CN112313243A - Pcsk9拮抗剂化合物 - Google Patents

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CN112313243A CN201980041438.5A CN201980041438A CN112313243A CN 112313243 A CN112313243 A CN 112313243A CN 201980041438 A CN201980041438 A CN 201980041438A CN 112313243 A CN112313243 A CN 112313243A
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Abstract

公开了式I化合物或其盐，其中A、B、D、X、R1、R2和R8如本文中所定义，所述化合物具有拮抗PCSK9的特性。还描述包含所述式I化合物或其盐的药物制剂，以及治疗与PCSK9活性相关的心血管疾病和病状的方法，所述心血管疾病和病状例如为动脉粥样硬化、高胆固醇血症、冠心病、代谢综合征、急性冠状动脉综合征或相关的心血管疾病和心血管代谢病状。

Description

PCSK9拮抗剂化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年6月21日提交的美国申请号62/687,913的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
背景技术
对有效治疗心血管病患的化合物和/或药剂的鉴别是高度期望的。在临床试验中，LDL胆固醇水平的降低已直接与冠状动脉事件的速率相关；Law等人，2003BMJ 326:1423-1427。血浆LDL胆固醇水平的适度终身降低经发现与冠状动脉事件的发生率的实质性降低相关；Cohen等人，2006N.Engl.J.Med.354:1264-1272。甚至在非脂质相关心血管风险因素的高发病率群体中也是如此情况；同前文献。因此，将从对LDL胆固醇水平的管理控制中取得较大益处。
还称为神经凋亡受调的转化酶1(“NARC-1”)的前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶-kexin 9型(下文中称作“PCSK9”)为一种经鉴别为分泌性枯草杆菌酶家族的第9成员的蛋白酶K类枯草杆菌酶；参见Seidah等人，2003PNAS 100:928-933。PCSK9属于丝氨酸蛋白酶的哺乳动物前蛋白转化酶家族，且含有N端信号序列、前域、催化域和C端域；参见Seidah等人，2012Nat.Rev.Drug Discov.11:367–383。对PCSK9转录调节的研究表明，其通过固醇调节元件-结合蛋白(“SREBP”)进行调节，如涉及胆固醇代谢的其他基因所见；Maxwell等人，2003J.Lipid Res.44:2109-2119，从涉及脂蛋白代谢的其他基因可以看出；Dubuc等人，2004Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.24:1454-1459。他汀类(Statin)已显示出以归因于药物的胆固醇降低效果的方式上调PCSK9表达；同前文献。此外，已显示出PCSK9启动子拥有参与胆固醇调节的两个保守位点，固醇调节组件和Sp1位点；同前文献。
当在内质网中时，PCSK9以其仅有催化活性在残基Gln-152和Ser-153之间执行自裂解；参见Naureckiene等人，2003Arch.Biochem.Biophys.420:55–67；Seidah等人，2003Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100:928–933。在通过反式高尔基体网络连续迁移期间，前域保持与催化域紧密相关联。已表明，经由自裂解的成熟对于PCSK9分泌和后续胞外功能而言至关重要(参见Benjannet等人，2012J.Biol.Chem.287:33745–33755)。因此，若干条证据表明，PCSK9尤其降低肝LDLR蛋白的量，且因此损害肝脏自循环移除LDL胆固醇的能力。
归因于肝LDLR蛋白的剧烈损失，PCSK9在小鼠肝中的腺病毒介导的过表达导致循环LDL-C的积聚，其中对LDLR mRNA水平无影响；Benjannet等人，2004J.Biol.Chem.279:48865-48875；Maxwell和Breslow，2004PNAS 101:7100-7105；Park等人，2004J.Biol.Chem.279:50630-50638；和Lalanne等人，2005J.Lipid Res.46:1312-1319。PCSK9过表达对升高小鼠体内的循环LDL-C水平的影响完全视LDLR的表现而定，再次指示通过PCSK9对LDL-C的调节是通过LDLR蛋白的下调介导的。与这些发现一致，缺乏PCSK9或其中PCSK9 mRNA已通过反义寡核苷酸抑制剂降低的小鼠具有较高水平的肝LDLR蛋白和较大的清除循环LDL-C的能力；Rashid等人，2005PNAS 102:5374-5379；和Graham等人，2007J.Lipid Res.48(4):763-767。另外，通过siRNA降低培养的人类肝细胞中的PCSK9含量还导致较高的LDLR蛋白水平和增加的吸收LDL-C的能力；Benjannet等人，2004J.Biol.Chem.279:48865-48875；和Lalanne等人，2005J.Lipid Res.46:1312-1319。总之，这些数据指示PCSK9作用通过降低LDLR蛋白水平导致增加的LDL-C。
基因PCSK9中的突变数目还已确凿地与常染色体显性高胆固醇血症(“ADH”)相关联，该常染色体显性高胆固醇血症为一种由血浆中显著升高的低密度脂蛋白(“LDL”)粒子表征的遗传性代谢病症，其可导致过早的心血管衰竭；参见Abifadel等人，2003NatureGenetics 34:154-156；Timms等人，2004Hum.Genet.114:349-353；Leren,2004Clin.Genet.65:419-422。由Abifadel等人(同前文献)后期出版的对S127R突变的研究报导，携带此突变的患者血浆中呈现较高的总胆固醇和apoB100，这归因于(1)诸如低密度脂蛋白(“LDL”)、极低密度脂蛋白(“VLDL”)和中等密度脂蛋白(“IDL”)的含apoB100脂蛋白的过度产生，和(2)所述脂蛋白的清除或转化的相关联降低；Ouguerram等人，2004Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.24:1448-1453。
因此，可毋庸置疑的是，PCSK9发挥调节LDL的作用。PCSK9的表达或上调与增加的LDL胆固醇血浆水平相关联，且PCSK9表达的对应抑制或缺失与降低的LDL胆固醇血浆水平相关联。已发现，与PCSK9的序列变异相关联的减小的LDL胆固醇水平赋予对冠心病的防护；Cohen,2006N.Engl.J.Med.354:1264-1272。
因此，对有效治疗心血管病患的化合物和/或药剂的鉴别是高度期望的，包括PCSK9在LDL调节中的拮抗作用，然而，通常，因为PCSK9在血液中循环且对细胞表面LDL受体具有适中结合亲和力，所以迄今对在治疗与高血清LDL水平相关的疾病时利用此机制的尝试已聚焦于使用大生物分子，例如抗体。因此，很少有出版物反映针对此目标使用小肽或小分子来抑制PCSK9的活性，参见例如Zhang等人，2014J.Biol.Chemistry,289(2):942-955。此外，存在极小量的化合物，所述化合物适合于配制为利用给药此类化合物的口服施用途径的剂型，该口服施用途径为一种对提供病状疗法(其中对PCSK9活性的调节可发挥作用)将高度期望的途径。
本发明通过提供PCSK9的拮抗剂而推进这些利益，据信所述拮抗剂具有用于抑制PCSK9的活性和PCSK9在各种病状(PCSK9拮抗剂的施用为其提供治疗)中所发挥的对应作用的用途。
发明内容
在一个方面中，本发明提供了式I化合物：
Figure BDA0002846014700000041
其中：
X为H、F、Cl或Br；
R1选自：
(a)-H；或
(b)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为：
(i)-H；
(ii)–NH2；
(iii)-N+H3；
(iv)-N+(H3C)3；
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B，其中R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B，其中：y12和y13不均为2且独立地为2至4；R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为-O-(CH2)za-N+(CH3)3，其中za为3或4；和
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为：
(ai)–O-(CH2)2-N+(CH3)3；
(aii)-N+(CH3)3；或
(aiii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000051
R2选自：
(a)-H；和
(b)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A选自：
(i)-H；
(ii)–NH2；
(iii)-N+H3；
(iv)-N+(H3C)3；
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B，其中R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B，其中：y12和y13不均为2且独立地为2至4；且R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为-O-(CH2)zb-N+(CH3)3，其中zb为3或4；和
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为：
(ai)–O-(CH2)2-N+(CH3)3；
(aii)-N+(CH3)2R14ca，其中R14ca为–CH3或–(CH2)1-4-OCH3；
(aiii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000052
或
(aiv)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000053
其中R14Cb和R14Cc为1至4；或
R1与R2可结合在一起以形成下式的部分：
Figure BDA0002846014700000061
其中：
G1、RG1a和RG1b定义如下：
(a)G1为下式的接头(linker)部分：
Figure BDA0002846014700000062
其中nq1为1至6，mq1为0、1或2，且同时选择nq1和mq1的值以使得其所限定的接头部分的长度不超出总共8个碳原子和/或氧原子，其包含在形成羰基部分的链中包括碳原子的链；
RG1a选自：(i)-H；和(ii)至多4个碳原子的烷基；且
RG1b选自：
(i)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000063
和
(ii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000064
或
(b)G1为下式的接头部分：
Figure BDA0002846014700000065
其中nq2为0、1或2，mq2为1至6，且同时选择nq2和mq2的值以使得其所限定的接头部分的长度不超出总共8个碳原子和/或氧原子，其包含在形成羰基部分的链中包括碳原子的链；
RG1a选自：
(i)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000071
和
(ii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000072
和
RG1b选自：(i)-H；和(ii)至多4个碳原子的烷基；
R8为-CH3或下式的部分：
Figure BDA0002846014700000073
其中R8a为-H，或至多四个碳原子的直链、支链或环状烷基；
A选自：
(a)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000074
(b)-CH2-(CH2)y-CH2-，其中y为1至6；
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000075
其中Ab1为：
(i)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000076
其中x为1至6；或
(ii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000081
其中y为1至5；
(d)下式的部分：-CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-，其中m＝1至5，且n＝0或1至4；
B为：
(a)键；
(b)–(CH2)1-4；或
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000082
D为：
(a)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000083
其中E为-CH2-或-(CH2)2-4-O-，且A和B如上文所定义；
(b)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000084
其中A和B如上文所定义；
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000085
其中na为1、2或3，ma为2、3或4，且na+ma为≥3，且其中A和B如上文所定义；
(d)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000091
其中，R34b为-H或至多四个碳原子的直链、支链或环烷基，且A和B如上文所定义，
或其任何药学上可接受的盐。
在另一实施方式中，本发明提供了式I的化合物，其中X为F，或其任何药学上可接受的盐。在一些实施方式中，D优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000092
其中，E为-CH2-或-(CH2)2-O-，且A和B如本文中所定义。
在一些实施方式中，D优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000093
其中，E为-CH2-或-(CH2)2-O-，且A和B如本文中所定义。
在一些实施方式中，D优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000094
其中A和B如本文中所定义。
在一些实施方式中，D优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000095
其中A和B如本文中所定义。
在一些实施方式中，D优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000101
其中A和B如本文中所定义。
在一些实施方式中，D优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000102
其中A和B如本文中所定义。
在一些实施方式中，D优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000103
其中A和B如本文中所定义。
在一些实施方式中，D优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000104
其中A和B如本文中所定义。
在其中R1和R2连同其所连接的肽环连接在一起，从而形成环状结构的一些实施方式中，R1和R2优选形成以下结构的部分：
Figure BDA0002846014700000105
在一个实施方式中，本发明提供了包含本发明化合物(例如式I化合物)和至少一种药物赋形剂的药物组合物，优选为针对口服施用的组合物。
在一个方面中，本发明提供了在针对与PCSK9活性相关的疾病状态提供疗法时，通过向有此需要的受试者施用治疗有效量的优选地呈药物组合物形式的式I的化合物或其盐来拮抗PCSK9的方法，所述疾病状态例如动脉粥样硬化、高胆固醇血症、冠心病、代谢综合征、急性冠状动脉综合征或相关的心血管疾病和心血管代谢病状。
具体实施方式
在以下描述中，采用已知的结构性表示且其包括针对某些非对称碳中心的常规立体化学符号。
因此，本发明的化合物的结构性表示包括示于实施例化合物中的一些非对称碳中心的常规立体化学符号。因此，在此类情况下，实心黑色“楔形”键表示自重现介质的平面突出的键，“散列楔形”键表示重现介质的平面中的下降键，且带有双键的碳所附接的“波浪”线指示包括可能的顺式和反式定向两者。如常规的那样，普通实线表示所描绘结合的所有空间构型。因此，在未提供特定立体化学符号时，该表示涵盖结构性特征的所有立体化学和空间定向。
如本发明的实例中所显示且如上文所提及，特定非对称碳中心使用已知“实心楔形”和“散列楔形”结合表示来进行结构性表示。大多数情况下，尚未确定实施例化合物的绝对构型，但已通过模拟将绝对构型分配至使用相同或类似反应条件和起始试剂且在相同层析条件下分离所制备的具有已知立体化学构型(通过X射线结晶测定)的特定实施例化合物。因此，除非在所呈现资料中另外指出，否则本文中在结构上呈现的构型的特定分配意指用于鉴别所制备特定化合物已具有过量的一种特定立体异构体，且在本文中不一定提出为该化合物的立体化学结构的绝对测定的陈述。
应了解，在获得异构混合物时，可视需要通过使用常规方法，例如通过层析或结晶，或通过使用用于所述合成的立体化学上均一的起始物质或通过立体选择性合成来分离混合物，以显著百分比的对映异构体过量的形式来进行单独的立体异构体的制备。任选可在分离立体异构体之前进行衍生作用。可在式I化合物合成期间在中间步骤处进行立体异构体混合物的分离或其可对最终外消旋产物进行。
当在本文中指示时，通过结晶产物或结晶中间体的X射线结晶来测定绝对立体化学，所述结晶产物或结晶中间体视需要通过含有已知构型的立体对称中心的试剂衍生。除非指示此类外消旋体、对映异构体或非对映异构体的具体异构体、盐、溶剂合物(包括水合物)或溶剂化盐，否则本发明包括全部此类异构体以及此类外消旋体、对映异构体、非对映异构体和其混合物的盐、溶剂合物(包括水合物)和溶剂化盐。
本发明还包括同位素标记的本发明化合物，其结构上等同于本文中所叙述的那些，但事实上化合物的那种形式中的统计学显著百分比的一种或多种原子经具有不同于在自然界中通常发现的最丰富同位素的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子置换，因此更改本发明的化合物中存在的那种同位素的天然存在丰度。本发明意欲包括式I化合物的所有合适的同位素变体。
可优选地并入至本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、碘、氟和氯的同位素，例如但不限于：2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl、123I和125I。应了解，还可通过已知手段并入其他同位素。
特别地，本发明的某些同位素标记的化合物(例如，以3H、11C和14C标记的那些)被认为特别适用于使用多种已知技术的化合物和/或底物组织分布分析中。另外，本发明的化合物涵盖同位素取代物，其包括不同同位素形式的氢(H)，包括氕(1H)和氘(2H或D)。氕为自然界中存在的主要氢同位素。富集氘可获得某些治疗优势，例如增加体内半衰期或降低剂量需求，或可提供适用作表征生物样本的标准物的化合物。式I内的同位素富集化合物无需过度实验即可通过本领域技术人员熟知的已知技术或通过与本文中的方案和实例中所述的那些类似的方法使用适当的同位素富集试剂和/或中间体来制备。
波浪线终止常规键(与连接结构内的两个原子相对)时指示与结构结合的点，例如：
Figure BDA0002846014700000131
指示仲丁基部分经由亚甲基经由波浪线终止的键而结合。当字母符号用于描绘取代基部分时，破折号用于指示与所指示底物结合的点，例如：-CH2-C(O)-CH2Cl指示氯化乙酰基部分经由该部分的亚甲基部分结合。
除非在定义点处另外规定，否则当任何变量(例如，n、Ra、Rb等)在任何成分中或在式I中出现超过一次时，其在每次出现时的定义独立于其在其他每次出现时的定义。本领域普通技术人员将认识到，对定义于结构性表示中的各种取代基(即R1、RA等)的组合的选择将与化学结构连接性和稳定性的熟知原则一致地进行选择，且取代基和/或变量的组合仅在此类组合产生稳定化合物时是可允许的。
“稳定的”化合物为可制备和分离的化合物，且其结构和特性仍保持或可导致基本上保持不变持续足以允许将化合物用于本文中所述的目的的时间段(例如，向受试者治疗性施用)。本发明的化合物限于式I所包括的稳定的化合物。
当任何变量或部分以一定范围的形式表现时，例如(-CH2-)1-4，其包括所指定范围的两个极值(即实例中的1和4)以及介于两者之间的所有整数值(即实例中的2和3)。
除非在使用点处另外规定，否则术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。如本文使用的术语“受试者”(或者“患者”)是指动物，优选哺乳动物，且特别是人类或包括牲畜动物和家畜的非人类动物，包括但不限于牛、马、绵羊、猪、山羊、兔、猫、狗和需要治疗的其他哺乳动物。在一些实施方式中，受试者优选为人类。如本文所用，参考式I化合物的术语“施用”和其变体(例如，“施用”化合物)意指向需要治疗的受试者提供化合物或其药学上可接受的盐。
如上文所提及，在一个方面中，本发明包括提供了具有拮抗PCSK9功能的特性的式I化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施方式中，式I的化合物具有式IA的结构：
Figure BDA0002846014700000141
其中：
R1选自：
(a)-H；或
(b)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为：
(i)-H；
(ii)–NH2；
(iii)-N+H3；
(iv)-N+(H3C)3；
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B，其中R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]1-4-(CH2)y13R14B，优选-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B，其中：y12和y13不均为2且独立地为2至4；且R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为-O-(CH2)za-N+(CH3)3，其中za为3或4；和
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为：
(ai)–O-(CH2)2-N+(CH3)3；
(aii)-N+(CH3)3；或
(aiii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000151
R2选自：
(a)-H；和
(b)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A选自：
(i)-H；
(ii)–NH2；
(iii)-N+H3；
(iv)-N+(H3C)3；
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1-4-(CH2)2R14B，优选-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B，其中R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B，其中：y12和y13不均为2且独立地为2至4；且R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为-O-(CH2)zb-N+(CH3)3，其中zb为3或4；和
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为：
(ai)–O-(CH2)2-N+(CH3)3；
(aii)-N+(CH3)2R14ca，其中R14ca为–CH3或–(CH2)1-4-OCH3；
(aiii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000152
或
(aiv)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000161
其中Y14Cb和Y14Cc为1至4；或
R1与R2可结合在一起以形成下式的部分：
Figure BDA0002846014700000162
其中：
G1、RG1a和RG1b定义如下：
(a)G1为下式的接头部分：
Figure BDA0002846014700000163
其中nq1为1至6，mq1为0、1或2，且同时选择nq1和mq1的值以使得其所限定的接头部分的长度不超出总共8个碳原子和/或氧原子，该接头部分包含在形成羰基部分的链中包括碳原子的链；
RG1a选自：(i)-H；和(ii)至多4个碳原子的烷基；且
RG1b选自：
(i)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000164
和
(ii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000165
或
(b)G1为下式的接头部分：
Figure BDA0002846014700000171
其中nq2为0、1或2，mq2为1至6，且同时选择nq2和mq2的值以使得其所限定的接头部分的长度不超出总共8个碳原子和/或氧原子，该接头部分包含在形成羰基部分的链中包括碳原子的链；
RG1a选自：
(i)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000172
