CN112105354A - 成纤维细胞激活蛋白抑制剂 - Google Patents

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Abstract

描述了用于调节成纤维细胞激活蛋白(FAP)的化合物和组合物。所述化合物和组合物可用作治疗包括过度增生性疾病在内的疾病的治疗剂。

Description

成纤维细胞激活蛋白抑制剂
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年12月15日提交的美国临时专利申请第62/599,630号的优先权益，该案的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
本公开大体上涉及可用于调节成纤维细胞激活蛋白的治疗剂。
背景技术
成纤维细胞激活蛋白(FAP)，又称为FAPα、分离酶(Seprase)或α2-抗纤溶酶转化酶，是属于脯氨酰寡肽酶家族S9的II型整合膜丝氨酸蛋白酶，该脯氨酰寡肽酶家族还包括DPPII、DPPIV、DPP8、DPP9及PREP酶。这一家族的特征在于具有外切二肽基肽酶(DPP)活性。FAP是另具有内肽酶活性的唯一成员(Aertgeerts,K.等人,《生物化学杂志(J BiolChem)》,2005.280(20):第19441-4页)。FAP与DPPIV具有高度同源性。FAP主要呈细胞表面同二聚体形式，但也有报导，它可与DPPIV在体内形成异二聚体(O'Brien,P.等人,《生物化学与生物物理学报(Biochim Biophys Acta)》,2008.1784(9):第1130-45页)。据称的FAP内肽酶活性的生理底物包括α2-抗纤溶酶、I型胶原蛋白、明胶及成纤维细胞生长因子21(FGF21)(Lee,K.N.等人,《生物化学(Biochemistry)》,2009.48(23):第5149-58页)，并且对于外肽酶活性，底物包括神经肽Y、B型钠尿肽、P物质及肽YY(Brokopp,C.E.等人,《欧洲心脏病杂志(Eur Heart J)》,2011.32(21):第2713-22页；Coppage,A.L.等人,《公共科学图书馆：综合》,2016.11(3):第e0151269页；Dunshee,D.R.等人,《生物化学杂志》,2016.291(11):第5986-96页；Lee,K.N.等人,《血栓形成与止血法杂志(J Thromb Haemost)》,2011.9(5):第987-96页)。
FAP已牵涉到涉及增殖、组织重构、慢性炎症和/或纤维化的疾病，包括但不限于纤维化疾病、创伤愈合、瘢痕疙瘩形成、骨关节炎、类风湿性关节炎以及涉及软骨退化的相关病症、动脉粥样硬化疾病和克罗恩氏病(Crohn's disease)。
FAP表达与包括胃癌、胰腺腺癌和肝细胞癌在内的若干类型癌症的预后不良相关(Wen,X.等人,《癌症研究(Oncol Res)》,2016；Cohen,S.J.等人,《胰腺(Pancreas)》,2008.37(2):第154-8页；Ju,M.J.等人,《美国临床病理学杂志(Am J Clin Pathol)》,2009.131(4):第498-510页)并且在结肠癌中，FAP表达增加已与侵袭性较高的疾病相关联(Henry,L.R.等人,《临床癌症研究(Clin Cancer Res)》,2007.13(6):第1736-41页)。据称，CAF上的FAPα通过诱导促进肿瘤的炎症而在调控抗肿瘤免疫反应中起到重要作用(Chen,L.等人,《生物化学与生物物理研究通讯(Biochem Biophys Res Commun)》,2017；Wen,X.等人,《癌症研究》,2016；Hugo,W.等人,《细胞(Cell)》,2016.165(1):第35-44页)。
Val-boroPro(他拉博司他(Talabostat)，PT-100)是进入临床阶段的唯一FAP抑制剂。这种化合物最初被开发作为DPPIV抑制剂，随后被评价为FAP抑制剂，而不管其缺乏选择性(Cunningham,C.C.,《研究药物专家评论(Expert Opin Investig Drugs)》,2007.16(9):第1459-65页)。在II期中，已在多种癌症中测试这一药剂与标准细胞毒性化学疗法的组合，不过，功效终点并未得到满足(Eager,R.M.等人,《BMC癌症(BMC Cancer)》,2009.9:第263页；Narra,K.等人,《癌症生物学与治疗(Cancer Biol Ther)》,2007.6(11):第1691-9页；Eager,R.M.等人,《临床肿瘤学(英国皇家放射科医学院)(Clin Oncol R Coll Radiol)》,2009.21(6):第464-72页)。有两项III期试验明显地由于安全性和功效问题而早早地终止(Jansen,K.等人,《药物化学杂志(J Med Chem)》,2014.57(7):第3053-74页)。由于Val-boroPro因在pH 7.8下静置时环化而迅速地丧失蛋白酶抑制活性，而鉴于这一药剂在较高剂量下观察到临床毒性，故难以在患者体内达到有效浓度(Narra,K.等人,《癌症生物学与治疗》,2007.6(11):第1691-9页)。
改善FAP抑制剂选择性以及这些抑制剂改善体内安全性和功效的特性仍有较大余地。
发明内容
本文提供了前述的化合物、其盐、药物组合物以及其制备和使用方法。在一个方面，提供了一种式(I)的化合物：
Figure GDA0002789796510000021
或其药学上可接受的盐，其中：
R是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rd取代；
m是0、1、2、3或4；
n是0、1、2、3或4，
其中m+n是1、2、3或4；
X是-C(＝O)-、-O-、-CH(OH)-、-S-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-；
L是
(a)
Figure GDA0002789796510000031
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
Ra是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于Ra的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Re取代，
R1和R2彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C1-C2烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R1和R2的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rf取代，或R1和R2连同其所连接的一个或多个碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rf取代，q是1、2或3，
R3和R4彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R3和R4的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rg取代，或R3和R4连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rg取代，并且
p是0、1或2；
(b)
Figure GDA0002789796510000032
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
R5和R6彼此独立地并且在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R5和R6的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rh取代，
Rb和Rc独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基、C6-C14芳基或-C(＝O)OR17，其中关于Rb和Rc的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Ri取代，并且
r是1、2或3；或
(c)
Figure GDA0002789796510000041
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
R7和R8彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R7和R8的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rj取代，或R7和R8连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rj取代，
R9和R10彼此独立地并且在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R9和R10的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rk取代，
s是1、2或3，
t是1、2或3，
其中s+t是2、3或4，
u是0或1，并且
v是0或1；
Y是任选地被R11取代的C6-C9芳基、任选地被R12取代的6至10元杂芳基或任选地被R13取代的3至12元杂环基，其中当Y是苯基或萘基时，关于Y的所述苯基或萘基被至少一个R11取代，并且其中当L是*-NH-CH2-**并且Y是任选地被取代的喹啉基时，关于Y的所述任选地被取代的喹啉基在2位、3位、5位、6位、7位或8位处连接至母结构，其中
R11、R12和R13彼此独立地并且在每次出现时独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C4-C8环烯基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基、C6-C14芳基、卤素、氰基、氧代、-OR14、-NR15R16、-SR14、-NO2、-C＝NH(OR14)、-C(O)R14、-OC(O)R14、-C(O)OR14、-C(O)NR15R16、-NR14C(O)R15、-NR14C(O)OR15、-NR14C(O)NR15R16、-S(O)R14、-S(O)2R14、-NR14S(O)R15、-NR14S(O)2R15、-S(O)NR15R16、-S(O)2NR15R16或-P(O)(OR15)(OR16)，其中各R11、R12和R13独立地任选被RL取代；
各R14独立地是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基或3至12元杂环基，其中关于R14的所述C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基和3至12元杂环基独立地任选被以下取代：卤素、-OH、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基；
R15和R16彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基或3至12元杂环基，其中关于R15和R16的所述C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基和3至12元杂环基独立地任选被以下取代：卤素、-OH、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基，
或R15和R16连同其所连接的原子一起形成3至6元杂环基，其任选地被以下取代：卤素、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基；并且
Rd、Re、Rf、Rg、Rh、Ri、Rj及Rk彼此独立地并且在每次出现时独立地是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基、3至12元杂环基、-OR14、-NR15R16、氰基或硝基；并且
各RL独立地是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基、3至12元杂环基、-OR14、-C(O)R14、-NR15R16、氰基、氧代或硝基。
在一个方面，提供了一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有以下特征中的一种或多种：
(i)X是-C(＝O)-、-O-或-CH(OH)-；
(ii)L是
(a)-NH-CR1R2-，如-NH-CH2-或-NH-CH(CH3)-，或其中R1和R2连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，如亚环丙基；
(b)-CR5R6-CH(NRbRc)-，包括但不限于，R6、Rb和Rc各自是H，并且R5是H或C1-C6烷基的情形；或
(c)
Figure GDA0002789796510000051
其中*表示与Y-X-部分的连接点，**表示与分子其余部分的连接点，如
Figure GDA0002789796510000052
(iii)Y是：
(a)任选地被R11取代的C6-C9芳基，如未被取代的2,3-二氢-1H-茚-2-基、或被至少一个R11取代的苯基或萘基，包括但不限于各R11独立地选自卤素、三卤代甲基、氰基和-C(＝O)NH2的情形；
(b)任选地被R12取代的6至10元杂芳基，如被至少一个R12取代的吡啶基或嘧啶基；或
(c)任选地被R13取代的3至12元杂环基，如被至少一个R13取代的哌啶基。
另一方面，提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中-X-L-部分选自由以下组成的组：
Figure GDA0002789796510000061
Figure GDA0002789796510000062
其中*表示与所述Y部分的连接点，并且**表示与分子其余部分的连接点。
还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括含式(I)在内的本文中任何式的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
还提供一种治疗有需要个体的由成纤维细胞激活蛋白(FAP)介导的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的如本文中详述化合物，包括但不限于式(I)化合物，或其药学上可接受的盐、或包含此类化合物或盐的药物组合物。在一个方面，此类疾病或病症以增殖、组织重构、慢性炎症、肥胖、葡萄糖不耐或胰岛素不敏感为特征。在一个方面，所述疾病或病症是乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、黑素瘤、纤维肉瘤、骨肉瘤、结缔组织肉瘤、肾细胞癌、巨大细胞癌、鳞状细胞癌、白血病、皮肤癌、软组织癌、肝癌、胃肠癌或腺癌。在一个特定方面，所述疾病或病症是转移性肾癌、慢性淋巴细胞性白血病、胰腺腺癌或非小细胞肺癌。在另一个方面，所述疾病或病症是纤维化疾病、创伤愈合、瘢痕疙瘩形成、骨关节炎、类风湿性关节炎以及涉及软骨退化的相关病症、动脉粥样硬化疾病、克罗恩氏病或II型糖尿病。在另一个特定方面，提供了一种减少有需要个体的肿瘤生长、肿瘤增殖或肿瘤形成的方法，所述方法包含向所述个体施用如本文中详述的化合物，如式(I)化合物，或其药学上可接受的盐、或前述的药物组合物。
附图说明
图1A显示在rhFAP作用下PRXS-AMC随时间降解。图1B显示在rhFAP作用下Z-Gly-Pro-AMC随时间降解。
图2A显示在rhPREP作用下PRXS-AMC随时间降解。图2B显示在rhPREP作用下Z-Gly-Pro-AMC随时间降解。
图3A显示在rhDPPIV作用下PRXS-AMC随时间降解。图3B显示在rhDPP9作用下PRXS-AMC随时间降解。
图4显示在施用后各种时间点之后，给与化合物13的小鼠的血浆中FAPα的活性。
图5显示在施用后各种时间点之后，给与化合物13的小鼠的血浆中DPPIV的活性。
图6A显示在施用后各种时间点之后，给与示例性化合物的小鼠的血浆中FAP的活性。图6B显示在施用后各种时间点之后，给与示例性化合物的小鼠的血浆中DPPIV的活性。图6C显示如在给与示例性化合物的小鼠的血浆中所测量的FAP活性随时间的变化和化合物暴露量的比较。
图7显示在口服施用(第7天)测试化合物24(50mg/kg，每天两次)或媒剂对照之后，C57/BL6小鼠中MC38结肠癌细胞系源性异种移植肿瘤的体积。图8显示在施用(第7天)测试化合物24(50mg/kg，每天两次)或媒剂对照之后，带有MC38结肠癌细胞系源性异种移植肿瘤的C47/BL6小鼠的体重增加。图9显示当用测试化合物24或对照媒剂治疗小鼠时肿瘤体积的各个记录。图10显示当用测试化合物24或对照媒剂治疗小鼠时肿瘤总质量的平均值和平均值的标准误差(SEM)。
图11A显示施用媒剂或化合物13(示例性化合物)的带有B16-F10肿瘤的小鼠的血浆和肿瘤中示例性化合物的浓度。图11B显示施用媒剂或化合物13(示例性化合物)的带有B16-F10肿瘤的小鼠的血浆和肿瘤中的FAP活性。
图12A显示施用媒剂或化合物13(示例性化合物)的带有MC38肿瘤的小鼠的血浆和肿瘤中示例性化合物的浓度。图12B显示施用媒剂或化合物13(示例性化合物)的带有MC38肿瘤的小鼠的血浆和肿瘤中的FAP活性。
图13A显示抗FGF21蛋白质印迹的图像，展示了在rhFAP作用下rhFGF21降解。图13B显示图13A中所示蛋白质印迹的光密度测定分析。图13C显示抗FGF21蛋白质印迹的图像，展示了化合物13(示例性化合物)介导的对在rhFAP作用下rhFGF21降解的抑制。图13D显示图13C中所示蛋白质印迹的光密度测定分析。
图14A显示抗FGF21蛋白质印迹的图像，展示了化合物13(示例性化合物)以剂量依赖性方式介导的对在rhFAP作用下rhFGF21降解的抑制。图14B显示图14A中所示蛋白质印迹的光密度测定分析和由所得曲线确定的IC50。
图15显示关于大鼠口服施用媒剂或化合物13(示例性化合物)，随后静脉内施用rhFGF21的实验方案的概述，并且还显示所得到的抗FGF21蛋白质印迹、FAP活性和血浆暴露水平随时间的变化。
图16显示在静脉内施用化合物13(示例性化合物)之后仓鼠体内FAP活性和FGF21水平随时间的变化。
具体实施方式
本文描述了根据式(I)的化合物：
Figure GDA0002789796510000081
和其药学上可接受的盐。所述化合物可用于抑制成纤维细胞激活蛋白(FAPα)。在某些实施例中，所述化合物被用于治疗个体的由FAPα介导的疾病或病症。此类疾病或病症可包括或特征为增殖、组织重构、慢性炎症、肥胖、葡萄糖不耐和/或胰岛素不敏感。在一些实施例中，所述化合物被用于治疗癌症。
定义
如本文所使用，除非另外清楚地指示，否则使用术语“一个(种)”等是指一个(种)或多个(种)。
本文中提到“约”一个值或参数包括(且描述)有关该值或参数本身的实施例。例如，提到“约X”的描述包括关于“X”的描述。
除非另外规定，否则如本文所使用，“烷基”是指具有指定碳原子数(即，C1-C10意思指一至十个碳原子)的饱和直链(即，未分支)或分支链单价烃链或其组合。特定烷基是具有1至20个碳原子(“C1-C20烷基”)、具有1至10个碳原子(“C1-C10烷基”)、具有6至10个碳原子(“C6-C10烷基”)、具有1至6个碳原子(“C1-C6烷基”)、具有2至6个碳原子(“C2-C6烷基”)或具有1至4个碳原子(“C1-C4烷基”)的那些。烷基的实例包括但不限于如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等基团。
如本文所使用，“亚烷基”是指与烷基相同但具有二价的残基。特定亚烷基是具有1至20个碳原子(“C1-C20亚烷基”)、具有1至10个碳原子(“C1-C10亚烷基”)、具有6至10个碳原子(“C6-C10亚烷基”)、具有1至6个碳原子(“C1-C6亚烷基”)、具有1至5个碳原子(“C1-C5亚烷基”)、具有1至4个碳原子(“C1-C4亚烷基”)或具有1至3个碳原子(“C1-C3亚烷基”)的那些。亚烷基的实例包括但不限于如亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基(-CH2CH2CH2-)、异亚丙基(-CH2CH(CH3)-)、亚丁基(-CH2(CH2)2CH2-)、异亚丁基(-CH2CH(CH3)CH2-)、亚戊基(-CH2(CH2)3CH2-)、亚己基(-CH2(CH2)4CH2-)、亚庚基(-CH2(CH2)5CH2-)、亚辛基(-CH2(CH2)6CH2-)等基团。
除非另外规定，否则如本文所使用，“烯基”是指并且包括具有至少一个烯系不饱和位点(即，具有至少一个式C＝C的部分)并且具有指定碳原子数(即，C2-C10意思指二至十个碳原子)的不饱和直链(即，未分支)或分支链单价烃链或其组合。烯基可具有“顺式”或“反式”构型，或替代地，具有“E”或“Z”构型。特定烯基是具有2至20个碳原子(“C2-C20烯基”)、具有6至10个碳原子(“C6-C10烯基”)、具有2至8个碳原子(“C2-C8烯基”)、具有2至6个碳原子(“C2-C6烯基”)或具有2至4个碳原子(“C2-C4烯基”)的那些。烯基的实例包括但不限于如乙烯基(ethenyl/vinyl)、丙-1-烯基、丙-2-烯基(或烯丙基)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、戊-1-烯基、戊-2-烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基等基团。
除非另外规定，否则如本文所使用，“炔基”是指并且包括具有至少一个炔系不饱和位点(即，具有至少一个式C≡C的部分)且具有指定碳原子数(即，C2-C10意思指二至十个碳原子)的不饱和直链(即，未分支)或分支链单价烃链或其组合。特定炔基是具有2至20个碳原子(“C2-C20炔基”)、具有6至10个碳原子(“C6-C10炔基”)、具有2至8个碳原子(“C2-C8炔基”)、具有2至6个碳原子(“C2-C6炔基”)或具有2至4个碳原子(“C2-C4炔基”)的那些。炔基的实例包括但不限于如乙炔基(ethynyl/acetylenyl)、丙-1-炔基、丙-2-炔基(或炔丙基)、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基等基团。
除非另外规定，否则如本文所使用，“环烷基”是指并且包括具有指定碳原子数(即，C3-C10意思指三至十个碳原子)的饱和环状单价烃结构。环烷基可以由一个环组成，如环己基，或由多个环组成，如金刚烷基。包含多个环的环烷基可以是稠合环烷基、螺环烷基或桥接环烷基，或其组合。特定环烷基是具有3至12个环碳原子的那些。优选的环烷基是具有3至8个环碳原子(“C3-C8环烷基”)、具有3至6个碳原子(“C3-C6环烷基”)或具有3至4个环碳原子(“C3-C4环烷基”)的环状烃。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、降冰片烷基等。
如本文所使用，“亚环烷基”是指与环烷基相同但具有二价的残基。亚环烷基可由一个环或多个环组成，所述多个环可以是稠合环、螺环或桥接环，或其组合。特定亚环烷基是具有3至12个环碳原子的那些。优选的亚环烷基是具有3至8个环碳原子(“C3-C8亚环烷基”)、具有3至6个碳原子(“C3-C6亚环烷基”)或具有3至4个环碳原子(“C3-C4亚环烷基”)的环状烃。亚环烷基的实例包括但不限于亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基、亚环庚基、亚降冰片基等。亚环烷基可通过相同环碳原子或不同环碳原子连接至其余结构。当亚环烷基通过两个不同的环碳原子连接至其余结构时，连接键可相对于彼此呈顺式或反式。例如，亚环丙基可包括1,1-亚环丙基和1,2-亚环丙基(例如顺-1,2-亚环丙基或反-1,2-亚环丙基)，或其混合物。
除非另外规定，否则“环烯基”是指并且包括具有至少一个烯系不饱和位点(即，具有至少一个式C＝C的部分)且具有指定碳原子数(即，C3-C10意思指三至十个碳原子)的不饱和环状非芳香族单价烃结构。环烯基可以由一个环组成，如环己烯基，或由多个环组成，如降冰片烯基。优选的环烯基是具有3至8个环碳原子的不饱和环烃(“C3-C8环烯基”)。环烯基的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、降冰片烯基等。
如本文所使用，“亚环烯基”是指与环烯基相同但具有二价的残基。
如本文所使用，“芳基”或“Ar”是指具有单个环(例如苯基)或多个稠环(例如萘基或蒽基)的不饱和芳香族碳环基团，所述稠环可以是或可以不是芳香族环。特定芳基是具有6至14个环碳原子的那些(“C6-C14芳基”)。具有多个环且至少一个环是非芳香环的芳基可在芳香环位置处或在非芳香环位置处连接至母结构。在一种变化形式中，具有多个环且至少一个环是非芳香环的芳基在芳香环位置处连接至母结构。
如本文所使用，“亚芳基”是指与芳基相同但具有二价的残基。特定亚芳基是具有6至14个环碳原子的那些(“C6-C14亚芳基”)。
如本文所使用，“杂芳基”是指具有1至14个环碳原子和至少一个环杂原子的不饱和芳香族环状基团，所述环杂原子包括但不限于如氮、氧和硫等杂原子。杂芳基可以具有单个环(例如吡啶基、呋喃基)或多个稠环(例如吲哚嗪基、苯并噻吩基)，所述稠环可以是或可以不是芳香环。特定杂芳基是具有1至12个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的5至14元环；具有1至8个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的5至10元环；或具有1至5个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的5元、6元或7元环。在一种变化形式中，特定杂芳基是具有1至6个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的单环芳香族5元、6元或7元环。在另一变化形式中，特定杂芳基是具有1至12个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的多环芳香环。具有多个环且至少一个环是非芳香环的杂芳基可在芳香环位置处或在非芳香环位置处连接至母结构。在一种变化形式中，具有多个环且至少一个环是非芳香环的杂芳基在芳香环位置处连接至母结构。杂芳基可以在环碳原子或环杂原子处连接至母结构。
在适用的情况下，杂芳基可描绘为互变异构形式。即使某些互变异构形式是例如杂环基，此类化合物也被认为是杂芳基。例如，杂芳基
Figure GDA0002789796510000111
可描绘为杂环互变异构形式
Figure GDA0002789796510000112
不管显示哪种互变异构体，所述基团都被认为是杂芳基。
如本文所使用，“杂环”、“杂环的”或“杂环基”是指具有单个环或多个稠环且具有1至14个环碳原子和1至6个如氮、硫或氧等环杂原子的饱和或不饱和非芳香族环状基团。包含多个环的杂环可以是稠合杂环、桥接杂环或螺杂环，或其任何组合，但不包括杂芳基。杂环基可任选独立地被一个或多个本文所描述的取代基取代。特定杂环基是具有1至13个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至14元环；具有1至11个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至12元环；具有1至9个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至10元环；具有1至7个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至8元环；或具有1至5个环碳原子和1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的3至6元环。在一种变化形式中，杂环基包括具有1至2个、1至3个、1至4个、1至5个或1至6个环碳原子和1至2个、1至3个或1至4个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的单环3元、4元、5元、6元或7元环。在另一变化形式中，杂环基包括具有1至12个环碳原子和1至6个独立地选自氮、氧和硫的环杂原子的多环非芳香环。
“卤代”或“卤素”是指原子数为9至85的第17族系列元素。优选的卤代基团包括氟、氯、溴和碘基。在一个残基被多个卤素取代的情况下，可以通过使用对应于所连接的卤素部分的数量的前缀来提及，例如二卤代芳基、二卤代烷基、三卤代芳基等是指被两个(“二”)或三个(“三”)卤代基团取代的芳基和烷基，所述卤代基团可以但不一定是相同卤素；因此，4-氯-3-氟苯基在二卤代芳基的范围内。各氢被卤代基团置换的烷基称为“全卤代烷基”。优选的全卤代烷基是三氟甲基(-CF3)。类似地，“全卤代烷氧基”是指卤素替代烃中构成烷氧基的烷基部分的每个H的烷氧基。全卤代烷氧基的实例是三氟甲氧基(-OCF3)。
“羰基”是指基团C＝O。
“氧代”是指部分＝O。
除非另外说明，否则“任选地被取代”意思指一个基团可以未被取代或被一个或多个(例如1、2、3、4或5个)关于该基团所列的取代基取代，其中所述取代基可相同或不同。在一个实施例中，任选地被取代的基团具有一个取代基。在另一个实施例中，任选地被取代的基团具有两个取代基。在另一个实施例中，任选地被取代的基团具有三个取代基。在另一个实施例中，任选地被取代的基团具有四个取代基。在一些实施例中，任选地被取代的基团具有1至2个、1至3个、1至4个、1至5个、2至3个、2至个4或2至5个取代基。在一个实施例中，任选地被取代的基团是未被取代的。
除非另外清楚地指示，否则如本文所使用，“个体”意图指哺乳动物，包括但不限于灵长类动物、人类、牛科动物、马、猫科动物、犬科动物或啮齿动物。在一种变化形式中，个体是人。
如本文所使用，“治疗(treatment/treating)”是用于获得包括临床结果在内的有益或所希望的结果的方法。有益或所希望的结果包括但不限于以下一种或多种：减少由疾病引起的一种或多种症状；降低疾病的程度；使疾病稳定(例如预防或延迟疾病的恶化)；预防或延迟疾病的扩散；延迟疾病的发生或复发；延迟或减慢疾病的进展；改善疾病状态；使疾病缓解(部分缓解或完全缓解)；减少治疗疾病所需的一种或多种其它药物的剂量；增强另一种药物的作用；延迟疾病的进展；提高生活质量；和/或延长存活期。本文所描述的方法涵盖这些治疗方面中的任一个或多个。
如本文所使用，术语“有效量”意图指以给定治疗形式应有效的本发明化合物的此类量。本领域中应了解，有效量可以分为一次或多次剂量，即，可能需要单次剂量或多次剂量来实现所希望的治疗。在施用一种或多种治疗剂的情况下，可考虑有效量，并且单一药剂如果结合一种或多种其它药剂可实现或实现了所希望的或有益的结果，则可认为该药剂是以有效量提供。任一种共施用化合物的适合剂量可因各化合物的组合作用(例如加和作用或协同作用)而任选地减少。
“治疗有效量”是指足以产生所希望的治疗结果的化合物或其盐的量。
如本文所使用，“单位剂型”是指适合作为单位剂量的物理离散单元，每一单元含有所计算的与所需药物载体结合产生所希望的治疗作用的预定量的活性成分。单位剂型可以含有单药疗法或组合疗法。
如本文所使用，“药学上可接受”或“药理学上可接受”意思指一种材料不是在生物学上或在其它方面不合需要的，例如该材料可以并入施用给患者的药物组合物中，而不会引起任何明显不合需要的生物作用，或不会以有害方式与含有该材料的组合物的任何其它组分相互作用。药学上可接受的载体或赋形剂优选地满足毒理学和制造测试所需的标准，和/或包括在美国食品和药物管理局(U.S.Food and Drug administration)所制定的无活性成分指南中。
“药学上可接受的盐”是保持游离(非盐)化合物的至少某些生物活性并且可以作为药物或医药施用给个体的盐。例如，此类盐包括：(1)与无机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐；或与有机酸，如乙酸、草酸、丙酸、琥珀酸、顺丁烯二酸、酒石酸等形成的酸加成盐；(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子，例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子置换时；或与有机碱配位时形成的盐。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。药学上可接受的盐可通过制造工艺原位制备，或通过使呈游离酸或碱形式的纯化的本发明化合物分别与适合有机或无机碱或酸分别地反应，并在随后的纯化过程中分离由此形成的盐来制备。
如本文所使用，术语“赋形剂”意思指可用于制造药物或医药，如含有本发明化合物作为活性成分的片剂的惰性或无活性物质。术语赋形剂可包含各种物质，包括但不限于用作粘合剂、崩解剂、包衣、压缩/囊封助剂、乳膏或洗剂、润滑剂、供肠胃外施用的溶液、用于咀嚼片的材料、甜味剂或调味剂、悬浮剂/胶凝剂、或湿式造粒剂的任何物质。粘合剂包括例如卡波姆(carbomers)、聚维酮、黄原胶等；包衣包括例如邻苯二甲酸乙酸纤维素、乙基纤维素、结冷胶、麦芽糊精、肠溶包衣等；压缩/囊封助剂包括例如碳酸钙、右旋糖、果糖dc(dc＝“直接可压缩”)、蜂蜜dc、乳糖(无水或单水合物；任选地与阿斯巴甜糖(aspartame)、纤维素或微晶纤维素组合)、淀粉dc、蔗糖等；崩解剂包括例如交联羧甲基纤维素钠、结冷胶、羟基乙酸淀粉钠等；乳膏或洗剂包括例如麦芽糊精、角叉菜胶等；润滑剂包括例如硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酰反丁烯二酸钠等；用于咀嚼片的材料包括例如右旋糖、果糖dc、乳糖(单水合物，任选地与阿斯巴甜糖或纤维素组合)等；悬浮剂/胶凝剂包括例如角叉菜胶、羟基乙酸淀粉钠、黄原胶等；甜味剂包括例如阿斯巴甜糖、右旋糖、果糖dc、山梨糖醇、蔗糖dc等；以及湿式造粒剂包括例如碳酸钙、麦芽糊精、微晶纤维素等。
应理解，本文以“包含”描述的各方面和实施例包括“由实施例组成”和“基本上由实施例组成”。
当一种组合物被描述为“基本上由所列组分组成”时，该组合物含有明确地列出的组分，并且还可以含有不会显著地影响所治疗的疾病或病况的其它组分，如痕量杂质。然而，组合物不含除明确列出的组分外的会显著地影响所治疗的疾病或病况的任何其它组分；或如果组合物含有除所列出的组分外的会显著地影响所治疗的疾病或病况的额外组分，则该组合物不含足以显著地影响所治疗的疾病或病况的浓度或量的这些额外组分。当一种方法被描述为“基本上由所列步骤组成”时，该方法含有所列的步骤，并且可以含有不会显著地影响所治疗的疾病或病况的其它步骤，但该方法不含除明确列出的步骤外的会显著地影响所治疗的疾病或病况的任何其它步骤。
当一个部分指示为被“至少一个”取代基取代时，它也涵盖刚好一个取代基的公开内容。
化合物
在一个方面，提供了一种式(I)的化合物：
Figure GDA0002789796510000141
或其药学上可接受的盐，其中：
R是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rd取代；
m是0、1、2、3或4；
n是0、1、2、3或4，
其中m+n是1、2、3或4；
X是-C(＝O)-、-O-、-CH(OH)-、-S-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-；
L是
(a)
Figure GDA0002789796510000142
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
Ra是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于Ra的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Re取代，
R1和R2彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C1-C2烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R1和R2的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rf取代，
或R1和R2连同其所连接的一个或多个碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rf取代，
q是1、2或3，
R3和R4彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R3和R4的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rg取代，
或R3和R4连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rg取代，并且
p是0、1或2；
(b)
Figure GDA0002789796510000151
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
R5和R6彼此独立地并且在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R5和R6的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rh取代，
Rb和Rc独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基、C6-C14芳基或-C(＝O)OR17，其中关于Rb和Rc的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Ri取代，并且
r是1、2或3；或
(c)
Figure GDA0002789796510000152
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
R7和R8彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R7和R8的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rj取代，
或R7和R8连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rj取代，
R9和R10彼此独立地并且在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R9和R10的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rk取代，
s是1、2或3、
t是1、2或3、
其中s+t是2、3或4，
u是0或1，并且
v是0或1；
Y是任选地被R11取代的C6-C9芳基、任选地被R12取代的6至10元杂芳基或任选地被R13取代的3至12元杂环基，其中当Y是苯基或萘基时，关于Y的所述苯基或萘基被至少一个R11取代，并且其中当L是*-NH-CH2-**并且Y是任选地被取代的喹啉基时，关于Y的所述任选地被取代的喹啉基在2位、3位、5位、6位、7位或8位处连接至母结构，其中
R11、R12和R13彼此独立地并且在每次出现时独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C4-C8环烯基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基、C6-C14芳基、卤素、氰基、氧代、-OR14、-NR15R16、-SR14、-NO2、-C＝NH(OR14)、-C(O)R14、-OC(O)R14、-C(O)OR14、-C(O)NR15R16、-NR14C(O)R15、-NR14C(O)OR15、-NR14C(O)NR15R16、-S(O)R14、-S(O)2R14、-NR14S(O)R15、-NR14S(O)2R15、-S(O)NR15R16、-S(O)2NR15R16或-P(O)(OR15)(OR16)，其中各R11、R12和R13独立地任选被RL取代；
各R14独立地是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基或3至12元杂环基，其中关于R14的所述C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基和3至12元杂环基独立地任选被以下取代：卤素、-OH、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基；
R15和R16彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基或3至12元杂环基，其中关于R15和R16的所述C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基和3至12元杂环基独立地任选被以下取代：卤素、-OH、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基，
或R15和R16连同其所连接的原子一起形成3至6元杂环基，其任选地被以下取代：卤素、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基；
Rd、Re、Rf、Rg、Rh、Ri、Rj及Rk彼此独立地并且在每次出现时独立地是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基、3至12元杂环基、-OR14、-NR15R16、氰基或硝基；并且
各RL独立地是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基、3至12元杂环基、-OR14、-C(O)R14、-NR15R16、氰基、氧代或硝基。
在本文的描述中，应理解，针对一个部分的每一描述、变化、实施例或方面可与针对其它部分的每一描述、变化、实施例或方面组合，就如同具体地且个别地列出每一描述组合一般。例如，本文所提供的关于式(I)中R的每一描述、变化、实施例或方面可以与关于Y、X、L、m和/或n的每一描述、变化、实施例或方面组合，就如同具体地且个别地列出每一组合一般。还应理解，适用时，关于式(I)的所有描述、变化、实施例或方面同等地适用于本文中详述的其它各式，并且同等地描述，就如同分别且个别地列出关于所有各式的每一描述、变化、实施例或方面一般。例如，适用时，关于式(I)的所有描述、变化、实施例或方面同等地适用于本文中详述的式Ia、Ib、II、IIa、IIb、III、IIIa、IIIb、IV、IVa、IVb、V、Va、Vb、VI、VIa、VIb、VII、VIIa、VIIb、VIII、VIIIa及VIIIb中的任一个，并且同等地描述，就如同分别且个别地列出关于所有各式的每一描述、变化、实施例或方面一般。
在一些实施例中，所述式(I)的化合物具有式(Ia)：
Figure GDA0002789796510000171
或其盐，其中Y、X、L、R、m及n如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(I)的化合物具有式(Ib)：
Figure GDA0002789796510000172
或其盐，其中Y、X、L、R、m及n如关于式(I)所定义。
在m是1且n是1的式(I)的化合物的一些实施例中，所述化合物具有式(II)：
Figure GDA0002789796510000181
或其盐，其中Y、X、L和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式的化合物(II)具有式(IIa)：
Figure GDA0002789796510000182
或其盐，其中Y、X、L和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(II)的化合物具有式(IIb)：
Figure GDA0002789796510000183
或其盐，其中Y、X、L和R如关于式(I)所定义。
在L是-NH-CH2-的式(II)的化合物的一些实施例中，所述化合物具有式(III)：
Figure GDA0002789796510000184
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(III)的化合物具有式(IIIa)：
Figure GDA0002789796510000185
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(III)的化合物具有式(IIIb)：
Figure GDA0002789796510000191
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(III)的化合物具有式(III-1)：
Figure GDA0002789796510000192
或其盐，其中Y和X如关于式(I)所定义。
在L是-NH-CH(CH3)-的式(II)的化合物的一些实施例中，所述化合物具有式(IV)：
Figure GDA0002789796510000193
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(IV)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈S构型。在式(IV)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈R构型。
在一些实施例中，所述式(IV)的化合物具有式(IVa)：
Figure GDA0002789796510000194
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(IVa)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈S构型。在式(IVa)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈R构型。
在一些实施例中，所述式(IV)的化合物具有式(IVb)：
Figure GDA0002789796510000195
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(IVb)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈S构型。在式(IVb)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈R构型。
在式(II)的化合物的一些实施例中，所述化合物具有式(V)：
Figure GDA0002789796510000201
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(V)的化合物具有式(Va)：
Figure GDA0002789796510000202
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(V)的化合物具有式(Vb)：
Figure GDA0002789796510000203
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在式(II)的化合物的一些实施例中，所述化合物具有式(VI)：
Figure GDA0002789796510000204
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(VI)的化合物具有式(VIa)：
Figure GDA0002789796510000205
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(VI)的化合物具有式(VIb)：
Figure GDA0002789796510000211
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在L是-CH2-CH(NH2)-的式(II)的化合物的一些实施例中，所述化合物具有式(VII)：
Figure GDA0002789796510000212
