KR20210024035A - Pcsk9 길항제 화합물 - Google Patents

Pcsk9 길항제 화합물 Download PDF

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KR20210024035A
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토마스 조셉 터커
안젤라 다운 케레케스
링 통
아바스 엠. 월지
아닐쿠마르 지. 네어
파-시앙 딩
엘리사베타 비안키
다닐라 브란카
쳉웨이 우
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Abstract

PCSK9를 길항하는 특성을 갖는 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 개시되며, 여기서 A, B, D, X, R1, R2 및 R8은 본원에 정의된 바와 같다. 또한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 포함하는 제약 제제, 및 PCSK9 활성과 관련된 심혈관 질환 및 병태, 예를 들어 아테롬성동맥경화증, 고콜레스테롤혈증, 관상동맥 심장 질환, 대사 증후군, 급성 관상동맥 증후군 또는 관련 심혈관 질환 및 심혈관대사 병태를 치료하는 방법이 기재된다.

Description

PCSK9 길항제 화합물
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 6월 21일에 출원된 미국 출원 번호 62/687,913을 우선권 주장하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
심혈관 질환의 치료에 효과적인 화합물 및/또는 작용제의 확인이 매우 요구된다. 임상 시험에서, LDL 콜레스테롤 수준의 감소는 관상동맥 사건의 비율과 직접 관련되었다 (Law et al., 2003 BMJ 326:1423-1427). 혈장 LDL 콜레스테롤 수준의 일생 중간 정도의 감소는 관상동맥 사건의 발생률의 실질적인 감소와 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌다 (Cohen et al., 2006 N. Engl. J. Med. 354:1264-1272). 이는 비-지질-관련 심혈관 위험 인자의 높은 유병률을 갖는 집단에서도 그러하였다 (상기 문헌). 따라서, LDL 콜레스테롤 수준의 관리된 제어로부터 거둘 이익은 크다.
신경 아폽토시스-조절 컨버타제 1 ("NARC-1")로도 공지된 전구단백질 컨버타제 서브틸리신-켁신 유형 9 (이하에서 "PCSK9"로 불림)는 분비 서브틸라제 패밀리의 제9 구성원으로서 확인된 프로테이나제 K-유사 서브틸라제이다 (문헌 [Seidah et al., 2003 PNAS 100:928-933] 참조). PCSK9는 세린 프로테아제의 포유동물 전구단백질 컨버타제 패밀리에 속하고, N-말단 신호 서열, 프로도메인, 촉매 도메인 및 C-말단 도메인을 함유한다 (문헌 [Seidah et al., 2012 Nat. Rev. Drug Discov. 11:367-383] 참조). PCSK9 전사 조절의 연구는 그것이 지단백질 대사에 연루되는 다른 유전자에 전형적인 것처럼 (Dubuc et al., 2004 Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:1454-1459), 콜레스테롤 대사에 수반되는 다른 유전자에서 관찰된 바와 같이 (Maxwell et al., 2003 J. Lipid Res. 44:2109-2119), 스테롤 조절 요소-결합 단백질 ("SREBP")에 의해 조절된다는 것을 입증하였다. 스타틴은 약물의 콜레스테롤-강하 효과에 기인하는 방식으로 PCSK9 발현을 상향조절하는 것으로 밝혀졌다 (상기 문헌). 더욱이, PCSK9 프로모터는 콜레스테롤 조절에 수반되는 2개의 보존된 부위, 스테롤 조절 요소 및 Sp1 부위를 보유하는 것으로 밝혀졌다 (상기 문헌).
내형질 세망에서 PCSK9는 그의 유일한 촉매 활성으로서 잔기 Gln-152와 Ser-153 사이의 자가절단을 수행한다 (문헌 [Naureckiene et al., 2003 Arch. Biochem. Biophys. 420:55-67; Seidah et al., 2003 Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100:928-933] 참조). 프로도메인은 트랜스-골지망을 통한 후속 트래픽킹 동안 촉매 도메인과 긴밀하게 회합된 채로 유지된다. 자가절단을 통한 성숙은 PCSK9 분비 및 후속 세포외 기능에 중요한 것으로 입증되었다 (문헌 [Benjannet et al., 2012 J. Biol. Chem. 287:33745-33755] 참조). 따라서, 여러 계열의 증거는 PCSK9가 특히 간 LDLR 단백질의 양을 낮추어 이에 따라 순환으로부터 LDL 콜레스테롤을 제거하는 간의 능력을 손상시킨다는 것을 입증한다.
마우스의 간에서 PCSK9의 아데노바이러스-매개 과다발현은 LDLR mRNA 수준에 대한 영향 없이 간 LDLR 단백질의 극적인 손실로 인해 순환 LDL-C의 축적을 유발한다 (문헌 [Benjannet et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:48865-48875; Maxwell & Breslow, 2004 PNAS 101:7100-7105; Park et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:50630-50638; 및 Lalanne et al., 2005 J. Lipid Res. 46:1312-1319] 참조). 마우스에서 상승하는 순환 LDL-C 수준에 대한 PCSK9 과다발현의 영향은 LDLR의 발현에 완전히 의존적이며, 이는 다시, PCSK9에 의한 LDL-C의 조절이 LDLR 단백질의 하향조절을 통해 매개된다는 것을 나타낸다. 이들 발견과 일치하게, PCSK9가 결여되거나 PCSK9 mRNA가 안티센스 올리고뉴클레오티드 억제제에 의해 저하된 마우스는 보다 높은 수준의 간 LDLR 단백질 및 보다 큰 순환 LDL-C 제거 능력을 갖는다 (Rashid et al., 2005 PNAS 102:5374-5379; 및 Graham et al., 2007 J. Lipid Res. 48(4):763-767). 추가로, 배양된 인간 간세포에서 siRNA에 의해 PCSK9 수준을 저하시키는 것은 보다 높은 LDLR 단백질 수준 및 증가된 LDL-C 흡수 능력을 유발한다 (Benjannet et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:48865-48875; 및 Lalanne et al., 2005 J. Lipid Res. 46:1312-1319). 종합하면, 이들 데이터는 PCSK9 작용이 LDLR 단백질 수준을 저하시킴으로써 LDL-C 증가를 유도한다는 것을 나타낸다.
유전자 PCSK9 내의 다수의 돌연변이는 또한 조기 심혈관 부전을 야기할 수 있는 혈장 내의 저밀도 지단백질 ("LDL") 입자의 현저한 상승을 특징으로 하는 유전성 대사 장애인 상염색체 우성 고콜레스테롤혈증 ("ADH")과 결정적으로 연관되었다 (문헌 [Abifadel et al., 2003 Nature Genetics 34:154-156; Timms et al., 2004 Hum. Genet. 114:349-353; Leren, 2004 Clin. Genet. 65:419-422] 참조). 상기 문헌 [Abifadel et al.]의 S127R 돌연변이에 대한 더 나중에 공개된 연구는 이러한 돌연변이를 보유하는 환자가 (1) apoB100-함유 지단백질, 예컨대 저밀도 지단백질 ("LDL"), 초저밀도 지단백질 ("VLDL") 및 중간 밀도 지단백질 ("IDL")의 과다생산 및 (2) 연관된 상기 지단백질의 클리어런스 또는 전환의 감소에 기인하는 혈장 내의 보다 높은 총 콜레스테롤 및 apoB100을 나타냈다는 것을 보고하였다 (Ouguerram et al., 2004 Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:1448-1453).
따라서, PCSK9가 LDL의 조절에 소정의 역할을 한다는 것에 의심의 여지가 없다. PCSK9의 발현 또는 상향조절은 증가된 LDL 콜레스테롤 혈장 수준과 연관되고, 상응하는 PCSK9의 발현 결여 또는 억제는 감소된 LDL 콜레스테롤 혈장 수준과 연관된다. PCSK9 내의 서열 변이와 연관된 LDL 콜레스테롤의 감소된 수준은 관상동맥 심장 질환에 대한 보호를 부여하는 것으로 밝혀졌다 (Cohen, 2006 N. Engl. J. Med. 354:1264-1272).
따라서, LDL 조절에서 PCSK9 역할의 길항작용을 비롯하여 심혈관 질환의 치료에 효과적인 화합물 및/또는 작용제의 확인이 매우 요구되지만, 그러나 일반적으로 PCSK9는 혈액에서 순환하고 세포 표면 LDL 수용체에 대한 보통의 결합 친화도를 갖기 때문에, 높은 혈청 LDL 수준과 관련된 질환의 치료에서 이 메카니즘을 이용하려는 지금까지의 시도는 큰 생체분자, 예를 들어 항체의 사용에 집중되어 왔다. 따라서, PCSK9를 억제하는 작은 펩티드 또는 작은 분자를 사용하여 이러한 표적에 대해 활성을 반영하는 공개문헌은 거의 없다 (예를 들어, 문헌 [Zhang et al., 2014 J. Biol. Chemistry, 289(2): 942-955] 참조). 더욱이, PCSK9의 활성의 조절이 소정의 역할을 할 수 있는 병태를 위한 요법을 제공하는데 매우 바람직할 경로인, 화합물 투여의 경구 투여 경로를 이용하기 위한 투여 형태로 제제화될 수 있는 화합물은 부족하다.
본 발명은 PCSK9 길항제의 투여가 요법을 제공하는 다양한 병태에서 PCSK9의 활성 및 PCSK9가 수행하는 상응하는 역할을 억제하기 위해 사용되는 것으로 여겨지는 PCSK9의 길항제를 제공함으로써 이들 관심을 진전시킨다.
한 측면에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00001
여기서
X는 H, F, Cl 또는 Br이고;
R1은 하기로부터 선택되고:
(a) -H; 또는
(b) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기임:
(i) -H;
(ii) -NH2;
(iii) -N+H3;
(iv) -N+(H3C)3;
(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B, 여기서 R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B, 여기서 y12 및 y13은 둘 다 2는 아니고, 독립적으로 2 내지 4이고; R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 -O-(CH2)za-N+(CH3)3이고, 여기서 za는 3 또는 4임; 및
(viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 하기임;
(ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii) -N+(CH3)3; 또는
(aiii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00002
;
R2는 하기로부터 선택되거나:
(a) -H; 및
(b) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기로부터 선택됨:
(i) -H;
(ii) -NH2;
(iii) -N+H3;
(iv) -N+(H3C)3;
(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B, 여기서 R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B, 여기서 y12 및 y13은 둘 다 2는 아니고, 독립적으로 2 내지 4이고; R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 -O-(CH2)zb-N+(CH3)3이고, 여기서 zb는 3 또는 4임; 및
(viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 하기임;
(ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii) -N+(CH3)2R14ca, 여기서 R14ca는 -CH3 또는 -(CH2)1-4-OCH3임;
(aiii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00003
; 또는
(aiv) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00004
여기서 R14Cb 및 R14Cc는 1 내지 4임; 또는
R1 및 R2는 함께 결합되어 하기 화학식의 모이어티를 형성할 수 있고:
Figure pct00005
, 여기서
G1, RG1a 및 RG1b는 하기와 같이 정의됨:
(a) G1은 하기 화학식의 링커 모이어티임:
Figure pct00006
여기서 nq1은 1 내지 6이고, mq1은 0, 1 또는 2이고, nq1 및 mq1의 값은 함께, 이들이 정의하는 링커 모이어티의 길이가 카르보닐 모이어티를 형성하는 쇄 내 탄소 원자를 포함하여 쇄를 구성하는 탄소 및/또는 산소 원자 총 8개를 초과하지 않도록 선택됨;
RG1a는 (i) -H; 및 (ii) 4개 이하의 탄소 원자의 알킬로부터 선택됨;
RG1b는 하기로부터 선택됨:
(i) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00007
; 및
(ii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00008
; 또는
(b) G1은 하기 화학식의 링커 모이어티임:
Figure pct00009
여기서 nq2는 0, 1 또는 2이고, mq2는 1 내지 6이고, nq2 및 mq2의 값은 함께, 이들이 정의하는 링커 모이어티의 길이가 카르보닐 모이어티를 형성하는 쇄 내 탄소 원자를 포함하여 쇄를 구성하는 탄소 및/또는 산소 원자 총 8개를 초과하지 않도록 선택됨;
RG1a는 하기로부터 선택됨:
(i) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00010
; 및
(ii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00011
; 및
RG1b는 (i) -H; 및 (ii) 4개 이하의 탄소 원자의 알킬로부터 선택됨;
R8은 -CH3 또는 하기 화학식의 모이어티이고:
Figure pct00012
여기서 R8a는 -H 또는 4개 이하의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 알킬이고;
A는 하기로부터 선택되고:
(a) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00013
;
(b) -CH2-(CH2)y-CH2-, 여기서 y는 1 내지 6임;
(c) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00014
, 여기서 Ab1은 하기임:
(i) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00015
여기서 x는 1 내지 6임; 또는
(ii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00016
여기서 y는 1 내지 5임;
(d) 화학식: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-의 모이어티, 여기서 m = 1 내지 5이고, n= 0 또는 1 내지 4임;
B는 하기이고:
(a) 결합;
(b) -(CH2)1-4; 또는
(c) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00017
;
D는 하기이다:
(a) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00018
여기서 E는 -CH2- 또는 -(CH2)2-4-O-이고, A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
(b) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00019
여기서 A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
(c) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00020
여기서 na는 1, 2 또는 3이고, ma는 2, 3 또는 4이고, na + ma는 ≥3이고, 여기서 A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
(d) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00021
여기서 R34b는 -H 또는 4개 이하의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 알킬이고, A 및 B는 상기 정의된 바와 같음.
추가 실시양태에서, 본 발명은 X가 F인 화학식 I의 화합물 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 일부 실시양태에서, D는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00022
여기서 E는 -CH2- 또는 -(CH2)2-O-이고, A 및 B는 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, D는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00023
여기서 E는 -CH2- 또는 -(CH2)2-O-이고, A 및 B는 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서 D는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00024
여기서 A 및 B는 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, D는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00025
여기서 A 및 B는 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, D는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00026
여기서 A 및 B는 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, D는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00027
여기서 A 및 B는 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, D는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00028
여기서 A 및 B는 본원에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, D는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00029
여기서 A 및 B는 본원에 정의된 바와 같다.
R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 펩티드 고리와 함께 연결되어 시클릭 구조를 형성하는 일부 실시양태에서, R1 및 R2는 하기 구조의 모이어티를 형성하는 것이 바람직하다:
Figure pct00030
한 실시양태에서 본 발명은 본 발명의 화합물, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 적어도 1종의 제약 부형제를 포함하는 제약 조성물, 바람직하게는 경구 투여에 관한 조성물을 제공한다.
한 측면에서 본 발명은 PCSK9 활성과 관련된 질환 상태, 예를 들어 아테롬성동맥경화증, 고콜레스테롤혈증, 관상동맥 심장 질환, 대사 증후군, 급성 관상동맥 증후군 또는 관련 심혈관 질환 및 심혈관대사 병태에 대한 요법의 제공에서 PCSK9를 길항하는 방법을 제공하며, 이는 그를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을, 바람직하게는 제약 조성물의 형태로 투여함으로써 이루어진다.
이어지는 설명에서, 통상적인 구조적 표현이 사용되고, 이는 특정 비대칭 탄소 중심에 대한 통상적인 입체화학적 표기를 포함한다.
따라서, 본 발명의 화합물의 구조식은 실시예 화합물에 제시된 일부 비대칭 탄소 중심에 대한 통상적인 입체화학적 표기를 포함한다. 따라서, 이러한 경우에, 진한 흑색의 "쐐기형 실선" 결합은 재현 매체의 평면으로부터 돌출된 결합을 나타내고, "해시형 쐐기형 실선" 결합은 재현 매체의 평면 안으로 내려가는 결합을 나타내고, 이중 결합을 보유하는 탄소에 부가된 "파상"선은 가능한 시스 및 트랜스 배향 둘 다가 포함된다는 것을 나타낸다. 통상적인 바와 같이, 평면 실선은 도시된 결합에 대한 모든 공간적 배위를 나타낸다. 따라서, 특정 입체화학적 표기가 제공되지 않는 경우, 표현은 구조적 특색의 모든 입체화학적 및 공간적 배향을 고려한다.
본 발명의 실시예에 제시되고 상기 언급된 바와 같이, 특정한 비대칭 탄소 중심은 통상적인 "쐐기형 실선" 및 "해시형 쐐기형 실선" 결합 표시를 사용하여 구조적으로 표현된다. 대부분의 경우, 실시예 화합물에 대해 절대 배위는 결정되지 않았지만, 동일한 또는 유사한 반응 조건 및 출발 시약을 사용하여 제조되고 동일한 크로마토그래피 조건 하에 단리된 기지의 입체화학적 배위 (X선 결정학에 의해 결정됨)를 갖는 특정 실시예 화합물과 유사하게 할당되었다. 따라서, 본원에 구조적으로 나타내어진 배위의 특정 할당은 제조된 특정 화합물이 과량의 1종의 특정한 입체이성질체를 갖는 것을 확인하기 위해 의도되며, 제시된 데이터에서 달리 나타내지 않는 한 반드시 상기 화합물의 입체화학적 구조의 절대 결정을 언급한 것으로 제시되는 것은 아니다.
이성질체 혼합물이 수득되는 경우에, 유의한 백분율의 거울상이성질체 과잉률의 개별 입체이성질체의 제조는, 원하는 경우에, 통상의 방법을 사용하는 혼합물의 분리에 의해, 예를 들어 크로마토그래피 또는 결정화에 의해, 또는 기재된 합성을 위한 입체화학적으로 균일한 출발 물질의 사용에 의해, 또는 입체선택적 합성에 의해 수행될 수 있는 것으로 인지될 것이다. 임의로, 유도체화는 입체이성질체의 분리 전에 수행될 수 있다. 입체이성질체의 혼합물의 분리는 화학식 I의 화합물의 합성 동안 중간 단계에서 수행될 수 있거나 또는 최종 라세미 생성물에 대해 수행될 수 있다.
본원에 나타낸 경우에, 절대 입체화학은, 필요한 경우에, 기지의 배위의 입체생성 중심을 함유하는 시약을 사용하여 유도체화된 결정질 생성물 또는 결정질 중간체의 X선 결정학에 의해 결정된다. 이러한 라세미체, 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체의 특정한 이성질체, 염, 용매화물 (수화물 포함) 또는 용매화된 염이 나타내어지지 않는 한, 본 발명은 모든 이러한 이성질체, 뿐만 아니라 이러한 라세미체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체의 염, 용매화물 (수화물 포함) 및 용매화된 염 및 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 동위원소-표지된 화합물을 포괄하며, 이는 그 화합물의 형태에서 통계적으로 유의한 백분율의 1개 이상의 원자가 자연에서 통상적으로 발견되는 가장 풍부한 동위원소의 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체됨으로써 본 발명의 화합물에 존재하는 상기 동위원소의 자연 발생 존재비가 변경된다는 사실만 제외하면, 본원에 언급된 것과 구조적으로 동일한 것이다. 본 발명은 화학식 I의 화합물의 모든 적합한 동위원소 변형을 포함하는 것으로 의도된다.
본 발명의 화합물 내로 우선적으로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 아이오딘, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예를 들어, 비제한적으로: 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 및 36Cl, 123I 및 125I를 포함한다. 다른 동위원소 또한 공지된 수단에 의해 혼입될 수 있는 것으로 인지될 것이다.
특히, 본 발명의 특정 동위원소-표지된 화합물 (예를 들어, 3H, 11C 및 14C로 표지된 화합물)은 다양한 공지된 기술을 사용하여 화합물 및/또는 기질 조직 분포 검정에서 특히 유용한 것으로 인식된다. 추가적으로, 본 발명의 화합물은 수소 (H)의 상이한 동위원소 형태, 예컨대 경수소 (1H) 및 중수소 (2H 또는 D)를 포함하는 동위원소 치환을 고려한다. 경수소는 자연에서 발견되는 우세한 수소 동위원소이다. 중수소의 농축은 특정 치료 이점, 예컨대 생체내 반감기 증가 또는 투여량 요건 감소를 제공할 수 있거나 또는 생물학적 샘플의 특징화를 위한 표준으로서 유용한 화합물을 제공할 수 있다. 화학식 I에 속하는 동위원소-농축된 화합물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 적절한 동위원소-농축된 시약 및/또는 중간체를 사용하여 본원의 반응식 및 실시예에 기재된 것과 유사한 방법에 의해 과도한 실험 없이 제조될 수 있다.
파상선이 통상적인 결합을 종결시키는 경우 (구조 내의 2개의 원자를 연결하는 것과는 대조적으로), 이는 구조에 대한 결합 지점을 나타내며, 예를 들어:
Figure pct00031
는 2급-부틸 모이어티가 파상선으로 종결된 결합을 통해 메틸렌 기를 통해 결합됨을 나타낸다. 알파벳 표기를 사용하여 치환기 모이어티를 도시하는 경우에, 파선은 표시된 기질에 대한 결합 지점을 나타내기 위해 사용되며, 예를 들어: -CH2-C(O)-CH2Cl은 아세틸 클로라이드 모이어티가 모이어티의 메틸렌 부분을 통해 결합된다는 것을 나타낸다.
임의의 가변기 (예를 들어, n, Ra, Rb 등)가 임의의 구성성분에서 또는 화학식 I에서 1회 초과로 발생하는 경우에, 각 경우에 대한 그의 정의는 정의 지점에서 달리 명시되지 않는 한 모든 다른 경우에서의 그의 정의와 독립적이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 R1, RA 등인 구조적 표현으로 정의된 다양한 치환기의 조합의 선택이 화학 구조 연결성 및 안정성의 널리 공지된 원리에 따라 선택되어야 하고, 치환기 및/또는 가변기의 조합이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 이러한 조합이 허용가능함을 인식할 것이다.
"안정한" 화합물은, 제조 및 단리될 수 있고 구조 및 특성이 본원에 기재된 목적 (예를 들어, 대상체에게의 치료적 투여)을 위한 화합물의 사용을 가능하게 하기에 충분한 기간 동안 본질적으로 변화하지 않고 남아있거나 또는 남아있게 할 수 있는 화합물이다. 본 발명의 화합물은 화학식 I에 의해 포괄되는 안정한 화합물로 제한된다.
임의의 가변기 또는 모이어티가 범위, 예를 들어 (-CH2-)1-4의 형태로 표현되는 경우에, 명시된 범위의 극한에 있는 둘 다 (즉, 이 예에서 1 및 4) 뿐만 아니라 그 사이의 모든 정수 값 (즉, 이 예에서 2 및 3)이 포함된다.
용어 "할로겐"은 사용 지점에서 달리 명시되지 않는 한 플루오린, 염소, 브로민 및 아이오딘을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "대상체" (대안적으로 "환자")는 치료를 필요로 하는 동물, 바람직하게는 포유동물, 특히 인간 또는 비-인간 동물, 예컨대 가축 및 집동물, 예컨대, 비제한적으로 소, 말, 양, 돼지, 염소, 토끼, 고양이, 개 및 다른 포유동물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 바람직하게는 인간이다. 화학식 I의 화합물과 관련하여 본원에 사용된 용어 "투여" 및 그의 변형어 (예를 들어, 화합물을 "투여하는")은 치료를 필요로 하는 대상체에게 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공하는 것을 의미한다.
상기 언급된 바와 같이, 한 측면에서 본 발명은 PCSK9 기능을 길항하는 특성을 갖는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 제공을 포함한다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 화학식 IA의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00032
여기서
R1은 하기로부터 선택되고:
(a) -H; 또는
(b) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기임:
(i) -H;
(ii) -NH2;
(iii) -N+H3;
(iv) -N+(H3C)3;
(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B, 여기서 R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]1-4-(CH2)y13R14B, 바람직하게는 -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B, 여기서 y12 및 y13은 둘 다 2는 아니고, 독립적으로 2 내지 4이고; R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 -O-(CH2)za-N+(CH3)3이고, 여기서 za는 3 또는 4임; 및
(viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 하기임;
(ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii) -N+(CH3)3; 또는
(aiii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00033
;
R2는 하기로부터 선택되거나:
(a) -H; 및
(b) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기로부터 선택됨:
(i) -H;
(ii) -NH2;
(iii) -N+H3;
(iv) -N+(H3C)3;
(v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1-4-(CH2)2R14B, 바람직하게는 -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B, 여기서 R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B, 여기서 y12 및 y13은 둘 다 2는 아니고, 독립적으로 2 내지 4이고; R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 -O-(CH2)zb-N+(CH3)3이고, 여기서 zb는 3 또는 4임; 및
(viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 하기임;
(ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii) -N+(CH3)2R14ca, 여기서 R14ca는 -CH3 또는 -(CH2)1-4-OCH3임;
(aiii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00034