和
(ii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000173
且
RG1b选自：(i)-H；和(ii)至多4个碳原子的烷基；
R8为–CH3或下式的部分：
Figure BDA0002846014700000174
其中R8a为-H，或至多四个碳原子的直链、支链或环状烷基；
A选自：
(a)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000175
(b)-CH2-(CH2)y-CH2-，其中y为1至6；
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000176
其中Ab1为：
(i)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000181
其中x为1至6；或
(ii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000182
其中y为1至5；
(d)下式的部分：-CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-，其中m＝1至5，且n＝0或1至4；
B为：
(a)键；
(b)–(CH2)1-4；或
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000183
D为：
(a)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000184
其中E为-CH2-或-(CH2)2-4-O-，且A和B如上文所定义；
(b)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000185
其中A和B如上文所定义；
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000191
其中na为1、2或3，ma为2、3或4，且na+ma为至少3，且其中A和B如上文所定义；
(d)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000192
其中，R34b为-H或至多四个碳原子的直链、支链或环烷基，且A和B如上文所定义，
或其任何药学上可接受的盐。
在式IA化合物的一个实施方式中，R1为-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为：
(i)-H；
(ii)–NH2；
(iii)-N+H3；或
(iv)-N+(H3C)3；
R2为-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A选自：
(i)-H；
(ii)–NH2；
(iii)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1-4-(CH2)2R14B，优选-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B，其中R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(iv)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B，其中：y12和y13不均为2且独立地为2至4；且R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(v)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中y＝1至6且R14C为-O-(CH2)zb-N+(CH3)3，其中zb为3或4；和
(vi)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中y＝1至6且R14C为：
(ai)–O-(CH2)2-N+(CH3)3；
(aii)-N+(CH3)2R14ca，其中R14ca为–CH3或–(CH2)1-4-OCH3；
(aiii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000201
或
(aiv)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000202
其中Y14Cb和Y14Cc为1至4；或
R8为-CH3或下式的部分：
Figure BDA0002846014700000203
其中R8a为-H，或至多四个碳原子的直链、支链或环烷基；
A选自：
(a)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000204
(b)-CH2-(CH2)y-CH2-，其中y为1至6；
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000205
其中Ab1为：
(i)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000206
其中x为1至6；或
(ii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000211
其中y为1至5；和
(d)下式的部分：-CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-，其中m＝1至5，且n＝0或1至4；
B为：
(a)–(CH2)1-4；或
(b)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000212
D为：
(a)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000213
其中E为-CH2-或-(CH2)2-4-O-，且A和B如上文所定义；
(b)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000214
其中A和B如上文所定义；或
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000215
其中，R34b为-H或至多四个碳原子的直链、支链或环烷基，且A和B如上文所定义，
或任何其药学上可接受的盐。
在式IA化合物的一个实施方式中，D为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000221
其中，E为-CH2-或-(CH2)2-O-，且A和B如上文在式IA中所定义。
在式IA化合物的一个实施方式中，A为：
(a)–(CH2)6；
(b)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000222
其中x为1至3；或
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000223
在式IA化合物的另一实施方式中，R2为：
(a)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为：
(a)-H；
(b)–CH3；
(c)–NH2；
(d)-N+H3；
(e)-N+(H3C)3；
(f)-NH-C(O)-[(CH2)2-4-O-]2-4-(CH2)2-4R14B，其中R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(g)-NH-C(O)-[(CH2)yR14C，其中y＝1至6且R14C为：
(ai)–O-(CH2)2-4-N+(CH3)3；
(aii)-N+(CH3)3；或
(aiii)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000231
或
(b)下式的部分
Figure BDA0002846014700000232
在式IA化合物的另一实施方式中，R1选自：
(a)-H；
(b)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为：
(i)-H；
(ii)-N+H3；或
(iii)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N+(CH3)3。
在式IA化合物的又一实施方式中，A为-CH2-(CH2)y-CH2-，其中y为3-5。在另一实施方式中，A为-(CH2)6。
在式IA化合物的另一实施方式中，B为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000233
在式IA化合物的另一实施方式中，R1为-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为-H。在式IA化合物的另一实施方式中，R1为-(CH2)z-R14A，其中：z为1，且R14A为-H。
在式IA化合物的另一实施方式中，R2为-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中y＝1至6且R14C为-N+(CH3)2R14ca，其中R14ca为-CH3。
在式IA化合物的另一实施方式中，R8为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000241
其中R8a为-H或至多四个碳原子的直链烷基。在另一实施方式中，R8为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000242
其中R8b为-H、-CH3或-C(CH3)3。
在一些实施方式中，式I化合物优选具有式II或式IIA的结构，或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002846014700000243
Figure BDA0002846014700000251
其中，A、R1和R2如以上式IA中所定义，且B1为-(CH2)0-2，且D1选自：
a)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000252
和
b)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000253
在式II或式IIA的一些实施方式中，D1优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000254
在式II或式IIA的一些实施方式中，D1优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000255
在式II或式IIA的一些实施方式中，D1优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000256
在式II或式IIA的一些实施方式中，D1优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000257
在一些实施方式中，式I化合物优选为式III化合物：
Figure BDA0002846014700000261
其中，A、R1和R2如以上式IA中所定义，且D2为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000262
在式III的一些实施方式中，D2优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000263
在式III的一些实施方式中，D2优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000264
在式III的一些实施方式中，D2优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000265
在一些实施方式中，式I化合物优选为式IV化合物：
Figure BDA0002846014700000271
其中A、R1和R2如以上式IA中所定义。
在一些实施方式中，式I化合物为式V化合物：
Figure BDA0002846014700000272
其中
A、B、R1和R2如以上式IA中所定义；且
D2为：
(a)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000281
(b)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000282
(c)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000283
或
(d)下式的部分：
Figure BDA0002846014700000284
在式I、式IA、式II、式IIA、式III、式IV或式V的一些实施方式中，A优选为下式的部分：–(CH2)ya，其中ya为4至6。在式I、式IA、式II或式IIA的一些实施方式中，A优选为下式的部分：-CH2-(CH2)ma-O-(CH2)na-，其中ma为2或3且na为0或1。在式III、式IV或式V的一些实施方式中，A优选为下式的部分：-CH2-(CH2)ma-O-(CH2)na-，其中ma为2或4且na为0、1或2。在式I、式IA、式II、式IIA、式III、式IV或式V的一些实施方式中，A优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000291
其中yb为1至3。在式I、式IA、式II、式IIA、式III、式IV或式V的一些实施方式中，A优选为下式的部分：
Figure BDA0002846014700000292
作为式I化合物，本文还提供了化合物Ex-1、Ex-2、Ex-3、Ex-4、Ex-5、Ex-6、Ex-7、Ex-8、Ex-9、Ex-10、Ex-11、Ex-12、Ex-13、Ex-14、Ex-15、Ex-16、Ex-17、Ex-18、Ex-19、Ex-20、Ex-21、Ex-22、Ex-23、Ex-24、Ex-25、Ex-26、Ex-27、Ex-28、Ex-29、Ex-31、Ex-35、Ex-36、Ex-38、Ex-39、Ex-40、Ex-41、Ex-44、Ex-47、Ex-48、Ex-49、Ex-50、Ex-51、Ex-52、Ex-53、Ex-54、Ex-55、Ex-56、Ex-57、Ex-58、Ex-59、Ex-60和Ex-61，或其任何药学上可接受的盐。公开于表1中的这些化合物在本文中还称为“本发明的化合物”。
表1
Figure BDA0002846014700000293
Figure BDA0002846014700000301
Figure BDA0002846014700000311
Figure BDA0002846014700000312
Figure BDA0002846014700000321
Figure BDA0002846014700000322
Figure BDA0002846014700000331
Figure BDA0002846014700000332
Figure BDA0002846014700000341
Figure BDA0002846014700000342
Figure BDA0002846014700000351
Figure BDA0002846014700000352
Figure BDA0002846014700000361
Figure BDA0002846014700000362
其中A-为药学上可接受的阴离子。
本文中采用的术语“盐”和其在短语使用“药学上可接受的盐”包括以下任一项：与无机酸和/或有机酸形成的酸盐、与无机碱和/或有机碱形成的碱盐、两性离子和季铵复合物。本发明的化合物的盐可通过本领域普通技术人员已知的方法，例如通过使本发明的化合物与一定量(如一定当量)的酸或碱在诸如盐沉淀的介质或水性介质中反应，随后冻干而形成。
本发明的化合物含有三配位氮原子，例如伯、仲或叔氨基部分，其中如已知的，存在于氮原子上的孤电子对可在适当反应条件下用适当酸质子化或用适当试剂(例如烷基溴化物)烷基化，以提供通过该过程中所产生的阴离子(例如卤素离子或共轭碱)稳定化的四配位带电氮。因此，本发明的化合物可以游离碱的形式来制备，或以季络合物或盐络合物的形式来分离。在一些情况下，其中适当酸性质子靠近两性离子络合物的碱性氮形成是可能的。当在本文中采用术语时，无论是与无机酸和/或有机酸形成的酸盐、与无机碱和/或有机碱形成的碱盐、所形成的包括两性离子性质的盐(例如其中化合物含有碱性部分，例如但不限于氮原子，例如胺、吡啶或咪唑；和酸性部分，例如但不限于羧酸两者)和季铵络合物，本发明化合物的盐均包括于本文中所述的本发明化合物的范围内。
因此，无论呈游离碱形式、盐形式、两性离子形成还是季铵形式，本发明的化合物的结构性表示还包括上文所论述的此类化合物的所有其他形式。因此，本发明的一个方面为以药学上可接受的盐、两性离子络合物或季铵络合物形式来提供本发明的化合物。本领域技术人员将认识到本发明的化合物可形成此类络合物的那些实例，包括其中四配位氮可被季铵化或质子化且带电氮形式通过相关联阴离子稳定化的实例。术语“药学上可接受的盐”是指拥有类似于或大于化合物的游离碱形式的效果且并非在生物学上或其他方面不希望(例如既无毒性，也不以其他方式对其接受者有害)的盐(包括季铵络合物和诸如两性离子络合物的内盐)。
通过例如以下来讨论从碱性(或酸性)药物化合物形成药学上有用的盐：S.Berge等人,Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould,InternationalJ.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等人,The Practice of MedicinalChemistry(1996),Academic Press,New York；The Orange Book中(Food&DrugAdministration,Washington,D.C.，在其网站上)；和P.Heinrich Stahl,CamilleG.Wermuth(编),Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,(2002)Int’l.Union of Pure and Applied Chemistry,第330-331页。这些公开内容以引用方式并入本文中。
本发明涵盖本发明的化合物的游离碱形式和所有可用的盐两者，包括通常被认为可安全地用于制备药物制剂的盐，以及目前可以在本领域普通技术人员范围内形成且后来被分类为“一般公认安全的”用于制备药物制剂的那些，在本文中称为“药学上可接受的盐”。可以理解，游离碱化合物可以通过控制合成期间化合物的分离条件或通过中和和从本发明化合物的盐形式进行离子交换来制备。
药学上可接受的酸盐的实例包括但不限于乙酸盐(包括三氟乙酸盐)、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐(诸如本文中所提及的那些)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate)(还称为甲苯磺酸盐(tosylate)、十一烷酸盐等。
药学上可接受的碱盐的实例包括但不限于铵盐、碱金属盐(如钠、锂和钾盐)、碱土金属盐(如钙和镁盐、铝盐、锌盐)、具有有机碱(例如，有机胺)的盐(如苄星(benzathines)、二乙胺、二环已胺、海巴明(hydrabamines)(用N,N-双(去氢松香基)乙二胺形成)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺、叔丁胺、哌嗪、苯基环己基-胺、胆碱、氨丁三醇)和具有氨基酸(如精氨酸、赖氨酸)的盐等。碱性含氮基团可转化为铵离子或用诸如以下的药剂经季铵化：低级烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸盐(例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐)、长链卤化物(例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基和苯乙基溴化物)和其他药剂。
术语“药学上可接受的阴离子”是指适用于形成药学上可接受的盐的阴离子。
可与本发明一起使用的药学上可接受的盐的其他实例包括但不限于氟化物、氯化物、溴化物和碘化物。
通常，化合物的盐意在为在本发明的范围内的药学上可接受的盐。
术语化合物的“纯化”、“呈纯化形式”或“呈分离和纯化形式”是指该化合物在从合成方法或天然来源或其组合中分离之后的物理状态。因此，术语化合物的“纯化”、“呈纯化形式”或“呈分离和纯化形式”是指在从纯化方法或本文中所述或本领域技术人员所熟知的方法获得之后且呈通过本文中所述或本领域技术人员熟知的标准分析技术表征的充分纯度的该化合物的物理状态。本发明的化合物包括化合物的任何形式，其包括呈原位反应混合物以及通过常规技术获得的分离和纯化形式。还包括本发明的化合物的多晶型形式及其溶剂合物和前药。
本发明的某些化合物可以不同互变异构形式存在，例如但不限于酮/烯醇互变异构形式、亚胺-烯胺互变异构形式和例如诸如以下部分的杂芳族形式：
Figure BDA0002846014700000391
以相同方式，除非另外指示，否则呈现显示出互变异构的化合物的任何互变异构形式的结构性表示意指包括该化合物的所有此类互变异构形式。因此，当本发明的化合物、其盐以及其溶剂合物和前药可以不同互变异构形式存在或在此类形式中处于平衡时，该化合物的所有此类形式涵盖于且包括于本发明的范围内。
在另一方面中，本发明提供包含一种或多种本发明的化合物的药物组合物。如本文所用，术语“药物组合物”包含至少一种药物活性化合物和至少一种赋形剂，且意欲涵盖所规定成分以规定量的组合和由所规定成分以规定量的组合直接或间接产生的任何产物两者。
本领域普通技术人员应了解，赋形剂为使组合物适应特定施用途径或有助于将组合物处理为剂型而自身不发挥活性药物效果的任何成分。通常，视施用途径和所施用活性剂的特性而定，组合物包含一种以上赋形剂。向组合物赋予使其更易于处理或加工的特性的赋形剂的实例包括但不限于意欲制成片剂的粉末药物中的润滑剂或压制助剂和组合物中的乳化稳定剂(其中活性剂以乳液的形式存在)。使组合物适应于所要施用途径的赋形剂的实例为例如但不限于，针对口服施用，促进从胃肠道吸收的吸收增进剂；针对经皮或经粘膜施用，渗透增进剂，例如用于粘性皮肤“贴剂”的那些或用于经颊施用的组合物。
尽管功能赋形剂以组合物形式来执行，但赋形剂在本文中统称为“载体”。典型地，虽然可以不同比率来制备制剂，但制剂可包含高达约95％的活性成分和余量载体。通常，可接受药物组合物含有合适浓度的活性剂，从而可基于施用途径以可接受体积的单独剂型提供有效量的PCSK9拮抗剂，以使得所述药物组合物可在施用组合物的受试者中提供治疗血清水平的活性剂持续可接受的时间段，且组合物将在可接受温度范围内储存可接受时间段期间保持生物活性。
如本文所用，药物组合物是指散装(bulk)组合物，即尚未形成为单独剂量单位以供施用的配制材料，和单独剂量单位内所含有的组合物两者。
虽然本发明的组合物可以散装形式采用，但应了解，对于大多数应用，组合物将并入至提供适用于施用至患者的单独单元的剂型中，各剂型包含含有有效量的所述一种或多种式I化合物的一定量的所选组合物。合适剂型的实例包括但不限于适用于以下的剂型：(i)口服施用，例如液体、凝胶、粉末、固体或半固体药物组合物，其装载至胶囊中或压制为片剂且可另外包含修改其释放特性的一种或多种包衣(例如，赋予延迟释放的包衣)或具有延迟释放特性的制剂；(ii)适用于通过口腔的组织施用的剂型，例如适用于提供粘膜内施用的速溶片剂、锭剂(lozenge)、溶液、凝胶、药囊(sachet)或针头阵列(needle array)；(iii)适用于经由鼻粘膜或上呼吸道腔施用的剂型，例如用于分散在鼻或呼吸道中的溶液、悬浮液或乳液制剂；(iv)适用于经皮施用的剂型，例如贴片、乳膏或凝胶；(v)适用于皮内施用的剂型，例如微针阵列(microneedle array)；(vi)适用于静脉内(IV)输注的剂型，例如历经长时间段使用静脉内输液泵；(vii)适用于肌内施用(IM)的剂型，例如可注射溶液或悬浮液，且该剂型可适用于形成具有延迟释放特性的储库；(viii)适用于静脉内滴注施用(IV)的剂型，例如溶液或悬浮液，例如作为IV溶液或待注射至生理盐水IV袋中的浓缩物；(ix)适用于皮下施用的剂型，包括历经延长时间段通过植入棒(rod)或将化合物扩散至周围组织中且由此提供持续血清治疗水平的其他装置来施用；或(x)适用于经由直肠或阴道粘膜递送的剂型，例如栓剂。
药物组合物可为固体、半固体或液体。固体、半固体和液体形式制剂可适用于多种施用模式，所述制剂的实例包括但不限于可例如用于压片、封装或直接施用的粉末、可分散颗粒、微型片剂、珠粒。另外，液体形式制剂包括但不限于溶液、悬浮液和乳液，所述制剂例如但非排他地可采用呈意欲用于摄入、吸入或静脉内施用(IV)(例如但不限于经由滴注IV或输液泵、肌肉内注射(IM)的施用(例如历经延长持续时间释放的药团(bolus))、直接IV注射)或适用于皮下施用途径的制剂的形式。
可考虑的其他施用途径包括鼻内施用或用于一些其他粘膜的施用。制备用于各种粘膜施用的制剂还可包括使其适应于此类施用的额外组分，例如粘度调节剂。
虽然在一些实施方式中，适用于固体口服剂型(例如片剂或速熔口腔溶解制剂)的组合物为本发明化合物或其盐的优选施用途径，但本发明的组合物可以配制为经由上文所提及的其他途径来施用。实例包括例如适用于经由吸入或经由鼻粘膜施用的气溶胶制剂，可包括溶液和呈粉末形式的固体，其可与例如惰性压缩气体(例如氮)的药学上可接受的推进剂组合。并且，包括意欲在使用前即刻转化为例如用于口服或肠胃外施用的悬浮液或溶液的固体形式制剂。此类固体形式的实例包括但不限于冷冻干燥制剂和吸附至固体吸收剂介质中的液体制剂。
例如，本发明的化合物还可由例如液体、栓剂、乳膏、泡沫、凝胶或快速溶解固体形式经皮或经粘膜递送。应了解，经皮组合物还可采用乳膏、乳液、喷雾剂和/或乳液的形式，且可以包括本领域已知的任何经皮贴片的单位剂型来提供，该经皮贴片例如并入包含药物活性化合物的基质或包含固体或液体形式的药物活性化合物的储库的贴片。