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(VII)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈S构型。在式(VII)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈R构型。
在一些实施例中，所述式(VII)的化合物具有式(VIIa)：
Figure GDA0002789796510000213
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(VIIa)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈S构型。在式(VIIa)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈R构型。
在一些实施例中，所述式(VII)的化合物具有式(VIIb)：
Figure GDA0002789796510000214
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(VIIb)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈S构型。在式(VIIb)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈R构型。
在L是-CH(CH3)-CH(NH2)-的式(II)的化合物的一些实施例中，所述化合物具有式(VIII)：
Figure GDA0002789796510000215
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(VIII)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈S构型。在式(VIII)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈R构型。在式(VIII)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈S构型。在式(VIII)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈R构型。
在一些实施例中，所述式(VIII)的化合物具有式(VIIIa)：
Figure GDA0002789796510000221
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(VIIIa)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈S构型。在式(VIIIa)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈R构型。在式(VIIIa)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈S构型。在式(VIIIa)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈R构型。
在一些实施例中，所述式(VIII)的化合物具有式(VIIIb)：
Figure GDA0002789796510000222
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(VIIIb)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈S构型。在式(VIIIb)的化合物的一个方面中，L的带有-NH2基团的碳呈R构型。在式(VIIIb)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈S构型。在式(VIIIb)的化合物的一个方面中，L的带有甲基的碳呈R构型。在式(II)的化合物的一些实施例中，所述化合物具有式(IX)：
Figure GDA0002789796510000223
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(IX)的化合物的一个方面中，1,3-亚环丁基是顺式异构体。在式(IX)的化合物的一个方面中，1,3-亚环丁基是反式异构体。
在一些实施例中，所述式(IX)的化合物具有式(IXa)：
Figure GDA0002789796510000224
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(IXa)的化合物的一个方面中，1,3-亚环丁基是顺式异构体。在式(IXa)的化合物的一个方面中，1,3-亚环丁基是反式异构体。
在一些实施例中，所述式(IX)的化合物具有式(IXb)：
Figure GDA0002789796510000231
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。在式(IXb)的化合物的一个方面中，1,3-亚环丁基是顺式异构体。在式(IXb)的化合物的一个方面中，1,3-亚环丁基是反式异构体。
在L是-NH-CH2-的式(II)的化合物的一些实施例中，所述化合物具有式(X)：
Figure GDA0002789796510000232
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(X)的化合物具有式(Xa)：
Figure GDA0002789796510000233
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一些实施例中，所述式(X)的化合物具有式(Xb)：
Figure GDA0002789796510000234
或其盐，其中Y、X和R如关于式(I)所定义。
在一种变化形式中，提供了式(I)的化合物或其盐，其中X是-C(＝O)-、-O-或-CH(OH)-。在另一种变化形式中，提供了式(I)的化合物或其盐，其中X是-S-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-。在式(I)的化合物或其盐的一些实施例中，X是-C(＝O)-。在式(I)的化合物或其盐的其它实施例中，X是-O-。X的所有变化形式同等地适用于任何本文中可适用的各式，如式Ia、Ib、II、IIa、IIb、III、IIIa、IIIb、IV、IVa、IVb、V、Va、Vb、VI、VIa、VIb、VII、VIIa、VIIb、VIII、VIIIa及VIIIb。
在式(I)的化合物或其盐的一些实施例中，L是
Figure GDA0002789796510000241
在一个特定此类实施例中，Ra是H，并且R1、R2、R3和R4当存在时各自是H。在一个实施例中，L是
Figure GDA0002789796510000242
并且X是-C＝O。在另一个实施例中，L是
Figure GDA0002789796510000243
X是-C＝O并且p是0。
在一些实施例中，L是
Figure GDA0002789796510000244
在一种特定变化形式中，R1和R2连接至同一碳原子。在另一种特定变化形式中，R1和R2连接至不同碳原子。
在一些实施例中，L是-N(Ra)-CR1R2-(即，p是0)。在一种特定变化形式中，L是-NH-CR1R2-。在另一种特定变化形式中，L是-NH-CH2-。在另一种特定变化形式中，L是-NH-CH(CH3)-。在另一种特定变化形式中，L是-NH-CR1R2-，其中R1和R2连同其所连接的一个或多个碳原子一起形成3至8元亚环烷基(例如亚环丙基)。
在一些实施例中，L是-N(Ra)-(CR1R2)3-(即，p是0)。在一种特定变化形式中，L是-NH-(CR1R2)3-。在另一种特定变化形式中，L是-NH-(CH2)3-。在另一种特定变化形式中，L是-NH-(CR1R2)3-，其中来自两个不相邻的碳的R1和R2连同其所连接的碳原子和间隙碳原子一起形成3至8元亚环烷基(例如1,3-亚环丁基)。
在式(I)的化合物或其盐的其它实施例中，L是
Figure GDA0002789796510000245
在一个此类实施例中，X是-C＝O。在另一个此类实施例中，X是-O-。在另一个此类实施例中，X是-CH(OH)-。在又另一个此类实施例中，X是-S-。在又另一个此类实施例中，X是-S(＝O)-。在又另一个此类实施例中，X是-S(＝O)2。在此类实施例的一个方面中，r是1。在此类实施例的另一个方面中，r是2。在此类实施例的又另一个方面中，r是3。在L在一种变化形式中是
Figure GDA0002789796510000246
的所提供的任何实施例中，Rb和Rc都是H。在L在另一种变化形式中是
Figure GDA0002789796510000247
的所提供的任何实施例中，Rb和Rc都是H，r是1，R5是H并且R6是C1-C6烷基，如甲基。
在这些实施例中的一些实施例中，L是-CR5R6-CH(NRbRc)-(即，r是1)。在一种特定变化形式中，L是-CH(R5)-CH(NH2)-，包括但不限于，其中R5是氢或C1-C6烷基的方面。在一种特定变化形式中，L是-CH2-CH(NH2)-。在另一种特定变化形式中，L是-CH(CH3)-CH(NH2)-。
在式(I)的化合物或其盐的一些实施例中，L是
Figure GDA0002789796510000251
在一个此类实施例中，X是-C＝O。在另一个此类实施例中，X是-O-。在另一个此类实施例中，X是-S-。在又另一个此类实施例中，X是-S(＝O)-。在又另一个此类实施例中，X是-S(＝O)2。在一种特定变化形式中，L是
Figure GDA0002789796510000252
并且u是0。在另一种变化形式中，L是
Figure GDA0002789796510000253
u是0并且X选自由以下组成的组：-C＝O、-O-、-S-、-S(＝O)-和-S(＝O)2。在L是
Figure GDA0002789796510000254
的任何实施例或变化形式中，在一个方面，s是1并且t是1。
在一种变化形式中，L是
Figure GDA0002789796510000255
在另一种特定变化形式中，L是
Figure GDA0002789796510000256
在一种变化形式中，L是
Figure GDA0002789796510000257
并且X选自由以下组成的组：-C＝O、-O-、-S-、-S(＝O)-和-S(＝O)2。
在一种变化形式中，本文提供了式(I)的化合物或其盐，其中-X-L-部分选自由以下组成的组：
Figure GDA0002789796510000258
Figure GDA0002789796510000261
其中*表示与Y部分的连接点并且**表示与分子其余部分的连接点。
在另一种变化形式中，提供了式(I)的化合物或其盐，其中-X-L-部分选自由以下组成的组：
Figure GDA0002789796510000262
其中*表示与Y部分的连接点并且**表示与分子其余部分的连接点。
在一个方面，提供了一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有以下特征中的任一种或多种：
(i)X是-C(＝O)-、-O-或-CH(OH)-；
(ii)L是：
(a)-NH-(CR1R2)q-，其中R1和R2彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢或C1-C2烷基，或连接至同一碳原子的R1和R2基团连同其所连接的碳原子一起形成3至5元亚环烷基，或连接至两个不同碳原子的R1和R2基团连同其所连接的碳原子一起形成3至5元亚环烷基(此类-NH-(CR1R2)q-部分的实例包括
Figure GDA0002789796510000271
Figure GDA0002789796510000272
(b)-CR5R6-CH(NH2)-，其中R5和R6彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢或C1-C2烷基(此类-CR5R6-CH(NH2)-部分的实例包括
Figure GDA0002789796510000273
或
(c)
Figure GDA0002789796510000274
其中*表示与Y-X-部分的连接点，并且**表示与分子其余部分的连接点；并且
(iii)Y是：
(a)任选地被R11取代的C6-C9芳基，如未被取代的2,3-二氢-1H-茚-2-基或被至少一个R11取代的苯基或萘基，包括但不限于各R11独立地选自卤素、三卤代甲基、氰基和-C(＝O)NH2的情形；
(b)任选地被R12取代的6至10元杂芳基，如任选地被R12取代的吡啶基、嘧啶基、吡啶-2(1H)-酮基、喹啉-6-基，其中R12是苯基或-OH；或
(c)任选地被R13取代的3至12元杂环基，如被至少一个R13取代的2H-吡喃-2-酮基、异吲哚啉基、哌啶-2-酮基和哌啶基。
在这一变化形式的一个方面中，(i)、(ii)(a)和(iii)(a)适用。在另一种变化形式中，(i)、(ii)(a)和(iii)(b)适用。在另一种变化形式中，(i)、(ii)(a)和(iii)(c)适用。在另一种变化形式中，(i)、(ii)(b)和(iii)(a)适用。在另一种变化形式中，(i)、(ii)(b)和(iii)(b)适用。在另一种变化形式中，(i)、(ii)(b)和(iii)(c)适用。在另一种变化形式中，(i)、(ii)(c)和(iii)(a)适用。在另一种变化形式中，(i)、(ii)(c)和(iii)(b)适用。在另一种变化形式中，(i)、(ii)(c)和(iii)(c)适用。
L或X和L的组合的所有变化形式同等地适用于任何本文中可适用的各式，如式Ia、Ib、II、IIa、IIb、III、IIIa、IIIb、IV、IVa、IVb、V、Va、Vb、VI、VIa、VIb、VII、VIIa、VIIb、VIII、VIIIa及VIIIb。
在一些实施例中，Y是任选地被R11取代的C6-C9芳基、任选地被R12取代的6至10元杂芳基或任选地被R13取代的3至12元杂环基，其中当Y是苯基或萘基时，关于Y的苯基或萘基被至少一个R11取代，并且其中当L是*-NH-CH2-**并且Y是任选地被取代的喹啉基时，关于Y的任选地被取代的喹啉基在2位、3位、5位、6位、7位或8位处连接至母结构。
在一些实施例中，Y是任选地被R11取代的C6-C9芳基。在一个方面，Y是任选地被R11取代的苯基。在一种变化形式中，Y被1至3个相同或不同的R11部分取代。在一些实施例中，Y是被1至5个R11取代的苯基，所述R11独立地选自卤素、三卤代甲基、氰基和-C(＝O)NH2。在另一个特定实施例中，Y是被单取代的苯基，如在C4位处被R11取代的苯基。在一种特定变化形式中，Y是在C4位中被氰基或-C(＝O)NH2取代的苯基。在另一个特定实施例中，Y是被双取代的苯基，如在C2位和C4位或在C3位和C4位被相同或不同的两个R11基团取代的苯基。在一个方面，Y的苯基被两个R11基团取代，所述R11基团选自由以下组成的组：氰基、-C(＝O)NH2、卤素和三卤代甲基。在另一个实施例中，Y是任选地被取代的2,3-二氢-1H-茚-2-基。
在一些实施例中，Y是任选地被R12取代的6至10元杂芳基，其中当L是*-NH-CH2-**并且Y是任选地被取代的喹啉基，关于Y的任选地被取代的喹啉基在2位、3位、5位、6位、7位或8位处连接至母结构。在另一个实施例中，Y是任选地被R12取代的喹啉-6-基。在另一个实施例中，Y是任选地被R12取代的喹啉-4-基并且L是*-CH2-CH(NH2)-**或*-CH(CH3)-CH(NH2)-**。在另一个实施例中，Y是任选地被R12取代的吡啶-4-基。在另一个实施例中，Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基或C5-C10环烷基稠合的嘧啶-4-基，所述C6-C14芳基或C5-C10环烷基任选地被R12取代。
在一些实施例中，Y是任选地被R12取代的喹啉-6-基，其中R12是-OH或苯基。
在一些实施例中，Y是被R12取代的吡啶-3-基。在一种变化形式中，Y是被R12取代的吡啶-3-基，其中R12独立地选自任选地被取代的C6-C14芳基或-OR14。在一种变化形式中，Y是在C2位中被R12取代的吡啶-3-基，其中R12是任选地被取代的C6-C14芳基。在一种变化形式中，Y是在C6位中被R12取代的吡啶-3-基，其中R12是-OR14。在一种变化形式中，Y是在C2位中任选地被取代的C6-C14芳基取代且在C6位中被-OR14取代的吡啶-3-基。
在一些实施例中，Y是在C3位中被R12取代的吡啶-4-基。在一种变化形式中，Y是在C3位中被R12取代的吡啶-4-基，其中R12独立地选自任选地被取代的C1-C6烷基、任选地被取代的C2-C6烯基、任选地被取代的C3-C8环烷基、任选地被取代的C4-C8环烯基、OR14、NR15R16、任选地被取代的吡啶基、任选地被取代的喹啉基、任选地被取代的吲哚基、任选地被取代的吲唑基、任选地被取代的吡啶-2(1H)-酮基、任选地被取代的苯基和任选地被取代的3至12元杂环基。
在一些实施例中，Y是在C3位中被R12取代的吡啶-4-基，其中R12是任选地被C1-C6烷基取代的吡啶基。在另一个实施例中，Y是在C3位中被R12取代的吡啶-4-基，其中R12是任选地被C1-C6烷基取代的吲哚基。在另一个实施例中，Y是在C3位中被R12取代的吡啶-4-基，其中R12是任选地被C1-C6烷基、卤素或C1-C6烷氧基取代的苯基。在另一个实施例中，Y是在C3位中被R12取代的吡啶-4-基，其中R12是任选地被C1-C6烷基或-OR14取代的环丙基。在另一个实施例中，Y是在C3位中被R12取代的吡啶-4-基，其中R12是-OR14，并且R14是任选地被取代的C1-C6烷基或任选地被取代的苯基。
在一种变化形式中，当Y是被C1-C2烷基取代的6元杂芳基(例如吡啶-4-基)，其中所述C1-C2烷基被RL取代时，RL选自由以下组成的组：卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基、3至12元杂环基、-OR14、-C(O)R14、氰基、氧代和硝基。
在一种变化形式中，当Y是被C1-C2烷基取代的6元杂芳基(例如吡啶-4-基)，其中所述C1-C2烷基被RL取代时，RL选自由卤素和C6-C14芳基组成的组。
在一些实施例中，Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基或C5-C10环烷基稠合的嘧啶-4-基，所述C6-C14芳基或C5-C10环烷基任选地被R12取代。在一个特定实施例中，Y是与C6-C14芳基稠合的嘧啶-4-基，其中C6-C14芳基任选地被R12取代。在另一个实施例中，Y是未被取代的喹唑啉-4-基。在另一个特定实施例中，Y是与C5-C10环烷基稠合的嘧啶-4-基，其中C5-C10环烷基任选地被R12取代。在另一个实施例中，Y是6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基。
在一些实施例中，Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基稠合的2H-吡喃-2-酮基，所述C6-C14芳基任选地被R12取代。在另一个实施例中，Y是与C6-C14芳基稠合的2H-吡喃-2-酮-5-基，其中2H-吡喃-2-酮基或C6-C14芳基任选地被R12取代。在又另一个实施例中，Y是任选地被卤素取代的1H-异色烯-1-酮-4-基。
在一些实施例中，Y是B'或其互变异构体。因此，应理解，在一些实施例中，Y是
Figure GDA0002789796510000291
其中z是0、1、2、3、4或5；
Figure GDA0002789796510000292
指示A'与B'之间的互变异构；和R12和R13对于任一对互变异构体都是相同的。在一些实施例中，Y是D'或其互变异构体。因此，应理解，在一些实施例中，Y是
Figure GDA0002789796510000301
其中z是0、1、2、3、4或5；
Figure GDA0002789796510000302
指示C'与D'之间的互变异构；并且R12和R13对于任一对互变异构体都是相同的。
在一个实施例中，Y选自由以下组成的组：
Figure GDA0002789796510000303
在一些实施例中，Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基或5至10元杂环基稠合的吡啶-2(1H)-酮基，所述C6-C14芳基或5至10元杂环基彼此独立地并且在每次出现时独立地是任选地被R12取代。在另一个实施例中，Y是任选C1-C6烷基(例如甲基)或C6-C14芳基(例如苯基，在本文中又称为“Ph”)被取代的吡啶-2(1H)-酮-5-基。在又另一个实施例中，Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基稠合的吡啶-2(1H)-酮-5-基，所述C6-C14芳基任选地被R12取代。在另一个实施例中，Y是任选地被R12取代的异喹啉-1(2H)-酮-4-基，所述R12如卤素(例如氟代)、C1-C6烷基(例如甲基)、C6-C14芳基(例如苯基)或C3-C8环烷基(例如环丙基)。在又另一个实施例中，Y是任选地被R12取代并且任选地与5至10元杂环基稠合的吡啶-2(1H)-酮-5-基，所述5至10元杂环基任选地被R12取代。在另一个实施例中，Y是未被取代的7,8,9,10-四氢吡啶并[1,2-a]氮杂环庚三烯-4(6H)-酮-1-基。
在一些实施例中，Y是任选地被R13取代的3至12元杂环基。在一个特定实施例中，Y是未被取代的异吲哚啉-2-基。在另一个实施例中，Y是任选地被R13取代的哌啶-2-酮-5-基，如C1-C6烷基(例如乙基)和C6-C14芳基(例如苯基)。
在这些实施例中的一些实施例中，Y选自由以下组成的组：
Figure GDA0002789796510000311
Figure GDA0002789796510000321
在这些实施例中的一些实施例中，Y选自由以下组成的组：
Figure GDA0002789796510000322
Figure GDA0002789796510000331
Y的所有变化同等地适用于本文中任何适用的各式，如式Ia、Ib、II、IIa、IIb、III、IIIa、IIIb、IV、IVa、IVb、V、Va、Vb、VI、VIa、VIb、VII、VIIa、VIIb、VIII、VIIIa及VIIIb。
还提供了本文所提到的化合物的盐，如药学上可接受的盐。本发明还包括所述化合物的任一种或所有立体化学形式，包括任何对映异构或非对映异构形式，以及任何互变异构体或其它形式。
本文所描述的化合物中有一些是与互变异构形式平衡存在。例如，酰胺A是B的互变异构形式并且亚胺酸B是A的互变异构形式。类似地，酰胺C是D的互变异构形式并且亚胺酸D是C的互变异构形式。酰胺A与亚胺酸B的互变异构形式平衡存在，并且酰胺C与亚胺酸D的互变异构形式平衡存在。不管描绘哪种互变异构形式，本领域的普通技术人员都将化合物理解为包含酰胺和亚胺酸互变异构体两种。
Figure GDA0002789796510000332
本文中详述的化合物一方面可呈纯化形式并且包含呈纯化形式的化合物的组合物在本文中有详述。提供了包含如本文中详述的化合物或其盐的组合物，如含大体上纯的化合物的组合物。在一些实施例中，含有如本文中详述的化合物或其盐的组合物呈大体上纯的形式。除非另外规定，否则“大体上纯”意图指一种组合物含有不超过35％的杂质，其中该杂质表示除占该组合物相当大比例的化合物或其盐外的化合物。在一些实施例中，提供了含大体上纯的化合物或其盐的组合物，其中该组合物含有不超过25％、20％、15％、10％或5％的杂质。在一些实施例中，提供了含大体上纯的化合物或其盐的组合物，其中该组合物含有或不超过3％、2％、1％或0.5％的杂质。
代表性化合物列于表1中。
表1
Figure GDA0002789796510000341
Figure GDA0002789796510000351
Figure GDA0002789796510000361
Figure GDA0002789796510000371
Figure GDA0002789796510000381
Figure GDA0002789796510000391
Figure GDA0002789796510000401
Figure GDA0002789796510000411
其它代表性化合物列于表1-A中。
表1-A
Figure GDA0002789796510000412
Figure GDA0002789796510000421
Figure GDA0002789796510000431
表1或表1-A中描绘的某些化合物以互变异构体形式存在。不管显示哪种互变异构体，都考虑所有互变异构形式。
在一些实施例中，本文提供了表1中所描述的化合物、或其互变异构体、或前述任一种的盐，以及其用途。在一些实施例中，本文提供了表1中所描述的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，本文提供了表1-A中所描述的化合物、或其互变异构体、或前述任一种的盐，以及其用途。在一些实施例中，本文提供了表1-A中所描述的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，本文提供了表1或1-A中所描述的化合物、或其互变异构体、或前述任一种的盐，以及其用途。在一些实施例中，本文提供了表1或1-A中所描述的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，本文提供了选自化合物编号1-129的化合物、或其互变异构体、或前述任一种的盐，以及其用途。在一些实施例中，本文提供了选自化合物编号1-129的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施例中，提供了选自化合物编号1-129的化合物、或其立体异构体(包括其两种或更多种立体异构体的混合物)、或其盐。在一些实施例中，所述化合物是选自化合物编号1-129的化合物或其立体异构体的盐。
在一种变化形式中，本文详述的化合物选自由以下组成的组：
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-环丙基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)喹啉-6-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异吲哚啉-2-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-甲基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-羟基喹啉-6-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)对苯二甲酰胺；
4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯基异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-5-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺；
4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-氟苯甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺；
4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)苯甲酰胺；
4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-(三氟甲基)苯甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-苯基喹啉-6-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-乙基-6-氧代-2-苯基哌啶-3-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢吡啶并[1,2-a]氮杂环庚三烯-1-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-甲酰胺；
N-(1-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-羰基)环丙基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-环丙基异烟酰胺；
N-(1-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氟-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氟-1-氧代-1H-异色烯-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-4-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-2-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-甲基-6-氧代-2-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺；
4,4-二氟-1-(1-(1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-羰基)氮杂环丁烷-3-羰基)吡咯烷-2-甲腈；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(二甲基氨基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(二乙基氨基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(4-氟苯氧基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-甲氧基异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(三氟甲基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-异丙基异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-乙烯基异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(吡咯烷-1-基)异烟酰胺；
N-[2-[2-氰基-4,4-二氟-吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-3-(1-哌啶基)吡啶-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(环己-1-烯-1-基)异烟酰胺；
3-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2,6-二氟苯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(3,5-二氟苯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2'-甲基-[3,4'-联吡啶]-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-甲基-1H-吲哚-5-基)异烟酰胺；
3-苯甲基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(喹啉-4-基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(4-氟苯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2,4-二氟苯基)异烟酰胺；
3-(5-氯-2-氟苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2-甲氧基苯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(3-甲氧基苯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(4-甲氧基苯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-[2,3'-联吡啶]-4'-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-[3,3'-联吡啶]-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-[3,4'-联吡啶]-4-甲酰胺；
3-(2-(叔丁基)苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2-异丙基苯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2-乙基苯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(邻甲苯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1H-吲哚-4-基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-甲基-1H-吲哚-4-基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)喹唑啉-4-甲酰胺；
1-(2-氨基-4-羟基-4-(1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-基)丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈；
4,4-二氟-1-(O-(1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-基)丝氨酰基)吡咯烷-2-甲腈；
1-(2-氨基-4-氧代-4-(喹啉-4-基)丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈；
1-(2-氨基-4-羟基-4-(喹啉-4-基)丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈；
4,4-二氟-1-(O-(喹啉-4-基)丝氨酰基)吡咯烷-2-甲腈；
1-(2-氨基-4-氧代-4-(1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-基)丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈；
1-(2-氨基-4-羟基-3-甲基-4-(1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-基)丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈；
4,4-二氟-1-(O-(1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-基)苏氨酰基)吡咯烷-2-甲腈；
1-(2-氨基-3-甲基-4-氧代-4-(喹啉-4-基)丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈；
1-(2-氨基-4-羟基-3-甲基-4-(喹啉-4-基)丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈；
4,4-二氟-1-(O-(喹啉-4-基)苏氨酰基)吡咯烷-2-甲腈；
1-(2-氨基-3-甲基-4-氧代-4-(1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-基)丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氧代-3,4,4a,8a-四氢酞嗪-1-甲酰胺；
N-[2-[2-氰基-4,4-二氟-吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-3-甲基-4-氧代-酞嗪-1-甲酰胺；
N-(4-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-4-氧代丁基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吲唑-5-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)呋喃并[2,3-c]吡啶-2-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-甲氧基-2-苯基烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)异烟酰胺；
N-[2-[2-氰基-4,4-二氟-吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-3-吗啉代-吡啶-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-甲基环丙基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2-羟基环丙基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(哌啶-4-基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(四氢-2H-吡喃-4-基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6,7-二氢-5H-环戊并[b]吡啶-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-5,6,7,8-四氢喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡咯并[1,2-a]嘧啶-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(三氟甲氧基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯氧基异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟-2-甲基吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6'-氧代-1',6'-二氢-[3,3'-联吡啶]-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-5-环丙基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-4-甲酰胺；
N-(3-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-羰基)环丁基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(苯基氨基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(环己-2-烯-1-基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(吲哚啉-5-基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1',2',3',6'-四氢-[3,4'-联吡啶]-4-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(5-甲基呋喃-2-基)异烟酰胺；
6'-氨基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-[3,3'-联吡啶]-4-甲酰胺；
3-(6-氯萘-2-基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)异烟酰胺；
3-(4-氯-3-氟苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺；
3-(3-(叔丁基)苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-乙氧基异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-((4-氟苯基)氨基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(苯基硫基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-4-(喹啉-4-基)-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(吡啶-3-基氨基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(哌啶-4-基氨基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(喹啉-4-基氨基)异烟酰胺；
3-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺；
4-苯甲基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-苯基乙烯基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-苯基乙基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯乙烯基异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯乙基异烟酰胺；
N-(1-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)-3-苯基异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2-苯基丙-1-烯-1-基)异烟酰胺；
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2-苯基烯丙基)异烟酰胺，以及
N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(2-苯基丙基)异烟酰胺。
即使未描绘盐，本文中描绘的化合物仍可呈盐形式存在，并且应理解，本公开包含此处描绘的化合物的所有盐和溶剂合物，以及所述化合物的非盐和非溶剂合物形式，这是熟练技术人员充分了解的。在一些实施例中，本文所提供的化合物的盐是药学上可接受的盐。在一个或多个叔胺部分存在于所述化合物中时，还提供并描述了N-氧化物。
在任何本文所描述的化合物都可呈互变异构形式存在时，预期每种互变异构形式，即使可能明确地描绘仅一种或一些互变异构形式。具体地描绘的互变异构形式在溶液中或当根据本文所描述的方法使用时可以是或可以不是主要形式。
本公开还包括所描述的化合物，如表1的化合物的任一种或所有立体化学形式，包括其任何对映异构或非对映异构形式。结构或名称意图包含所描绘的化合物的所有可能的立体异构体。本发明还包含所述化合物的所有形式，如所述化合物的结晶或非结晶形式。还预期包含本发明化合物的组合物，如具有大体上纯的化合物(包括其特定立体化学形式)的组合物，或包含呈任何比率的本发明化合物的混合物的组合物，所述混合物包括两种或更多种立体化学形式，如外消旋或非外消旋混合物。
本发明还预期本文所描述的化合物的同位素标记和/或同位素富集的形式。本文中的化合物可在构成这类化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。在一些实施例中，所述化合物被同位素标记，如同位素标记的本文所描述的式(I)化合物或其变化形式，其中一个或多个原子中有一部分被相同元素的同位素置换。可并入本发明中的化合物的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯的同位素，如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15O、17O、32P、35S、18F、36Cl。某些同位素标记的化合物(例如3H和14C)可用于化合物或底物组织分布研究中。并入较重同位素，如氘(2H)可由于较大代谢稳定性而提供某些治疗益处，例如体内半衰期增加或剂量要求降低，并因此，在一些情况下可为优选的。
同位素标记的本发明化合物一般可通过本领域的普通技术人员已知的标准方法和技术或通过与所附实例中所描述类似的程序，用适当同位素标记的试剂替代相应未标记的试剂来制备。
提供了在适合容器中包含本文所描述的化合物或其盐或溶剂合物的制品。容器可以是小瓶、广口瓶、安瓿、预装载注射器、静脉内袋等。
优选地，本文中详述的化合物是口服生物可用的。然而，所述化合物也可被配制成供肠胃外(例如静脉内)施用。
可使用本文所描述的一种或数种化合物，通过将一种或多种化合物作为活性成分与本领域中已知的药理学上可接受的载体组合来制备药剂。取决于药物的治疗形式，所述载体可以呈各种形式。在一种变化形式中，制造药剂是用于本文所公开的任何方法中，例如用于治疗癌症。
通用合成方法
本发明的化合物可通过下文且更确切地说，以下实例(如以下实例中所提供的方案)中大体上描述的多种方法制备。在以下方法描述中，各符号当用于所描绘的各式中时，这些符号应理解为表示本文以上关于这些式所描述的基团。
当希望获得一种化合物的特定对映异构体时，这可由相应的对映异构体混合物，使用适于分离或拆分对映异构体的常规程序实现。因此，例如，非对映异构衍生物可通过使对映异构体混合物，例如外消旋体与适当手性化合物反应来制备。接着，可通过任何便利的手段，例如通过结晶来分离非对映异构体，并回收所希望的对映异构体。在另一种拆分方法中，可使用手性高效液相色谱法分离外消旋体。或者，必要时，可在一种所描述的方法中，通过使用适当的手性中间体获得特定对映异构体。
在希望获得一种化合物的特定异构体或以其它方式纯化反应产物的情况下，也可将色谱法、再结晶和其它常规分离程序用于中间体或终产物。
还涵盖本文所提供的化合物或其盐的溶剂合物。溶剂合物含有化学计算量或非化学计算量的量的溶剂，并且通常是在结晶过程期间形成。当溶剂是水时形成水合物，或者当溶剂是醇时形成醇化物。
式(I-1)的化合物可根据方案1制备，其中R、R1、R2、Y、m、n及q如本文中关于式(I)或本文中详述的其任何变化形式所详述；Z和Z1是离去基团；以及PG1是胺保护基。
方案1
Figure GDA0002789796510000491
式(I-1a)的化合物与式(I-1b)的化合物在偶合剂(例如HATU、HOBt或PyBOP)存在下偶合得到式(I-1c)的化合物。式(I-1c)化合物的胺在酸性条件(例如HCl或pTsOH)下脱保护，提供呈盐形式的式(I-1d)的化合物，该化合物与羧酸在偶合剂(例如HATU、HOBt或PyBOP)存在下偶合，以得到式(1-1)的化合物。
方案1中制备方法的示例性实施例显示于方案1a中。
方案1a
Figure GDA0002789796510000492
在一些实施例中，Y是任选地被R12取代的6至10元杂芳基。在另一个实施例中，Y是在3位中被R12取代的吡啶-4-基，其中
Figure GDA0002789796510000493
由式(II-1)的化合物表示。
方案2
Figure GDA0002789796510000494
应理解，以上方案可被修改成通过选择适当的试剂和起始物质获得各种本发明的化合物。关于保护基和其用途的一般描述，参见P.G.M.Wuts和T.W.Greene,《Greene的有机合成中的保护基(Greene's Protective Groups in Organic Synthesis)》,第4版,Wiley-Interscience,纽约,2006。
药物组合物和配制物