; 또는
(aiv) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00035
여기서 Y14Cb 및 Y14Cc는 1 내지 4임; 또는
R1 및 R2는 함께 결합되어 하기 화학식의 모이어티를 형성할 수 있고:
Figure pct00036
여기서
G1, RG1a 및 RG1b는 하기와 같이 정의됨:
(a) G1은 하기 화학식의 링커 모이어티임:
Figure pct00037
여기서 nq1은 1 내지 6이고, mq1은 0, 1 또는 2이고, nq1 및 mq1의 값은 함께, 이들이 정의하는 링커 모이어티의 길이가 카르보닐 모이어티를 형성하는 쇄 내 탄소 원자를 포함하여 쇄를 구성하는 탄소 및/또는 산소 원자 총 8개를 초과하지 않도록 선택됨;
RG1a는 (i) -H; 및 (ii) 4개 이하의 탄소 원자의 알킬로부터 선택됨;
RG1b는 하기로부터 선택됨:
(i) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00038
; 및
(ii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00039
; 또는
(b) G1은 하기 화학식의 링커 모이어티임:
Figure pct00040
여기서 nq2는 0, 1 또는 2이고, mq2는 1 내지 6이고, nq2 및 mq2의 값은 함께, 이들이 정의하는 링커 모이어티의 길이가 카르보닐 모이어티를 형성하는 쇄 내 탄소 원자를 포함하여 쇄를 구성하는 탄소 및/또는 산소 원자 총 8개를 초과하지 않도록 선택됨;
RG1a는 하기로부터 선택됨:
(i) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00041
; 및
(ii) 화학식
Figure pct00042
의 모이어티; 및
RG1b는 (i) -H; 및 (ii) 4개 이하의 탄소 원자의 알킬로부터 선택됨;
R8은 -CH3 또는 하기 화학식의 모이어티이고:
Figure pct00043
여기서 R8a는 -H 또는 4개 이하의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 알킬이고;
A는 하기로부터 선택되고:
(a) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00044
;
(b) -CH2-(CH2)y-CH2-, 여기서 y는 1 내지 6임;
(c) 화학식
Figure pct00045
의 모이어티, 여기서 Ab1은 하기임:
(i) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00046
여기서 x는 1 내지 6임; 또는
(ii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00047
여기서 y는 1 내지 5임;
(d) 화학식: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-의 모이어티, 여기서 m = 1 내지 5이고, n= 0 또는 1 내지 4임;
B는 하기이고:
(a) 결합;
(b) -(CH2)1-4; 또는
(c) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00048
;
D는 하기이다:
(a) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00049
여기서 E는 -CH2- 또는 -(CH2)2-4-O-이고, A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
(b) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00050
여기서 A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
(c) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00051
여기서 na는 1, 2 또는 3이고, ma는 2, 3 또는 4이고, na + ma는 적어도 3이고, 여기서 A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
(d) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00052
여기서 R34b는 -H 또는 4개 이하의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 알킬이고, A 및 B는 상기 정의된 바와 같음.
화학식 IA의 화합물 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R1은 (CH2)z-R14A이고, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기이고:
(i) -H;
(ii) -NH2;
(iii) -N+H3; 또는
(iv) -N+(H3C)3;
R2는 -(CH2)z-R14A이고, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기로부터 선택됨:
(i) -H;
(ii) -NH2;
(iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1-4-(CH2)2R14B, 바람직하게는 -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B, 여기서 R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(iv) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B, 여기서 y12 및 y13은 둘 다 2는 아니고, 독립적으로 2 내지 4이고; R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(v) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 -O-(CH2)zb-N+(CH3)3이고, 여기서 zb는 3 또는 4임; 및
(vi) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 하기임:
(ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii) -N+(CH3)2R14ca, 여기서 R14ca는 -CH3 또는 -(CH2)1-4-OCH3임;
(aiii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00053
; 또는
(aiv) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00054
여기서 Y14Cb 및 Y14Cc는 1 내지 4임;
R8은 -CH3 또는 하기 화학식의 모이어티이고:
Figure pct00055
여기서 R8a는 -H 또는 4개 이하의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 알킬이고;
A는 하기로부터 선택되고:
(a) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00056
;
(b) -CH2-(CH2)y-CH2-, 여기서 y는 1 내지 6임;
(c) 화학식
Figure pct00057
의 모이어티, 여기서 Ab1은 하기임:
(i) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00058
여기서 x는 1 내지 6임; 또는
(ii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00059
여기서 y는 1 내지 5임; 및
(d) 화학식: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-의 모이어티, 여기서 m = 1 내지 5이고, n= 0 또는 1 내지 4임;
B는 하기이고:
(a) -(CH2)1-4; 또는
(b) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00060
;
D는 하기이다:
(a) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00061
여기서 E는 -CH2- 또는 -(CH2)2-4-O-이고, A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
(b) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00062
여기서 A 및 B는 상기 정의된 바와 같음; 또는
(c) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00063
여기서 R34b는 -H 또는 4개 이하의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 알킬이고, A 및 B는 상기 정의된 바와 같음.
화학식 IA의 화합물의 한 실시양태에서, D는 하기 화학식의 모이어티이고:
Figure pct00064
여기서 E는 -CH2- 또는 -(CH2)2-O-이고, A 및 B는 상기 화학식 IA에 정의된 바와 같다.
화학식 IA의 화합물의 한 실시양태에서, A는 하기이다:
(a) -(CH2)6;
(b) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00065
여기서 x는 1 내지 3임; 또는
(c) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00066
화학식 IA의 화합물의 또 다른 실시양태에서, R2는 하기이다:
(a) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기임:
(a) -H;
(b) -CH3;
(c) -NH2;
(d) -N+H3;
(e) -N+(H3C)3;
(f) -NH-C(O)-[(CH2)2-4-O-]2-4-(CH2)2-4R14B, 여기서 R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
(g) -NH-C(O)-[(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 하기임:
(ai) -O-(CH2)2-4-N+(CH3)3;
(aii) -N+(CH3)3; 또는
(aiii) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00067
; 또는
(b) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00068
화학식 IA의 화합물의 추가 실시양태에서, R1은 하기로부터 선택된다:
(a) -H;
(b) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기임:
(i) -H;
(ii) -N+H3; 또는
(iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N+(CH3)3.
화학식 IA의 화합물의 또 다른 실시양태에서, A는 -CH2-(CH2)y-CH2-이고, 여기서 y는 3-5이다. 추가 실시양태에서, A는 -(CH2)6이다.
화학식 IA의 화합물의 또 다른 실시양태에서, B는 하기 화학식의 모이어티이다:
Figure pct00069
화학식 IA의 화합물의 또 다른 실시양태에서, R1은 -(CH2)z-R14A이고, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 -H이다. 화학식 IA의 화합물의 또 다른 실시양태에서, R1은 -(CH2)z-R14A이고, 여기서 z는 1이고, R14A는 -H이다.
화학식 IA의 화합물의 또 다른 실시양태에서, R2는 -(CH2)z-R14A이고, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 -NH-C(O)-(CH2)yR14C이고, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 -N+(CH3)2R14ca이고, 여기서 R14ca는 -CH3이다.
화학식 IA의 화합물의 또 다른 실시양태에서, R8은 하기 화학식의 모이어티이고:
Figure pct00070
여기서 R8a는 -H 또는 4개 이하의 탄소 원자의 선형 알킬이다. 추가 실시양태에서, R8은 하기 화학식의 모이어티이고:
Figure pct00071
여기서 R8b는 -H, -CH3 또는 -C(CH3)3이다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 화학식 II 또는 화학식 IIA의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 것이 바람직하다:
Figure pct00072
여기서 A, R1 및 R2는 상기 화학식 IA에 정의된 바와 같고, B1은 -(CH2)0-2이고, D1은 하기로부터 선택된다:
a) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00073
; 및
b) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00074
화학식 II 또는 화학식 IIA의 일부 실시양태에서, D1은 화학식:
Figure pct00075
의 모이어티인 것이 바람직하다. 화학식 II 또는 화학식 IIA의 일부 실시양태에서, D1은 화학식:
Figure pct00076
의 모이어티인 것이 바람직하다. 화학식 II 또는 화학식 IIA의 일부 실시양태에서, D1은 화학식:
Figure pct00077
의 모이어티인 것이 바람직하다. 화학식 II 또는 화학식 IIA의 일부 실시양태에서, D1은 화학식:
Figure pct00078
의 모이어티인 것이 바람직하다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 바람직하게는 화학식 III의 화합물이다:
Figure pct00079
여기서 A, R1 및 R2는 상기 화학식 IA에 정의된 바와 같고, D2는 하기 화학식의 모이어티이다:
Figure pct00080
화학식 III의 일부 실시양태에서, D2는 화학식:
Figure pct00081
의 모이어티인 것이 바람직하다. 화학식 III의 일부 실시양태에서, D2는 화학식:
Figure pct00082
의 모이어티인 것이 바람직하다. 화학식 III의 일부 실시양태에서, D2는 화학식:
Figure pct00083
의 모이어티인 것이 바람직하다.
일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 바람직하게는 화학식 IV의 화합물이다:
Figure pct00084
여기서 A, R1 및 R2는 상기 화학식 IA에 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서 화학식 I의 화합물은 화학식 V의 화합물이다:
Figure pct00085
여기서
A, B, R1 및 R2는 상기 화학식 IA에 정의된 바와 같고;
D2는 하기이다:
(a) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00086
;
(b) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00087
;
(c) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00088
; 또는
(d) 하기 화학식의 모이어티:
Figure pct00089
화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 화학식 IIA, 화학식 III, 화학식 IV 또는 화학식 V의 일부 실시양태에서, A가 화학식: -(CH2)ya의 모이어티이고, 여기서 ya는 4 내지 6인 것이 바람직하다. 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II 또는 화학식 IIA의 일부 실시양태에서, A가 화학식: -CH2-(CH2)ma-O-(CH2)na-의 모이어티이고, 여기서 ma는 2 또는 3이고, na는 0 또는 1인 것이 바람직하다. 화학식 III, 화학식 IV 또는 화학식 V의 일부 실시양태에서, A가 화학식: -CH2-(CH2)ma-O-(CH2)na-의 모이어티이고, 여기서 ma는 2 또는 4이고, na는 0, 1 또는 2인 것이 바람직하다. 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 화학식 IIA, 화학식 III, 화학식 IV 또는 화학식 V의 일부 실시양태에서, A는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00090
여기서 yb는 1 내지 3이다. 화학식 I, 화학식 IA, 화학식 II, 화학식 IIA, 화학식 III, 화학식 IV 또는 화학식 V의 일부 실시양태에서, A는 하기 화학식의 모이어티인 것이 바람직하다:
Figure pct00091
화합물 Ex-1, Ex-2, Ex-3, Ex-4, Ex-5, Ex-6, Ex-7, Ex-8, Ex-9, Ex-10, Ex-11, Ex-12, Ex-13, Ex-14, Ex-15, Ex-16, Ex-17, Ex-18, Ex-19, Ex-20, Ex-21, Ex-22, Ex-23, Ex-24, Ex-25, Ex-26, Ex-27, Ex-28, Ex-29, Ex-31, Ex-35, Ex-36, Ex-38, Ex-39, Ex-40, Ex-41, Ex-44, Ex-47, Ex-48, Ex-49, Ex-50, Ex-51, Ex-52, Ex-53, Ex-54, Ex-55, Ex-56, Ex-57, Ex-58, Ex-59, Ex-60 및 Ex-61 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염이 또한 화학식 I의 화합물로서 본원에 제공된다. 표 1에 개시된 이들 화합물이 또한 본원에서 "본 발명의 화합물"로 지칭된다.
표 1
Figure pct00092
Figure pct00093
Figure pct00094
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
여기서 A-는 제약상 허용되는 음이온이다.
본원에 사용된 용어 "염(들)" 및 어구 "제약상 허용되는 염"에서의 그의 사용은 하기 중 임의의 것을 포함한다: 무기 및/또는 유기 산을 사용하여 형성된 산성 염, 무기 및/또는 유기 염기를 사용하여 형성된 염기성 염, 쯔비터이온성 및 4급 암모늄 착물. 본 발명의 화합물의 염은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해, 예를 들어 본 발명의 화합물을 소정량, 예컨대 등가량의 산 또는 염기와 매질, 예컨대 염이 침전되는 매질 또는 수성 매질 중에서 반응시킨 후 동결건조시킴으로써 형성될 수 있다.
본 발명의 화합물은 3-배위 질소 원자, 예를 들어 1급, 2급 또는 3급 아미노 모이어티를 함유하며, 여기서 공지된 바와 같이, 질소 원자 상에 존재하는 고립 전자 쌍은 적절한 반응 조건 하에 적절한 산으로 양성자화되거나 또는 적절한 시약, 예를 들어 알킬 브로마이드로 알킬화되어, 공정 중 생성된 음이온, 예를 들어 할로겐 이온 또는 짝염기에 의해 안정화된 4배위 하전된 질소를 제공할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 유리-염기의 형태로 제조되거나 또는 4급 착물 또는 염 착물의 형태로 단리될 수 있다. 일부 경우에 쯔비터이온성 착물의 염기성 질소 형성에 근접하게 적절한 산성 양성자가 존재하는 것이 가능하다. 상기 용어가 본원에 사용되는 경우, 본 발명의 화합물의 염은, 산성 염이 무기 및/또는 유기 산으로 형성되든, 염기성 염이 무기 및/또는 유기 염기로 형성되든, 쯔비터이온성 특성을 포함하는 염이 형성되든, 예를 들어 화합물이 염기성 모이어티, 예를 들어 비제한적으로 질소 원자, 예를 들어 아민, 피리딘 또는 이미다졸, 및 산성 모이어티, 예를 들어 비제한적으로 카르복실산 둘 다를 함유하든, 및 4급 암모늄 착물이든, 본원에 기재된 본 발명의 화합물의 범주 내에 포함된다.
따라서, 본 발명의 화합물의 구조적 표현은, 유리-염기 형태, 염 형태, 쯔비터이온 형태 또는 4급 암모늄 형태이건 간에, 상기 논의된 이러한 화합물의 모든 다른 형태를 또한 포함한다. 따라서, 본 발명의 한 측면은 제약상 허용되는 염, 쯔비터이온성 착물 또는 4급 암모늄 착물 형태의 본 발명의 화합물의 제공이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는, 4배위 질소가 4급화 또는 양성자화될 수 있고 하전된 질소 형태가 회합된 음이온에 의해 안정화되는 경우를 비롯하여, 본 발명의 화합물이 이러한 착물을 형성할 수 있는 경우를 인식할 것이다. 용어 "제약상 허용되는 염"은 화합물의 유리-염기 형태와 유사하거나 그보다 더 큰 유효성을 보유하고 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 (예를 들어, 그의 수용자에 대해 독성도 아니고 달리 유해하지도 않은) 염 (4급 암모늄 착물 및 내부 염, 예컨대 쯔비터이온 착물 포함)을 지칭한다.
염기성 (또는 산성) 제약 화합물로부터의 제약상 유용한 염의 형성은, 예를 들어 문헌 [S. Berge et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al., The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; in The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. on their website); 및 P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (2002) Int'l. Union of Pure and Applied Chemistry, pp. 330-331]에 논의되어 있다. 이들 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
본 발명은 본 발명의 화합물의 유리 염기 형태 및 모든 이용가능한 염, 예컨대 제약 제제의 제조에 사용하기에 일반적으로 안전한 것으로 인식되는 염 및 현재 관련 기술분야의 통상의 기술 내에서 형성될 수 있고 나중에 제약 제제의 제조에 사용하기에 "일반적으로 안전한 것으로 인식"될 염 (본원에서 "제약상 허용되는 염"으로 지칭됨) 둘 다를 고려한다. 인지될 바와 같이, 유리 염기 화합물은 합성 동안 화합물의 단리 조건을 제어함으로써 또는 본 발명의 화합물의 염 형태로부터의 중화 및 이온 교환에 의해 제조될 수 있다.
제약상 허용되는 산 염의 예는 아세테이트, 예를 들어 트리플루오로아세테이트 염, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메탄술포네이트, 메틸 술페이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 숙시네이트, 술페이트, 술포네이트 (예컨대 본원에 언급된 것), 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트 (또한 토실레이트로서 공지된 것), 운데카노에이트 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
제약상 허용되는 염기성 염의 예는 암모늄 염, 알칼리 금속 염, 예컨대 나트륨, 리튬 및 칼륨 염, 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 및 마그네슘 염, 알루미늄 염, 아연 염, 유기 염기 (예를 들어, 유기 아민), 예컨대 벤자틴, 디에틸아민, 디시클로헥실아민, 히드라바민 (N,N-비스(데히드로아비에틸)에틸렌디아민에 의해 형성됨), N-메틸-D-글루카민, N-메틸-D-글루카미드, t-부틸 아민, 피페라진, 페닐시클로헥실-아민, 콜린, 트로메타민과의 염 및 아미노산, 예컨대 아르기닌, 리신 등과의 염을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 염기성 질소-함유 기는 암모늄 이온으로 전환되거나 또는 저급 알킬 할라이드 (예를 들어 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 디알킬 술페이트 (예를 들어 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 술페이트), 장쇄 할라이드 (예를 들어 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드), 아르알킬 할라이드 (예를 들어 벤질 및 페네틸 브로마이드) 등과 같은 작용제로 4급화될 수 있다.
용어 "제약상 허용되는 음이온"은 제약상 허용되는 염을 형성하는데 적합한 음이온을 지칭한다.
본 발명에서 사용될 수 있는 제약상 허용되는 염의 추가의 예는 플루오라이드, 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일반적으로, 화합물의 염은 본 발명의 범주 내에서 제약상 허용되는 염인 것으로 의도된다.
화합물에 대한 용어 "정제된", "정제된 형태" 또는 "단리 및 정제된 형태"는 합성 공정 또는 천연 공급원 또는 그의 조합으로부터 단리된 후의 상기 화합물의 물리적 상태를 지칭한다. 따라서, 화합물에 대한 용어 "정제된", "정제된 형태" 또는 "단리 및 정제된 형태로"는 본원에 기재되거나 또는 통상의 기술자에게 널리 공지된 정제 공정 또는 공정들로부터, 본원에 기재되거나 또는 통상의 기술자에게 널리 공지된 표준 분석 기술에 의해 특징화되기에 충분한 순도로 수득된 후의 상기 화합물의 물리적 상태를 지칭한다. 본 발명의 화합물은 반응 혼합물 중 계내 형태 뿐만 아니라 상용 기술에 의해 수득된 단리 및 정제된 형태를 포함한 임의의 형태의 화합물을 포함한다. 본 발명의 화합물의 다형체 형태 및 그의 용매화물 및 전구약물이 또한 포함된다.
본 발명의 특정 화합물은 상이한 호변이성질체 형태, 예를 들어 케톤/엔올 호변이성질체 형태, 이민-엔아민 호변이성질체 형태 및 예를 들어 헤테로방향족 형태, 예컨대 하기 모이어티로 존재할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00101
동일한 방식으로, 달리 나타내지 않는 한, 호변이성질현상을 나타내는 화합물의 임의의 호변이성질체 형태의 구조적 표현을 제시하는 것은 화합물의 모든 이러한 호변이성질체 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 본 발명의 화합물, 그의 염 및 그의 용매화물 및 전구약물이 상이한 호변이성질체 형태로 또는 이러한 형태 중에서 평형으로 존재할 수 있는 경우에, 화합물의 모든 이러한 형태는 본 발명의 범주에 의해 포괄되며 그 내에 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 1종 이상의 화합물을 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 본원에 사용된 용어 "제약 조성물"은 적어도 1종의 제약 활성 화합물 및 적어도 1종의 부형제를 포함하고, 명시된 성분의 명시된 양으로의 조합 및 명시된 성분의 명시된 양으로의 조합으로부터 직접적으로 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물 둘 다를 포괄하는 것으로 의도된다.
통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 부형제는 그 자체로는 활성 제약 효과를 발휘하지 않으면서 특정한 투여 경로에 조성물을 적합화하거나 또는 투여 형태로의 조성물의 가공을 보조하는 임의의 구성성분이다. 일반적으로 조성물은 투여 경로 및 투여되는 활성제의 특징에 따라 1종 초과의 부형제를 포함한다. 조성물에 취급 또는 가공을 보다 용이하게 하는 특성을 부여하는 부형제의 예는 정제화하고자 하는 분말화 의약에서의 윤활제 또는 가압 보조제 및 활성제가 에멀젼 형태로 존재하는 조성물에서의 에멀젼 안정화제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 조성물을 목적하는 투여 경로에 적합화시키는 부형제의 예는, 예를 들어, 경구 투여의 경우 위장관으로부터의 흡수를 촉진하는 흡수 증진제, 경피 또는 경점막 투여의 경우 침투 증진제, 예를 들어 접착성 피부 "패치"에서 사용되는 것 또는 협측 투여를 위한 조성물이나 이에 제한되지는 않는다.
부형제가 조성물에서 수행하는 기능에도 불구하고, 부형제는 본원에서 집합적으로 "담체"로 칭해진다. 전형적으로, 제제는 최대 약 95 퍼센트의 활성 성분 및 나머지 담체를 포함할 수 있으며, 상이한 비를 갖는 제제도 제조될 수 있다. 일반적으로, 허용되는 제약 조성물은 유효량의 PCSK9 길항제를 투여 경로에 기초하여 허용되는 부피의 개별 투여 형태로 제공할 수 있는 적합한 농도의 활성제를 함유하여, 조성물이 투여되는 대상체에서 허용되는 기간 동안 활성제의 치료 혈청 수준을 제공할 수 있고, 조성물은 허용되는 기간 동안 허용되는 온도 범위 내에서 저장 동안 생물학적 활성을 보유할 것이다.
본원에 사용된 제약 조성물은 벌크 조성물, 즉 투여를 위한 개별 투여 단위로 아직 형성되지 않은 제제화된 물질 및 개별 투여 단위 내에 함유된 조성물을 둘 다 지칭한다.
본 발명의 조성물이 벌크 형태로 사용될 수 있지만, 대부분의 적용에 대해 조성물은 환자에게 투여하기에 적합한 개별 단위를 제공하는 투여 형태로 포함될 것이고, 각각의 투여 형태는 유효량의 상기 화학식 I의 1종 이상의 화합물을 함유하는 소정량의 선택된 조성물을 포함하는 것으로 인지될 것이다. 적합한 투여 형태의 예는 하기 적합화된 투여 형태를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: (i) 경구 투여, 예를 들어 캡슐 내에 로딩되거나 또는 정제로 압축되고 추가적으로 그의 방출 특성을 변형하는 1종 이상의 코팅, 예를 들어 지연 방출을 부여하는 코팅 또는 연장 방출 특성을 갖는 제제를 포함할 수 있는 액체, 겔, 분말, 고체 또는 반-고체 제약 조성물; (ii) 구강의 조직을 통한 투여에 적합화된 투여 형태, 예를 들어 점막내 투여를 제공하기에 적합한 신속하게 용해되는 정제, 로젠지, 용액, 겔, 사쉐 또는 바늘 어레이; (iii) 비강 또는 상기도강의 점막을 통한 투여에 적합화된 투여 형태, 예를 들어 코 또는 기도 내의 분산을 위한 용액, 현탁액 또는 에멀젼 제제; (iv) 경피 투여에 적합화된 투여 형태, 예를 들어 패치, 크림 또는 겔; (v) 피내 투여에 적합화된 투여 형태, 예를 들어 미세바늘 어레이; (vi) 정맥내 (IV) 주입에 적합화된 투여 형태, 예를 들어 I.V. 주입 펌프를 사용하는 장기간에 걸친 주입에 적합화된 투여 형태; (vii) 근육내 투여 (IM)에 적합화된 투여 형태, 예를 들어 주사가능한 용액 또는 현탁액 및 연장 방출 특성을 갖는 데포를 형성하도록 적합화될 수 있는 투여 형태; (viii) 점적 정맥내 투여 (IV)에 적합화된 투여 형태, 예를 들어 용액 또는 현탁액, 예를 들어 IV 용액 또는 염수 IV 백 내로 주사될 농축물; (ix) 피하 투여에 적합화된 투여 형태, 예를 들어 화합물을 주위 조직 내로 확산시켜 연속 혈청 치료 수준을 제공하는 로드 또는 다른 장치의 이식에 의한 연장된 기간에 걸친 투여에 적합화된 투여 형태; 또는 (x) 직장 또는 질 점막을 통한 전달에 적합화된 투여 형태, 예를 들어 좌제.
제약 조성물은 고체, 반-고체 또는 액체일 수 있다. 고체, 반-고체 및 액체 형태 제제는 다양한 투여 방식에 적합화될 수 있으며, 이의 예는 분말, 분산성 과립, 미니-정제, 비드를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 이는 예를 들어 정제화, 캡슐화 또는 직접 투여에 사용될 수 있다. 추가로, 액체 형태 제제는, 예를 들어 비독점적으로 섭취, 흡입 또는 정맥내 투여 (IV), 예를 들어 비제한적으로 점적 IV 또는 주입 펌프를 통한 투여, 예를 들어 연장된 지속기간에 걸쳐 방출되는 볼루스의 근육내 주사 (IM), 직접적 IV 주사를 위해 의도되거나 또는 피하 투여 경로에 적합화된 제제의 제조에 사용될 수 있는 용액, 현탁액 및 에멀젼을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
