JP7112531B2 - Pcsk9アンタゴニスト化合物 - Google Patents
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Description
本出願は、2018年6月21日に出願された米国特許出願第62/687,913号への優先権を主張するものであり、この文献は参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
Xは、H、F、ClまたはBrであり;
R1は:
(a)-H;もしくは
(b)-(CH2)z-R14Aから選択され、式中:zは、1から6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)za-N+(CH3)3であり、式中、zaは、3もしくは4である);ならびに
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)3;もしくは
(aiii)式:
R2は:
(a)-H;および
(b)-(CH2)z-R14Aから選択され、式中:zは、1から6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)zb-N+(CH3)3であり、式中、zbは、3もしくは4である);ならびに
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)2R14ca(式中、R14caは、-CH3もしくは-(CH2)1-4-OCH3である);
(aiii)式:
RG1aは:(i)-H;および(ii)4個までの炭素原子のアルキルから選択され;そして
RG1bは:
(i)式:
RG1aは:
(i)式:
(d)式:-CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-の部分(式中、mは、1から5であり、nは、0または1から4である)
から選択され;
Bは:
(a)結合;
(b)-(CH2)1-4;または
(c)式:
である前記化合物、または薬学的に許容されるそれらのいずれかの塩を提供する。
即ち、本発明では、以下のものを提供する。
[項1]
式I:
の化合物であって、式中、
Xは、H、F、ClまたはBrであり;
R 1 は:
(a)-H;もしくは
(b)-(CH 2 ) z -R 14A から選択され、式中:zは、1-6であり、R 14A は:
(i)-H;
(ii)-NH 2 ;
(iii)-N + H 3 ;
(iv)-N + (H 3 C) 3 ;
(v)-NH-C(O)-[(CH 2 ) 2 -O-] 2 -(CH 2 ) 2 R 14B (式中、R 14B は:-NH 2 ;-N + H 3 ;-N(CH 3 ) 2 ;もしくは-N + (CH 3 ) 3 である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH 2 ) y12 -O-] 2 -(CH 2 ) y13 R 14B (式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そしてR 14B は:-NH 2 ;-N + H 3 ;-N(CH 3 ) 2 ;もしくは-N + (CH 3 ) 3 である);
(vii)-NH-C(O)-(CH 2 ) y R 14C (式中、yは、1から6であり、R 14C は、-O-(CH 2 ) 3-4 -N + (CH 3 ) 3 である);および
(viii)-NH-C(O)-(CH 2 ) y R 14C (式中、yは、1から6であり、R 14C は:
(ai)-O-(CH 2 ) 2 -N + (CH 3 ) 3 ;
(aii)-N + (CH 3 ) 3 ;もしくは
(aiii)式:
の部分である)であり;
R 2 は:
(a)-H;および
(b)-(CH 2 ) z -R 14A から選択され、式中:zは1から6であり、R 14A は:
(i)-H;
(ii)-NH 2 ;
(iii)-N + H 3 ;
(iv)-N + (H 3 C) 3 ;
(v)-NH-C(O)-[(CH 2 ) 2 -O-] 2 -(CH 2 ) 2 R 14B (式中、R 14B は:-NH 2 ;-N + H 3 ;-N(CH 3 ) 2 ;もしくは-N + (CH 3 ) 3 である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH 2 ) y12 -O-] 2 -(CH 2 ) y13 R 14B (式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R 14B は:-NH 2 ;-N + H 3 ;-N(CH 3 ) 2 ;もしくは-N + (CH 3 ) 3 である);
(vii)-NH-C(O)-(CH 2 ) y R 14C (式中、yは、1から6であり、R 14C は、-O-(CH 2 ) 3-4 -N + (CH 3 ) 3 である);および
(viii)-NH-C(O)-(CH 2 ) y R 14C (式中、yは、1から6であり、R 14C は:
(ai)-O-(CH 2 ) 2 -N + (CH 3 ) 3 ;
(aii)-N + (CH 3 ) 2 R 14ca (式中、R 14ca は、-CH 3 もしくは-(CH 2 ) 1-4 -OCH 3 である);
(aiii)式:
の部分;もしくは
(aiv)式:
の部分(式中、R 14Cb およびR 14Cc は、1から4である))から選択され;または
R 1 およびR 2 は、一緒に結合して、式:
の部分を形成してもよく、式中:
G 1 、R G1a およびR G1b は、以下のように規定され:
(a)G 1 は、式:
のリンカー部分であり、式中、n q1 は、1から6であり、m q1 は、0、1もしくは2であり、合わせてn q1 およびm q1 の値は、それらが規定するリンカー部分の長さが、カルボニル部分を形成する鎖中の炭素原子を含めて鎖を構成する炭素原子および/もしくは酸素原子の合計で8個を超えないように選択され;
R G1a は:(i)-H;および(ii)4個までの炭素原子のアルキルから選択され;そして
R G1b は:
(i)式:
の部分;および
(ii)式:
の部分から選択され;もしくは
(b)G 1 は、式:
リンカー部分であり、式中、n q2 は、0、1もしくは2であり、m q2 は、1から6であり、合わせてn q2 およびm q2 の値は、それらが規定するリンカー部分の長さが、カルボニル部分を形成する鎖中の炭素原子を含めて鎖を構成する炭素原子および/もしくは酸素原子の合計で8個を超えないように選択され;
R G1a は:
(i)式:
の部分;および
(ii)式:
の部分から選択され;そして
R G1b は:(i)-H;および(ii)4個までの炭素原子のアルキルから選択され;
R 8 は、-CH 3 または式:
の部分であり、式中、R 8a は、-Hであるか、または、直鎖、分岐鎖もしくは環状の4個までの炭素原子のアルキルであり;
Aは:
(a)式:
の部分;
(b)-CH 2 -(CH 2 ) y -CH 2 -(式中、yは、1から6である);
(c)式:
の部分(式中、A b1 は:
(i)式:
の部分であり、式中、xは、1から6であり;または
(ii)式:
の部分であり、式中、yは、1から5である);
(d)式:-CH 2 -(CH 2 ) m -O-(CH 2 ) n -の部分(式中、mは、1から5であり、nは、0または1から4である)
から選択され;
Bは:
(a)結合;
(b)-(CH 2 ) 1-2 -;または
(c)式:
の部分であり;
Dは:
(a)式:
の部分(式中、Eは、-CH 2 -または-(CH 2 ) 2-4 -O-であり、AおよびBは、上に規定されるとおりである);
(b)式:
の部分(式中、AおよびBは、上に規定されるとおりである);
(c)式:
の部分(式中、n a は、1、2または3であり、m a は、2、3または4であり、n a +m a は≧3であり、式中、AおよびBは、上に規定されるとおりである);
(d)式:
の部分(式中、R 34b は、-Hであるか、または、直鎖、分岐鎖もしくは環状の4個までの炭素原子のアルキルであり、AおよびBは、上に規定されるとおりである)
である前記化合物、または薬学的に許容されるそれらのいずれかの塩。
[項2]
式中、XがFである、項1に記載の式Iの化合物または薬学的に許容されるそれらのいずれかの塩。
[項3]
Dが、式:
の部分であり、式中、Eは、-CH 2 -または-(CH 2 ) 2 -O-である、項2の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項4]
Dが、式:
の部分であり、式中、Eは、-CH 2 -または-(CH 2 ) 2 -O-である、項2の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項5]
Dが、式:
の部分である、項2の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項6]
Dが、式:
の部分である、項2の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項7]
Dが、式:
の部分である、項2の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項8]
Dが、式:
の部分である、項2の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項9]
Dが、式:
の部分である、項2の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項10]
Dが、式:
の部分である、項2の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項11]
R 1 およびR 2 は、R 1 およびR 2 が結合している環状ペプチドと一緒に非環式構造を形成するように、式:
の部分と一緒に結合する、項2の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項12]
式IIBの構造を有する項2の化合物または薬学的に許容されるその塩であって:
B 1 が-((CH 2 ) 0-2 )-であり;そして
D 1 が:
(a)式:
の部分;
(b)式:
の部分;または
(c)式:
の部分である、前記化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項13]
式IICの構造を有する項2の化合物または薬学的に許容されるその塩であって:
式中、D 2 が:
(a)式:
の部分;
(b)式:
の部分;
(c)式:
の部分;または
(d)式:
の部分である、前記化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項14]
式IIDの構造を有する項2の化合物または薬学的に許容されるその塩:
[項15]
式IIEの構造を有する項2の化合物または薬学的に許容されるその塩:
[項16]
式IIFの構造を有する項2の化合物または薬学的に許容されるその塩:
[項17]
Aが:
(a)-(CH 2 ) 6 -;
(b)式:
の部分(式中、xは、1から3である);または
(c)式:
の部分である、項1から16のいずれかの化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項18]
R 2 が:
(a)-(CH 2 ) z -R 14A であって、式中:zは1から6であり、R 14A は:
(a)-H;
(b)-CH 3 ;
(c)-NH 2 ;
(d)-N + H 3 ;
(e)-N + (H 3 C) 3 ;
(f)-NH-C(O)-[(CH 2 ) 2-4 -O-] 2-4 -(CH 2 ) 2-4 R 14B (式中、R 14B は:-NH 2 ;-N + H 3 ;-N(CH 3 ) 2 ;もしくは-N + (CH 3 ) 3 である);
(g)-NH-C(O)-[(CH 2 ) y R 14C (式中、yは、1から6であり、R 14C は:
(ai)-O-(CH 2 ) 2-4 -N + (CH 3 ) 3 ;
(aii)-N + (CH 3 ) 3 ;もしくは
(aiii)式:
の部分である)
であり;または
(b)式
の部分である、項1から17のいずれかの化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項19]
R 1 が:
(a)-H;
(b)-(CH 2 ) z -R 14A (式中:zは、1から6であり、R 14A は:
(i)-H;
(ii)-N + H 3 ;または
(iii)-NH-C(O)-[(CH 2 ) 2 -O-] 2 -(CH 2 ) 2 -N + (CH 3 ) 3、 である)
から選択される、項1から18のいずれかの化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項20]
R 8 が、式:
の部分であって、式中、R 8b は、-H、-CH 3 または-C(CH 3 ) 3 である、項1から19のいずれかの化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項21]
よりなる群から選択される、項1の化合物または任意の薬学的に許容されるその塩形態。
[項22]
項1から21のいずれかの少なくとも1つの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはその遊離塩基形態、および少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤を含む、組成物。
[項23]
その必要がある患者に治療的有効量の項22の組成物を投与することを含む、高コレステロール血症を処置する方法。
[項24]
その必要がある患者に治療的有効量の項1から21のいずれかの化合物を投与することを含む、高コレステロール血症を処置する方法。
[項25]
治療における使用のための、項1から21のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
[項26]
高コレステロール血症を処置するための、項1から21のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩。
R1は:
(a)-H;もしくは
(b)-(CH2)z-R14Aから選択され、式中:zは、1から6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]1-4-(CH2)y13R14B、好ましくは-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)za-N+(CH3)3であり、式中、zaは、3もしくは4である);そして
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)3;もしくは
(aiii)式:
R2は:
(a)-H;ならびに
(b)-(CH2)z-R14Aから選択され、式中:zは、1から6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1-4-(CH2)2R14B、好ましくは-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)zb-N+(CH3)3であり、式中、zbは、3もしくは4である);ならびに
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)2R14ca(式中、R14caは、-CH3もしくは-(CH2)1-4-OCH3である);