药学上可接受的载体和制造上文提及的各种组合物的方法的实例可在A.Gennaro(编),Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,(2000),LippincottWilliams与Wilkins,Baltimore,MD中找到。可以在以下出版物中找到解决制剂问题的其他实例：可以通过本领域已知的许多策略来配制药物组合物，参见例如McGoff和Scher，2000Solution Formulation of Proteins/Peptides:–McNally,E.J.编.ProteinFormulation and Delivery.New York,NY:Marcel Dekker；第139至158页；Akers和Defilippis,2000,Peptides and Proteins as Parenteral Solutions.–PharmaceuticalFormulation Development of Peptides and Proteins.Philadelphia,PA:Taylor andFrancis；第145至177页；Akers等人,2002,Pharm.Biotechnol.14:47-127。
在另一方面中，本发明提供了采用本文所述的PCSK9特异性拮抗剂化合物以拮抗PCSK9功能的方法；所述方法在下文进一步描述。贯穿本申请使用的术语“拮抗”是指向受影响组织提供对抗受影响组织中的PCSK9的作用，抑制、抵消、中和或降低受影响组织中的PCSK9的一种或多种功能的物质。对PCSK9相关联功能特性中的一个或多个的抑制或拮抗可易于根据本领域已知的方法来测定(参见例如Barak和Webb,1981J.Cell Biol.90:595-604；Stephan&Yurachek,1993J.Lipid Res.34:325330；和McNamara等人,2006ClinicaChimica Acta369:158-167)以及本文中所述的那些方法。相对于在不存在拮抗剂的情况中所见的或例如相对于当存在具有不相关特异性的对照拮抗剂时所观测到的活性所见的，抑制或拮抗将实现PCSK9活性的降低。优选地，本发明的PCSK9特异性拮抗剂将PCSK9功能拮抗至所测量参数(包括但不限于本文中所公开的活性)降低至少10％，且更优选，所测量参数降低至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、和95％的点。对PCSK9功能的此类抑制/拮抗在其中PCSK9功能至少部分地促成负面影响个体的特定表型、疾病、病症或病状的那些情况下尤其有效。
在一个方面中，本发明提供了一种用于拮抗PCSK9的活性的方法，该方法包括在允许所述拮抗剂与PCSK9(存在时)结合并抑制PCSK9对细胞LDL吸收的抑制的条件下，将能够受PCSK9(即，其表现和/或包含LDL受体)影响的细胞、细胞群体或组织样本与本文所公开的PCSK9特异性拮抗剂接触。本发明的一些实施方式包括其中细胞为人类细胞的此类方法。本发明的另外实施方式包括其中细胞为小鼠细胞的此类方法。
在一个方面中，本发明提供了一种用于拮抗受试者中的PCSK9的活性的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的PCSK9特异性拮抗剂。在一些实施方式中，用于拮抗PCSK9功能的方法如本文中所定义用于PCSK9相关联疾病、病症或病状的治疗，或可替代地用于在可受益于PCSK9拮抗剂的作用的疾病、病症或病状中提供疗法。
因此，本发明涵盖本文中所述的PCSK9特异性拮抗剂在需要拮抗PCSK9功能的各种治疗方法中的用途。如本文所用，术语“治疗方法”涉及导致在本质上可为防治性或治疗性的疾病状态的至少一种症状的变化的作用过程。在一些实施方式中，本发明涉及一种用于与PCSK9活性相关联和/或归因于PCSK9活性的病状或其中PCSK9的功能对特定个体为禁忌的病状的治疗方法，该方法包括向个体施用治疗有效量的式I的PCSK9拮抗剂化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方式中，该病况可为动脉粥样硬化、高胆固醇血症、冠心病、代谢综合征、急性冠状动脉综合征或相关心血管疾病和心血管代谢病状，或可为其中PCSK9活性为禁忌的疾病状态或病状。
根据本发明的治疗方法包括向个体施用治疗(或防治)有效量的本发明的PCSK9特异性拮抗剂。术语“治疗有效”或“防治有效”参考一定量的使用是指在为达成期望的治疗性和/或防治性效果持续所期望的时间段的预期剂量处所必需的量。期望的效果可例如为与所治疗病状相关联的至少一种症状的缓解、减轻、降低或停止。如本领域技术人员将了解，这些量将根据各种因素而变化，所述因素包括但不限于疾病状态、年龄、性别和个体的体重以及PCSK9特异性拮抗剂在个体中诱发所要效果的能力。反应可通过体外测定、体内非人类动物研究来记录和/或进一步由临床试验来支撑。
在一些实施方式中，优选以如本文所述的药物组合物形式来施用本发明的PCSK9拮抗剂化合物。
拮抗剂疗法的给药完全在本领域技术人员的能力范围内，参见例如Lederman等人，1991Antibody,Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4:915-922，并且将基于许多因素而变化，例如但不限于上文提及的那些，包括患者的病状、待治疗的区域、施用途径和所需治疗(例如防治或急性治疗)等。具有一般技术的医师或兽医可易于确定和开出拮抗剂的有效治疗量。
受试者可能需要或期望对现有疾病或医学病状的治疗。如本文所用，“需要”治疗现有病状的受试者涵盖需要通过医疗专业人士的测定以及需要此类治疗的受试者两者。当化合物或其盐与一种或多种其他活性剂组合提供时，“施用”和其变型各自理解为包括同期(contemporaneously)或同时(simultaneously)或历经一段时间内的单独施用的疗程而提供化合物或其盐和其他药剂。当组合的药剂同时施用时，其可在单个组合物中一起施用或其可单独施用。应理解，活性剂的“组合”可为含有全部活性剂的单一组合物或各自含有活性剂中的一个或多个的多种组合物。在两种活性剂的情况下，组合可为包含两种药剂的单一组合物或各自包含药剂中的一个的两种单独组合物；在三种活性剂的情况下，组合物可为包含全部三种药剂的单一组合物、各自包含药剂中的一个的三种单独组合物，或两种组合物，其中一个包含药剂中的两个且另一个包含第三药剂；等等。
本发明的组合物和组合适合以有效量施用。术语“有效量”意指足以拮抗PCSK9且由此诱发所寻求反应(即，在针对与PCSK9功能相关联或受PCSK9功能影响的病状的治疗或管理中诱发的治疗反应，所述病状包括但不限于动脉粥样硬化、高胆固醇血症、冠心病、代谢综合征、急性冠状动脉综合征以及动物或人类中的相关心血管疾病和心血管代谢病状)的活性化合物的量。
所采用的实际剂量可视患者的需求和所治疗病状的严重程度而变化。用于特定情形的适当剂量方案的判定在本领域的能力内，例如如标准文献中所述，例如，如“Physicians’Desk Reference”(PDR)中，例如1996版(Medical Economics Company,Montvale,NJ 07645-1742,USA),the Physician’s Desk Reference,第56版,2002(由Medical Economics company,Inc.Montvale,NJ 07645-1742公开),或the Physician’sDesk Reference,第57版,2003(由Thompson PDR,Montvale,NJ 07645-1742公开)所述；其公开内容以引用方式并入本文中。为方便起见，可以将每日总剂量分成几部分，并在当日按需分批施用或连续递送。
PCSK9特异性拮抗剂可通过本领域所了解的任何施用途径单独或与经设计以辅助个体的治疗的其他药剂组合而施用至个体，该施用途径包括但不限于口服施用、通过注射施用(其特定实例包括静脉内、皮下、腹膜内或肌肉内注射)或通过吸入施用、鼻内或局部施用。PCSK9特异性拮抗剂还可通过注射装置、注射器笔、无针装置；和皮下贴片递送系统来施用。施用途径应基于本领域技术人员所了解的多种考虑因素来确定，所述考虑因素包括但不限于治疗的所需理化特性。
可将一种或多种另外的药理学活性剂与式I化合物组合施用。另外的活性剂(或药剂)欲意指在体内具有活性的药物活性剂(或药剂)，包括在施用之后转化为药物活性形式的前药(其不同于式I化合物)，且还包括所述另外的活性剂的游离酸、游离碱和药学上可接受的盐。通常，任何合适的一种或多种另外的活性剂(包括但不限于抗高血压药剂、抗动脉粥样硬化药剂(如脂质改性化合物)、抗糖尿病药剂和/或抗肥胖药剂)可以与呈单一剂型的式I化合物的任何组合(固定剂量药物组合)形式来使用，或可以一种或多种单独剂型施用至受试者，其允许活性剂的同时或顺序施用(单独活性剂的共同施用)。
可采用的另外的活性剂的实例包括但不限于血管紧张素转化酶抑制剂(例如，阿拉普利(alacepril)、贝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、西罗普利(ceronapril)、西拉普利(cilazapril)、地拉普利(delapril)、依那普利(enalapril)、依那普利拉(enalaprilat)、福辛普利(fosinopril)、咪达普利(imidapril)、赖诺普利(lisinopril)、莫维普利(moveltipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(ramipril)、螺普利(spirapril)、替莫普利(temocapril)或群多普利(trandolapril))、血管紧张素II受体拮抗剂(例如，氯沙坦(losartan)，即
Figure BDA0002846014700000461
缬沙坦(valsartan)、坎地沙坦(candesartan)、奥美沙坦(olmesartan)、替美沙坦(telmesartan)和与氢氯噻嗪组合使用的这些药物中的任一个，如
Figure BDA0002846014700000462
)；中性内肽酶抑制剂(例如，塞奥芬(thiorphan)和磷酰二肽)、醛固酮拮抗剂、醛固酮合成酶抑制剂、肾素抑制剂(例如二肽和三肽的脲衍生物(参见美国专利号5,116,835)、氨基酸和衍生物(美国专利5,095,119和5,104,869)、通过非肽键连接的氨基酸链(美国专利5,114,937)、二肽和三肽衍生物、肽基氨基二醇和肽基β-氨基酰基氨基二醇氨基甲酸酯和小分子肾素抑制剂(包括二醇磺酰胺和亚磺酰)、N-吗啉基衍生物、N-杂环醇和吡咯并咪唑酮；另外，胃抑素肽衍生物以及含斯达酮(statone)肽的氟和氯衍生物、依那克林(enalkrein)、RO 42-5892、A 65317、CP 80794、ES 1005、ES 8891、SQ 34017、阿力克伦(aliskiren)(2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(2-氨基甲酰基-2-甲基丙基)-5-氨基-4-羟基-2,7-二异丙基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)-苯基]-辛酰胺半反丁烯二酸盐)SPP600、SPP630和SPP635)、内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶-5抑制剂(例如西地那非(sildenafil)、他达拉非(tadalfil)和伐地那非(vardenafil))、血管扩张剂、钙离子通道阻断剂(例如，氨氯地平(amlodipine)、硝苯地平(nifedipine)、维拉帕米(veraparmil)、地尔硫卓(diltiazem)、加洛帕米(gallopamil)、尼鲁地平(niludipine)、尼莫地平(nimodipins)、尼卡地平(nicardipine))、钾通道激活剂(例如，尼可地尔(nicorandil)、吡那地尔(pinacidil)、克罗马卡林(cromakalim)、米诺地尔(minoxidil)、阿普利林(aprilkalim)、洛普唑仑(loprazolam))、利尿剂(例如氢氯噻嗪)、交感神经阻滞剂、β-肾上腺素阻断药物(例如，普萘洛尔(propranolol)、阿替洛尔(atenolol)、比索洛尔(bisoprolol)、卡维地洛(carvedilol)、美托洛尔(metoprolol)或美托洛尔酒石酸盐)、α肾上腺素阻断药物(例如，多沙唑星(doxazocin)、哌唑嗪或α甲基多巴(methyldopa))、中央α肾上腺素能激动剂、外周血管扩张剂(例如肼酞嗪)；降脂剂，例如HMG-CoA还原酶抑制剂，如作为
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和
Figure BDA0002846014700000472
以内酯前药形式出售且在施用之后充当抑制剂的辛伐他汀(simvastatin)和洛伐他汀(lovastatin)，和二羟基开环酸HMG-CoA还原酶抑制剂的药学上可接受的盐，如阿托伐他汀(atorvastatin)(尤其是以
Figure BDA0002846014700000473
出售的钙盐)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin)(尤其是以
Figure BDA0002846014700000474
出售的钙盐)、普伐他汀(pravastatin)(尤其是以
Figure BDA0002846014700000475
出售的钠盐)、氟伐他汀(fluvastatin)(尤其是以
Figure BDA0002846014700000476
出售的钠盐)、克伐他汀(crivastatin)和匹伐他汀(pitavastatin)；胆固醇吸收抑制剂，如依折麦布(ezetimibe)
Figure BDA0002846014700000477
和依折麦布与诸如上述HMG-CoA还原酶抑制剂的任何其他降脂剂组合，且尤其与辛伐他汀
Figure BDA0002846014700000478
或与阿托伐他汀钙组合；呈立即释放或控制释放形式且/或具有HMG-CoA还原酶抑制剂的烟酸；烟酸受体激动剂，如阿昔莫司(acipimox)和阿昔呋喃(acifran)以及烟酸受体部分激动剂；代谢改变药剂，包括胰岛素和胰岛素模拟物(例如，德谷(degludec)胰岛素、甘精胰岛素、赖脯胰岛素)、二肽基肽酶-IV(DPP-4)抑制剂(例如，西他列汀(sitagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、奥格列汀(omarigliptin)、利格列汀(linagliptin)、维格列汀(vildagliptin))；胰岛素敏化剂，包括(i)PPARγ激动剂，诸如格列酮(例如吡格列酮、AMG131、MBX2044、匹格列酮(mitoglitazone)、洛贝格列酮(lobeglitazone)、IDR-105、罗格列酮(rosiglitazone)和巴拉列酮(balaglitazone))和其他PPAR配体，包括(1)PPARα/γ双重激动剂(例如，ZYH2、ZYH1、GFT505、西格列扎(chiglitazar)、莫格列扎(muraglitazar)、阿格列扎(aleglitazar)、索格列扎(sodelglitazar)和那格列扎(naveglitazar))；(2)PPARα激动剂，诸如非诺贝酸(fenofibric acid)衍生物(例如，吉非罗齐(gemfibrozil)、氯贝特(clofibrate)、环丙贝特(ciprofibrate)、非诺贝特(fenofibrate)、苯扎贝特(bezafibrate))，(3)选择性PPARγ调节剂(SPPARγM’s)，(例如，诸如公开于WO 02/060388、WO 02/08188、WO 2004/019869、WO 2004/020409、WO 2004/020408和WO 2004/066963中的那些)；和(4)PPARγ部分激动剂；(ii)双胍，如二甲双胍和其药学上可接受的盐，尤其是二甲双胍盐酸盐，和其缓释制剂，如GlumetzaTM、FortametTM和GlucophageXRTM；和(iii)蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制剂(例如，ISIS-113715和TTP814)；胰岛素或胰岛素类似物(例如，地特(detemir)胰岛素、赖谷(glulisine)胰岛素、德谷胰岛素、甘精胰岛素、赖脯胰岛素和各自的可吸入制剂)；瘦素和瘦素衍生物以及激动剂；胰淀素(amylin)和胰淀素类似物(例如，普兰林肽(pramlintide))；磺酰脲和非磺酰脲胰岛素促分泌物(例如，甲苯磺丁尿、格列本脲(glyburide)、格列吡嗪(glipizide)、格列美脲(glimepiride)、米格列奈(mitiglinide)、美格列奈(meglitinides)、那格列奈(nateglinide)和瑞格列奈(repaglinide))；α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖(acarbose)、伏格列波糖(voglibose)和米格列醇(miglitol))；胰高血糖素受体拮抗剂(例如，MK-3577、MK-0893、LY-2409021和KT6-971)；肠促胰岛素模拟物，如GLP-1、GLP-1类似物、衍生物和模拟物；和GLP-1受体激动剂(例如，度拉糖肽(dulaglutide)、索马鲁肽(semaglutide)、阿必鲁肽(albiglutide)、艾塞那肽(exenatide)、利拉鲁肽(liraglutide)、利司那肽(lixisenatide)、他司鲁肽(taspoglutide)、CJC-1131和BIM-51077，包括其鼻内、经皮和每周一次的制剂)；胆酸螯合剂(例如，考来替兰(colestilan)、科利酰胺(colestimide)、考来维兰(colesevalam)盐酸盐、考来替泊(colestipol)、消胆胺(cholestyramine)和交联聚葡萄糖的二烷氨基烷基衍生物)，酰基CoA:胆固醇酰基转移酶抑制剂，(例如，阿伐麦布(avasimibe))；减肥化合物；意欲用于发炎病状中的药剂，诸如阿司匹林(aspirin)、非类固醇抗炎药或NSAID、糖皮质激素和选择性环加氧酶-2或COX-2抑制剂；葡萄糖激酶激活剂(GKA)(例如，AZD6370)；11β-羟基类固醇脱氢酶1型的抑制剂(例如，诸如公开于美国专利号6,730,690中的那些和LY-2523199)；CETP抑制剂(例如，安特普(anacetrapib)、托彻普(torcetrapib)和伊特普(evacetrapib))；果糖1,6-二磷酸酶的抑制剂(例如，诸如公开于美国专利号6,054,587；6,110,903；6,284,748；6,399,782；和6,489,476中的那些)；乙酰基CoA羧化酶1或2(ACC1或ACC2)的抑制剂；AMP活化的蛋白激酶(AMPK)激活剂；G蛋白偶合受体的其他激动剂：(i)GPR-109，(ii)GPR-119(例如，MBX2982和PSN821)，和(iii)GPR-40(例如，TAK875)；SSTR3拮抗剂(例如，诸如公开于WO2009/001836中的那些)；神经介素U受体激动剂(例如，诸如公开于WO2009/042053中的那些，包括但不限于神经介素S(NMS))；SCD调节剂；GPR-105拮抗剂(例如，诸如公开于WO 2009/000087中的那些)；SGLT抑制剂(例如，ASP1941、SGLT-3、依帕列净(empagliflozin)、达格列净(dapagliflozin)、卡格列净(canagliflozin)、BI-10773、艾托格列净(ertugliflozin)、雷莫格列净(remogloflozin)、TS-071、托格列净(tofogliflozin)、伊格列净(ipragliflozin)和LX-4211)；酰基辅酶A:二酰甘油酰基转移酶1和2(DGAT-1和DGAT-2)的抑制剂；脂肪酸合成酶的抑制剂；酰基辅酶A:单酰甘油酰基转移酶1和2(MGAT-1和MGAT-2)的抑制剂；TGR5受体(还称为GPBAR1、BG37、GPCR19、GPR131和M-BAR)的激动剂；回肠胆汁酸转运蛋白抑制剂；PACAP、PACAP模拟物和PACAP受体3激动剂；PPAR激动剂；蛋白质酪氨酸磷酸酶-1B(PTP-1B)抑制剂；IL-1b抗体(例如，XOMA052和康纳单抗(canakinumab))；和溴麦角环肽(bromocriptine)甲磺酸盐和其迅速释放制剂；或与有益于治疗上述病状或病症的其他药物组合，所述其他药物包括游离酸、游离碱和以上活性剂在化学上可能的药学上可接受的盐形式。
本发明的化合物可易于根据以下反应方案和实施例或其修饰，使用容易获得的起始物质、试剂和常规合成程序来制备。在这些反应中，还有可能利用已知变体。对于使用反相色谱(HPLC或MPLC，如下文所述)来纯化所述化合物，使用C18柱。鉴于以下反应方案和实施例，用于制备本发明的化合物的其他方法对于本领域普通技术人员将是显而易见的。可在本文中的例示性方案和/或实施例中使用下列缩写。
ACN为乙腈
AcOH为乙酸
AcO-NH4为乙酸铵
Boc2O为二碳酸二叔丁酯
Bn为苄基
BnBr为溴苄
BzCl为苯甲酰氯
CBr4为全溴甲烷
Cbz-Cl为氯甲酸苄酯
DBU为1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DCC为二环己基碳化二亚胺
DCE为1,2-二氯乙烷
DCM为二氯甲烷
DEA为N,N-二乙胺
DIAD为(E)-二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯
DIEA或DIPEA为N,N-二异丙基乙胺
DMAP为4-二甲氨基吡啶
DMF为N,N-二甲基甲酰胺
DMSO为二甲亚砜
EA或EtOAc为乙酸乙酯
EtOH为乙醇
Et2O为乙醚
Fmoc为芴基甲氧基羰基保护基
Fmoc-Cl为氯甲酸(9H-芴-9-基)甲酯
Fmoc-D-Dap(Boc)-OH为N-α-(9-芴基甲氧基羰基)-N-β-叔丁氧基羰基-D-2,3-二氨基丙酸
Fmoc-Osu为Fmoc N-羟基琥珀酰亚胺酯
HATU为1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐
HPLC为高效液相色谱
IPA为异丙醇
LiOH为氢氧化锂
LC/MS为液相色谱-质谱
Me3N为三甲胺
MeOH为甲醇
MPLC为中压液相色谱
MsCl为甲磺酰氯
NaBH(OAc)3为三乙酰氧基硼氢化钠
NMR为核磁共振
NsCl为4-硝基苯-1-磺酰氯
PE为石油醚
Pd2(dba)3(HCCl3)为三(二亚苄基丙酮)二钯(0)-氯仿加合物
PPh3为三苯基膦
PdCl2(dppf)或Pd(ii)(dppf)Cl2为二氯[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)
Pd(dppf)Cl2CH2Cl2为二氯[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物
Pd(PPh3)4为四(三苯基膦)钯
PPTs为对甲苯磺酸吡啶鎓
[Rh(OAc)2]2为乙酸铑(II)二聚体
RT或r.t.或rt为室温
tBuOAc为乙酸叔丁酯
TEA为三乙胺
TFA为三氟乙酸
TFE为四氟乙烯
THF为四氢呋喃
Tf2O为三氟甲磺酸酐
Teoc-OSu为2,5-二氧代吡咯烷-1-基(2-(三甲基硅烷基)乙基)碳酸酯
TBAF为四丁基氟化铵
TMS为四甲基硅烷
詹式(Zhan’s)催化剂1B为二氯(1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基)((5-((二甲氨基)磺酰基)-2-(1-甲基乙氧基-O)苯基)亚甲基-C)钌(II)
[也描述为1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)-4,5-二氢咪唑-2-亚基[2-(异丙氧基)-5-(N,N-二甲基氨基磺酰基)苯基[亚甲基钌(II)二氯化物]
实施例1制备Ex-01和Ex-51
Figure BDA0002846014700000531
Ex-01，(示例的游离碱)
Figure BDA0002846014700000541
Ex-51，(示例的游离碱)
根据以下方案由中间体76和86(以下制备)来制备化合物Ex-01和Ex-51的盐形式：
Figure BDA0002846014700000542
Figure BDA0002846014700000551
Figure BDA0002846014700000561
步骤A：制备中间体89
向76(1.56g，1.917mmol，以下制备)和86(1.506g，1.936mmol，以下制备)于DMF(40ml)中的溶液中添加HATU(0.802g，2.108mmol)和DIEA(0.670ml，3.83mmol)。将所得溶液在室温下搅拌50min，然后分配于EtOAc(300mL)与盐水(100mL)之间。用盐水(2×100mL)洗涤有机相，经Na2SO4干燥，浓缩并使用MeOH/DCM作为洗脱溶剂在硅胶柱上纯化残余物以得到89。LC/MS:(M+1)+:1573.8。
步骤B：制备中间体90
用N2将89(0.68g，0.432mmol)于DCM(500ml)和乙酸(40mL)中的溶液鼓泡20min，随后添加詹氏催化剂-1b(0.222g，0.302mmol)。用N2将所得混合物进一步鼓泡20min，然后在55℃下加热5h。冷却至室温后，通过硅藻土(celite)过滤混合物，浓缩滤液，并使用MeOH/DCM作为洗脱溶剂在硅胶柱上纯化残余物以得到90(顺式/反式混合物)。LC/MS:(M+1)+:1545.7。
步骤C：制备中间体91
向90(顺式/反式混合物)(65mg，0.042mmol)于乙腈(2ml)中的溶液中添加哌啶(0.042ml，0.420mmol)。在室温下搅拌所得溶液1h，然后浓缩并将残余物溶解于乙腈(4mL)中并再次浓缩。残余物进一步在高真空下干燥30min以得到91(顺式和反式混合物)。LC/MS:(M+1)+:1324.0。
步骤D：制备中间体92
在0℃下向91(顺式/反式混合物)(548mg，0.414mmol)和88(227mg，0.455mmol，以下制备)于DMF(10ml)中的溶液添加HATU(181mg，0.476mmol)和DIEA(0.166ml，0.952mmol)。在0℃下搅拌所得溶液1h，并将溶液通过反相MPLC在C18柱上使用乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)作为洗脱溶剂纯化以得到92(顺式/反式混合物)。LC/MS:(M+1)+:1803.5。
步骤E：制备中间体93