本公开包含本文中详述的任何化合物的药物组合物。因此，本公开包括含如本文中详述的化合物或其盐和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。在一个方面，药学上可接受的盐是酸加成盐，如与无机酸或有机酸形成的盐。药物组合物可呈适合口服、经颊、肠胃外、鼻、表面或直肠施用的形式或适于通过吸入施用的形式。
本文中详述的化合物一方面可呈纯化形式并且包含呈纯化形式的化合物的组合物在本文中有详述。提供了包含如本文中详述的化合物或其盐的组合物，如含大体上纯的化合物的组合物。在一些实施例中，含有如本文中详述的化合物或其盐的组合物呈大体上纯的形式。
在一种变化形式中，本文中的化合物是所制备的供施用给个体的合成化合物。在另一种变化形式中，提供了含有呈大体上纯形式的化合物的组合物。在另一种变化形式中，本公开包括含本文中详述的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。在另一种变化形式中，提供了施用化合物的方法。所述纯化形式、药物组合物以及施用化合物的方法适合于本文详述的任何化合物或其形式。
本文中详述的化合物或其盐可被配制用于任何可用的递送途径，包括口服、粘膜(例如鼻、舌下、阴道、经颊或直肠)、肠胃外(例如肌肉内、皮下或静脉内)、表面或透皮递送形式。化合物或其盐可在适合载体存在下配制以提供递送形式，所述递送形式包括但不限于片剂、囊片、胶囊(如硬明胶胶囊或软质弹性明胶胶囊)、扁囊剂、糖衣片、口含片、胶状物、分散液、栓剂、软膏、巴布剂(泥罨剂)、糊剂、散剂、敷料、乳膏、溶液、贴片、气雾剂(例如鼻喷雾剂或吸入剂)、凝胶剂、悬浮液(例如水性或非水性液体悬浮液、水包油乳液或油包水乳液)、溶液及酏剂。
本文所描述的一种或数种化合物或其盐可用于制备配制物，如药物配制物，通过将一种或多种化合物或其盐作为活性成分与药学上可接受的载体，如上文所提到的载体组合来制备。取决于系统的治疗形式(例如透皮贴片对比口服片剂)，载体可以呈各种形式。此外，药物配制物可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、再湿润剂、乳化剂、甜味剂、染料、调节剂以及用于调整渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。包含化合物的配制物还可含有其它物质，这些物质具有有用的治疗特性。药物配制物可通过已知医药方法制备。适合配制物可见于以引用的方式并入本文中的例如《雷氏药学大全(Remington's PharmaceuticalSciences)》,Mack Publishing Company,宾夕法尼亚州费城(Philadelphia,PA),第20版(2000)。
施用给个体的本文所描述的化合物可呈公认的口服组合物形式，如片剂、包衣片剂、以及在硬壳或软壳中的凝胶胶囊、乳液或悬浮液。可用于制备此类组合物的载体的实例有乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸酯或其盐等。用于软壳凝胶胶囊的可接受的载体是例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。此外，药物配制物可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、再湿润剂、乳化剂、甜味剂、染料、调节剂以及用于调整渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。
还描述了包含本文所提供的化合物的组合物。在一种变化形式中，该组合物包含化合物或其盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。在另一种变化形式中，提供了含大体上纯的化合物的组合物。在一些实施例中，该组合物是用作人类或兽医学药剂。在一些实施例中，该组合物用于本文所描述的方法中。在一些实施例中，该组合物用于治疗本文所描述的疾病或病症。
使用方法和用途
本文中详述的化合物和组合物，如包含本文所提供的任何式的化合物或其盐以及药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物，可用于如本文所提供的施用和治疗方法中。所述化合物和组合物还可用于体外方法中，如将化合物或组合物施用至细胞用于筛选目的和/或用于进行质量控制测定的体外方法。
本文提供了一种治疗有需要个体的疾病或病症的方法，该方法包含施用本文所述的化合物或其任何实施例、变化或方面、或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，所述化合物、其药学上可接受的盐或组合物是根据本文所描述的施用剂量和/或方法施用给个体。
相信本文所描述的化合物或其盐以及本文所描述的组合物可有效治疗多种疾病和病症。在一些实施例中，本文所描述的化合物或其盐或本文所描述的组合物可用于治疗由成纤维细胞激活蛋白(FAP)介导的疾病或病症的方法中。在一些实施例中，所述疾病或病症以增殖、组织重构、纤维化、慢性炎症、过量酒精消费或异常代谢为特征。
在一些实施例中，本文所描述的化合物或其盐或本文所描述的组合物可用于治疗由FAP肽酶活性的生理底物介导的疾病或病症的方法中。在一些实施例中，FAP肽酶活性是内肽酶活性。在一些实施例中，FAP内肽酶活性的生理底物是α2-抗纤溶酶、I型胶原蛋白、明胶及成纤维细胞生长因子21(FGF21)。在一些实施例中，FAP肽酶活性是外肽酶活性。在一些实施例中，FAP外肽酶活性的生理底物是神经肽Y、B型钠尿肽、P物质及肽YY。在一些实施例中，本文所描述的化合物或其盐或本文所描述的组合物可用于治疗由FGF21介导的疾病或病症的方法中。
在一些实施例中，本文所描述的化合物或其盐或本文所描述的组合物可用于治疗FGF21相关病症的方法中，所述病症如肥胖、I型和II型糖尿病、胰腺炎、血脂异常、高脂质血症、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、葡萄糖不耐、高血糖症、代谢综合征、急性心肌梗塞、高血压、心血管疾病、动脉粥样硬化、周边动脉疾病、中风、心力衰竭、冠状动脉性心脏病、肾病、糖尿病并发症、神经病变、胃瘫、与胰岛素受体中的严重失活突变相关的病症以及其它代谢障碍。在一些实施例中，FGF21相关病症是糖尿病、肥胖、血脂异常、代谢综合征、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎或心血管疾病。
在一些实施例中，本文所描述的化合物或其盐或本文所描述的组合物可用于治疗以增殖、组织重构、纤维化、慢性炎症、过量酒精消费或异常代谢为特征的疾病或病症的方法中。
在一些实施例中，本文所描述的化合物或其盐或本文所描述的组合物可用于治疗癌症的方法中，所述癌症如乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、黑素瘤、纤维肉瘤、骨肉瘤、结缔组织肉瘤、肾细胞癌、巨大细胞癌、鳞状细胞癌、白血病、皮肤癌、软组织癌、肝癌、胃肠癌瘤或腺癌。在一些实施例中，所述化合物、盐或组合物可用于治疗转移性肾癌、慢性淋巴细胞性白血病、胰腺腺癌或非小细胞肺癌的方法中。
在一些实施例中，施用所述化合物、盐或组合物减少个体体内的肿瘤生长、肿瘤增殖或肿瘤形成。在一些实施例中，所述化合物、盐或组合物可用于减少有需要个体体内的肿瘤生长、肿瘤增殖或肿瘤形成的方法中。在一些实施例中，肿瘤生长减慢或停滞。在一些实施例中，肿瘤生长减少至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更高百分比。在一些实施例中，肿瘤的大小减小。在一些实施例中，肿瘤转移得到预防或减慢。在一些实施例中，将所述肿瘤生长、肿瘤增殖或肿瘤形成与施用所述化合物、盐或组合物之前个体体内的肿瘤生长、肿瘤增殖或肿瘤形成相比较。在一些实施例中，将所述肿瘤生长、肿瘤增殖或肿瘤形成与一名类似个体或一组个体体内的肿瘤生长、肿瘤增殖或肿瘤形成相比较。测量肿瘤生长、肿瘤增殖和肿瘤形成的方法是本领域中已知的，例如通过对个体进行重复成像进行测量。
在一些实施例中，本文所描述的化合物或其盐或本文所描述的组合物可用于治疗纤维化疾病、血栓形成、创伤愈合、瘢痕疙瘩形成、骨关节炎、类风湿性关节炎以及涉及软骨降解的相关病症、动脉粥样硬化疾病、克罗恩氏病、肝硬化、特发性肺纤维化、心肌肥大、舒张性功能障碍、肥胖、葡萄糖不耐、胰岛素不敏感或糖尿病的方法中。在一些实施例中，肝硬化是病毒性肝炎诱发的肝硬化、酒精诱发的肝硬化或胆汁性肝硬化。在一些实施例中，糖尿病是II型糖尿病。在一些实施例中，所述疾病或病症是纤维化肝变性。
在一些实施例中，本文提供了一种抑制FAP的方法。相信本文所描述的化合物或其盐和本文所描述的组合物可有效抑制FAP。
在一些实施例中，该抑制FAP的方法包含通过将本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物施用或递送至细胞来抑制细胞中的FAP。在一些实施例中，细胞是成纤维细胞，如成肌纤维细胞、瘢痕疙瘩成纤维细胞、癌症相关成纤维细胞(CAF)或反应性基质成纤维细胞等具有FAP表达的细胞。
在一些实施例中，抑制FAP的方法包含通过将本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物施用或递送至肿瘤或血浆来抑制肿瘤中或血浆中的FAP。
在一些实施例中，抑制FAP包含抑制FAP的内肽酶和/或外肽酶活性。在一些实施例中，FAP被抑制至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或更高百分比。FAP的抑制可通过本领域已知的方法确定。
在一些实施例中，所述化合物、其盐或组合物抑制FAP，其IC50值小于约1μM，如小于约750nM、600nM、500nM、300nM、200nM、100nM、80nM、60nM、40nM、25nM或更低。在一些实施例中，所述化合物、其盐或组合物抑制FAP，其IC50值在约7nM与1μM之间，如在约10nM与600nM之间、在15nM与200nM之间或在20nm与180nM之间。在一些方面，半数最大抑制浓度(IC50)是对一种物质抑制特定生物或生物化学功能的有效性的量度。在一些方面，IC50是指示将给定生物过程或一个过程中的组分如酶、细胞、细胞受体或微生物抑制一半所需抑制剂的量的定量量度。在体外和体内确定IC50的方法是本领域中已知的。
在一些实施例中，本文所描述的化合物或其盐以及本文所描述的组合物的施用量使得DPPII、DPPIV、DPP8、DPP9和/或PREP活性不受抑制或受到较低程度抑制。在一些实施例中，对FAP的抑制作用比对DPPII、DPPIV、DPP8、DPP9和/或PREP活性的抑制作用高至少或至少约2倍，例如高至少或至少约3倍、4倍、5倍、8倍、10倍、15倍、30倍、50倍、60倍、75倍或100倍。
本文提供了一种增强个体体内的免疫反应的方法，该方法包含向所述个体施用本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物。在一些实施例中，个体患有癌症。在一些实施例中，增强的免疫反应是针对肿瘤或癌细胞。举例来说且不希望受理论束缚，相信FAP可抑制免疫反应，尤其是在癌症的情况下，因此，抑制FAP可增强个体体内的免疫反应。因此，本文提供了治疗有需要个体的癌症的方法，所述方法包含向所述个体施用本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物，其中所述个体的免疫反应增加。
本文提供了一种增加个体体内FGF21的表达水平的方法，所述方法包含向所述个体施用本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物。本文还提供了一种增加个体体内FGF21或FGF21类似物的水平的方法，所述方法包含向所述个体施用本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物。在一些实施例中，所述方法另外包含施用FGF21或FGF21类似物，如突变的FGF21、聚乙二醇化FGF21、PF-05231023或LY2405319。
FGF21是主要由肝分泌的肽内分泌激素(Markan,K.R.等人,《细胞与发育生物学研讨文辑(Semin Cell Dev Biol)》,2016,53:85-93)。在进入循环后，FGF21通过信号传导至调控碳水化合物和脂质代谢的特定组织而发挥功能(Kharitonenkov,A.等人,《临床研究杂志(J Clin Invest)》,2005,115(6):1627-35)。FGF21刺激脂肪细胞中的葡萄糖摄取并且被认为针对肥胖和胰岛素不敏感具有防护作用。将FGF21药理学施用至糖尿病和肥胖动物模型使啮齿动物的肥胖、胰岛素抵抗、血脂异常、脂肪肝和高血糖症明显改善(Markan,K.R.等人,《细胞与发育生物学研讨文辑》,2016,53:85-93)。小规模临床试验已展示，FGF21类似物可在患有2型糖尿病的肥胖个体中有效诱导体重减轻并医治高胰岛素血症、血脂异常和低脂联素血症(Gaich,G.等人,《细胞代谢(Cell Metab)》,2013,18(3):第333-40页；Dong,J.Q.等人,《英国临床药理学杂志(Br J Clin Pharmacol)》,2015,80(5):1051-63)。
举例来说且不希望受理论束缚，相信FAP是引起FGF21裂解和失活的酶；因此，抑制FAP可增加FGF21的表达水平并且可增强内源性和/或外源性FGF21作用。FGF21通过其N末端与FGFR1相互作用并且通过其C末端与β-Klotho相互作用。FGF21的这一C末端区对于激活受体复合物以引发信号传导至关重要(Micanovic,R.等人,《细胞生理学杂志(J CellPhysiol)》,2009、219(2):227-34；Yie,J.等人,《欧洲生物化学学会联合会快报(FEBSLett)》,2009,583(1):19-24)。近来，FAPα已被鉴别为通过在Pro171处进行C末端裂解而引起循环FGF21失活的蛋白酶(Dunshee,D.R.等人,《生物化学杂志(J Biol Chem)》,2016,291(11):5986-96；Coppage,A.L.等人,《公共科学图书馆：综合(PLoS One)》,2016,11(3):e0151269；Zhen,E.Y.等人,《生物化学杂志(Biochem J)》,2016,473(5):605-14)。在啮齿动物和灵长类动物中，外源施用的人FGF21因FAP介导的酶降解以及易于发生肾清除而具有较短半衰期(约0.5-2小时)(Hager,T.等人,《分析化学(Anal Chem)》,2013,85(5):2731-8；Xu,J.等人,《美国生理学会杂志：内分泌学与新陈代谢(Am J Physiol EndocrinolMetab)》,2009,297(5):E1105-14；Kharitonenkov,A.等人,《内分泌学(Endocrinology)》,2007,148(2):774-81)。常用的半衰期延长策略使这些FGF21类似物在体内的PK特性明显改善；不过，这些类似物中仍存在蛋白水解加工(Hecht,R.等人,《公共科学图书馆：综合》,2012,7(11):e49345；Mu,J.等人,《糖尿病(Diabetes)》,2012,61(2):505-12；Camacho,R.C.等人,《欧洲药理学杂志(Eur J Pharmacol)》,2013,715(1-3):41-5)。
因此，本文提供了治疗有需要个体的糖尿病、胰岛素不敏感和/或肥胖的方法，所述方法包含向所述个体施用本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物。在一些实施例中，所述方法另外包含施用FGF21或FGF21类似物。在一些实施例中，FGF21类似物是聚乙二醇化FGF21、PF-05231023或LY2405319。本文还提供了治疗有需要个体的糖尿病、胰岛素不敏感和/或肥胖的方法，所述方法包含向所述个体施用本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物，其中FGF21表达增加。在一些实施例中，糖尿病是II型糖尿病。
在一些实施例中，个体是哺乳动物。在一些实施例中，个体是灵长类动物、牛科动物、绵羊科动物、猪科动物、马科动物、犬科动物、猫科动物、兔或啮齿动物。在一些实施例中，个体是人。在一些实施例中，个体患有本文所公开的疾病或病症中的任一种。在一些实施例中，个体有发展本文所公开的疾病或病症中的任一种的风险。
在一些实施例中，个体是人。在一些实施例中，人的年龄是至少约或是约21岁、25岁、30岁、35岁、40岁、45岁、50岁、55岁、60岁、65岁、70岁、75岁、80岁或85岁中的任一种。在一些实施例中，所述人是儿童。在一些实施例中，人的年龄小于约或是约21岁、18岁、15岁、12岁、10岁、8岁、6岁、5岁、4岁、3岁、2岁或1岁中的任一种。
本文还提供了本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物在制造药剂中的用途。在一些实施例中，制造药剂是用于治疗本文所描述的病症或疾病。在一些实施例中，制造药剂是用于预防和/或治疗由FAP介导的病症或疾病。
组合疗法
如本文所提供，本文所描述的化合物或其盐以及本文所描述的组合物可与其它药剂一起施用以治疗本文所公开的疾病和病症中的任一种。
在一些实施例中，(a)本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物与(b)额外药剂是依序施用、并行地施用或同时施用的。在某些实施例中，(a)本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物与(b)额外药剂是间隔约15分钟或更短时间，如间隔约10分钟、5分钟或1分钟或更短时间中的任一种施用。在某些实施例中，(a)本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物与(b)额外药剂是间隔约15分钟或更长时间，如间隔约20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟或更长时间施用。(a)本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物与(b)额外药剂可先施用。在某些实施例中，(a)本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物与(b)额外药剂是同时施用的。
在一些实施例中，所述额外药剂靶向免疫检查点蛋白。在一些实施例中，所述额外药剂是靶向免疫检查点蛋白的抗体。在一些实施例中，所述额外药剂靶向PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、CCR4、OX40、OX40L、IDO及A2AR。在一些实施例中，所述额外药剂是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。
在一些实施例中，所述额外药剂是FGF21表达的诱导剂，如PPARα激动剂。在一些实施例中，PPARα激动剂是贝特类(fibrate)或非诺贝特(fenofibrate)。在一些实施例中，所述额外药剂是FGF-21或FGF-21类似物。在一些实施例中，FGF-21类似物是突变的FGF21和/或聚乙二醇化FGF21。在一些实施例中，FGF-21类似物是PF-05231023或LY2405319。
在一些实施例中，所述额外药剂是KLB/FGFR复合物激动剂、DDPIV拮抗剂、GLP-1受体激动剂或升糖素受体激动剂。
本文提供了一种增强个体体内的免疫反应的方法，所述方法包含向所述个体施用(a)本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物和(b)靶向免疫检查点蛋白的药剂。在一些实施例中，个体患有癌症。在一些实施例中，增强的免疫反应是针对肿瘤或癌细胞。
本文还提供了治疗有需要个体的癌症的方法，所述方法包含向所述个体施用(a)本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物和(b)靶向免疫检查点蛋白的药剂，其中所述个体的免疫反应增加。
本文提供了一种增加个体体内FGF21的表达水平的方法，所述方法包含向所述个体施用(a)本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物和(b)诱导FGF21表达的药剂。
本文还提供了治疗有需要个体的糖尿病、胰岛素不敏感和/或肥胖的方法，所述方法包含向所述个体施用(a)本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐、或本文所描述的药物组合物和(b)诱导FGF21表达的药剂，其中FGF21表达增加。在一些实施例中，糖尿病是II型糖尿病。
如本文所提供，本文所描述的化合物或其盐和本文所描述的组合物是作为治疗方案的一部分施用，所述治疗方案包括运动方案，如力量训练或心血管运动。在一些实施例中，本文所描述的化合物或其盐和本文所描述的组合物作为治疗方案的一部分与额外药剂一起施用，所述治疗方案包括运动方案，如力量训练或心血管运动。在一些实施例中，运动方案包含每周运动至少一次，如每周运动两次、每周运动3次、每周运动4次、每周运动5次、每周运动6次或每周运动7次。在一些实施例中，运动方案包含每周运动至少一天，如每周运动两天、每周运动3天、每周运动4天、每周运动5天、每周运动6天或每周运动7天。在一些实施例中，运动方案包含每天运动一次、每天运动两次或每天运动3次。在一些实施例中，运动方案包含运动的每个时段持续至少10分钟，如至少15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、1小时、1.25小时或1.5小时。
剂量和施用方法
施用给个体(如人)的化合物的剂量可随具体化合物或其盐、施用方法以及所治疗的具体疾病，如癌症的类型和分期而变化。在一些实施例中，化合物或其盐的量是治疗有效量。
一方面，化合物的有效量可以是在约0.01与约100mg/kg之间的剂量。本发明化合物的有效量或剂量可通过常规方法，如建立模型、剂量递增或临床试验，考虑常规因素，例如施用或药物递送的模式或途径、药剂的药物动力学、待治疗疾病的严重程度和过程、受试者的健康状况、病况和体重来确定。示例性剂量范围是约每天约0.7mg至7g、或每天约7mg至350mg、或每天约350mg至1.75g、或每天约1.75至7g。
一方面，本文所提供的方法中的任一种可包含向个体施用药物组合物，该药物组合物含有有效量的本文所提供的化合物或其盐以及药学上可接受的赋形剂。
本发明的化合物或组合物可根据有效给药方案施用给个体，持续所希望的时间段或持续时间，如至少约一个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约6个月、或至少约12个月或更长时间，在一些变化形式中，施用可持续个体生命的持续时间。在一种变化形式中，化合物是根据每天或间歇性时程施用。化合物可在一段时间内连续地(例如每天至少一次)施用给个体。给药频率也可小于每天一次，例如每周约给药一次。给药频率可为每天超过一次，例如每天两次或三次。给药频率也可以是间歇性的，包括‘休药期’(例如每天给药一次，持续7天，随后停药7天，重复任何14天时间段，如约2个月、约4个月、约6个月或更长时间)。任何给药频率都可采用任何本文所描述的化合物以及任何本文所描述的剂量。
制品和试剂盒
本公开另外提供制品，所述制品在适合的包装中包含本文所描述的化合物或其盐、本文所描述的组合物、或本文所描述的一个或多个单元剂量。在某些实施例中，该制品用于任何本文所描述的方法中。适合包装是本领域中已知的并且包括例如小瓶、容器、安瓿、瓶子、广口瓶、柔性包装等。制品可进一步灭菌和/或密封。
本公开另外提供了用于进行本发明方法的试剂盒，所述试剂盒包含一种或多种本文所描述的化合物或包含本文所描述的化合物的组合物。所述试剂盒可采用任一种本文所公开的化合物。在一种变化形式中，试剂盒采用了本文所描述的化合物或其盐。试剂盒可用于任一种或多种本文所描述的用途，并因此，可含有关于治疗本文所描述的任何疾病，例如关于治疗癌症的说明书。
试剂盒一般包含适合的包装。试剂盒可包括含任何本文所描述的化合物的一个或多个容器。每一组分(如果存在多种组分)可包装在独立容器中，或在交叉反应性和保存期限容许的情况下，一些组分可组合于一个容器中。
试剂盒可以呈单位剂型、成批包装(例如多剂量包装)或亚单位剂量形式。例如，提供的试剂盒可含有足够剂量的本文所公开的化合物和/或可用于本文中详述的疾病的额外药物活性化合物，以向个体提供有效的治疗，持续较长时间段，如一周、2周、3周、4周、6周、8周、3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月中的任一种或更长时间。试剂盒还可包括多个单元剂量的化合物和使用说明书，并且以足以在药店(例如医院药店和调制药房)中储存和使用的量包装。
试剂盒可任选地包括一组说明书，一般是书面说明书，不过，含有与本发明方法中组分的用法有关的说明书的电子储存媒体(例如磁盘或光盘)也是可接受的。包括在试剂盒中的说明书一般包括关于各组分和其施用给个体的信息。
参照以下实例可进一步理解本发明，提供的实例是出于说明目的且不打算作为限制。
通篇的所有参考文献，如出版物、专利、专利申请和公布的专利申请，都以全文引用的方式并入本文中。
列举的实施例
以下列举的实施例代表本发明的一些方面。
实施例1.一种式(I)的化合物：
Figure GDA0002789796510000591
或其药学上可接受的盐，其中：
R是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rd取代；
m是0、1、2、3或4；
n是0、1、2、3或4，
其中m+n是1、2、3或4；
X是-C(＝O)-、-O-、-CH(OH)-、-S-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-；
L是
(a)
Figure GDA0002789796510000592
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
Ra是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于Ra的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Re取代，
R1和R2彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C1-C2烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R1和R2的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rf取代，
或R1和R2连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rf取代，
q是1、2或3，
R3和R4彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R3和R4的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rg取代，
或R3和R4连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rg取代，并且
p是0、1或2；
(b)
Figure GDA0002789796510000601
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
R5和R6彼此独立地并且在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R5和R6的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rh取代，
Rb和Rc独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基、C6-C14芳基或-C(＝O)OR17，其中关于Rb和Rc的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Ri取代，并且
r是1、2或3；
(c)
Figure GDA0002789796510000602
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
R7和R8彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R7和R8的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rj取代，
或R7和R8连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rj取代，
R9和R10彼此独立地并且在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R9和R10的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rk取代，
s是1、2或3，
t是1、2或3，
其中s+t是2、3或4，
u是0或1，并且
v是0或1；
Y是任选地被R11取代的C6-C9芳基、任选地被R12取代的6至10元杂芳基或任选地被R13取代的3至12元杂环基，其中当Y是苯基或萘基时，关于Y的所述苯基或萘基被至少一个R11取代，并且其中当L是*-NH-CH2-**并且Y是任选地被取代的喹啉基时，关于Y的所述任选地被取代的喹啉基在2位、3位、5位、6位、7位或8位处连接至母结构，其中
R11、R12和R13彼此独立地并且在每次出现时独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C4-C8环烯基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基、C6-C14芳基、卤素、氰基、氧代、-OR14、-NR15R16、-SR14、-NO2、-C＝NH(OR14)、-C(O)R14、-OC(O)R14、-C(O)OR14、-C(O)NR15R16、-NR14C(O)R15、-NR14C(O)OR15、-NR14C(O)NR15R16、-S(O)R14、-S(O)2R14、-NR14S(O)R15、-NR14S(O)2R15、-S(O)NR15R16、-S(O)2NR15R16或-P(O)(OR15)(OR16)，其中各R11、R12和R13独立地任选被RL取代；
各R14独立地是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基或3至12元杂环基，其中关于R14的所述C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基和3至12元杂环基独立地任选被以下取代：卤素、-OH、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基；
R15和R16彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基或3至12元杂环基，其中关于R15和R16的所述C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基和3至12元杂环基独立地任选被以下取代：卤素、-OH、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基，
或R15和R16连同其所连接的原子一起形成3至6元杂环基，其任选地被以下取代：卤素、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基；
Rd、Re、Rf、Rg、Rh、Ri、Rj基Rk彼此独立地并且在每次出现时独立地是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基、3至12元杂环基、-OR14、-NR15R16、氰基或硝基；并且
各RL独立地是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基、3至12元杂环基、-OR14、-C(O)R14、-NR15R16、氰基、氧代或硝基。
实施例2.根据实施例1所述的化合物或其盐，其中X是-C(＝O)-。
实施例3.根据实施例1所述的化合物或其盐，其中X是-O-。
实施例4.根据实施例1所述的化合物或其盐，其中X是-CH(OH)-。
实施例5.根据实施例1至4中任一项所述的化合物或其盐，其中L是-NH-CR1R2-。
实施例6.根据实施例5所述的化合物或其盐，其中L是-NH-CH2-。
实施例7.根据实施例5所述的化合物或其盐，其中L是-NH-CH(CH3)-。
实施例8.根据实施例5所述的化合物或其盐，其中L是-NH-CR1R2-，其中R1和R2连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基。
实施例9.根据实施例8所述的化合物或其盐，其中R1和R2连同其所连接的碳原子一起形成亚环丙基。
实施例10.根据实施例1至4中任一项所述的化合物或其盐，其中L是-CR5R6-CH(NRbRc)-。
实施例11.根据实施例10所述的化合物或其盐，其中L是-CR5R6-CH(NRbRc)-，其中R6、Rb和Rc是H，并且R5是H或C1-C6烷基。
实施例12.根据实施例1至4中任一项所述的化合物或其盐，其中L是
Figure GDA0002789796510000621
其中*表示与Y-X-部分的连接点，**表示与分子其余部分的连接点。
实施例13.根据实施例12所述的化合物或其盐，其中L是
Figure GDA0002789796510000622
其中*表示与Y-X-部分的连接点，并且**表示与分子其余部分的连接点。
实施例14.根据实施例1至13中任一项所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R11取代的C6-C9芳基、任选地被R12取代的6至10元杂芳基、或任选地被R13取代的3至12元杂环基。
实施例15.根据实施例14所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R11取代的C6-C9芳基，其中当Y是苯基或萘基时，关于Y的所述苯基或萘基被至少一个R11取代。
实施例16.根据实施例15所述的化合物，其中Y是被1至5各R11取代的苯基，所述苯基独立地选自卤素、三卤代甲基、氰基和-C(＝O)NH2。
实施例17.根据实施例15所述的化合物，其中Y是未被取代的2,3-二氢-1H-茚-2-基。
实施例18.根据实施例14所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R12取代的6至10元杂芳基，其中当L是*-NH-CH2-**并且Y是任选地被取代的喹啉基，关于Y的所述任选地被取代的喹啉基在2位、3位、5位、6位、7位或8位处连接至母结构。
实施例19.根据实施例18所述的化合物或其盐，其中：
(a)L是*-CH2-CH(NH2)-**或*-CH(CH3)-CH(NH2)-**并且Y是任选地被R12取代的喹啉-4-基或
(b)L是*-NH-CH2-**，Y是任选地被R12取代的喹啉-6-基，所述R12独立地选自-OH和苯基。
实施例20.根据实施例18所述的化合物或其盐，其中Y是在3位中被R12取代的吡啶-4-基。
实施例21.根据实施例20所述的化合物或其盐，其中R12是任选地被C1-C6烷基取代的吡啶基。
实施例22.根据实施例20所述的化合物或其盐，其中R12是任选地C1-C6烷基被取代的吲哚基。
实施例23.根据实施例20所述的化合物或其盐，其中R12是任选地被C1-C6烷基、卤素或C1-C6烷氧基取代的苯基。
实施例24.根据实施例18所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基或C5-C10环烷基稠合的嘧啶-4-基，其中C6-C14芳基和C5-C根据实施例24所述的化合物或其盐，其中Y是与C6-C14芳基稠合的嘧啶-4-基，其中C6-C14芳基任选地被R12取代。
实施例26.根据实施例24所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被取代的吡啶-3-基、未被取代的喹唑啉-4-基或未被取代的6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基。
实施例27.根据实施例18所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基稠合的2H-吡喃-2-酮-5-基，所述C6-C14芳基任选地被R12取代。
实施例28.根据实施例27所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被卤素取代的1H-异色烯-1-酮-4-基。
实施例29.根据实施例18所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基或5至10元杂环基稠合的吡啶-2(1H)-酮-5-基，所述C6-C14芳基或5至10元杂环基彼此独立地并且在每次出现时独立地是任选地被R12取代。
实施例30.根据实施例29所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被C1-C6烷基或C6-C14芳基取代的吡啶-2(1H)-酮-5-基。
实施例31.根据实施例29所述的化合物或其盐，其中Y是未被取代的7,8,9,10-四氢吡啶并[1,2-a]氮杂环庚三烯-4(6H)-酮-1-基。
实施例32.根据实施例29所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被卤素、C1-C6烷基、C6-C14芳基或C3-C8环烷基取代的异喹啉-1(2H)-酮-4-基。
实施例33.根据实施例14所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R13取代的3至12元杂环基。
实施例34.根据实施例33所述的化合物或其盐，其中Y是未被取代的异吲哚啉-2-基。
实施例35.根据实施例33所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被C1-C6烷基或C6-C14芳基取代的哌啶-2-酮-5-基。
实施例36.根据实施例1至35中任一项所述的化合物或其盐，其中m＝n＝1。
实施例37.根据实施例1至36中任一项所述的化合物或其盐，其中R是氢。
实施例38.根据实施例1所述的化合物或其盐，其中所述-X-L-部分选自由以下组成的组：
Figure GDA0002789796510000641
Figure GDA0002789796510000642
Figure GDA0002789796510000643
其中*表示与Y部分的连接点，并且**表示与分子其余部分的连接点。
实施例39.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据实施例1至38中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
实施例40.一种治疗有需要个体的由成纤维细胞激活蛋白(FAP)介导的疾病或病症的方法，所述方法包含向所述个体施用治疗有效量的根据实施例1至38中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物。
实施例41.一种治疗有需要个体的以增殖、组织重构、慢性炎症、肥胖、葡萄糖不耐或胰岛素不敏感为特征的疾病或病症的方法，所述方法包含向所述个体施用治疗有效量的根据实施例1至38中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物。
实施例42.根据实施例40或41所述的方法，其中所述疾病或病症是乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、黑素瘤、纤维肉瘤、骨肉瘤、结缔组织肉瘤、肾细胞癌、巨大细胞癌、鳞状细胞癌、白血病、皮肤癌、软组织癌、肝癌、胃肠癌或腺癌。
实施例43.根据实施例42所述的方法，其中所述疾病或病症是转移性肾癌、慢性淋巴细胞性白血病、胰腺腺癌或非小细胞肺癌。
实施例44.根据实施例40或41所述的方法，其中所述疾病或病症是纤维化疾病、创伤愈合、瘢痕疙瘩形成、骨关节炎、类风湿性关节炎以及涉及软骨退化的相关病症、动脉粥样硬化疾病、克罗恩氏病或II型糖尿病。
实施例45.一种减少有需要个体的肿瘤生长、肿瘤增殖或肿瘤形成的方法，所述方法包含向所述个体施用根据实施例1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物。
实施例46.一种抑制个体体内的FAP的方法，所述方法包含向所述个体施用根据实施例1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物。
实施例47.一种抑制细胞中的FAP的方法，所述方法包含向所述细胞施用或递送根据实施例1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物、或前述的代谢物。
实施例48.根据实施例47所述的方法，其中所述细胞是成纤维细胞。
实施例49.根据实施例47或48所述的方法，其中所述细胞是癌症相关成纤维细胞(CAF)或反应性基质成纤维细胞。
实施例50.一种抑制肿瘤中的FAP的方法，所述方法包含向所述肿瘤施用或递送根据实施例1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物、或前述的代谢物。
实施例51.一种抑制血浆中的FAP的方法，所述方法包含向所述血浆施用或递送根据实施例1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物、或前述的代谢物。
实施例52.根据实施例46至51中任一项所述的方法，其中抑制FAP包含抑制FAP的内肽酶活性。
实施例53.根据实施例46至51中任一项所述的方法，其中抑制FAP包含抑制FAP的外肽酶活性。
实施例54.一种增强个体体内的免疫反应的方法，所述方法包含施用(a)免疫检查点抑制剂和(b)根据实施例1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物。
实施例55.一种增加个体体内FGF21的表达水平的方法，所述方法包含向所述个体施用根据实施例1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物。
实施例56.根据实施例55所述的方法，所述方法另外包含施用FGF21表达的诱导剂。
实施例57.根据实施例56所述的方法，其中所述FGF21表达的诱导剂是PPARα激动剂。
实施例58.根据实施例57所述的方法，其中所述PPARα激动剂是贝特类或非诺贝特。
实施例59.根据实施例39所述的组合物，所述组合物用作人类或兽医学药剂。
实施例60.一种根据实施例1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据实施例39所述的药物组合物在制造用于预防和/或治疗由FAP介导的病症或疾病的药剂中的用途。
实例
合成实例
所描述的合成实例中的化学反应可易于适于制备本发明的多种其它化合物，并且认为用于制备本发明化合物的替代性方法在本发明的范围内。例如，可通过本领域的普通技术人员显而易见的修饰，例如通过适当地保护干扰基团、通过利用除所描述试剂外的本领域中已知的其它适合试剂、或通过常规地改变反应条件，成功地合成根据本发明的非示例性化合物。或者，本文所公开或本领域中已知的其它反应将被认为适用于制备本发明的其它化合物。
实例1
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000671
化合物1a：在0℃下，经30分钟时间向(S)-4-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(1.9g，7.36mmol，1.0equiv.)于DCM(15mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加DAST(2.6ml，19.85mmol，2.6equiv)，在室温下将反应混合物搅拌过夜。通过NMR监测反应进程。将水(50mL)添加至反应混合物中，搅拌5分钟并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到呈红色油状的(S)-4,4-二氟吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(1.25g，61％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.41-4.53(m,1H),3.65-3.84(m,5H),2.82-3.01(m,2H),1.41(s,4H),1.35(s,5H)。
化合物1b：在0℃下，向(S)-4,4-二氟吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)酯2-甲酯(200mg，0.75mmol，1.0equiv.)于MeOH(1.0mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加7.0M氨的甲醇溶液(5.0mL)。在室温下，将混合物搅拌12小时。通过NMR监测反应进程。反应完成后，减压蒸发溶剂并利用己烷和戊烷使所获得的粗物质结晶，得到呈灰白色固体状的(S)-2-氨甲酰基-4,4-二氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(185mg，98％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.48(d,J＝15.16Hz,1H),7.16(br.s.,1H),4.24(dd,J＝5.87,8.80Hz,1H),3.58-3.83(m,2H),2.77(dd,J＝8.31,13.69Hz,1H),2.20-2.38(m,1H),1.26-1.55(m,9H)。
化合物1c：在0℃下，向(S)-2-氨甲酰基-4,4-二氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.4mmol，1.0equiv)于DCM(5.0mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加吡啶(0.36ml，0.48mmol，1.2equiv)。在0℃下，将反应混合物搅拌15分钟。在0℃下，逐滴添加三氟乙酸酐(54.72mg，0.48mmol，1.2equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌1小时。通过NMR和TLC监测反应进程，反应完成后，通过水(20mL)淬灭，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3溶液(10mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。所得粗产物通过combi-flash色谱法(0-30％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到(S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(70mg，76％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.96(d,J＝8.80Hz,1H),3.65-3.89(m,2H),2.82-3.03(m,1H),2.75(br.s.,1H),1.35-1.56(m,9H)。
化合物1d：在0℃下，经10分钟时间向(S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(250mg，1.07mmol，1.0equiv)于乙腈(10mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加4.0M HCl的二噁烷溶液(0.5mL)。在室温下，将所得反应混合物搅拌16小时。通过TLC和NMR监测反应进程。减压浓缩反应混合物，用乙酸乙酯和己烷(1:1(20mL))洗涤所获得的粗物质，得到呈灰白色固体状的(S)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(70mg，38％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.56-4.67(m,1H),3.27-3.50(m,2H),2.54-2.75(m,2H)。