고려될 수 있는 다른 투여 경로는 비강내 투여 또는 일부 다른 점막으로의 투여를 포함한다. 다양한 점막으로의 투여를 위해 제조된 제제는 또한 이러한 투여를 위해 이를 적합화하는 추가의 성분, 예를 들어 점도 개질제를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 고체 경구 투여 형태, 예를 들어 정제 또는 신속-용융 구강-용해 제제에 사용하기에 적합한 조성물은 본 발명의 화합물 또는 그의 염에 대한 바람직한 투여 경로이지만, 본 발명의 조성물은 상기 언급된 다른 경로를 통한 투여를 위해 제제화될 수 있다. 예는, 예를 들어 흡입을 통한 또는 비점막을 통한 투여에 적합한 에어로졸 제제를 포함하며, 이는 용액 및 분말 형태의 고체를 포함할 수 있으며, 이는 제약상 허용되는 추진제, 예를 들어 불활성 압축 기체, 예를 들어 질소와 조합될 수 있다. 또한, 사용 직전에, 예를 들어 경구 또는 비경구 투여를 위한 현탁액 또는 용액으로 전환되도록 의도되는 고체 형태 제제가 포함된다. 이러한 고체 형태의 예는 동결 건조 제제 및 고체 흡수제 매질 중에 흡착된 액체 제제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
예를 들어, 본 발명의 화합물은 또한 액체, 좌제, 크림, 발포체, 겔 또는 신속 용해 고체 형태로부터 경피로 또는 경점막으로 전달가능할 수 있다. 경피 조성물은 또한 크림, 로션, 에어로졸 및/또는 에멀젼의 형태를 취할 수 있고, 임의의 관련 기술분야에 공지된 경피 패치, 예를 들어 제약 활성 화합물을 포함하는 매트릭스 또는 제약 활성 화합물의 고체 또는 액체 형태를 포함하는 저장소를 포함하는 패치를 포함하는 단위 투여 형태로 제공될 수 있다는 것이 인지될 것이다.
상기 언급된 제약상 허용되는 담체 및 다양한 조성물의 제조 방법의 예는 문헌 [A. Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, (2000), Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD]에서 찾아볼 수 있다. 제제 문제를 다루는 간행물의 추가의 예는 하기에서 찾아볼 수 있다: 제약 조성물은 관련 기술분야에 공지된 임의의 수의 전략에 의해 제제화될 수 있으며, 예를 들어 문헌 [McGoff and Scher, 2000 Solution Formulation of Proteins/Peptides: In - McNally, E.J., ed. Protein Formulation and Delivery. New York, NY: Marcel Dekker; pp. 139-158; Akers & Defilippis, 2000, Peptides and Proteins as Parenteral Solutions. In - Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins. Philadelphia, PA: Taylor and Francis; pp. 145-177; Akers et al., 2002, Pharm. Biotechnol. 14:47-127]을 참조한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 PCSK9 기능을 길항하기 위한 본원에 기재된 PCSK9-특이적 길항제 화합물을 사용하는 방법을 제공하며; 상기 방법은 하기에 추가로 기재된다. 본 출원 전반에 걸쳐 용어 "길항하는"의 사용은 이환 조직에서 PCSK9의 1종 이상의 기능을 억제, 상쇄, 중화 또는 축소시키는 작용에 대항하는 물질을 이환 조직(들)에 제공하는 것을 지칭한다. PCSK9-연관 기능적 특성 중 1종 이상의 억제 또는 길항작용은 관련 기술분야에 공지된 방법론 (예를 들어, 문헌 [Barak & Webb, 1981 J. Cell Biol. 90:595-604; Stephan & Yurachek, 1993 J. Lipid Res. 34:325330; 및 McNamara et al., 2006 Clinica Chimica Acta 369:158-167] 참조) 뿐만 아니라 본원에 기재된 것에 따라 용이하게 결정될 수 있다. 억제 또는 길항작용은 길항제의 부재 하에 관찰된 활성 또는 예를 들어 무관한 특이성의 대조군 길항제가 존재할 때 관찰된 활성에 비해 PCSK9 활성의 감소를 유발할 것이다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 PCSK9-특이적 길항제는 본원에 개시된 활성을 포함하나 이에 제한되지는 않는 측정된 파라미터의 적어도 10%의 감소, 보다 바람직하게는 측정된 파라미터의 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 및 95%의 감소가 존재하는 지점까지 PCSK9 기능을 길항한다. PCSK9 기능의 이러한 억제/길항작용은 PCSK9 기능이 대상체에 부정적으로 영향을 미치는 특정한 표현형, 질환, 장애 또는 병태에 대해 적어도 부분적으로 기여하는 경우에 특히 효과적이다.
한 측면에서, 본 발명은 PCSK9에 의해 영향을 받을 수 있는 (즉, LDL 수용체를 발현하고/거나 포함하는) 세포, 세포 집단 또는 조직 샘플을 본원에 개시된 PCSK9-특이적 길항제와, 상기 길항제가 PCSK9 (존재할 때)에 결합하여 PCSK9의 세포 LDL 흡수 억제를 억제하도록 하는 조건 하에 접촉시키는 것을 포함하는, PCSK9의 활성을 길항하는 방법을 제공한다. 본 발명의 일부 실시양태는 세포가 인간 세포인 상기 방법을 포함한다. 본 발명의 추가의 실시양태는 세포가 뮤린 세포인 상기 방법을 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 본 발명의 PCSK9-특이적 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 PCSK9의 활성을 길항하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, PCSK9 기능을 길항하는 방법은 본원에 정의된 바와 같은 PCSK9-연관 질환, 장애 또는 병태의 치료를 위한 것이거나 또는 대안적으로 PCSK9 길항제의 효과로부터 이익을 얻을 수 있는 질환, 장애 또는 병태에 요법을 제공하는 것이다.
따라서, 본 발명은 PCSK9 기능을 길항하는 것이 요구되는 다양한 치료 방법에서 본원에 기재된 PCSK9-특이적 길항제의 사용을 고려한다. 본원에 사용된 용어 "치료 방법"은 자연에서 질환 상태의 적어도 1종의 증상의 변화를 유발하는 작용 과정에 관한 것이며, 이는 예방적 또는 치료적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 화학식 I의 PCSK9-길항제 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, PCSK9 활성과 연관되고/거나 그에 기인하는 병태 또는 PCSK9의 기능이 특정한 대상체에 대해 금기되는 병태의 치료 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 병태는 아테롬성동맥경화증, 고콜레스테롤혈증, 관상동맥 심장 질환, 대사 증후군, 급성 관상동맥 증후군 또는 관련 심혈관 질환 및 심혈관대사 병태일 수 있거나, 또는 PCSK9 활성이 금기되는 질환 상태 또는 병태일 수 있다.
본 발명에 따른 치료 방법은 개체에게 치료 (또는 예방) 유효량의 본 발명의 PCSK9-특이적 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 양과 관련하여 용어 "치료상 유효한" 또는 "예방상 유효한"의 사용은 목적하는 기간 동안 목적하는 치료적 및/또는 예방적 효과를 달성하기 위해 필요한 의도된 투여량의 양을 지칭한다. 목적하는 효과는, 예를 들어 치료된 병태와 연관된 적어도 1종의 증상의 완화, 호전, 감소 또는 중지일 수 있다. 이들 양은, 통상의 기술자가 인지할 바와 같이, 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중 및 개체에서 목적하는 효과를 도출하는 PCSK9-특이적 길항제의 능력을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 인자에 따라 달라질 것이다. 반응은 시험관내 검정, 생체내 비-인간 동물 연구에 의해 기록될 수 있고/거나 임상 시험으로부터 추가로 지지될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 PCSK9 길항제 화합물을 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물의 형태로 투여하는 것이 바람직하다.
길항제 치료제의 투여는 통상의 기술자의 영역에 내에 충분히 속하고 (예를 들어, 문헌 [Lederman et al., 1991 Int. J. Cancer 47:659-664; Bagshawe et al., 1991 Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4:915-922] 참조), 다수의 인자, 예를 들어 비제한적으로, 환자의 상태, 치료되는 면적, 투여 경로 및 목적하는 치료, 예를 들어 예방 또는 급성 치료 등을 포함한 상기 언급된 것에 기초하여 달라질 것이다. 통상의 기술을 가진 의사 또는 수의사는 길항제의 유효 치료량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.
대상체는 기존 질환 또는 의학적 상태에 대한 치료를 필요로 하거나 요구할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 대상체가 기존 병태의 치료를 "필요로 한다"는 것은 의료 전문가에 의한 필요의 결정 뿐만 아니라 이러한 치료에 대한 대상체의 요구를 둘 다 포괄한다. 화합물 또는 그의 염이 1종 이상의 다른 활성제와 조합되어 제공되는 경우에, "투여" 및 그의 변형어는 각각 화합물 또는 그의 염 및 다른 작용제를 동시발생적으로 또는 동시에 또는 소정 기간에 걸친 개별 투여 과정에 걸쳐 제공하는 것을 포함하는 것으로 이해된다. 조합의 작용제가 동시에 투여되는 경우에, 이들은 단일 조성물로 함께 투여될 수 있거나 또는 이들은 개별적으로 투여될 수 있다. 활성제의 "조합"은 모든 활성제를 함유하는 단일 조성물 또는 활성제 중 1종 이상을 각각 함유하는 다중 조성물일 수 있는 것으로 이해된다. 2종의 활성제의 경우에 조합은 또한 둘 다의 작용제를 포함하는 단일 조성물 또는 작용제 중 1종을 각각 포함하는 2종의 개별 조성물일 수 있고; 3종의 활성제의 경우에 조합은 모든 3종의 작용제를 포함하는 단일 조성물, 작용제 중 1종을 각각 포함하는 3종의 개별 조성물, 또는 하나는 작용제 중 2종을 포함하는 2종의 조성물이고 다른 것은 제3 작용제를 포함하는 것 등일 수 있다.
본 발명의 조성물 및 조합은 적합하게는 유효량으로 투여된다. 용어 "유효량"은 PCSK9를 길항하여 추구되는 반응을 도출하기에 (즉, 동물 또는 인간에서 아테롬성동맥경화증, 고콜레스테롤혈증, 관상동맥 심장 질환, 대사 증후군, 급성 관상동맥 증후군 및 관련 심혈관 질환 및 심혈관대사 병태를 포함하나 이에 제한되지는 않는, PCSK9 기능과 연관되거나 그에 의해 영향을 받는 병태의 치료 또는 관리에서 치료 반응을 유도하기에) 충분한 활성 화합물의 양을 의미한다.
사용되는 실제 투여량은 환자의 요건 및 치료될 병태의 중증도에 따라 달라질 수 있다. 특정한 상황에 대한 적절한 투여 요법의 결정은, 예를 들어 표준 문헌에 기재된 바와 같이, 예를 들어 문헌 [the "Physicians' Desk Reference" (PDR), for example, 1996 edition (Medical Economics Company, Montvale, NJ 07645-1742, USA), the Physician's Desk Reference, 56th Edition, 2002 (published by Medical Economics company, Inc. Montvale, NJ 07645-1742), 또는 the Physician's Desk Reference, 57th Edition, 2003 (published by Thompson PDR, Montvale, NJ 07645-1742] (이의 개시내용은 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같이 관련 기술분야의 기술 내에 속한다. 편의상, 총 1일 투여량은 필요한 경우 또는 연속적으로 전달되는 경우 1일 동안 여러 부분으로 분할되어 투여될 수 있다.
PCSK9-특이적 길항제는 경구 투여, 주사에 의한 투여 (이의 구체적 실시양태는 정맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 주사를 포함함) 또는 흡입, 비강내 또는 국소 투여에 의한 투여를 포함하나 이에 제한되지 않는 관련 기술분야에서 인식되는 임의의 투여 경로에 의해, 단독으로 또는 개체의 치료를 보조하도록 설계된 다른 작용제와 조합되어 개체에게 투여될 수 있다. PCSK9-특이적 길항제는 또한 주사 장치, 주사기 펜, 무바늘 장치; 및 피하 패치 전달 시스템에 의해 투여될 수 있다. 투여 경로는 치료의 목적하는 생리화학적 특징을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 통상의 기술자에 의해 인지되는 다수의 고려사항에 기초하여 결정되어야 한다.
1종 이상의 추가의 약리학적 활성제가 화학식 I의 화합물과 조합되어 투여될 수 있다. 추가의 활성제 (또는 활성제들)는 투여 후에 제약상 활성인 형태로 전환되는 전구-약물을 포함한, 체내에서 활성인 제약 활성제 (또는 활성제들)를 의미하는 것으로 의도되며, 이는 화학식 I의 화합물과 상이하고, 또한 상기 추가의 활성제의 유리-산, 유리-염기 및 제약상 허용되는 염을 포함한다. 일반적으로, 항고혈압제, 항아테롬성동맥경화제, 예컨대 지질 조절 화합물, 항당뇨병제 및/또는 항비만제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 추가의 활성제 또는 활성제들은 단일 투여 제제 (고정 용량 약물 조합)로 화학식 I의 화합물과 임의로 조합되어 사용될 수 있거나, 또는 활성제의 동시 또는 순차적 투여 (개별 활성제의 공-투여)를 가능하게 하는 1종 이상의 개별 투여 제제로 대상체에게 투여될 수 있다.
사용될 수 있는 추가의 활성제의 예는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 안지오텐신 전환 효소 억제제 (예를 들어, 알라세프릴, 베나제프릴, 캅토프릴, 세로나프릴, 실라자프릴, 델라프릴, 에날라프릴, 에날라프릴라트, 포시노프릴, 이미다프릴, 리시노프릴, 모벨티프릴, 페린도프릴, 퀴나프릴, 라미프릴, 스피라프릴, 테모카프릴, 또는 트란돌라프릴), 안지오텐신 II 수용체 길항제 (예를 들어, 로사르탄, 즉 코자(COZAAR)®, 발사르탄, 칸데사르탄, 올메사르탄, 텔메사르탄 및 히드로클로로티아지드, 예컨대 하이자(HYZAAR)®와 조합되어 사용되는 임의의 이들 약물); 중성 엔도펩티다제 억제제 (예를 들어, 티오르판 및 포스포르아미돈), 알도스테론 길항제, 알도스테론 신타제 억제제, 레닌 억제제 (예를 들어, 디- 및 트리-펩티드의 우레아 유도체 (미국 특허 번호 5,116,835 참조), 아미노산 및 유도체 (미국 특허 5,095,119 및 5,104,869), 비-펩티드성 결합에 의해 연결된 아미노산 쇄 (미국 특허 5,114,937), 디- 및 트리-펩티드 유도체, 펩티딜 아미노 디올 및 펩티딜 베타-아미노아실 아미노디올 카르바메이트, 및 소분자 레닌 억제제 (디올 술폰아미드 및 술피닐 포함), N-모르폴리노 유도체, N-헤테로시클릭 알콜 및 피롤이미다졸론; 또한, 펩스타틴 유도체 및 스타톤-함유 펩티드의 플루오로- 및 클로로-유도체, 에날크레인, RO 42-5892, A 65317, CP 80794, ES 1005, ES 8891, SQ 34017, 알리스키렌 (2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(2-카르바모일-2-메틸프로필)-5-아미노-4-히드록시-2,7-디이소프로필-8-[4-메톡시-3-(3-메톡시프로폭시)-페닐]-옥탄아미드 헤미푸마레이트), SPP600, SPP630 및 SPP635), 엔도텔린 수용체 길항제, 포스포디에스테라제-5 억제제 (예를 들어, 실데나필, 타달라필 및 바르데나필), 혈관확장제, 칼슘 채널 차단제 (예를 들어, 암로디핀, 니페디핀, 베라파르밀, 딜티아젬, 갈로파밀, 닐루디핀, 니모디핀, 니카르디핀), 칼륨 채널 활성화제 (예를 들어, 니코란딜, 피나시딜, 크로마칼림, 미녹시딜, 아프릴칼림, 로프라졸람), 이뇨제 (예를 들어, 히드로클로로티아지드), 교감신경차단제, 베타-아드레날린성 차단 약물 (예를 들어, 프로프라놀롤, 아테놀롤, 비소프롤롤, 카르베딜롤, 메토프롤롤 또는 메토프롤롤 타르테이트), 알파 아드레날린성 차단 약물 (예를 들어, 독사조신, 프라조신 또는 알파 메틸도파), 중추성 알파 아드레날린성 효능제, 말초 혈관확장제 (예를 들어 히드랄라진); 지질 강하제, 예를 들어 HMG-CoA 리덕타제 억제제, 예컨대 심바스타틴 및 로바스타틴 (이들은 락톤 전구-약물 형태의 조코르(ZOCOR)® 및 메바코르(MEVACOR)®로 시판되고 투여 후 억제제로서 기능함), 및 디히드록시 개환 산 HMG-CoA 리덕타제 억제제의 제약상 허용되는 염, 예컨대 아토르바스타틴 (특히 리피토르(LIPITOR)®로 판매되는 칼슘 염), 로수바스타틴 (특히 크레스토르(CRESTOR)®로 판매되는 칼슘 염), 프라바스타틴 (특히 프라바콜(PRAVACHOL)®로 판매되는 나트륨 염), 플루바스타틴 (특히 레스콜(LESCOL)®로 판매되는 나트륨 염), 크리바스타틴 및 피타바스타틴; 콜레스테롤 흡수 억제제, 예컨대 에제티미브 (제티아(ZETIA)®) 및 임의의 다른 지질 강하제, 예컨대 상기 언급된 HMG-CoA 리덕타제 억제제 및 특히 심바스타틴과 조합된 에제티미브 (비토린(VYTORIN)®) 또는 아토르바스타틴 칼슘과 조합된 에제티미브; 즉시-방출 또는 제어 방출 형태의 니아신 및/또는 HMG-CoA 리덕타제 억제제와의 니아신; 니아신 수용체 효능제, 예컨대 아시피목스 및 아시프란, 뿐만 아니라 니아신 수용체 부분 효능제; 대사 변경제, 예컨대 인슐린 및 인슐린 모방체 (예를 들어, 인슐린 데글루덱, 인슐린 글라진, 인슐린 리스프로), 디펩티딜 펩티다제-IV (DPP-4) 억제제 (예를 들어, 시타글립틴, 알로글립틴, 오마리글립틴, 리나글립틴, 빌다글립틴); 인슐린 감작제, 예를 들어 (i) PPARγ 효능제, 예컨대 글리타존 (예를 들어, 피오글리타존, AMG 131, MBX2044, 미토글리타존, 로베글리타존, IDR-105, 로시글리타존 및 발라글리타존), 및 다른 PPAR 리간드, 예를 들어 (1) PPARα/γ 이중 효능제 (예를 들어, ZYH2, ZYH1, GFT505, 치글리타자르, 무라글리타자르, 알레글리타자르, 소델글리타자르 및 나베글리타자르); (2) PPARα 효능제, 예컨대 페노피브르산 유도체 (예를 들어, 겜피브로질, 클로피브레이트, 시프로피브레이트, 페노피브레이트, 베자피브레이트), (3) 선택적 PPARγ 조정제 (SPPARγM), (예를 들어, 예컨대 WO 02/060388, WO 02/08188, WO 2004/019869, WO 2004/020409, WO 2004/020408 및 WO 2004/066963에 개시된 것); 및 (4) PPARγ 부분 효능제; (ii) 비구아니드, 예컨대 메트포르민 및 그의 제약상 허용되는 염, 특히, 메트포르민 히드로클로라이드, 및 그의 연장-방출 제제, 예컨대 글루메트자(Glumetza)™, 포르타메트(Fortamet)™ 및 글루코파지(Glucophage)XR™; 및 (iii) 단백질 티로신 포스파타제-1B (PTP-1B) 억제제 (예를 들어, ISIS-113715 및 TTP814); 인슐린 또는 인슐린 유사체 (예를 들어, 인슐린 데테미르, 인슐린 글루리신, 인슐린 데글루덱, 인슐린 글라진, 인슐린 리스프로 및 각각의 흡입가능한 제제); 렙틴 및 렙틴 유도체 및 효능제; 아밀린 및 아밀린 유사체 (예를 들어, 프람린티드); 술포닐우레아 및 비-술포닐우레아 인슐린 분비촉진제 (예를 들어, 톨부타미드, 글리부리드, 글리피지드, 글리메피리드, 미티글리니드, 메글리티니드, 나테글리니드 및 레파글리니드); α-글루코시다제 억제제 (예를 들어, 아카르보스, 보글리보스 및 미글리톨); 글루카곤 수용체 길항제 (예를 들어, MK-3577, MK-0893, LY-2409021 및 KT6-971); 인크레틴 모방체, 예컨대 GLP-1, GLP-1 유사체, 유도체 및 모방체; 및 GLP-1 수용체 효능제 (예를 들어, 둘라글루티드, 세마글루티드, 알비글루티드, 엑세나티드, 리라글루티드, 릭시세나티드, 타스포글루티드, CJC-1131 및 BIM-51077, 예를 들어 그의 비강내, 경피 및 1주 1회 제제); 담즙산 봉쇄제 (예를 들어, 콜레스틸란, 콜레스티미드, 콜레세발람 히드로클로라이드, 콜레스티폴, 콜레스티라민, 및 가교된 덱스트란의 디알킬아미노알킬 유도체), 아실 CoA:콜레스테롤 아실트랜스퍼라제 억제제 (예를 들어, 아바시미브); 항비만 화합물; 염증성 병태에 사용하기 위해 의도된 작용제, 예컨대 아스피린, 비-스테로이드성 항염증 약물 또는 NSAID, 글루코코르티코이드, 및 선택적 시클로옥시게나제-2 또는 COX-2 억제제; 글루코키나제 활성화제 (GKA) (예를 들어, AZD6370); 11β-히드록시스테로이드 데히드로게나제 제1형의 억제제 (예를 들어, 예컨대 미국 특허 번호 6,730,690에 개시된 것 및 LY-2523199); CETP 억제제 (예를 들어, 아나세트라피브, 토르세트라피브 및 에바세트라피브); 프룩토스 1,6-비스포스파타제의 억제제 (예를 들어, 예컨대 미국 특허 번호 6,054,587; 6,110,903; 6,284,748; 6,399,782; 및 6,489,476에 개시된 것); 아세틸 CoA 카르복실라제-1 또는 2 (ACC1 또는 ACC2)의 억제제; AMP-활성화된 단백질 키나제 (AMPK) 활성화제; G-단백질-커플링된 수용체의 다른 효능제: (i) GPR-109, (ii) GPR-119 (예를 들어, MBX2982 및 PSN821), 및 (iii) GPR-40 (예를 들어, TAK875); SSTR3 길항제 (예를 들어, 예컨대 WO 2009/001836에 개시된 것); 뉴로메딘 U 수용체 효능제 (예를 들어, 예컨대 WO 2009/042053에 개시된 것, 예를 들어 비제한적으로 뉴로메딘 S (NMS)); SCD 조정제; GPR-105 길항제 (예를 들어, 예컨대 WO 2009/000087에 개시된 것); SGLT 억제제 (예를 들어, ASP1941, SGLT-3, 엠파글리플로진, 다파글리플로진, 카나글리플로진, BI-10773, 에르투글리플로진, 레모글로플로진, TS-071, 토포글리플로진, 이프라글리플로진 및 LX-4211); 아실 조효소 A:디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 1 및 2 (DGAT-1 및 DGAT-2)의 억제제; 지방산 신타제의 억제제; 아실 조효소 A:모노아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 1 및 2 (MGAT-1 및 MGAT-2)의 억제제; TGR5 수용체 (또한 GPBAR1, BG37, GPCR19, GPR131 및 M-BAR로 공지됨)의 효능제; 회장 담즙산 수송체 억제제; PACAP, PACAP 모방체 및 PACAP 수용체 3 효능제; PPAR 효능제; 단백질 티로신 포스파타제-1B (PTP-1B) 억제제; IL-1b 항체 (예를 들어, XOMA052 및 카나키누맙); 및 브로모크립틴 메실레이트 및 그의 급속-방출 제제; 또는 상기 언급된 병태 또는 장애의 치료에 유익한 다른 약물, 예를 들어 화학적으로 가능한 경우에 상기 활성제의 유리-산, 유리-염기 및 제약상 허용되는 염 형태.
본 발명의 화합물은 용이하게 입수가능한 출발 물질, 시약 및 통상적인 합성 절차를 사용하여 하기 반응식 및 실시예 또는 그의 변형에 따라 용이하게 제조될 수 있다. 이들 반응에서, 공지된 변이체를 사용하는 것이 또한 가능하다. 역상 크로마토그래피 (하기 언급된 바와 같은 HPLC 또는 MPLC)를 사용하는 화합물의 정제를 위해, C18 칼럼을 사용하였다. 본 발명의 화합물의 다른 제조 방법은 하기 반응식 및 실시예에 비추어 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 자명할 것이다. 하기 열거된 약어는 본원의 예시적인 반응식 및/또는 실시예에서 사용될 수 있다.
ACN은 아세토니트릴이다.
AcOH는 아세트산이다.
AcO-NH4는 아세트산암모늄이다.
Boc2O는 디-tert-부틸 디카르보네이트이다.
Bn은 벤질이다.
BnBr은 벤질 브로마이드이다.
BzCl은 벤조일 클로라이드이다.
CBr4는 퍼브로모메탄이다.
Cbz-Cl은 벤질 클로로포르메이트이다.
DBU는 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔이다.
DCC는 디시클로헥실카르보디이미드이다.
DCE는 1,2-디클로로에탄이다.
DCM은 디클로로메탄이다.
DEA는 N,N-디에틸아민이다.
DIAD는 (E)-디이소프로필 디아젠-1,2-디카르복실레이트이다.
DIEA 또는 DIPEA는 N,N-디이소프로필에틸아민이다.
DMAP는 4-디메틸아미노피리딘이다.
DMF는 N,N-디메틸포름아미드이다.
DMSO는 디메틸 술폭시드이다.
EA 또는 EtOAc는 에틸 아세테이트이다.
EtOH는 에탄올이다.
Et2O는 디에틸 에테르이다.
Fmoc는 플루오레닐메틸옥시카르보닐 보호기이다.
Fmoc-Cl은 (9H-플루오렌-9-일)메틸 카르보노클로리데이트이다.
Fmoc-D-Dap(Boc)-OH는 N-알파-(9-플루오레닐메틸옥시카르보닐)-N-베타-t-부틸옥시카르보닐-D-2,3-디아미노프로피온산이다.
Fmoc-Osu는 Fmoc N-히드록시숙신이미드 에스테르이다.
HATU는 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트이다.
HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피이다.
IPA는 이소프로필 알콜이다.
LiOH는 수산화리튬이다.
LC/MS는 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법이다.
Me3N은 트리메틸 아민이다.
MeOH는 메탄올이다.
MPLC는 중압 액체 크로마토그래피이다.
MsCl은 메탄술포닐 클로라이드이다.
NaBH(OAc)3은 소듐 트리아세톡시보로히드라이드이다.
NMR은 핵 자기 공명이다.
NsCl은 4-니트로벤젠-1-술포닐 클로라이드이다.
PE는 석유 에테르이다.
Pd2(dba)3(HCCl3)은 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0)-클로로포름 부가물이다.
PPh3은 트리페닐포스핀이다.
PdCl2(dppf) 또는 Pd(ii)(dppf)Cl2는 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II)이다.
Pd(dppf)Cl2CH2Cl2는 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 디클로로메탄 부가물이다.
Pd(PPh3)4는 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐이다.
PPTs는 피리디늄 p-톨루엔술포네이트이다.
[Rh(OAc)2]2는 아세트산로듐(II) 이량체이다.
RT 또는 r.t.또는 rt는 실온이다.
tBuOAc는 tert-부틸 아세테이트이다.
TEA는 트리에틸아민이다.
TFA는 트리플루오로아세트산이다.
TFE는 테트라플루오로에틸렌이다.
THF는 테트라히드로푸란이다.
Tf2O는 트리플루오로메탄술폰산 무수물이다.
Teoc-OSu는 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 (2-(트리메틸실릴)에틸)카르보네이트이다.
TBAF는 테트라부틸암모늄 플루오라이드이다.
TMS는 테트라메틸실란이다.
잔 촉매 1B는 디클로로(1,3-비스(2,4,6-트리메틸페닐)-2-이미다졸리디닐리덴)((5-((디메틸아미노)술포닐)-2-(1-메틸에톡시-O)페닐)메틸렌-C)루테늄(II)이다
[또한 1,3-비스(2,4,6-트리메틸페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴[2-(i-프로폭시)-5-(N,N-디메틸아미노술포닐)페닐[메틸렌루테늄 (II) 디클로라이드로서 기재됨].
실시예 1 Ex-01 및 Ex-51의 제조
Figure pct00102
Figure pct00103
화합물 Ex-01 및 Ex-51의 염 형태를 하기 반응식에 따라 중간체 76 및 86 (하기 제제)으로부터 제조하였다:
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
단계 A: 중간체 89의 제조
DMF (40 ml) 중 76 (1.56 g, 1.917 mmol, 하기 제제) 및 86 (1.506 g, 1.936 mmol, 하기 제제)의 용액에 HATU (0.802 g, 2.108 mmol) 및 DIEA (0.670 ml, 3.83 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 50분 동안 교반한 다음, EtOAc (300 mL)와 염수 (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 염수 (2x100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 MeOH/DCM을 사용하여 정제하여 89를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1573.8.
단계 B: 중간체 90의 제조
DCM (500 ml) 및 아세트산 (40 mL) 중 89 (0.68 g, 0.432 mmol)의 용액을 20분 동안 N2로 버블링하고, 이어서 잔 촉매-1b (0.222 g, 0.302 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20분 동안 N2로 추가로 버블링한 다음, 55℃에서 5시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 MeOH/DCM을 사용하여 정제하여 90 (시스/트랜스 혼합물)을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1545.7.
단계 C: 중간체 91의 제조
아세토니트릴 (2 ml) 중 90 (시스/트랜스 혼합물) (65 mg, 0.042 mmol)의 용액에 피페리딘 (0.042 ml, 0.420 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, 잔류물을 아세토니트릴 (4 mL) 중에 용해시키고, 다시 농축시켰다. 잔류물을 추가로 고진공 하에 30분 동안 건조시켜 91 (시스 및 트랜스 혼합물)을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1324.0.
단계 D: 중간체 92의 제조