(aiii)式:
RG1aは:(i)-H;および(ii)4個までの炭素原子のアルキルから選択され;そして
RG1bは:
(i)式:
RG1aは:
(i)式:
(d)式:-CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-の部分(式中、mは、1から5であり、nは、0または1から4である)
から選択され;
Bは:
(a)結合;
(b)-(CH2)1-4;または
(c)式:
である前記化合物、または薬学的に許容されるそれらのいずれかの塩を提供する。
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;または
(iv)-N+(H3C)3であり;
R2は、-(CH2)z-R14Aであり、式中:zは、1から6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]1-4-(CH2)2R14B、好ましくは-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(iv)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(v)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)zb-N+(CH3)3であり、式中、zbは、3もしくは4である);ならびに
(vi)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)2R14ca(式中、R14caは、-CH3もしくは-(CH2)1-4-OCH3である);
(aiii)式:
(d)式:-CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-の部分(式中、mは、1から5であり、nは、0または1から4である)
から選択され;
Bは:
(a)-(CH2)1-4;または
(b)式:
である前記化合物、または薬学的に許容されるそれらのいずれかの塩である。
(a)-(CH2)z-R14Aであって、式中:zは、1から6であり、R14Aは:
(a)-H;
(b)-CH3;
(c)-NH2;
(d)-N+H3;
(e)-N+(H3C)3;
(f)-NH-C(O)-[(CH2)2-4-O-]2-4-(CH2)2-4R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(g)-NH-C(O)-[(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-4-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)3;もしくは
(aiii)式:
(a)-H;
(b)-(CH2)z-R14A(式中:zは、1から6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-N+H3;または
(iii)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N+(CH3)3
である)
から選択される。
AcOHは、酢酸である。
AcO-NH4は、酢酸アンモニウムである。
Boc2Oは、ジ-tert-ブチルジカーボネートである。
Bnは、ベンジルである。
BnBrは、臭化ベンジルである。
BzClは、塩化ベンゾイルである。
CBr4は、ペルブロモメタンである。
Cbz-Clは、ベンジルクロロホルメートである。
DBUは、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エンである。
DCCは、ジシクロヘキシルカルボジイミドである。
DCEは、1,2-ジクロロエタンである。
DCMは、ジクロロメタンである。
DEAは、N,N-ジエチルアミンである。
DIADは、(E)-ジイソプロピルジアゼン-1,2-ジカルボキシレートである。
DIEAまたはDIPEAは、N,N-ジイソプロピルエチルアミンである。
DMAPは、4-ジメチルアミノピリジンである。
DMSOは、ジメチルスルホキシドである。
EAまたはEtOAcは、酢酸エチルである。
EtOHは、エタノールである。
Et2Oは、ジエチルエーテルである。
Fmocは、フルオレニルメチルオキシカルボニル保護基である。
Fmoc-Clは、(9H-フルオレン-9-イル)メチルカルボノクロリデートである。
Fmoc-D-Dap(Boc)-OHは、N-アルファ-(9-フルオレニルメチルオキシカルボニル)-N-ベータ-t-ブチルオキシカルボニル-D-2,3-ジアミノプロピオン酸である。
Fmoc-Osuは、Fmoc N-ヒドロキシスクシンイミドエステルである。
HATUは、1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ[4,5-b]ピリジニウム 3-オキシド ヘキサフルオロホスフェートである。
HPLCは、高速液体クロマトグラフィーである。
IPAは、イソプロピルアルコールである。
LiOHは、水酸化リチウムである。
LC/MSは、液体クロマトグラフィー-質量分析である。
Me3Nは、トリメチルアミンである。
MeOHは、メタノールである。
MPLCは、中圧液体クロマトグラフィーである。
MsClは、メタンスルホニルクロリドである。
NaBH(OAc)3は、トリアセトキシボロヒドリドナトリウムである。
NMRは、核磁気共鳴である。
NsClは、4-ニトロベンゼン-1-スルホニルクロリドである。
PEは、石油エーテルである。
Pd2(dba)3(HCCl3)は、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)-クロロホルム付加物である。
PPh3は、トリフェニルホスフィンである。
PdCl2(dppf)またはPd(ii)(dppf)Cl2は、ジクロロ[1,1’-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウム(II)である。
Pd(dppf)Cl2CH2Cl2は、ジクロロ[1,1’-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウム(II)ジクロロメタン付加物である。
Pd(PPh3)4は、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウムである。
PPTsは、ピリジニウムp-トルエンスルホネートである。
[Rh(OAc)2]2は、ロジウム(II)アセテートダイマーである。
RTまたはr.t.またはrtは、室温である。
tBuOAcは、tert-ブチルアセテートである。
TEAは、トリエチルアミンである。
TFAは、トリフルオロ酢酸である。
TFEは、テトラフルオロエチレンである。
THFは、テトラヒドロフランである。
Tf2Oは、トリフルオロメタンスルホン酸無水物である。
Teoc-OSuは、2,5-ジオキソピロリジン-1-イル(2-(トリメチルシリル)エチル)カーボネートである。
TBAFは、テトラブチルアンモニウムフルオリドである。
TMSは、テトラメチルシランである。
Zhan触媒1Bは、ジクロロ(1,3-ビス(2,4,6-トリメチルフェニル)-2-イミダゾリジニリデン)((5-((ジメチルアミノ)スルホニル)-2-(1-メチルエトキシ-O)フェニル)メチレン-C)ルテニウム(II)である[1,3-ビス(2,4,6-トリメチルフェニル)-4,5-ジヒドロイミダゾール-2-イリデン[2-(i-プロポキシ)-5-(N,N-ジメチルアミノスルホニル)フェニル[メチレンルテニウム(II)ジクロリドとしても記載される]。
DMF(40ml)中の76(1.56g、1.917mmol、以下で調製)および86(1.506g、1.936mmol、以下で調製)の溶液に、HATU(0.802g、2.108mmol)およびDIEA(0.670ml、3.83mmol)を加えた。得られた溶液を室温で50分間撹拌し、次いでEtOAc(300mL)とブライン(100mL)との間で分配した。有機層をブライン(2×100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でMeOH/DCMを溶出溶媒として用いて精製することで、89を与えた。LC/MS:(M+1)+:1573.8.
DCM(500ml)および酢酸(40mL)中の89(0.68g、0.432mmol)の溶液をN2で20分間バブリングし、続いてZhan触媒-1b(0.222g、0.302mmol)を加えた。得られた混合物をさらにN2で20分間バブリングし、次いで55℃で5時間加熱した。室温まで冷却した後、セライトを通して混合物をろ過し、ろ液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でMeOH/DCMを溶出溶媒として用いて精製することで、90(シス/トランス混合物)を与えた。LC/MS:(M+1)+:1545.7.
アセトニトリル(2ml)中の90(シス/トランス混合物)(65mg、0.042mmol)の溶液に、ピペリジン(0.042ml、0.420mmol)を加えた。得られた溶液を室温で1時間撹拌し、次いで濃縮し、残渣をアセトニトリル(4mL)中に溶解し、再度濃縮した。残渣を高真空下でさらに30分間乾燥させることで、91(シスおよびトランスの混合物)を与えた。LC/MS:(M+1)+:1324.0.
0℃のDMF(10ml)中の91(シス/トランス混合物)(548mg、0.414mmol)および88(227mg、0.455mmol、以下で調製)の溶液に、HATU(181mg、0.476mmol)およびDIEA(0.166ml、0.952mmol)を加えた。得られた溶液を0℃で1時間撹拌し、溶液をC18カラム上の逆相MPLCによってアセトニトリル(0.05%TFA)/水(0.05%TFA)を溶出溶媒として用いて精製することで、92(シス/トランス混合物)を与えた。LC/MS:(M+1)+:1803.5.
0℃のTHF(20ml)、MeOH(6ml)および水(6ml)中の92(700mg、0.388mmol)の溶液に、1N LiOH水溶液(3.11ml、3.11mmol)を滴下して加え、得られた溶液を、0℃で23時間撹拌した。溶液を1N HClの添加によってpH7~8に中性化し、揮発性成分を蒸発させ、水性層をpH5に酸性化し、混合物をC18カラム上の逆相MPLCによってアセトニトリル(0.05%TFA)/水(0.05%TFA)を溶出溶媒として用いて精製することで、93をTFA塩として与えた。0℃の水(70mL)およびアセトニトリル(70ml)中の93 TFA塩(427mg、0.257mmol)の溶液に、0.1N HCl(13.5ml、1.350mmol)を滴下して加え、得られた溶液を0℃で5分間撹拌し、次いで凍結乾燥することで、93をHCl塩として与えた。LC/MS:(M+1)+:1567.1.
DMF(30mL)中のHCl塩としての93(200mg、0.125mmol)の溶液に、HATU(56.9mg、0.150mmol)を加えた。得られた溶液を室温で30分間撹拌し、次いでDCM(400mL)で希釈し、続いてDIEA(0.065mL、0.374mmol)を加えた。得られた溶液を室温で1時間撹拌し、揮発性成分をロータリーエバポレーター上で蒸発させ、得られたDMF溶液を逆相MPLCによってアセトニトリル(0.05%TFA)/水(0.05%TFA)を溶出溶媒として用いて精製することで、94を与えた。LC/MS:(M+1)+:1549.2.
MeOH(20ml)中の94(14mg、9.04μmol)の溶液に、10%Pd/C(1.924mg、1.808μmol)を加え、得られた混合物を、H2バルーンを通じて室温で1時間、水素付加に供した。セライトを通して混合物をろ過し、ろ液を濃縮することで中間体化合物95を与えた。LC/MS:(M+1)+:1550.9.
前のステップにおいて調製した中間体化合物95(26mg、0.017mmol)を、DCM(2ml)中に溶解した。この溶液にTFA(6mL、78mmol)を加え、得られた溶液を室温で30分間撹拌し、次いで濃縮し、残渣をDCM(3mL)中に溶解し、ジオキサン中の4N HCl(0.042mL、0.168mmol)で処理し、再度濃縮することで、Ex-01を粗生成物として与えた。粗精製のEx-01を、逆相HPLCによってアセトニトリル(0.1%ギ酸)/水(0.1%ギ酸)を溶出溶媒として用いて精製することで、ギ酸塩形態のEx-01を提供した。LC/MS:(M+1)+:1394.4.
DCM(2ml)中の中間体化合物94(30mg、0.019mmol)の溶液に、TFA(4ml、51.9mmol)を加え、反応混合物を外界温度で30分間撹拌し、次いで濃縮した。残渣をDCM(2mL)中に溶解し、HCl(ジオキサン中4N)(0.048ml、0.194mmol)で処理し、濃縮することで、Ex-51をHCl塩としてもたらした。その化合物を逆相HPLCによってアセトニトリル(0.1%ギ酸)/水(0.1%ギ酸)を移動相として用いて精製することで、ギ酸塩形態のEx-51を提供した。LC/MS:(M+1)+:1392.0.
0℃のジオキサン(100ml)中の(2S,3S)-3-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸(5.32g、40.6mmol)の懸濁液に水酸化ナトリウム(122ml、122mmol)を加え、続いてベンジルクロロホルメート(6.50ml、44.6mmol)を滴下して加えた。得られた懸濁液を0℃で5時間撹拌した。揮発性成分を除去した後、水性層をpH3に酸性化し、次いで30%IPA/DCM(200mL)とブライン(50mL)との間で分配し、水性層をさらに30%IPA/DCM(2×100mL)で抽出した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮することで、(2S,3S)-1-((ベンジルオキシ)カルボニル)-3-ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸(65)を与えた。LC/MS:(M+1)+:266.1.
MeOH(80ml)中の65(7.48g、28.2mmol)の溶液に、TMS-ジアゾメタン(70.5ml、141mmol)を滴下して加え、得られた溶液を室温で10分間撹拌し、次いで酢酸(約400uL)の滴下添加によってクエンチした。溶液を濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でEtOAc/ヘキサンを溶出溶媒として用いて精製することで、66を与えた。LC/MS:(M+1)+:280.1.
DCM(200mL)中の66(4.81g、17.22mmol)の溶液をN2で30分間バブリングし、続いてロジウム(ii)アセテートダイマー(0.761g、1.722mmol)を加えた。混合物を氷水浴内で冷却し、tert-ブチルジアゾアセテート(3.58mL、25.8mmol)を0℃で滴下して加えた。得られた混合物を0℃で1.5時間撹拌した。反応物を水(100mL)の添加によってクエンチし、混合物をDCM(3×100mL)で抽出し、合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣を、溶出溶媒としてアセトニトリル(0.05%TFA)/水(0.05%TFA)を用いた逆相MPLCによって精製した。生成物を含有するフラクションを濃縮し、水性層をDCM(2×100mL)で抽出した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮することで、67を与えた。LC/MS:(M+1)+:394.2.