在0℃下向92(700mg，0.388mmol)于THF(20ml)、MeOH(6ml)和水(6ml)中的溶液中滴加1N LiOH水溶液(3.11ml，3.11mmol)，并在0℃下搅拌所得溶液23h。通过添加1N HCl将溶液中和至pH 7-8，蒸发挥发物，将水相酸化至pH 5，并将混合物通过反相MPLC在C18柱上使用乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)作为洗脱溶剂纯化以得到呈TFA盐形式的93。在0℃下向93TFA盐(427mg，0.257mmol)于水(70mL)和乙腈(70ml)中的溶液中滴加0.1N HCl(13.5ml，1.350mmol)，在0℃下搅拌所得溶液5min，然后冻干以得到呈HCl盐形式的93。LC/MS:(M+1)+:1567.1。
步骤F：制备中间体94
向呈HCl盐形式的93(200mg，0.125mmol)于DMF(30mL)中的溶液中添加HATU(56.9mg，0.150mmol)。在室温下搅拌所得溶液30min，然后用DCM(400mL)稀释，随后添加DIEA(0.065mL，0.374mmol)。在室温下搅拌所得溶液1h，在旋转蒸发仪上蒸发挥发物，并将所得DMF溶液通过反相MPLC使用乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)作为洗脱溶剂纯化以得到94。LC/MS:(M+1)+:1549.2。
步骤G：制备中间体95
向94(14mg，9.04μmol)于MeOH(20ml)中的溶液中添加10％Pd/C(1.924mg，1.808μmol)，并在室温下经由H2气球使所得混合物经历氢化1h。通过硅藻土过滤混合物并浓缩滤液以得到中间体化合物95。LC/MS:(M+1)+:1550.9。
步骤H：制备Ex-01
将之前步骤中制备的中间体化合物95(26mg，0.017mmol)溶于DCM(2ml)中。向此溶液中添加TFA(6mL，78mmol)并在室温下搅拌所得溶液30min，然后浓缩并将残余物溶于DCM(3mL)中并用含4N HCl/二噁烷(0.042mL，0.168mmol)处理，并再次浓缩以得到呈粗产物形式的Ex-01。粗物质Ex-01通过反相HPLC使用乙腈(0.1％甲酸)/水(0.1％甲酸)作为洗脱溶剂纯化以提供甲酸盐形式的Ex-01。LC/MS:(M+1)+:1394.4。
步骤I：制备Ex-51
向中间体化合物94(30mg，0.019mmol)于DCM(2ml)中的溶液中添加TFA(4ml，51.9mmol)，并在环境温度下搅拌反应混合物30分钟，然后浓缩。将残余物溶解于DCM(2mL)中，用HCl(4N于二噁烷中)(0.048ml，0.194mmol)处理，并浓缩以产生呈HCl盐形式的Ex-51。该化合物通过反相HPLC使用乙腈(0.1％甲酸)/水(0.1％甲酸)作为流动相纯化以提供甲酸盐形式的Ex-51。LC/MS:(M+1)+:1392.0。
以下方案和程序用于制备用于上文所述程序中的中间体76、86和88。
制备用于中间体76的制备的中间体68
Figure BDA0002846014700000581
步骤A：制备中间体化合物65
在0℃下向(2S,3S)-3-羟基吡咯烷-2-甲酸(5.32g，40.6mmol)于二噁烷(100ml)中的悬浮液中添加氢氧化钠(122ml，122mmol)，随后滴加氯甲酸苄酯(6.50ml，44.6mmol)。在0℃下搅拌所得悬浮液5h。在移除挥发物之后，将水相酸化至pH 3，然后分配于30％IPA/DCM(200mL)与盐水(50mL)之间，进一步用30％IPA/DCM(2×100mL)萃取水相。合并的有机相经Na2SO4干燥并浓缩以得到(2S,3S)-1-((苄基氧基)羰基)-3-羟基吡咯烷-2-甲酸(65)。LC/MS:(M+1)+:266.1。
步骤B：制备中间体化合物66
向65(7.48g，28.2mmol)于MeOH(80ml)中的溶液中滴加TMS-重氮甲烷(70.5ml，141mmol)，并在室温下搅拌所得溶液10min，然后通过滴加乙酸(约400uL)淬灭。将溶液浓缩，并将残余物在硅胶柱上使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂纯化以得到66。LC/MS:(M+1)+:280.1。
步骤C：制备中间体化合物67
用N2将66(4.81g，17.22mmol)于DCM(200mL)中的溶液鼓泡30min，随后添加乙酸铑(ii)二聚体(0.761g，1.722mmol)。在冰水浴中冷却混合物，并在0℃下滴加重氮乙酸叔丁酯(3.58mL，25.8mmol)。在0℃下搅拌所得混合物1.5h。通过添加水(100mL)淬灭反应，将混合物用DCM(3×100mL)萃取，合并的有机相经Na2SO4干燥，浓缩并将残余物通过反相MPLC使用乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)作为洗脱溶剂纯化。将含有产物的级分(fraction)浓缩并用DCM(2×100mL)萃取水相。合并的有机相经Na2SO4干燥并浓缩以得到67。LC/MS:(M+1)+:394.2。
步骤D：制备中间体化合物68
向67(3.72g，9.46mmol)于MeOH(80ml)中的溶液中添加10％Pd/C(0.805g，0.756mmol)并在环境温度下经由H2气球使所得混合物经历氢化2小时，然后通过硅藻土过滤。浓缩滤液以得到68。LC/MS:(M+1)+:259.9。
制备中间体化合物76
Figure BDA0002846014700000601
步骤A：制备中间体69
在0℃下向(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸(3g，6.75mmol)于THF(20ml)、MeOH(10mL)和水(20.00ml)中的溶液中添加NaOH(20.25ml，20.25mmol)并在环境温度下搅拌所得溶液4小时，然后蒸发挥发物。向水性混合物中添加二噁烷(50ml)和水(20mL)，将所得溶液冷却至0℃并将Boc2O(1.881ml，8.10mmol)添加至以上溶液中。在0℃下搅拌所得溶液3小时，移除挥发物并用Et2O(3×40mL)萃取水相，酸化至pH 3，然后用DCM(3×100mL)，随后用30％IPA/DCM(2×80mL)萃取。合并的有机相经Na2SO4干燥并浓缩以得到69。LC/MS:(M+1)+:322.9。
步骤B：制备中间体70
在0℃下向69(2.079g，6.45mmol)于DMF(40ml)中的溶液中添加60％NaH/己烷(0.568g，14.19mmol)，并在0℃下搅拌所得溶液50min，随后滴加烯丙基溴(1.172mL，13.54mmol)。在0℃下搅拌所得溶液1.5h，然后通过添加1N HCl(大约3.68mL)淬灭。然后将溶液分配于EtOAc(200mL)与水(100mL)之间，用盐水(2×100mL)洗涤有机相，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物在硅胶柱上使用MeOH/DCM作为洗脱溶剂纯化以得到70。LC/MS:(M+1)+:363.0。
步骤C：制备中间体71
向70(2.239g，6.18mmol)和68(1.842g，7.11mmol)于DMF(30ml)中的溶液中添加HATU(2.82g，7.41mmol)和DIEA(2.59ml，14.83mmol)，并在环境温度下搅拌所得溶液1小时。将混合物分配于EtOAc(200mL)与盐水(100mL)之间，用盐水(3×100mL)洗涤有机相，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物在硅胶柱上使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂纯化以得到71。LC/MS:(M+1)+:604.2。
步骤D：制备中间体72
在0℃下向71(2.83g，4.69mmol)于CH2Cl2(20ml)和tBuOAc(30ml)中的溶液中添加甲磺酸(1.218ml，18.75mmol)，并在0℃下搅拌所得溶液16.5h，然后在环境温度下搅拌2.5h。溶液(72)直接用于下一步骤中。LC/MS:(M+1)+:504.2。
步骤E：制备中间体73
向(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(3-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苯基)丙酸(2.66g，5.16mmol)于DMF(10ml)中的溶液中添加HATU(1.961g，5.16mmol)和DIEA(5.32ml，30.5mmol)，并将所得溶液在室温下搅拌30min，然后添加至以上制备的72溶液的冰冷浴中。在环境温度下搅拌所得溶液1小时。在旋转蒸发仪上蒸发挥发物，并将残余物通过反相MPLC使用乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)作为洗脱溶剂纯化。在旋转蒸发仪上浓缩所收集级分以得到73。LC/MS:(M+1)+:1002.1。
步骤F：制备中间体74
向73(3.235g，3.23mmol)于DCM(4ml)中的溶液中添加TFA(7.46ml，97mmol)，并在环境温度下搅拌所得溶液1小时，然后浓缩。将残余物溶解于DCM(10mL)中，用4N HCl/二噁烷(3.23ml，12.91mmol)处理，然后浓缩，并将残余物溶解于乙腈(100mL)/水(50mL)中并冻干以提供74。LC/MS:(M+1)+:846.1。
步骤G：制备中间体75
向74(2.85g，3.23mmol)于DMF(45ml)中的溶液中添加HATU(1.474g，3.88mmol)，并在环境温度下搅拌所得溶液30min，然后用DCM(600ml)稀释，随后滴加DIEA(1.692ml，9.69mmol)。在环境温度下搅拌所得溶液1小时。浓缩溶液，并将残余物通过反相MPLC在C18柱上使用乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)作为洗脱溶剂纯化。浓缩含有产物的级分，并将水性层分配于DCM(200mL)与饱和NaHCO3(200mL)之间。用DCM(2×100mL)萃取水相，并将合并的有机相经Na2SO4干燥并浓缩以得到75。LC/MS:(M+1)+:828.1。
步骤H：制备中间体化合物76
在0℃下向75(1.93g，2.331mmol)于THF(60ml)、MeOH(30ml)和水(20ml)中的溶液中滴加1N LiOH水溶液(9.9ml，9.90mmol)，并在0℃下搅拌所得溶液16h，然后通过添加HCl(1N，9.9mL)淬灭。在旋转蒸发仪上蒸发挥发物，并在0℃下向以上溶液中添加丙酮(60ml)、碳酸钠(0.371g，3.50mmol)和Fmoc-Osu(0.802g，2.378mmol)。在0℃下搅拌所得溶液6h，在旋转蒸发仪上蒸发挥发物，将水相酸化至pH 4，然后用30％IPA/DCM(3×100mL)萃取。合并的有机相经Na2SO4干燥，浓缩并将残余物在硅胶柱上使用MeOH/DCM作为洗脱溶剂纯化以得到76。LC/MS:(M+1)+:814.2。
中间体化合物75b和中间体化合物76B自以下的替代性制备
Figure BDA0002846014700000631
除了消除步骤B及最终步骤G还包括用Boc保护基替换Fmoc保护基以外，一般遵循上文所述的用于制备中间体化合物75的一般程序，由此提供中间体化合物75a。下文描述75a和76B的程序。
步骤C：制备中间体化合物71a
在-50℃下向69(5.00g，15.5mmol)于DMF(40.0mL)中的溶液中添加68、HATU(5.90g，15.5mmol)和DIEA(4.01g，31.0mmol)，并在-50℃下搅拌反应混合物3h。用水(5mL)淬灭最终溶液，在减压下浓缩，并将残余物通过在C18上进行反相柱层析(用乙腈/水+0.01％碳酸氢铵的梯度洗脱)来纯化以提供71a。C28H38FN3O8[M+H]+的LCMS(ESI)计算值：564.3，实验值564.2。
步骤D：制备中间体化合物72a
在室温下向2N HCl/二噁烷(100mL)和THF(100mL)的溶液中添加71a(8.40g，14.9mmol)，并搅拌反应混合物5h。在减压下浓缩最终溶液以提供72a。C23H31ClFN3O6[M-HCl+H]+的LCMS(ESI)计算值：464.2，实验值464.3。
步骤E：制备中间体化合物73a
在-50℃下向72a(800mg，1.60mmol)于DMF(10.0mL)中的溶液中添加(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(3-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苯基)丙酸(827mg，1.60mmol)、HATU(608mg，1.60mmol)和DIEA(620mg，4.80mmol)，并在-50℃下搅拌混合物3h。用水(50mL)稀释所得溶液并用EtOAc(3×100mL)萃取水性层。用盐水洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱层析(用梯度1％-60％的EtOAc/PE洗脱)纯化以得到73a。C53H60FN5O11[M+H]+的LCMS(ESI)计算值：962.4，实验值962.6。
步骤F：制备中间体化合物74a
在室温下向73a(3.00g，3.12mmol)于DCM(15.0mL)中的溶液中添加TFA(15.0mL)并在室温下搅拌反应混合物1h。在减压下浓缩所得溶液，与甲苯和DCM共蒸发以得到74a。C46H45F4N5O11[M-TFA+H]+的LCMS(ESI)计算值：806.3，实验值806.7。
步骤G：制备中间体化合物75a
在室温下向74a(4.00g，4.35mmol)于DMF(150mL)中的溶液中添加HATU(1.65g，4.35mmol)，并搅拌反应溶液0.5h。用DCM(450mL)和DIEA(1.69g，13.1mmol)稀释该溶液，然后在室温下搅拌3h。用水(5mL)淬灭所得溶液，在减压下浓缩，并将残余物通过在C18上进行反相柱层析(用乙腈/水+0.05％TFA的梯度洗脱)来纯化以提供Fmoc保护的中间体。C44H42FN5O8[M+H]+的LCMS(ESI)计算值：788.3，实验值788.9。
在室温下向以上Fmoc保护的中间体(200mg，0.250mmol)于DCM(5.00mL)中的溶液中添加哌啶(1.25mL)，并搅拌反应溶液1h。在减压下浓缩最终溶液，并将残余物通过硅胶柱层析(用梯度0％-5％的MeOH/DCM洗脱)来纯化以提供胺中间体。C29H32FN5O6[M+H]+的LCMS(ESI)计算值：566.2，实验值566.3。
在室温下向以上胺中间体(2.86g，5.06mmol)于THF(30.0mL)和水(30.0mL)中的溶液中添加Boc2O(2.21g，10.1mmol)和碳酸氢钠(1.70g，20.2mmol)，并搅拌反应物3h。用水(50mL)稀释最终溶液并用EtOAc(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并将残余物通过硅胶柱层析(用梯度0％-5％MeOH/DCM洗脱)来纯化以提供75a。C34H40FN5O8[M+H]+的LCMS(ESI)计算值：666.3，实验值666.5；1H NMR(300MHz,CD3OD)δ7.35-7.08(m,6H),6.95-6.79(m,2H),5.01-4.91(m,1H),4.72-4.56(m,2H),4.45-4.38(m,1H),4.45-4.38(m,5H),3.69(s,3H),3.32-2.92(m,5H),2.14-1.82(m,2H),1.47(s,9H)。
步骤H：制备中间体化合物75b
在0℃下向75a(0.665g，0.99mmol)于DMF(0.5mL)中的溶液中添加Cs2CO3(1.11g，3.40mmol)和3-溴丙-1-烯(0.43g，3.55mmol)。在室温下将反应混合物搅拌16小时，并倒入至5mL的50％饱和盐水/10％柠檬酸溶液中，然后用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。用盐水(3×20mL)洗涤有机层，经无水MgSO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液。残余物通过硅胶柱层析用1％-5％梯度的MeOH/DCM洗脱来纯化。将含有中间体化合物75b的级分合并并浓缩以得到标题化合物。C37H44FN5O8[M+H]+的LCMS(ESI)计算值：706.3，实验值706.3。
步骤I：制备中间体化合物76B
遵循类似于中间体93的制备中所述的条件用LiOH水解75b以提供76B。
制备中间体77B
Figure BDA0002846014700000661
步骤A：制备中间体77A
在0℃下向(S)-1-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-2-甲基吡咯烷-2-甲酸(6.16g，17.54mmol)和4-(2-氨基乙基)苄基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(5.03g，17.54mmol)于DMF(140ml)中的溶液中添加HATU(8.00g，21.05mmol)和DIPEA(9.16ml，52.6mmol)，然后使反应升温至室温并搅拌2h。用水稀释最终混合物，用EtOAc萃取，用盐水洗涤，经MgSO4干燥并过滤。浓缩滤液，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用0-60％的EtOAc/己烷梯度洗脱)来纯化以得到77A。MS(ESI):m/z(M+H)+584.5。
步骤B：制备中间体77B
向77A(8.92g，15.28mmol)于DCM(40ml)中的溶液中添加HCl 4N/二噁烷(15.28ml，61.1mmol)，并在室温下搅拌所得溶液过夜。浓缩混合物以得到77B。MS(ESI):m/z(M+H)+484.3。
制备中间体86
Figure BDA0002846014700000671
步骤A：制备中间体77
在0℃下向2-((4-(氨甲基)苯乙基)氨基甲酰基)-2-甲基吡咯烷-1-甲酸(S)-(9H-芴-9-基)甲酯盐酸盐(77B)(5.87g，11.29mmol)于DCM(140ml)中的溶液中滴加DIEA(5.91ml，33.9mmol)和CBZ-Cl(1.726ml，11.85mmol)，并在0℃下搅拌所得溶液4h。将反应溶液分配于水(200mL)与DCM(200mL)之间，用DCM(100mL)萃取水相，合并的有机相经Na2SO4干燥，并将残余物在硅胶柱上使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂纯化以得到77。LC/MS:(M+1)+:618.3。
步骤B：制备中间体78
向77(5.56g，9.00mmol)于THF(100ml)、水(50ml)和MeOH(30ml)中的溶液中添加1NNaOH水溶液(45.0ml，45.0mmol)，并在室温下搅拌所得溶液2h。蒸发挥发物，并向水溶液中添加二噁烷(200ml)和含Boc2O(2.508ml，10.80mmol)的二噁烷(20mL)。自0℃至室温将所得混合物搅拌过夜。在旋转蒸发仪上蒸发挥发物，并用DCM(3×150mL)萃取水相。合并的有机相经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物在硅胶柱上使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂纯化以得到78。LC/MS:(M+1)+:496.2。
步骤C：制备中间体79
向78(4.04g，8.15mmol)于MeOH(100ml)中的溶液中添加10％Pd/C(0.867g，0.815mmol)，并经由H2气球使所得混合物在室温下经历氢化1.5h。通过硅藻土过滤混合物，并浓缩滤液以得到79。LC/MS:(M+1)+:362.2。
步骤D：制备中间体80
向79(2.58g，7.14mmol)于DMF(15ml)中的溶液中添加4-甲基苯磺酸戊-4-烯-1-基酯(0.858g，3.57mmol)和K2CO3(1.973g，14.27mmol)，并在80℃下加热所得混合物6h。冷却至室温后，过滤混合物，并将滤液通过反相MPLC使用乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)作为洗脱溶剂纯化以得到呈TFA盐形式的产物，将该产物进一步分配于DCM(100mL)与1N NaOH水溶液(50mL)之间。用DCM(2×50mL)进一步萃取水相，合并的有机相经Na2SO4干燥，并浓缩以得到80。LC/MS:(M+1)+:430.3。
步骤E：制备中间体81
向80(0.95g，2.211mmol)于DMF(15ml)中的溶液中添加4-甲氧基-4-氧代丁酸(0.321g，2.433mmol)、HATU(1.009g，2.65mmol)和DIEA(0.927ml，5.31mmol)，并在室温下搅拌所得溶液1h。将溶液分配于EtOAc(200mL)与盐水(100mL)之间，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物在硅胶柱上使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂纯化以得到81。LC/MS:(M+1)+:544.2。
步骤F：制备中间体82
向81(1.165g，2.143mmol)于DCM(12ml)中的溶液中添加HCl(4N于二噁烷中)(5.36ml，21.43mmol)。在室温下搅拌所得溶液3h，并浓缩混合物以得到82。LC/MS:(M+1)+:444.2。
步骤G：制备中间体83
向82(1.003g，2.089mmol)于DMF(20ml)中的溶液中添加Fmoc-L-Tyr(Me)-OH(0.959g，2.298mmol)、HATU(0.914g，2.403mmol)和DIEA(1.095ml，6.27mmol)，并在室温下搅拌所得溶液50min。将溶液分配于EtOAc(200mL)与盐水(100mL)之间，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，合并的有机相经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物在硅胶柱上使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂纯化以得到83。LC/MS:(M+1)+:843.4。
步骤H：制备中间体84
向83(1.63g，1.934mmol)于乙腈(10ml)中的溶液中添加哌啶(0.574ml，5.80mmol)，并在室温下搅拌所得溶液1h，然后浓缩。使残余物再悬浮于乙腈(20mL)中并再次浓缩，该循环重复一次，并将残余物进一步高真空干燥以得到84。LC/MS:(M+1)+:621.3。
步骤I：制备中间体85
向84(1.2g，1.933mmol)于DMF(15ml)中的溶液中添加Fmoc-L-Thr(tBu)-OH(0.922g，2.320mmol)、HATU(0.919g，2.416mmol)和DIEA(0.844ml，4.83mmol)，并在室温下搅拌所得溶液1h。将溶液分配于EtOAc(200mL)与盐水(100mL)之间，有机相用盐水(2×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物在硅胶柱上使用EtOAc/己烷作为洗脱溶剂纯化以得到85。LC/MS:(M+1)+:1000.2。
步骤J：制备中间体86
向之前步骤中制备的85(1.94g，1.940mmol)于乙腈(20ml)中的溶液中添加哌啶(0.960ml，9.70mmol)，并在室温下搅拌所得溶液30min，然后浓缩。将残余物再溶于DCM/乙腈(1:1，20mL)中，然后再次浓缩，该循环重复一次，并将残余物高真空干燥以得到86。LC/MS:(M+1)+:778.3。
制备中间体88
Figure BDA0002846014700000701
步骤A-合成中间体87
向2-氯-2-氯三苯甲基树脂1-1.5mmol/g(7.0g，1-1.5mmol/g)中添加干燥DCM(45ml)。将树脂振荡20min，随后添加半数含DIPEA 0.17N的DCM(3.67ml，21.00mmol)、Fmoc-D-Dap(Boc)-OH(3.28g，7.70mmol)，然后添加剩余部分的含DIPEA 0.17N的DCM(3.67ml，21.00mmol)。在室温下振荡树脂过夜，用DCM冲洗并干燥。然后用含5％DIPEA和10％MeOH的DCM(80mL)使树脂淬灭，振荡2h，然后过滤，用DCM(3×)、DMF(3×)和DCM(3×)冲洗，然后在真空下干燥以得到在下一步骤中按原样使用的树脂87。
步骤B-合成中间体88
用5％哌啶/DMF(30ml)将树脂87(4.5g，2.475mmol)人工脱保护30min，过滤，用5％哌啶/DMF(30ml)再处理另外30min，过滤，然后用DMF和DCM冲洗并干燥。然后使树脂与DMF(30ml)中的Fmoc-Ala-OH(1.541g，4.95mmol)、HATU(1.694g，4.46mmol)和DIPEA(1.729ml，9.90mmol)人工偶联2h，然后过滤，用DMF和DCM冲洗，然后干燥。然后用含10％AcOH和TFE的DCM(60ml)处理该树脂90min，过滤并浓缩滤液以提供88。LC/MS:[2M+H]+＝995.01。
实施例1A-Ex-01的替代性合成和由其制备Ex-25：
以上呈现的化合物Ex-01可替代地进行制备，并且化合物Ex-25可根据以下方案由Ex-01制备：
Figure BDA0002846014700000711
Figure BDA0002846014700000721
Figure BDA0002846014700000731
Figure BDA0002846014700000741
步骤A-合成中间体Int-cd1
在0℃下向Int-3c(由下文描述的中间体107合成)(7.09g，10.33mmol)于DMF(45ml)中的溶液中添加Int-2d(3.63g，9.84mmol，下文所述制备)和HATU(3.74g，9.84mmol))，随后添加DIPEA/DMF(6.87ml，39.4mmol)，并使混合物升温至室温并搅拌1h。在0℃下将混合物用盐水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机级分用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％至80％梯度的乙酸乙酯/石油醚洗脱)来纯化以得到Int-cd1。LC/MS:[M+1]+＝1000.5。