0℃에서 DMF (10 ml) 중 91 (시스/트랜스 혼합물) (548 mg, 0.414 mmol) 및 88 (227 mg, 0.455 mmol, 하기 제제)의 용액에 HATU (181 mg, 0.476 mmol) 및 DIEA (0.166 ml, 0.952 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 용액을 역상 MPLC에 의해 C18 칼럼 상에서 용리 용매로서 아세토니트릴 (0.05% TFA)/물 (0.05% TFA)을 사용하여 정제하여 92 (시스/트랜스 혼합물)를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1803.5.
단계 E: 중간체 93의 제조
0℃에서 THF (20 ml), MeOH (6 ml) 및 물 (6 ml) 중 92 (700 mg, 0.388 mmol)의 용액에 1N 수성 LiOH (3.11 ml, 3.11 mmol)를 적가하고, 생성된 용액을 0℃에서 23시간 동안 교반하였다. 용액을 1N HCl의 첨가에 의해 pH 7-8로 중화시키고, 휘발성 물질을 증발시키고, 수성 상을 pH 5로 산성화시키고, 혼합물을 역상 MPLC에 의해 C18 칼럼 상에서 용리 용매로서 아세토니트릴 (0.05% TFA)/물 (0.05% TFA)을 사용하여 정제하여 93을 TFA 염으로서 수득하였다. 0℃에서 물 (70 mL) 및 아세토니트릴 (70 ml) 중 93 TFA 염 (427 mg, 0.257 mmol)의 용액에 0.1 N HCl (13.5 ml, 1.350 mmol)을 적가하고, 생성된 용액을 0℃에서 5분 동안 교반한 다음, 동결건조시켜 93을 HCl 염으로서 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1567.1.
단계 F: 중간체 94의 제조
DMF (30 mL) 중 HCl 염 (200 mg, 0.125 mmol)으로서의 93의 용액에 HATU (56.9 mg, 0.150 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, DCM (400 mL)으로 희석하고, 이어서 DIEA (0.065 mL, 0.374 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 휘발성 물질을 회전 증발기 상에서 증발시키고, 생성된 DMF 용액을 역상 MPLC에 의해 용리 용매로서 아세토니트릴 (0.05% TFA)/물 (0.05% TFA)을 사용하여 정제하여 94를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1549.2.
단계 G: 중간체 95의 제조
MeOH (20 ml) 중 94 (14 mg, 9.04 μmol)의 용액에 10% Pd/C (1.924 mg, 1.808 μmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 H2 풍선을 통해 수소화시켰다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켜 중간체 화합물 95를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1550.9.
단계 H: Ex-01의 제조
이전 단계에서 제조된 중간체 화합물 95 (26 mg, 0.017 mmol)를 DCM (2 ml) 중에 용해시켰다. 이 용액에 TFA (6 mL, 78 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 농축시키고, 잔류물을 DCM (3 mL) 중에 용해시키고, 디옥산 중 4N HCl (0.042 mL, 0.168 mmol)로 처리하고, 다시 농축시켜 Ex-01을 조 생성물로서 수득하였다. 조 Ex-01을 역상 HPLC에 의해 용리 용매로서 아세토니트릴 (0.1% 포름산)/물 (0.1% 포름산)을 사용하여 정제하여 Ex-01의 포르메이트 염 형태를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1394.4.
단계 I: Ex-51의 제조
DCM (2 ml) 중 중간체 화합물 94 (30 mg, 0.019 mmol)의 용액에 TFA (4 ml, 51.9 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 30분 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 DCM (2 mL) 중에 용해시키고, HCl (디옥산 중 4N) (0.048 ml, 0.194 mmol)로 처리하고, 농축시켜 Ex-51을 HCl 염으로서 수득하였다. 화합물을 역상 HPLC에 의해 이동상으로서 아세토니트릴 (0.1% 포름산)/물 (0.1% 포름산)을 사용하여 정제하여 Ex-51의 포르메이트 염 형태를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1392.0.
하기 반응식 및 절차를 사용하여 상기 기재된 절차에 사용된 중간체 76, 86 및 88을 제조하였다.
중간체 76의 제조에 사용된 중간체 68의 제조
Figure pct00107
단계 A: 중간체 화합물 65의 제조
0℃에서 디옥산 (100 ml) 중 (2S,3S)-3-히드록시피롤리딘-2-카르복실산 (5.32 g, 40.6 mmol)의 현탁액에 수산화나트륨 (122 ml, 122 mmol)을 첨가한 다음, 벤질 클로로포르메이트 (6.50 ml, 44.6 mmol)를 적가하였다. 생성된 현탁액을 0℃에서 5시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 제거한 후, 수성 상을 pH 3으로 산성화시킨 다음, 30% IPA/DCM (200 mL)과 염수 (50 mL) 사이에 분배하고, 수성 상을 30% IPA/DCM (2x100mL)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 (2S,3S)-1-((벤질옥시)카르보닐)-3-히드록시피롤리딘-2-카르복실산 (65)을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 266.1.
단계 B: 중간체 화합물 66의 제조
MeOH (80 ml) 중 65 (7.48 g, 28.2 mmol)의 용액에 TMS-디아조메탄 (70.5 ml, 141 mmol)을 적가하고, 생성된 용액을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 아세트산 (약 400 uL)을 적가하여 켄칭하였다. 용액을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 EtOAc/헥산을 사용하여 정제하여 66을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 280.1.
단계 C: 중간체 화합물 67의 제조
DCM (200 mL) 중 66 (4.81 g, 17.22 mmol)의 용액을 N2로 30분 동안 버블링하고, 이어서 아세트산로듐(ii) 이량체 (0.761 g, 1.722 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 빙수조에서 냉각시키고, tert-부틸 디아조아세테이트 (3.58 mL, 25.8 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (100 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 혼합물을 DCM (3x100 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 역상 MPLC에 의해 용리 용매로서 아세토니트릴 (0.05% TFA)/물 (0.05% TFA)을 사용하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 농축시키고, 수성 상을 DCM (2x100mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 67을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 394.2.
단계 D: 중간체 화합물 68의 제조
MeOH (80 ml) 중 67 (3.72 g, 9.46 mmol)의 용액에 10% Pd/C (0.805 g, 0.756 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 H2 풍선을 통해 수소화시킨 다음, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시켜 68을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 259.9.
중간체 화합물 76의 제조
Figure pct00108
Figure pct00109
단계 A: 중간체 69의 제조
0℃에서 THF (20 ml), MeOH (10 mL) 및 물 (20.00 ml) 중 (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(5-플루오로-1H-인돌-3-일)프로판산 (3 g, 6.75 mmol)의 용액에 NaOH (20.25 ml, 20.25 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 주위 온도에서 4시간 동안 교반한 다음, 휘발성 물질을 증발시켰다. 수성 혼합물에 디옥산 (50 ml) 및 물 (20 mL)을 첨가하고, 생성된 용액을 0℃로 냉각시키고, Boc2O (1.881 ml, 8.10 mmol)를 상기 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 3시간 동안 교반하고, 휘발성 물질을 제거하고, 수성 상을 Et2O (3x40 mL)로 추출하고, pH 3으로 산성화시킨 다음, DCM (3x100 mL)에 이어서 30% IPA/DCM (2x80 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 69를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 322.9.
단계 B: 중간체 70의 제조
0℃에서 DMF (40 ml) 중 69 (2.079 g, 6.45 mmol)의 용액에 헥산 중 60% NaH (0.568 g, 14.19 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 0℃에서 50분 동안 교반하고, 이어서 알릴 브로마이드 (1.172 mL, 13.54 mmol)를 적가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 1N HCl (약 3.68 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 이어서, 용액을 EtOAc (200 mL)와 물 (100 mL) 사이에 분배하고, 유기 상을 염수 (2x100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 MeOH/DCM을 사용하여 정제하여 70을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 363.0.
단계 C: 중간체 71의 제조
DMF (30 ml) 중 70 (2.239 g, 6.18 mmol) 및 68 (1.842 g, 7.11 mmol)의 용액에 HATU (2.82 g, 7.41 mmol) 및 DIEA (2.59 ml, 14.83 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (200 mL)와 염수 (100 mL) 사이에 분배하고, 유기 상을 염수 (3x100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 EtOAc/헥산을 사용하여 정제하여 71을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 604.2.
단계 D: 중간체 72의 제조
0℃에서 CH2Cl2 (20 ml) 및 tBuOAc (30 ml) 중 71 (2.83 g, 4.69 mmol)의 용액에 메탄술폰산 (1.218 ml, 18.75 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 0℃에서 16.5시간 동안 교반한 다음, 주위 온도에서 2.5시간 동안 교반하였다. 용액 (72)을 후속 단계에 직접 사용하였다. LC/MS: (M+1)+: 504.2.
단계 E: 중간체 73의 제조
DMF (10 ml) 중 (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(3-(((tert-부톡시카르보닐)아미노)메틸)페닐)프로판산 (2.66 g, 5.16 mmol)의 용액에 HATU (1.961 g, 5.16 mmol) 및 DIEA (5.32 ml, 30.5 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 상기 제조된 72 용액의 빙냉조에 첨가하였다. 생성된 용액을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 회전 증발기 상에서 증발시키고, 잔류물을 역상 MPLC에 의해 용리 용매로서 아세토니트릴 (0.05% TFA)/물 (0.05% TFA)을 사용하여 정제하였다. 수집된 분획을 회전 증발기 상에서 농축시켜 73을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1002.1.
단계 F: 중간체 74의 제조
DCM (4 ml) 중 73 (3.235 g, 3.23 mmol)의 용액에 TFA (7.46 ml, 97 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 주위 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 DCM (10 mL) 중에 용해시키고, 디옥산 중 4N HCl (3.23 ml, 12.91 mmol)로 처리한 다음, 농축시키고, 잔류물을 아세토니트릴 (100 mL)/물 (50 mL) 중에 용해시키고, 동결건조시켜 74를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 846.1.
단계 G: 중간체 75의 제조
DMF (45 ml) 중 74 (2.85 g, 3.23 mmol)의 용액에 HATU (1.474 g, 3.88 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 주위 온도에서 30분 동안 교반한 다음, DCM (600 ml)으로 희석하고, 이어서 DIEA (1.692 ml, 9.69 mmol)를 적가하였다. 생성된 용액을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 농축시키고, 잔류물을 역상 MPLC에 의해 C18 칼럼 상에서 용리 용매로서 아세토니트릴 (0.05% TFA) / 물 (0.05% TFA)을 사용하여 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 농축시키고, 수성 층을 DCM (200 mL)과 포화 NaHCO3 (200 mL) 사이에 분배하였다. 수성 상을 DCM (2x100 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 75를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 828.1.
단계 H: 중간체 화합물 76의 제조
0℃에서 THF (60 ml), MeOH (30 ml) 및 물 (20 ml) 중 75 (1.93 g, 2.331 mmol)의 용액에 1N 수성 LiOH (9.9 ml, 9.90 mmol)를 적가하고, 생성된 용액을 0℃에서 16시간 동안 교반한 다음, HCl (1N, 9.9 mL)을 첨가하여 켄칭하였다. 휘발성 물질을 회전 증발기 상에서 증발시키고, 0℃에서 상기 용액에 아세톤 (60 ml), 탄산나트륨 (0.371 g, 3.50 mmol) 및 Fmoc-Osu (0.802 g, 2.378 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 6시간 동안 교반하고, 휘발성 물질을 회전 증발기 상에서 증발시키고, 수성 상을 pH 4로 산성화시킨 다음, 30% IPA/DCM (3x100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 MeOH/DCM을 사용하여 정제하여 76을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 814.2.
중간체 화합물 75b 및 그로부터 중간체 화합물 76B의 대안적 제조:
Figure pct00110
Figure pct00111
중간체 화합물 75의 제조에 대해 상기 기재된 일반적 절차를 일반적으로 따르되, 예외로 단계 B를 제거하고, 최종 단계 G 또한 Fmoc 보호기를 Boc 보호기로 대체하는 것을 포함하여, 중간체 화합물 75a를 수득하였다. 75a 및 76B에 대한 절차는 하기 기재된다.
단계 C: 중간체 화합물 71a의 제조
-50℃에서 DMF (40.0 mL) 중 69 (5.00 g, 15.5 mmol)의 용액에 68, HATU (5.90 g, 15.5 mmol) 및 DIEA (4.01 g, 31.0 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 -50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 최종 용액을 물 (5 mL)로 켄칭하고, 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 칼럼 크로마토그래피에 의해 C18 상에서 정제하여 (아세토니트릴/물 + 0.01% 중탄산암모늄의 구배로 용리시킴) 71a를 수득하였다. LCMS (ESI) C28H38FN3O8 [M + H]+ 계산치: 564.3, 실측치: 564.2.
단계 D: 중간체 화합물 72a의 제조
실온에서 디옥산 (100 mL) 및 THF (100 mL) 중 2 N HCl의 용액에 71a (8.40 g, 14.9 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 최종 용액을 감압 하에 농축시켜 72a를 수득하였다. LCMS (ESI) C23H31ClFN3O6 [M - HCl + H]+ 계산치: 464.2, 실측치: 464.3.
단계 E: 중간체 화합물 73a의 제조
-50℃에서 DMF (10.0 mL) 중 72a (800 mg, 1.60 mmol)의 용액에 (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(3-(((tert-부톡시카르보닐)아미노)메틸)페닐)프로판산 (827 mg, 1.60 mmol), HATU (608 mg, 1.60 mmol) 및 DIEA (620 mg, 4.80 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 -50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 물 (50 mL)로 희석하고, 수성 층을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (PE 중 EtOAc의 1%-60% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 73a를 수득하였다. LCMS (ESI) C53H60FN5O11 [M + H]+ 계산치: 962.4, 실측치: 962.6.
단계 F: 중간체 화합물 74a의 제조
실온에서 DCM (15.0 mL) 중 73a (3.00 g, 3.12 mmol)의 용액에 TFA (15.0 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 감압 하에 농축시키고, 톨루엔 및 DCM으로 공-증발시켜 74a를 수득하였다. LCMS (ESI) C46H45F4N5O11 [M - TFA + H]+ 계산치: 806.3, 실측치: 806.7.
단계 G: 중간체 화합물 75a의 제조
실온에서 DMF (150 mL) 중 74a (4.00 g, 4.35 mmol)의 용액에 HATU (1.65 g, 4.35 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 0.5시간 동안 교반하였다. 용액을 DCM (450 mL) 및 DIEA (1.69 g, 13.1 mmol)로 희석한 다음, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 물 (5 mL)로 켄칭하고, 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 역상 칼럼 크로마토그래피에 의해 C18 상에서 정제하여 (아세토니트릴/물 + 0.05% TFA의 구배로 용리시킴) Fmoc-보호된 중간체를 수득하였다. LCMS (ESI) C44H42FN5O8 [M + H]+ 계산치: 788.3, 실측치: 788.9.
실온에서 DCM (5.00 mL) 중 바로 위의 Fmoc-보호된 중간체 (200 mg, 0.250 mmol)의 용액에 피페리딘 (1.25 mL)을 첨가하고, 반응 용액을 1시간 동안 교반하였다. 최종 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%-5% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 아민 중간체를 수득하였다. LCMS (ESI) C29H32FN5O6 [M + H]+ 계산치: 566.2, 실측치: 566.3.
실온에서 THF (30.0 mL) 및 물 (30.0 mL) 중 바로 위의 아민 중간체 (2.86 g, 5.06 mmol)의 용액에 Boc2O (2.21 g, 10.1 mmol) 및 중탄산나트륨 (1.70 g, 20.2 mmol)을 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 교반하였다. 최종 용액을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3 x 100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%-5% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 75a를 수득하였다. LCMS (ESI) C34H40FN5O8 [M + H]+ 계산치: 666.3, 실측치: 666.5; 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.35-7.08 (m, 6H), 6.95-6.79 (m, 2H), 5.01-4.91 (m, 1H), 4.72-4.56 (m, 2H), 4.45-4.38 (m, 1H), 4.45-4.38 (m, 5H), 3.69 (s, 3H), 3.32-2.92 (m, 5H), 2.14-1.82 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
단계 H: 중간체 화합물 75b의 제조
DMF (0.5 mL) 중 75a (0.665 g, 0.99 mmol)의 용액에 0℃에서 Cs2CO3 (1.11 g, 3.40 mmol) 및 3-브로모프로프-1-엔 (0.43 g, 3.55 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 5 mL의 50% 포화 염수/10% 시트르산 용액에 부은 다음, 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수 (3 x 20 mL)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM 중 MeOH의 1%-5% 구배로 용리시키면서 정제하였다. 중간체 화합물 75b를 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. LCMS (ESI) C37H44FN5O8 [M + H]+ 계산치: 706.3, 실측치: 706.3.
단계 I: 중간체 화합물 76B의 제조
중간체 93의 제조에 기재된 것과 유사한 조건을 따라 LiOH에 의한 75b의 가수분해를 수행하여 76B를 수득하였다.
중간체 77B의 제조
Figure pct00112
단계 A: 중간체 77A의 제조
0℃에서 DMF (140 ml) 중 (S)-1-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (6.16 g, 17.54 mmol) 및 tert-부틸 4-(2-아미노에틸)벤질카르바메이트 히드로클로라이드 (5.03 g, 17.54 mmol)의 용액에 HATU (8.00 g, 21.05 mmol) 및 DIPEA (9.16 ml, 52.6 mmol)를 첨가한 다음, 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 2시간 동안 교반하였다. 최종 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출하고, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산 중 EtOAc의 0-60% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 77A를 수득하였다. MS (ESI): m/z (M+H)+ 584.5.
단계 B: 중간체 77B의 제조
DCM (40 ml) 중 77A (8.92 g, 15.28 mmol)의 용액에 디옥산 중 HCl 4N (15.28 ml, 61.1 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 77B를 수득하였다. MS (ESI): m/z (M+H)+ 484.3.
중간체 86의 제조
Figure pct00113
Figure pct00114
단계 A: 중간체 77의 제조
0℃에서 DCM (140 ml) 중 (S)-(9H-플루오렌-9-일)메틸 2-((4-(아미노메틸)페네틸)카르바모일)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 히드로클로라이드 (77B) (5.87 g, 11.29 mmol)의 용액에 DIEA (5.91 ml, 33.9 mmol) 및 CBZ-Cl (1.726 ml, 11.85 mmol)을 적가하고, 생성된 용액을 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 물 (200 mL)과 DCM (200 mL) 사이에 분배하고, 수상을 DCM (100 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 EtOAc/헥산을 사용하여 정제하여 77을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 618.3.
단계 B: 중간체 78의 제조
THF (100 ml), 물 (50 ml) 및 MeOH (30 ml) 중 77 (5.56 g, 9.00 mmol)의 용액에 1N 수성 NaOH (45.0 ml, 45.0 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 증발시키고, 수용액에 디옥산 (200 ml) 및 디옥산 (20 mL) 중 Boc2O (2.508 ml, 10.80 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃ 내지 실온에서 밤새 교반하였다. 휘발성 물질을 회전 증발기 상에서 증발시키고, 수성 상을 DCM (3x150 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 EtOAc/헥산을 사용하여 정제하여 78을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 496.2.
단계 C: 중간체 79의 제조
MeOH (100 ml) 중 78 (4.04 g, 8.15 mmol)의 용액에 10% Pd/C (0.867 g, 0.815 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 H2 풍선을 통해 수소화시켰다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켜 79를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 362.2.
단계 D: 중간체 80의 제조
DMF (15 ml) 중 79 (2.58 g, 7.14 mmol)의 용액에 펜트-4-엔-1-일 4-메틸벤젠술포네이트 (0.858 g, 3.57 mmol) 및 K2CO3 (1.973 g, 14.27 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃에서 6시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 여과하고, 여과물을 역상 MPLC에 의해 용리 용매로서 아세토니트릴 (0.05% TFA)/ 물 (0.05% TFA)을 사용하여 정제하여 생성물을 TFA 염으로서 수득하였으며, 이를 추가로 DCM (100 mL)과 1N 수성 NaOH (50 mL) 사이에 분배하였다. 수성 상을 추가로 DCM (2x50 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 80을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 430.3.
단계 E: 중간체 81의 제조
DMF (15 ml) 중 80 (0.95 g, 2.211 mmol)의 용액에 4-메톡시-4-옥소부탄산 (0.321 g, 2.433 mmol), HATU (1.009 g, 2.65 mmol) 및 DIEA (0.927 ml, 5.31 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 EtOAc (200 mL)와 염수 (100 mL) 사이에 분배하고, 유기 상을 염수 (2x100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 EtOAc/헥산을 사용하여 정제하여 81을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 544.2.
단계 F: 중간체 82의 제조
DCM (12 ml) 중 81 (1.165 g, 2.143 mmol)의 용액에 HCl (디옥산 중 4N) (5.36 ml, 21.43 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 혼합물을 농축시켜 82를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 444.2.
단계 G: 중간체 83의 제조
DMF (20 ml) 중 82 (1.003 g, 2.089 mmol)의 용액에 Fmoc-L-Tyr(Me)-OH (0.959 g, 2.298 mmol), HATU (0.914 g, 2.403 mmol) 및 DIEA (1.095 ml, 6.27 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 50분 동안 교반하였다. 용액을 EtOAc (200 mL)와 염수 (100 mL) 사이에 분배하고, 유기 상을 염수 (2x100 mL)로 세척하고, 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 EtOAc/헥산을 사용하여 정제하여 83을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 843.4.
단계 H: 중간체 84의 제조
아세토니트릴 (10 ml) 중 83 (1.63 g, 1.934 mmol)의 용액에 피페리딘 (0.574 ml, 5.80 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴 (20 mL) 중에 재현탁시키고, 다시 농축시키고, 사이클을 1회 반복하고, 잔류물을 추가로 고진공 하에 건조시켜 84를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 621.3.
