CN112114071A - 一种欧洲越橘提取物、中国越橘提取物的鉴别和其混合物中比例的测定方法 - Google Patents

一种欧洲越橘提取物、中国越橘提取物的鉴别和其混合物中比例的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种鉴别欧洲越橘提取物和中国越橘提取物的方法，也可以进一步对其混合物进行比例的测定。包括步骤待测溶液的配制；以高效液相色谱仪对待测溶液进行分析；通过分析图谱中保留时间21分钟之前的峰，进行鉴别待测溶液中越橘提取物的种类；根据峰面积比推算越橘提取物中来源，推导待测溶液中各组分的比例。本发明的方法的操作性强，过程方便快捷，适用范围广。

Description

一种欧洲越橘提取物、中国越橘提取物的鉴别和其混合物中 比例的测定方法
技术领域
本发明属于生物鉴别技术领域，具体涉及欧洲越橘提取物、中国越橘提取物的鉴别和其混合物中比例的测定方法。
背景技术
越桔是杜鹃花科植物，原产北美，常绿矮小灌木。环北极分布，自北欧、中欧、北美至格陵兰岛和亚洲。
越橘提取物富含花青素，越橘花青素中的色素物质，主要为花青素-2-葡萄糖苷、花青素-3-木糖苷、花青素-3-半郛糖苷、花青素-2-鼠李糖苷、翠雀花-3-鼠李糖苷、翠雀花-5-葡萄糖苷、3-O-酰原花翠素、锦葵色素-3、5-二糖甙和3、3-二-酰原花萃素等。越橘花青素是高级医药中间体，有助于维持毛细血管完整性和稳定胶原质。花青素也是有力的抗氧化剂。
越橘提取物又分为中国越橘提取物和欧洲越橘提取物。两者市场价格存在较大差异。常规含量检测是用UV法去检测其中花青素的含量，无法进行区分。少数不法厂商会用中国越橘提取物或者其混合物代替纯欧洲越橘提前物进行销售。
本法正是针对这一问题，提出了解决办法，对欧洲越橘和中国越橘进行鉴别，也可以进一步对其混合物进行比例的测定。
发明内容
发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供欧洲越橘提取物、中国越橘提取物的鉴别和其混合物中比例的测定方法。
技术方案：为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：一种越橘提取物种类鉴别方法，其包括如下步骤，待测溶液的配制；以高效液相色谱仪对待测溶液进行分析；通过分析图谱中保留时间21分钟之前的峰，进行鉴别待测溶液中越橘提取物的种类；根据峰面积比推算越橘提取物中来源；所述进行高效液相色谱分析，其色谱条件的流动相包括第一流动相和第二流动相，所述第一流动相为甲酸溶液，所述第二流动项为乙腈、甲醇、甲酸的混合水溶液。
优选的，按体积比计，所述第一流动相中水比甲酸为9：1，所述第二流动项中水、乙腈、甲醇、甲酸的比为160:90:90:40。
优选的，所述色谱条件还包括，
波长：535nm
色谱柱：C18 4.6mm×150mm 5μm
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：20μl。
优选的，所述越橘提取物来源于欧洲越橘和/或中国越橘。
优选的，所述中国越橘，其提取物中包括保留时间为19.540-19.855min的物质。
优选的，所述中国越橘，其提取物中不包括氯化飞燕草素-3-O-半乳糖苷、氯化飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-O-半乳糖苷、氯化飞燕草素-3-O-阿拉伯糖苷中的一种或几种。
优选的，所述越橘提取物，其提取工艺为，(1)第1次提取：取越橘果实100g，破碎后加入0.2％盐酸的乙醇溶液1000ml，60℃水浴提取3小时，抽滤，收集抽滤液，滤渣备用；(2)第2次提取：将第1次提取的滤渣，加入0.2％盐酸的乙醇溶液1000ml，60℃水浴提取3小时，抽滤，收集抽滤液，滤渣弃去；(3)浓缩液的制备：将两次抽滤液合并，减压蒸发至无醇浓缩液；(4)提纯：浓缩液上大孔吸附树脂吸附，再用乙醇溶液解吸，收集洗脱液；(5)浓缩：洗脱液减压蒸发至无醇，干燥即得欧洲越橘提取物。
作为本发明的另一方面，本发明提供一组用于鉴别越橘种类的化合物，所述化合物为在高效液相色谱分析图谱中保留时间21分钟之前的峰对应的物质。