步骤B-合成中间体Int-cd2
向Int-cd1(3.48g，3.48mmol)于乙腈(50ml)中的溶液添加哌啶(1.72ml，17.40mmol)，并在室温下搅拌所得溶液3h。浓缩混合物，将残余物再溶于DCM/乙腈(1:1，20mL)中，再次浓缩，并将残余物在真空下干燥以得到呈粗产物形式的Int-cd2。LC/MS:(M+1)+＝778.5。
步骤C-合成中间体Int-cd3
在0℃下向76(以上实施例1中所示制备)(2.45g，3.01mmol)和Int-cd2(2.69g，3.46mmol)于DMF(70ml)中的溶液中添加HATU(1.37g，3.61mmol)，随后添加DIEA(1.05ml，6.02mmol)。在室温下将所得溶液搅拌50min，然后分配于EtOAc(500mL)与盐水(200mL)之间。有机相用盐水(2×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-5％梯度的MeOH/DCM洗脱)来纯化以得到Int-cd3。LC/MS:(M+1)+＝1574.7。
步骤D-合成中间体Int-cd4
用N2将Int-cd3(1.91g，1.21mmol)于DCM(1500ml)和乙酸(30mL)中的室温溶液鼓泡30min，随后添加詹氏催化剂-1B(0.445g，0.607mmol)。在室温下用N2将所得混合物进一步鼓泡30min，然后在55℃下加热5h。冷却至室温后，混合物经硅藻土过滤，浓缩滤液，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-5％梯度的MeOH/DCM洗脱)来纯化以得到Int-cd4(呈顺式与反式烯烃的混合物形式)。LC/MS:(M+1)+＝1546.8。
步骤E-合成中间体Int-cd5
向Int-cd4(顺式与反式烯烃的混合物)(5.49g，3.55mmol)于DCM(20ml)和乙腈(50ml)中的溶液中添加哌啶(1.76ml，17.8mmol)。在室温下搅拌所得溶液2h，然后浓缩，并将残余物悬浮于乙腈(20ml)中，并再次浓缩。然后在真空下干燥残余物以得到呈粗混合物形式的Int-cd5(呈顺式与反式烯烃的混合物形式)。LC/MS:(M+1)+＝1323.8。
步骤F-合成中间体Int-cd6
在0℃下向Int-cd5(顺式与反式烯烃的混合物)(4.70g，3.55mmol)和Int-1d(2.21g，4.44mmol，下文描述的制备)于DMF(70ml)中的溶液中添加HATU(1.76g，4.62mmol)和DIEA(1.55ml，8.88mmol)。将所得溶液升温至室温并搅拌1h，然后分配于EtOAc(300mL)与盐水(200mL)之间。用EtOAc(200mL)萃取水相，合并EtOAc相并用盐水(3×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-5％梯度的MeOH/DCM洗脱)来纯化以得到Int-cd6(呈顺式与反式烯烃的混合物形式)。LC/MS:(M+1)+＝1802.8
步骤G-合成中间体Int-cd7
在0℃下向Int-cd6(呈顺式与反式烯烃的混合物形式)(5.41g，3.00mmol)于THF(100ml)、MeOH(30ml)和水(30ml)中的溶液中滴加1N LiOH水溶液(24.0ml，24.0mmol)，并在0℃下搅拌所得溶液3h。在0℃下通过添加1N HCl来中和该混合物，蒸发挥发物，并通过1NHCl将水性层中和至pH 5。然后使混合物冻结并冻干，并将残余物通过在C18上进行柱层析(用乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)的梯度洗脱)来纯化以得到呈TFA盐形式的Int-cd7(呈顺式与反式烯烃的混合物形式)。在0℃下向含由此获得的Int-cd7 TFA盐(呈顺式与反式烯烃的混合物形式)的乙腈(750mL)和水(450mL)中滴加0.1N HCl水溶液(150ml，15.00mmol)，然后在0℃下搅拌所得溶液5min，冻结并冻干以得到呈HCl盐形式的Int-cd7(呈顺式与反式烯烃的混合物形式)。LC/MS:(M+1)+＝1566.6。
步骤H-合成中间体Int-cd8
向自之前步骤获得的Int-cd7 HCl盐(1.01g，0.630mmol)于DMF(50ml)和DCM(1300ml)中的溶液中添加DIEA(0.330ml，1.890mmol)和HATU(0.287g，0.756mmol)。在室温下搅拌所得溶液2h，蒸发挥发物，并将残余物分配于EtOAc(400mL)与盐水(200mL)之间。用EtOAc(300mL)萃取水相，合并的有机层用盐水(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-10％MeOH/DCM的梯度洗脱)纯化以得到Int-cd8(呈顺式与反式烯烃的混合物形式)。LC/MS:(M+1)+＝1548.8。
步骤I-合成中间体Int-cd9
向之前步骤中所获得的Int-cd8(1.22g，0.788mmol)于MeOH(100ml)中的溶液中添加10％Pd/C(0.645g，0.607mmol)，并在环境温度下经由H2气球将所得混合物氢化7小时。在7小时之后，经硅藻土过滤反应物，浓缩滤液，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-10％MeOH/DCM的梯度洗脱)纯化以得到Int-cd9。LC/MS:(M+1)+＝1550.9。步骤J-合成呈HCl盐形式的化合物Ex-01
向Int-cd9(1.14g，0.735mmol)于DCM(6ml)中的溶液中添加TFA(12ml，156mmol)，并在环境温度下搅拌所得溶液30min。然后浓缩该混合物，并将残余物溶于DCM(20mL)和甲苯(20mL)中。浓缩所得混合物，并将残余物再溶于DCM(20mL)中并用HCl(4N于二噁烷中)(0.919ml，3.68mmol)处理。浓缩所得混合物以得到呈固体形式的产物。将此固体产物再溶于乙腈(200mL)和水(100mL)中，并在0℃下向以上溶液中滴加1N HCl水溶液(3.68ml，3.68mmol)。在0℃下搅拌所得溶液2min，然后冻结并冻干以得到呈HCl盐形式的Ex-01。LC/MS:(M+1)+＝1394.7。
步骤K-合成呈TFA盐形式的实施例Ex-25
向Ex-01 HCl盐(870mg，0.608mmol)和Int-4b(170mg，0.669mmol，以下所述制备)于DMF(1.2ml)和水(0.6ml)中的溶液中添加HATU(254mg，0.669mmol)和DIEA(425μl，2.433mmol)。在室温下搅拌所得溶液1h，然后通过添加1.2mL水淬灭。过滤该混合物，并将滤液通过在C18上进行柱层析(用乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)的梯度洗脱)来纯化以得到呈TFA盐形式的Ex-25。LC/MS:M+＝1550.6。
步骤L-制备呈Cl盐形式的实施例Ex-25
向两个柱中封装73.6g的AG MP-1离子交换树脂氯化物形式(批号141-1841BIO-RAD)，其中各柱中总共36.8g树脂。各柱用水(2×80ml)，随后用20％乙腈/水(2×100ml)洗涤。将之前步骤中制备的Ex-25 TFA盐(737mg，0.443mmol)于20％乙腈/水(100mL)中的溶液均匀装载至两个树脂柱上，然后用20％乙腈/水(130ml)洗脱各柱。合并洗脱液，冻结并冻干以得到呈氯盐形式的Ex-25。LC/MS:M+＝1550.6。
下文描述在紧接的前文中描述的Ex-01和Ex-25的合成中有效采用的多种中间体。
制备中间体Int-1d
由起始物质根据以下方案来制备中间体化合物Int-1d：
Figure BDA0002846014700000781
步骤A-合成Int-1da
在0℃下向D-Dap(Boc)-OMe HCl盐(4.10g，16.10mmol)、Fmoc-Ala-OH(5.01g，16.10mmol)和HATU(6.43g，16.90mmol)于DMF(40ml)中的溶液中添加DIPEA(7.03ml，40.2mmol)，并在0℃下搅拌混合物2h，然后保存于冰箱中过夜。在室温下将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机级分用半盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc的梯度洗脱)来纯化以得到Int-1da。LC/MS:[M+H]+＝512.3。
步骤B-合成Int-1d
在室温下向Int-1da(8.03g，15.70mmol)和0.8N氯化钙(19.62ml，15.70mmol)于水(40ml)和2-丙醇(120ml)中的溶液中添加固体氢氧化钠(0.691g，17.27mmol)。在室温下搅拌混合物过夜。将混合物浓缩，用0.5N酸化至pH～2(～40mL)，立刻用EtOAc萃取，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过在C18上进行柱层析(用乙腈/水+0.1％TFA的梯度洗脱)来纯化以得到Int-1d。LC/MS:[M+H]+＝498.25。
上文描述中间体Int-1d的制备以用于制备Ex-01和Ex-25。分子的此部分可描述为“接头”，其将低级肽环环化为高级肽环。其他类似“接头”可用于通过改变用于合成中的间隔基来代替Int-1d，包括但不限于使用Dap和D-Ala。
制备中间体Int-2d
在制备本发明的化合物时可用作“接头”的中间体Int-2d根据以下方案来制备：
Figure BDA0002846014700000791
步骤A-合成Int-2da
将4-溴苯甲醛(15.00g，81mmol)、N-[2-(三氟硼酸基)乙基]氨基甲酸叔丁酯钾(20.97g，84mmol)、碳酸铯(52.8g，162mmol)和1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(Pd(II)(dppf)Cl2，1.99g，2.43mmol)于脱气甲苯(250ml)和水(85ml)中的溶液升温至76℃并搅拌过夜。在室温下将混合物用半饱和氯化铵水溶液淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机级分用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用DCM/EtOAc的梯度洗脱)来纯化以得到
Int-2da。LC/MS:(M-56+1)+＝193.0。
步骤B-合成Int-2db
在室温下在水浴中向Int-2da(12.9g，51.7mmol)和戊-4-烯-1-胺(6.61g，78mmol)于DCM(120ml)和AcOH(3ml)中的溶液中逐份添加三乙酰氧基硼氢化钠(32.9g，155mmol)，并搅拌混合物30min。在0℃下用3ml水将反应缓慢淬灭，倒入1N NaOH(500ml)中，搅拌15min，然后用DCM萃取，经Na2SO4干燥，并浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用DCM/MeOH的梯度洗脱)来纯化以得到Int-2db。LC/MS:(M+1)+＝319.2。
步骤C-合成Int-2dc
向Int-2db(8.48g，20.77mmol)和4-甲氧基-4-氧代丁酸(3.02g，22.85mmol)于DMF(40ml)中的溶液中添加HATU(9.48g，24.92mmol)和DIPEA(8.71ml，49.8mmol)。在室温下搅拌所得溶液1小时，然后用饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭。将混合物分配于EtOAc(500mL)与饱和NaHCO3水溶液(200mL)之间，有机相用盐水(3×200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物在硅胶柱上(用己烷/EtOAc的梯度洗脱)纯化以得到Int-2dc。LC/MS:(M+1)+＝433.4。
步骤D-合成Int-2d
在室温下向Int-2dc(2.9g，6.70mmol)于DCM(15mL)中的溶液中添加4M HCl/二噁烷(10mL)。在室温下搅拌反应混合物1h。在减压下浓缩混合物以得到4-((4-(2-氨基乙基)苄基)(戊-4-烯-1-基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯盐酸盐(Int-2d)。LC/MS[M-HCl+H]+＝333.3。
由在上文所述的Ex-01和Ex-25的合成中使用的107来制备Int-3c
根据以下方案来制备中间体Int-3c：
Figure BDA0002846014700000811
步骤A-合成Int-3ca
在室温下向107(其制备呈现于109的合成中并稍后用于116，该中间体化合物用于以下实施例3中Ex-53、Ex-54和Ex-55的合成)(10.34g，21.65mmol)于THF(100ml)中的溶液中添加2N单水合氢氧化锂(43.3ml，87mmol)，将混合物升温至45℃并搅拌过夜以得到呈粗溶液形式的Int-3ca。LC/MS:(M+1)+＝464.3。将反应混合物冷却至0℃并用1M HCl(40mL)处理。该混合物直接用于下一步骤。
步骤B-合成Int-3c
在0℃下向之前步骤中制备的粗Int-3ca中添加NaHCO3(1.725g，20.54mmol)和Fmoc-OSu(3.81g，11.30mmol)。在0℃下将反应混合物搅拌2h，用1M HCl(20.5mL)处理，并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。合并的有机层用盐水(2×100mL)洗涤并经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过硅胶柱层析，用2％至5％梯度的MeOH/DCM洗脱来纯化以得到Int-3c。LC/MS:(M+1)+＝686.4。
制备中间体Int-4b
根据以下方案来制备中间体Int-4b：
Figure BDA0002846014700000812
步骤A-由3-(2-羟基乙氧基)丙酸叔丁酯合成Int-4ba
在0℃下向3-(2-羟基乙氧基)丙酸叔丁酯(500.0mg，2.63mmol)于DCM(2mL)中的溶液中添加CBr4(1395mg，4.21mmol)和PPh3(965mg，3.68mmol)。在室温下搅拌混合物2h。在减压下浓缩所得混合物，并将残余物通过硅胶柱层析，用梯度1％-15％的乙酸乙酯/石油醚洗脱来纯化。将含有所要产物的级分合并并浓缩以得到6-溴己酸叔丁酯。用三甲胺(13.56ml，59.7mmol)处理6-溴己酸叔丁酯(5g，19.91mmol)于乙腈(10ml)中的如此制备的溶液，并在50℃下加热所得溶液过夜。浓缩该溶液以得到Int-4ba。LC/MS:M+＝230.3。
步骤B-合成Int-4b
向Int-4ba(6.8g，21.92mmol)于DCM(6ml)中的溶液中添加4N HCl/二噁烷(27.4ml，110mmol)，并在室温下搅拌所得溶液3h。然后浓缩该混合物以得到Int-4b。LC/MS:M+＝174.3。
上文描述中间体Int-2d的制备以用于制备Ex-01和Ex-25。分子的此部分可描述为“接头”，其将带有R1、R2和R8取代基的低级肽环环化。其他类似“接头”可用于代替Int-2d。以下为对可用于制备本文中所述的本发明的实施例的其他“接头”的描述。
制备中间体Int-2e
在制备本发明的化合物时可用作“接头”的中间体Int-2e根据以下方案来制备：
Figure BDA0002846014700000821
Figure BDA0002846014700000831
步骤A-合成中间体Int-2ea
向(2-(3-氧代异吲哚啉-5-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.60g，5.79mmol)于DCE(20mL)中的溶液中添加NsCl(1.93g，8.69mmol)、三乙胺(1.76g，17.4mmol)和DMAP(0.141g，1.16mmol)。在40℃下将反应混合物搅拌14h。将反应物冷却至室温并在减压下浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-40％梯度的EtOAc/PE洗脱)来纯化以得到Int-2ea。LC/MS:(M+Na)+:＝484.4。
步骤B-合成中间体Int-2eb
向Int-2ea(11.3g，24.5mmol)于THF(100mL)和水(100mL)中的溶液中添加LiOH(1.76g，73.5mmol)。在25℃下搅拌反应混合物5h，然后通过HCl(1M)将所得溶液调节至pH 4～5。用EtOAc萃取溶液并将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-6％梯度的MeOH/DCM洗脱)纯化以得到Int-2eb。LC/MS:(M+Na)+:＝502.2。
步骤C-合成中间体Int-2ec
在0℃下向Int-2eb(1.70g，3.55mmol)于THF(8mL)中的溶液中添加硼烷(0.147g，10.6mmol)。在25℃下搅拌反应混合物14h，然后将所得溶液在减压下浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-50％梯度的EtOAc/PE洗脱)来纯化以得到Int-2ec。LC/MS:(M+NH4]+＝483.2。
步骤D-合成中间体Int-2ed
向Int-2ec(4.50g，9.67mmol)于DMF(150mL)中的溶液中添加K2CO3(2.01g，14.5mmol)和3-溴丙-1-烯(1.41g，11.6mmol)。在室温下将反应混合物搅拌5h，然后用水稀释并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-50％梯度的EtOAc/PE洗脱)来纯化以得到Int-2ed。LC/MS:(M+H)+:＝506.2。
步骤E-合成中间体Int-2e
向Int-2ed(4.50g，8.90mmol)于DMF(35mL)中的溶液中添加DBU(1.35g，8.90mmol)和2-巯基乙醇(2.08g，26.7mmol)。在室温下将反应混合物搅拌14h，然后通过在C18上进行柱层析(柱：330g；流动相A：水/0.05％TFA，流动相B：ACN；流速：85mL/min；梯度：15min内10％B至20％B，15min内20％B至45％B；检测器：UV 210nm；Rt＝20min)来纯化以得到Int-2e。LC/MS:(M+H)+:＝321.2。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.21-7.13(m,2H),7.10-7.01(m,1H),5.96-5.79(m,1H),5.30-5.09(m,2H),4.58(s,2H),3.84(s,2H),3.43-3.19(m,4H),2.76(t,J＝7.1Hz,2H),1.41(s,9H)。
制备中间体Int-2f-1
在制备本发明的化合物时可用作“接头”的中间体Int-2f-1根据以下方案来制备：
Figure BDA0002846014700000841
Figure BDA0002846014700000851
步骤A-合成中间体Int-2fa
在氮气保护下向4-溴苯甲醛(20.0g，108mmol)、(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(12.5g，103mmol)、MgSO4(130g，1081mmol)于DCM(225mL)中的溶液中添加吡啶4-甲基苯磺酸酯(1.35g，5.40mmol)。在25℃下搅拌此混合物72h，然后过滤所得溶液，并在减压下浓缩滤液。所得残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-15％梯度的EtOAc/PE洗脱)来纯化以得到Int-2fa。LC/MS:(M+H)+:＝287.9,289.9。
步骤B-合成中间体Int-2fb(外消旋体)并分离为对映异构体Int-2fb-1和Int-2fb-2
在氮气保护下在-48℃下向Int-2fa(20.0g，65.9mmol)于无水DCM(200mL)中的溶液中缓慢添加丁-3-烯-1-基溴化镁(15.7g，99mmol)。在-48℃下搅拌混合物2h，然后用饱和NH4Cl(400mL)水溶液淬灭并用DCM萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并将所得残余物(含有Int-2fb外消旋混合物)通过在硅胶上进行柱层析(用1％-35％梯度的EtOAc/PE洗脱)来纯化以得到Int-2fb-1和Int-2fb-2。LC/MS:(M+H)+:＝344.0,346.0。
步骤C-合成中间体Int-2fc-1
在室温下向HCl(100mL，4N于1,4-二噁烷中)溶液中添加Int-2fb-1(17.0g，46.9mmol)。将反应溶液搅拌1h，然后在减压下浓缩以得到Int-2fc-1。LC/MS:(M+H-HCl)+:＝240.0,242.0。
步骤D-合成中间体Int-2fd-1
在25℃下向Int-2fc-1(8.20g，28.2mmol)和Teoc-OSu(8.03g，31.0mmol)于1,4-二噁烷(200mL)中的溶液中添加TEA(8.55g，84mmol)。将此混合物搅拌2小时，然后用水淬灭并用石油醚(PE)萃取。合并的有机层在减压下浓缩，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-10％梯度的EtOAc/PE洗脱)来纯化以得到Int-2fd-1。LC/MS:(M+Na+CH3CN)+:＝447.3,449.3。
步骤E-合成中间体Int-2fe-1
在氮气保护下向Int-2fd-1(15.1g，37.3mmol)、(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)三氟硼酸钾(18.7g，74.6mmol)、Cs2CO3(36.5g，112mmol)于甲苯(285mL)和水(95mL)中的溶液中添加PdCl2(dppf)(1.37g，1.87mmol)。在80℃下搅拌混合物40h。将所得溶液用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-40％梯度的EtOAc/PE洗脱)来纯化以得到Int-2fe-1。LC/MS:(M+Na)+:＝471.4。
步骤F-合成中间体Int-2f-1
向Int-2fe1(10.6g，22.4mmol)于THF(100mL)中的溶液中添加1N TBAF/THF(44.9mL，44.9mmol)。在室温下将此混合物搅拌16h，然后用水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用1％-70％梯度的EtOAc/PE洗脱)，然后通过在C18上进行柱层析(柱：330g；流动相A：水(10mm NH4HCO3)，流动相B：ACN；流速：80mL/min；梯度：10min内10％B至10％B，10min内20％B至45％B，20min内45％B至70％B；检测器：UV 210nm；Rt＝25min)来纯化以提供Int-2f-1。LC/MS:(M+H)+:＝305.1。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ7.27-7.16(m,4H),5.85-5.75(m,1H),5.00-4.85(m,2H),3.79(t,J＝7.0Hz,1H),3.32-3.21(m,2H),2.75(t,J＝7.4Hz,2H),2.98-1.72(m,4H),1.42(s,9H)。
实施例2制备Ex-50和Ex-52
Figure BDA0002846014700000871
根据以下方案由化合物Ex-01(其制备描述于本文实施例1中)，通过使其在适当条件下与根据以下方案来制备的中间体Int32反应来制备化合物Ex-50：
Figure BDA0002846014700000872
步骤A：制备中间体Int-32A
向3-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)丙酸叔丁酯(5g，16.82mmol)于乙腈(10ml)中的溶液中添加三甲胺(33％于乙醇中，11.46ml，50.5mmol)，并在50℃下加热所得溶液过夜。浓缩该溶液以得到2-(2-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)-N,N,N-三甲基乙醇铵溴化物(Int 32A)。LC/MS:(M)+:276.5。
步骤B：制备中间体Int-32
向2-(2-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)-N,N,N-三甲基乙醇铵溴化物(Int-32A)(5.99g，16.81mmol)于DCM(20ml)中的溶液中添加HCl(4N于二噁烷中)(21.01ml，84mmol)，并在室温下搅拌所得溶液过夜。浓缩该溶液以得到2-(2-(2-羧基乙氧基)乙氧基)-N,N,N-三甲基乙醇铵溴化物(Int-32)。LC/MS:(M)+:220.1。
制备实施例化合物Ex-50
Figure BDA0002846014700000881
向Ex-01(粗物质)(17.4mg，0.012mmol)和2-(2-(2-羧基乙氧基)乙氧基)-N,N,N-三甲基乙醇铵溴化物(Int-32)(4.49mg，0.015mmol)于DMF(2ml)中的溶液中添加HATU(5.69mg，0.015mmol)和DIEA(6.54μl，0.037mmol)，并在室温下将所得溶液搅拌50min，然后通过反相HPLC使用乙腈(0.1％甲酸)/水(0.1％甲酸)作为流动相纯化以得到Ex-50。LC/MS:M+＝1596.3。
制备实施例化合物Ex-52
以与制备化合物Ex-50相似的方式制备化合物Ex-52，但使用Ex-51替代Ex-01。根据本文所述的方法，使用反相HPLC来纯化Ex-52。LC/MS:M+＝1593.8。
实施例3制备Ex-53、Ex-54和Ex-55
Figure BDA0002846014700000891