MeOH(80ml)中の67(3.72g、9.46mmol)の溶液に、10%Pd/C(0.805g、0.756mmol)を加え、得られた混合物を、H2バルーンを通じて外界温度で2時間、水素付加に供し、次いでセライトを通してろ過した。ろ液を濃縮することで、68を与えた。LC/MS:(M+1)+:259.9.
0℃のTHF(20ml)、MeOH(10mL)および水(20.00ml)中の(S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)プロパン酸(3g、6.75mmol)の溶液に、NaOH(20.25ml、20.25mmol)を加え、得られた溶液を外界温度で4時間撹拌し、次いで揮発性成分を蒸発させた。水性混合物にジオキサン(50ml)および水(20mL)を加え、得られた溶液を0℃まで冷却し、Boc2O(1.881ml、8.10mmol)を上記溶液に加えた。得られた溶液を0℃で3時間撹拌し、揮発性成分を除去し、水性層をEt2O(3×40mL)で抽出し、pH3に酸性化し、次いでDCM(3×100mL)で、続いて30%IPA/DCM(2×80mL)で抽出した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮することで、69を与えた。LC/MS:(M+1)+:322.9.
0℃のDMF(40ml)中の69(2.079g、6.45mmol)の溶液に、ヘキサン中の60% NaH(0.568g、14.19mmol)を加え、得られた溶液を0℃で50分間撹拌し、続いて臭化アリル(1.172mL、13.54mmol)を滴下して加えた。得られた溶液を0℃で1.5時間撹拌し、次いで1N HCl(約3.68mL)の添加によってクエンチした。溶液を次いでEtOAc(200mL)と水(100mL)との間で分配し、有機層をブライン(2×100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でMeOH/DCMを溶出溶媒として用いて精製することで、70を与えた。LC/MS:(M+1)+:363.0.
DMF(30ml)中の70(2.239g、6.18mmol)および68(1.842g、7.11mmol)の溶液に、HATU(2.82g、7.41mmol)およびDIEA(2.59ml、14.83mmol)を加え、得られた溶液を外界温度で1時間撹拌した。混合物をEtOAc(200mL)とブライン(100mL)との間で分配し、有機層をブライン(3×100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でEtOAc/ヘキサンを溶出溶媒として用いて精製することで、71を与えた。LC/MS:(M+1)+:604.2.
0℃のCH2Cl2(20ml)およびtBuOAc(30ml)中の71(2.83g、4.69mmol)の溶液に、メタンスルホン酸(1.218ml、18.75mmol)を加え、得られた溶液を、0℃で16.5時間、次いで外界温度で2.5時間撹拌した。溶液(72)を次のステップにおいて直接用いた。LC/MS:(M+1)+:504.2.
DMF(10ml)中の(S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-(3-(((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)メチル)フェニル)プロパン酸(2.66g、5.16mmol)の溶液に、HATU(1.961g、5.16mmol)およびDIEA(5.32ml、30.5mmol)を加え、得られた溶液を室温で30分間撹拌し、次いで上記で調製した72の溶液の氷冷浴に加えた。得られた溶液を外界温度で1時間撹拌した。揮発性成分をロータリーエバポレーター上で蒸発させ、残渣を、溶出溶媒としてアセトニトリル(0.05%TFA)/水(0.05%TFA)を用いた逆相MPLCによって精製した。集めたフラクションをロータリーエバポレーター上で濃縮することで、73を与えた。LC/MS:(M+1)+:1002.1.
DCM(4ml)中の73(3.235g、3.23mmol)の溶液に、TFA(7.46ml、97mmol)を加え、得られた溶液を外界温度で1時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣をDCM(10mL)中に溶解し、ジオキサン中の4N HCl(3.23ml、12.91mmol)で処理し、次いで濃縮し、残渣をアセトニトリル(100mL)/水(50mL)中に溶解し、凍結乾燥することで、74を提供した。LC/MS:(M+1)+:846.1.
DMF(45ml)中の74(2.85g、3.23mmol)の溶液に、HATU(1.474g、3.88mmol)を加え、得られた溶液を外界温度で30分間撹拌し、次いでDCM(600ml)で希釈し、続いてDIEA(1.692ml、9.69mmol)を滴下して加えた。得られた溶液を外界温度で1時間撹拌した。溶液を濃縮し、残渣を、溶出溶媒としてアセトニトリル(0.05%TFA)/水(0.05%TFA)を用いたC18カラム上の逆相MPLCによって精製した。生成物を含有するフラクションを濃縮し、水性層をDCM(200mL)と飽和NaHCO3(200mL)との間で分配した。水性層をDCM(2×100mL)で抽出し、合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮することで、75を与えた。LC/MS:(M+1)+:828.1.
0℃のTHF(60ml)、MeOH(30ml)および水(20ml)中の75(1.93g、2.331mmol)の溶液に、1N LiOH水溶液(9.9ml、9.90mmol)を滴下して加え、得られた溶液を0℃で16時間撹拌し、次いでHCl(1N、9.9mL)の添加によってクエンチした。揮発性成分をロータリーエバポレーター上で蒸発させ、0℃の上記溶液にアセトン(60ml)、炭酸ナトリウム(0.371g、3.50mmol)およびFmoc-Osu(0.802g、2.378mmol)を加えた。得られた溶液を0℃で6時間撹拌し、揮発性成分をロータリーエバポレーター上で蒸発させ、水性層をpH4に酸性化し、次いで30%IPA/DCM(3×100mL)で抽出した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でMeOH/DCMを溶出溶媒として用いて精製することで、76を与えた。LC/MS:(M+1)+:814.2.
-50℃のDMF(40.0mL)中の69(5.00g、15.5mmol)の溶液に、68、HATU(5.90g、15.5mmol)およびDIEA(4.01g、31.0mmol)を加え、反応混合物を-50℃で3時間撹拌した。最終の溶液を水(5mL)でクエンチし、減圧下で濃縮し、残渣をC18上の逆相カラムクロマトグラフィー(アセトニトリル/水+0.01%炭酸水素アンモニウムのグラジエントで溶出)によって精製することで、71aを提供した。LCMS(ESI) C28H38FN3O8[M+H]+の計算値:564.3、測定値564.2。
室温のジオキサン(100mL)およびTHF(100mL)中の2N HClの溶液に、71a(8.40g、14.9mmol)を加え、反応混合物を5時間撹拌した。最終の溶液を減圧下で濃縮することで、72aを与えた。LCMS(ESI) C23H31ClFN3O6[M-HCl+H]+の計算値:464.2、測定値464.3。
-50℃のDMF(10.0mL)中の72a(800mg、1.60mmol)の溶液に、(S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-(3-(((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)メチル)フェニル)プロパン酸(827mg、1.60mmol)、HATU(608mg、1.60mmol)およびDIEA(620mg、4.80mmol)を加え、混合物を-50℃で3時間撹拌した。得られた溶液を水(50mL)で希釈し、水性層をEtOAc(3x100mL)で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(PE中1%-60%EtOAcのグラジエントで溶出)によって精製することで、73aを与えた。LCMS(ESI) C53H60FN5O11[M+H]+の計算値:962.4、測定値962.6。
室温のDCM(15.0mL)中の73a(3.00g、3.12mmol)の溶液に、TFA(15.0mL)を加え、反応混合物を室温で1時間撹拌した。得られた溶液を減圧下で濃縮し、トルエンおよびDCMと共蒸発させることで、74aを与えた。LCMS(ESI) C46H45F4N5O11[M-TFA+H]+の計算値:806.3、測定値806.7。
室温のDMF(150mL)中の74a(4.00g、4.35mmol)の溶液に、HATU(1.65g、4.35mmol)を加え、反応溶液を0.5時間撹拌した。溶液をDCM(450mL)およびDIEA(1.69g、13.1mmol)で希釈し、次いで室温で3時間撹拌した。得られた溶液を水(5mL)でクエンチし、減圧下で濃縮し、残渣をC18上の逆相カラムクロマトグラフィー(アセトニトリル/水+0.05%TFAのグラジエントで溶出)によって精製することで、Fmoc保護された中間体を提供した。LCMS(ESI) C44H42FN5O8[M+H]+の計算値:788.3、測定値788.9。
DMF(0.5mL)中の75a(0.665g、0.99mmol)の溶液に、Cs2CO3(1.11g、3.40mmol)および3-ブロモプロパ-1-エン(0.43g、3.55mmol)を0℃で加えた。反応混合物を室温で16時間撹拌し、5mlの50%飽和ブライン/10%クエン酸溶液の中に注ぎ、次いで酢酸エチル(2×20mL)で抽出した。有機層をブライン(3×20mL)で洗浄し、無水MgSO4で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮した。残渣を、DCM中1%-5%MeOHのグラジエントで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。中間体化合物75bを含有するフラクションを合わせ、濃縮することで、標題の化合物を与えた。LCMS(ESI) C37H44FN5O8[M+H]+の計算値:706.3、測定値706.3。
LiOHでの75bの加水分解を、中間体93の調製において記載されたものと同様の条件に従って行うことで、76Bを提供した。
0℃のDMF(140ml)中の(S)-1-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)-2-メチルピロリジン-2-カルボン酸(6.16g、17.54mmol)およびtert-ブチル 4-(2-アミノエチル)ベンジルカルバメート塩酸塩(5.03g、17.54mmol)の溶液に、HATU(8.00g、21.05mmol)およびDIPEA(9.16ml、52.6mmol)を加え、次いで反応物をそのままにして室温まで温め、2時間撹拌した。最終の混合物を水で希釈し、EtOAcで抽出し、ブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(ヘキサン中0-60%EtOAcののグラジエントで溶出)によって精製することで、77Aを与えた。MS(ESI):m/z(M+H)+ 584.5.
DCM(40ml)中の77A(8.92g、15.28mmol)の溶液に、ジオキサン中のHCl 4N(15.28ml、61.1mmol)を加え、得られた溶液を室温で一晩撹拌した。混合物を濃縮することで、77Bを与えた。MS(ESI):m/z(M+H)+ 484.3.
0℃のDCM(140ml)中の(S)-(9H-フルオレン-9-イル)メチル 2-((4-(アミノメチル)フェネチル)カルバモイル)-2-メチルピロリジン-1-カルボキシレート塩酸塩(77B)(5.87g、11.29mmol)の溶液に、DIEA(5.91ml、33.9mmol)およびCBZ-Cl(1.726ml、11.85mmol)を滴下して加え、得られた溶液を0℃で4時間撹拌した。反応溶液を水(200mL)とDCM(200mL)との間で分配し、水相をDCM(100mL)で抽出し、合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、残渣をシリカゲルカラム上でEtOAc/ヘキサンを溶出溶媒として用いて精製することで、77を与えた。LC/MS:(M+1)+:618.3.
THF(100ml)、水(50ml)およびMeOH(30ml)中の77(5.56g、9.00mmol)の溶液に、1N NaOH水溶液(45.0ml、45.0mmol)を加え、得られた溶液を室温で2時間撹拌した。揮発性成分を蒸発させ、この水溶液にジオキサン(200ml)、およびジオキサン(20ml)中のBoc2O(2.508mL、10.80mmol)を加えた。得られた混合物を0℃から室温まで一晩撹拌した。揮発性成分をロータリーエバポレーター上で蒸発させ、水性層をDCM(3×150mL)で抽出した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でEtOAc/ヘキサンを溶出溶媒として用いて精製することで、78を与えた。LC/MS:(M+1)+:496.2.
MeOH(100ml)中の78(4.04g、8.15mmol)の溶液に、10%Pd/C(0.867g、0.815mmol)を加え、得られた混合物をH2バルーンを通じて室温で1.5時間、水素付加に供した。セライトを通して混合物をろ過し、ろ液を濃縮することで、79を与えた。LC/MS:(M+1)+:362.2.
DMF(15ml)中の79(2.58g、7.14mmol)の溶液に、ペンタ-4-エン-1-イル 4-メチルベンゼンスルホネート(0.858g、3.57mmol)およびK2CO3(1.973g、14.27mmol)を加え、得られた混合物を80℃で6時間加熱した。室温まで冷却した後、混合物をろ過し、ろ液を逆相MPLCによってアセトニトリル(0.05%TFA)/水(0.05%TFA)を溶出溶媒として用いて精製することで、生成物をTFA塩として与え、これをさらにDCM(100mL)と1N NaOH水溶液(50mL)との間で分配した。水性層をさらにDCM(2×50mL)で抽出し、合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮することで、80を与えた。LC/MS:(M+1)+:430.3.