优选的，所述化合物包括氯化飞燕草素-3-O-半乳糖苷、氯化飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-O-半乳糖苷、氯化飞燕草素-3-O-阿拉伯糖苷、氯化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-O-阿拉伯糖苷、氯化矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷、保留时间为19.540-19.855min的物质中的一种或几种。
本发明，有益效果如下：
1)鉴别越橘提取物是属于欧洲越橘提取物还是中国越橘提取物；
2)如果是混合物，可以测定出其中欧洲越橘提取物和中国越橘提取物的比例；
3)本发明方便操作，鉴别准确度好。
附图说明
图1为纯欧洲越橘提取物HPLC图谱；
图2为纯中国越橘提取物HPLC图谱；
图3为自制混合的越橘提取物(欧洲越橘:中国越橘＝7:3)HPLC图谱；
图4为未知比例的混合越橘提取物HPLC图谱。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作更进一步的说明。
实施例1
1.仪器
高效液相色谱仪
2.色谱条件：经摸索和调整，确定了如下检测色谱条件，
波长：535nm
色谱柱：C18 4.6mm×150mm 5μm
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：20μl
流动相：A：水－甲酸(90:10)
B：水－乙腈－甲醇－甲酸(160:90:90:40)
表1
T(min) A(％) B(％)
0 93 7
35 75 25
45 35 65
46 0 100
50 0 100
51 93 7
60 93 7
3.溶液制备
(1)溶剂：甲醇:盐酸(98:2)
(2)稀释剂：水:85％磷酸(90:10)
(3)样品溶液：取越橘提取物125mg加到100mL容量瓶中，加25mL溶剂，超声使溶解，再用稀释剂定容至刻度。
提取物的提取工艺如下，
(1)第1次提取：取越橘果实100g，破碎后加入0.2％盐酸的乙醇溶液1000ml，60℃水浴提取3小时。抽滤，收集抽滤液，滤渣备用；
(2)第2次提取：将第1次提取的滤渣，加入0.2％盐酸的乙醇溶液1000ml，60℃水浴提取3小时。抽滤，收集抽滤液，滤渣弃去；
(3)浓缩液的制备：将两次抽滤液合并，减压蒸发至无醇浓缩液。
(4)提纯：浓缩液上大孔吸附树脂吸附，再用乙醇溶液解吸。收集洗脱液。
(5)浓缩：洗脱液减压蒸发至无醇。干燥即得越橘提取物。
根据该工艺，改变越橘果实的种类，即可获得相应提取物。
4.进样
在上述色谱条件下，待仪器稳定基线平衡后，各取20μl进样。
(三)鉴别：
图1为欧洲越橘提取物HPLC图谱，其分析结果如下表2
表2
Figure BDA0002692266180000041
从图1、图2两图中，可以看出，欧洲越橘提取物和中国越橘提取物的HPLC图谱存在显著差异。分析保留时间21分钟之前的峰，欧洲越橘提取物成分复杂。中国越橘提取物成分相对简单。可以通过成分差异鉴别越橘提取物是属于欧洲越橘提取物还是中国越橘提取物。
具体成分如下表3：
表3
Figure BDA0002692266180000042
7号峰出峰位置与常规越橘提取物花色苷不一样，推测为花青素的一种。
实施例2
参照实施例1的提取工艺及色谱工艺，自制一定比例的混合越橘提取物，将该提取物进行检测。将市面上购得的未知比例的混合越橘制备获得提取物，同样将该提取物采用实施例1的色谱条件进行检测。结果分别见图3、4。
分析保留时间21分钟之前的峰，下表6是数据对比和计算。用混合越橘提取物中各峰的峰面积与纯欧洲越橘提取物中相应位置的峰的峰面积相除，得到峰面积比的比值。由于样品称样量和溶剂体积一样，故峰面积比即物质含量比值。：欧洲越橘提取物和中国越橘提取物的色谱峰有部分相同，有部分是特有的，欧洲越橘提取物和中国越橘提取物的特有色谱峰的比例关系与其质量分数成正相关。实测值与预估值的差值，应系实验误差。