化合物1f：向(叔丁氧基羰基)甘氨酸(921.8mg，5.26mmol，1.5equiv.)和HATU(2667mg，7.025mmol，2.0equiv)于DMF(10mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(590mg，3.51mmol，1.0equiv)并搅拌10分钟。添加DIPEA(1.8mL，10.53mmol，3.0equiv)并在室温下将反应混合物搅拌16小时。通过NMR和TLC监测反应进程。将反应混合物用冷水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(25mL×4)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。所获得的粗物质通过combi flash色谱法纯化，得到(S)-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，30％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.08(t,J＝5.92Hz,1H),4.98-5.16(m,1H),4.09-4.24(m,1H),3.93-4.09(m,1H),3.77(d,J＝6.14Hz,2H),2.71-2.97(m,2H),1.31-1.42(m,9H)。
化合物1g：在0℃下，经10分钟时间向(S)-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，1.03mmol，1.0equiv)于乙腈(10mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加4.0M HCl的二噁烷溶液(2mL)。在室温下，将混合物搅拌16小时。通过TLC和NMR监测反应进程。减压蒸发溶剂，得到残余物，用20mL乙酸乙酯和己烷(1:1)洗涤该残余物，得到呈灰白色固体状的(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(200mg，86％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(br.s.,2H),5.18(d,J＝7.89Hz,1H),4.21(d,J＝11.40Hz,1H),3.97-4.10(m,1H),3.94(br.s.,1H),3.82(d,J＝12.28Hz,1H),2.81-2.97(m,2H)。
化合物1：向1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(315mg，1.6mmol，1.5equiv)和HATU(843mg，2.22mmol，2.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(250mg，1.11mmol，1.0equiv)并搅拌10分钟。添加DIPEA(429mg，3.33mmol，3.0equiv.)并在室温下将混合物搅拌16小时。通过NMR和TLC监测反应进程。将反应混合物用冷水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺(38mg，6％产率)。
LCMS 361[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.62(br.s.,1H),8.68(t,J＝5.62Hz,1H),8.25(t,J＝8.31Hz,2H),7.75(t,J＝7.09Hz,1H),7.47-7.62(m,2H),5.03-5.18(m,1H),4.22-4.36(m,1H),3.99-4.20(m,3H),2.77-2.98(m,2H)。
实例2
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000691
化合物2a：向1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(500mg，2.6mmol，1equiv)于DCM(10mL)中的搅拌的溶液中添加苯基硼酸(480mg，3.9mmol，1.5equiv)、乙酸铜(2360mg，13mmol，5equiv)、分子筛和Et3N(4mL，26mmol，10equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，使反应混合物通过
Figure GDA0002789796510000701
床并减压浓缩滤液，得到粗品，将该粗品用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL)洗涤。用3N HCl(30mL)将水层酸化至pH-3并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到呈白色固体状的1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(650mg，93％)。
LCMS 266[M+H]+
化合物2：向1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(200mg，0.75mmol，1equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加DIPEA(0.5mL，3mmol，4equiv)和HATU(802mg，2.1mmol，2.8equiv)并在氮气氛下，将反应混合物搅拌30分钟。将(S)-1-(2-氨基乙酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(204mg，0.905mmol，1.2equiv)添加至上述混合物中并在室温下搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。将有机层用水(100mL)和盐水溶液(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-2-苯基-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺(游离碱)(25mg，7％)。
LCMS 437.3[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78(t,J＝5.9Hz,1H),8.35-8.27(m,2H),7.82(q,J＝5.3,3.2Hz,2H),7.66-7.54(m,5H),7.51(p,J＝4.6Hz,1H),5.15-5.07(m,1H),4.29(ddd,J＝16.2,11.9,4.5Hz,1H),4.14(qd,J＝18.6,17.9,7.2Hz,2H),3.29(s,1H),2.99-2.73(m,2H)。
实例3
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-环丙基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000711
化合物3a：向1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(1000mg，5.2mmol，1equiv)于DCM(15mL)中的搅拌的溶液中添加环丙基硼酸(683mg，7.9mmol，1.5equiv)、乙酸铜(4732mg，26mmol，5equiv)、分子筛和Et3N(7.2mL，52mmol，10equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，使反应混合物通过硅藻土床并减压浓缩滤液，得到粗品，将该粗品用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL)萃取。用3N HCl(30mL)将水层酸化至pH-3并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到呈浅褐色固体状化合物的2-环丙基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(550mg，45％)。
LCMS 230[M+H]+
化合物3：向2-环丙基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(200mg，0.87mmol，1equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加DIPEA(0.6mL，3.48mmol，4equiv)和HATU(926mg，2.43mmol，2.8equiv)。在氮气下，将反应混合物搅拌30分钟。将(S)-1-(2-氨基乙酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(236mg，1.04mmol，1.2equiv)添加至上述混合物中并在室温下搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。将有机层用水(100mL)和盐水溶液(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-环丙基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺(游离碱)(60mg，17％)。
LCMS 437.3[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(t,J＝5.9Hz,1H),8.24(dd,J＝19.7,8.1Hz,2H),7.78-7.66(m,2H),7.55(t,J＝7.5Hz,1H),5.14(d,J＝9.2Hz,1H),4.37-4.24(m,1H),4.14(qd,J＝17.0,16.5,7.9Hz,3H),3.35(s,1H),2.88(dd,J＝40.5,13.1Hz,2H),1.75(s,0H),1.05(d,J＝7.3Hz,2H),0.98(s,2H)。
实例4
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)喹啉-6-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000721
向喹啉-6-甲酸(230mg，1.32mmol，1.0equiv)和HATU(1003mg，2.64mmol，2.0equiv)于DMF(15ml)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(250mg，1.32mmol，1.0equiv.)并将反应混合物搅拌10分钟。添加DIPEA(510mg，3.96mmol，3.0equiv)并在室温下将反应混合物搅拌16小时。通过NMR和TLC监测反应进程。将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(25mL×4)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。所获得的粗物质通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)喹啉-6-甲酰胺(175mg，38％产率)。
LCMS 345[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.62(br.s.,1H),8.68(t,J＝5.62Hz,1H),8.25(t,J＝8.31Hz,2H),7.75(t,J＝7.09Hz,1H),7.47-7.62(m,2H),5.03-5.18(m,1H),4.22-4.36(m,1H),3.99-4.20(m,3H),2.77-2.98(m,2H)。
实例5
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000722
向(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(100mg，0.44mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加喹啉-4-甲酸(73mg，0.44mmol，1equiv)、Et3N(0.06mL，0.48mmol，1.1equiv)、HOBt(68mg，0.44mmol，1equiv)、DMAP(3mg，0.02mmol，0.05equiv)和EDC.HCl(93mg，0.48mmol，1.1equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。用水(50mL)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过正相combi flash纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-甲酰胺(40mg，27％)。
LCMS 336[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.02(s,1H),5.09-5.01(m,1H),4.33-3.92(m,4H),3.24(t,J＝7.7Hz,2H),2.97(t,J＝7.8Hz,2H),2.93-2.70(m,2H),2.06(p,J＝7.7Hz,2H)。
实例6
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000731
向6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(50mg，0.22mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加Et3N(0.03mL，0.24mmol，1.1equiv)、HOBt(34mg，0.22mmol，1equiv)、DMAP(1.3mg，0.01mmol，0.05equiv)和EDC.HCl(47mg，0.24mmol，1.1equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。用水(50mL)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(游离碱)(50mg，58％)。
LCMS 311[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.78(s,1H),8.60(q,J＝7.8,6.0Hz,1H),8.03(d,J＝2.7Hz,1H),7.87(dd,J＝9.6,2.8Hz,1H),6.37(d,J＝9.6Hz,1H),5.07(dd,J＝9.3,2.8Hz,1H),4.32-4.20(m,1H),4.07(qt,J＝16.8,7.9Hz,3H),2.97-2.71(m,2H)。
实例7
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000741
向2,3-二氢-1H-茚-2-甲酸(100mg，0.617mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加DIPEA(0.4mL，2.46mmol，4equiv)和HATU(657mg，1.72mmol，2.8equiv)并将混合物搅拌30分钟。将(S)-1-(2-氨基乙酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(167mg，0.74mmol，1.2equiv)添加至上述混合物中并在室温下，将所得混合物搅拌过夜。通过LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。用水(50mL)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层通过无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2,3-二氢-1H-茚-2-甲酰胺(游离碱)(100mg，49％)。
LCMS 334.1[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(t,J＝5.8Hz,1H),7.19(dt,J＝7.3,3.6Hz,2H),7.12(dd,J＝5.5,3.2Hz,2H),5.07(dd,J＝9.3,2.8Hz,1H),4.22(ddd,J＝15.8,11.3,4.5Hz,1H),4.16-4.00(m,1H),3.97(t,J＝6.0Hz,1H),3.29(dd,J＝17.8,9.2Hz,2H),3.08(t,J＝6.3Hz,4H),2.96-2.71(m,2H)。
实例8
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异吲哚啉-2-甲酰胺。
Figure GDA0002789796510000751
向(S)-1-(2-氨基乙酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(50mg，0.22mmol，1equiv)于DCM(3mL)中的搅拌的溶液中添加Et3N(0.2mL，1.1mmol，5equiv)。在氮气下，将反应混合物搅拌15分钟。将异吲哚啉(26mg，0.22mmol，1.0equiv)添加至上述混合物中并将反应混合物冷却至0℃。将光气(20％于甲苯中)(0.6mL)逐滴添加至上述混合物中。使温度升高至室温并在室温下搅拌过夜。通过LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(30mL)稀释并用DCM(50mL×2)萃取。用水(50mL)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异吲哚啉-2-甲酰胺(游离碱)(20mg，27％)。
LCMS 335.1[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.34(dt,J＝7.1,3.6Hz,2H),7.31-7.25(m,2H),6.70(t,J＝5.8Hz,1H),5.07(dd,J＝9.3,2.9Hz,1H),4.62(s,4H),4.24(ddd,J＝16.1,11.5,4.6Hz,1H),4.15-4.01(m,1H),3.90(t,J＝5.3Hz,2H),.97-2.71(m,2H)。
实例9
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-甲基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺。
Figure GDA0002789796510000761
向(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(100mg，0.44mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加2-甲基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(89mg，0.44mmol，1equiv)、Et3N(0.06mL，0.48mmol，1.1equiv)、HOBt(68mg，0.44mmol，1equiv)、DMAP(3mg，0.02mmol，0.05equiv)和EDC.HCl(93mg，0.48mmol，1.1equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。用水(50mL)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过正相combi flash纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-甲基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺(游离碱)(80mg，48％)。
LCMS 375[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.69(t,J＝5.7Hz,1H),8.26(d,J＝8.1Hz,1H),8.16(d,J＝8.2Hz,1H),7.83(s,1H),7.79-7.70(m,1H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),5.07(dd,J＝9.5,2.6Hz,1H),4.29-3.99(m,4H),3.54(s,3H),2.97-2.70(m,2H)。
实例10
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-羟基喹啉-6-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000762
向2-羟基喹啉-6-甲酸(0.200g，1.05mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.261g，1.16mmol，1.1equiv)、HOBt(0.156g，1.16mmol，1.1equiv)和EDC.HCl(0.221g，1.16mmol，1.1equiv)。在室温下，将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.73mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所获得的粗物质通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-羟基喹啉-6-甲酰胺(0.010g，约5％产率)。
LCMS 361.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d 11.97(br.s.,1H),8.80(br.s.,1H),8.23(br.s.,1H),7.89-8.04(m,2H),7.35(d,J＝8.33Hz,1H),6.56(d,J＝7.45Hz,1H),5.10(d,J＝10.96Hz,1H),4.30(br.s.,2H),4.15(d,J＝10.96Hz,2H),2.85(br.s.,1H),2.80(br.s.,1H)。
实例11
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)对苯二甲酰胺
Figure GDA0002789796510000771
向(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(136mg，0.606mmol，1equiv)于DMF(10mL)中的搅拌的溶液中添加4-氨甲酰基苯甲酸(100mg，0.606mmol，1equiv)、Et3N(0.2mL，1.818mmol，3equiv)、HOBT(90mg，0.666mmol，1.1equiv)、EDC.HCL(128mg，0.666mmol，1.1equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。用水(20mL×4)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过正相combi flash纯化，得到呈灰白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)对苯二甲酰胺(游离碱)(25mg，12％产率)。
LCMS 337[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.79-3.00(m,3H)4.04-4.22(m,3H)4.24-4.41(m,1H)5.10(d,J＝7.02Hz,1H)7.51(br.s.,1H)7.83-8.02(m,3H)8.09(br.s.,1H)8.92(d,J＝5.70Hz,1H)。
实例12
合成(S)-4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺
Figure GDA0002789796510000781
化合物12a.向4-甲基-2-(三氟甲基)苯甲腈(0.790g，4.270mmol，1equiv)于吡啶(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加KMnO4(0.675g，4.270mmol，1.0equiv)。在微波反应器中，在100℃下将所得反应混合物加热1小时。通过LCMS(-ve模式质量)确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤并用乙酸乙酯洗涤。用1N HCl酸化滤液并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的4-氰基-3-(三氟甲基)苯甲酸(0.200g，22％产率)。
LCMS 214.2(M-1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(d,J＝4.38Hz,1H),8.32-8.42(m,2H)。
化合物12.向4-氰基-3-(三氟甲基)苯甲酸(0.200g，0.930mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.210g，0.930mmol，1.0equiv)、HOBt(0.151g，1.116mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.212g，1.116mmol，1.2equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.4mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.060g，17％产率)。
LCMS 387.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d 9.35(br.s.,1H),8.41(s,1H),8.35(s,2H),5.10(d,J＝7.89Hz,1H),4.31(t,J＝11.62Hz,1H),4.05-4.22(m,2H),2.77-3.00(m,2H),2.73(s,1H)。
实例13
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯基异烟酰胺
Figure GDA0002789796510000791
化合物13a.向3-溴异烟酸乙酯(1.00g，4.34mmol，1.equiv)于THF(20mL)中的溶液中添加苯基硼酸(0.584g，4.78mmol，1.1equiv)、Na2CO3(0.922g，8.68mmol，2.0equiv)，随后添加Pd(PPh3)2Cl2(0.153g，0.217mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-30％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的3-苯基异烟酸乙酯(0.300g，31％产率)。
LCMS 228.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68-8.76(m,2H),7.67(d,J＝4.82Hz,1H),7.41-7.51(m,3H),7.37(d,J＝6.14Hz,2H),4.11(q,J＝7.02Hz,2H),0.98(t,J＝7.24Hz,3H)。
化合物13b.向3-苯基异烟酸乙酯(0.250g，1.10mmol，1.0equiv)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.053g，2.20mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(15mL)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈灰白色固体状的3-苯基异烟酸(0.300g，99％产率)。
LCMS 200.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d 8.30-8.47(m,2H),7.58(d,J＝7.02Hz,2H),7.26-7.45(m,3H),7.13(d,J＝4.82Hz,1H)。
化合物13.向3-苯基异烟酸(0.200g，1.00mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.224g，1.00mmol，1.0equiv)、HOBt(0.163g，1.206mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.230g，1.206mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.7mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯基异烟酰胺(0.050g，14％产率)。
LCMS 371.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(t,J＝5.48Hz,1H),8.62-8.70(m,1H),7.54(d,J＝6.58Hz,1H),7.29-7.51(m,3H),5.10(d,J＝7.02Hz,1H),4.21(br.s.,1H),3.93-4.12(m,2H),2.80(d,J＝13.59Hz,2H)。
实例14
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-5-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000801
向(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(50mg，0.22mmol，1equiv)于DMF(2mL)中的搅拌的溶液中添加6-氧代-5-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(48mg，0.22mmol，1equiv)、Et3N(0.03mL，0.24mmol，1.1equiv)、HOBt(34mg，0.22mmol，1equiv)、DMAP(2mg，0.01mmol，0.05equiv)和EDC.HCl(46mg，0.24mmol，1.1equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。用水(50mL)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过正相combi flash纯化，得到呈灰白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-5-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(游离碱)(30mg，35％)。
LCMS 387[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.22(s,1H),8.72(t,J＝5.8Hz,1H),8.11(d,J＝2.7Hz,1H),8.04(s,1H),7.74(d,J＝7.5Hz,2H),7.42(t,J＝7.5Hz,2H),7.35(t,J＝7.2Hz,1H),5.09(dd,J＝9.4,2.8Hz,1H),4.29(ddd,J＝15.9,11.6,4.6Hz,1H),4.18-3.93(m,3H),2.98-2.70(m,2H)。
实例15
合成(S)-4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-氟苯甲酰胺
Figure GDA0002789796510000811
向(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(100mg，0.44mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加4-氰基-3-氟苯甲酸(73mg，0.44mmol，1equiv)、Et3N(0.06mL，0.48mmol，1.1equiv)、HOBt(67mg，0.44mmol，1equiv)、DMAP(3mg，0.02mmol，0.05equiv)和EDC.HCl(92mg，0.48mmol，1.1equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。用水(50mL)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过正相combi flash纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-氟苯甲酰胺(游离碱)(45mg，30％)。
LCMS 337[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.18(q,J＝8.4,5.8Hz,1H),8.10(t,J＝7.3Hz,1H),7.91(dd,J＝18.9,9.1Hz,2H),5.10(dd,J＝9.3,2.8Hz,1H),4.31(ddt,J＝16.3,11.9,5.9Hz,1H),4.25-4.00(m,3H),2.99-2.74(m,2H)。
实例16
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000821
向(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(100mg，0.44mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(68mg，0.44mmol，1equiv)、Et3N(0.06mL，0.48mmol，1.1equiv)、HOBt(67mg，0.44mmol，1equiv)、DMAP(3mg，0.02mmol，0.05equiv)和EDC.HCl(92mg，0.48mmol，1.1equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。用水(50mL)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过正相combi flash纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(游离碱)(30mg，21％)。
LCMS 325[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33-8.66(d,J＝2.6Hz,2H),7.98(dd,J＝9.4,2.7Hz,1H),6.68(d,J＝9.4Hz,1H),5.14(dd,J＝8.4,4.4Hz,1H),4.26(dd,J＝12.1,7.1Hz,1H),4.22(s,2H),4.20-4.06(m,1H),3.65(s,3H),3.06-2.82(m,2H)。
实例17
合成(S)-4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)苯甲酰胺
Figure GDA0002789796510000831
向(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(100mg，0.44mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加4-氰基苯甲酸(68mg，0.44mmol，1equiv)、Et3N(0.06mL，0.48mmol，1.1equiv)、HOBt(67mg，0.44mmol，1equiv)、DMAP(3mg，0.02mmol，0.05equiv)和EDC.HCl(92mg，0.48mmol，1.1equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。用水(50mL)和盐水溶液(50mL)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过正相combi flash纯化，得到呈白色固体状化合物的(S)-4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)苯甲酰胺(游离碱)(35mg，25％)。
LCMS 319[M+H]+
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.10(q,J＝7.5,5.8Hz,1H),8.01(q,J＝8.0Hz,5H),5.10(dd,J＝9.4,2.8Hz,1H),4.30(ddd,J＝16.1,11.8,4.8Hz,1H),4.14(qt,J＝17.2,8.4Hz,3H),17.9,14.3,9.9Hz,2H)。
实例18
合成(S)-4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-(三氟甲基)苯甲酰胺
Figure GDA0002789796510000832
向3-苯基异烟酸(0.100g，0.46mmol，1.0equiv)于DMF(10mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.104g，0.46mmol，1.0equiv)、HOBt(0.068g，0.50mmol，1.1equiv)和EDC.HCl(0.96g，0.50mmol，1.1equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.19mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-4-氰基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-2-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.030g，17％产率)。
LCMS 387.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(br.s.,1H),8.40(s,1H),8.28(d,J＝7.45Hz,1H),7.78(d,J＝7.89Hz,1H),5.12(d,J＝7.02Hz,1H),4.27(t,J＝15.13Hz,1H),4.01-4.21(m,3H),2.72-2.99(m,3H)。
实例19
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-苯基喹啉-6-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000841
化合物19a.在0℃下，向喹啉-6-甲酸(1.00g，5.7mmol，1equiv)于MeOH(10mL)中的溶液中添加SOCl2(2.06mL，17.30mmol，3.0equiv)。在50℃下将反应混合物加热过夜。反应完成(TLC)后，用饱和NaHCO3碱化混合物并用DCM(100mL×2)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥并减压浓缩，得到呈褐色固体状的喹啉-6-甲酸甲酯(1.00g，98％产率)。
LCMS 188.2[M+H]+
化合物19b.向喹啉-6-甲酸甲酯(1.00g，5.3mmol，1equiv)于DCM(30mL)中的溶液中添加mCPBA(1.84g，10.6mmol，2equiv)并在室温下将混合物搅拌过夜。反应完成(TLC)后，将混合物用饱和NaHCO3(40mL)稀释并用DCM(100mL×2)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥并减压浓缩，得到残余物，使该残余物在乙酸乙酯中结晶，得到6-(甲氧基羰基)喹啉1-氧化物(1.00g，92％产率)。
LCMS 204.2[M+H]+
化合物19c.在氮气氛下，将6-(甲氧基羰基)喹啉1-氧化物(0.900g，4.4mmol，1equiv)放入50mL RB中，向其中添加POCl3(5mL)，接着在氮气氛下，将所得混合物搅拌2小时。反应完成(TLC)后，减压浓缩混合物。将由此得到的残余物溶解于DCM(100mL)中并用饱和NaHCO3(25mL×3)洗涤。将有机层分离并经无水Na2SO4干燥，并减压浓缩，得到粗物质，该粗物质通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到4-氯喹啉-6-甲酸甲酯(0.300g，30％产率)。
LCMS 222.1[M+H]+
化合物19d.向4-氯喹啉-6-甲酸甲酯(300mg，1.30mmol，1.0equiv)于THF(5mL)中的溶液中添加苯基硼酸(198mg，1.60mmol，1.2equiv)、Na2CO3(287mg，2.70mmol，2.0equiv)和催化量的Pd(PPh3)2Cl2(47mg，0.069mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并的有机层经无水Na2SO4干燥并减压浓缩，得到粗物质，该粗物质通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到4-苯基喹啉-6-甲酸甲酯(0.300g，84％产率)。
LCMS 264.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.08(d,J＝4.38Hz,1H),8.53(s,1H),8.08-8.35(m,2H),7.48-7.69(m,5H),3.86(s,3H)。
化合物19e.向3-苯基异烟酸乙酯(0.360g，1.30mmol，1.0equiv)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.098g，4.10mmol，3.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR确定产物形成。浓缩反应混合物，得到呈灰白色固体状的4-苯基喹啉-6-甲酸(0.420g，100％产率)。
LCMS 249.9[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(d,J＝4.38Hz,1H),8.37(s,1H),8.27(d,J＝8.77Hz,1H),7.95(d,J＝8.77Hz,1H),7.49-7.65(m,4H),7.39(d,J＝4.38Hz,1H)。
化合物19.向4-苯基喹啉-6-甲酸(0.200g，0.80mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.180g，0.80mmol，1.0equiv)、HOBt(0.118g，0.88mmol，1.1equiv)和EDC.HCl(0.168g，0.88mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.4mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-苯基喹啉-6-甲酰胺(0.030g，9％产率)。
LCMS 421.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.04(d,J＝4.38Hz,2H),8.43(s,1H),8.12-8.28(m,2H),7.61(s,3H),7.55(d,J＝4.38Hz,2H),5.09(d,J＝8.33Hz,1H),4.29(br.s.,1H),4.04-4.23(m,2H),2.90(br.s.,2H),2.81(d,J＝17.54Hz,2H)。
实例20
合成(2R,3R)-N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-乙基-6-氧代-2-苯基哌啶-3-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000861
向(2R,3R)-1-乙基-6-氧代-2-苯基哌啶-3-甲酸(0.200g，0.809mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.200g，0.890mmol，1.0equiv)、HOBt(0.163g，1.21mmol，1.5equiv)和EDC.HCl(0.230g，1.21mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.4mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(2R,3R)-N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-乙基-6-氧代-2-苯基哌啶-3-甲酰胺(0.040g，12％产率)。
LCMS 419.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝4.82Hz,1H),7.17-7.43(m,4H),5.07(t,J＝9.65Hz,1H),4.88(d,J＝5.26Hz,1H),4.17(t,J＝12.06Hz,1H),3.95-4.11(m,2H),3.77-3.90(m,1H),3.58-3.74(m,1H),2.87(dd,J＝5.26,9.65Hz,1H),2.72-2.83(m,2H),2.27-2.46(m,3H),1.84(d,J＝6.58Hz,2H),0.92(t,J＝6.36Hz,3H)。
实例21
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢吡啶并[1,2-a]氮杂环庚三烯-1-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000871
向4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢吡啶并[1,2-a]氮杂环庚三烯-1-甲酸(0.050g，0.241mmol，1.0equiv)于DMF(2mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.060g，0.265mmol，1.1equiv)、DMAP(0.002g，0.0120mmol，0.05equiv)、HOBt(0.050g，0.362mmol，1.5equiv)和EDC.HCl(0.070g，0.362mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟，添加Et3N(0.1mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(25mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(10mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氧代-4,6,7,8,9,10-六氢吡啶并[1,2-a]氮杂环庚三烯-1-甲酰胺(0.015g，17％产率)。
LCMS 379.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝5.70Hz,1H),7.37(d,J＝9.21Hz,1H),6.30(d,J＝9.65Hz,1H),5.10(d,J＝7.02Hz,1H),4.34(br.s.,2H),4.17-4.31(m,2H),3.96-4.15(m,3H),3.09(br.s.,2H),2.72-2.92(m,2H),1.69(br.s.,3H),1.59(br.s.,2H)。