Figure BDA0002846014700000901
根据以下方案和合成描述以与上文所述的化合物相似的方式由中间体115(下文所述制备)来制备化合物Ex-53、Ex-54和Ex-55：
Figure BDA0002846014700000902
步骤A-合成中间体116
在0℃下向115(66.3mg，0.044mmol)于DMF(1.5ml)、DCM(10ml)和水(0.5ml)中的溶液中添加DIPEA(0.030ml，0.173mmol)，随后添加HATU(18.50mg，0.049mmol)并搅拌混合物30min。在真空中将混合物浓缩并通过在C18上进行柱层析(30g，用乙腈+0.05％TFA/水+0.05％TFA 90:10至40:60洗脱)来直接纯化，以提供呈E与Z异构体的混合物形式的116以及呈E或Z异构体的纯级分形式的116。LC/MS(主要异构体)LC/MS:M+＝1481.19；LC/MS(次要异构体):LC/MS:M+＝1480。
步骤B-合成化合物Ex-54
在1atm下将116(25.1mg，0.017mmol)和Pd-C 10％(3.61mg，3.39μmol)于MeOH(10ml)中的溶液氢化1h。反应混合物经硅藻土过滤，并浓缩。残余物用DCM/TFA 1:1处理30min，然后浓缩，用4N HCl/二噁烷(100uL)处理，然后浓缩以提供呈HCl盐形式的Ex-54。LC/MS:M+＝1383.44。
步骤C-合成化合物Ex-55
以与在实施例2中针对化合物Ex-50的合成所述一致的方式由Ex-54以甲酸盐形式来制备实施例化合物Ex-55。LC/MS:M+＝1583.69。步骤D-合成化合物Ex-53
以与实施例1中针对化合物Ex-51的合成所述一致的方式由中间体化合物116以HCl盐形式来制备实施例化合物Ex-53。LC/MS:M+＝1381.33。
提供中间体化合物115(化合物Ex-53、Ex-54和Ex-55最终由其制备)所需的中间体的制备描述于以下方案和合成中，其以制备中间体化合物103开始。
Figure BDA0002846014700000911
步骤A-合成中间体100
将4-溴-2-羟基苯甲醛(3.00g，14.92mmol)、N-[2-三氟硼酸基)乙基]氨基甲酸叔丁酯钾(3.82g，15.22mmol)、碳酸铯(17.02g，52.2mmol)和1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(ii)二氯甲烷络合物(0.611g，0.746mmol)于脱气甲苯(45ml)和水(15ml)中的溶液升温至75℃并搅拌过夜。在室温下通过半饱和碳酸氢钠水溶液将混合物淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机级分用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc 99:1至60:40洗脱)来纯化以得到100。LC/MS:(M-55)+＝210.25。
步骤B-合成中间体101
在室温下向100(1.70g，6.41mmol)和烯丙基溴(0.832ml，9.61mmol)于DMF(10ml)中的溶液中添加碳酸钾(1.328g，9.61mmol)，并将混合物升温至50℃并搅拌1h。在室温下通过半饱和碳酸氢钠水溶液将混合物淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机级分用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc 99:1至70:30洗脱)来纯化以得到101。LC/MS:(M-55)+＝250.29。
步骤C-合成中间体102
在室温下向前述步骤中制备的101(1.76g，5.76mmol)、4A分子筛(2g)和乙酸铵(4.44g，57.6mmol)于MeOH(100ml)中的溶液中添加氰基硼氢化钠(0.380g，6.05mmol)，并振荡混合物过夜。将混合物浓缩，在室温下用水淬灭并用DCM萃取。合并的有机级分经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用DCM/MeOH 99:1至30:70洗脱)来纯化以提供102。LC/MS:(2M+H)+＝613.56。
步骤D-合成中间体103
在室温下向102(220mg，0.718mmol)和琥珀酸单甲酯(114mg，0.862mmol)于DMF(4ml)中的溶液中添加HATU(300mg，0.790mmol)和DIPEA(0.314ml，1.795mmol)，并搅拌混合物30min。在室温下通过饱和碳酸氢钠水溶液将混合物淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机级分用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc 99:1至30:70洗脱)来纯化以得到中间体，将其用20％TFA/DCM处理1h。将反应物浓缩，然后用4N HCl(1.5mL)处理并浓缩以提供103。LC/MS:(M+H)+＝321.29。
制备中间体109
Figure BDA0002846014700000931
步骤A-合成中间体104
在0℃下向(S)-2-甲基吡咯烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(7.00g，39mmol)和(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酸(12.08g，40.9mmol)于DMF(100ml)中的搅拌溶液中添加DIPEA(17.01ml，97.0mmol)，随后添加HATU(19.26g，50.7mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌过夜。反应物用10％LiCl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取。有机萃取物用10％LiCl水溶液洗涤并经MgSO4干燥。在减压下移除溶剂，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc 80:20至40:60洗脱)来纯化以提供104。
步骤B-合成中间体105
向104(16.4g，39.0mmol)于EtOAc(100ml)中的溶液中添加4N HCl/二噁烷(48.8ml，195mmol)。在室温下将所得混合物搅拌18h并在减压下浓缩以得到未经进一步纯化即用于下一步骤的105。
步骤C-合成中间体106
在0℃下向105(13.2g，37.0mmol)和N-((苄基氧基)羰基)-O-(叔丁基)-L-苏氨酸(18.15g，37.0mmol)于DMF中的溶液中添加DIPEA(16.15ml，92mmol)，随后添加HATU(18.28g，48.1mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌过夜。反应物用10％LiCl水溶液淬灭，并用EtOAc萃取。有机萃取物用10％LiCl水溶液洗涤并经MgSO4干燥。在减压下移除溶剂，并将残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc 80:20至40:60洗脱)来纯化以提供106。
步骤D-合成中间体107
向106(16.5g，27.0mmol)于MeOH中的溶液中添加10％Pd/C的浆液，并在20psi下将混合物氢化4h。反应混合物经硅藻土过滤并在减压下浓缩。然后将粗产物再溶于DCM中，并将溶液通过2μm过滤器过滤并浓缩以得到107。
步骤E-合成中间体108
向107(3.2g，6.70mmol)于DCM中的溶液中添加DIPEA(1.52ml，8.71mmol)，随后添加二碳酸二叔丁酯(1.90g，8.71mmol)。在室温下将所得混合物搅拌2h，然后在减压下浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc 100:0至40:60洗脱)来纯化以得到108。
步骤F-合成中间体109
将108(1.43g，2.475mmol)和1N LiOH水溶液(9.90ml，9.90mmol)于THF(15ml)和MeOH(15ml)中的溶液升温至45℃并搅拌4h，然后在32℃下搅拌48h。将反应物浓缩，在0℃下用0.5M盐酸水溶液淬灭直至pH～2-3，并用EtOAc萃取。合并的有机级分经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc-EtOH 99:1至EtOAc-EtOH 3:1洗脱)来纯化以得到109。LC/MS:(M+H)+＝564.49。
制备中间体化合物110至115
步骤A-合成中间体110
Figure BDA0002846014700000951
在0℃下将109(217mg，0.385mmol)、HATU(133mg，0.350mmol)和DIPEA(0.245ml，1.400mmol)于DMF(2.5ml)中的溶液用103(217mg，0.385mmol)处理，并将混合物升温至室温并搅拌30min。在0℃下用饱和碳酸氢钠水溶液将混合物淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机级分用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc-EtOH 3:1 99:1至EtOAc-EtOH 3:1洗脱)来纯化以得到110。LC/MS:(M+H)+＝866.21。
步骤B和步骤C-合成中间体化合物111和112
Figure BDA0002846014700000952
在室温下向110(249mg，0.288mmol)于DCM(1ml)中的溶液中添加HCl 4N/二噁烷(0.359ml，1.438mmol)，并将混合物搅拌6h，然后浓缩以提供111。LC/MS:(M+H)+＝710.19。
在0℃下向111(219mg，0.293mmol)和76(232mg，0.285mmol)于DMF(3ml)和水(0.15ml)中的溶液中添加DIPEA(0.128ml，0.734mmol)和HATU(123mg，0.323mmol)，并搅拌混合物30min。在0℃下将混合物用盐水淬灭并用EtOAc萃取。合并的有机级分经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用己烷/EtOAc-EtOH3-1 99:1至30:70，然后用DCM/MeOH 99:1至70:30洗脱)来纯化以得到112。LC/MS:(M+H)+＝1506.11。
步骤D-合成中间体113
Figure BDA0002846014700000961
向112(173mg，0.115mmol)于DCM(180ml)和AcOH(15ml)中的氮气脱气30min的溶液中添加詹氏催化剂(59.0mg，0.080mmol)，并将混合物升温至50℃并搅拌3h。混合物经硅藻土过滤，用DCM洗涤，然后在真空中浓缩。残余物通过在硅胶上进行柱层析(用DCM/MeOH99:1至80:20洗脱)来纯化以得到呈E与Z异构体的混合物形式的113。LC/MS(主要异构体):(M)+＝1477.80；LC/MS(次要异构体):(M)+＝1478.28。
步骤E-合成中间体114
Figure BDA0002846014700000971
向113(141mg，0.095mmol)于乙腈(2ml)中的溶液中添加哌啶(0.066ml，0.668mmol)，并搅拌混合物45min。将混合物在真空中浓缩，立刻与乙腈共蒸发以得到粗物质。在0℃下向此粗物质(119mg，0.095mmol)和中间体化合物88(52.0mg，0.105mmol)于DMF(2ml)和水(0.1ml)中的浆液中添加HATU(39.7mg，0.105mmol)和DIPEA(0.037ml，0.209mmol)，并搅拌混合物30min。该混合物通过在C18上进行柱层析(用乙腈+0.05％TFA/水+0.05％TFA 90:10至30:70洗脱)来纯化以得到呈E与Z异构体的混合物形式的114。LC/MS主要异构体:(M)+＝1735.28；LC/MS(次要异构体):(M)+＝1735.25。
步骤F-合成中间体化合物115
Figure BDA0002846014700000972
在0℃下向114(134mg，0.077mmol)于THF(1.5ml)和MeOH(1.5ml)中的溶液中滴加1N LiOH水溶液(0.386ml，0.386mmol)，并搅拌混合物2h。在0℃下用0.5N HCl将反应物逐滴处理直至pH～7，自有机溶剂浓缩，然后浆液用～1mL的DMF溶解，并通过在C18上进行柱层析(用乙腈+0.05％TFA/水+0.05％TFA 90:10至50:50洗脱)来直接纯化以得到呈E与Z异构体的混合物形式的115。LC/MS主要异构体:(M)+＝1498.71；LC/MS(次要异构体):(M)+＝1499.48。
如上文在由Ex-01和Ex-54通过使各自的起始化合物中的其R2酰胺与酸性取代基前体反应来制备Ex-50和Ex-55时所述，以下中间体化合物可采用相似反应来提供本发明的有用的化合物。
合成R1/R2取代基前体：
制备5-羧基-N-(3-甲氧基丙基)-N,N-二甲基戊烷-1-铵氯化物(中间体Z-1a)
步骤A：制备中间体Z-1
Figure BDA0002846014700000981
向6-(二甲氨基)己酸叔丁酯(300mg，1.393mmol)于乙腈(1mL)中的搅拌溶液中添加1-溴-3-甲氧基丙烷(853mg，5.57mmol)。在50℃下搅拌反应混合物16h。在减压下浓缩所得混合物以得到Z-1。LC/MS:(M-Br)+＝288.4。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ3.76-3.47(m,6H),3.38(d,J＝28.9Hz,9H),2.25(t,J＝7.2Hz,2H),2.12-1.95(m,2H),1.87-1.55(m,4H),1.45(s,11H)。
步骤B：合成中间体化合物Z-1a
Figure BDA0002846014700000982
在室温下向Z-1(460mg，1.249mmol)于DCM(0.5mL)中的搅拌溶液中添加4M HCl/二噁烷(2mL)。在室温下将反应混合物搅拌4h并在减压下浓缩。将残余物再溶于DCM(5mL)中并在减压下浓缩以得到中间体化合物Z-1a。LC/MS:(M-Cl)+＝232.3。
制备中间体Z-2b
步骤A：制备中间体Z-2
Figure BDA0002846014700000991
向6-溴己酸叔丁酯(1.0g，3.98mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加二甲胺(2M于THF中)(7.96mL，15.93mmol)。在室温下搅拌反应混合物16h。在减压下浓缩所得混合物，并将残余物通过硅胶柱层析用梯度1％-15％的MeOH/DCM洗脱来纯化。将含有期望产物的级分合并并浓缩以得到Z-2。LC/MS:(M+H)+＝216.2。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ2.35-2.17(m,J＝8.5,6.5Hz,10H),1.67-1.47(m,4H),1.45(s,9H),1.42-1.23(m,2H)。
步骤B：制备中间体Z-2a
Figure BDA0002846014700000992
向Z-2(250mg，1.161mmol)于ACN(1mL)中的搅拌溶液中添加1-溴-2-甲氧基乙烷(645mg，4.64mmol)。在50℃下搅拌反应混合物16h。在减压下浓缩所得混合物以得到Z-2a。LC/MS:(M-Br)+＝274.3。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ4.02-3.80(m,4H),3.70-3.54(m,2H),3.42(d,J＝13.0Hz,9H),2.24(t,J＝7.2Hz,2H),1.85-1.75(m,2H),1.72-1.55(m,2H),1.44(s,11H)。
步骤C：制备中间体Z-2b
Figure BDA0002846014700000993
在室温下向Z-2a(450mg，1.270mmol)于DCM(0.5mL)中的搅拌溶液中添加4M HCl/二噁烷(2mL)。在室温下将反应混合物搅拌4h并在减压下浓缩。将残余物再溶于DCM(5mL)中并在减压下浓缩以得到Z-2b。LC/MS:(M-Cl)+＝218.3。
制备中间体Z-3b
步骤A：制备中间体Z-3
Figure BDA0002846014700000994
在0℃下向3-(2-羟基乙氧基)丙酸叔丁酯(500.0mg，2.63mmol)于DCM(2mL)中的溶液中添加CBr4(1395mg，4.21mmol)和PPh3(965mg，3.68mmol)。在室温下搅拌混合物2h。在减压下浓缩所得混合物，并将残余物通过硅胶柱层析用梯度1％-15％的EA/PE洗脱来纯化。将含有期望产物的级分合并并浓缩以得到Z-3。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.78(dt,J＝11.1,6.3Hz,4H),3.47(t,J＝6.3Hz,2H),2.53(t,J＝6.4Hz,2H),1.48(s,9H)。
步骤B：合成中间体Z-3a
Figure BDA0002846014700001001
向3-(2-溴乙氧基)丙酸叔丁酯Z-3(450mg，1.778mmol)于ACN(2mL)中的搅拌溶液中添加三甲胺(955mg，5.33mmol)(33％Wt，于EtOH中)。在50℃下搅拌反应混合物16h。在减压下浓缩所得混合物以得到Z-3a。LC/MS:(M-Br)+＝232.3。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ5.32(s,1H),4.04-3.94(m,4H),3.73(t,J＝5.7Hz,2H),3.50(s,10H),2.50(t,J＝5.7Hz,2H),1.44(s,9H)。
步骤C：合成中间体Z-3b
Figure BDA0002846014700001002
在室温下向Z-3a(550mg，1.761mmol)于DCM(0.6mL)中的溶液中添加4M HCl/二噁烷(2.5mL)。在室温下搅拌混合物4h。在减压下浓缩所得混合物，并将残余物再溶于DCM(3mL)和甲苯(3mL)中。然后在减压下浓缩混合物以得到Z-3b。LC/MS:(M-Cl)+＝176.2。
制备中间体Z-4b
步骤A：制备中间体Z-4
Figure BDA0002846014700001003
向DIAD(1.755mL，9.03mmol)于THF(30mL)中的溶液中添加Ph3P(2.368g，9.03mmol)。在室温下搅拌混合物10min，然后将2-(3-羟苯基)乙酸甲酯(1.0g，6.02mmol)和3-(二甲氨基)丙-1-醇(0.931g，9.03mmol)添加至该溶液。在50℃下搅拌混合物1h。在减压下浓缩所得溶液，并将残余物通过硅胶柱层析用梯度1％-10％的MeOH/DCM洗脱来纯化。将含有期望产物的级分合并并浓缩以得到Z-4。LC/MS:(M+H)+＝252.2。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.23-7.18(m,1H),6.82(td,J＝8.7,4.1Hz,3H),4.01(t,J＝6.4Hz,2H),3.69(s,3H),3.59(s,2H),2.46(t,J＝7.3Hz,2H),2.27(s,6H),1.97(dt,J＝7.9,6.5Hz,2H)。
步骤B：制备中间体Z-4a
Figure BDA0002846014700001011
向Z-4(600mg，2.268mmol)于ACN(12mL)中的溶液中添加MeI(1.288g，9.07mmol)。在室温下搅拌混合物1h。在减压下浓缩所得溶液以得到-Z-4a。LC/MS:(M-I)+＝266.2。
步骤C：制备中间体Z-4b
Figure BDA0002846014700001012
向Z-4a(800mg，1.729mmol)于THF(12mL)中的溶液中添加2M LiOH(1.729mL，3.46mmol)。在室温下搅拌此混合物2h。通过HCl(1M)将溶液的pH值调节至4，并在减压下浓缩该溶液。粗产物通过在C18上的反相色谱(流动相A：水，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：25min内1％B至25％B；15min内25％B至95％B；10min内95％B至95％B)来纯化以得到Z-4b。LC/MS:(M-Cl)+＝252.2。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ7.21(t,J＝7.9Hz,1H),6.95-6.75(m,3H),4.12(t,J＝5.7Hz,2H),3.63-3.50(m,4H),3.18(s,9H),2.35-2.20(m,2H)。
实施例4制备Ex-23
Figure BDA0002846014700001021
步骤A：制备中间体S-1b
在0℃下将(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四乙酸四基酯S-1a(5g，12.81mmol)添加至48％HBr(7.25mL，64.0mmol)于AcOH和DCM(40mL)中的溶剂中，并在0℃下搅拌混合物1小时。将反应混合物倒入在冰上冷却的饱和碳酸氢钠水溶液中，并用DCM(3×60mL)萃取该混合物。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，然后粗产物通过硅胶快速色谱(用0～30％EtOAc/PE洗脱)来纯化为S-1b。
步骤B：制备中间体S-1c
向S-1b(4.5g，10.94mmol)于无水DMF(45mL)中的溶液中添加叠氮化钠(0.854g，13.13mmol)，并将反应物在18℃下搅拌30min。反应混合物用水(30mL)稀释，并用EtOAc(3×80mL)萃取。有机层经Na2SO4干燥并蒸发至干燥。粗产物通过硅胶快速色谱(用0～30％EtOAc/PE洗脱)来纯化以得到S-1c。
步骤C：制备中间体S-1d
向S-1c(3.15g，8.44mmol)于EtOH(60mL)中的溶液中添加10％Pd-C(0.898g，0.844mmol)。将反应容器自空气吹扫并在50psi下用H2填充。在18℃下搅拌反应物5h。将反应混合物用EtOAc稀释，经硅藻土过滤，并浓缩，以得到用于下一步骤的S-1d。
步骤D：制备中间体S-1e
向S-1d(2.34g，6.74mmol)于无水THF(20mL)中的溶液中添加二氢呋喃-2,5-二酮(0.742g，7.41mmol)和Et3N(0.939mL，6.74mmol)。搅拌反应物3h直至起始材料完全消耗，然后蒸发。所得粗产物通过硅胶快速色谱(用0～10％DCM/MeOH洗脱)来纯化以得到S-1e。MS(ESI):m/z(M+H)+448.1。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ:6.48(d,J＝9.04Hz,1H),5.43(s,1H),5.24(t,J＝8.93Hz,1H),5.07-5.17(m,2H),4.08-4.18(m,2H),4.04(q,J＝6.69Hz,1H),2.72-2.84(m,1H),2.58-2.69(m,2H),2.43-2.53(m,2H),2.15(s,3H),2.06(s,3H),2.04(s,4H),2.00(s,3H)。
步骤E：制备Ex-23
向Ex-01(300mg，0.215mmol)和S-1e(115mg，0.258mmol)于DMF(8ml)和水(0.4ml)中的溶液中添加DIEA(0.150ml，0.860mmol)和HATU(98mg，0.258mmol)，并在室温下搅拌所得溶液1h。用1N LiOH(2.58ml，2.58mmol)逐滴淬灭反应物，在室温下搅拌所得溶液2h，然后过滤，并将滤液在反相HPLC C18柱上使用29％-34％梯度的乙腈(0.05％TFA)/水(0.05％TFA)来纯化以得到Ex-23。LC/MS:[M+1]+＝1657.1。
实施例5制备Ex-14
Figure BDA0002846014700001041
以与实施例1中所述的程序相似的方式，但使用不同“接头”和替代性合成步骤来制备化合物Ex-14。下文描述这些“接头”的合成、替代性步骤和主要组装。
制备中间体Int-2g
在制备本发明的化合物时可用作“接头”的中间体Int-2g根据以下方案来制备：
Figure BDA0002846014700001042
Figure BDA0002846014700001051
步骤A-合成Int-2gb
在水浴中在室温下向Int-2da(0.5g，2mmol)和2-叠氮乙醇胺、HCl(0.246g，2mmol)于THF(16ml)中的溶液中逐份添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.06g，5mmol)，并搅拌混合物2h。反应物用饱和NaHCO3水溶液缓慢淬灭，然后用DCM萃取并用盐水洗涤。合并的有机层经MgSO4干燥，并浓缩以得到Int-2gb。LC/MS:(M+1)+＝320.3。
步骤B-合成Int-2gc
在-15℃下向Int-2gb(0.64g，2mmol)和琥珀酸单甲酯(0.3g，2.3mmol)于DMF(4ml)和DCM(8ml)中的溶液中添加HATU(0.914g，2.4mmol)和DIPEA(0.7ml，4.01mmol)。在-15℃下将所得溶液搅拌2小时，然后用水淬灭并浓缩。残余物通过在C18上的反相色谱(用乙腈/水+0.1％TFA洗脱)来纯化以得到Int-2gc。LC/MS:(M+1)+＝434.3。
步骤C-合成Int-2g
在室温下向Int-2gc(0.52g，1.2mmol)于DCM(9mL)中的溶液中添加TFA(3mL，38.9mmol)。在室温下搅拌反应混合物2h。在减压下浓缩混合物以得到Int-2g。LC/MS:(M+1)+＝334.3。
制备中间体化合物70B和76C
Figure BDA0002846014700001061
步骤A-合成中间体70B