图3为自制混合的越橘提取物(欧洲越橘:中国越橘＝7:3)HPLC图谱，分析结果如下表4，图4为市面上购得的未知比例的混合越橘提取物HPLC图谱，分析结果如下表5。
表4
Figure BDA0002692266180000051
表5
Figure BDA0002692266180000052
表6
Figure BDA0002692266180000061
将自混越橘提取物中1～4号及6号峰的峰面积与纯欧洲、纯中国越橘提取物的峰进行对比(如表7)，其峰面积比为72％～73％，与预估值70％很接近；
将未知比例混合越橘提取物中1～4号及6号峰的峰面积与纯欧洲越橘提取物的峰进行对比，其峰面积比为31％～35％。可以判断其欧洲越橘提取物的比例约为30％。
表7
Figure BDA0002692266180000062
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种越橘提取物种类鉴别方法，其特征在于：包括如下步骤，
待测溶液的配制；
以高效液相色谱仪对待测溶液进行分析；
通过分析图谱中保留时间21分钟之前的峰，进行鉴别待测溶液中越橘提取物的种类；
根据峰面积比推算越橘提取物中来源。
所述进行高效液相色谱分析，其色谱条件的流动相包括第一流动相和第二流动相，所述第一流动相为甲酸溶液，所述第二流动项为乙腈、甲醇、甲酸的混合水溶液。
2.如权利要求1所述的越橘提取物种类鉴别方法，其特征在于：按体积比计，所述第一流动相中水比甲酸为9：1，所述第二流动项中水、乙腈、甲醇、甲酸的比为160:90:90:40。
3.如权利要求1所述的越橘提取物种类鉴别方法，其特征在于：所述色谱条件还包括，
波长：535nm
色谱柱：C18 4.6mm×150mm 5μm
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：20μl。
4.如权利要求1所述的越橘提取物种类鉴别方法，其特征在于：所述越橘提取物来源于欧洲越橘和/或中国越橘。
5.如权利要求4所述的越橘提取物种类鉴别方法，其特征在于：所述中国越橘，其提取物中包括保留时间为19.540-19.855min的物质。
6.如权利要求4所述的越橘提取物种类鉴别方法，其特征在于：所述中国越橘，其提取物中不包括氯化飞燕草素-3-O-半乳糖苷、氯化飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-O-半乳糖苷、氯化飞燕草素-3-O-阿拉伯糖苷中的一种或几种。
7.如权利要求4所述的越橘提取物种类鉴别方法，其特征在于：所述越橘提取物，其提取工艺为，
(1)第1次提取：取越橘果实100g，破碎后加入0.2％盐酸的乙醇溶液1000ml，60℃水浴提取3小时，抽滤，收集抽滤液，滤渣备用；
(2)第2次提取：将第1次提取的滤渣，加入0.2％盐酸的乙醇溶液1000ml，60℃水浴提取3小时，抽滤，收集抽滤液，滤渣弃去；
(3)浓缩液的制备：将两次抽滤液合并，减压蒸发至无醇浓缩液；
(4)提纯：浓缩液上大孔吸附树脂吸附，再用乙醇溶液解吸，收集洗脱液；
(5)浓缩：洗脱液减压蒸发至无醇，干燥即得欧洲越橘提取物。
8.一组用于鉴别越橘种类的化合物，其特征在于：所述化合物为在高效液相色谱分析图谱中保留时间21分钟之前的峰对应的物质。
9.如权利要求8所述的用于鉴别越橘种类的化合物，其特征在于：所述化合物包括氯化飞燕草素-3-O-半乳糖苷、氯化飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-O-半乳糖苷、氯化飞燕草素-3-O-阿拉伯糖苷、氯化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、氯化矢车菊素-3-O-阿拉伯糖苷、氯化矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷、保留时间为19.540-19.855min的物质中的一种或几种。
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