DMF(15ml)中の80(0.95g、2.211mmol)の溶液に、4-メトキシ-4-オキソブタン酸(0.321g、2.433mmol)、HATU(1.009g、2.65mmol)およびDIEA(0.927ml、5.31mmol)を加え、得られた溶液を室温で1時間撹拌した。溶液をEtOAc(200mL)とブライン(100mL)との間で分配し、有機層をブライン(2×100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でEtOAc/ヘキサンを溶出溶媒として用いて精製することで、81を与えた。LC/MS:(M+1)+:544.2.
DCM(12ml)中の81(1.165g、2.143mmol)の溶液に、HCl(ジオキサン中4N)(5.36ml、21.43mmol)を加えた。得られた溶液を室温で3時間撹拌し、混合物を濃縮することで、82を与えた。LC/MS:(M+1)+:444.2.
DMF(20ml)中の82(1.003g、2.089mmol)の溶液に、Fmoc-L-Tyr(Me)-OH(0.959g、2.298mmol)、HATU(0.914g、2.403mmol)およびDIEA(1.095ml、6.27mmol)を加え、得られた溶液を室温で50分間撹拌した。溶液をEtOAc(200mL)とブライン(100mL)との間で分配し、有機層をブライン(2×100mL)で洗浄し、合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でEtOAc/ヘキサンを溶出溶媒として用いて精製することで、83を与えた。LC/MS:(M+1)+:843.4.
アセトニトリル(10ml)中の83(1.63g、1.934mmol)の溶液に、ピペリジン(0.574ml、5.80mmol)を加え、得られた溶液を室温で1時間撹拌し、次いで濃縮した。残渣をアセトニトリル(20mL)中に再懸濁し、再度濃縮し、このサイクルを1回繰り返し、残渣を高真空下でさらに乾燥させることで、84を与えた。LC/MS:(M+1)+:621.3.
DMF(15ml)中の84(1.2g、1.933mmol)の溶液に、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH(0.922g、2.320mmol)、HATU(0.919g、2.416mmol)およびDIEA(0.844ml、4.83mmol)を加え、得られた溶液を室温で1時間撹拌した。溶液をEtOAc(200mL)とブライン(100mL)との間で分配し、有機層をブライン(2×100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上でEtOAc/ヘキサンを溶出溶媒として用いて精製することで、85を与えた。LC/MS:(M+1)+:1000.2.
アセトニトリル(20ml)中の前のステップにおいて調製した85(1.94g、1.940mmol)の溶液に、ピペリジン(0.960ml、9.70mmol)を加え、得られた溶液を室温で30分間撹拌し、次いで濃縮した。残渣をDCM/アセトニトリル(1:1、20mL)中に再溶解し、次いで再度濃縮し、このサイクルを1回繰り返し、残渣を高真空下で乾燥させることで、86を与えた。LC/MS:(M+1)+:778.3.
2-クロロ-2-クロロトリチル樹脂1-1.5mmol/g(7.0g、1-1.5mmol/g)に無水DCM(45ml)を加えた。樹脂を20分振とうし、続いてDCM(3.67ml、21.00mmol)中のDIPEA 0.17Nの半量、Fmoc-D-Dap(Boc)-OH(3.28g、7.70mmol)を、次いで残りのDCM(3.67ml、21.00mmol)中のDIPEA 0.17Nを加えた。樹脂を室温で一晩振とうし、DCMですすいで乾燥させた。樹脂を次いでDCM(80mL)中の5%DIPEAおよび10%MeOHでクエンチし、2時間振とうし、次いでろ過し、DCM(3×)、DMF(3×)およびDCM(3×)ですすぎ、次いで真空下で乾燥させることで、樹脂87を与え、これを次のステップにおいてそのまま用いた。
樹脂87(4.5g、2.475mmol)をDMF(30ml)中の5%ピペリジンにより30分間、手作業で脱保護し、ろ過し、DMF(30ml)中の5%ピペリジンでさらに30分間再処理し、ろ過し、次いでDMFおよびDCMですすぎ、乾燥させた。樹脂を次いでDMF(30ml)中のFmoc-Ala-OH(1.541g、4.95mmol)、HATU(1.694g、4.46mmol)およびDIPEA(1.729ml、9.90mmol)と2時間、手作業でカップリングさせ、次いでろ過し、DMFおよびDCMですすぎ、次いで乾燥させた。樹脂を、次いでDCM(60ml)中の10%AcOHおよびTFEで90分間処理し、ろ過し、ろ液を濃縮することで、88を提供した。LC/MS:[2M+H]+=995.01.
0℃のDMF(45ml)中のInt-3c(下記の中間体107から合成)(7.09g、10.33mmol)の溶液に、Int-2d(3.63g、9.84mmol、調製は下記)およびHATU(3.74g、9.84mmol))を加え、続いてDMF中のDIPEA(6.87ml、39.4mmol)を加え、混合物をそのままにして室温まで温め、1時間撹拌した。混合物を0℃でブラインによりクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機フラクションをブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(石油エーテル中1%から80%酢酸エチルのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-cd1を与えた。LC/MS:[M+1]+=1000.5.
アセトニトリル(50ml)中のInt-cd1(3.48g、3.48mmol)の溶液に、ピペリジン(1.72ml、17.40mmol)を加え、得られた溶液を室温で3時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣をDCM/アセトニトリル(1:1、20mL)中に再溶解し、再度濃縮し、残渣を真空下で乾燥させることで、Int-cd2を粗生成物として与えた。LC/MS:(M+1)+=778.5.
0℃のDMF(70ml)中の76(調製は上の実施例1中に示される)(2.45g、3.01mmol)およびInt-cd2(2.69g、3.46mmol)の溶液に、HATU(1.37g、3.61mmol)を加え、続いてDIEA(1.05ml、6.02mmol)を加えた。得られた溶液を室温で50分間撹拌し、次いでEtOAc(500mL)とブライン(200mL)との間で分配した。有機層をブライン(2×200mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(DCM中1%-5%MeOHのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-cd3を与えた。LC/MS:(M+1)+=1574.7.
DCM(1500ml)および酢酸(30mL)中のInt-cd3(1.91g、1.21mmol)の室温溶液をN2で30分間バブリングし、続いてZhan触媒-1B(0.445g、0.607mmol)を加えた。得られた混合物を、さらに室温で30分間、N2でバブリングし、次いで55℃で5時間加熱した。室温まで冷却した後、混合物をセライト上でろ過し、ろ液を濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(DCM中1%-5%MeOHのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-cd4(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物としてのもの)を与えた。LC/MS:(M+1)+=1546.8.
DCM(20ml)およびアセトニトリル(50ml)中のInt-cd4(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物)(5.49g、3.55mmol)の溶液に、ピペリジン(1.76ml、17.8mmol)を加えた。得られた溶液を室温で2時間撹拌し、次いで濃縮し、残渣をアセトニトリル(20ml)中に懸濁し、再度濃縮した。残渣を次いで真空下で乾燥させることで、Int-cd5(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物として)を粗混合物として与えた。LC/MS:(M+1)+=1323.8.
0℃のDMF(70ml)中のInt-cd5(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物)(4.70g、3.55mmol)およびInt-1d(2.21g、4.44mmol、調製は下記)の溶液に、HATU(1.76g、4.62mmol)およびDIEA(1.55ml、8.88mmol)を加えた。得られた溶液を室温まで温め、1時間撹拌し、次いでEtOAc(300mL)とブライン(200mL)との間で分配した。水性層をEtOAc(200mL)で抽出し、EtOAc層を合わせ、ブライン(3×200mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(DCM中1%-5%MeOHのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-cd6(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物として)を与えた。LC/MS:(M+1)+=1802.8
0℃のTHF(100ml)、MeOH(30ml)および水(30ml)中のInt-cd6(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物として)(5.41g、3.00mmol)の溶液に、1N LiOH水溶液(24.0ml、24.0mmol)を滴下して加え、得られた溶液を0℃で3時間撹拌した。混合物を0℃で1N HClの添加によって中性化し、揮発性成分を蒸発させ、水性層を1N HClによってpH5に中性化した。混合物を次いで凍らせて凍結乾燥し、残渣をC18上のカラムクロマトグラフィー(アセトニトリル(0.05%TFA)/水(0.05%TFA)のグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-cd7(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物として)をTFA塩として与えた。アセトニトリル(750mL)および水(450mL)中のこのようにして得たInt-cd7 TFA塩(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物として)に、0℃で0.1N HCl水溶液(150ml、15.00mmol)を滴下して加え、次いで得られた溶液を0℃で5分間撹拌し、凍らせて凍結乾燥することで、Int-cd7をHCl塩として与えた(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物として)。LC/MS:(M+1)+=1566.6.
DMF(50ml)およびDCM(1300ml)中の、前のステップから得たInt-cd7 HCl塩(1.01g、0.630mmol)の溶液に、DIEA(0.330ml、1.890mmol)およびHATU(0.287g、0.756mmol)を加えた。得られた溶液を室温で2時間撹拌し、揮発性成分を蒸発させ、残渣をEtOAc(400mL)とブライン(200mL)との間で分配した。水性層をEtOAc(300mL)で抽出し、合わせた有機層をブライン(3×100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(DCM中1%-10%MeOHのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-cd8(シスオレフィンおよびトランスオレフィンの混合物として)を与えた。LC/MS:(M+1)+=1548.8.
MeOH(100ml)中の、前のステップにおいて得られたInt-cd8(1.22g、0.788mmol)の溶液に、10%Pd/C(0.645g、0.607mmol)を加え、得られた混合物を、H2バルーンを通じて外界温度で7時間、水素付加に供した。7時間後、反応物をセライト上でろ過し、ろ液を濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(DCM中1%-10%MeOHのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-cd9を与えた。LC/MS:(M+1)+=1550.9.
DCM(6ml)中のInt-cd9(1.14g、0.735mmol)の溶液に、TFA(12ml、156mmol)を加え、得られた溶液を外界温度で30分間撹拌した。混合物を次いで濃縮し、残渣をDCM(20mL)およびトルエン(20mL)中に溶解した。得られた混合物を濃縮し、残渣をDCM(20mL)中に再溶解し、HCl(ジオキサン中4N)(0.919ml、3.68mmol)で処理した。得られた混合物を濃縮することで、生成物を固形物として与えた。この固形生成物をアセトニトリル(200mL)および水(100mL)中に再溶解し、0℃の上記溶液に、1N HCl水溶液(3.68ml、3.68mmol)を滴下して加えた。得られた溶液を0℃で2分間撹拌し、次いで凍らせて凍結乾燥することで、Ex-01をHCl塩として与えた。LC/MS:(M+1)+=1394.7.
DMF(1.2ml)および水(0.6ml)中のEx-01 HCl塩(870mg、0.608mmol)およびInt-4b(170mg、0.669mmol、調製は下記)の溶液に、HATU(254mg、0.669mmol)およびDIEA(425μl、2.433mmol)を加えた。得られた溶液を室温で1時間撹拌し、次いで1.2mLの水の添加によってクエンチした。混合物をろ過し、ろ液をC18上のカラムクロマトグラフィー(アセトニトリル(0.05%TFA)/水(0.05%TFA)のグラジエントで溶出)によって精製することで、Ex-25をTFA塩として与えた。LC/MS:M+=1550.6.
2つのカラムに、73.6gのAG MP-1イオン交換樹脂塩化物形態(cat# 141-1841 BIO-RAD)を、各カラム中の樹脂が合計36.8gとなるように充填した。各カラムを水(2×80ml)で洗浄し、続いて水中の20%アセトニトリル(2×100ml)で洗浄した。水中の20%アセトニトリル(100ml)中の、前のステップにおいて調製したEx-25 TFA塩(737mg、0.443mmol)の溶液を、2つの樹脂カラムに均等にロードし、次いで各カラムを水中の20%アセトニトリル(130ml)で溶出した。溶出液を合わせ、凍らせて凍結乾燥することで、Ex-25を塩化物塩として与えた。LC/MS:M+=1550.6.