在0℃下向69B(1.5g，4.46mmol)于DMF(17.8ml)中的溶液中添加95％NaH(0.141g，5.56mmol)，并在0℃下搅拌所得溶液20min，随后滴加3-溴丙-1-炔(80％于甲苯中)(0.596ml，5.35mmol)。向所得溶液中滴加氢氧化锂水溶液(2M)(3345μl，6.69mmol)。将反应物在室温下搅拌2h，过滤并通过反相HPLC(用乙腈/水+0.1％TFA洗脱)来纯化以得到70B。LC/MS:(M+1)+:361.0,(M+Na)+:383.0。
步骤B-合成中间体76C
70B至中间体76C的转化根据与描述于中间体76的制备步骤C至H中的那些相似的程序来进行。LC/MS:[M+1]+＝812.16。
组装为实施例Ex-14：
Figure BDA0002846014700001071
Figure BDA0002846014700001081
步骤A-合成中间体117
由中间体Int-2g和76C根据与实施例1和1A中所述的那些相似的程序来制备中间体117。更具体地，Int-2g遵循中间体77B的制备步骤A至B的试剂和程序进行官能化，进一步详述为中间体86的制备步骤G至J的以下程序，然后最终遵循在实施例1A的制备步骤B至C的程序与中间体76C偶联以提供117。LC/MS:(M+1)+:1573.36。
步骤B-合成中间体118
将含四(乙腈)六氟磷酸铜(I)(51.6mg，0.138mmol)、三[(1-苄基-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基]胺(73.4mg，0.138mmol)和抗坏血酸钠(137mg，0.692mmol)的BuOH(185.00mL)/水(93mL)用氮气鼓泡，然后在50℃下加热。将中间体117(435.3mg，0.277mmol)添加至呈固体的反应物中。1h后，将反应物用pH 4缓冲液水溶液处理并用EtOAc萃取。蒸发合并的有机层，并将残余物通过反相色谱(用乙腈/水+0.1％甲酸的梯度洗脱)来纯化以提供中间体118。LC/MS:(M+1)+:1573.2。
步骤C-合成Ex-14
由中间体118根据与实施例1中所述的那些相似的程序来进行合成实施例Ex-14，包括使用用于组装的替代性间隔基。LC/MS:[M+1]+＝1621.01。
使用上文所述的合成方案，并且如将理解的，在其中对某些中间体进行适当取代，包括使用本领域技术人员显见的替代性间隔基的一些情况下，制备了以下表2中所列的其制备可在上文所述的本发明的以下化合物。另外，本发明的化合物的替代性盐形式也可描述于本申请中：
表2
Figure BDA0002846014700001091
Figure BDA0002846014700001101
Figure BDA0002846014700001111
Figure BDA0002846014700001121
Figure BDA0002846014700001131
Figure BDA0002846014700001141
Figure BDA0002846014700001151
Figure BDA0002846014700001161
Figure BDA0002846014700001171
Figure BDA0002846014700001181
Figure BDA0002846014700001191
Figure BDA0002846014700001201
Figure BDA0002846014700001211
Figure BDA0002846014700001221
Figure BDA0002846014700001231
Figure BDA0002846014700001241
Figure BDA0002846014700001251
Figure BDA0002846014700001261
Figure BDA0002846014700001271
活性测定
本发明的所选化合物经历以下程序中的一个或多个以测定其拮抗PCSK9活性的活性。
以下为对用于测定本发明的化合物以及经报道的任何比较剂化合物对于PCSK9拮抗的测定的描述。生物素标记的PCSK9为商购获得。
LDLR TR-FRET
PCSK9 TR-FRET测定测量PCSK9与LDLR之间的相互作用。在50mM HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、5mM CaCl2、0.01％BSA和0.01％表面活性剂P20中制得含有40nM生物素标记的PCSK9+10nM Lance ULight链霉亲和素的溶液。在相同缓冲系统中制得含有40nM rhLDLR-6xHis+10nM Eu-W1024抗6xHis的单独的溶液。Echo用于将0.750ul的化合物转移至测定板，随后添加15ul的PCSK9+Ulight和15ul的LDLR+Eu。最终测定体积为30.750ul，其含有20nMPCSK9、5nM Ulight、20nM LDLR和5nM Eu。在室温下将反应培育至少两小时，然后使用Envision Multilabel读取器进行荧光测量。通过使用非线性回归将数据拟合至S形剂量-反应曲线来测定IC50值。追踪铕标记的LDLR的计数(B计数)以观测化合物是否有害地影响LDLR。B计数的降低有可能指示抑制的假阳性。
AlexaFRET标准TR-FRET
PCSK9 Alexa FRET标准测定对PCSK9与AlexaFluor647(AF)标记的环肽(试剂A(KD＝83nM))之间的相互作用进行测量。在50mM HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、5mM CaCl2、0.01％BSA和0.01％表面活性剂P20中制得含有1nM生物素标记的PCSK9+2.5nM Lance链霉亲和素铕(Strep-Eu)的溶液。在相同缓冲系统中制得含有40nM AlexaFluor标记的环肽的单独的溶液。Echo用于将0.750ul的化合物转移至测定板，随后添加15ul的PCSK9+Stept-Eu和15ul的AF肽。最终测定体积为30.750ul，其含有0.5nM PCSK9、1.25nM Strep-Eu和20nMAF环肽。在室温下将反应培育至少两小时，然后使用Envision Multilabel读取器进行荧光测量。通过使用非线性回归将数据拟合至S形剂量-反应曲线来测定IC50值。然后根据IC50和AF环肽的KD来计算Ki。追踪铕标记的PCSK9的计数(B计数)以观测化合物是否为有害地影响PCSK9。B计数的降低有可能指示抑制的假阳性。来自此程序的数据报道为“A＝‘数值’(纳摩尔)”
根据以下方法来制备试剂A：
Figure BDA0002846014700001291
步骤A-合成中间体化合物Int-A
在CEM Liberty Blue Microwave合成器上使用Fmoc/tBu化学方法在PS Rink-Amide MBHA树脂(0.32mmol g-1)上以0.250mmol规模合成肽。使用单偶联，使用4当量的Fmoc保护的氨基酸0.2M/DMF、4当量的0.5M HATU/DMF、4当量的2M DIPEA(Tyr的双偶联)来执行组装。使用20％(V/V)哌啶/DMF来执行Fmoc脱保护循环。
所使用的Fmoc保护的氨基酸和构建嵌段的序列为：
1.N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸
2.(S)-1((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-甲基吡咯烷-2-甲酸
3.(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-L-酪氨酸
4.N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N-三苯甲基-L-组氨酸
5.(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸
6.(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸
7.(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸
8.(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酸
9.N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸
10. 3-(三苯甲硫基)丙酸
在组装结束时，用DMF、MeOH、DCM、Et2O洗涤树脂。在室温下使用50ml的TFA溶液(v/v)(91％TFA，5％H2O，4％TIPS)自固体载体切割肽大约1.5小时。将树脂过滤，用TFA洗涤，将溶液浓缩至干燥并冻干。冻干得到中间体化合物Int.A(399mg)，其作为粗物质用于下一步骤中。C61H75F2N15O13S2的LCMS分析计算值：1328.48，实测值：1328.2(M+1)+
步骤B-合成中间体化合物Int-B：如针对试剂B所述
通过RP-HPLC(Waters Deltapak C4、双重滤筒，40×100mm，15μm，300A；15％至35％ACN/水+0.1％TFA改性剂，经20min)来纯化。将所收集级分冻干以得到35mg的中间体化合物Int-B。C69H81F2N15O13S2的LCMS分析计算值：1430.62；实测值：1430.9(M+1)+
步骤C-合成化合物试剂A：如针对试剂B所述
C105H122F2N17O26S63-的LCMS分析计算值：2268.58；1135.8(M+2)2+
Alexa FRET Plus TR-FRET
PCSK9 Alexa FRET Plus测定对PCSK9与AlexaFluor647(AF)标记的环肽(试剂B(KD＝35nM))之间的相互作用进行测量。在50mM HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、5mM CaCl2、0.01％BSA和0.01％表面活性剂P20中制得含有1nM生物素标记的PCSK9+2.5nM Lance链霉亲和素铕(Strep-Eu)的溶液。在相同缓冲系统中制得含有1920nM AlexaFluor标记的环肽的单独的溶液。Echo用于将0.075ul的化合物加0.675ul的DMSO转移至测定板的各孔，随后添加15ul的PCSK9+Stept-Eu和15ul的AF肽。最终测定体积为30.750ul，其含有0.5nMPCSK9、1.25nM Strep-Eu和960nM AF环肽。在室温下将反应培育至少两小时，然后使用Envision Multilabel读取器进行荧光测量。通过使用非线性回归将数据拟合至S形剂量-反应曲线来测定IC50值。然后根据IC50和AF环肽的KD来计算Ki。追踪铕标记的PCSK9的计数(B计数)以观测化合物是否有害地影响PCSK9。B计数的降低有可能指示抑制的假阳性。来自此程序的数据报道为“P＝‘数值’(纳摩尔)”
通过以下程序来制备试剂B。
Figure BDA0002846014700001311
Figure BDA0002846014700001321
步骤A-合成中间体化合物Int-A
在CEM Liberty Blue Microwave合成器上使用Fmoc/tBu化学方法在PS Rink-Amide MBHA树脂(0.32mmol g-1)上以0.250mmol规模合成肽。使用单偶联，使用4当量的Fmoc保护的氨基酸0.2M/DMF、4当量的1M Oxyme/DMF、4当量的0.5M N,N-二异丙基碳化二亚胺(DIC)(Y01的双偶联)来执行组装。使用20％(V/V)哌啶/DMF来执行Fmoc脱保护循环。
所使用的Fmoc保护的氨基酸和构建嵌段的序列为：
1.N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-S-三苯甲基-L-半胱氨酸
2.(S)-1((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-2-甲基吡咯烷-2-甲酸
3.(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酸
4.N-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N-三苯甲基-L-组氨酸
5.(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸
6.(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸
7.(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸
8.(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-D-丙氨酸
9.N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸
10. 3-(三苯甲硫基)丙酸
在组装结束时，用DMF、MeOH、DCM、Et2O洗涤树脂。在室温下使用50ml的TFA溶液(v/v)(91％TFA，5％H2O，4％TIPS)自固体载体切割肽约1.5小时。将树脂过滤，用TFA洗涤，将溶液浓缩至干燥并冻干。冻干得到中间体化合物Int.A(300mg)，其作为粗物质用于下一步骤中。C63H79F2N15O13S2的LCMS分析计算值：1356.53，实测值：1356.9(M+1)+
步骤B-合成中间体化合物Int-B
将粗物质Int-A(0.22mmol)再溶于24ml的DMF中。添加6ml的1M碳酸氢钠水溶液以使pH升高至7。然后滴加0.26mmol的1,3-双(溴甲基)苯(0.1M于DMF中)。在室温下在搅拌下将反应物静置20min，用TFA(pH为3-4)淬灭，然后在真空中浓缩以提供粗Int-B，通过RP-HPLC(Waters XBridge，C18，50×150mm，5μm，130A；25％至40％ACN/水+0.1％TFA改性剂，经20min)将其纯化。将所收集级分冻干以得到35mg的中间体化合物Int-B。C71H85F2N15O13S2的LCMS分析计算值：1458.67；实测值：1458.8(M+1)+
步骤C-合成化合物试剂B
将中间体化合物Int-B(15mg)溶于0.2ml的无水DMSO中。然后添加溶于1.5ml的无水DMSO中的15mg的ALEXAFLUOR 647NHS酯(A37566，Life technology)。添加20uL的无水DIPEA。在暗处在氮气氛下，在室温下在搅拌下静置反应物12h。用TFA(pH为3-4)淬灭并通过RP-HPLC(Dr Maish，Reprosil Gold C18，250×20mm，
Figure BDA0002846014700001331
10μm；20％至35％的0.1％TFA/ACN/0.1％TFA/H2O，经20min，然后以20mL/min流速进行35％至40％，经5min)来纯化。将所收集级分冻干以得到16.1mg的化合物试剂B。C107H126F2N17O26S63-的LCMS分析值：2296.64；实测值：1150.6(M+2)2+
针对本发明的所选实施例化合物按以下格式报道通过上述程序中的一个或两个所获得的活性数据：
实施例编号：A(标准TR FRET)＝‘数值’；P(Alexa Fret加标准TR FRET)＝‘数值’/，应注意，所有报导值为纳摩尔。
Alexa FRET Ultra TR-FRET
PCSK9 Alexa FRET Ultra测定对PCSK9与AlexaFluor647(AF)标记的环肽(试剂B(KD＝0.99nM))之间的相互作用进行测量。在50mM HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、5mM CaCl2、0.01％BSA和0.01％表面活性剂P20中制得含有1nM生物素标记的PCSK9+2.5nM Lance链霉亲和素铕(Strep-Eu)的溶液。在相同缓冲系统中制得含有1920nM AlexaFluor标记的环肽的单独的溶液。Echo用于将0.015ul的化合物加0.735ul的DMSO转移至测定板的各孔，随后添加15ul的PCSK9+Stept-Eu和15ul的AF肽。最终测定体积为30.750ul，其含有0.5nMPCSK9、1.25nM Strep-Eu和960nM AF环肽。在室温下将反应培育至少两小时，然后使用Envision Multilabel读取器进行荧光测量。通过使用非线性回归将数据拟合至S形剂量-反应曲线来测定IC50值。然后根据IC50和AF环肽的KD来计算Ki。追踪铕标记的PCSK9的计数(B计数)以观测化合物是否有害地影响PCSK9。B计数的降低有可能指示抑制的假阳性。来自此程序的数据报道为“Ki Ultra＝‘数值’(所报道数据为纳摩尔)”
使用上文所述的方案来评估如表2中所示的以下化合物，结果如下所示：
Ex-01 Ki Plus＝<0.00558,Ki Ultra＝0.0046/Ex-02 Ki Plus＝0.00558,KiUltra＝0.005933/Ex-03 Ki Plus＝0.02535,Ki Ultra＝0.06803/Ex-04 Ki Plus≤0.00558,Ki Ultra＝0.004711/Ex-05Ki Plus＝0.009621,Ki Ultra＝0.03296/Ex-06 KiPlus＝0.00568,Ki Ultra＝0.003424/Ex-07 Ki Plus＝0.05914,Ki Ultra＝0.06753/Ex-08 Ki Plus＝0.01574,Ki Ultra＝0.06832/Ex-09 Ki Plus＝0.09189,Ki Ultra＝0.247/Ex-10 Ki Plus＝0.005743,Ki Ultra＝0.02489/Ex-11 Ki Plus＝0.04334,Ki Ultra＝0.2067/Ex-12 Ki Plus＝0.01448,Ki Ultra＝0.02247/Ex-13 Ki Plus＝0.1454,KiUltra＝0.4772/Ex-14 Ki Plus＝0.01605,Ki Ultra＝0.02099/Ex-15 Ki Plus＝0.1027,Ki Ultra＝0.2601/Ex-16 Ki Plus＝0.01423,Ki Ultra＝0.05141/Ex-17 Ki Plus≤0.00558,Ki Ultra＝0.0028/Ex-18 Ki Plus＝0.03356,Ki Ultra＝0.1183/Ex-19 KiPlus＝0.01662,Ki Ultra＝0.01204/Ex-20 Ki Plus＝0.01303,Ki Ultra＝0.01711/Ex-21 Ki Plus＝0.005692,Ki Ultra＝0.001264/Ex-22 Ki Plus＝0.00926,Ki Ultra＝0.01519/Ex-23 Ki Plus＝0.00938,Ki Ultra＝0.00239/Ex-24 Ki Plus＝0.00812,KiUltra＝0.00767/Ex-25 Ki Plus＝0.01127,Ki Ultra＝0.00463/Ex-26Ki Plus≤0.00558,Ki Ultra＝0.002754/Ex-27 Ki Plus≤0.00558,Ki Ultra＝0.00301/Ex-28 KiPlus≤0.00558,Ki Ultra＝0.00078/Ex-29 Ki Plus＝0.00981,Ki Ultra＝0.00614/Ex-31 Ki Plus<0.00558,Ki Ultra＝0.00074/Ex-35 Ki Plus＝0.04652,Ki Ultra＝0.08434/Ex-36 Ki Plus＝0.00762,Ki Ultra＝0.00507/Ex-38Ki Plus＝0.00904,KiUltra＝0.01416/Ex-39 Ki Plus＝0.00716,Ki Ultra＝0.00414/Ex-40 Ki Plus＝0.30800,Ki Ultra＝0.86010/Ex-41 Ki Plus＝0.00697,Ki Ultra＝0.00628/Ex-44 KiPlus＝0.01445,Ki Ultra＝0.02194/Ex-47 Ki Plus＝0.01474,Ki Ultra＝0.01193/Ex-48 Ki Plus＝0.01169,Ki Ultra＝0.01545/Ex-49Ki Plus＝0.00716,Ki Ultra＝0.00414/Ex-50 Ki标准<1.26,Ki Plus＝0.01052,Ki Ultra＝0.00443/Ex-51 Ki标准<1.26,Ki Plus<0.00558,Ki Ultra＝0.00597/Ex-52 Ki标准<1.26,Ki Plus<0.00558,KiUltra＝0.00359/Ex-53 Ki标准<1.26,Ki Plus＝0.09629,Ki Ultra＝0.21500/Ex-54 Ki标准<1.26,Ki Plus＝0.36720,Ki Ultra＝0.48390/Ex-55 Ki标准<1.26,Ki Plus＝0.07240,Ki Ultra＝0.23800/Ex-56 Ki标准<1.257,Ki Plus＝0.02237,Ki Ultra＝0.00481/Ex-57 Ki标准<1.257,Ki Plus<0.00558,Ki Ultra＝0.00162/Ex-58 Ki标准<1.257,Ki Plus＝0.00773,Ki Ultra＝0.00196/Ex-59 Ki Plus＝0.00788,Ki Ultra＝0.004959/Ex-60 Ki Plus＝0.006515,Ki Ultra＝0.005312/Ex-61Ki Plus＝0.00747,KiUltra＝0.006543。

Claims (26)

1.式I的化合物：
Figure FDA0002846014690000011
其中：
X为H、F、Cl或Br；
R1选自：
(a)-H；或
(b)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为：
(i)-H；
(ii)–NH2；
(iii)-N+H3；
(iv)-N+(H3C)3；
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B，其中R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B，其中：y12和y13不均为2且独立地为2至4；且R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为-O-(CH2)3-4-N+(CH3)3；和
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为：
(ai)–O-(CH2)2-N+(CH3)3；
(aii)-N+(CH3)3；或
(aiii)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000021
R2选自：
(a)-H；和
(b)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A选自：
(i)-H；
(ii)–NH2；
(iii)-N+H3；
(iv)-N+(H3C)3；
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B，其中R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B，其中：y12和y13不均为2且独立地为2至4；且R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为-O-(CH2)3-4-N+(CH3)3；和
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为：
(ai)–O-(CH2)2-N+(CH3)3；
(aii)-N+(CH3)2R14ca，其中R14ca为–CH3或–(CH2)1-4-OCH3；
(aiii)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000022
或
(aiv)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000031
其中R14Cb和R14Cc为1至4；或
R1与R2可结合在一起以形成下式的部分：
Figure FDA0002846014690000032
其中G1、RG1a和RG1b定义如下：
(a)G1为下式的接头部分：
Figure FDA0002846014690000033
其中nq1为1至6，mq1为0、1或2，且同时选择nq1和mq1的值以使得它们所限定的接头部分的长度不超出总共8个碳原子和/或氧原子，其包含包括在形成羰基部分的链中的碳原子的链；
RG1a选自：(i)-H；和(ii)至多4个碳原子的烷基；且
RG1b选自：
(i)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000034
和
(ii)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000035
或
(b)G1为下式的接头部分：
Figure FDA0002846014690000036
其中nq2为0、1或2，mq2为1至6，且同时选择nq2和mq2的值以使得它们所限定的接头部分的长度不超出总共8个碳原子和/或氧原子，其包含包括在形成羰基部分的链中的碳原子的链；
RG1a选自：
(i)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000041
和
(ii)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000042
且
RG1b选自：(i)-H；和(ii)至多4个碳原子的烷基；
R8为-CH3或下式的部分：
Figure FDA0002846014690000043
其中R8a为-H，或至多四个碳原子的直链、支链或环状烷基；
A选自：
(a)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000044
(b)-CH2-(CH2)y-CH2-，其中y为1至6；
(c)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000045
其中Ab1为：
(i)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000046
其中x为1至6；或
(ii)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000051
