳定剂中。
所述调节试剂PH值的试剂可以是：浓盐酸，和/或浓硫酸，和/或氢氧化钠；所述调节试剂PH值的试剂在所述血液游离DNA稳定剂中的占比为1%—5%，在本发明实施例中，所述调节试剂PH值的试剂选择浓盐酸，且每升所述血液游离DNA稳定剂中浓盐酸的加入量在6ml—7ml。在其他实施例中，所述调节试剂PH值的试剂选择乙浓硫酸，且每升所述血液游离DNA稳定剂中浓硫酸的加入量在15ul—20ul。需要说明的是，在本发明其他实施例中，可以同时选择多种所述调节试剂PH值的试剂加入稳定剂中。
在本发明实施例中所述制备血液游离DNA稳定剂包括：依次称量所述6类试剂，放入试剂瓶并搅拌均匀，配置完成后用真空泵进行过滤纯化，质检后得到制备完成的血液游离DNA稳定剂。需要说明的是称量所述6类试剂，首先依据需求和前述原理列好生产配方，按照配方依次称量所述6类试剂，放入试剂瓶并搅拌均匀。
需要说明的是，所述血液游离DNA稳定剂配置完成后，且测试合格的情况下，将制备完成的血液游离DNA稳定剂分别注入所述Z个空的塑料采血管后抽真空。如此，稳定保存血液中游离DNA的采血管就制备完成了，实验人员通过对比试验发现了含有所述稳定剂的采血管对样本的保存效果最好，具体：
通过模拟肿瘤血液运输，通过观察细胞破裂情况和气压值验证本发明制备的采血管的可行性，通血气压在0-20Kpa时为通血成功，在20Kpa-50Kpa时由于气压值较大，细胞易变形和破裂。试验中选择分别含有以下试剂的采血管：第一试剂（A采血管），第二试剂（B采血管），本发明所述稳定剂（I采血管），第三试剂（C采血管），第四试剂（D采血管）；用相同的肿瘤血液测试；用旋转混匀仪模拟血样的运输条件；分别记录72小时内不同时间各个采血管通血气压；72小时结束后观察细胞破裂情况并拍照。需要说明的是，所述第一试剂至第四试剂为市面上现有的试剂，仅用于对比试验用，并不对本发明专利要保护的范围有任何影响。
由数据显示可见本发明所述稳定剂符合通血气压，均小于20Kpa。
Figure 272068DEST_PATH_IMAGE004
请参考图2-图6，含有所述稳定剂的采血管运输72小时细胞几乎无破裂情况，有核细胞比较稳定。
需要说明的是，步骤2)中，所述塑料采血管的材质为塑料材质，是通过聚氯乙烯或者聚对笨二甲酸乙二醇酯材料制作而成。
显然，上述仅为本发明的较佳实施例及所运用技术原理。本领域技术人员会理解，本发明不限于这里所述的特定实施例，对本领域技术人员来说能够进行各种明显的变化、重新调整和替代而不会脱离本发明的保护范围。因此，虽然通过以上实施例对本发明进行了较为详细的说明，但是本发明不仅仅限于以上实施例，在不脱离本发明构思的情况下，还可以包括更多其他等效实施例，而本发明的范围由所附的权利要求范围决定。

Claims (9)

1.一种稳定保存血液中游离DNA的采血管的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）制备血液游离DNA稳定剂，所述血液游离DNA稳定剂包括以6类试剂：一种或多种核酸酶抑制剂，一种或多种生长代谢抑制剂，一种或多种防降解的试剂，一种或多种防止细胞凝集的试剂，一种或多种维持细胞渗透压平衡的试剂，一种或多种调节试剂PH值的试剂；
2）从Z个空的塑料采血管中随机抽取至少U个空的塑料采血管抽真空，并进行空管性能测试，所述空管性能测试包括保水性测试和保气性测试；
3）判断所述至少U个空管性能测试的结果是否合格，若是，则进行步骤4），当所述保水性测试和所述保气性测试结果均合格，表示所述空管性能测试的结果是合格；
4）将制备完成的血液游离DNA稳定剂分别注入所述Z个空的塑料采血管后抽真空。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述空管性能测试中测试时间根据如下公式确定：
测试时间=实际天数/老化因子[（老化温度—实际温度）/10]。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述老化因子为2，所述老化温度为45，所述实际温度为25，所述实际天数为365。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述保水性测试包括：