0℃のDMF(40ml)中のD-Dap(Boc)-OMe HCl塩(4.10g、16.10mmol)、Fmoc-Ala-OH(5.01g、16.10mmol)およびHATU(6.43g、16.90mmol)の溶液に、DIPEA(7.03ml、40.2mmol)を加え、混合物を0℃で2時間撹拌し、次いで冷蔵庫内に一晩静置した。混合物を室温で水によりクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機フラクションを半ブライン(half brine)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(ヘキサン類/EtOAcのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-1daを与えた。LC/MS:[M+H]+=512.3.
室温の水(40ml)および2-プロパノール(120ml)中のInt-1da(8.03g、15.70mmol)および0.8N塩化カルシウム(19.62ml、15.70mmol)の溶液に、固体の水酸化ナトリウム(0.691g、17.27mmol)を加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を濃縮し、0.5NでpHを約2に酸性化し(約40mL)、EtOAcで2回抽出し、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮した。残渣をC18上のカラムクロマトグラフィー(アセトニトリル/水+0.1%TFAのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-1dを与えた。LC/MS:[M+H]+=498.25.
脱気トルエン(250ml)および水(85ml)中の4-ブロモベンズアルデヒド(15.00g、81mmol)、カリウムtert-ブチル N-[2-(トリフルオロボラヌイジル)エチル]カルバメート(20.97g、84mmol)、炭酸セシウム(52.8g、162mmol)および1,1’-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン-パラジウム(ii)ジクロリド ジクロロメタン錯体(Pd(II)(dppf)Cl2、1.99g、2.43mmol)の溶液を76℃まで温め、一晩撹拌した。混合物を室温で半飽和の塩化アンモニウム水溶液によりクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機フラクションをブラインで洗浄し、Na2SO44で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(DCM/EtOAcのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2daを与えた。LC/MS:(M-56+1)+=193.0.
水浴内にある室温のDCM(120ml)およびAcOH(3ml)中のInt-2da(12.9g、51.7mmol)およびペンタ-4-エン-1-アミン(6.61g、78mmol)の溶液に、トリアセトキシヒドロホウ酸ナトリウム(32.9g、155mmol)を少しずつ加え、混合物を30分間撹拌した。反応物を0℃で3mlの水により緩徐にクエンチし、1N NaOH(500ml)の中に注ぎ、15分間撹拌し、次いでDCMで抽出し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOHのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2dbを与えた。LC/MS:(M+1)+=319.2.
DMF(40ml)中のInt-2db(8.48g、20.77mmol)および4-メトキシ-4-オキソブタン酸(3.02g、22.85mmol)の溶液に、HATU(9.48g、24.92mmol)およびDIPEA(8.71ml、49.8mmol)を加えた。得られた溶液を室温で1時間撹拌し、次いで飽和NaHCO3水溶液(10mL)でクエンチした。混合物をEtOAc(500mL)と飽和NaHCO3水溶液(200mL)との間で分配し、有機層をブライン(3×200mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、濃縮し、残渣をシリカゲルカラム上(ヘキサン類/EtOAcのグラジエントで溶出)で精製することで、Int-2dcを与えた。LC/MS:(M+1)+=433.4.
DCM(15mL)中のInt-2dc(2.9g、6.70mmol)の溶液に、室温のジオキサン中の4M HCl(10mL)を加えた。反応混合物を室温で1時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮することで、メチル 4-((4-(2-アミノエチル)ベンジル)(ペンタ-4-エン-1-イル)アミノ)-4-オキソブタノエート塩酸塩(Int-2d)を与えた。LC/MS [MHCl+H]+=333.3.
室温のTHF(100ml)中の107(その調製は109の合成の中に示され、後に116のために用いられるが、この中間体化合物は、下の実施例3の中でEx-53、Ex-54およびEx-55の合成において用いられる)(10.34g、21.65mmol)の溶液に、2N水酸化リチウム一水和物(43.3ml、87mmol)を加え、混合物を45℃まで温め、一晩撹拌することで、Int-3caを粗精製の溶液として与えた。LC/MS:(M+1)+=464.3. 反応混合物を0℃まで冷却し、1M HCl(40mL)で処理した。混合物を次のステップのために直接用いた。
前のステップにおいて調製した粗精製のInt-3caに、NaHCO3(1.725g、20.54mmol)およびFmoc-OSu(3.81g、11.30mmol)を0℃で加えた。反応混合物を0℃で2時間撹拌し、1M HCl(20.5mL)で処理し、酢酸エチル(2×200mL)で抽出した。合わせた有機層を、ブライン(2×100mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、DCM中2%から5%MeOHのグラジエントで溶出して精製することで、Int-3cを与えた。LC/MS:(M+1)+=686.4.
DCM(2mL)中のtert-ブチル 3-(2-ヒドロキシエトキシ)プロパノエート(500.0mg、2.63mmol)の溶液に、CBr4(1395mg、4.21mmol)およびPPh3(965mg、3.68mmol)を0℃で加えた。混合物を室温で2時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮し、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、石油エーテル中1%-15%酢酸エチルのグラジエントで溶出して精製した。所望の生成物を含有するフラクションを合わせ、濃縮することで、tert-ブチル 6-ブロモヘキサノエートを与えた。このように調製したアセトニトリル(10ml)中のtert-ブチル 6-ブロモヘキサノエート(5g、19.91mmol)の溶液を、トリメチルアミン(13.56ml、59.7mmol)で処理し、得られた溶液を50℃で一晩加熱した。溶液を濃縮することで、Int-4baを与えた。LC/MS:M+=230.3.
DCM(6ml)中のInt-4ba(6.8g、21.92mmol)の溶液に、ジオキサン中の4N HCl(27.4ml、110mmol)を加え、得られた溶液を室温で3時間撹拌した。混合物を次いで濃縮することで、Int-4bを与えた。LC/MS:M+=174.3.
DCE(20mL)中のtert-ブチル(2-(3-オキソイソインドリン-5-イル)エチル)カルバメート(1.60g、5.79mmol)の溶液に、NsCl(1.93g、8.69mmol)、トリエチルアミン(1.76g、17.4mmol)およびDMAP(0.141g、1.16mmol)を加えた。反応混合物を40℃で14時間撹拌した。反応物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(PE中EtOAcの1%-40%グラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2eaを与えた。LC/MS:(M+Na)+:=484.4.
THF(100mL)および水(100mL)中のInt-2ea(11.3g、24.5mmol)の溶液に、LiOH(1.76g、73.5mmol)を加えた。反応混合物を25℃で5時間撹拌し、次いで得られた溶液をHCl(1M)でpH4~5に調整した。溶液をEtOAcで抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(DCM中1%-6%MeOHのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2ebを与えた。LC/MS:(M+Na)+:=502.2.
THF(8mL)中のInt-2eb(1.70g、3.55mmol)の溶液に、ボラン(0.147g、10.6mmol)を0℃で加えた。反応混合物を25℃で14時間撹拌し、次いで得られた溶液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(PE中1%-50%EtOAcのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2ecを与えた。LC/MS:(M+NH4]+=483.2.
DMF(150mL)中のInt-2ec(4.50g、9.67mmol)の溶液に、K2CO3(2.01g、14.5mmol)および3-ブロモプロパ-1-エン(1.41g、11.6mmol)を加えた。反応混合物を室温で5時間撹拌し、次いで水で希釈し、EtOAcで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(PE中1%-50%EtOAcのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2edを与えた。LC/MS:(M+H)+:=506.2.
DMF(35mL)中、Int-2ed(4.50g、8.90mmol)の溶液に、DBU(1.35g、8.90mmol)および2-メルカプトエタノール(2.08g、26.7mmol)を加えた。反応混合物を室温で14時間撹拌し、次いでC18上のカラムクロマトグラフィー(カラム:330g;移動相A:水/0.05%TFA、移動相B:ACN;流速:85mL/分;グラジエント:10%Bから20%Bまで15分で、20%Bから45%Bまで15分で 検出器:UV210nm;Rt=20分)によって精製することで、Int-2eを与えた。LC/MS:(M+H)+:=321.2. 1H NMR(300MHz,CDCl3) δ7.21-7.13(m,2H),7.10-7.01(m,1H),5.96-5.79(m,1H),5.30-5.09(m,2H),4.58(s,2H),3.84(s,2H),3.43-3.19(m,4H),2.76(t,J=7.1Hz,2H),1.41(s,9H).
DCM(225mL)中の4-ブロモベンズアルデヒド(20.0g、108mmol)、(S)-2-メチルプロパン-2-スルフィンアミド(12.5g、103mmol)、MgSO4(130g、1081mmol)の溶液に、ピリジン4-メチルベンゼンスルホネート(1.35g、5.40mmol)を窒素保護下で加えた。この混合物を25℃で72時間撹拌し、次いで得られた溶液をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(PE中1%-15%EtOAcのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2faを与えた。LC/MS:(M+H)+:=287.9、289.9.
無水DCM(200mL)中のInt-2fa(20.0g、65.9mmol)の溶液に、ブタ-3-エン-1-イルマグネシウムブロミド(15.7g、99mmol)を、-48℃で、窒素保護下で緩徐に加えた。混合物を-48℃で2時間撹拌し、次いで飽和NH4Cl水溶液(400mL)でクエンチし、DCMで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、得られた残渣(Int-2fbラセミ混合物を含有する)を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(PE中1%-35%EtOAcのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2fb-1およびInt-2fb-2を与えた。LC/MS:(M+H)+:=344.0,346.0.
室温のHCl(100mL、1,4-ジオキサン中4N)の溶液に、Int-2fb-1(17.0g、46.9mmol)を加えた。反応溶液を1時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮することで、Int-2fc-1を与えた。LC/MS:(M+H-HCl)+:=240.0,242.0.
1,4-ジオキサン(200mL)中のInt-2fc-1(8.20g、28.2mmol)およびTeoc-OSu(8.03g、31.0mmol)の溶液に、TEA(8.55g、84mmol)を25℃で加えた。この混合物を2時間撹拌し、次いで水でクエンチし、石油エーテル(PE)で抽出した。合わせた有機層を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(PE中EtOAcの1%-10%グラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2fd-1を与えた。LC/MS:(M+Na+CH3CN)+:=447.3、449.3.
トルエン(285mL)および水(95mL)中のInt-2fd-1(15.1g、37.3mmol)、カリウム(2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)エチル)トリフルオロボレート(18.7g、74.6mmol)、Cs2CO3(36.5g、112mmol)の溶液に、PdCl2(dppf)(1.37g、1.87mmol)を窒素保護下で加えた。混合物を80℃で40時間撹拌した。得られた溶液を水でクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(PE中1%-40%EtOAcのグラジエントで溶出)によって精製することで、Int-2fe-1を与えた。LC/MS:(M+Na)+:=471.4.
THF(100mL)中のInt-2fe1(10.6g、22.4mmol)の溶液に、THF(44.9mL、44.9mmol)中の1N TBAFを加えた。この混合物を室温で16時間撹拌し、次いで水でクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(PE中1%-70%EtOAcのグラジエントで溶出)によって、次いでC18上のカラムクロマトグラフィー(カラム:330g;移動相A:水(10mm NH4HCO3)、移動相B:ACN;流速:80mL/分;グラジエント:10%Bから10%Bまで10分で、20%Bから45%Bまで10分で、45%Bから70%Bまで20分で、検出器:UV210nm;Rt=25分)によって精製することで、Int-2f-1を提供した。LC/MS:(M+H)+:=305.1. 1H NMR(300MHz,CD3OD) δ7.27-7.16(m,4H),5.85-5.75(m,1H),5.00-4.85(m,2H),3.79(t,J=7.0Hz,1H),3.32-3.21(m,2H),2.75(t,J=7.4Hz,2H),2.98-1.72(m,4H),1.42(s,9H).
アセトニトリル(10ml)中のtert-ブチル 3-(2-(2-ブロモエトキシ)エトキシ)プロパノエート(5g、16.82mmol)の溶液に、トリメチルアミン(エタノール中33%、11.46ml、50.5mmol)を加え、得られた溶液を50℃で一晩加熱した。溶液を濃縮することで、2-(2-(3-(tert-ブトキシ)-3-オキソプロポキシ)エトキシ)-N,N,N-トリメチルエタンアミニウムブロミド(Int32A)を与えた。LC/MS:(M)+:276.5.