实例22
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000881
向1-氧代-1H-异色烯-4-甲酸(0.200g，1.04mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.235g，1.04mmol，1.0equiv)、HOBt(0.168g，1.24mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.235g，1.24mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.5mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1-氧代-1H-异色烯-4-甲酰胺(0.030g，15％产率)。
LCMS 362.2[M+H]+
1H NMR 400MHz,DMSO-d6)δ8.90(br.s.,1H),8.22(d,J＝7.02Hz,1H),8.05(d,J＝7.89Hz,1H),7.93(s,2H),7.57-7.74(m,1H),5.14(d,J＝6.58Hz,1H),4.01-4.22(m,2H),2.83(d,J＝17.98Hz,2H),1.87(s,2H)。
实例23
合成(S)-N-(1-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-羰基)环丙基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000891
化合物23a.向1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙烷-1-甲酸(201mg，1.00mmol，1equiv)于DMF(2mL)中的搅拌的溶液中添加HATU(760mg，2.00mmol，2.0equiv)，随后添加(S)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(305mg，1.00mmol，1.0equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌10分钟。添加DIPEA(0.86mL，5.00mmol，5.0equiv)并在室温下将反应混合物搅拌过夜。通过1H NMR监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(25mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(25mL×4)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。所获得的粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)富集，得到呈灰白色固体状的(S)-(1-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-羰基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，95％产率)。
LCMS 315.2[M+H]+
化合物23b.向(S)-(1-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-羰基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(468mg，1.48mmol，1equiv)于MeCN(5mL)中的搅拌的溶液中添加pTsOH(383mg，2.22mmol，1.5equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌过夜。通过NMR监测反应进程。反应完成后，在减压下去除溶剂，得到呈白色固体状化合物的(S)-1-(1-氨基环丙烷-1-羰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(898mg，定量)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(br.s.,1H),7.42-7.54(m,2H),7.09-7.20(m,J＝7.89Hz,2H),5.10-5.28(m,1H),4.14-4.31(m,1H),3.87-4.11(m,1H),2.74-3.03(m,1H),2.29(s,3H),1.42-1.67(m,1H),1.31-1.41(m,1H)。
化合物23.向1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(0.398g，2.10mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-1-(1-氨基环丙烷-1-羰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(0.816g，2.10mmol，1.0equiv)、HOBt(0.311g，2.31mmol，1.1equiv)和EDC.HCl(0.441g，2.31mmol，1.1equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.87mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。使所得粗产物在MeOH中结晶，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(1-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-羰基)环丙基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺(0.140g，17％产率)。
LCMS 387.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.79(br.s.,1H),10.72(br.s.,1H),8.24(d,J＝7.89Hz,1H),7.76(t,J＝7.67Hz,1H),7.54(t,J＝7.45Hz,1H),5.40(br.s.,1H),4.22(d,J＝11.40Hz,1H),3.68(d,J＝11.84Hz,1H),2.87(br.s.,1H),2.78(d,J＝14.03Hz,1H),1.65(br.s.,1H),1.40(br.s.,1H),1.15-1.23(m,1H),1.12(br.s.,1H)。
实例24
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-环丙基异烟酰胺
Figure GDA0002789796510000901
化合物24a.向3-溴异烟酸乙酯(0.5g，2.32mmol，1.0equiv)于甲苯(30mL)中的搅拌的溶液中添加环丙基硼酸(0.398g，4.63mmol，2.0equiv)、K2CO3(0.958g，6.95mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.133g，0.116mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过
Figure GDA0002789796510000911
床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-15％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色液体状的3-环丙基异烟酸甲酯(0.360g，87.8％产率)。
LCMS 178.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.51(d,J＝5.26Hz,1H),8.37(s,1H),7.56(d,J＝4.82Hz,1H),3.89(s,3H),2.35(d,J＝14.03Hz,1H),0.96-1.04(m,2H),0.80-0.87(m,2H)。
化合物24b.向3-环丙基异烟酸甲酯(0.420g，2.37mmol，1.0equiv)于THF(10mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.170g，7.11mmol，和3.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR确定产物形成。减压浓缩反应混合物并用水(15mL)稀释，并用乙酸乙酯(15mL)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈灰白色固体状的3-环丙基异烟酸(0.380g，100％产率)。
LCMS 164.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝4.82Hz,1H),8.38(s,1H),7.66(d,J＝5.26Hz,1H),2.42-2.46(m,1H),0.99-1.07(m,2H),0.78-0.94(m,2H)。
化合物24.向3-环丙基异烟酸(0.200g，1.22mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.33g，1.46mmol，1.2equiv)和TBTU(0.587g，1.83mmol，1.5equiv)并在室温下将混合物继续搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.4mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-环丙基异烟酰胺(0.065g，16％产率)。
LCMS 335.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85(br.s.,1H),8.44(d,J＝4.82Hz,1H),8.24(s,1H),7.26(d,J＝4.82Hz,1H),5.12(d,J＝8.33Hz,1H),4.27(d,J＝11.84Hz,1H),4.05-4.17(m,2H),2.90(br.s.,1H),2.81(d,J＝17.10Hz,2H),2.22(d,J＝5.26Hz,1H),0.97(d,J＝8.33Hz,2H),0.74-0.90(m,2H)。
实例25
合成N-(1-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000921
化合物25a.向(叔丁氧基羰基)丙氨酸(140mg，0.73mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加HATU(555mg，1.46mmol，2.0equiv)，随后添加(S)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(225mg，0.73mmol，1.0equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌10分钟。添加DIPEA(0.63mL，3.65mmol，5.0equiv)并在室温下将反应混合物搅拌过夜。通过1H NMR监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(25mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(25mL×4)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。所获得的粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)富集，得到呈灰白色固体状的(1-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，定量)。
LCMS 304.2.2[M+H]+
化合物25b.向(1-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.65mmol，1equiv)于ACN(5mL)中的搅拌的溶液中添加PTSA(425mg，2.40mmol，1.5equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌混合物过夜。通过NMR监测反应进程。反应完成后，在减压下去除溶剂，得到呈白色固体状化合物的(2S)-1-丙氨酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(630mg，定量)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(br.s.,2H),7.44-7.52(m,2H),7.06-7.17(m,J＝7.89Hz,2H),5.12(d,J＝9.21Hz,1H),4.21(br.s.,1H),3.61(d,J＝4.38Hz,1H),3.07-3.26(m,1H),2.77-2.96(m,1H),2.29(s,3H),1.20-1.26(m,3H)。
化合物25.向1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(0.100g，0.53mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(2S)-1-丙氨酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(0.200g，0.53mmol，1.0equiv)、HOBt(0.078g，0.58mmol，1.1equiv)和EDC.HCl(0.111g，0.58mmol，1.1equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.22mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。使所得粗产物在纯MeOH中结晶，得到呈灰白色固体状的N-(1-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺(0.120g，60％产率)。
LCMS 375.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.64(br.s.,1H),8.77(dd,J＝6.80,18.20Hz,1H),8.22(d,J＝7.89Hz,2H),7.73(br.s.,1H),7.45-7.65(m,2H),4.98-5.16(m,1H),4.62(d,J＝5.70Hz,1H),4.31(d,J＝17.54Hz,2H),2.92(br.s.,1H),2.85(br.s.,1H),1.26-1.44(m,3H)。
实例26
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氟-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000931
向6-氟-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(0.80g，0.386mmol，1.0equiv)于DMF(12mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.173g，0.772mmol，2.0equiv)和TBTU(0.136g，0.425mmol，1.1equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.3mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(15mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-5％甲醇/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氟-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺(0.015g，10.3％产率)。
LCMS 379.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.74(br.s.,1H),8.72(br.s.,1H),8.29(br.s.,1H),8.07(d,J＝13.16Hz,1H),7.66(br.s.,1H),7.41(d,J＝7.89Hz,1H),5.13(d,J＝8.33Hz,1H),4.28(d,J＝16.22Hz,1H),4.05-4.21(m,3H),2.82(d,J＝10.09Hz,2H)。
实例27
合成N-[2-[(2S)-2-氰基-4,4-二氟-吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-3-甲氧基-吡啶-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000941
向3-甲氧基吡啶-4-甲酸(0.100g，0.65mmol，1.0equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(2S)-1-(2-氨基乙酰基)-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.146g，0.65mmol，1.0equiv)、HOBt(0.105g，0.78mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.149g，0.78mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.3mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。将合并的有机层用水(15mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。用己烷洗涤粗产物并在乙醚中结晶，得到呈灰白色固体状的N-[2-[(2S)-2-氰基-4,4-二氟-吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-3-甲氧基-吡啶-4-甲酰胺(0.060g，28％产率)。
LCMS 325.2[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ＝8.66-8.72(m,1H),8.59(s,1H),8.35(d,J＝4.8Hz,1H),7.66(d,J＝4.8Hz,1H),5.12(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),4.15-4.34(m,2H),4.11(d,J＝11.8Hz,2H),3.99(s,3H),2.89(d,J＝3.1Hz,1H),2.82ppm(d,J＝8.8Hz,1H)。
实例28
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(三氟甲基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510000951
向3-(三氟甲基)异烟酸(0.100g，0.523mmol，1.0equiv)于DMF(7mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(0.226g，0.627mmol，1.2equiv)和TBTU(0.201g，0.627mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.2mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(25mL)稀释并用乙酸乙酯(25mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。用含20％DCM的己烷使所得粗产物结晶，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(三氟甲基)异烟酰胺(0.070g，37％产率)。
LCMS 363.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.09(br.s.,1H),9.04(s,1H),8.98(d,J＝4.82Hz,1H),7.61(d,J＝4.82Hz,1H),5.13(d,J＝8.33Hz,1H),4.26(d,J＝15.79Hz,1H),4.18(br.s.,1H),4.11(d,J＝11.84Hz,2H),2.82(d,J＝15.35Hz,1H),2.73(s,1H)。
实例29
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-乙烯基异烟酰胺
Figure GDA0002789796510000952
化合物40a.向3-溴异烟酸(0.300g，1.49mmol，1.0equiv)于二噁烷:水(1:1)(12mL)中的溶液中添加化合物4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.34g，2.21mmol，2.0equiv)、K2CO3(0.31g，2.23mmol，1.5equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.086g，0.074mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(15mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-乙烯基异烟酸(定量产率)。
LCMS 150.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65(s,1H),8.29(d,J＝4.82Hz,1H),7.26-7.39(m,1H),7.23(d,J＝4.38Hz,1H),5.74(d,J＝17.98Hz,1H),5.19(d,J＝10.96Hz,1H)。
化合物40.向化合物3-乙烯基异烟酸(0.200g，1.342mmol，1.0equiv)于DMF(15mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.453g，2.013mmol，1.5equiv)和TBTU(0.646g，2.013mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.5mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×6)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-乙烯基异烟酰胺(0.012g，3％产率)。
LCMS 320.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85-9.00(m,1H),8.56(d,J＝4.82Hz,1H),7.35(d,J＝4.82Hz,1H),7.02(dd,J＝11.40,17.54Hz,1H),6.01(d,J＝17.54Hz,1H),5.43(d,J＝10.96Hz,1H),5.14(d,J＝8.33Hz,1H),4.28(br.s.,1H),3.99-4.21(m,3H),2.91(br.s.,1H),2.82(d,J＝17.54Hz,1H),2.67(br.s.,1H)。
实例30
合成N-[2-[(2S)-2-氰基-4,4-二氟-吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-3-(1-哌啶基)吡啶-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510000961
向3-(1-哌啶基)吡啶-4-甲酸(0.100g，0.49mmol，1.0equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(2S)-1-(2-氨基乙酰基)-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.110g，0.49mmol，1.0equiv)、HOBt(0.078g，0.58mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.110g，0.58mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.21mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。将合并的有机层用水(15mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。粗产物通过柱色谱法纯化(2％MeOH/DCM)，得到呈灰白色固体状的N-[2-[(2S)-2-氰基-4,4-二氟-吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-3-(1-哌啶基)吡啶-4-甲酰胺(0.050g，27.32％产率)。
LCMS 378.3[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.78(br.s.,1H),8.58(br.s.,1H),8.40(br.s.,1H),7.64(d,J＝4.8Hz,1H),5.14(d,J＝9.2Hz,1H),4.17-4.37(m,2H),4.01-4.17(m,1H),2.94-3.07(m,3H),2.90(br.s.,1H),2.82(d,J＝9.6Hz,1H),1.72(br.s.,3H),1.53ppm(br.s.,2H)。
实例31
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(3,5-二氟苯基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510000971
化合物47a.向3-溴异烟酸乙酯(0.25g，1.16mmol，1.0equiv)于甲苯(15mL)中的溶液中添加(3,5-二氟苯基)硼酸(0.366g，2.315mmol，2.0equiv)、K2CO3(0.48g，3.472mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.69g，0.058mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-10％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的3-(3,5-二氟苯基)异烟酸甲酯(0.34g，定量)。
LCMS 250.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(d,J＝4.82Hz,1H),8.72(s,1H),8.40(s,1H),7.77(d,J＝5.26Hz,1H),7.27-7.45(m,1H),7.16(d,J＝6.58Hz,1H),3.71(s,3H)。
化合物47b.向3-(3,5-二氟苯基)异烟酸甲酯(0.34g，1.364mmol，1.0equiv)于THF(10mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.98g，4.08mmol，3.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(15mL)稀释，并用乙酸乙酯(15mL)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到3-(3,5-二氟苯基)异烟酸(0.340g，定量，呈灰白色固体状)。
LCMS 236.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,1H),8.41(d,J＝4.82Hz,1H),7.32(d,J＝7.02Hz,2H),7.05-7.22(m,2H)。
化合物47.向3-(3,5-二氟苯基)异烟酸(0.200g，0.845mmol，1.0equiv)于DMF(10mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.38g，1.46mmol，2.0equiv)和TBTU(0.587g，1.83mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.4mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)，随后反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(3,5-二氟苯基)异烟酰胺(0.020g，5.8％产率)。
LCMS 407.3[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.01(br.s.,1H),8.65-8.74(m,1H),7.49(d,J＝4.8Hz,1H),7.22-7.33(m,1H),5.08(d,J＝7.0Hz,1H),4.15-4.33(m,1H),3.92-4.15(m,3H),2.89(br.s.,1H),2.79ppm(d,J＝13.2Hz,1H)。
实例32
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(4-氟苯基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510000991
化合物52a.向3-溴异烟酸乙酯(0.2g，0.93mmol，1.0equiv)于甲苯(15mL)中的溶液中添加(4-氟苯基)硼酸(0.21g，1.85mmol，2.0equiv)、K2CO3(0.38g，2.78mmol，3.0equiv)。用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.054g，0.046mmol，0.05equiv)。在100℃下，将反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的3-(4-氟苯基)异烟酸甲酯(0.185g，83.3％)。
LCMS 232.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(d,J＝5.26Hz,1H),8.70(s,1H),7.70(d,J＝4.82Hz,1H),7.42(dd,J＝5.70,8.33Hz,2H),7.31(t,J＝8.77Hz,2H),3.68(s,3H)。
化合物52b.向3-(4-氟苯基)异烟酸甲酯(0.37g，1.601mmol，1.0equiv)于THF(20mL)和水(10mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.192g，8.01mmol，5.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×2)洗涤。分离水层并冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(4-氟苯基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 218.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.38(s,1H),8.36(d,J＝4.82Hz,1H),7.61(dd,J＝5.92,8.11Hz,2H),7.18(t,J＝8.77Hz,2H),7.13(d,J＝4.82Hz,1H)。
化合物52.向3-(4-氟苯基)异烟酸(0.200g，0.92mmol，1.0equiv)于DMF(20mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.228g，1.014mmol，1.1equiv)和TBTU(0.325g，1.014mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.3mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(4-氟苯基)异烟酰胺(0.005g，2％产率)。
LCMS 389.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(br.s.,1H),8.65(br.s.,2H),7.57(br.s.,2H),7.45(br.s.,1H),7.23(br.s.,2H),5.08(br.s.,1H),4.20(br.s.,1H),4.05(br.s.,2H),2.87(br.s.,1H),2.81(br.s.,2H)。
实例33
合成(S)-3-(5-氯-2-氟苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001001
化合物54a.向3-溴异烟酸乙酯(0.25g，1.16mmol，1.0equiv)于甲苯(15mL)中的溶液中添加(5-氯-2-氟苯基)硼酸(0.403g，2.315mmol，2.0equiv)、K2CO3(0.48g，3.472mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.69g，0.058mmol，0.05equiv)。在100℃下将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-10％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到3-(5-氯-2-氟苯基)异烟酸甲酯(0.400g，定量，呈灰白色固体状)。
LCMS 266.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.84(d,J＝5.26Hz,1H),8.73(s,1H),7.83(d,J＝5.26Hz,1H),7.49-7.68(m,2H),7.29-7.41(m,2H),3.72(s,3H)。
化合物54b.向化合物3-(5-氯-2-氟苯基)异烟酸甲酯(0.4g，1.504mmol，1.0equiv)于THF(20mL)和水(10mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.108g，4.51mmol，3.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(15mL)稀释，并用乙酸乙酯(15mL)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到3-(5-氯-2-氟苯基)异烟酸(0.400，定量，呈白色固体状)。
LCMS 252.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(d,J＝4.82Hz,1H),8.34(s,1H),7.32-7.52(m,3H),7.24(t,J＝9.21Hz,1H)。
化合物54.向化合物3-(5-氯-2-氟苯基)异烟酸(0.200g，0.796mmol，1.0equiv)于DMF(20mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.358g，1.59mmol，2.0equiv)和TBTU(0.383g，1.19mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.3mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-3-(5-氯-2-氟苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺(0.055g，16.41％产率)。
LCMS 423.2[M+H]+
1H NMR 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(br.s.,1H),8.78(d,J＝4.82Hz,1H),8.64(s,1H),7.61(d,J＝4.82Hz,1H),7.52(d,J＝7.02Hz,2H),7.31(s,1H),5.07(d,J＝9.21Hz,1H),3.93-4.09(m,2H),2.80(br.s.,2H)。
实例34
合成N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氧代-3,4,4a,8a-四氢酞嗪-1-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001021
向4-氧代-3,4,4a,8a-四氢酞嗪-1-甲酸(0.200g，1.05mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(0.380g，1.05mmol，1.0equiv)、HOBt(0.170g，1.26mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.240g，1.26mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.3mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-氧代-3,4,4a,8a-四氢酞嗪-1-甲酰胺(0.110g，29％产率)。
LCMS 363[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.04(s,1H),8.84(br.s.,1H),8.61(d,J＝7.45Hz,1H),8.30(d,J＝7.89Hz,1H),7.94-7.99(m,1H),7.90(d,J＝7.02Hz,1H),5.14(d,J＝6.58Hz,1H),4.30(br.s.,1H),4.12-4.23(m,2H),4.08(d,J＝11.84Hz,1H),2.91(br.s.,1H),2.83(d,J＝17.98Hz,1H)。
实例35
合成N-[2-[(2S)-2-氰基-4,4-二氟-吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-3-甲基-4-氧代-酞嗪-1-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001022
向3-甲基-4-氧代-酞嗪-1-甲酸(0.100g，0.49mmol，1.0equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(2S)-1-(2-氨基乙酰基)-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.110g，0.49mmol，1.0equiv)、HOBt(0.080g，0.59mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.113g，0.59mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.21mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。将合并的有机层用水(15mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。粗产物用己烷洗涤并在乙醚中结晶，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-甲基-4-氧代-3,4-二氢酞嗪-1-甲酰胺(0.040g，21.7％产率)。
LCMS 376.3[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ＝8.93(t,J＝5.7Hz,1H),8.66(d,J＝7.9Hz,1H),8.33(d,J＝7.9Hz,1H),7.86-8.03(m,2H),5.14(d,J＝7.0Hz,1H),4.31(br.s.,1H),4.07-4.24(m,3H),2.92(br.s.,1H),2.83ppm(d,J＝17.1Hz,1H)。
实例36
合成(S)-N-(4-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-4-氧代丁基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001031
化合物82a.向4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(200mg，0.98mmol，1equiv)于DMF(4mL)中的搅拌的溶液中添加HATU(745mg，1.96mmol，2.0equiv)，随后添加(S)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(599mg，1.97mmol，2.0equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌10分钟。添加DIPEA(0.8mL，4.7mmol，5.0equiv)并在室温下将反应混合物搅拌过夜。通过LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(25mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(25mL×4)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。所获得的粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)富集，得到呈灰白色固体状的(S)-(4-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(267mg，85％产率)。
LCMS 318.3[M+H]+
化合物82b.向(S)-(4-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(267mg，0.84mmol，1equiv)于ACN(3mL)中的搅拌的溶液中添加PTSA(217mg，1.26mmol，1.5equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌混合物过夜。通过NMR监测反应进程。反应完成后，在减压下去除溶剂，得到呈白色固体状化合物的(S)-1-(4-氨基丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(425mg，定量)。
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.68(br.s.,2H),7.48(d,J＝8.3Hz,2H),7.12(d,J＝7.9Hz,2H),5.04(d,J＝9.2Hz,1H),4.07(d,J＝15.8Hz,1H),3.91-4.02(m,1H),2.77-2.93(m,2H),2.38-2.44(m,1H),2.29(s,4H),1.99-2.12(m,2H),1.69-1.86ppm(m,3H)。
化合物82.向1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酸(206mg，1.09mmol，1.0equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-1-(4-氨基丁酰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(425mg，1.09mmol，1.0equiv)、HOBt(160mg，1.19mmol，1.1equiv)和EDC.HCl(229mg，1.19mmol，1.1equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.4mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。使所得粗产物在纯MeOH中结晶，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(4-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-4-氧代丁基)-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-4-甲酰胺(17mg，4％产率)。
LCMS 389.3[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.57(br.s.,1H),8.34(br.s.,1H),8.22(d,J＝7.9Hz,2H),7.73(t,J＝7.5Hz,1H),7.42-7.60(m,2H),5.05(d,J＝8.3Hz,1H),3.90-4.20(m,4H),3.22-3.29(m,2H),2.86(br.s.,1H),2.78(d,J＝12.3Hz,1H),2.20-2.40(m,2H),1.69-1.86ppm(m,2H)。
实例37
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吲唑-5-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001051
向1H-吲唑-5-甲酸(0.200g，1.2mmol，1.0equiv)于DMF(10mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈PTSA(0.444g，1.2mmol，1.0equiv)、HOBt(0.198g，1.46mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.280g，1.46mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.4mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吲唑-5-甲酰胺(0.020g，10％产率)。
LCMS 334[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.29(br.s.,1H),8.79(br.s.,1H),8.38(s,1H),8.23(s,1H),7.88(d,J＝8.77Hz,1H),7.60(d,J＝8.77Hz,1H),5.10(d,J＝8.77Hz,1H),4.31(br.s.,1H),4.04-4.21(m,3H),2.90-2.81(m,2H)。
实例38
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)呋喃并[2,3-c]吡啶-2-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001052
向呋喃并[2,3-c]吡啶-2-甲酸(0.050g，0.30mmol，1.0equiv)于DMF(10mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(0.110g，0.30mmol，1.0equiv)、HOBt(0.049g，0.36mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.069g，0.36mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.1mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)呋喃并[2,3-c]吡啶-2-甲酰胺(0.020g，19％产率)。