取Y支抽真空后的所述空的塑料采血管，依次贴上标签样本1，样本2，至样本Y，Y≥U；
用万分天平依次称量抽真空后空的所述样本1至样板Y采血管的质量并记录An，n为序号；
依次给所述样本1至样板Y采血管中注入300ul纯水，所述纯水温度为18℃～25℃；
放入老化箱中，在所述测试时间内进行保水性测试。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，每间隔15天将所述样本1至样本Y从所述老化箱中取出，用万分天平依次称量质量并记录，直至达到所述测试时间为止；将每次记录的数据与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量An相减，得到质量差；将每个样本获得的多个质量差求平均值，样本质量差平均值Bn，n为序号；根据相对偏差Nn=（Bn-m）/m*100%，n为序号，m为300ul，得到每个样本的相对偏差N1至Nn；所述相对偏差值Nn（n取1至Y）小于等于±10%，则证明保水性测试合格。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述保气性测试包括：
取J支抽真空后的所述空的塑料采血管，放入老化箱中；每间隔15天重复以下操作，直至达到所述测试时间为止：
从所述老化箱中任意取出W支空的样本采血管（W≥2），用万分天平依次称量质量并记录为Cn，n为序号；在取出的W支空的样本采血管中注入纯水，直至无法注入为止，所述纯水的温度为18℃～25℃，用万分天平依次称量质量并记录为Dn，n为序号；将每次记录的数据Dn与其的应对的抽真空后空的所述样本采血管质量Cn相减，得到每个样本采血管中水的质量En, n为序号；根据相对偏差Mn=（En-X）/X*100%，X为标准水质量，n为序号；所述相对偏差值Mn（n取1至J）小于等于±10%，则证明保气性测试合格；
15*J≥测试天数*W。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸酶抑制剂可以是：焦磷酸二乙酯，和/或异硫氰酸胍，和/或氧钒核糖核昔复合物，和/或十二烷基磺酸钠，和/或尿素，和/或硅藻土；
所述生长代谢抑制剂可以是：金精三羧酸，和/或嘌呤霉素，和/或放线菌酮，和/或放线菌素D，和/或D-甘油醛，和/或道诺红菌素，和/或氟化钠，和/或亚得里亚霉素，和/或L-甘油醛，和/或DL-甘油醛，和/或氟化钠；
所述防降解的试剂可以是：苯甲酸钠，和/或山梨酸钠，和/或山梨酸钾，和/或对羟基苯甲酸甲酯，和/或乙酯，和/或丙酯，和/或丁酯，和/或硫酸铵，和/或咪唑烷基脲，和/或重氮咪唑烷基脲，和/或羟甲基甘氨酸钠，和/或二羟甲基脲，和/或碘代丙炔基丁基甲氨酸酯，和/或1，3-二甲羟甲基二甲基乙内酰脲，和/或对羟基苯甲酸甲酯，和/或硫酸铵；
所述防止细胞凝集的试剂可以是：柠檬酸，和/或柠檬酸三钠，和/或柠檬酸二钠，和/或乙二胺四乙酸，和/或乙二胺四乙酸三钾，和/或乙二胺四乙酸二钾，和/或肝素钠，和/或枸橼酸钠，和/或草酸钠，和/或水蛭素，和/或氟化钾，和/或葡萄糖；
所述维持细胞渗透压平衡的试剂可以是：氯化钙，和/或氯化钠，和/或氯化钾，和/或磷酸二氢钾，和/或磷酸二氢钠，和/或磷酸氢二钾，和/或磷酸氢二钠；
所述调节试剂PH值的试剂可以是：浓盐酸，和/或浓硫酸，和/或氢氧化钠。
8.根据权利要求1所述的所述的方法，其特征在于，所述制备血液游离DNA稳定剂包括：
依次称量所述6类试剂，放入试剂瓶并搅拌均匀，配置完成后用真空泵进行过滤纯化，质检后得到制备完成的血液游离DNA稳定剂。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述塑料采血管的材质为塑料材质，是通过聚氯乙烯或者聚对笨二甲酸乙二醇酯材料制作而成。
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