단계 I: 중간체 85의 제조
DMF (15 ml) 중 84 (1.2 g, 1.933 mmol)의 용액에 Fmoc-L-Thr(tBu)-OH (0.922 g, 2.320 mmol), HATU (0.919 g, 2.416 mmol) 및 DIEA (0.844 ml, 4.83 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 EtOAc (200 mL)와 염수 (100 mL) 사이에 분배하고, 유기 상을 염수 (2x100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 용리 용매로서 EtOAc/헥산을 사용하여 정제하여 85를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1000.2.
단계 J: 중간체 86의 제조
아세토니트릴 (20 ml) 중 이전 단계에서 제조된 85 (1.94 g, 1.940 mmol)의 용액에 피페리딘 (0.960 ml, 9.70 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 DCM/아세토니트릴 (1:1, 20 mL) 중에 재용해시킨 다음, 다시 농축시키고, 사이클을 1회 반복하고, 잔류물을 고진공 하에 건조시켜 86을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 778.3.
중간체 88의 제조
Figure pct00115
단계 A - 중간체 87의 합성
2-클로로-2-클로로트리틸 수지 1-1.5 mmol/g (7.0 g, 1-1.5 mmol/g)에 건조 DCM (45 ml)을 첨가하였다. 수지를 20분 동안 진탕시키고, 이어서 DCM 중 DIPEA 0.17 N의 절반 (3.67 ml, 21.00 mmol), Fmoc-D-Dap(Boc)-OH (3.28 g, 7.70 mmol), 그 다음 DCM 중 DIPEA 0.17 N의 나머지 (3.67 ml, 21.00 mmol)를 첨가하였다. 수지를 실온에서 밤새 진탕시키고, DCM으로 헹구고, 건조시켰다. 이어서, 수지를 DCM (80 mL) 중 5% DIPEA 및 10% MeOH로 켄칭하고, 2시간 동안 진탕시킨 다음, 여과하고, DCM (3x), DMF (3x) 및 DCM (3x)으로 헹군 다음, 진공 하에 건조시켜 수지 87을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 그대로 사용하였다.
단계 B - 중간체 88의 합성
수지 87 (4.5 g, 2.475 mmol)을 DMF (30 ml) 중 5% 피페리딘으로 30분 동안 수동으로 탈보호하고, 여과하고, DMF (30 ml) 중 5% 피페리딘으로 추가 30분 동안 재처리하고, 여과한 다음, DMF 및 DCM으로 헹구고, 건조시켰다. 이어서, 수지를 DMF (30 ml) 중 Fmoc-Ala-OH (1.541 g, 4.95 mmol), HATU (1.694 g, 4.46 mmol) 및 DIPEA (1.729 ml, 9.90 mmol)와 2시간 동안 수동으로 커플링시킨 다음, 여과하고, DMF 및 DCM으로 헹군 다음, 건조시켰다. 이어서, 수지를 DCM (60 ml) 중 10% AcOH 및 TFE로 90분 동안 처리하고, 여과하고, 여과물을 농축시켜 88을 수득하였다. LC/MS: [2M+H]+ = 995.01.
실시예 1A - Ex-01의 대안적 합성 및 그로부터 Ex-25의 제조:
상기 제시된 화합물 Ex-01은 대안적으로 제조할 수 있고, 화합물 Ex-25는 하기 반응식에 따라 Ex-01로부터 제조할 수 있다:
Figure pct00116
Figure pct00117
Figure pct00118
Figure pct00119
단계 A - 중간체 Int-cd1의 합성
0℃에서 DMF (45 ml) 중 Int-3c (하기 기재된 중간체 107로부터 합성) (7.09 g, 10.33 mmol)의 용액에 Int-2d (3.63 g, 9.84 mmol, 하기 기재된 제제) 및 HATU (3.74 g, 9.84 mmol)에 이어서 DMF 중 DIPEA (6.87 ml, 39.4 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 염수로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 1%에서 80% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-cd1을 수득하였다. LC/MS: [M+1]+ = 1000.5.
단계 B - 중간체 Int-cd2의 합성
아세토니트릴 (50 ml) 중 Int-cd1 (3.48 g, 3.48 mmol)의 용액에 피페리딘 (1.72 ml, 17.40 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DCM/아세토니트릴 (1:1, 20 mL) 중에 재용해시키고, 다시 농축시키고, 잔류물을 진공 하에 건조시켜 Int-cd2를 조 생성물로서 수득하였다. LC/MS: (M+1)+=778.5.
단계 C - 중간체 Int-cd3의 합성
0℃에서 DMF (70 ml) 중 76 (상기 실시예 1에 제시된 제제) (2.45 g, 3.01 mmol) 및 Int-cd2 (2.69 g, 3.46 mmol)의 용액에 HATU (1.37 g, 3.61 mmol)에 이어서 DIEA (1.05 ml, 6.02 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 50분 동안 교반한 다음, EtOAc (500 mL)와 염수 (200 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 염수 (2x200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 1% - 5% MeOH의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-cd3을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+=1574.7.
단계 D - 중간체 Int-cd4의 합성
DCM (1500 ml) 및 아세트산 (30 mL) 중 Int-cd3 (1.91 g, 1.21 mmol)의 실온 용액을 N2로 30분 동안 버블링한 다음, 잔 촉매-1B (0.445 g, 0.607 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 N2로 추가로 버블링한 다음, 55℃에서 5시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하고, 여과물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 1% - 5% MeOH의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-cd4 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물로서)를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+=1546.8.
단계 E - 중간체 Int-cd5의 합성
DCM (20 ml) 및 아세토니트릴 (50 ml) 중 Int-cd4 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물) (5.49 g, 3.55 mmol)의 용액에 피페리딘 (1.76 ml, 17.8 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, 잔류물을 아세토니트릴 (20 ml) 중에 현탁시키고, 다시 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 진공 하에 건조시켜 Int-cd5 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물로서)를 조 혼합물로서 수득하였다. LC/MS: (M+1)+=1323.8.
단계 F - 중간체 Int-cd6의 합성
0℃에서 DMF (70 ml) 중 Int-cd5 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물) (4.70 g, 3.55 mmol) 및 Int-1d (2.21 g, 4.44 mmol, 하기 기재된 제제)의 용액에 HATU (1.76 g, 4.62 mmol) 및 DIEA (1.55 ml, 8.88 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반한 다음, EtOAc (300 mL)와 염수 (200 mL) 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc (200 mL)로 추출하고, EtOAc 상을 합하고, 염수 (3x200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 1% - 5% MeOH의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-cd6 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물로서)을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+= 1802.8
단계 G - 중간체 Int-cd7의 합성
0℃에서 THF (100 ml), MeOH (30 ml) 및 물 (30 ml) 중 Int-cd6 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물로서) (5.41 g, 3.00 mmol)의 용액에 1N 수성 LiOH (24.0 ml, 24.0 mmol)를 적가하고, 생성된 용액을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 1N HCl의 첨가에 의해 중화시키고, 휘발성 물질을 증발시키고, 수성 층을 1N HCl에 의해 pH 5로 중화시켰다. 이어서, 혼합물을 동결시키고, 동결건조시키고, 잔류물을 C18 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (아세토니트릴 (0.05% TFA)/물 (0.05% TFA)의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-cd7 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물로서)을 TFA 염으로서 수득하였다. 아세토니트릴 (750 mL) 및 물 (450 mL) 중 이렇게 수득된 Int-cd7 TFA 염 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물로서)에 0℃에서 0.1N 수성 HCl (150 ml, 15.00 mmol)을 적가한 다음, 생성된 용액을 0℃에서 5분 동안 교반하고, 동결시키고, 동결건조시켜 Int-cd7을 HCl 염 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물로서)으로서 수득하였다. LC/MS: (M+1)+=1566.6.
단계 H - 중간체 Int-cd8의 합성
DMF (50 ml) 및 DCM (1300 ml) 중 이전 단계로부터 수득된 Int-cd7 HCl 염 (1.01 g, 0.630 mmol)의 용액에 DIEA (0.330 ml, 1.890 mmol) 및 HATU (0.287 g, 0.756 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 휘발성 물질을 증발시키고, 잔류물을 EtOAc (400 mL)와 염수 (200 mL) 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc (300 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 (3x100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 1% - 10% MeOH의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-cd8 (시스 및 트랜스 올레핀의 혼합물로서)을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+=1548.8.
단계 I - 중간체 Int-cd9의 합성
MeOH (100 ml) 중 이전 단계에서 수득된 Int-cd8 (1.22 g, 0.788 mmol)의 용액에 10% Pd/C (0.645 g, 0.607 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 주위 온도에서 7시간 동안 H2 풍선을 통해 수소화시켰다. 7시간 후, 반응물을 셀라이트 상에서 여과하고, 여과물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 1% - 10% MeOH의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-cd9를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+=1550.9.
단계 J - -HCl 염으로서의 화합물 Ex-01의 합성
DCM (6 ml) 중 Int-cd9 (1.14 g, 0.735 mmol)의 용액에 TFA (12 ml, 156 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 주위 온도에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DCM (20 mL) 및 톨루엔 (20 mL) 중에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DCM (20 mL) 중에 재용해시키고, HCl (디옥산 중 4N) (0.919 ml, 3.68 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 생성물을 고체로서 수득하였다. 이 고체 생성물을 아세토니트릴 (200 mL) 및 물 (100 mL) 중에 재용해시키고, 0℃에서 상기 용액에 1N 수성 HCl (3.68 ml, 3.68 mmol)을 적가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 2분 동안 교반한 다음, 동결시키고, 동결건조시켜 Ex-01을 -HCl 염으로서 수득하였다. LC/MS: (M+1)+=1394.7.
단계 K - TFA 염으로서의 실시예 Ex-25의 합성
DMF (1.2 ml) 및 물 (0.6 ml) 중 Ex-01 HCl 염 (870 mg, 0.608 mmol) 및 Int-4b (170 mg, 0.669 mmol, 하기 기재된 제제)의 용액에 HATU (254 mg, 0.669 mmol) 및 DIEA (425 μl, 2.433 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 1.2 mL 물의 첨가에 의해 켄칭하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 C18 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (아세토니트릴 (0.05% TFA)/물 (0.05% TFA)의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Ex-25를 TFA 염으로서 수득하였다. LC/MS: M+= 1550.6.
단계 L - Cl 염으로서의 실시예 Ex-25의 제조
2개의 칼럼 내에 73.6 g의 AG MP-1 이온 교환 수지 클로라이드 형태 (cat# 141-1841 바이오-라드)를 패킹하여 각 칼럼당 총 36.8 g의 수지가 되도록 하였다. 각각의 칼럼을 물 (2x80 ml), 이어서 물 중 20% 아세토니트릴 (2x100 ml)로 세척하였다. 물 중 20% 아세토니트릴 (100 mL) 중 이전 단계에서 제조된 Ex-25 TFA 염 (737 mg, 0.443 mmol)의 용액을 2개의 수지 칼럼 상에 고르게 로딩한 다음, 각각의 칼럼을 물 중 20% 아세토니트릴 (130 ml)로 용리시켰다. 용리액을 합하고, 동결시키고, 동결건조시켜 Ex-25를 클로라이드 염으로서 수득하였다. LC/MS: M+ = 1550.6.
바로 위에 기재된 Ex-01 및 Ex-25의 합성에 유용하게 사용되는 다수의 중간체의 설명이 이어진다.
중간체 Int-1d의 제조
중간체 화합물 Int-1d를 하기 반응식에 따라 출발 물질로부터 제조하였다:
Figure pct00120
단계 A - Int-1da의 합성
0℃에서 DMF (40 ml) 중 D-Dap(Boc)-OMe HCl 염 (4.10 g, 16.10 mmol), Fmoc-Ala-OH (5.01 g, 16.10 mmol) 및 HATU (6.43 g, 16.90 mmol)의 용액에 DIPEA (7.03 ml, 40.2 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 밤새 냉장고에 보관하였다. 혼합물을 실온에서 물로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 절반으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-1da를 수득하였다. LC/MS: [M+H]+= 512.3.
단계 B - Int-1d의 합성
실온에서 물 (40 ml) 및 2-프로판올 (120 ml) 중 Int-1da (8.03 g, 15.70 mmol) 및 0.8 N 염화칼슘 (19.62 ml, 15.70 mmol)의 용액에 고체 수산화나트륨 (0.691 g, 17.27 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 혼합물을 농축시키고, 0.5 N으로 pH ~2로 산성화시키고 (~40 mL), EtOAc로 3회 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 C18 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (아세토니트릴/물 + 0.1% TFA의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-1d를 수득하였다. LC/MS: [M+H]+ = 498.25.
Ex-01 및 Ex-25의 제조에 사용하기 위한 중간체 Int-1d의 제조가 상기 기재되어 있다. 분자의 이러한 부분은 저급 펩티드 고리를 고급 펩티드 고리로 고리화시키는 "링커"로서 기재될 수 있다. Dap 및 D-Ala 사용을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 합성에 사용되는 스페이서를 달리함으로써 Int-1d 대신 다른 유사한 "링커"를 사용할 수 있다.
중간체 Int-2d의 제조
본 발명의 화합물의 제조에서 "링커"로서 유용한 중간체 Int-2d를 하기 반응식에 따라 제조하였다:
Figure pct00121
단계 A - Int-2da의 합성
탈기된 톨루엔 (250 ml) 및 물 (85 ml) 중 4-브로모벤즈알데히드 (15.00 g, 81 mmol), 포타슘 tert-부틸 N-[2-(트리플루오로보라누이딜)에틸]카르바메이트 (20.97 g, 84 mmol), 탄산세슘 (52.8 g, 162 mmol) 및 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(ii)디클로라이드 디클로로메탄 착물 (Pd(II)(dppf)Cl2, 1.99 g, 2.43 mmol)의 용액을 76℃로 가온하고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온에서 반-포화 수성 염화암모늄으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM/EtOAc의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2da를 수득하였다. LC/MS: (M-56+1)+= 193.0.
단계 B - Int-2db의 합성
수조 내 실온에서 DCM (120 ml) 및 AcOH (3 ml) 중 Int-2da (12.9 g, 51.7 mmol) 및 펜트-4-엔-1-아민 (6.61 g, 78 mmol)의 용액에 소듐 트리아세톡시히드로보레이트 (32.9 g, 155 mmol)를 조금씩 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 3 ml의 물로 천천히 켄칭하고, 1 N NaOH (500 ml)에 붓고, 15분 동안 교반한 다음, DCM으로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2db를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+= 319.2.
단계 C - Int-2dc의 합성
DMF (40 ml) 중 Int-2db (8.48 g, 20.77 mmol) 및 4-메톡시-4-옥소부탄산 (3.02 g, 22.85 mmol)의 용액에 HATU (9.48 g, 24.92 mmol) 및 DIPEA (8.71 ml, 49.8 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 수성 포화 NaHCO3 (10 mL)로 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc (500 mL)와 수성 포화 NaHCO3 (200 mL) 사이에 분배하고, 유기 상을 염수 (3x200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 상에서 (헥산/EtOAc의 구배로 용리시킴) 정제하여 Int-2dc를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+= 433.4.
단계 D - Int-2d의 합성
DCM (15 mL) 중 Int-2dc (2.9 g, 6.70 mmol)의 용액에 실온에서 디옥산 중 4 M HCl (10 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 메틸 4-((4-(2-아미노에틸)벤질)(펜트-4-엔-1-일)아미노)-4-옥소부타노에이트 히드로클로라이드 (Int-2d)를 수득하였다. LC/MS [M-HCl + H]+ = 333.3.
상기 기재된 Ex-01 및 Ex-25의 합성에 사용된 107로부터의 Int-3c의 제조
중간체 Int-3c를 하기 반응식에 따라 제조하였다:
Figure pct00122
단계 A - Int-3ca의 합성
실온에서 THF (100 ml) 중 107 (이의 제조는 109의 합성에 제시되어 있고, 이후 116에 사용됨, 이 중간체 화합물은 하기 실시예 3에서 Ex-53, Ex-54 및 Ex-55의 합성에 사용됨) (10.34 g, 21.65 mmol)의 용액에 2 N 수산화리튬 1수화물 (43.3 ml, 87 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 45℃로 가온하고, 밤새 교반하여 Int-3ca를 조 용액으로서 수득하였다. LC/MS: (M+1)+=464.3. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 1 M HCl (40 mL)로 처리하였다. 혼합물을 후속 단계에 직접 사용하였다.
단계 B - Int-3c의 합성
이전 단계에서 제조된 조 Int-3ca에 0℃에서 NaHCO3 (1.725 g, 20.54 mmol) 및 Fmoc-OSu (3.81 g, 11.30 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 1 M HCl (20.5 mL)로 처리하고, 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2 x 100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM 중 2%에서 5% MeOH의 구배로 용리시키면서 정제하여 Int-3c를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+ = 686.4.
중간체 Int-4b의 제조
중간체 Int-4b를 하기 반응식에 따라 제조하였다:
Figure pct00123
단계 A - tert-부틸-3-(2-히드록시에톡시)프로피오네이트로부터 Int-4ba의 합성
DCM (2 mL) 중 tert-부틸 3-(2-히드록시에톡시)프로파노에이트 (500.0 mg, 2.63 mmol)의 용액에 0℃에서 CBr4 (1395 mg, 4.21 mmol) 및 PPh3 (965 mg, 3.68 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 에틸 아세테이트의 1% - 15% 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 tert-부틸 6-브로모헥사노에이트를 수득하였다. 이렇게 제조된, 아세토니트릴 (10 ml) 중 tert-부틸 6-브로모헥사노에이트 (5 g, 19.91 mmol)의 용액을 트리메틸아민 (13.56 ml, 59.7 mmol)으로 처리하고, 생성된 용액을 50℃에서 밤새 가열하였다. 용액을 농축시켜 Int-4ba를 수득하였다. LC/MS: M+ = 230.3.
단계 B - Int-4b의 합성
DCM (6 ml) 중 Int-4ba (6.8 g, 21.92 mmol)의 용액에 디옥산 중 4N HCl (27.4 ml, 110 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축시켜 Int-4b를 수득하였다. LC/MS: M+= 174.3.
Ex-01 및 Ex-25의 제조에 사용하기 위한 중간체 Int-2d의 제조가 상기 기재되어 있다. 분자의 이러한 부분은 R1, R2 및 R8 치환기를 보유하는 저급 펩티드 고리를 고리화하는 "링커"로서 기재될 수 있다. 다른 유사한 "링커"가 Int-2d 대신에 사용될 수 있다. 하기는 본원에 기재된 본 발명의 실시예를 제조하는데 사용될 수 있는 다른 "링커"의 기재이다.
중간체 Int-2e의 제조
본 발명의 화합물의 제조에서 "링커"로서 유용한 중간체 Int-2e를 하기 반응식에 따라 제조하였다:
Figure pct00124
단계 A - 중간체 Int-2ea의 합성
DCE (20 mL) 중 tert-부틸 (2-(3-옥소이소인돌린-5-일)에틸)카르바메이트 (1.60 g, 5.79 mmol)의 용액에 NsCl (1.93 g, 8.69 mmol), 트리에틸아민 (1.76 g, 17.4 mmol) 및 DMAP (0.141 g, 1.16 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (PE 중 EtOAc의 1%-40% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2ea를 수득하였다. LC/MS: (M+Na)+:= 484.4.
단계 B - 중간체 Int-2eb의 합성
THF (100 mL) 및 물 (100 mL) 중 Int-2ea (11.3 g, 24.5 mmol)의 용액에 LiOH (1.76 g, 73.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반한 다음, 생성된 용액을 HCl (1M)에 의해 pH 4~5로 조정하였다. 용액을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 1%-6% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2eb를 수득하였다. LC/MS: (M+Na)+:= 502.2.
단계 C - 중간체 Int-2ec의 합성
THF (8 mL) 중 Int-2eb (1.70 g, 3.55 mmol)의 용액에 0℃에서 보란 (0.147 g, 10.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반한 다음, 생성된 용액을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (PE 중 EtOAc의 1%-50% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2ec를 수득하였다. LC/MS: (M+NH4)+= 483.2.
단계 D - 중간체 Int-2ed의 합성
DMF (150 mL) 중 Int-2ec (4.50 g, 9.67 mmol)의 용액에 K2CO3 (2.01 g, 14.5 mmol) 및 3-브로모프로프-1-엔 (1.41 g, 11.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (PE 중 EtOAc의 1%-50% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2ed를 수득하였다. LC/MS: (M+H)+:= 506.2.
단계 E - 중간체 Int-2e의 합성
DMF (35 mL) 중 Int-2ed (4.50 g, 8.90 mmol)의 용액에 DBU (1.35 g, 8.90 mmol) 및 2-메르캅토에탄올 (2.08 g, 26.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반한 다음, C18 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (칼럼: 330 g; 이동상 A: 물/0.05% TFA, 이동상 B: ACN; 유량: 85 mL/분; 구배: 15분간 10% B에서 20% B, 15분간 20% B에서 45% B; 검출기: UV 210 nm; Rt=20분)에 의해 정제하여 Int-2e를 수득하였다. LC/MS: (M+H)+:= 321.2. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.21-7.13 (m, 2H), 7.10-7.01 (m, 1H), 5.96-5.79 (m, 1H), 5.30-5.09 (m, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.43-3.19 (m, 4H), 2.76 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H).
중간체 Int-2f-1의 제조
본 발명의 화합물의 제조에서 "링커"로서 유용한 중간체 Int-2f-1을 하기 반응식에 따라 제조하였다:
Figure pct00125
Figure pct00126
단계 A - 중간체 Int-2fa의 합성
DCM (225 mL) 중 4-브로모벤즈알데히드 (20.0 g, 108 mmol), (S)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (12.5 g, 103 mmol), MgSO4 (130 g, 1081 mmol)의 용액에 질소 보호 하에 피리딘 4-메틸벤젠술포네이트 (1.35 g, 5.40 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물을 25℃에서 72시간 동안 교반한 다음, 생성된 용액을 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (PE 중 EtOAc의 1%-15% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2fa를 수득하였다. LC/MS: (M+H)+:= 287.9, 289.9.
단계 B - 중간체 Int-2fb (라세미체)의 합성 및 거울상이성질체 Int-2fb-1 및 Int-2fb-2로의 분리