LCMS 335[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ(br.s.,1H),9.09(s,1H),8.49(d,J＝5.3Hz,1H),7.84(d,J＝5.3Hz,1H),7.69(s,1H),5.11(d,J＝9.6Hz,1H),4.25-4.39(m,1H),4.04-4.22(m,3H),2.72-3.00ppm(m,3H)。
实例39
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001061
向吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲酸(0.100g，0.61mmol，1.0equiv)于DMF(2mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈4-甲基苯磺酸盐(0.222g，0.61mmol，1.0equiv)、HOBt(0.93g，0.67mmol，1.1equiv)和EDC.HCl(0.129g，0.67mmol，1.1equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.2mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲酰胺(0.030g，15％产率)。
LCMS 334.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.02(br.s.,1H),8.78(d,J＝7.5Hz,1H),8.29(br.s.,1H),8.11(s,1H),7.30(d,J＝7.0Hz,1H),6.85(br.s.,1H),5.11(d,J＝7.9Hz,1H),4.42-4.23(m,1H),4.23-4.05(m,3H),3.01-2.72(m,3H)。
实例40
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-甲氧基-2-苯基烟酰胺
Figure GDA0002789796510001071
化合物86a.向2,6-二氯烟酸(2.0g，10.41mmol，1.0equiv)于MeOH(50mL)中的溶液中添加化合物叔丁醇钾(4.7g，41.66mmol，4.0equiv)，并在70℃下将所得反应混合物加热3小时。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，浓缩反应混合物并用水(50ml)稀释。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的2-氯-6-甲氧基烟酸(1.8g，96.4％)。
LCMS 188[M+H]+
1H NMR 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.33(br.s.,1H),8.06-8.24(m,1H),6.92(d,J＝8.77Hz,1H),3.91(s,3H)。
化合物86b.向2-氯-6-甲氧基烟酸(0.200g，1.07mmol，1.0equiv)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加苯基硼酸(0.195g，1.604mmol，1.5equiv)、Na2CO3(0.23g，2.14mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.062g，0.054mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-2％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的6-甲氧基-2-苯基烟酸(0.07g，28.6％)。
LCMS 230[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89(br.s.,1H),8.17(d,J＝6.58Hz,3H),7.67(d,J＝7.45Hz,1H),7.38-7.60(m,3H),4.04(s,3H)。
化合物86.向6-甲氧基-2-苯基烟酸(0.050g，0.218mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.073g，0.327mmol，1.5equiv)和TBTU(0.104g，0.327mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.1mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(10mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-甲氧基-2-苯基烟酰胺(0.015g，17.2％产率)。
LCMS 401.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(br.s.,1H),8.48(s,2H),7.79(d,J＝8.33Hz,2H),7.39(br.s.,2H),6.86(d,J＝8.33Hz,1H),5.10(d,J＝7.45Hz,1H),4.23(br.s.,1H),3.98-4.12(m,2H),3.94(s,3H),2.90(d,J＝8.33Hz,1H),2.70-2.86(m,1H),2.67(br.s.,1H)。
实例41
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001081
化合物87a.向3-溴异烟酸乙酯(0.2g，0.93mmol，1.0equiv)于甲苯(15mL)中的溶液中添加(1-甲基-1H-吲唑-4-基)硼酸(0.325g，1.85mmol，2.0equiv)、K2CO3(0.38g，2.78mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.054g，0.046mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-30％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈褐色液体状的3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)异烟酸甲酯(0.150g，60.7％)。
LCMS 268.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72-8.87(m,2H),7.79(d,J＝5.26Hz,1H),7.64-7.76(m,2H),7.49(s,1H),7.07(d,J＝7.02Hz,1H),4.10(s,3H),3.53(s,3H)。
化合物87b.向3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)异烟酸甲酯(0.27g，1.011mmol，1.0equiv)于THF(10mL)和水(10mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.072g，3.03mmol，3.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(15mL×2)洗涤。分离水层并冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 254.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34-8.52(m,2H),7.90(s,1H),7.56(d,J＝8.77Hz,1H),7.39(s,1H),7.16-7.31(m,2H),4.06(s,3H)。
化合物87.向3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)异烟酸(0.100g，0.395mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.088g，0.395mmol，1.0equiv)、EDC.HCl(0.075g，0.395mmol，1.0equiv)、HOBt(0.060g，0.395mmol，1.0equiv)和DMAP(0.003g，0.019mmol，0.05equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加TEA(0.5mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)异烟酰胺(0.010g，6％产率)。
LCMS 425.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(br.s.,1H),8.62-8.80(m,2H),7.86(s,1H),7.64(d,J＝8.33Hz,1H),7.56(d,J＝4.82Hz,1H),7.35-7.45(m,1H),7.18(d,J＝7.02Hz,1H),5.05(d,J＝6.58Hz,1H),4.13(br.s.,1H),4.06(s,3H),3.83-3.99(m,3H),2.75(d,J＝11.84Hz,2H),2.65(br.s.,1H)。
实例42
合成N-[2-[(2S)-2-氰基-4,4-二氟-吡咯烷-1-基]-2-氧代-乙基]-3-吗啉代-吡啶-4-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001101
化合物88a.在一个25mL瓶中，添加3-氟吡啶-4-甲酸(0.500g，3.54mmol，1.0equiv)和吗啉(0.616g，7.08mmol，2.0equiv)并在120℃下将反应混合物加热1小时。通过NMR和LCMS监测反应进程。反应完成后，减压浓缩反应混合物并将粗化合物通过正相快速色谱法(2-10％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色固体状的3-吗啉代吡啶-4-甲酸(100mg，13％产率)。
LCMS 209.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.16(br.s.,1H),8.55(s,1H),8.34(d,J＝4.8Hz,1H),7.53(d,J＝4.8Hz,1H),3.82-3.63(m,4H),3.19-3.01(m,4H)。
化合物88.向3-吗啉代吡啶-4-甲酸(0.100g，0.48mmol，1.0equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(2S)-1-(2-氨基乙酰基)-4,4-二氟-吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.108g，0.48mmol，1.0equiv)、HOBt(0.078g，0.58mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.111g，0.58mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.21mL)并在室温下将反应混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(15mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-吗啉代异烟酰胺(0.020g，11％产率)。
LCMS 380.5[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.48(br.s.,1H),8.55(s,1H),8.40(d,J＝4.8Hz,1H),7.57(d,J＝4.8Hz,1H),4.37-4.09(m,4H),3.78(br.s.,4H),3.08(br.s.,4H),2.90(br.s.,2H),2.08(s,1H)。
实例43
合成(S)-3-苯甲基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001111
化合物50a.向3-溴异烟酸(0.5g，2.475mmol，1.0equiv)于二噁烷(6mL)和水(12mL)中的溶液中添加2-苯甲基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.1g，4.95mmol，2.0equiv)、K2CO3(1.1g，7.45mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟。添加Pd(PPh3)4(0.143g，0.124mmol，0.05equiv)并在100℃下将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，浓缩反应混合物并用水(10mL)稀释。用EtOAc(10mL×2)洗涤水层并用6N HCl(约pH 3.0)酸化，用EtOAc(10m萃取L×3)。将合并的有机萃取物用水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-10％甲醇/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的3-苯甲基异烟酸(0.100g，19％)。
LCMS 214.2[M+H]+
化合物50.向3-苯甲基异烟酸(0.100g，0.467mmol，1.0equiv)于DMF(8mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.105g，0.467mmol，1.0equiv)和TBTU(0.164g，0.514mmol，1.1equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.4mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将反应混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-3-苯甲基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺(0.025g，14％产率)。
LCMS 385.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(br.s.,1H),8.61-8.42(m,2H),7.34(d,J＝4.8Hz,1H),7.30-7.21(m,3H),7.18(d,J＝7.0Hz,2H),5.13(d,J＝7.0Hz,1H),4.27(d,J＝15.3Hz,2H),4.23-4.01(m,4H),2.90(br.s.,1H),2.82(d,J＝17.5Hz,1H)。
实例44
合成N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(环己-1-烯-1-基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001121
化合物43a.向3-溴异烟酸乙酯(0.4g，1.85mmol，1.0equiv)于甲苯(20mL)中的溶液中添加2-(环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.58g，2.77mmol，1.5equiv)、K2CO3(0.51g，3.78mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.065g，0.093mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，反应混合物通过
Figure GDA0002789796510001122
床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-10％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈无色油状的3-(环己-1-烯-1-基)异烟酸甲酯(0.170g，42.4％)。
LCMS 218.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(d,J＝5.3Hz,1H),8.52(s,1H),7.56(d,J＝5.3Hz,1H),5.62(br.s.,1H),2.24-2.06(m,4H),1.77-1.54(m,4H)。
化合物43b.向3-(环己-1-烯-1-基)异烟酸甲酯(0.17g，0.779mmol，1.0equiv)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.037g，1.56mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(15mL×2)洗涤。分离水层并冻干，得到呈白色固体状的3-(环己-1-烯-1-基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 204.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(d,J＝4.8Hz,1H),8.17(s,1H),7.10(d,J＝4.8Hz,1H),5.66(br.s.,1H),2.29(br.s.,2H),2.12-2.05(m,2H),1.72-1.53(m,4H)。
化合物43.向3-(环己-1-烯-1-基)异烟酸(0.100g，0.493mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.110g，0.493mmol，1.0equiv)、TBTU(0.174g，0.542mmol，1.1equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.4mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将反应混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(环己-1-烯-1-基)异烟酰胺(0.004g，2.4％产率)。
LCMS 375.3[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.69(t,J＝5.8Hz,1H),8.53(d,J＝4.9Hz,1H),8.46(s,1H),7.33(d,J＝4.9Hz,1H),5.79(d,J＝3.9Hz,1H),5.10(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.33-4.23(m,1H),4.15-4.03(m,3H),2.95-2.74(m,2H),2.25(s,2H),2.12(d,J＝6.4Hz,2H),1.70-1.61(m,2H),1.58(q,J＝6.0,5.5Hz,2H)。
实例45
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-甲基-1H-吲哚-4-基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001131
化合物66a.向3-溴异烟酸乙酯(0.2g，0.93mmol，1.0equiv)于甲苯(16mL)和水(4mL)的混合物中的溶液中添加1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲哚(0.48g，1.85mmol，2.0equiv)、K2CO3(0.382g，2.78mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)2Cl2(0.033g，0.046mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色油状的3-(1-甲基-1H-吲哚-4-基)异烟酸甲酯(0.180g，73.4％)。
LCMS 267.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(s,1H),8.67(d,J＝4.8Hz,1H),7.67-7.49(m,3H),7.40(d,J＝3.1Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H),6.49(d,J＝3.1Hz,1H),3.92(s,3H),3.63(s,3H)。
化合物66b.向1H-吲哚-4-基)异烟酸甲酯(0.18g，0.67mmol，1.0equiv)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.085g，2.63mmol，3.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(15mL×2)洗涤。分离水层并冻干，得到呈白色固体状的3-(1-甲基-1H-吲哚-4-基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 253.2[M+H]+
化合物66.向3-(1-甲基-1H-吲哚-4-基)异烟酸(0.050g，0.198mmol，1.0equiv)于DMF(2mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.044g，0.198mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.057g，0.297mmol，1.5equiv)、HOBt(0.04g，0.297mmol，1.5equiv)。在室温下，将所得反应混合物搅拌10分钟。添加Et3N(0.2mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(10mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-甲基-1H-吲哚-4-基)异烟酰胺(0.013g，15.5％产率)。
LCMS 424.3[M+H]+
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.91(t,J＝6.0Hz,1H),8.69(s,1H),8.61(d,J＝4.9Hz,1H),8.19(t,J＝5.8Hz,1H),7.74(d,J＝1.8Hz,1H),7.49-7.40(m,2H),7.40-7.29(m,2H),6.47(d,J＝3.1Hz,1H),5.08(ddd,J＝15.6,9.3,2.8Hz,2H),4.18(t,J＝13.4Hz,2H),4.10-3.89(m,6H),3.81(s,4H),2.91-2.72(m,4H),1.88(s,2H),1.32-1.21(m,5H),0.84(q,J＝10.7,8.5Hz,1H)。
实例46
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(吲哚啉-5-基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001151
化合物104a.向3-溴异烟酸乙酯(0.2g，0.922mmol，1.0equiv)于甲苯(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吲哚啉-1-甲酸叔丁酯(0.381g，1.106mmol，1.2equiv)、K2CO3(0.38g，2.764mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.033g，0.046mmol，0.05equiv)。在100℃下将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过
Figure GDA0002789796510001152
床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色油状的化合物5-(4-(甲氧基羰基)吡啶-3-基)吲哚啉-1-甲酸叔丁酯(0.200g，61.34％)。
LCMS 355.4[M+H]+
化合物104b.向化合物5-(4-(甲氧基羰基)吡啶-3-基)吲哚啉-1-甲酸叔丁酯(0.200g，0.565mmol，1.0equiv)于THF(8mL)和水(8mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.028g，1.29mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的化合物3-(1-(叔丁氧基羰基)吲哚啉-5-基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 341.4[M+H]+
化合物104c.向化合物3-(1-(叔丁氧基羰基)吲哚啉-5-基)异烟酸(0.050g，0.147mmol，1.0equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.034g，0.147mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.042g，0.225mmol，1.5equiv)、HOBT(0.03g，0.225mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌30分钟。添加三乙胺(0.2mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(0 1mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(10mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩，得到呈黄色固体状的(S)-5-(4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)吡啶-3-基)吲哚啉-1-甲酸叔丁酯(0.035g，46％产率)。
LCMS 512.4[M+H]+
化合物104.向(S)-5-(4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)吡啶-3-基)吲哚啉-1-甲酸叔丁酯(0.07g，0.14mmol，1.0equiv)于DCM(5mL)中的搅拌的溶液中添加三氟乙酸(0.5mL)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并将粗品通过反相纯化法纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(吲哚啉-5-基)异烟酰胺(0.022g，40％产率)。
LCMS 512.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(br.s.,1H),8.58(s,1H),8.52(d,J＝4.8Hz,1H),7.33(d,J＝4.8Hz,1H),7.26(s,1H),7.08(d,J＝6.6Hz,1H),6.50(d,J＝7.9Hz,1H),5.68(br.s.,1H),5.09(d,J＝7.5Hz,1H),4.21(br.s.,1H),4.06(br.s.,1H),4.00(br.s.,3H),3.45(t,J＝8.6Hz,2H),2.96(d,J＝9.2Hz,2H),2.80(d,J＝17.5Hz,1H)。
实例47
合成(S)-3-(6-氯萘-2-基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001161
化合物108a.向3-溴异烟酸甲酯(0.150g，0.694mmol，1.0equiv)于二噁烷(4mL)中的溶液中添加2-(6-氯萘-2-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.300g，1.04mmol，1.5equiv)、K2CO3(0.192g，1.38mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)Cl2(0.024g，0.0347mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色固体状的3-(6-氯萘-2-基)异烟酸甲酯(0.200g，97.43％产率)。
LCMS 298.1[M+H]+
化合物108b.向3-(6-氯萘-2-基)异烟酸甲酯(0.200g，0.673mmol，1.0equiv)于THF(4mL)和水(4mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.043g，1.011mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈黄色固体状的3-(6-氯萘-2-基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 284.2[M+H]+
化合物108.向3-(6-氯萘-2-基)异烟酸(0.130g，0.459mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.103g，0.459mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.133g，0.688mmol，1.5equiv)和HOBt(0.094g，0.688mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加TEA(0.3mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-3-(6-氯萘-2-基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺(0.100g，48％产率)。
LCMS 455.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.12(t,J＝5.9Hz,1H),8.82(s,1H),8.72(d,J＝4.8Hz,1H),8.23(s,1H),8.12-8.00(m,2H),7.95(d,J＝8.3Hz,1H),7.75(dd,J＝1.8,8.3Hz,1H),7.61-7.45(m,2H),5.12(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),4.27-3.97(m,3H),2.95-2.76(m,2H)。
实例48
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-羟基-2-苯基烟酰胺
Figure GDA0002789796510001181
化合物30a.向2,6-二氯烟酸(2.0g，10.41mmol，1.0equiv)于MeOH(50mL)中的溶液中添加化合物叔丁醇钾(4.7g，41.66mmol，4.0equiv)，并在70℃下将所得反应混合物加热3小时。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，最大限度地浓缩反应混合物并用水(50ml)稀释。用乙酸乙酯(30mL×3)萃取水层。减压浓缩滤液。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的2-氯-6-甲氧基烟酸(1.8g，96.4％)。
LCMS 188[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.33(br.s.,1H),8.06-8.24(m,1H),6.92(d,J＝8.77Hz,1H),3.91(s,3H)。
化合物30b.向2-氯-6-甲氧基烟酸(0.200g，1.07mmol，1.0equiv)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加化合物(0.195g，1.604mmol，1.5equiv)、Na2CO3(0.23g，2.14mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.062g，0.054mmol，0.05equiv)。在100℃下将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-2％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的6-甲氧基-2-苯基烟酸(0.07g，28.6％产率)。
LCMS 230[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89(br.s.,1H),8.17(d,J＝6.58Hz,3H),7.67(d,J＝7.45Hz,1H),7.38-7.60(m,3H),4.04(s,3H)。
化合物30c.向6-甲氧基-2-苯基烟酸(0.050g，0.218mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.073g，0.327mmol，1.5equiv)和TBTU(0.104g，0.327mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加N-甲基吗啉(0.1mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(10mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-甲氧基-2-苯基烟酰胺(0.015g，17.2％产率)。
LCMS 401.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(br.s.,1H),8.48(s,2H),7.79(d,J＝8.33Hz,2H),7.39(br.s.,2H),6.86(d,J＝8.33Hz,1H),5.10(d,J＝7.45Hz,1H),4.23(br.s.,1H),3.98-4.12(m,2H),3.94(s,3H),2.90(d,J＝8.33Hz,1H),2.70-2.86(m,1H),2.67(br.s.,1H)。
化合物30.向(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-甲氧基-2-苯基烟酰胺(0.035g,0.087mmol，1.0equiv)于DCM(5mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加溶解于DCM(5ml)中的TMSI(1ml)。在室温下将混合物搅拌10分钟，接着在50℃下搅拌2小时。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物浓缩至干，残余物用乙酸乙酯(15mL)稀释并用水(10mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相纯化法纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-羟基-2-苯基烟酰胺(0.003g，8.9％产率)。
LCMS 387.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.18(s,1H),8.37(d,J＝7.9Hz,1H),7.82(br.s.,2H),7.54(br.s.,2H),6.81(d,J＝7.0Hz,1H),5.12(d,J＝8.8Hz,1H),4.37-4.18(m,2H),4.18-3.95(m,1H),2.89(s,1H),2.81(d,J＝8.8Hz,2H)。
实例49
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(邻甲苯基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001191
化合物64a.向3-溴异烟酸乙酯(0.3g，1.38mmol，1.0equiv)于甲苯(15mL)和水(2mL)中的溶液中添加邻甲苯基硼酸(0.288g，1.66mmol，1.2equiv)、K2CO3(0.571g，4.14mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.08g，0.007mmol，0.05equiv)。在90℃下将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色液体状的3-(邻甲苯基)异烟酸甲酯(0.300g，95％)。
LCMS 228.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(d,J＝5.3Hz,1H),8.55(s,1H),7.77(d,J＝4.8Hz,1H),7.39-7.14(m,3H),7.08(d,J＝7.5Hz,1H),3.33(s,3H),2.02(s,3H)
化合物64b.向3-(邻甲苯基)异烟酸甲酯(0.4g，1.762mmol，1.0equiv)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.148g，3.524mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(邻甲苯基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 214.2[M+H]+
化合物64.向3-(邻甲苯基)异烟酸(0.100g，0.469mmol，1.0equiv)于DMF(4mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.105g，0.469mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.135g，0.704mmol，1.5equiv)和HOBt(0.096g，0.704mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.5mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(3％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(邻甲苯基)异烟酰胺(0.1g，55.5％产率)。
LCMS 315.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79-8.62(m,2H),8.46(s,1H),7.52(d,J＝4.4Hz,1H),7.25(br.s.,2H),7.22-7.03(m,2H),5.06(d,J＝8.8Hz,1H),4.14(d,J＝12.7Hz,1H),4.03-3.83(m,2H),2.87(d,J＝16.7Hz,1H),2.81-2.69(m,2H),2.09(s,3H)。
实例50
合成(R)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-环丙基异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001211
化合物37.向3-环丙基异烟酸(0.100g，060mmol，1.0eq)于DMF(05mL)中的搅拌的溶液中添加(R)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈.HCl(0.138g，0.60mmol，1.0eq)、HOBt(0.098g，0.72mmol，1.2eq)和EDC.HCl(0.138g，0.72mmol，1.2eq)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.2mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状的(R)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-环丙基异烟酰胺(0.005g，03％产率)。
LCMS 335[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-δ8.85(br.s.,1H),8.44(d,J＝4.4Hz,1H),8.24(s,1H),7.26(d,J＝4.8Hz,1H),5.12(d,J＝7.5Hz,1H),4.27(d,J＝12.3Hz,2H),4.21-3.99(m,2H),2.98-2.86(m,1H),2.81(d,J＝17.1Hz,1H),2.73(s,1H),2.21(br.s.,2H),1.24(br.s.,2H)。
实例51
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-4-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001212
化合物29a.向4-氯-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(0.200g，1.07mmol，1equiv)于二噁烷(4mL)和水(1mL)中的搅拌的溶液中添加Na2CO3(0.227g，2.14mmol，2equiv)和苯基硼酸(0.196g，1.61mmol，1.5equiv)。向反应混合物中充入氮气，持续15分钟。将Pd(PPh3)2Cl2(0.078g，0.11mmol，0.1equiv)添加至反应混合物中。再向反应混合物中充入氮气，持续15分钟。在100℃下，将反应混合物搅拌16小时。通过LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(25mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并减压浓缩，得到呈灰白色固体状的6-氧代-4-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(0.170g，69％产率)。
LCMS 230.3[M+H]+
化合物29b.向6-氧代-4-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(0.170g，0.74mmol，1equiv)于EtOH和水(1:1)(6mL)中的搅拌的溶液中添加NaOH(0.059g，1.48mmol，2equiv)。在50℃下，将混合物搅拌16小时。通过LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用1MHCl(10mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(25mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并减压浓缩。粗产物通过快速色谱法纯化(0-10％MeOH/DCM作为洗脱剂)，得到呈灰白色固体状的6-氧代-4-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(0.090g，56％产率)。
LCMS 216.2[M+H]+
化合物29.向6-氧代-4-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(0.080g，0.37mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.083g，0.37mmol，1.0equiv)、HOBt(0.059g，0.44mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.085g，0.44mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.112g，1.11mmol，3.0equiv)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(15mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过正相combi-flash色谱法纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-4-苯基-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(0.045g，31.25％产率)。
LCMS 387.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.39-11.70(m,1H),8.66(t,J＝5.9Hz,1H),7.64(s,1H),7.44-7.32(m,5H),6.29(s,1H),5.08(dd,J＝9.3,2.9Hz,1H),4.20(ddd,J＝16.0,11.6,4.4Hz,1H),4.01(dd,J＝19.7,8.6Hz,3H),2.96-2.70(m,2H),1.38-1.21(m,3H),1.16(s,1H)。
实例52
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯氧基异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001231
化合物97a.向3-溴异烟酸甲酯(1.0g，4.65mmol，1equiv)于DMF(10mL)中的搅拌的溶液中添加苯酚(0.437g，4.65mmol，1equiv)、CuI(1.762g，9.3mmol，2equiv)和Cs2CO3(3.03g，10.0mmol，2equiv)。在110℃下，将反应混合物加热18小时。通过LCMS检查反应进程。将反应混合物用水(20mL)稀释并添加数滴稀HCl，直至pH略呈酸性。用乙酸乙酯(50mL×2)萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体状的3-苯氧基异烟酸(0.200g，20％产率)。
LCMS:216.1[M+H]+
化合物97.向3-苯氧基异烟酸(0.140g，0.65mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.146g，0.65mmol，1.0equiv)、HOBt(0.105g，0.78mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.149g，0.78mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.197g，1.95mmol，3equiv)并在环境温度下将混合物搅拌16小时。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。用水(25mL×5)洗涤合并的有机萃取物。有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。所得粗产物通过正相combi-flash色谱法纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯氧基异烟酰胺(0.050g，19.9％产率)。
LCMS 387.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(t,J＝5.2Hz,1H),8.49(d,J＝4.9Hz,1H),8.25(s,1H),7.67(d,J＝4.9Hz,1H),7.43(t,J＝7.9Hz,2H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),5.10(dd,J＝9.3,3.0Hz,1H),4.29-3.98(m,4H),2.93-2.73(m,2H),1.23(d,J＝3.6Hz,1H)。