DCM(20ml)中の2-(2-(3-(tert-ブトキシ)-3-オキソプロポキシ)エトキシ)-N,N,N-トリメチルエタンアミニウムブロミド(Int-32A)(5.99g、16.81mmol)の溶液に、HCl(ジオキサン中4N)(21.01ml、84mmol)を加え、得られた溶液を室温で一晩撹拌した。溶液を濃縮することで、2-(2-(2-カルボキシエトキシ)エトキシ)-N,N,N-トリメチルエタンアミニウムブロミド(Int-32)を与えた。LC/MS:(M)+:220.1.
化合物Ex-52を、化合物Ex-50の調製と類似した方法で、ただしEx-01の代わりにEx-51を用いて調製した。Ex-52を、本明細書中に記載される方法に従って、逆相HPLCを用いて精製した。LC/MS:M+=1593.8.
0℃のDMF(1.5ml)、DCM(10ml)および水(0.5ml)中の115(66.3mg、0.044mmol)の溶液に、DIPEA(0.030ml、0.173mmol)を加え、続いてHATU(18.50mg、0.049mmol)を加え、混合物を30分間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、C18上のカラムクロマトグラフィー(30g、アセトニトリル+0.05%TFA/水+0.05%TFA 90:10から40:60で溶出)によって直接精製することで、116をE異性体およびZ異性体の混合物として、同様に116をE異性体またはZ異性体の純粋なフラクションとして提供した。LC/MS(メジャーな異性体) LC/MS:M+=1481.19;LC/MS(マイナーな異性体):LC/MS:M+=1480.
MeOH(10ml)中の116(25.1mg、0.017mmol)およびPd-C10%(3.61mg、3.39μmol)の溶液を、1気圧で1時間水素付加した。反応物をセライト上でろ過し、濃縮した。残渣をDCM/TFA 1:1で30分間処理し、次いで濃縮し、ジオキサン(100uL)中の4N HClで処理し、次いで濃縮することで、Ex-54をHCl塩の形態で提供した。LC/MS:M+=1383.44.
実施例化合物Ex-55を、ギ酸塩の形態で、Ex-54から、化合物Ex-50の合成について実施例2の中で記載されたものと同じ方法で調製した。LC/MS:M+=1583.69.
実施例化合物Ex-53を、HCl塩の形態で、中間体化合物116から、化合物Ex-51の合成について実施例1の中で記載されたものと同じ方法で調製した。LC/MS:M+=1381.33.
脱気トルエン(45ml)および水(15ml)中の4-ブロモ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド(3.00g、14.92mmol)、カリウムtert-ブチル N-[2-トリフルオロボラニウジル(trifluoroboraniudyl)エチル] カルバメート(3.82g、15.22mmol)、炭酸セシウム(17.02g、52.2mmol)および1,1’-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン-パラジウム(ii)ジクロリド ジクロロメタン錯体(0.611g、0.746mmol)の溶液を、75℃まで温め、一晩撹拌した。混合物を室温で半飽和の炭酸水素ナトリウム水溶液によりクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機フラクションをブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(ヘキサン類/EtOAc 99:1から60:40で溶出)によって精製することで、100を与えた。LC/MS:(M-55)+=210.25.
室温のDMF(10ml)中の100(1.70g、6.41mmol)および臭化アリル(0.832ml、9.61mmol)の溶液に、炭酸カリウム(1.328g、9.61mmol)を加え、混合物を50℃まで温め、1時間撹拌した。混合物を室温で半飽和の炭酸水素ナトリウム水溶液によりクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機フラクションをブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(ヘキサン類/EtOAc 99:1から70:30で溶出)によって精製することで、101を与えた。LC/MS:(M-55)+=250.29.
室温のMeOH(100ml)中の、前ステップにおいて調製した101(1.76g、5.76mmol)、4 Aモレキュラーシーブ(2g)および酢酸アンモニウム(4.44g、57.6mmol)の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(0.380g、6.05mmol)を加え、混合物を一晩振とうした。混合物を濃縮し、室温で水によりクエンチし、DCMで抽出した。合わせた有機フラクションをNa2SO4で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH 99:1から30:70で溶出)によって精製することで、102を提供した。LC/MS:(2M+H)+=613.56.
室温のDMF(4ml)中の102(220mg、0.718mmol)およびコハク酸モノメチルエステル(114mg、0.862mmol)の溶液に、HATU(300mg、0.790mmol)およびDIPEA(0.314ml、1.795mmol)を加え、混合物を30分間撹拌した。混合物を室温で飽和炭酸水素ナトリウム水溶液によりクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機フラクションをブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(ヘキサン類/EtOAc 99:1から30:70で溶出)によって精製することで、中間体を与え、これをDCM中の20%TFAで1時間処理した。反応物を濃縮し、次いで4N HCl(1.5ml)で処理し、濃縮することで103を提供した。LC/MS:(M+H)+=321.29.
0℃のDMF(100ml)中のメチル(S)-2-メチルピロリジン-2-カルボキシレート塩酸塩(7.00g、39mmol)および(S)-2-((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-3-(4-メトキシフェニル)プロパン酸(12.08g、40.9mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(17.01ml、97.0mmol)を加え、続いてHATU(19.26g、50.7mmol)を加えた。得られた混合物をそのままにして室温まで温め、一晩撹拌した。反応物を10%LiCl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機抽出物を10%LiCl水溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(ヘキサン類/EtOAc 80:20から40:60で溶出)によって精製することで、104を提供した。
EtOAc(100ml)中の104(16.4g、39.0mmol)の溶液に、ジオキサン中の4N HCl(48.8ml、195mmol)を加えた。得られた混合物を室温で18時間撹拌し、減圧下で濃縮することで105を与え、これを次のステップにおいてさらに精製せずに用いた。
0℃のDMF中の105(13.2g、37.0mmol)およびN-((ベンジルオキシ)カルボニル)-O-(tert-ブチル)-L-スレオニン(18.15g、37.0mmol)の溶液に、DIPEA(16.15ml、92mmol)を加え、続いてHATU(18.28g、48.1mmol)を加えた。得られた混合物をそのままにして室温まで温め、一晩撹拌した。反応物を10%LiCl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機抽出物を10%LiCl水溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(ヘキサン類/EtOAc 80:20から40:60で溶出)によって精製することで、106を提供した。
MeOH中の106(16.5g、27.0mmol)の溶液に、10%Pd/Cのスラリーを加え、混合物を20psiで4時間水素付加した。反応混合物をセライト上でろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、次いでDCM中に再溶解し、溶液を、2μmフィルターを通してろ過し、濃縮することで、107を与えた。
DCM中の107(3.2g、6.70mmol)の溶液に、DIPEA(1.52ml、8.71mmol)を加え、続いてジ-tert-ブチルジカーボネート(1.90g、8.71mmol)を加えた。得られた混合物を室温で2時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(ヘキサン類/EtOAc 100:0から40:60で溶出)によって精製することで、108を与えた。
THF(15ml)およびMeOH(15ml)中の108(1.43g、2.475mmol)および1N LiOH水溶液(9.90ml、9.90mmol)の溶液を45℃まで温めて4時間撹拌し、次いで32℃で48時間撹拌した。反応物を濃縮し、0℃で0.5M塩酸水溶液によりpHが約2-3になるまでクエンチし、EtOAcで抽出した。合わせた有機フラクションをNa2SO4で乾燥させ、ろ過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー(ヘキサン類/EtOAc-EtOH 99:1からEtOAc-EtOH 3:1で溶出)によって精製することで、109を与えた。LC/MS:(M+H)+=564.49.
ステップC:中間体Z-4bの調製
(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(アセトキシメチル)テトラヒドロ-2H-ピラン-2,3,4,5-テトライルテトラアセテートS-1a(5g、12.81mmol)を、AcOHおよびDCM(40mL)中の48%HBr(7.25mL、64.0mmol)の0℃の溶媒に加え、混合物を0℃で1時間撹拌した。反応混合物を氷冷した飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の中に注ぎ、混合物をDCM(3×60mL)で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、ろ過し、濃縮し、次いで粗生成物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー(0~30%EtOAc/PEで溶出)によってS-1bへと精製した。
無水DMF(45mL)中のS-1b(4.5g、10.94mmol)の溶液に、アジ化ナトリウム(0.854g、13.13mmol)を加え、反応物を18℃で30分間撹拌した。反応混合物を水(30mL)で希釈し、EtOAc(3×80mL)で抽出した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、蒸発乾固させた。粗生成物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー(0~30% EtOAc/PEで溶出)によって精製することで、S-1cを与えた。
EtOH(60mL)中のS-1c(3.15g、8.44mmol)の溶液に、10%Pd-C(0.898g、0.844mmol)を加えた。反応容器から空気を追い出し、50psi下でH2を充填した。反応物を18℃で5時間撹拌した。反応混合物をEtOAcで希釈し、セライトを通してろ過し、濃縮することで、S-1dを与え、これを次のステップのために用いた。
無水THF(20mL)中のS-1d(2.34g、6.74mmol)の溶液に、ジヒドロフラン-2,5-ジオン(0.742g、7.41mmol)およびEt3N(0.939mL、6.74mmol)を加えた。反応物を出発材料が完全に消費されるまで3時間撹拌し、次いで蒸発させた。得られた粗生成物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー(0~10% DCM/MeOHで溶出)によって精製することで、S-1eを与えた。MS(ESI):m/z(M+H)+ 448.1. 1HNMR(400MHz,CDCl3) δ:6.48(d,J=9.04Hz,1H),5.43(s,1H),5.24(t,J=8.93Hz,1H),5.07-5.17(m,2H),4.08-4.18(m,2H),4.04(q,J=6.69Hz,1H),2.72-2.84(m,1H),2.58-2.69(m,2H),2.43-2.53(m,2H),2.15(s,3H),2.06(s,3H),2.04(s,4H),2.00(s,3H).
DMF(8ml)および水(0.4ml)中のEx-01(300mg、0.215mmol)およびS-1e(115mg、0.258mmol)の溶液に、DIEA(0.150ml、0.860mmol)およびHATU(98mg、0.258mmol)を加え、得られた溶液を室温で1時間撹拌した。反応物を1N LiOH(2.58ml、2.58mmol)を滴下してクエンチし、得られた溶液を室温で2時間撹拌し、次いでろ過し、ろ液を逆相HPLC C18カラム上で水(0.05%TFA)中29-34%アセトニトリル(0.05%TFA)のグラジエントを用いて精製することで、Ex-23を与えた。LC/MS:[M+1]+=1657.1.
水浴内にある室温のTHF(16ml)中のInt-2da(0.5g、2mmol)および2-アジドエタンアミン、HCl(0.246g、2mmol)の溶液に、トリアセトキシヒドロホウ酸ナトリウム(1.06g、5mmol)を少しずつ加え、混合物を2時間撹拌した。反応物を飽和NaHCO3水溶液で緩徐にクエンチし、次いでDCMで抽出し、ブラインで洗浄した。合わせた有機層をMgSO4で乾燥させ、濃縮することで、Int-2gbを与えた。LC/MS:(M+1)+=320.3.
DMF(4ml)およびDCM(8ml)中のInt-2gb(0.64g、2mmol)およびコハク酸モノメチル(0.3g、2.3mmol)の溶液に、HATU(0.914g、2.4mmol)およびDIPEA(0.7ml、4.01mmol)を-15℃で加えた。得られた溶液を-15℃で2時間撹拌し、次いで水でクエンチし、濃縮した。残渣をC18上の逆相クロマトグラフィー(アセトニトリル/水+0.1%TFAで溶出)によって精製することで、Int-2gcを与えた。LC/MS:(M+1)+=434.3.
DCM(9mL)中のInt-2gc(0.52g、1.2mmol)の溶液に、室温でTFA(3mL、38.9mmol)を加えた。反応混合物を室温で2時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮することで、Int-2gを与えた。LC/MS:(M+1)+=334.3.