건조 DCM (200 mL) 중 Int-2fa (20.0 g, 65.9 mmol)의 용액에 질소 보호 하에 -48℃에서 부트-3-엔-1-일마그네슘 브로마이드 (15.7 g, 99 mmol)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 -48℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 포화 NH4Cl (400 mL) 수용액으로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물 (Int-2fb 라세미 혼합물 함유)을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (PE 중 EtOAc의 1%-35% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2fb-1 및 Int-2fb-2를 수득하였다. LC/MS: (M+H)+:= 344.0, 346.0.
단계 C - 중간체 Int-2fc-1의 합성
실온에서 HCl의 용액 (100 mL, 1,4-디옥산 중 4 N)에 Int-2fb-1 (17.0 g, 46.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 1시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켜 Int-2fc-1을 수득하였다. LC/MS: (M+H-HCl)+:= 240.0, 242.0.
단계 D - 중간체 Int-2fd-1의 합성
1,4-디옥산 (200 mL) 중 Int-2fc-1 (8.20 g, 28.2 mmol) 및 Teoc-OSu (8.03 g, 31.0 mmol)의 용액에 25℃에서 TEA (8.55 g, 84 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물을 2시간 동안 교반한 다음, 물로 켄칭하고, 석유 에테르 (PE)로 추출하였다. 합한 유기 층을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (PE 중 EtOAc의 1%-10% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2fd-1을 수득하였다. LC/MS: (M+Na+CH3CN)+:= 447.3, 449.3.
단계 E - 중간체 Int-2fe-1의 합성
톨루엔 (285 mL) 및 물 (95 mL) 중 Int-2fd-1 (15.1 g, 37.3 mmol), 포타슘 (2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에틸) 트리플루오로보레이트 (18.7 g, 74.6 mmol), Cs2CO3 (36.5 g, 112 mmol)의 용액에 질소 보호 하에 PdCl2(dppf) (1.37 g, 1.87 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 40시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 물로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (PE 중 EtOAc의 1%-40% 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2fe-1을 수득하였다. LC/MS: (M+Na)+:= 471.4.
단계 F - 중간체 Int-2f-1의 합성
THF (100 mL) 중 Int-2fe1 (10.6 g, 22.4 mmol)의 용액에 THF 중 1N TBAF (44.9 mL, 44.9 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 물로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (PE 중 EtOAc의 1%-70% 구배로 용리시킴)에 이어서 C18 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (칼럼: 330 g; 이동상 A: 물 (10 mm NH4HCO3), 이동상 B: ACN; 유량: 80 mL/분; 구배: 10분간 10% B에서 10% B, 10분간 20% B에서 45% B, 20분간 45% B에서 70% B; 검출기: UV 210 nm; Rt= 25분)에 의해 정제하여 Int-2f-1을 수득하였다. LC/MS: (M+H)+:= 305.1. 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.27-7.16 (m, 4H), 5.85-5.75 (m, 1H), 5.00-4.85 (m, 2H), 3.79 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.32-3.21 (m, 2H), 2.75 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.98-1.72 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).
실시예 2 Ex-50 및 Ex-52의 제조
Figure pct00127
화합물 Ex-50은 하기 반응식에 따라 화합물 Ex-01 (이의 제조는 본원 실시예 1에 기재되어 있음)로부터 이를 중간체 Int 32 (하기 반응식에 따라 제조됨)와 적절한 조건 하에 반응시켜 제조된다.
Figure pct00128
단계 A: 중간체 Int-32A의 제조
아세토니트릴 (10 ml) 중 tert-부틸 3-(2-(2-브로모에톡시)에톡시)프로파노에이트 (5 g, 16.82 mmol)의 용액에 트리메틸아민 (에탄올 중 33%, 11.46 ml, 50.5 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 50℃에서 밤새 가열하였다. 용액을 농축시켜 2-(2-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로폭시)에톡시)-N,N,N-트리메틸에탄아미늄 브로마이드 (Int 32A)를 수득하였다. LC/MS: (M)+: 276.5.
단계 B: 중간체 Int-32의 제조
DCM (20 ml) 중 2-(2-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로폭시)에톡시)-N,N,N-트리메틸에탄아미늄 브로마이드 (Int-32A) (5.99 g, 16.81 mmol)의 용액에 HCl (디옥산 중 4N) (21.01 ml, 84 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 용액을 농축시켜 2-(2-(2-카르복시에톡시)에톡시)-N,N,N-트리메틸에탄아미늄 브로마이드 (Int-32)를 수득하였다. LC/MS: (M)+: 220.1.
실시예 화합물 Ex-50의 제조
Figure pct00129
DMF (2 ml) 중 Ex-01 (조 물질) (17.4 mg, 0.012 mmol) 및 2-(2-(2-카르복시에톡시)에톡시)-N,N,N-트리메틸에탄아미늄 브로마이드 (Int-32) (4.49 mg, 0.015 mmol)의 용액에 HATU (5.69 mg, 0.015 mmol) 및 DIEA (6.54 μl, 0.037 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 50분 동안 교반한 다음, 역상 HPLC에 의해 이동상으로서 아세토니트릴 (0.1% 포름산)/물 (0.1% 포름산)을 사용하여 정제하여 Ex-50을 수득하였다. LC/MS: M+ = 1596.3.
실시예 화합물 Ex-52의 제조
화합물 Ex-52를 화합물 Ex-50의 제조와 유사한 방식으로, 그러나 Ex-01 대신에 Ex-51을 사용하여 제조하였다. Ex-52를 본원에 기재된 방법에 따라 역상 HPLC를 사용하여 정제하였다. LC/MS: M+ = 1593.8.
실시예 3 Ex-53, Ex-54 및 Ex-55의 제조
Figure pct00130
Figure pct00131
화합물 Ex-53, Ex-54 및 Ex-55를 하기 반응식 및 합성 설명에 따라 중간체 115 (하기 기재된 제제)로부터 상기 기재된 화합물과 유사한 방식으로 제조하였다:
Figure pct00132
단계 A - 중간체 116의 합성
0℃에서 DMF (1.5 ml), DCM (10 ml) 및 물 (0.5 ml) 중 115 (66.3 mg, 0.044 mmol)의 용액에 DIPEA (0.030 ml, 0.173 mmol)에 이어서 HATU (18.50 mg, 0.049 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, C18 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (30 g, 아세토니트릴+0.05% TFA/물+0.05% TFA 90:10에서 40:60으로 용리시킴)에 의해 직접 정제하여 116을 E 및 Z 이성질체의 혼합물로서 뿐만 아니라 116을 E 또는 Z 이성질체의 순수한 분획으로서 수득하였다. LC/MS (주요 이성질체) LC/MS: M+ = 1481.19; LC/MS (부차 이성질체): LC/MS: M+ = 1480.
단계 B - 화합물 Ex-54의 합성
MeOH (10 ml) 중 116 (25.1 mg, 0.017 mmol) 및 Pd-C 10% (3.61 mg, 3.39 μmol)의 용액을 1 atm에서 1시간 동안 수소화시켰다. 반응물을 셀라이트 상에서 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM/TFA 1:1로 30분 동안 처리한 다음, 농축시키고, 디옥산 중 4N HCl (100 uL)로 처리한 다음, 농축시켜 Ex-54를 HCl 염의 형태로 수득하였다. LC/MS: M+ = 1383.44.
단계 C - 화합물 Ex-55의 합성
실시예 화합물 Ex-55를 화합물 Ex-50의 합성에 대해 실시예 2에 기재된 것과 동일한 방식으로 Ex-54로부터 포르메이트 염의 형태로 제조하였다. LC/MS: M+ = 1583.69.
단계 D - 화합물 Ex-53의 합성
실시예 화합물 Ex-53을 화합물 Ex-51의 합성에 대해 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방식으로 중간체 화합물 116으로부터 HCl 염의 형태로 제조하였다. LC/MS: M+ = 1381.33.
화합물 Ex-53, Ex-54 및 Ex-55를 궁극적으로 제조하는 중간체 화합물 115를 제공하는데 필요한 중간체의 제조는 중간체 화합물 103의 제조로부터 시작하여 하기 반응식 및 합성에 기재된다.
Figure pct00133
단계 A - 중간체 100의 합성
탈기된 톨루엔 (45 ml) 및 물 (15 ml) 중 4-브로모-2-히드록시벤즈알데히드 (3.00 g, 14.92 mmol), 포타슘 tert-부틸 N-[2-트리플루오로보라누딜)에틸] 카르바메이트 (3.82 g, 15.22 mmol), 탄산세슘 (17.02 g, 52.2 mmol) 및 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(ii)디클로라이드 디클로로메탄 착물 (0.611 g, 0.746 mmol)의 용액을 75℃로 가온하고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온에서 반-포화 수성 중탄산나트륨으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 99:1에서 60:40으로 용리시킴)에 의해 정제하여 100을 수득하였다. LC/MS: (M-55)+ = 210.25.
단계 B - 중간체 101의 합성
실온에서 DMF (10 ml) 중 100 (1.70 g, 6.41 mmol) 및 알릴 브로마이드 (0.832 ml, 9.61 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (1.328 g, 9.61 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 50℃로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온에서 반-포화 수성 중탄산나트륨으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 99:1에서 70:30으로 용리시킴)에 의해 정제하여 101을 수득하였다. LC/MS: (M-55)+ = 250.29.
단계 C - 중간체 102의 합성
실온에서 MeOH (100 ml) 중 이전 단계에서 제조된 101 (1.76 g, 5.76 mmol), 4 A 분자체 (2 g) 및 아세트산암모늄 (4.44 g, 57.6 mmol)의 용액에 소듐 시아노보로히드라이드 (0.380 g, 6.05 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 밤새 진탕시켰다. 혼합물을 농축시키고, 실온에서 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH 99:1에서 30:70으로 용리시킴)에 의해 정제하여 102를 수득하였다. LC/MS: (2M+H)+ = 613.56.
단계 D - 중간체 103의 합성
실온에서 DMF (4 ml) 중 102 (220 mg, 0.718 mmol) 및 숙신산 모노-메틸 에스테르 (114 mg, 0.862 mmol)의 용액에 HATU (300 mg, 0.790 mmol) 및 DIPEA (0.314 ml, 1.795 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 실온에서 포화 수성 중탄산나트륨으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 99:1에서 30:70으로 용리시킴)에 의해 정제하여 중간체를 수득하였으며, 이를 DCM 중 20% TFA로 1시간 동안 처리하였다. 반응물을 농축시킨 다음, 4N HCl (1.5 mL)로 처리하고, 농축시켜 103을 수득하였다. LC/MS: (M+H)+ = 321.29.
중간체 109의 제조
Figure pct00134
단계 A - 중간체 104의 합성
0℃에서 DMF (100 ml) 중 메틸 (S)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실레이트 히드로클로라이드 (7.00 g, 39 mmol) 및 (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-메톡시페닐)프로판산 (12.08 g, 40.9 mmol)의 교반 용액에 DIPEA (17.01 ml, 97.0 mmol)에 이어서 HATU (19.26 g, 50.7 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 천천히 가온되도록 하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 10% 수성 LiCl 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 10% 수성 LiCl로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 80:20에서 40:60으로 용리시킴)에 의해 정제하여 104를 수득하였다.
단계 B - 중간체 105의 합성
EtOAc (100 ml) 중 104 (16.4 g, 39.0 mmol)의 용액에 디옥산 중 4 N HCl (48.8 ml, 195 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켜 105를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 C - 중간체 106의 합성
0℃에서 DMF 중 105 (13.2 g, 37.0 mmol) 및 N-((벤질옥시)카르보닐)-O-(tert-부틸)-L-트레오닌 (18.15 g, 37.0 mmol)의 용액에 DIPEA (16.15 ml, 92 mmol)에 이어서 HATU (18.28 g, 48.1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 천천히 가온되도록 하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 10% 수성 LiCl 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 10% 수성 LiCl로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 80:20에서 40:60으로 용리시킴)에 의해 정제하여 106을 수득하였다.
단계 D - 중간체 107의 합성
MeOH 중 106 (16.5 g, 27.0 mmol)의 용액에 10% Pd/C의 슬러리를 첨가하고, 혼합물을 20 psi에서 4시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 조 생성물을 DCM 중에 재용해시키고, 용액을 2 μm 필터를 통해 여과하고, 농축시켜 107을 수득하였다.
단계 E - 중간체 108의 합성
DCM 중 107 (3.2 g, 6.70 mmol)의 용액에 DIPEA (1.52 ml, 8.71 mmol)에 이어서 디-tert-부틸 디카르보네이트 (1.90 g, 8.71 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 100:0에서 40:60으로 용리시킴)에 의해 정제하여 108을 수득하였다.
단계 F - 중간체 109의 합성
THF (15 ml) 및 MeOH (15 ml) 중 108 (1.43 g, 2.475 mmol) 및 1 N 수성 LiOH (9.90 ml, 9.90 mmol)의 용액을 45℃로 가온하고, 4시간 동안 교반한 다음, 32℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 0℃에서 0.5 M 수성 염산으로 pH ~2-3이 될 때까지 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc-EtOH 99:1에서 EtOAc-EtOH 3:1로 용리시킴)에 의해 정제하여 109를 수득하였다. LC/MS: (M+H)+ = 564.49.
중간체 화합물 110 내지 115의 제조
단계 A - 중간체 110의 합성
Figure pct00135
DMF (2.5 ml) 중 109 (217 mg, 0.385 mmol), HATU (133 mg, 0.350 mmol) 및 DIPEA (0.245 ml, 1.400 mmol)의 용액을 0℃에서 103 (217 mg, 0.385 mmol)으로 처리하고, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 포화 수성 중탄산나트륨으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc-EtOH 3:1 99:1에서 EtOAc-EtOH 3:1로 용리시킴)에 의해 정제하여 110을 수득하였다. LC/MS: (M+H)+ = 866.21.
단계 B 및 C - 중간체 화합물 111 및 112의 합성
Figure pct00136
실온에서 DCM (1 ml) 중 110 (249 mg, 0.288 mmol)의 용액에 디옥산 중 HCl 4 N (0.359 ml, 1.438 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 6시간 동안 교반한 다음, 농축시켜 111을 수득하였다. LC/MS: (M+H)+ = 710.19.
0℃에서 DMF (3 ml) 및 물 (0.15 ml) 중 111 (219 mg, 0.293 mmol) 및 76 (232 mg, 0.285 mmol)의 용액에 DIPEA (0.128 ml, 0.734 mmol) 및 HATU (123 mg, 0.323 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 염수로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc-EtOH 3-1 99:1에서 30:70, 그 다음 DCM/MeOH 99:1에서 70:30으로 용리시킴)에 의해 정제하여 112를 수득하였다. LC/MS: (M+H)+ = 1506.11.
단계 D - 중간체 113의 합성
Figure pct00137
질소로 30분 동안 탈기된 DCM (180 ml) 및 AcOH (15 ml) 중 112 (173 mg, 0.115 mmol)의 용액에 잔 촉매 (59.0 mg, 0.080 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 50℃로 가온하고, 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 세척하면서 셀라이트 상에서 여과한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH 99:1에서 80:20으로 용리시킴)에 의해 정제하여 113을 E 및 Z 이성질체의 혼합물로서 수득하였다. LC/MS (주요 이성질체): (M)+ = 1477.80; LC/MS (부차 이성질체): (M)+ = 1478.28.
단계 E - 중간체 114의 합성
Figure pct00138
아세토니트릴 (2 ml) 중 113 (141 mg, 0.095 mmol))의 용액에 피페리딘 (0.066 ml, 0.668 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 아세토니트릴과 함께 3회 공-증발시켜 조 물질을 수득하였다. 0℃에서 DMF (2 ml) 및 물 (0.1 ml) 중 이러한 조 물질 (119 mg, 0.095 mmol) 및 중간체 화합물 88 (52.0 mg, 0.105 mmol)의 슬러리에 HATU (39.7 mg, 0.105 mmol) 및 DIPEA (0.037 ml, 0.209 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 C18 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (아세토니트릴+0.05% TFA/물+0.05% TFA 90:10에서 30:70으로 용리시킴)에 의해 정제하여 114를 E 및 Z 이성질체의 혼합물로서 수득하였다. LC/MS 주요 이성질체: (M)+ = 1735.28; LC/MS (부차 이성질체): (M)+ = 1735.25.
단계 F - 중간체 화합물 115의 합성
Figure pct00139
0℃에서 THF (1.5 ml) 및 MeOH (1.5 ml) 중 114 (134 mg, 0.077 mmol)의 용액에 1 N 수성 LiOH (0.386 ml, 0.386 mmol)를 적가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 0.5 N HCl로 pH ~7까지 적가 처리하고, 유기 용매로부터 농축시킨 다음, 슬러리를 ~1 mL의 DMF로 용해시키고, C18 상에서의 칼럼 크로마토그래피 (아세토니트릴+0.05% TFA/물+0.05% TFA 90:10에서 50:50으로 용리시킴)에 의해 직접 정제하여 115를 E 및 Z 이성질체의 혼합물로서 수득하였다. LC/MS 주요 이성질체: (M)+ = 1498.71; LC/MS (부차 이성질체): (M)+ = 1499.48.
상기 각각의 출발 화합물 중 그의 R2 아미드를 산성 치환기 전구체와 반응시키는 것에 의한 Ex-01로부터의 Ex-50의 제조 및 Ex-54로부터의 Ex-55의 제조에 기재된 바와 같이, 하기 중간체 화합물을 유사한 반응에 사용하여 본 발명의 유용한 화합물을 제공할 수 있다.
R1/R2 치환기 전구체의 합성:
5-카르복시-N-(3-메톡시프로필)-N,N-디메틸펜탄-1-염화아미늄 (중간체 Z-1a)의 제조
단계 A: 중간체 Z-1의 제조
Figure pct00140
아세토니트릴 (1 mL) 중 tert-부틸 6-(디메틸아미노)헥사노에이트 (300 mg, 1.393 mmol)의 교반 용액에 1-브로모-3-메톡시프로판 (853 mg, 5.57 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켜 Z-1을 수득하였다. LC/MS: (M-Br)+ = 288.4. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 3.76-3.47 (m, 6H), 3.38 (d, J = 28.9 Hz, 9H), 2.25 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.12-1.95 (m, 2H), 1.87-1.55 (m, 4H), 1.45 (s, 11H).
단계 B: 중간체 화합물 Z-1a의 합성
Figure pct00141
DCM (0.5 mL) 중 Z-1 (460 mg, 1.249 mmol)의 교반 용액에 실온에서 디옥산 중 4 M HCl (2 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL) 중에 재용해시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 화합물 Z-1a를 수득하였다. LC/MS: (M-Cl)+ = 232.3.
중간체 Z-2b의 제조
단계 A: 중간체 Z-2의 제조
Figure pct00142
THF (10 mL) 중 tert-부틸 6-브로모헥사노에이트 (1.0 g, 3.98 mmol)의 교반 용액에 디메틸아민 (THF 중 2M) (7.96 mL, 15.93 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM 중 1% - 15% MeOH의 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 Z-2를 수득하였다. LC/MS: (M+H)+ = 216.2. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 2.35-2.17 (m, J = 8.5, 6.5 Hz, 10H), 1.67-1.47 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.42 -1.23 (m, 2H).
단계 B: 중간체 Z-2a의 제조
Figure pct00143
ACN (1 mL) 중 Z-2 (250 mg, 1.161 mmol)의 교반 용액에 1-브로모-2-메톡시에탄 (645 mg, 4.64 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켜 Z-2a를 수득하였다. LC/MS: (M-Br)+ = 274.3. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 4.02-3.80 (m, 4H), 3.70-3.54 (m, 2H), 3.42 (d, J = 13.0 Hz, 9H), 2.24 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.85-1.75 (m, 2H), 1.72-1.55 (m, 2H), 1.44 (s, 11H).
단계 C: 중간체 Z-2b의 제조
Figure pct00144
DCM (0.5 mL) 중 Z-2a (450 mg, 1.270 mmol)의 교반 용액에 실온에서 디옥산 중 4 M HCl (2 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM (5 mL) 중에 재용해시키고, 감압 하에 농축시켜 Z-2b를 수득하였다. LC/MS: (M-Cl)+ = 218.3.
중간체 Z-3b의 제조
단계 A: 중간체 Z-3의 제조
Figure pct00145
DCM (2 mL) 중 tert-부틸 3-(2-히드록시에톡시)프로파노에이트 (500.0 mg, 2.63 mmol)의 용액에 0℃에서 CBr4 (1395 mg, 4.21 mmol) 및 PPh3 (965 mg, 3.68 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE 중 1% - 15% EA의 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 Z-3을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.78 (dt, J = 11.1, 6.3 Hz, 4H), 3.47 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.53 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H).
단계 B: 중간체 Z-3a의 합성
Figure pct00146
ACN (2 mL) 중 tert-부틸 3-(2-브로모에톡시)프로파노에이트 Z-3 (450 mg, 1.778 mmol)의 교반 용액에 트리메틸아민 (955 mg, 5.33 mmol) (EtOH 중 33%Wt)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켜 Z-3a를 수득하였다. LC/MS: (M-Br)+ = 232.3. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.32 (s, 1H), 4.04-3.94 (m, 4H), 3.73 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.50 (s, 10H), 2.50 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).
단계 C: 중간체 Z-3b의 합성
Figure pct00147
DCM (0.6 mL) 중 Z-3a (550 mg, 1.761 mmol)의 용액에 실온에서 디옥산 (2.5 mL) 중 4 M HCl을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 DCM (3 mL) 및 톨루엔 (3 mL) 중에 재용해시켰다. 이어서, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 Z-3b를 수득하였다. LC/MS: (M-Cl)+ = 176.2.
중간체 Z-4b의 제조
단계 A: 중간체 Z-4의 제조
Figure pct00148
THF (30 mL) 중 DIAD (1.755 mL, 9.03 mmol)의 용액에 Ph3P (2.368 g, 9.03 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 메틸 2-(3-히드록시페닐)아세테이트 (1.0 g, 6.02 mmol) 및 3-(디메틸아미노)프로판-1-올 (0.931 g, 9.03 mmol)을 용액에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM 중 1% - 10% MeOH의 구배로 용리시키면서 정제하였다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 농축시켜 Z-4를 수득하였다. LC/MS: (M+H)+ = 252.2. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.23-7.18 (m, 1H), 6.82 (td, J = 8.7, 4.1 Hz, 3H), 4.01 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.59 (s, 2H), 2.46 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.27 (s, 6H), 1.97 (dt, J = 7.9, 6.5 Hz, 2H).
단계 B: 중간체 Z-4a의 제조
Figure pct00149
ACN (12 mL) 중 Z-4 (600 mg, 2.268 mmol)의 용액에 MeI (1.288 g, 9.07 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 감압 하에 농축시켜-Z-4a를 수득하였다. LC/MS: (M-I)+ = 266.2.
단계 C: 중간체 Z-4b의 제조
Figure pct00150
THF (12 mL) 중 Z-4a (800 mg, 1.729 mmol)의 용액에 2 M LiOH (1.729 mL, 3.46 mmol)를 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용액의 pH 값을 HCl (1 M)에 의해 4로 조정하고, 용액을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 C18 상에서의 역상 크로마토그래피 (이동상 A: 물, 이동상 B: ACN; 유량: 60 mL/분; 구배: 25분간 1% B에서 25% B; 15분간 25% B에서 95% B; 10분간 95% B에서 95% B)에 의해 정제하여 Z-4b를 수득하였다. LC/MS: (M-Cl)+ = 252.2. 1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 7.21 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.95-6.75 (m, 3H), 4.12 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.63-3.50 (m, 4H), 3.18 (s, 9H), 2.35-2.20 (m, 2H).