实例53
合成N-(2-((2R)-2-氰基-4,4-二氟环戊基)-2-氧代乙基)-3-(苯基氨基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001241
化合物102a.向3-溴异烟酸甲酯(1.0g，4.65mmol，1equiv)于甲苯(6mL)中的搅拌的溶液中添加苯胺(0.476g，5.12mmol，1.1equiv)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(0.431g，0.47mmol，0.1equiv)、xantphos(0.539g，0.93mmol，0.2equiv)和Cs2CO3(2.28g，6.98mmol，1.5equiv)。在微波中，在190℃下将所得反应混合物加热1小时。通过LCMS检查反应进程。将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗化合物通过正相combi-flash色谱法纯化，得到呈黄色半固体状的3-(苯基氨基)异烟酸甲酯(0.300g，28％产率)。
LCMS:229.2[M+H]+
化合物102b.向3-(苯基氨基)异烟酸甲酯(0.300g，1.31mmol，1equiv)于THF和水(1:1)(4mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.083g，1.97mmol，1.5equiv)。在环境温度下，将混合物搅拌16小时。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯萃取并减压浓缩水层并冻干，得到呈灰白色固体状的3-(苯基氨基)异烟酸(0.260g)。
LCMS 215.2[M+H]+
化合物102.向3-(苯基氨基)异烟酸(0.260g，1.21mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(1R)-4,4-二氟-2-甘氨酰基环戊烷-1-甲腈盐酸盐(0.272g，1.21mmol，1.0equiv)、HOBt(0.196g，1.45mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.278g，1.45mmol，1.2equiv)，并添加三乙胺(0.366g，3.63mmol，3equiv)并在环境温度下将混合物搅拌16小时。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(25mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过反相HPLC纯化，得到N-(2-((2R)-2-氰基-4,4-二氟环戊基)-2-氧代乙基)-3-(苯基氨基)异烟酰胺(0.004g，0.8％产率)。
LCMS 386.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.22-9.07(m,2H),8.64(s,1H),8.12(d,J＝5.0Hz,1H),7.58(d,J＝5.0Hz,1H),7.34(t,J＝7.7Hz,2H),7.22(d,J＝7.8Hz,2H),7.03(t,J＝7.4Hz,1H),5.13(dd,J＝9.4,2.9Hz,1H),4.36-4.25(m,1H),4.25-4.04(m,3H),3.00-2.74(m,2H),2.09(s,3H),1.24(s,1H)。
实例54
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1',2',3',6'-四氢-[3,4'-联吡啶]-4-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
Figure GDA0002789796510001251
化合物105a.向3-溴异烟酸乙酯(0.2g，0.925mmol，1.0equiv)于甲苯(8mL)和水(2mL)中的溶液中添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(0.429g，1.39mmol，1.5equiv)、K2CO3(0.255g，1.85mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh2)Cl2(0.033g，0.046mmol，0.05equiv)。在90℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色油状的3',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1',4(2'H)-二甲酸1'-(叔丁基)酯4-甲酯(0.130g，44.4％产率)。
LCMS 319.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65(d,J＝4.8Hz,1H),8.59-8.52(m,1H),7.63(d,J＝4.8Hz,1H),5.68(br.s.,1H),3.96(br.s.,2H),3.87-3.69(m,3H),3.52(br.s.,2H),2.27(br.s.,2H),1.53-1.25(m,9H),1.07(s,3H)。
化合物105b.向3',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1',4(2'H)-二甲酸1'-(叔丁基)酯4-甲酯(0.13g，0.408mmol，1.0equiv)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.020g，0.817mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。将浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(15mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的1'-(叔丁氧基羰基)-1',2',3',6'-四氢-[3,4'-联吡啶]-4-甲酸(定量产率)。
LCMS 305.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,J＝4.8Hz,2H),8.22(s,1H),7.17(d,J＝4.8Hz,1H),3.92(br.s.,2H),2.38(br.s.,2H),2.06(s,1H),2.04-1.92(m,1H),1.43(s,9H),1.06(s,2H)
化合物105c.向1'-(叔丁氧基羰基)-1',2',3',6'-四氢-[3,4'-联吡啶]-4-甲酸(0.100g，0.32mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.074g，0.32mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.092g，0.48mmol，1.5equiv)和HOBt(0.065g，0.48mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.5mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过反相纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)-3',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1'(2'H)-甲酸叔丁酯(0.020g，13.15％产率)。
LCMS 476.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(br.s.,1H),8.57(d,J＝4.8Hz,1H),8.52(s,1H),7.36(d,J＝5.3Hz,1H),5.83(br.s.,1H),5.09(br.s.,1H),4.25(d,J＝13.6Hz,2H),4.11(d,J＝5.3Hz,2H),3.94(br.s.,2H),3.48(br.s.,2H),2.81(d,J＝17.5Hz,3H),2.67(br.s.,2H),2.35(d,J＝14.5Hz,3H),1.43(s,9H)。
化合物105·TFA.在室温下，向N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(环己-2-烯-1-基)异烟酰胺(0.020g，0.042mmol，1.0equiv)于DCM(2mL)中的搅拌的溶液中添加TFA(0.02mL，0.126mmol，3.0equiv)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，将混合物浓缩至干，获得粗品。所得粗产物通过反相纯化法纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-1',2',3',6'-四氢-[3,4'-联吡啶]-4-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(0.005g，31.72％产率)。
LCMS 376.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(br.s.,1H),8.54(d,J＝4.4Hz,1H),8.47(s,1H),7.33(d,J＝4.4Hz,2H),5.85(br.s.,1H),5.11(d,J＝8.3Hz,1H),4.26(d,J＝12.3Hz,1H),4.15-4.00(m,2H),3.31(br.s.,4H),2.98-2.82(m,3H),2.79(br.s.,1H),2.24(br.s.,2H),1.80(br.s.,3H),1.75(s,2H)。
实例55
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(5-甲基呋喃-2-基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001271
化合物106a.向3-溴异烟酸甲酯(0.300g，1.4mmol，1.0equiv)于二噁烷(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加(5-甲基呋喃-2-基)硼酸(0.212g，1.68mmol，1.2equiv)、Na2CO3(0.297g，2.8mmol，2.0equiv)并向反应混合物中充入氮气，持续15分钟，并添加二氯双(三苯基膦)钯(II)(0.098g，0.14mmol，0.1equiv)。再向反应混合物中充入氮气，持续15分钟。在100℃下，将混合物搅拌2小时。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×2)洗涤。分离水层并经冻干仪冷冻干燥，得到3-(5-甲基呋喃-2-基)异烟酸(0.250g)。
LCMS 204.2[M+H]+
化合物106.向3-(5-甲基呋喃-2-基)异烟酸(0.100g，0.5mmol，1.0equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.112g，0.5mmol，1.0equiv)、HOBt(0.081g，0.6mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.115g，0.6mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.151g，1.5mmol，3.0equiv)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(25mL×6)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(5-甲基呋喃-2-基)异烟酰胺(0.010g，5.04％产率)。
LCMS 375.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(t,J＝5.8Hz,1H),8.92(s,1H),8.52(d,J＝4.9Hz,1H),7.32(d,J＝4.9Hz,1H),6.90(d,J＝3.4Hz,1H),6.21(d,J＝3.4Hz,1H),5.13(dd,J＝9.3,2.8Hz,1H),4.29(ddd,J＝16.0,11.2,4.1Hz,1H),4.16(d,J＝5.8Hz,2H),4.12-4.03(m,1H),2.97-2.74(m,2H),2.34(s,3H),1.24(s,1H)。
实例56
合成(S)-6'-氨基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-[3,3'-联吡啶]-4-甲酰胺甲酸盐
Figure GDA0002789796510001281
化合物107a.向3-溴异烟酸(0.500g，2.34mmol，1equiv)于二噁烷(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加Na2CO3(0.496g，4.68mmol，2equiv)和5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(0.618g，2.81mmol，1.2equiv)。向反应混合物中充入氮气，持续15分钟。将双(三苯基膦)氯化钯(0.164g，0.234mmol，0.1equiv)添加至反应混合物中。再向反应混合物中充入氮气，持续15分钟。在120℃下，将反应混合物加热16小时。通过LCMS监测反应进程。反应完成后，用水(35mL)稀释反应混合物。将水相用乙酸乙酯(20mL×2)洗涤并在冻干仪上冷冻干燥，得到6'-氨基-[3,3'-联吡啶]-4-甲酸(0.600g，定量产率)。
LCMS 216.2[M+H]+
化合物107.向6'-氨基-[3,3'-联吡啶]-4-甲酸(0.200g，0.93mmol，1equiv)于DMF(4mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.208g，0.93mmol，1.0equiv)、HOBt(0.151g，1.12mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.214g，1.12mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.282g，2.79mmol，3.0equiv)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(15mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，得到(S)-6'-氨基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-[3,3'-联吡啶]-4-甲酰胺甲酸盐(0.003g，0.8％产率)。
LCMS 387.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(t,J＝5.8Hz,1H),8.64-8.55(m,2H),8.18(s,1H),8.03(s,1H),7.55(d,J＝8.6Hz,1H),7.38(d,J＝4.9Hz,1H),6.46(d,J＝8.6Hz,1H),6.11(s,2H),5.13-5.03(m,1H),4.30-4.17(m,1H),4.05(dt,J＝21.0,8.8Hz,3H),3.95-3.80(m,1H),3.26(s,3H),2.94-2.72(m,2H),2.13(d,J＝16.6Hz,1H),1.23(s,1H),1.12(d,J＝16.9Hz,1H)。
实例57
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(喹啉-4-基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001291
化合物51a.向3-溴异烟酸乙酯(0.3g，1.38mmol，1.0equiv)于甲苯(15mL)和水(2mL)中的溶液中添加喹啉-4-基硼酸(0.288g，1.66mmol，1.2equiv)、K3PO4.3H2O(0.887g，4.14mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(OAc)(0.032g，0.139mmol，0.1equiv)和三环己基膦(0.053g，0.139mmol，0.1equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(100％乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的3-(喹啉-4-基)异烟酸甲酯(0.230g，62.7％产率)。
LCMS 265.3[M+H]+
化合物51b.向3-(喹啉-4-基)异烟酸甲酯(0.21g，0.795mmol，1.0equiv)于THF(7mL)和水(7mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.067g，1.59mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(喹啉-4-基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 251.2[M+H]+
化合物51.向3-(喹啉-4-基)异烟酸(0.12g，0.48mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.108g，0.48mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.138g，0.72mmol，1.5equiv)和HOBt(0.097g，0.72mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(1mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(喹啉-4-基)异烟酰胺(0.040g，19.8％产率)。
LCMS 422.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.00(br.s.,1H),8.92-8.81(m,2H),8.65(s,1H),8.08(d,J＝8.3Hz,1H),7.78(d,J＝4.8Hz,1H),7.70(d,J＝4.8Hz,1H),7.55(br.s.,2H),7.47(d,J＝4.4Hz,1H),5.03(d,J＝8.3Hz,1H),4.11(br.s.,1H),3.96-3.74(m,3H),2.82(br.s.,1H),2.74(d,J＝9.2Hz,1H)
实例58
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001301
化合物109a.向4-氯-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(1g，5.3191mmol，1.0equiv)于二噁烷(30mL):水(10mL)中的溶液中添加化合物4-氟苯基)硼酸(0.82g，5.8510mmol，1.1equiv)、Na2CO3(1.12g，10.63mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物，持续10分钟，随后添加Pd(PPh3)2Cl2(0.187g，0.2659mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。用水稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取，有机层经Na2SO4干燥，并减压浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的化合物4-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯。(1.2g，81.34％)。
LCMS 247.8[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.22(br.s.,1H),8.05(s,1H),7.65-7.58(m,1H),7.56(d,J＝6.6Hz,1H),7.35-7.26(m,1H),7.22-7.14(m,1H),6.21(s,1H),3.61-3.52(m,3H)
化合物109b.向化合物4-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(1.2g，4.8582mmol，1.0equiv)于THF(30mL)和水(10mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.225g，9.7165mmol，2.0equiv)。在80℃下，将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的化合物4-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(1gm，88％)。
LCMS:234.0[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.07(s,1H)7.63(s,1H),7.34(dd,J＝5.7,8.3Hz,2H),7.11(t,J＝9.0Hz,2H),6.03(s,1H),3.53(s,1H)。
化合物109.10分钟后，向4-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(0.4gm，1.7167mmol，1.0equiv)、HATU(0.278gm，2.064mmol，1.2equiv)于DMF(10ml)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.464gm，2.06mmol，1.2equiv)并将反应混合物搅拌10分钟，随后逐滴添加Et3N(0.5ml，3.4334mmol，3equiv)，在室温下搅拌反应16小时。通过LCMS和TLC监测反应进程，通过将冷水(50mL)添加至反应块中进行处理，并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取，并收集所有的有机层，用水洗涤三次，并用碳酸氢钠洗涤一次，并用盐水溶液洗涤一次。有机层经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，粗品通过反相色谱法纯化，得到所希望的产物(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-4-(4-氟苯基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(100mg，20％)。
LCMS:405.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.93(br.s.,1H),8.69(br.s.,1H),7.64(s,1H),7.44(br.s.,2H),7.17(t,J＝8.8Hz,2H),6.30(s,1H),5.08(br.s.,1H),4.20(d,J＝11.0Hz,2H),3.99-3.89(m,2H),2.80(d,J＝13.6Hz,2H)。
实例59
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001311
化合物110a.向3-溴异烟酸乙酯(0.1g，0.463mmol，1.0equiv)于甲苯(5mL)中的溶液中添加3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异噁唑(0.126g，0.926mmol，2equiv)、K2CO3(0.192g，1.39mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.027g，0.023mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-30％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色液体状的3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)异烟酸甲酯(0.105g，97.2％产率)。
LCMS 233.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(d,J＝4.8Hz,1H),8.65(s,1H),7.85(d,J＝5.3Hz,1H),3.32(s,3H),2.23(s,3H),2.09-1.90(m,3H)。
化合物110b.向3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)异烟酸酯(0.120g，0.518mmol，1.0equiv)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.2H2O(0.043g，1.034mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 219.2[M+H]+
化合物110.向3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)异烟酸(0.1g，0.46mmol，1.0equiv)于DMF(4mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.103g，0.46mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.132g，0.69mmol，1.5equiv)和HOBt(0.093g，0.69mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.5mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)异烟酰胺(0.055g，30.7％产率)。
LCMS 390.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85(d,J＝5.7Hz,1H),8.75(d,J＝4.8Hz,1H),8.56(s,1H),7.56(d,J＝4.8Hz,1H),5.10-4.98(m,1H),4.27-4.18(m,1H),4.11-3.95(m,2H),2.95-2.74(m,3H),2.25(s,3H),2.06(s,3H)。
实例60
合成(S)-3-(4-氯-3-氟苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001321
化合物111a.向3-溴异烟酸乙酯(1)(0.2g，0.926mmol，1.0equiv)于甲苯(10mL)中的溶液中添加3,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)异噁唑(2)(0.242g，1.39mmol，1.5equiv)、K2CO3(0.383g，2.79mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.053g，0.046mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的3-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)异烟酸甲酯(3)(0.250g，98％产率)。
LCMS 266.1[M+H]+
化合物111b.向甲基3-(4-氯-3-氟苯基)异烟酸(0.25g，0.94mmol，1.0equiv)于THF(8mL)和水(8mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.080g，1.89mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。将浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(4-氯-3-氟苯基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 252.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47-8.35(m,2H),7.67-7.51(m,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,1H),7.19(d,J＝4.8Hz,1H)。
化合物111.向3-(4-氯-3-氟苯基)异烟酸(0.12g，0.48mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.108g，0.48mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.138g，0.717mmol，1.5equiv)和HOBt(0.097g，0.717mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(1mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的(S)-3-(4-氯-3-氟苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺(0.120g，59.1％产率)。
LCMS 423.5[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.04(t,J＝5.9Hz,1H),8.76-8.63(m,2H),7.65-7.54(m,2H),7.49(d,J＝4.8Hz,1H),7.41(d,J＝7.0Hz,1H),5.09(br.s.,1H),4.22(d,J＝11.8Hz,1H),4.12-3.96(m,2H),3.92(d,J＝5.3Hz,1H),2.97-2.76(m,2H)。
实例61
合成(S)-3-(3-(叔丁基)苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001341
化合物112a.向1-溴-3-(叔丁基)苯(0.2g，0.938mmol，1.0equiv)于DMSO(10mL)中的溶液中添加4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(0.356g，1.41mmol，1.5equiv)、KOAc(0.184g，1.876mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.055g，0.047mmol，0.05equiv)。在100℃下将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的2-(3-(叔丁基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.230g，94.26％产率)。
LCMS 261.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.67(s,1H),7.57-7.45(m,2H),7.32(t,J＝7.5Hz,1H),1.44(d,J＝6.6Hz,1H),1.39-1.23(m,9H),1.23-1.04(m,12H)
化合物112b.向2-(3-(叔丁基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.216g，0.833mmol，1.2equiv)于甲苯(15mL)中的溶液中添加3-溴异烟酸乙酯(0.150g，0.649mmol，1.0equiv)、K2CO3(0.287g，2.08mmol，3.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)4(0.040g，0.035mmol，0.05equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色半固体状的3-(3-(叔丁基)苯基)异烟酸甲酯(0.150g，80.6％)。
LCMS 270.5[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75-8.66(m,2H),7.74(d,J＝4.8Hz,1H),7.66(d,J＝4.8Hz,1H),7.51-7.39(m,2H),7.24(d,J＝7.5Hz,1H),3.66(s,3H),1.30(s,9H)。
化合物112c.向3-(3-(叔丁基)苯基)异烟酸甲酯(0.150g，0.555mmol，1.0equiv)于THF(4mL)和水(4mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.047g，1.11mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(3-(叔丁基)苯基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 256.3[M+H]+
化合物112.向3-(3-(叔丁基)苯基)异烟酸(0.1g，0.392mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.89g，0.392mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.113g，0.59mmol，1.5equiv)和HOBt(0.080g，0.59mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.5mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH in DCM作为洗脱剂)，随后通过制备型纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-3-(3-(叔丁基)苯基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺(0.028g，16.86％产率)。
LCMS 427.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(br.s.,1H),8.76-8.56(m,2H),7.50(s,1H),7.48-7.40(m,2H),7.40-7.29(m,2H),5.14-5.04(m,1H),4.21(br.s.,1H),4.03(d,J＝2.6Hz,2H),2.87(br.s.,1H),2.79(d,J＝14.5Hz,1H),2.67(br.s.,1H)。
实例62
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-乙氧基异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001351
化合物113.向3-乙氧基异烟酸(0.05g，0.299mmol，1.0equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.067g，0.299mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.086g，0.488mmol，1.5equiv)和HOBt(0.06g，0.488mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.5mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-乙氧基异烟酰胺(0.07g，30.7％产率)。
LCMS 339.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.71(br.s.,1H),8.59(s,1H),8.34(d,J＝4.8Hz,1H),7.70(d,J＝4.8Hz,1H),5.15(dd,J＝2.9,9.0Hz,1H),4.36(q,J＝7.0Hz,2H),4.30-4.12(m,3H),4.12-3.98(m,1H),2.90-2.68(m,2H),1.46(t,J＝6.8Hz,3H)。
实例63
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-((4-氟苯基)氨基)异烟酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
Figure GDA0002789796510001361
化合物114a.向3-溴异烟酸甲酯(0.200g，0.93mmol，1equiv)于甲苯(3mL)中的搅拌的溶液中添加4-氟苯胺(0.103g，0.93mmol，1.0equiv)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(0.043g，0.046mmol，0.05equiv)、xantphos(0.053g，0.093mmol，0.1equiv)和Cs2CO3(0.456g，1.4mmol，1.5equiv)。在微波中，在190℃下将所得反应混合物加热1小时。通过LCMS检查反应进程。将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。粗化合物通过正相combi-flash色谱法纯化，得到呈灰白色固体状的3-((4-氟苯基)氨基)异烟酸甲酯(0.120g，53％产率)。
LCMS:246.8[M+H]+
化合物114b.向3-((4-氟苯基)氨基)异烟酸甲酯(0.350g，1.4mmol，1equiv)于THF和水(1:1)(6mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.089g，2.1mmol，1.5equiv)。在环境温度下将混合物搅拌16小时。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯萃取并减压浓缩水层，并冻干，得到呈灰白色固体状的3-((4-氟苯基)氨基)异烟酸(0.350g，定量产率)。
LCMS 233.2[M+H]+
化合物114.向3-((4-氟苯基)氨基)异烟酸(0.350g，1.5mmol，1equiv)于DMF(4mL)中的搅拌的溶液中添加(1R)-4,4-二氟-2-甘氨酰基环戊烷-1-甲腈盐酸盐(0.337g，1.5mmol，1.0equiv)、HOBt(0.243g，1.8mmol，1.2equiv)、EDC.HCl(0.343g，1.8mmol，1.2equiv)，并添加三乙胺(0.455g，4.5mmol，3equiv)，并在环境温度下将混合物搅拌16小时。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(25mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，该粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈TFA盐形式的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-((4-氟苯基)氨基)异烟酰胺(0.003g，0.5％产率)。
LCMS 404.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.22(t,J＝6.0Hz,1H),9.12(s,1H),8.58(s,1H),8.50(q,J＝15.7Hz,1H),8.15(s,1H),7.68-7.63(m,1H),7.32-7.14(m,4H),5.12(dd,J＝9.3,2.9Hz,1H),4.30(ddd,J＝15.9,11.5,4.6Hz,1H),4.20-4.06(m,3H),2.92-2.73(m,2H),2.33-2.25(m,1H),1.56-1.49(m,1H),1.23(s,1H),0.87(d,J＝12.4Hz,1H)。
实例64
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(4-氟苯氧基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001371
化合物35a.向3-溴吡啶-4-甲酸(1.0g，5.0mmol，1equiv)于DMF(10mL)中的搅拌的溶液中添加4-氟苯酚(0.560g，5.0mmol，1equiv)、CuI(1.90g，10.0mmol，2equiv)和Cs2CO3(3.260g，10.0mmol，2equiv)。在110℃下，将反应混合物加热18小时。通过LCMS检查反应进程。将反应混合物用水(20mL)稀释并添加数滴稀HCl，直至pH略呈酸性。用乙酸乙酯(50mL×2)萃取水层。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到3-(4-氟苯氧基)吡啶-4-甲酸(0.200g，18％产率)。
LCMS:234.2[M+H]+
化合物35.向3-(4-氟苯氧基)吡啶-4-甲酸(0.200g，0.86mmol，1equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.194g，0.86mmol，1.0equiv)、HOBt(0.140g，1.03mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.197g，1.03mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.260g，2.58mmol，3equiv)并在环境温度下将混合物搅拌16小时。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(10mL)稀释并用乙酸乙酯(40mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(25mL×5)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。所得粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(4-氟苯氧基)异烟酰胺(0.040g，11.5％产率)。
LCMS 405.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(t,J＝5.6Hz,1H),8.48(d,J＝4.8Hz,1H),8.24(s,1H),7.65(d,J＝5.0Hz,1H),7.26(t,J＝8.7Hz,2H),7.18(dd,J＝9.0,4.5Hz,2H),5.10(dd,J＝8.9,3.0Hz,1H),4.30-3.98(m,4H),2.93-2.72(m,2H)。
实例65
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(苯基硫基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001381
化合物115a.向3-溴异烟酸甲酯(0.2g，0.93mmol，1.0equiv)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加苯硫醇(0.204g，1.85mmol，2.0equiv)、KOAc(0.184g，1.876mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd2(dba)3(0.042g，0.046mmol，0.05equiv)、Xanthphose(0.026g，0.046mmol，0.05equiv)并所得反应混合物)。在90℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈黄色油状的3-(苯基硫基)异烟酸甲酯(0.100g，44.4％产率)。
LCMS 246.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(br.s.,1H),8.76-8.56(m,2H),7.50(s,1H),7.48-7.40(m,2H),7.40-7.29(m,2H),5.14-5.04(m,1H),4.21(br.s.,1H),4.03(d,J＝2.6Hz,2H),2.87(br.s.,1H),2.79(d,J＝14.5Hz,1H),2.67(br.s.,1H)。
化合物115b.向所得3-(苯基硫基)异烟酸甲酯(0.150g，0.614mmol，1.0equiv)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.052g，1.23mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(苯基硫基)异烟酸酯(定量产率)。
LCMS 232.3[M+H]+
化合物115.向3-(苯基硫基)异烟酸酯(0.15g，0.65mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.146g，0.65mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.190g，0.97mmol，1.5equiv)和HOBt(0.132g，0.97mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.3mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过制备型纯化法进行纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(苯基硫基)异烟酰胺(0.010g，3.8％产率)。
LCMS 403.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.03(br.s.,1H),8.52(d,J＝4.8Hz,1H),8.18(s,1H),7.56-7.32(m,6H),5.13(d,J＝7.5Hz,1H),4.29(br.s.,1H),4.24-4.05(m,2H),2.82(d,J＝14.9Hz,3H)。
实例66
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-4-(喹啉-4-基)-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001391
化合物116a.向4-氯-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(0.2g，1.07mmol，1.0equiv)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加喹啉-4-基硼酸(0.22g，1.26mmol，2.0equiv)、K3PO4.3H2O(0.455g，2.14mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd2(dba)3(0.024g，0.11mmol，0.1equiv)、三环己基膦(0.030g，0.11mmol，0.1equiv)。在140℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用含10％甲醇的DCM(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(5甲醇/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的6-氧代-4-(喹啉-4-基)-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(3)(0.058g，19.4％)。