0℃のDMF(17.8ml)中の69B(1.5g、4.46mmol)の溶液に、95%NaH(0.141g、5.56mmol)を加え、得られた溶液を0℃で20分間撹拌し、続いて3-ブロモプロパ-1-イン(トルエン中80%)(0.596ml、5.35mmol)を滴下して加えた。得られた溶液に、水酸化リチウム水溶液(2M)(3345μl、6.69mmol)を滴下して加えた。反応物を室温で2時間撹拌し、ろ過し、逆相HPLC(アセトニトリル/水+0.1% TFAで溶出)によって精製することで、70Bを与えた。LC/MS:(M+1)+:361.0、(M+Na)+:383.0.
70Bの中間体76Cへの変換は、中間体76の調製ステップCからHの中で記載されたものと類似した手順に従って進めた。LC/MS:[M+1]+=812.16.
中間体117を、中間体Int-2gおよび76Cから、実施例1および1Aに記載されたものと類似した手順に従って調製した。より詳細には、Int-2gを中間体77BステップAからBの調製のための試薬および手順に従って官能化し、さらに中間体86ステップGからJの調製のための手順に従って構築(elaborate)し、次いで最後に中間体76Cと、実施例1AステップBからCの調製のための手順に従ってカップリングさせることで、117を提供した。LC/MS:(M+1)+:1573.36.
BuOH(185.00mL)/水(93mL)中のテトラキス(アセトニトリル)銅(I)ヘキサフルオロホスフェート(51.6mg、0.138mmol)、トリス[(1-ベンジル-1h-1,2,3-トリアゾール-4-イル)メチル]アミン(73.4mg、0.138mmol)およびアスコルビン酸ナトリウム(137mg、0.692mmol)を窒素でバブリングし、次いで50℃で加熱した。中間体117(435.3mg、0.277mmol)を固体として反応物の中に加えた。1時間後、反応物をpH4の水性バッファーで処理し、EtOAcで抽出した。合わせた有機層を蒸発させ、残渣を逆相クロマトグラフィー(アセトニトリル/水+0.1%ギ酸のグラジエントで溶出)によって精製することで、中間体118を提供した。LC/MS:(M+1)+:1573.2.
中間体例Ex-14の合成は、中間体118から、実施例1の中で記載されたものと類似した手順に従って、アセンブリのための代替的スペーサーの使用を包含して進めた。LC/MS:[M+1]+=1621.01.
本発明の選択された化合物を、PCSK9活性の拮抗に関するそれらの活性をアッセイするために、以下の手順のうちの1以上に供した。
PCSK9 TR-FRETアッセイは、PCSK9とLDLRとの間の相互作用を測定する。40nMビオチン化PCSK9+10nM Lance ULight Streptavidinを含有する溶液を、50mM HEPES pH7.4、0.15M NaCl、5mM CaCl2、0.01% BSAおよび0.01% Surfactant P20中に作製する。40nM rhLDLR-6xHis+10nM Eu-W1024 anti-6xHisを含有する別の溶液を、同じバッファー系の中に作製する。Echoを用いて0.750ulの化合物をアッセイプレートに移し、続いて15ulのPCSK9+Ulightおよび15ulのLDLR+Euを加える。最終のアッセイ容量は30.750ulであり、20nM PCSK9、5nM Ulight、20nM LDLRおよび5nM Euを含有する。反応物を室温で少なくとも2時間インキュベートした後、Envision Multilabel Readerを用いて蛍光測定を行う。IC50値は、非線形回帰を用いてシグモイド用量-反応曲線にデータをフィッティングすることによって決定される。ユーロピウム標識されたLDLRのカウント(Bカウント)を追跡し、化合物がLDLRに悪影響を及ぼすか観察する。Bカウントの低下は、阻害の偽陽性を示している可能性が高い。
PCSK9 Alexa FRET Standardアッセイは、PCSK9とAlexaFluor647(AF)タグ付加環状ペプチドである試薬A(KD=83nM)との間の相互作用を測定する。1nMビオチン化 PCSK9+2.5nM Lance Streptavidin Europium(Strep-Eu)を含有する溶液を、50mM HEPES pH7.4、0.15M NaCl、5mM CaCl2、0.01% BSAおよび0.01% Surfactant P20中に作製する。40nMのAlexaFluorタグ付加環状ペプチドを含有する別の溶液を、同じバッファー系の中に作製する。Echoを用いて0.750ulの化合物をアッセイプレートに移し、続いて15ulのPCSK9+Stept-Euおよび15ulのAFペプチドを加える。最終のアッセイ容量は30.750ulであり、0.5nM PCSK9、1.25nM Strep-Euおよび20nM AF環状ペプチドを含有する。反応物を室温で少なくとも2時間インキュベートした後、Envision Multilabel Readerを用いて蛍光測定を行う。IC50値は、非線形回帰を用いてシグモイド用量-反応曲線にデータをフィッティングすることによって決定される。Kiは、次いでAF環状ペプチドのIC50およびKDから計算される。ユーロピウム標識されたPCSK9のカウント(Bカウント)を追跡し、化合物がPCSK9に悪影響であるかを観察する。Bカウントの低下は、阻害の偽陽性を示している可能性が高い。この手順からのデータは、「A=’数値’(ナノモル濃度)」として報告される。
ペプチドは、0.250mmolスケールで、CEM Liberty Blueマイクロ波合成装置上で、PS Rink-Amide MBHA樹脂上でFmoc/tBuケミストリーを用いて、0.32mmol g-1で合成した。アセンブリは、4当量のDMF中Fmoc保護アミノ酸0.2M、4当量のDMF中0.5M HATU、4当量の2M DIPEAを用いたシングルカップリングを用いて実施した(Tyrについてはダブルカップリング)。Fmoc脱保護サイクルは、DMF中の20%(V/V)ピペリジンを用いて実施した。
1. N-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)-S-トリチル-L-システイン
2. (S)-1((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-2-メチルピロリジン-2-カルボン酸
3. (((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)-L-チロシン
4. N-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)-N-トリチル-L-ヒスチジン
5. (S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-4-(tert-ブトキシ)-4-オキソブタン酸
6. (S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)プロパン酸
7. (S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)プロパン酸
8. (((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)グリシン
9. N2-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)-N6-(tert-ブトキシカルボニル)-L-リジン
10. 3-(トリチルチオ)プロパン酸
RP-HPLC(Waters Deltapak C4、ダブルカートリッジ、40×100mm、15m、300A;20分かけて15%から35%ACN/水+0.1%TFA調整剤)によって精製。回収したフラクションを凍結乾燥することで、35mgの中間体化合物Int-Bを与えた。LCMS分析 C69H81F2N15O13S2の計算値:1430.62;測定値:1430.9(M+1)+
LCMS分析 C105H122F2N17O26S63-の計算値:2268.58;1135.8(M+2)2+
PCSK9 Alexa FRET Plusアッセイは、PCSK9とAlexaFluor647(AF)タグ付加環状ペプチドである試薬B(KD=35nM)との間の相互作用を測定する。1nMビオチン化 PCSK9+2.5nM Lance Streptavidin Europium(Strep-Eu)を含有する溶液を、50mM HEPES pH7.4、0.15M NaCl、5mM CaCl2、0.01%BSAおよび0.01% Surfactant P20中に作製する。1920nMのAlexaFluorタグ付加環状ペプチドを含有する別の溶液を、同じバッファー系の中に作製する。Echoを用いて0.075ulの化合物+0.675ulのDMSOをアッセイプレートの各ウェルに移し、続いて15ulのPCSK9+Stept-Euおよび15ulのAFペプチドを加える。最終のアッセイ容量は30.750ulであり、0.5nM PCSK9、1.25nM Strep-Euおよび960nM AF環状ペプチドを含有する。反応物を室温で少なくとも2時間インキュベートした後、Envision Multilabel Readerを用いて蛍光測定を行う。IC50値は、非線形回帰を用いてシグモイド用量-反応曲線にデータをフィッティングすることによって決定される。Kiは、次いでAF環状ペプチドのIC50およびKDから計算される。ユーロピウム標識されたPCSK9のカウント(Bカウント)を追跡し、化合物がPCSK9に悪影響を及ぼすか観察する。Bカウントの低下は、阻害の偽陽性を示している可能性が高い。この手順からのデータは、「P=’数値’(ナノモル濃度)」として報告される。
ペプチドは、0.250mmolスケールで、CEM Liberty Blueマイクロ波合成装置上で、PS Rink-Amide MBHA樹脂上でFmoc/tBuケミストリーを用いて、0.32mmol g-1で合成した。アセンブリは、4当量のDMF中Fmoc保護アミノ酸0.2M、4当量のDMF中1Mオキシム、4当量の0.5M N,N-ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)を用いたシングルカップリングを用いて実施した(Y01についてはダブルカップリング)。Fmoc脱保護サイクルは、DMF中の20%(V/V)ピペリジンを用いて実施した。
1.N-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)-S-トリチル-L-システイン
2.(S)-1((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-2-メチルピロリジン-2-カルボン酸
3.(S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-(4-メトキシフェニル)プロパン酸
4.N-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)-N-トリチル-L-ヒスチジン
5.(S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-4-(tert-ブトキシ)-4-オキソブタン酸
6.(S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)プロパン酸
7.(S)-2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)アミノ)-3-(5-フルオロ-1H-インドール-3-イル)プロパン酸
8.(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)-D-アラニン
9.N2-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル)-N6-(tert-ブトキシカルボニル)-L-リジン
10.3-(トリチルチオ)プロパン酸
粗精製のInt-A(0.22mmol)を、24mlのDMF中に再溶解した。6mlの1M炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、pHを7に上げた。次いで0.26mmolの1,3-ビス(ブロモメチル)ベンゼン(DMF中0.1M)を滴下して加えた。反応物を室温で20分間の撹拌下に置き、TFAで(pHが3-4になるまで)クエンチし、次いで真空中で濃縮することで、粗精製のInt-Bを提供し、これをRP-HPLC(Waters XBridge、C18、50×150mm、5μm、130A;20分かけて25%から40%ACN/水+0.1%TFA調整剤)によって精製した。回収したフラクションを凍結乾燥することで、35mgの中間体化合物Int-Bを与えた。LCMS分析 C71H85F2N15O13S2の計算値:1458.67;測定値:1458.8(M+1)+
中間体化合物Int-B(15mg)を、0.2mlの無水DMSO中に溶解した。次いで、1.5mlの無水DMSO中に溶解した15mgのALEXAFLUOR 647NHS Ester(A37566、Life technology)を加えた。20uLの無水DIPEAを加えた。反応物を、室温で12時間の撹拌下で、窒素雰囲気下、暗所に置いた。TFAで(pHが3-4になるまで)クエンチし、RP-HPLC(Dr Maish、Reprosil Gold C18、250×20mm、120Å、10μm;20分かけて20%から35%のACN中0.1%TFA/H2O中0.1%TFA、次いで5分かけて35%から40%まで、20mL/分の流速)によって精製。回収したフラクションを凍結乾燥することで、16.1mgの化合物試薬Bを与えた。LCMS分析 C107H126F2N17O26S63-の計算値:2296.64;測定値:1150.6(M+2)2+
例No.:A(standard TR Fret)=’数値’;P(Alexa Fret plus standard TR Fret)=’数値’/、なお報告される全ての値はナノモル濃度である。
PCSK9 Alexa FRET Ultraアッセイは、PCSK9とAlexaFluor647(AF)タグ付加環状ペプチドである試薬B(KD=0.99nM)との間の相互作用を測定する。1nMビオチン化 PCSK9+2.5nM Lance Streptavidin Europium(Strep-Eu)を含有する溶液を、50mM HEPES pH7.4、0.15M NaCl、5mM CaCl2、0.01%BSAおよび0.01% Surfactant P20中に作製する。1920nMのAlexaFluorタグ付加環状ペプチドを含有する別の溶液を、同じバッファー系の中に作製する。Echoを用いて0.015ulの化合物+0.735ulのDMSOをアッセイプレートの各ウェルに移し、続いて15ulのPCSK9+Stept-Euおよび15ulのAFペプチドを加える。最終のアッセイ容量は30.750ulであり、0.5nM PCSK9、1.25nM Strep-Euおよび960nM AF環状ペプチドを含有する。反応物を室温で少なくとも2時間インキュベートした後、Envision Multilabel Readerを用いて蛍光測定を行う。IC50値は、非線形回帰を用いてシグモイド用量-反応曲線にデータをフィッティングすることによって決定される。Kiは、次いでAF環状ペプチドのIC50およびKDから計算される。ユーロピウム標識されたPCSK9のカウント(Bカウント)を追跡し、化合物がPCSK9に悪影響を及ぼすか観察する。Bカウントの低下は、阻害の偽陽性を示している可能性が高い。この手順からのデータは、「Ki Ultra=’数値’(報告されるデータはナノモル濃度である)」として報告される。