실시예 4 Ex-23의 제조
Figure pct00151
단계 A: 중간체 S-1b의 제조
(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(아세톡시메틸)테트라히드로-2H-피란-2,3,4,5-테트라일테트라아세테이트 S-1a (5 g, 12.81 mmol)를 0℃에서 AcOH 및 DCM (40 mL) 중 48% HBr (7.25 mL, 64.0 mmol)의 용매에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음 상에서 냉각시킨 수성 포화 탄산수소나트륨에 붓고, 혼합물을 DCM (3x60 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시킨 다음, 조 생성물을 실리카 겔 상에서의 플래쉬 크로마토그래피 (0~30% EtOAc/PE로 용리시킴)에 의해 S-1b로 정제하였다.
단계 B: 중간체 S-1c의 제조
건조 DMF (45 mL) 중 S-1b (4.5 g, 10.94 mmol)의 용액에 아지드화나트륨 (0.854 g, 13.13 mmol)을 첨가하고, 반응물을 18℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (3 x 80 mL)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서의 플래쉬 크로마토그래피 (0~30% EtOAc/PE로 용리시킴)에 의해 정제하여 S-1c를 수득하였다.
단계 C: 중간체 S-1d의 제조
EtOH (60 mL) 중 S-1c (3.15 g, 8.44 mmol)의 용액에 10% Pd-C (0.898 g, 0.844 mmol)를 첨가하였다. 반응 용기를 공기로부터 퍼징하고, 50 psi 하에 H2로 충전하였다. 반응물을 18℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켜 S-1d를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 사용하였다.
단계 D: 중간체 S-1e의 제조
무수 THF (20 mL) 중 S-1d (2.34 g, 6.74 mmol)의 용액에 디히드로푸란-2,5-디온 (0.742 g, 7.41 mmol) 및 Et3N (0.939 mL, 6.74 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 출발 물질의 완전한 소모까지 3시간 동안 교반한 다음, 증발시켰다. 생성된 조 생성물을 실리카 겔 상에서의 플래쉬 크로마토그래피 (0~10% DCM/MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 S-1e를 수득하였다. MS (ESI): m/z (M+H)+ 448.1. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.48 (d, J = 9.04 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.24 (t, J = 8.93 Hz, 1H), 5.07-5.17 (m, 2H), 4.08-4.18 (m, 2H), 4.04 (q, J = 6.69 Hz, 1H), 2.72-2.84 (m, 1H), 2.58-2.69 (m, 2H), 2.43-2.53 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.04 (s, 4H), 2.00 (s, 3H).
단계 E: Ex-23의 제조
DMF (8 ml) 및 물 (0.4 ml) 중 Ex-01 (300 mg, 0.215 mmol) 및 S-1e (115 mg, 0.258 mmol)의 용액에 DIEA (0.150 ml, 0.860 mmol) 및 HATU (98 mg, 0.258 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 1N LiOH (2.58 ml, 2.58 mmol)로 적가 켄칭하고, 생성된 용액을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 여과하고, 여과물을 역상 HPLC C18 칼럼 상에서 물 (0.05% TFA) 중 아세토니트릴 (0.05% TFA)의 29-34% 구배를 사용하여 정제하여 Ex-23을 수득하였다. LC/MS: [M+1]+ = 1657.1.
실시예 5 Ex-14의 제조
Figure pct00152
화합물 Ex-14를 실시예 1에 기재된 절차와 유사한 방식으로, 그러나 상이한 "링커" 및 대안적 합성 단계를 사용하여 제조하였다. 이들 "링커"의 합성, 대안적 단계 및 주요 조립이 하기에 기재되어 있다.
중간체 Int-2g의 제조
본 발명의 화합물의 제조에서 "링커"로서 유용한 중간체 Int-2g를 하기 반응식에 따라 제조하였다:
Figure pct00153
단계 A - Int-2gb의 합성
수조 내 실온에서 THF (16 ml) 중 Int-2da (0.5 g, 2 mmol) 및 2-아지도에탄아민, HCl (0.246 g, 2 mmol)의 용액에 소듐 트리아세톡시히드로보레이트 (1.06 g, 5 mmol)를 조금씩 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액으로 천천히 켄칭한 다음, DCM으로 추출하고, 염수로 세척하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 Int-2gb를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+= 320.3.
단계 B - Int-2gc의 합성
DMF (4 ml) 및 DCM (8 ml) 중 Int-2gb (0.64 g, 2 mmol) 및 모노-메틸 숙시네이트 (0.3 g, 2.3 mmol)의 용액에 HATU (0.914 g, 2.4 mmol) 및 DIPEA (0.7 ml, 4.01 mmol)를 -15℃에서 첨가하였다. 생성된 용액을 -15℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 물로 켄칭하고, 농축시켰다. 잔류물을 C18 상에서의 역상 크로마토그래피 (아세토니트릴/물 + 0.1% TFA로 용리시킴)에 의해 정제하여 Int-2gc를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+= 434.3.
단계 C - Int-2g의 합성
DCM (9 mL) 중 Int-2gc (0.52 g, 1.2 mmol)의 용액에 실온에서 TFA (3 mL, 38.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켜 Int-2g를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+= 334.3.
중간체 화합물 70B 및 76C의 제조
Figure pct00154
단계 A - 중간체 70B의 합성
0℃에서 DMF (17.8 ml) 중 69B (1.5 g, 4.46 mmol)의 용액에 95% NaH (0.141 g, 5.56 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 0℃에서 20분 동안 교반하고, 이어서 3-브로모프로프-1-인 (톨루엔 중 80%) (0.596 ml, 5.35 mmol)을 적가하였다. 생성된 용액에 수성 수산화리튬 (2M) (3345 μl, 6.69 mmol)을 적가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 역상 HPLC (아세토니트릴/물 + 0.1% TFA로 용리시킴)에 의해 정제하여 70B를 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 361.0, (M+Na)+: 383.0.
단계 B - 중간체 76C의 합성
70B의 중간체 76C로의 전환은 중간체 76 단계 C 내지 H의 제조에 기재된 것과 유사한 절차에 따라 진행하였다. LC/MS: [M+1]+ = 812.16.
실시예 Ex-14로의 조립:
Figure pct00155
Figure pct00156
단계 A - 중간체 117의 합성
중간체 117을 실시예 1 및 1A에 기재된 것과 유사한 절차에 따라 중간체 Int-2g 및 76C로부터 제조하였다. 보다 구체적으로 Int-2g를 중간체 77B 단계 A 내지 B의 제조를 위한 시약 및 절차에 따라 관능화시키고, 추가로 중간체 86 단계 G 내지 J의 제조를 위한 절차에 따라 정교화한 다음, 최종적으로 실시예 1A 단계 B 내지 C의 제조를 위한 절차에 따라 중간체 76C와 커플링시켜 117을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1573.36.
단계 B - 중간체 118의 합성
BuOH (185.00 mL)/물 (93 mL) 중 테트라키스(아세토니트릴)구리(I) 헥사플루오로포스페이트 (51.6 mg, 0.138 mmol), 트리스[(1-벤질-1h-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸]아민 (73.4 mg, 0.138 mmol) 및 아스코르브산나트륨 (137 mg, 0.692 mmol)을 질소로 버블링한 다음, 50℃에서 가열하였다. 중간체 117 (435.3 mg, 0.277 mmol)을 고체로서 반응물에 첨가하였다. 1시간 후, 반응물을 수성 pH 4 완충제로 처리하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 증발시키고, 잔류물을 역상 크로마토그래피 (아세토니트릴/물 +0.1% 포름산의 구배로 용리시킴)에 의해 정제하여 중간체 118을 수득하였다. LC/MS: (M+1)+: 1573.2.
단계 C - Ex-14의 합성
실시예 Ex-14의 합성은 조립을 위한 대안적 스페이서의 사용을 비롯하여, 실시예 1에 기재된 것과 유사한 절차에 따라 중간체 118로부터 진행하였다. LC/MS: [M+1]+ = 1621.01.
상기 기재된 합성 반응식을 사용하여, 인지될 바와 같이, 일부 경우에 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한 대안적 스페이서의 사용을 비롯하여 특정 중간체의 적절한 치환을 사용하면서 (이의 제조는 상기 기재되어 있을 수 있음), 하기 표 2에 열거된 하기 본 발명의 화합물을 제조하였다. 추가적으로, 본 발명의 화합물의 대안적 염 형태가 또한 본 출원에 기재될 수 있다:
표 2
Figure pct00157
Figure pct00158
Figure pct00159
Figure pct00160
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
Figure pct00166
Figure pct00167
Figure pct00168
Figure pct00169
Figure pct00170
Figure pct00171
Figure pct00172
Figure pct00173
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176
활성 결정
본 발명의 선택된 화합물에 대해 하기 절차 중 1가지 이상을 실시하여 PCSK9 활성의 길항작용에 대한 그의 활성을 검정하였다.
하기는 PCSK9 길항작용에 대한 본 발명의 화합물 및 보고된 임의의 비교 화합물의 활성을 결정하기 위해 사용된 검정의 기재이다. 비오티닐화 PCSK9는 상업적으로 입수하였다.
LDLR TR-FRET
PCSK9 TR-FRET 검정으로 PCSK9와 LDLR 사이의 상호작용을 측정하였다. 40 nM 비오티닐화 PCSK9 + 10 nM 랜스 유라이트(Lance ULight) 스트렙타비딘을 함유하는 용액을 50 mM HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 5 mM CaCl2, 0.01% BSA 및 0.01% 계면활성제 P20 중에서 제조하였다. 40 nM rhLDLR-6xHis + 10 nM Eu-W1024 항-6xHis를 함유하는 별개의 용액을 동일한 완충제 시스템에서 제조하였다. 에코(Echo)를 사용하여 0.750ul의 화합물을 검정 플레이트로 옮기고, 이어서 15ul의 PCSK9+유라이트 및 15ul의 LDLR+Eu를 첨가하였다. 최종 검정 부피는 20nM PCSK9, 5nM 유라이트, 20nM LDLR 및 5nM Eu를 함유하는 30.750ul이었다. 엔비전 멀티라벨 판독기를 사용하는 형광 측정 전 적어도 2시간 동안 반응물을 실온에서 인큐베이션하였다. 비선형 회귀를 사용하여 데이터를 S자형 용량-반응 곡선에 피팅함으로써 IC50 값을 결정하였다. 유로퓸-표지된 LDLR의 카운트 (B-카운트)에 따라 화합물이 LDLR에 불리한 영향을 미치는지 여부를 관찰하였다. B-카운트의 하락은 억제의 가양성을 나타낼 가능성이 있다.
알렉사 FRET 표준 TR-FRET
PCSK9 알렉사 FRET 표준 검정으로 PCSK9와 알렉사플루오르647 (AF) 태그부착된 시클릭 펩티드 시약 A 사이의 상호작용을 측정하였다 (KD = 83nM). 1 nM 비오티닐화 PCSK9 + 2.5nM 랜스 스트렙타비딘 유로퓸 (Strep-Eu)을 함유하는 용액을 50 mM HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 5 mM CaCl2, 0.01% BSA 및 0.01% 계면활성제 P20 중에서 제조하였다. 40 nM의 알렉사플루오르 태그부착된 시클릭 펩티드를 함유하는 별개의 용액을 동일한 완충제 시스템에서 제조하였다. 에코를 사용하여 0.750ul의 화합물을 검정 플레이트로 옮기고, 이어서 15ul의 PCSK9+Stept-Eu 및 15ul의 AF 펩티드를 첨가하였다. 최종 검정 부피는 0.5nM PCSK9, 1.25nM Strep-Eu 및 20nM AF 시클릭 펩티드를 함유하는 30.750ul이었다. 엔비전 멀티라벨 판독기를 사용하는 형광 측정 전 적어도 2시간 동안 반응물을 실온에서 인큐베이션하였다. 비선형 회귀를 사용하여 데이터를 S자형 용량-반응 곡선에 피팅함으로써 IC50 값을 결정하였다. 이어서 AF 시클릭 펩티드의 IC50 및 KD로부터 Ki를 계산하였다. 유로퓸-표지된 PCSK9의 카운트 (B-카운트)에 따라 화합물이 PCSK9에 불리한 영향을 미치는지 여부를 관찰하였다. B-카운트의 하락은 억제의 가양성을 나타낼 가능성이 있다. 이 절차로부터의 데이터를 "A = '수치' (나노몰)"로 보고하였다.
시약 A를 하기 방법에 따라 제조하였다:
Figure pct00177
단계 A - 중간체 화합물 Int-A의 합성
CEM 리버티 블루 마이크로웨이브 합성기에서 PS 링크-아미드 MBHA 수지 0.32 mmol g-1 상에서 Fmoc/tBu 화학을 사용하여 0.250 mmol 규모로 펩티드를 합성하였다. DMF 중 4eq의 Fmoc 보호된 아미노산 0.2M, DMF 중 4eq의 0.5M HATU, 4eq의 2M DIPEA를 사용하여 단일-커플링을 사용하여 조립을 수행하였다 (Tyr의 경우 이중 커플링). DMF 중 20% (V/V) 피페리딘을 사용하여 Fmoc 탈보호 사이클을 수행하였다.
사용된 Fmoc 보호된 아미노산 및 빌딩 블록의 서열은 하기와 같다:
1. N-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-S-트리틸-L-시스테인
2. (S)-1((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산
3. (((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-L-티로신
4. N-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-N-트리틸-L-히스티딘
5. (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-4-(tert-부톡시)-4-옥소부탄산
6. (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(5-플루오로-1H-인돌-3-일)프로판산
7. (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(5-플루오로-1H-인돌-3-일)프로판산
8. (((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)글리신
9. N2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-N6-(tert-부톡시카르보닐)-L-리신
10. 3-(트리틸티오)프로판산
조립 종료시에, 수지를 DMF, MeOH, DCM, Et2O로 세척하였다. 실온에서 대략 1.5시간 동안 50 ml의 TFA 용액 (v/v) (91% TFA, 5% H2O, 4% TIPS)을 사용하여 고체 지지체로부터 펩티드를 절단하였다. 수지를 여과하고, TFA로 세척하고, 용액을 농축 건조시키고, 동결건조시켰다. 동결건조하여 중간체 화합물 Int. A (399mg)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에서 조 물질로 사용하였다. LCMS: C61H75F2N15O13S2 분석 계산치: 1328.48, 실측치: 1328.2 (M+1)+
단계 B - 중간체 화합물 Int-B의 합성: 시약 B에 대해 기재된 바와 같음
RP-HPLC (워터스 델타팩 C4, 이중 카트리지, 40x100 mm, 15μm, 300A; 20분에 걸쳐 15%에서 35% ACN/물 + 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 수집된 분획을 동결건조시켜 중간체 화합물 Int-B 35 mg을 수득하였다. LCMS: C69H81F2N15O13S2 분석 계산치: 1430.62; 실측치: 1430.9 (M+1)+
단계 C - 화합물 시약A의 합성: 시약 B에 대해 기재된 바와 같음. LCMS: C105H122F2N17O26S63- 분석 계산치: 2268.58; 1135.8 (M+2)2+
알렉사 FRET 플러스 TR-FRET
PCSK9 알렉사 FRET 플러스 검정으로 PCSK9와 알렉사플루오르647 (AF) 태그부착된 시클릭 펩티드 시약 B 사이의 상호작용을 측정하였다 (KD = 35nM). 1 nM 비오티닐화 PCSK9 + 2.5nM 랜스 스트렙타비딘 유로퓸 (Strep-Eu)을 함유하는 용액을 50 mM HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 5 mM CaCl2, 0.01% BSA 및 0.01% 계면활성제 P20 중에서 제조하였다. 1920 nM의 알렉사플루오르 태그부착된 시클릭 펩티드를 함유하는 별개의 용액을 동일한 완충제 시스템에서 제조하였다. 에코를 사용하여 0.075ul의 화합물 플러스 0.675ul의 DMSO를 검정 플레이트의 각각의 웰로 옮긴 후, 15ul의 PCSK9+Stept-Eu 및 15ul의 AF 펩티드를 첨가하였다. 최종 검정 부피는 0.5nM PCSK9, 1.25nM Strep-Eu 및 960nM AF 시클릭 펩티드를 함유하는 30.750ul이었다. 엔비전 멀티라벨 판독기를 사용하는 형광 측정 전 적어도 2시간 동안 반응물을 실온에서 인큐베이션하였다. 비선형 회귀를 사용하여 데이터를 S자형 용량-반응 곡선에 피팅함으로써 IC50 값을 결정하였다. 이어서 AF 시클릭 펩티드의 IC50 및 KD로부터 Ki를 계산하였다. 유로퓸-표지된 PCSK9의 카운트 (B-카운트)에 따라 화합물이 PCSK9에 불리한 영향을 미치는지 여부를 관찰하였다. B-카운트의 하락은 억제의 가양성을 나타낼 가능성이 있다. 이 절차로부터의 데이터를 "P = '수치' (나노몰)"로 보고하였다.
시약 B를 하기 절차에 의해 제조하였다.
Figure pct00178
단계 A - 중간체 화합물 Int-A의 합성
CEM 리버티 블루 마이크로웨이브 합성기에서 PS 링크-아미드 MBHA 수지 0.32 mmol g-1 상에서 Fmoc/tBu 화학을 사용하여 0.250 mmol 규모로 펩티드를 합성하였다. DMF 중 4eq의 Fmoc 보호된 아미노산 0.2M, DMF 중 4eq의 1M 옥심, 4eq의 0.5M N,N-디이소프로필카르보디이미드 (DIC)를 사용하여 단일-커플링을 사용하여 조립을 수행하였다 (Y01의 경우 이중 커플링). DMF 중 20% (V/V) 피페리딘을 사용하여 Fmoc 탈보호 사이클을 수행하였다.
사용된 Fmoc 보호된 아미노산 및 빌딩 블록의 서열은 하기와 같다:
1. N-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-S-트리틸-L-시스테인
2. (S)-1((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-2-메틸피롤리딘-2-카르복실산
3. (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(4-메톡시페닐)프로판산
4. N-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-N-트리틸-L-히스티딘
5. (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-4-(tert-부톡시)-4-옥소부탄산
6. (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(5-플루오로-1H-인돌-3-일)프로판산
7. (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-(5-플루오로-1H-인돌-3-일)프로판산
8. (((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-D-알라닌
9. N2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)-N6-(tert-부톡시카르보닐)-L-리신
10. 3-(트리틸티오)프로판산
조립 종료시에, 수지를 DMF, MeOH, DCM, Et2O로 세척하였다. 실온에서 대략 1.5시간 동안 50 ml의 TFA 용액 (v/v) (91% TFA, 5% H2O, 4% TIPS)을 사용하여 고체 지지체로부터 펩티드를 절단하였다. 수지를 여과하고, TFA로 세척하고, 용액을 농축 건조시키고, 동결건조시켰다. 동결건조하여 중간체 화합물 Int. A (300mg)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에서 조 물질로 사용하였다. LCMS: C63H79F2N15O13S2 분석 계산치: 1356.53, 실측치: 1356.9 (M+1)+
단계 B - 중간체 화합물 Int-B의 합성
조 Int-A (0.22 mmol)를 24ml의 DMF 중에 재용해시켰다. 6 ml의 1M 중탄산나트륨 수용액을 첨가하여 pH를 7로 상승시켰다. 이어서 0.26 mmol의 1,3-비스(브로모메틸)벤젠 (DMF 중 0.1M)을 적가하였다. 반응물을 실온에서 20분 동안 교반 하에 두고, TFA로 켄칭한 다음 (pH 3-4로), 진공 하에 농축시켜 조 Int-B를 수득하였으며, 이를 RP-HPLC (워터스 엑스브리지, C18, 50x150 mm, 5μm, 130A; 20분에 걸쳐 25%에서 40% ACN/물 + 0.1% TFA 개질제)에 의해 정제하였다. 수집된 분획을 동결건조시켜 중간체 화합물 Int-B 35 mg을 수득하였다. LCMS: C71H85F2N15O13S2 분석 계산치: 1458.67; 실측치: 1458.8 (M+1)+
단계 C - 화합물 시약 B의 합성
중간체 화합물 Int-B (15mg)를 0.2ml의 건조 DMSO 중에 용해시켰다. 이어서 1.5ml의 건조 DMSO 중에 용해시킨 알렉사플루오르 647NHS 에스테르 (A37566, 라이프 테크놀로지(Life technology)) 15mg을 첨가하였다. 20uL의 건조 DIPEA를 첨가하였다. 반응물을 암실에서 질소 분위기 하에 12시간 동안 실온에서 교반 하에 두었다. TFA로 켄칭하고 (pH 3-4로), RP-HPLC (닥터 마이쉬(Dr Maish), 레프로실 골드(Reprosil Gold) C18, 250x20 mm, 120 Å, 10μm; 20분에 걸쳐 20%에서 35%의 ACN 중 0.1% TFA/H2O 중 0.1% TFA, 이어서 5분에 걸쳐 35%에서 40%, 20 mL/분 유량)에 의해 정제하였다. 수집된 분획을 동결건조시켜 화합물 시약 B 16.1 mg을 수득하였다. LCMS: C107H126F2N17O26S63- 분석 계산치: 2296.64; 실측치: 1150.6 (M+2)2+
상기 기재된 절차 중 하나 또는 둘 다에 의해 수득된 활성 데이터를 본 발명의 선택된 실시예 화합물에 대해 하기 포맷으로 보고하였다:
실시예 번호: A (표준 TR Fret) = '수치'; P (알렉사 Fret 플러스 표준 TR Fret) = '수치' /, 보고된 모든 값은 나노몰임을 주목한다.
알렉사 FRET 울트라 TR-FRET
PCSK9 알렉사 FRET 울트라 검정으로 PCSK9와 알렉사플루오르647 (AF) 태그부착된 시클릭 펩티드 시약 B 사이의 상호작용을 측정하였다 (KD = 0.99nM). 1 nM 비오티닐화 PCSK9 + 2.5 nM 랜스 스트렙타비딘 유로퓸 (Strep-Eu)을 함유하는 용액을 50 mM HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 5 mM CaCl2, 0.01% BSA 및 0.01% 계면활성제 P20 중에서 제조하였다. 1920 nM의 알렉사플루오르 태그부착된 시클릭 펩티드를 함유하는 별개의 용액을 동일한 완충제 시스템에서 제조하였다. 에코를 사용하여 0.015 ul의 화합물 플러스 0.735 ul의 DMSO를 검정 플레이트의 각각의 웰로 옮긴 후, 15 ul의 PCSK9+Stept-Eu 및 15 ul의 AF 펩티드를 첨가하였다. 최종 검정 부피는 0.5 nM PCSK9, 1.25 nM Strep-Eu 및 960 nM AF 시클릭 펩티드를 함유하는 30.750 ul이었다. 엔비전 멀티라벨 판독기를 사용하는 형광 측정 전 적어도 2시간 동안 반응물을 실온에서 인큐베이션하였다. 비선형 회귀를 사용하여 데이터를 S자형 용량-반응 곡선에 피팅함으로써 IC50 값을 결정하였다. 이어서 AF 시클릭 펩티드의 IC50 및 KD로부터 Ki를 계산하였다. 유로퓸-표지된 PCSK9의 카운트 (B-카운트)에 따라 화합물이 PCSK9에 불리한 영향을 미치는지 여부를 관찰하였다. B-카운트의 하락은 억제의 가양성을 나타낼 가능성이 있다. 이 절차로부터의 데이터를 "Ki 울트라 = '수치' (보고된 데이터는 나노몰임)"로 보고하였다.
표 2에 제시된 바와 같이, 하기 화합물을 상기 기재된 프로토콜을 사용하여 평가하였으며, 결과를 제시하였다:
Ex-01 Ki 플러스 = < 0.00558, Ki 울트라 = 0.0046 / Ex-02 Ki 플러스 = 0.00558, Ki 울트라 = 0.005933/ Ex-03 Ki 플러스 = 0.02535, Ki 울트라 = 0.06803/ Ex-04 Ki 플러스 ≤ 0.00558, Ki 울트라 = 0.004711/ Ex-05 Ki 플러스 = 0.009621, Ki 울트라 = 0.03296/ Ex-06 Ki 플러스 = 0.00568, Ki 울트라 = 0.003424/ Ex-07 Ki 플러스 = 0.05914, Ki 울트라 = 0.06753/ Ex-08 Ki 플러스 = 0.01574, Ki 울트라 = 0.06832/ Ex-09 Ki 플러스 = 0.09189, Ki 울트라 = 0.247/ Ex-10 Ki 플러스 = 0.005743, Ki 울트라 = 0.02489/ Ex-11 Ki 플러스 = 0.04334, Ki 울트라 = 0.2067/ Ex-12 Ki 플러스 = 0.01448, Ki 울트라 = 0.02247/ Ex-13 Ki 플러스 = 0.1454, Ki 울트라 = 0.4772/ Ex-14 Ki 플러스 = 0.01605, Ki 울트라 = 0.02099/ Ex-15 Ki 플러스 = 0.1027, Ki 울트라 = 0.2601/ Ex-16 Ki 플러스 = 0.01423, Ki 울트라 = 0.05141/ Ex-17 Ki 플러스 ≤ 0.00558, Ki 울트라 = 0.0028/ Ex-18 Ki 플러스 = 0.03356, Ki 울트라 = 0.1183/ Ex-19 Ki 플러스 = 0.01662, Ki 울트라 = 0.01204/ Ex-20 Ki 플러스 = 0.01303, Ki 울트라 = 0.01711/ Ex-21 Ki 플러스 = 0.005692, Ki 울트라 = 0.001264/ Ex-22 Ki 플러스 = 0.00926, Ki 울트라 = 0.01519/ Ex-23 Ki 플러스 = 0.00938, Ki 울트라 = 0.00239/ Ex-24 Ki 플러스 = 0.00812, Ki 울트라 = 0.00767/ Ex-25 Ki 플러스 = 0.01127, Ki 울트라 = 0.00463/ Ex-26 Ki 플러스 ≤ 0.00558, Ki 울트라 = 0.002754/ Ex-27 Ki 플러스 ≤ 0.00558, Ki 울트라 = 0.00301/ Ex-28 Ki 플러스 ≤ 0.00558, Ki 울트라 = 0.00078/ Ex-29 Ki 플러스 = 0.00981, Ki 울트라 = 0.00614/ Ex-31 Ki 플러스 < 0.00558, Ki 울트라 = 0.00074/ Ex-35 Ki 플러스 = 0.04652, Ki 울트라 = 0.08434/ Ex-36 Ki 플러스 = 0.00762, Ki 울트라 = 0.00507/ Ex-38 Ki 플러스 = 0.00904, Ki 울트라 = 0.01416/ Ex-39 Ki 플러스 = 0.00716, Ki 울트라 = 0.00414/ Ex-40 Ki 플러스 = 0.30800, Ki 울트라 = 0.86010/ Ex-41 Ki 플러스 = 0.00697, Ki 울트라 = 0.00628/ Ex-44 Ki 플러스 = 0.01445, Ki 울트라 = 0.02194/ Ex-47 Ki 플러스 = 0.01474, Ki 울트라 = 0.01193/ Ex-48 Ki 플러스 = 0.01169, Ki 울트라 = 0.01545/ Ex-49 Ki 플러스 = 0.00716, Ki 울트라 = 0.00414/ Ex-50 Ki 표준 <1.26, Ki 플러스 = 0.01052, Ki 울트라 = 0.00443/ Ex-51 Ki 표준 <1.26, Ki 플러스 < 0.00558, Ki 울트라 = 0.00597/ Ex-52 Ki 표준 <1.26, Ki 플러스 < 0.00558, Ki 울트라 = 0.00359/ Ex-53 Ki 표준 <1.26, Ki 플러스 = 0.09629, Ki 울트라 = 0.21500/ Ex-54 Ki 표준 <1.26, Ki 플러스 = 0.36720, Ki 울트라 = 0.48390/ Ex-55 Ki 표준 <1.26, Ki 플러스 = 0.07240, Ki 울트라 = 0.23800/ Ex-56 Ki 표준 <1.257, Ki 플러스 = 0.02237, Ki 울트라 = 0.00481/ Ex-57 Ki 표준 <1.257, Ki 플러스 < 0.00558, Ki 울트라 = 0.00162/ Ex-58 Ki 표준 <1.257, Ki 플러스 = 0.00773, Ki 울트라 = 0.00196/ Ex-59 Ki 플러스 = 0.00788, Ki 울트라 = 0.004959/ Ex-60 Ki 플러스 = 0.006515, Ki 울트라 = 0.005312 / Ex-61 Ki 플러스 = 0.00747, Ki 울트라 = 0.006543.