其中y为1至5；
(d)下式的部分：-CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-，其中m＝1至5，且n＝0或1至4；
B为：
(a)键；
(b)–(CH2)1-2-；或
(c)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000052
D为：
(a)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000053
其中E为-CH2-或-(CH2)2-4-O-，且A和B如上所定义；
(b)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000054
其中A和B如上所定义；
(c)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000055
其中na为1、2或3，ma为2、3或4，且na+ma为≥3，且其中A和B如上所定义；
(d)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000061
其中，R34b为-H或至多四个碳原子的直链、支链或环状烷基，且A和B如上所定义，
或任何其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1的式I的化合物，其中X为F，或任何其药学上可接受的盐。
3.权利要求2的化合物，其中D为下式的部分：
Figure FDA0002846014690000062
其中，E为-CH2-或–(CH2)2-O-，或其药学上可接受的盐。
4.权利要求2的化合物，其中D为下式的部分：
Figure FDA0002846014690000063
其中，E为-CH2-或–(CH2)2-O-，或其药学上可接受的盐。
5.权利要求2的化合物，其中D为下式的部分：
Figure FDA0002846014690000064
或其药学上可接受的盐。
6.权利要求2的化合物，其中D为下式的部分：
Figure FDA0002846014690000071
或其药学上可接受的盐。
7.权利要求2的化合物，其中D为下式的部分：
Figure FDA0002846014690000072
或其药学上可接受的盐。
8.权利要求2的化合物，其中D为下式的部分：
Figure FDA0002846014690000073
或其药学上可接受的盐。
9.权利要求2的化合物，其中D为下式的部分：
Figure FDA0002846014690000074
或其药学上可接受的盐。
10.权利要求2的化合物，其中D为下式的部分：
Figure FDA0002846014690000075
或其药学上可接受的盐。
11.权利要求2的化合物，其中R1和R2经下式的部分连接在一起：
Figure FDA0002846014690000081
以使得其连同R1和R2所附接的环肽一起形成非环状结构，或其药学上可接受的盐。
12.权利要求2的化合物，其具有式IIB结构，或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002846014690000082
B1为–((CH2)0-2)-；且
D1为：
(a)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000083
(b)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000091
或
(c)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000092
13.权利要求2的化合物，其具有式IIC结构，或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002846014690000093
其中
D2为：
(a)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000094
(b)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000101
(c)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000102
或
(d)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000103
14.权利要求2的化合物，其具有式IID结构，或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002846014690000104
15.权利要求2的化合物，其具有式IIE结构，或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002846014690000111
16.权利要求2的化合物，其具有式IIF结构，或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002846014690000112
17.权利要求1至16中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中A为：
(a)–(CH2)6；
(b)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000121
其中x为1至3；或
(c)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000122
18.权利要求1至17中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2为：
(a)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为：
(a)-H；
(b)–CH3；
(c)–NH2；
(d)-N+H3；
(e)-N+(H3C)3；
(f)-NH-C(O)-[(CH2)2-4-O-]2-4-(CH2)2-4R14B，其中R14B为：-NH2；-N+H3；-N(CH3)2；或-N+(CH3)3；
(g)-NH-C(O)-[(CH2)yR14C，其中，y＝1至6且R14C为：
(ai)–O-(CH2)2-4-N+(CH3)3；
(aii)-N+(CH3)3；或
(aiii)下式的部分：
Figure FDA0002846014690000123
或
(b)下式的部分
Figure FDA0002846014690000131
19.权利要求1至18中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自：
(a)-H；
(b)-(CH2)z-R14A，其中：z为1-6，且R14A为：
(i)-H；
(ii)-N+H3；或
(iii)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N+(CH3)3。
20.权利要求1至19中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中R8为下式的部分：
Figure FDA0002846014690000132
其中R8b为–H、-CH3或–C(CH3)3。
21.权利要求1的化合物，其选自以下：
Figure FDA0002846014690000133
Figure FDA0002846014690000141
Figure FDA0002846014690000151
Figure FDA0002846014690000161
Figure FDA0002846014690000171
Figure FDA0002846014690000181
Figure FDA0002846014690000191
Figure FDA0002846014690000201
或其任何药学上可接受的盐形式。
22.一种组合物，其包含权利要求1至21中任一项的至少一种化合物，或其药学上可接受的盐或其游离碱形式，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
23.一种治疗高胆固醇血症的方法，其包括向有此需要的患者施用治疗有效量的权利要求22的组合物。
24.一种治疗高胆固醇血症的方法，其包括向有此需要的患者施用治疗有效量的权利要求1至21中任一项的化合物。
25.根据权利要求1至21中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗中。
26.根据权利要求1至21中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗高胆固醇血症。
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100558932B1 (ko) * 2005-04-21 2006-03-10 주식회사 엠제이스마트 테크놀러지 다공성 세라믹 분리막 제조방법과, 이에 의해 제조되어진 다공성 세라믹 분리막
ES2901704T3 (es) 2013-03-15 2022-03-23 Protagonist Therapeutics Inc Análogos de hepcidina y usos de los mismos
EP3143037B1 (en) 2014-05-16 2021-06-23 Protagonist Therapeutics, Inc. Alpha4beta7 integrin thioether peptide antagonists
US9624268B2 (en) 2014-07-17 2017-04-18 Protagonist Therapeutics, Inc. Oral peptide inhibitors of interleukin-23 receptor and their use to treat inflammatory bowel diseases
CA3089868A1 (en) 2018-02-08 2019-08-15 Protagonist Therapeutics, Inc. Conjugated hepcidin mimetics
EP3810178A4 (en) 2018-06-21 2022-05-04 Merck Sharp & Dohme Corp. CYCLIC POLYPEPTIDES TO INHIBIT PCSK9
JOP20190150A1 (ar) * 2018-06-21 2019-12-21 Merck Sharp & Dohme مركبات مناهضة لـ pcsk9
US11306125B2 (en) 2018-06-21 2022-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. PCSK9 antagonists bicyclo-compounds
WO2019246405A1 (en) 2018-06-21 2019-12-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Cyclic polypeptides for pcsk9 inhibition
EP3810177A4 (en) 2018-06-21 2022-05-11 RA Pharmaceuticals, Inc. CYCLIC PEPTIDES FOR PCSK9 INHIBITION
WO2019246386A1 (en) 2018-06-21 2019-12-26 Ra Pharmaceuticals Inc. Cyclic polypeptides for pcsk9 inhibition
WO2021041770A1 (en) * 2019-08-30 2021-03-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Pcsk9 antagonist compounds
EP4076492A4 (en) * 2019-12-20 2024-01-17 Merck Sharp & Dohme Llc PCSK9 ANTAGONIST COMPOUNDS
EP4090670A1 (en) 2020-01-15 2022-11-23 Janssen Biotech, Inc. Peptide inhibitors of interleukin-23 receptor and their use to treat inflammatory diseases
US11939361B2 (en) 2020-11-20 2024-03-26 Janssen Pharmaceutica Nv Compositions of peptide inhibitors of Interleukin-23 receptor
US11932705B2 (en) 2020-12-18 2024-03-19 Merck Sharp & Dohme Llc Cyclic polypeptides for PCSK9 inhibition
AU2022330007A1 (en) 2021-08-19 2024-02-15 Merck Sharp & Dohme Llc Compounds for treating conditions related to pcsk9 activity
TW202404574A (zh) 2022-06-15 2024-02-01 美商默沙東有限責任公司 用於捕捉介白素-1 β之環狀肽

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107158002A (zh) * 2017-07-01 2017-09-15 维亚生物科技(上海)有限公司 苄撑巴比妥类化合物在作为pcsk9拮抗剂和降低低密度脂蛋白中的应用

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4393046A (en) 1981-01-30 1983-07-12 Merck & Co., Inc. Combination of thiopeptin and other related sulfur-containing cyclic polypeptide antibiotics with rumen-active diimides to improve ruminant feed efficiency
DE3841520A1 (de) 1988-12-09 1990-06-13 Hoechst Ag Enzymhemmende harnstoffderivate von dipeptiden, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende mittel und ihre verwendung
US5104869A (en) 1989-10-11 1992-04-14 American Cyanamid Company Renin inhibitors
US5114937A (en) 1989-11-28 1992-05-19 Warner-Lambert Company Renin inhibiting nonpeptides
US5095119A (en) 1990-03-08 1992-03-10 American Home Products Corporation Renin inhibitors
ATE253073T1 (de) 1997-03-07 2003-11-15 Metabasis Therapeutics Inc Neue benzimidazol inhibitoren der fructose-1,6- bisphosphatase
AU6691798A (en) 1997-03-07 1998-09-22 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel indole and azaindole inhibitors of fructose-1,6-bisphosphatase
AU6452098A (en) 1997-03-07 1998-09-22 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel purine inhibitors of fructose-1,6-bisphosphatase
SK286080B6 (sk) 1998-09-09 2008-03-05 Metabasis Therapeutics, Inc. Heterocyklické aromatické zlúčeniny obsahujúce fosfonátovú skupinu, ich použitie a farmaceutická kompozícia obsahujúca uvedené zlúčeniny
EP1305285B1 (en) 2000-07-25 2007-05-16 Merck & Co., Inc. N-substituted indoles useful in the treatment of diabetes
JP4181408B2 (ja) 2001-01-30 2008-11-12 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド 肥満、糖尿病及び脂質異常を治療するためのアシルスルファミド類
AR040241A1 (es) 2002-06-10 2005-03-23 Merck & Co Inc Inhibidores de la 11-beta-hidroxiesteroide deshidrogrenasa 1 para el tratamiento de la diabetes obesidad y dislipidemia
WO2004020408A1 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Merck & Co., Inc. Indoles having anti-diabetic activity
US7393960B2 (en) 2002-08-29 2008-07-01 Merck & Co., Inc. Indoles having anti-diabetic activity
AU2004207444B2 (en) 2003-01-17 2008-07-31 Merck & Co., Inc. N-cyclohexylaminocarbonyl benzenesulfonamide derivatives
CN101636179B (zh) 2006-11-07 2012-10-10 默沙东公司 Pcsk9拮抗剂
EP2170883A1 (en) 2007-06-28 2010-04-07 Merck Frosst Canada Ltd. Substituted fused pyrimidines as antagonists of gpr105 activity
KR101404781B1 (ko) 2007-06-28 2014-06-12 가부시키가이샤 한도오따이 에네루기 켄큐쇼 반도체 장치의 제조 방법
WO2009042053A2 (en) 2007-09-21 2009-04-02 Merck & Co., Inc. Neuromedin u receptor agonists and uses thereof
UY32690A (es) 2009-06-08 2011-01-31 Astrazeneca Ab Péptidos específicos para receptores de melanocortina
WO2011037791A1 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Antagonists of pcsk9
US20140113874A1 (en) 2010-09-23 2014-04-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modified Compstatin With Improved Stability And Binding Properties
KR101510975B1 (ko) 2010-12-28 2015-04-10 카딜라 핼쓰캐어 리미티드 이상지질혈증의 치료에 적절한 헤테로시클릭 화합물
CA2837658A1 (en) 2011-06-20 2012-12-27 Genentech, Inc. Pcsk9-binding polypeptides and methods of use
UA119028C2 (uk) 2011-10-27 2019-04-25 Массачусеттс Інстітьют Оф Текнолоджі Функціоналізовані на n-кінці амінокислотні похідні, здатні утворювати мікросфери, що інкапсулюють лікарський засіб
EP2814501A4 (en) 2012-03-13 2016-03-02 Tensive Controls Inc MELANOCORTINANALOGA WITH INCREASED EFFECTIVENESS AND TRANSPORTATION OF THEREOF
US9238676B2 (en) 2012-05-17 2016-01-19 Ra Pharmaceuticals, Inc. Peptide and peptidomimetic inhibitors
RU2015142437A (ru) 2013-03-14 2017-04-27 Дайити Санкио Ко., Лтд Новые связывающие белки для pcsk9
JP2016512825A (ja) 2013-03-15 2016-05-09 シファ・バイオメディカル・コーポレイションＳｈｉｆａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 抗プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（抗ｐｃｓｋ９）化合物および心血管疾患の治療および／または予防におけるその使用方法
US10557129B2 (en) 2015-01-30 2020-02-11 Pronasci Inc. Peptides derived from human PCSK9 catalytic domain and uses thereof for promoting LDL-R activity
EP3442991A4 (en) 2016-04-15 2019-11-20 RA Pharmaceuticals, Inc. RAS-BINDING PEPTIDES AND METHODS OF USE
WO2017220701A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods for treating cardiovascular disease
WO2018053517A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 The Texas A&M University System Inhibitors of ldlr-pcsk9 protein-protein interaction and methods of their use
EP3810178A4 (en) 2018-06-21 2022-05-04 Merck Sharp & Dohme Corp. CYCLIC POLYPEPTIDES TO INHIBIT PCSK9
US11306125B2 (en) 2018-06-21 2022-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. PCSK9 antagonists bicyclo-compounds
WO2019246386A1 (en) 2018-06-21 2019-12-26 Ra Pharmaceuticals Inc. Cyclic polypeptides for pcsk9 inhibition
WO2019246405A1 (en) 2018-06-21 2019-12-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Cyclic polypeptides for pcsk9 inhibition
EP3810177A4 (en) 2018-06-21 2022-05-11 RA Pharmaceuticals, Inc. CYCLIC PEPTIDES FOR PCSK9 INHIBITION
JOP20190150A1 (ar) 2018-06-21 2019-12-21 Merck Sharp & Dohme مركبات مناهضة لـ pcsk9
WO2021041770A1 (en) 2019-08-30 2021-03-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Pcsk9 antagonist compounds

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107158002A (zh) * 2017-07-01 2017-09-15 维亚生物科技(上海)有限公司 苄撑巴比妥类化合物在作为pcsk9拮抗剂和降低低密度脂蛋白中的应用

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US11427616B2 (en) 2022-08-30
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JP7112531B2 (ja) 2022-08-03
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CA3102629A1 (en) 2019-12-26
EP3810626A1 (en) 2021-04-28

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