Ex-01 Ki Plus=<0.00558、Ki Ultra=0.0046/Ex-02 Ki Plus=0.00558、Ki Ultra=0.005933/Ex-03 Ki Plus=0.02535、Ki Ultra=0.06803/Ex-04 Ki Plus ≦0.00558、Ki Ultra=0.004711/Ex-05 Ki Plus=0.009621、Ki Ultra=0.03296/Ex-06 Ki Plus=0.00568、Ki Ultra=0.003424/Ex-07 Ki Plus=0.05914、Ki Ultra=0.06753/Ex-08 Ki Plus=0.01574、Ki Ultra=0.06832/Ex-09 Ki Plus=0.09189、Ki Ultra=0.247/Ex-10 Ki Plus=0.005743、Ki Ultra=0.02489/Ex-11 Ki Plus=0.04334、Ki Ultra=0.2067/Ex-12 Ki Plus=0.01448、Ki Ultra=0.02247/Ex-13 Ki Plus=0.1454、Ki Ultra=0.4772/Ex-14 Ki Plus=0.01605、Ki Ultra=0.02099/Ex-15 Ki Plus=0.1027、Ki Ultra=0.2601/Ex-16 Ki Plus=0.01423、Ki Ultra=0.05141/Ex-17 Ki Plus ≦0.00558、Ki Ultra=0.0028/Ex-18 Ki Plus=0.03356、Ki Ultra=0.1183/Ex-19 Ki Plus=0.01662、Ki Ultra=0.01204/Ex-20 Ki Plus=0.01303、Ki Ultra=0.01711/Ex-21 Ki Plus=0.005692、Ki Ultra=0.001264/Ex-22 Ki Plus=0.00926、Ki Ultra=0.01519/Ex-23 Ki Plus=0.00938、Ki Ultra=0.00239/Ex-24 Ki Plus=0.00812、Ki Ultra=0.00767/Ex-25 Ki Plus=0.01127、Ki Ultra=0.00463/Ex-26 Ki Plus ≦0.00558、Ki Ultra=0.002754/Ex-27 Ki Plus ≦0.00558、Ki Ultra=0.00301/Ex-28 Ki Plus ≦0.00558、Ki Ultra=0.00078/Ex-29 Ki Plus=0.00981、Ki Ultra=0.00614/Ex-31 Ki Plus <0.00558、Ki Ultra=0.00074/Ex-35 Ki Plus=0.04652、Ki Ultra=0.08434/Ex-36 Ki Plus=0.00762、Ki Ultra=0.00507/Ex-38 Ki Plus=0.00904、Ki Ultra=0.01416/Ex-39 Ki Plus=0.00716、Ki Ultra=0.00414/Ex-40 Ki Plus=0.30800、Ki Ultra=0.86010/Ex-41 Ki Plus=0.00697、Ki Ultra=0.00628/Ex-44 Ki Plus=0.01445、Ki Ultra=0.02194/Ex-47 Ki Plus=0.01474、Ki Ultra=0.01193/Ex-48 Ki Plus=0.01169、Ki Ultra=0.01545/Ex-49 Ki Plus=0.00716、Ki Ultra=0.00414/Ex-50 Ki Standard <1.26、Ki Plus=0.01052、Ki Ultra=0.00443/Ex-51 Ki Standard <1.26、Ki Plus <0.00558、Ki Ultra=0.00597/Ex-52 Ki Standard <1.26、Ki Plus <0.00558、Ki Ultra=0.00359/Ex-53 Ki Standard <1.26、Ki Plus=0.09629、Ki Ultra=0.21500/Ex-54 Ki Standard <1.26、Ki Plus=0.36720、Ki Ultra=0.48390/Ex-55 Ki Standard <1.26、Ki Plus=0.07240、Ki Ultra=0.23800/Ex-56 Ki Standard <1.257、Ki Plus=0.02237、Ki Ultra=0.00481/Ex-57 Ki Standard <1.257、Ki Plus <0.00558、Ki Ultra=0.00162/Ex-58 Ki Standard <1.257、Ki Plus=0.00773、Ki Ultra=0.00196/Ex-59 Ki Plus=0.00788、Ki Ultra=0.004959/Ex-60 Ki Plus=0.006515、Ki Ultra=0.005312/Ex-61 Ki Plus=0.00747、Ki Ultra=0.006543.
Claims (47)
- 式I:
の化合物であって、式中、
Xは、H、F、ClまたはBrであり;
R1は:
(a)-H;もしくは
(b)-(CH2)z-R14Aから選択され、式中:zは、1-6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そしてR14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)3-4-N+(CH3)3である);または
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)3;もしくは
(aiii)式:
の部分である)、であり;
R2は:
(a)-H;および
(b)-(CH2)z-R14Aから選択され、式中:zは1から6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)3-4-N+(CH3)3である);および
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)2R14ca(式中、R14caは、-CH3もしくは-(CH2)1-4-OCH3である);
(aiii)式:
の部分;もしくは
(aiv)式:
の部分(式中、y 14Cbおよびy 14Ccは、1から4である)である)
から選択され;または
R1およびR2は、一緒に結合して、式:
の部分を形成してもよく、式中:
G1、RG1aおよびRG1bは、以下のように規定され:
(a)G1は、式:
のリンカー部分であり、式中、nq1は、1から6であり、mq1は、0、1もしくは2であり、合わせてnq1およびmq1の値は、それらが規定するリンカー部分の長さが、カルボニル部分を形成する鎖中の炭素原子を含めて鎖を構成する炭素原子および/もしくは酸素原子の合計で8個を超えないように選択され;
RG1aは:(i)-H;および(ii)4個までの炭素原子のアルキルから選択され;そして
RG1bは:
(i)式:
の部分;および
(ii)式:
の部分から選択され;もしくは
(b)G1は、式:
リンカー部分であり、式中、nq2は、0、1もしくは2であり、mq2は、1から6であり、合わせてnq2およびmq2の値は、それらが規定するリンカー部分の長さが、カルボニル部分を形成する鎖中の炭素原子を含めて鎖を構成する炭素原子および/もしくは酸素原子の合計で8個を超えないように選択され;
RG1aは:
(i)式:
の部分;および
(ii)式:
の部分から選択され;そして
RG1bは:(i)-H;および(ii)4個までの炭素原子のアルキルから選択され;
R8は、-CH3または式:
の部分であり、式中、R8aは、-Hであるか、または、直鎖、分岐鎖もしくは環状の4個までの炭素原子のアルキルであり;
Aは:
(a)式:
(b)-CH2-(CH2)y-CH2-(式中、yは、1から6である);
(c)式:
(i)式:
(ii)式:
の部分であり、式中、yは、1から5である);および
(d)式:-CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-の部分(式中、mは、1から5であり、nは、0または1から4である)
から選択され;
Bは:
(a)結合;
(b)-(CH2)1-2 -;または
(c)式:
Dは:
(a)式:
(b)式:
(c)式:
(d)式:
である、前記化合物、または薬学的に許容されるそれらのいずれかの塩。 - 式中、XがFである、請求項1に記載の式Iの化合物または薬学的に許容されるそれらのいずれかの塩。
- R2が:
(a)-(CH2)z-R14Aであって、式中:zは1から6であり、R14Aは:
(a)-H;
(c)-NH2;
(d)-N+H3;
(e)-N+(H3C)3;
(f)-NH-C(O)-[(CH2)2-4-O-]2-(CH2)2-4R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);または
(g)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-4-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)3;もしくは
(aiii)式:
請求項1から10及び12から17のいずれかの化合物または薬学的に許容されるその塩。 - R1が:
(a)-H;および
(b)-(CH2)z-R14A(式中:zは、1から6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-N+H3;または
(iii)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2-N+(CH3)3、である)
から選択される、請求項1から10及び12から18のいずれかの化合物または薬学的に許容されるその塩。 - 請求項1から21のいずれかの少なくとも1つの化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくはその遊離塩基形態、および少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤を含む、組成物。
- 高コレステロール血症を処置するための、請求項22に記載の組成物。
- 式IIEの構造を有する請求項15の化合物または薬学的に許容されるその塩:
(a)-H;もしくは
(b)-(CH2)z-R14Aから選択され、式中:zは、1-6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そしてR14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)3-4-N+(CH3)3である);または
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)3、である)、であり;
R2は:
(a)-H;および
(b)-(CH2)z-R14Aから選択され、式中:zは1から6であり、R14Aは、以下から選択され:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)3-4-N+(CH3)3である);および
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;
(aii)-N+(CH3)2R14ca(式中、R14caは、-CH3もしくは-(CH2)1-4-OCH3である)である);
Aは:
(a)-CH2-(CH2)y-CH2-(式中、yは、1から6である);
(b)式:
の部分(式中、Ab1は:
(i)式:
(ii)式:
(c)式:-CH2-(CH2)m-O-(CH2)n-の部分(式中、mは、1から5であり、nは、0または1から4である)、から選択される、前記化合物。 - R1が、
-(CH2)z-R14Aであり、式中:zは、1-6であり、R14Aは:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そしてR14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)3-4-N+(CH3)3である);または
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3、もしくは;
(aii)-N+(CH3)3である)、
であり;
R2は:
-(CH2)z-R14Aであり、式中:zは1から6であり、R14Aは以下から選択され:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)3-4-N+(CH3)3である);および
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;または
(aii)-N+(CH3)2R14ca(式中、R14caは、-CH3もしくは-(CH2)1-4-OCH3である)である);
Aは:-CH2-(CH2)y-CH2-(式中、yは、1から6である)、である、
請求項24の化合物または薬学的に許容されるその塩。 - R1が、
-(CH2)z-R14Aであり、式中:zは、1-6であり、R14Aは、-Hであり;
R2は:
-(CH2)z-R14Aであり、式中:zは1から6であり、R14Aは以下から選択され:
(i)-H;
(ii)-NH2;
(iii)-N+H3;
(iv)-N+(H3C)3;
(v)-NH-C(O)-[(CH2)2-O-]2-(CH2)2R14B(式中、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vi)-NH-C(O)-[(CH2)y12-O-]2-(CH2)y13R14B(式中:y12およびy13は、両方とも同時に2ではなく、独立して2から4であり;そして、R14Bは:-NH2;-N+H3;-N(CH3)2;もしくは-N+(CH3)3である);
(vii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは、-O-(CH2)3-4-N+(CH3)3である);および
(viii)-NH-C(O)-(CH2)yR14C(式中、yは、1から6であり、R14Cは:
(ai)-O-(CH2)2-N+(CH3)3;または
(aii)-N+(CH3)2R14ca(式中、R14caは、-CH3もしくは-(CH2)1-4-OCH3である)である);
Aは:-CH2-(CH2)y-CH2-(式中、yは、1から6である)、である、
請求項25の化合物または薬学的に許容されるその塩。 - 請求項28に記載の化合物、及び、少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤を含む組成物。
- 高コレステロール血症を処置するための、請求項29に記載の組成物。
- 請求項31に記載の化合物、及び、少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤を含む組成物。
- 高コレステロール血症を処置するための、請求項32に記載の組成物。
- 請求項34に記載の化合物、及び、少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤を含む組成物。
- 高コレステロール血症を処置するための、請求項35に記載の組成物。
- 請求項37に記載の化合物、及び、少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤を含む組成物。
- 高コレステロール血症を処置するための、請求項38に記載の組成物。
- 請求項40に記載の化合物、及び、少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤を含む組成物。
- 高コレステロール血症を処置するための、請求項41に記載の組成物。
- 請求項43に記載の化合物、及び、少なくとも1つの薬学的に許容される添加剤を含む組成物。
- 高コレステロール血症を処置するための、請求項44に記載の組成物。
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