Claims (26)

  1. 화학식 I의 화합물 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00179

    여기서
    X는 H, F, Cl 또는 Br이고;
    R1은 하기로부터 선택되고:
    (a) -H; 또는
    (b) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기임:
    (i) -H;
    (ii) -NH2;
    (iii) -N+H3;
    (iv) -N+(H3C)3;
    (v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B, 여기서 R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
    (vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B, 여기서 y12 및 y13은 둘 다 2는 아니고, 독립적으로 2 내지 4이고; R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
    (vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 -O-(CH2)3-4-N+(CH3)3임; 및
    (viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 하기임;
    (ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;
    (aii) -N+(CH3)3; 또는
    (aiii) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00180
    ;
    R2는 하기로부터 선택되거나:
    (a) -H; 및
    (b) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기로부터 선택됨:
    (i) -H;
    (ii) -NH2;
    (iii) -N+H3;
    (iv) -N+(H3C)3;
    (v) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B, 여기서 R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
    (vi) -NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B, 여기서 y12 및 y13은 둘 다 2는 아니고, 독립적으로 2 내지 4이고; R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
    (vii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 -O-(CH2)3-4-N+(CH3)3임; 및
    (viii) -NH-C(O)-(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 하기임;
    (ai) -O-(CH2)2-N+(CH3)3;
    (aii) -N+(CH3)2R14ca, 여기서 R14ca는 -CH3 또는 -(CH2)1-4-OCH3임;
    (aiii) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00181
    ; 또는
    (aiv) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00182

    여기서 R14Cb 및 R14Cc는 1 내지 4임; 또는
    R1 및 R2는 함께 결합되어 하기 화학식의 모이어티를 형성할 수 있고:
    Figure pct00183
    , 여기서
    G1, RG1a 및 RG1b는 하기와 같이 정의됨:
    (a) G1은 하기 화학식의 링커 모이어티임:
    Figure pct00184

    여기서 nq1은 1 내지 6이고, mq1은 0, 1 또는 2이고, nq1 및 mq1의 값은 함께, 이들이 정의하는 링커 모이어티의 길이가 카르보닐 모이어티를 형성하는 쇄 내 탄소 원자를 포함하여 쇄를 구성하는 탄소 및/또는 산소 원자 총 8개를 초과하지 않도록 선택됨;
    RG1a는 (i) -H; 및 (ii) 4개 이하의 탄소 원자의 알킬로부터 선택됨;
    RG1b는 하기로부터 선택됨:
    (i) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00185
    ; 및
    (ii) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00186
    ; 또는
    (b) G1은 하기 화학식의 링커 모이어티임:
    Figure pct00187

    여기서 nq2는 0, 1 또는 2이고, mq2는 1 내지 6이고, nq2 및 mq2의 값은 함께, 이들이 정의하는 링커 모이어티의 길이가 카르보닐 모이어티를 형성하는 쇄 내 탄소 원자를 포함하여 쇄를 구성하는 탄소 및/또는 산소 원자 총 8개를 초과하지 않도록 선택됨;
    RG1a는 하기로부터 선택됨:
    (i) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00188
    ; 및
    (ii) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00189
    ; 및
    RG1b는 (i) -H; 및 (ii) 4개 이하의 탄소 원자의 알킬로부터 선택됨;
    R8은 -CH3 또는 하기 화학식의 모이어티이고:
    Figure pct00190

    여기서 R8a는 -H 또는 4개 이하의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 알킬이고;
    A는 하기로부터 선택되고:
    (a) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00191
    ;
    (b) -CH2-(CH2)y-CH2-, 여기서 y는 1 내지 6임;
    (c) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00192
    , 여기서 Ab1은 하기임:
    (i) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00193

    여기서 x는 1 내지 6임; 또는
    (ii) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00194

    여기서 y는 1 내지 5임;
    (d) 화학식: -CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-의 모이어티, 여기서 m = 1 내지 5이고, n= 0 또는 1 내지 4임;
    B는 하기이고:
    (a) 결합;
    (b) -(CH2)1-2-; 또는
    (c) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00195
    ;
    D는 하기이다:
    (a) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00196

    여기서 E는 -CH2- 또는 -(CH2)2-4-O-이고, A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
    (b) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00197

    여기서 A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
    (c) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00198

    여기서 na는 1, 2 또는 3이고, ma는 2, 3 또는 4이고, na + ma는 ≥3이고, 여기서 A 및 B는 상기 정의된 바와 같음;
    (d) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00199

    여기서 R34b는 -H 또는 4개 이하의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 시클릭 알킬이고, A 및 B는 상기 정의된 바와 같음.
  2. 제1항에 있어서, X가 F인 화학식 I의 화합물 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염.
  3. 제2항에 있어서, D가 하기 화학식의 모이어티이고:
    Figure pct00200

    여기서 E는 -CH2- 또는 -(CH2)2-O-인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제2항에 있어서, D가 하기 화학식의 모이어티이고:
    Figure pct00201

    여기서 E는 -CH2- 또는 -(CH2)2-O-인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  5. 제2항에 있어서, D가 하기 화학식의 모이어티인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00202
  6. 제2항에 있어서, D가 하기 화학식의 모이어티인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00203
  7. 제2항에 있어서, D가 하기 화학식의 모이어티인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00204
  8. 제2항에 있어서, D가 하기 화학식의 모이어티인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00205
  9. 제2항에 있어서, D가 하기 화학식의 모이어티인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00206
  10. 제2항에 있어서, D가 하기 화학식의 모이어티인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00207
  11. 제2항에 있어서, R1 및 R2가 하기 화학식의 모이어티와 함께 연결되어:
    Figure pct00208

    R1 및 R2가 부착되는 시클로펩티드와 함께 비-시클릭 구조를 형성하는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  12. 제2항에 있어서, 화학식 IIB의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00209

    여기서
    B1은 -((CH2)0-2)-이고;
    D1은 하기이다:
    (a) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00210
    ;
    (b) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00211
    ; 또는
    (c) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00212
    .
  13. 제2항에 있어서, 화학식 IIC의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00213

    여기서
    D2는 하기이다:
    (a) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00214

    (b) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00215
    ;
    (c) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00216
    ; 또는
    (d) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00217
    .
  14. 제2항에 있어서, 화학식 IID의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00218
  15. 제2항에 있어서, 화학식 IIE의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00219
  16. 제2항에 있어서, 화학식 IIF의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00220
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, A가
    (a) -(CH2)6;
    (b) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00221

    여기서 x는 1 내지 3임; 또는
    (c) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00222

    인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R2가
    (a) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기임:
    (a) -H;
    (b) -CH3;
    (c) -NH2;
    (d) -N+H3;
    (e) -N+(H3C)3;
    (f) -NH-C(O)-[(CH2)2-4-O-]2-4-(CH2)2-4R14B, 여기서 R14B는 -NH2; -N+H3; -N(CH3)2; 또는 -N+(CH3)3임;
    (g) -NH-C(O)-[(CH2)yR14C, 여기서 y= 1 내지 6이고, R14C는 하기임:
    (ai) -O-(CH2)2-4-N+(CH3)3;
    (aii) -N+(CH3)3; 또는
    (aiii) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00223
    ; 또는
    (b) 하기 화학식의 모이어티:
    Figure pct00224

    인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    (a) -H;
    (b) -(CH2)z-R14A, 여기서 z는 1-6이고, R14A는 하기임:
    (i) -H;
    (ii) -N+H3; 또는
    (iii) -NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N+(CH3)3
    로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, R8이 하기 화학식의 모이어티이고:
    Figure pct00225

    여기서 R8b는 -H, -CH3 또는 -C(CH3)3인
    화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  21. 제1항에 있어서,
    Figure pct00226

    Figure pct00227

    Figure pct00228

    Figure pct00229

    Figure pct00230

    Figure pct00231

    Figure pct00232

    Figure pct00233

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 그의 임의의 제약상 허용되는 염 형태.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 적어도 1종의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 그의 유리 염기 형태 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 조성물.
  23. 고콜레스테롤혈증의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 제22항의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 고콜레스테롤혈증을 치료하는 방법.
  24. 고콜레스테롤혈증의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 고콜레스테롤혈증을 치료하는 방법.
  25. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  26. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 고콜레스테롤혈증을 치료하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
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