LCMS 281.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.47(br.s.,1H),8.91(d,J＝4.4Hz,1H),8.23(s,1H),8.11-7.96(m,1H),7.84-7.70(m,1H),7.64-7.43(m,2H),7.35(d,J＝4.4Hz,1H),6.30(s,1H),3.35(s,3H)。
化合物116b.向所得6-氧代-4-(喹啉-4-基)-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(0.115g，0.412mmol，1.0equiv)于THF(4mL)和水(4mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.026g，0.616mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的6-氧代-4-(喹啉-4-基)-1,6-二氢吡啶-3-甲酸酯(定量产率)。
LCMS 267.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.54(d,J＝17.1Hz,1H),8.80(d,J＝4.4Hz,1H),8.05-7.86(m,2H),7.67(t,J＝7.2Hz,1H),7.58(d,J＝8.3Hz,1H),7.21(d,J＝4.4Hz,1H),5.98(s,1H)
化合物116.向6-氧代-4-(喹啉-4-基)-1,6-二氢吡啶-3-甲酸酯(0.1g，0.38mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.085g，0.38mmol，1.0equiv)、HATU(0.286g，0.754mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加DIPEA(0.3mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过制备型纯化法纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-4-(喹啉-4-基)-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(0.045g，27.12％产率)。
LCMS 438.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.24(br.s.,1H),8.86(br.s.,1H),8.59(br.s.,1H),8.03(d,J＝8.3Hz,1H),7.94(br.s.,1H),7.74(br.s.,1H),7.67(d,J＝7.9Hz,1H),7.60-7.45(m,1H),7.33(d,J＝4.4Hz,1H),6.29(br.s.,1H),4.98(br.s.,1H),4.05(d,J＝14.9Hz,1H),3.89-3.73(m,2H),2.83-2.60(m,3H)。
实例67
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(吡啶-3-基氨基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001401
化合物117a.向3-溴异烟酸甲酯(0.5g，2.315mmol，1.0equiv)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加吡啶-3-胺(0.218g，2.315mmol，1.0equiv)、Cs2CO3(1.5g，4.63mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd2(dba)3(0.106g，0.116mmol，0.05equiv)、Xanthphose(0.134g，0.232mmol，0.1equiv)并所得反应混合物)。在120℃下,将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(3％甲醇/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈深褐色液体状的3-(吡啶-3-基氨基)异烟酸甲酯(0.170g，32.07％)。
LCMS 230.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.88(s,1H),8.57-8.44(m,2H),8.29(d,J＝3.5Hz,1H),8.13(d,J＝5.3Hz,1H),7.79-7.62(m,2H),7.39-7.29(m,1H),3.88(s,3H)。
化合物117b.向所得3-(吡啶-3-基氨基)异烟酸甲酯(0.170g，0.742mmol，1.0equiv)于THF(4mL)和水(4mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.048g，1.114mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(吡啶-3-基氨基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 216.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.84(s,1H),8.55(s,1H),8.39(d,J＝2.6Hz,1H),8.10(d,J＝3.9Hz,1H),7.96(d,J＝4.8Hz,1H),7.70(d,J＝4.8Hz,1H),7.65-7.55(m,1H),7.28(dd,J＝4.8,8.3Hz,1H)。
化合物117.向3-(吡啶-3-基氨基)异烟酸酯(0.10g，0.465mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.104g，0.465mmol，1.0equiv)、HATU(0.353g，0.93mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加DIPEA(0.35mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(10％MeOH/DCM作为洗脱剂)，随后通过制备型纯化法进行纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(吡啶-3-基氨基)异烟酰胺(0.072g，40％产率)。
LCMS 387.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.17(br.s.,1H),9.09(s,1H),8.62(s,1H),8.45(br.s.,1H),8.19(br.s.,2H),7.64(d,J＝7.5Hz,1H),7.58(d,J＝4.8Hz,1H),7.38-7.22(m,1H),5.12(d,J＝7.0Hz,1H),4.31(d,J＝11.4Hz,1H),4.18-3.98(m,2H),2.90(br.s.,1H),2.82(d,J＝15.3Hz,2H)。
实例68
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(哌啶-4-基氨基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001421
化合物118a.向3-溴异烟酸甲酯(0.500gm，2.3148mmol，1equiv)和4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.463gm，2.3148mmol，1equiv)和CS2CO3(1.5gm，4.6296mmol，2equiv)于二噁烷(15mL)中的搅拌的溶液中。用氮气吹扫所得混合物10分钟，随后添加Pd2(dba)3(0.106gm，0.1157mmol，0.05equiv)和xantphos(0.134gm，0.2314mmol，0.1equiv)，再用氮气吹扫10分钟。在120℃下，将反应混合物加热过夜。通过LCMS监测反应进程。将反应混合物用水(30mL)稀释，用EtOAc(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，得到粗品，该粗品通过快速色谱法纯化，得到呈白色固体状的3-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)异烟酸甲酯(400mg，51.49％)。
LCMS:336.3[M+H]+`
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(s,1H),7.60-7.51(m,2H),7.27(d,J＝7.9Hz,1H),3.00(m.,4H),2.04-1.88(s,3H),1.44-1.35(s,9H),1.31-1.12(m,4H)。
化合物118b.向化合物3-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)异烟酸甲酯(0.400gm，1.1904mmol，1equiv)于THF(8mL)和水(4mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.058gm，2.3809mmol，2equiv)。在80℃下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的化合物3-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)异烟酸(330mg，78％产率)。
LCMS:322.2[M+H]+
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ11.70(s,1H),8.41(s,1H),7.60-7.51(m,2H),7.27(d,J＝7.9Hz,1H),3.00(m.,4H),1.44-1.35(s,9H),1.31-1.12(m,4H)。
化合物118c.10分钟后，向3-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)异烟酸(0.200gm，0.6211mmol，1equiv)、HATU(0354gm，0.9316mmol，1.5equiv)于DMF(10ml)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.168gm，0.7453mmol，1.2equiv)并将反应混合物搅拌10分钟，随后逐滴添加DIPEA(0.2ml，0.9316mmol，1.5equiv)，在室温下搅拌反应16小时。通过LCMS和TLC监测反应进程，通过添加水(30ml)进行处理并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用水(4×20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得到呈褐色固体状的(S)-4-((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(220mg，71.89％产率)。
LCMS:493.3[M+H]+
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ8.95(br.s.,1H),8.28(s,1H),7.86(d,J＝5.3Hz,1H),7.51-7.38(m,2H),5.76(s,1H),4.12-4.02(m,4H),3.81(d,J＝13.2Hz,2H),3.50(m,1H),2.05-1.93(m,4H),1.40(s,9H),1.28-1.10(m,4H)。
化合物118.向(S)-4-((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)吡啶-3-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.190gm，0.3861mmol，1equiv)于DCM(5mL)中的搅拌的溶液中添加三氟乙酸(1.5mL)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并将粗品通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(哌啶-4-基氨基)异烟酰胺(60mg，39.73％产率)。
LCMS:393.3[M+H]+
1H NMR:(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.95(br.s.,1H),8.28(s,1H),7.86(d,J＝5.3Hz,1H),7.51-7.38(m,2H),5.76(s,1H),4.12-4.02(m,4H),3.81(d,J＝13.2Hz,2H),3.50(m,1H),2.05-1.93(m,4H),1.28-1.10(m,4H)。
实例69
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(喹啉-4-基氨基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001431
化合物119a.向3-溴异烟酸甲酯(0.5g，2.315mmol，1.0equiv)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加吡啶-3-胺(0.334g，2.315mmol，1.0equiv)、Cs2CO3(1.5g，4.63mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd2(dba)3(0.106g，0.116mmol，0.05equiv)、Xanthphose(0.134g，0.232mmol，0.1equiv)并所得反应混合物)。在120℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(喹啉-4-基氨基)异烟酸(定量产率)。
LCMS 266.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.66(s,1H),8.93(s,1H),8.58(d,J＝5.3Hz,1H),8.28-8.18(m,1H),8.14(d,J＝4.8Hz,1H),7.91(d,J＝8.8Hz,1H),7.79(d,J＝4.8Hz,1H),7.72(t,J＝7.0Hz,1H),7.58(t,J＝7.2Hz,1H),7.45-7.33(m,1H),6.76(br.s.,1H)。
化合物119.向3-(喹啉-4-基氨基)异烟酸(0.10g，0.377mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.085g，0.377mmol，1.0equiv)、HATU(0.286g，0.754mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加DIPEA(0.2mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL×5)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过制备型纯化法纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(喹啉-4-基氨基)异烟酰胺(0.004g，2.4％产率)。
LCMS 437.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.76(br.s.,1H),8.48(s,2H),7.79(d,J＝8.33Hz,2H),7.39(br.s.,2H),6.86(d,J＝8.33Hz,1H),5.10(d,J＝7.45Hz,1H),4.23(br.s.,1H),3.98-4.12(m,2H),3.94(s,3H),2.90(d,J＝8.33Hz,1H),2.70-2.86(m,1H),2.67(br.s.,1H)。
实例70
合成(S)-3-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
Figure GDA0002789796510001451
化合物120a.向3-溴异烟酸甲酯(0.200gm，0.925mmol，1.0equiv)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(0.185gm，0.925mmol，1.0equiv)和CS2CO3(0.601gm，1.85mmol，2.0equiv)于二噁烷(5mL)中的搅拌的溶液中。用氮气吹扫所得混合物10分钟，随后添加d2(dba)3(0.042gm，0.046mmol，0.05equiv)和xantphos(0.053gm，0.092mmol，0.1equiv)，再用氮气吹扫10分钟。在120℃下，将反应混合物加热过夜。通过LCMS监测反应进程。将反应混合物用水(30mL)稀释，用EtOAc(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，得到粗品，该粗品通过柱色谱法纯化，得到呈黄色半固体状的3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)异烟酸甲酯(0.120g，38％产率)。
LCMS:336.5[M+H]+`
化合物120b.向化合物3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)异烟酸甲酯(0.100gm，0.298mmol，1.0equiv)于THF(3mL)和水(2mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.014gm，0.597mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈白色固体状的3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)异烟酸锂盐(0.120g，定量产率)。
LCMS:322.2[M+H]+
化合物120c.10分钟后，向3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)异烟酸锂盐(0.070gm，0.213mmol，1.0equiv)、HATU(0.162gm，0.426mmol，2.0equiv)于DMF(3ml)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.048gm，0.213mmol，1.0equiv)并将反应混合物搅拌10分钟，随后逐滴添加DIPEA(0.082g，0.640mmol，3.0equiv)，在室温下搅拌反应16小时。通过LCMS和TLC监测反应进程，通过添加水(30ml)进行处理并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。将合并的有机层用水(4×20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得到呈粗产物的(S)-(1-(4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(0.110g)，该粗产物直接用于下一步骤。
LCMS:493.3[M+H]+
化合物120·TFA.向(S)-(1-(4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨甲酰基)吡啶-3-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(0.110gm，0.223mmol，1.0equiv)于DCM(3mL)中的搅拌的溶液中添加三氟乙酸(1.0mL)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。浓缩反应混合物并将粗品通过反相HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的(S)-3-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)异烟酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(0.015g)。
LCMS:393.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(d,J＝5.7Hz,1H),8.50(br.s.,1H),8.34(d,J＝4.8Hz,1H),7.93(br.s.,2H),7.49(d,J＝4.8Hz,1H),7.11(s,1H),5.10(d,J＝6.6Hz,1H),4.22-4.11(m,2H),3.51-3.35(m,3H),3.19(br.s.,1H),3.04-2.75(m,4H),1.97(d,J＝11.8Hz,2H),1.71(d,J＝11.4Hz,2H),1.55(br.s.,1H),0.94-0.77(m,2H)
实例71
合成(S)-4-苯甲基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺
Figure GDA0002789796510001461
化合物121a.向4-氯-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(0.250g，1.34mmol，1.0equiv)于二噁烷(4ml)和水(4ml)中的正在搅拌的溶液中添加Na2CO3(0.284g，2.68mmol，2.0equiv)、2-苯甲基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.584g，2.68mmol，2.0equiv)和Pd(dppf)Cl2.DCM络合物(0.058g，0.07mmol，0.05equiv)。在微波中，在150℃下将反应混合物加热70分钟。通过TLC和LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机层。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过正相combi-flash色谱法纯化化合物，得到4-苯甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(0.030g)。
LCMS 244.0[M+H]+
化合物121b.向4-苯甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸甲酯(0.300g，1.23mmol，1equiv)于THF和水(1:1)(6mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.104g，2.47mmol，2.0equiv)。在60℃下，将混合物搅拌16小时。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(25mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL)萃取，并减压浓缩水层并冻干，得到4-苯甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(0.260g)。
LCMS 230.0[M+H]+
化合物121.向4-苯甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酸(0.500g，2.18mmol，1.0equiv)于DMF(17ml)中的正在搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.590g，2.62mmol，1.2equiv)、EDC.HCl(0.503g，2.62mmol，1.2equiv)、HOBT(0.354g，2.62mmol，1.2equiv)、DMAP(0.001g)并在室温下将反应混合物搅拌10分钟，随后添加TEA(0.661g，6.54mmol，3.0equiv)。在室温下，将反应混合物搅拌16小时。通过LCMS确定产物形成。将反应混合物用水(35mL)稀释并用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。用水(40mL×6)和盐水(60mL)洗涤合并的有机层。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过反相HPLC纯化化合物，得到呈灰白色固体状的纯(S)-4-苯甲基-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(0.070g，8.5％)。
LCMS 401.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.74(s,1H),8.55(t,J＝5.9Hz,1H),7.58(s,1H),7.33-7.15(m,5H),6.05(s,1H),5.09(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),4.26(dd,J＝14.5,9.9Hz,1H),4.16-3.95(m,5H),2.98-2.72(m,2H)。
实例72
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-苯基乙烯基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001471
化合物122a.向3-溴异烟酸甲酯(1.0g，4.6mmol，1.0equiv)于甲苯(10mL)中的溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-(1-苯基乙烯基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.06g，4.6mmol，1.0equiv)、K3O4P(1.96g，9.2mmol，2.0equiv)，随后添加乙酸钯(II)(0.104g，0.46mmol，0.1equiv)和三环己基膦(0.130g，0.46mmol，0.1equiv)。在100℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(150mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×2)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈褐色半固体状的3-(1-苯基乙烯基)异烟酸甲酯(0.560g，50％产率)。
LCMS 240[M+H]+
化合物122b.向3-(1-苯基乙烯基)异烟酸甲酯(0.100g，0.41mmol，1.0equiv)于THF(5mL)和水(5mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.020g，0.82mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(15mL)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈褐色固体状的3-(1-苯基乙烯基)异烟酸(0.140g，定量产率)。
LCMS 225.9[M+H]+
化合物122.向3-(1-苯基乙烯基)异烟酸(0.140g，0.44mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.100g，0.44mmol，1.0equiv)、HOBt(0.072g，0.53mmol，1.2equiv)和EDC.HCl(0.102g，0.53mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.2mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-苯基乙烯基)异烟酰胺(0.010g，07％产率)。
LCMS 397[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(t,J＝5.9Hz,2H),8.43(s,1H),7.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.29(br.s.,2H),7.25(br.s.,2H),5.77(s,1H),5.38(s,1H),5.07(d,J＝6.6Hz,1H),4.16(br.s.,1H),3.97(d,J＝9.2Hz,1H),3.86(br.s.,2H),2.78(d,J＝10.5Hz,2H),2.67(br.s.,1H)。
实例73
合成N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-苯基乙基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001491
化合物123a.在氮气下，向3-(1-苯基乙烯基)异烟酸甲酯(0.200g，0.83mmol，1.0equiv)于THF:甲醇(10:04mL)中的搅拌的溶液中添加TEA(0.425g，4.16mmol，5.0equiv)并添加碳载钯[Pd/C](0.045g，0.41mmol，0.5equiv)。用氢气吹扫反应混合物1小时。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，反应混合物通过硅藻土床过滤，并减压浓缩滤液，得到呈褐色半固体状的3-(1-苯基乙基)异烟酸甲酯(0.180g，89％产率)。
LCMS 241.28[M+H]+
化合物123b.向3-(1-苯基乙基)异烟酸甲酯(0.180g，0.74mmol，1.0equiv)于THF(15mL)和水(10mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH(0.036g，1.48mmol，2.0equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。将反应混合物用水(15mL)稀释并用乙酸乙酯(15mL)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈褐色固体状的3-(1-苯基乙基)异烟酸(0.210g，定量产率)。
LCMS 227.9[M+H]+
化合物123.向3-(1-苯基乙基)异烟酸(0.100g，0.43mmol，1.0equiv)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加DIPEA(0.3mL，1.29mmol，3.0equiv)和HATU(0.327g，0.86mmol，2.0equiv)。在氮气氛下，将混合物搅拌30分钟。将(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.099g，0.43mmol，1.0equiv)添加至上述混合物中并在室温下搅拌过夜。通过TLC和LCMS监测反应进程。反应完成后，将反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。将有机层用水(100mL)和盐水溶液(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到粗化合物，该粗化合物通过反相HPLC纯化，得到呈白色固体状的N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-(1-苯基乙基)异烟酰胺(游离碱)(0.005g，03％产率)。
LCMS 399[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(d,J＝8.8Hz,1H),8.56-8.38(m,2H),7.46-7.33(m,2H),7.29(t,J＝7.2Hz,3H),7.18(t,J＝7.0Hz,1H),5.14(d,J＝9.6Hz,1H),4.69-4.59(m,1H),4.29(br.s.,1H),4.22-3.99(m,3H),2.82(d,J＝18.4Hz,2H),1.63(t,J＝7.0Hz,3H)。
实例74
合成N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-((R)-1-苯基乙基)异烟酰胺和N-(2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-((S)-1-苯基乙基)异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001501
手性拆分方法：通过手性SFC将对映异构体分离(Chiralpak-IC，250×20mm，5μ)。用分析级液体二氧化碳和HPLC级含0.2％DEA的己烷和异丙醇进行等度程序。
LCMS 399.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.97(d,J＝8.8Hz,1H),8.56-8.38(m,2H),7.46-7.33(m,2H),7.29(t,J＝7.2Hz,3H),7.18(t,J＝7.0Hz,1H),5.14(d,J＝9.6Hz,1H),4.69-4.59(m,1H),4.29(br.s.,1H),4.22-3.99(m,3H),2.82(d,J＝18.4Hz,2H),1.63(t,J＝7.0Hz,3H)。
实例75
合成(S,E)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯乙烯基异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001502
化合物124a.向3-溴异烟酸乙酯(0.2g，0.925mmol，1.0equiv)于二噁烷(10mL)和水(1mL)中的溶液中添加(E)-4,4,5,5-四甲基-2-苯乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.319g，1.39mmol，1.5equiv)、K2CO3(0.26g，1.852mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)Cl2(0.033g，0.046mmol，0.05equiv)。在120℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-30％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈浅黄色固体状的(E)-3-苯乙烯基异烟酸甲酯(0.150g，67.87％产率)。
LCMS 240.1[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.12(s,1H),8.63(d,J＝5.4Hz,1H),7.65-7.77(m,2H),7.61(d,J＝7.3Hz,2H),7.38-7.49(m,2H),7.26-7.38(m,2H),3.83-3.96ppm(m,3H)。
化合物124b.向(E)-3-苯乙烯基异烟酸甲酯(0.1g，0.418mmol，1.0equiv)于THF(2mL)和水(2mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.021g，0.0.502mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈灰白色固体状的(E)-3-苯乙烯基异烟酸(定量产率)。
LCMS 226.2[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.83(s,1H),8.30(d,J＝4.9Hz,1H),7.86(d,J＝17.1Hz,1H),7.52(d,J＝7.3Hz,2H),7.38(t,J＝7.6Hz,2H),7.20-7.29(m,2H),7.18ppm(s,1H)。
化合物124.向(E)-3-苯乙烯基异烟酸(0.06g，0.266mmol，1.0equiv)于DMF(2mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.06g，0.266mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.077g，0.39mmol，1.5equiv)和HOBt(0.054g，0.39mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.2mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％甲醇/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈灰白色固体状的(S,E)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯乙烯基异烟酰胺(0.046g，43.8％产率)。
LCMS 397.2[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.14(s,1H),8.99(t,J＝5.9Hz,1H),8.53(d,J＝4.4Hz,1H),7.69(d,J＝7.3Hz,2H),7.63(s,1H),7.47(d,J＝16.1Hz,1H),7.33-7.44(m,3H),7.24-7.33(m,1H),5.10-5.24(m,1H),4.32(br.s.,1H),4.05-4.23(m,3H),2.94(br.s.,1H),2.80-2.91ppm(m,1H)。
实例76
合成(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯乙基异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001521
化合物125a.向3-溴异烟酸乙酯(0.2g，0.925mmol，1.0equiv)于二噁烷(10mL)和水(1mL)中的溶液中添加(E)-4,4,5,5-四甲基-2-苯乙烯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(0.319g，1.39mmol，1.5equiv)、K2CO3(0.26g，1.852mmol，2.0equiv)并用氮气吹扫所得反应混合物10分钟，随后添加Pd(PPh3)Cl2(0.033g，0.046mmol，0.05equiv)。在120℃下，将所得反应混合物加热过夜。通过LCMS确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯(100mL)洗涤。减压浓缩滤液。所得粗产物通过快速色谱法(0-30％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)纯化，得到呈浅黄色固体状的(E)-3-苯乙烯基异烟酸甲酯(0.150g，67.87％产率)。
LCMS 240.1[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.12(s,1H),8.63(d,J＝5.4Hz,1H),7.65-7.77(m,2H),7.61(d,J＝7.3Hz,2H),7.38-7.49(m,2H),7.26-7.38(m,2H),3.83-3.96ppm(m,3H)。
化合物125b.用氮气吹扫(E)-3-苯乙烯基异烟酸甲酯(0.13g，0.544mmol，1.0equiv)于甲醇(9mL)中的溶液10分钟，随后添加Pd/C(0.065g)。接着，用氢气吹扫所得反应混合物6小时。通过LCMS和NMR确定产物形成。反应完成后，混合物通过硅藻土床过滤，用甲醇(30mL)洗涤。减压浓缩滤液，得到呈透明油状的3-苯乙基异烟酸甲酯(0.1g，76.33％产率)。
LCMS 242.2[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.57(s,2H),7.27(d,J＝6.8Hz,1H),7.19(d,J＝6.8Hz,2H),3.88(s,3H),3.15(d,J＝8.8Hz,2H),2.83ppm(br.s.,2H)。
化合物125c.向3-苯乙基异烟酸甲酯(0.1g，0.415mmol，1.0equiv)于THF(4mL)和水(4mL)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.021g，0.5mmol，1.2equiv)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和1H NMR色谱法确定产物形成。浓缩反应混合物并用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(10mL×2)洗涤。分离水层并在冻干仪上冷冻干燥，得到呈灰白色固体状的3-苯乙基异烟酸(定量产率)。
LCMS 228.2[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.22(d,J＝4.9Hz,1H),7.18-7.33(m,5H),7.08-7.18(m,1H),2.96-3.11(m,2H),2.74-2.87ppm(m,2H)。
化合物125.向(E)-3-苯乙烯基异烟酸(0.05g，0.22mmol，1.0equiv)于DMF(3mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟-1-甘氨酰基吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.05g，0.22mmol，1.0equiv)、EDCI.HCl(0.063g，0.33mmol，1.5equiv)和HOBt(0.046g，0.33mmol，1.5equiv)。在室温下将混合物搅拌10分钟。添加三乙胺(0.2mL)并在室温下将混合物搅拌过夜。通过LCMS和TLC确定产物形成。反应完成后，将混合物用水(20mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(20mL×4)洗涤，经无水Na2SO4干燥并浓缩。所得粗产物通过快速色谱法(5％甲醇/DCM作为洗脱剂)纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-3-苯乙基异烟酰胺(0.050g，57.12％产率)。
LCMS 399.2[M+H]+
1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.92(br.s.,1H),8.40-8.53(m,2H),7.34(d,J＝4.4Hz,1H),7.21-7.29(m,4H),7.17(d,J＝6.4Hz,1H),5.12(d,J＝7.3Hz,1H),4.31(br.s.,1H),4.02-4.22(m,3H),2.96-3.08(m,2H),2.77-2.95ppm(m,4H)。
实例77
合成N-(1-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)-3-苯基异烟酰胺
Figure GDA0002789796510001531
化合物126a.向丙氨酸(2.0g，22.2mmol，1.0equiv.)于ACN(20mL)中的搅拌的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(5.35g，24.4mmol，1.1equiv)并搅拌10分钟。添加0.5M NaOH溶液(20mL)并在室温下将反应混合物搅拌过夜。通过NMR监测反应进程。用稀HCl(PH＝2.5)酸化反应物并用乙酸乙酯(100mL)萃取，并经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到(叔丁氧基羰基)丙氨酸(2.100g，白色固体)。
化合物126b.向(叔丁氧基羰基)丙氨酸(0.623g，3.2mmol，1.1equiv.)和HATU(2.20g，5.8mmol，2.0equiv.)于DMF(05mL)中的搅拌的溶液中添加(S)-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.500g，2.9mmol，1.0equiv)并搅拌10分钟。添加DIPEA(1.5mL，8.7mmol，3.0equiv.)并在室温下将反应混合物搅拌过夜。通过NMR和TLC监测反应进程。用冷水(200mL)稀释反应物并用乙酸乙酯(200mL×2)萃取。将合并的有机萃取物用水(200mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到(1-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.700g，呈浅褐色固体状)。
化合物126c.在0℃下，经10分钟向(1-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.700g，2.31mmol，1.0equiv)于乙腈(10mL)中的搅拌的溶液中逐滴添加4.0M HCl的二噁烷溶液(5.0ml)。在室温下将混合物搅拌过夜。通过NMR监测反应进程。减压蒸发溶剂，得到残余物，用20mL乙酸乙酯和己烷(1:1)洗涤该残余物，得到呈黄色半固体状的(2S)-1-丙氨酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.900g)。
化合物126.向3-苯基异烟酸(0.753g，3.7mmol，1.0equiv.)于DMF(5mL)中的搅拌的溶液中添加(2S)-1-丙氨酰基-4,4-二氟吡咯烷-2-甲腈盐酸盐(0.900g，3.7mmol，1.0equiv.)、HOBT(0.594g，4.4mmol，1.2equiv.)、EDC.HCl(0.848g，4.4mmol，1.2equiv.)并搅拌10分钟。添加TEA(1.0mL，7.4mmol，2.0equiv.)并在室温下将混合物搅拌16小时。通过NMR和TLC监测反应进程。将反应混合物用冷水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(150×2mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL×4)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。所得粗产物通过反相色谱法纯化，得到呈灰白色固体状的N-(1-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-1-氧代丙-2-基)-3-苯基异烟酰胺(35mg，03％产率)。
LCMS 385[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(d,J＝7.45Hz,1H)8.66(br.s.,2H)7.32-7.52(m,5H)5.05(d,J＝7.02Hz,1H)4.56(br.s.,1H)4.07(d,J＝9.21Hz,1H)4.01(br.s.,1H)2.82(br.s.,2H)1.09-1.20(m,3H)。
生物实例
实例B1
通过体外酶活性测定法评估测试化合物对FAPα的抑制作用
FAPα酶外肽酶(二肽酶)活性测定.为了测定基线FAPα酶外肽酶活性，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将40ng重组人FAPα(rhFAPα，R&S system，#3715-SE)或40ng重组小鼠FAPα(rmFAPα，R&S system，#8647-SE)与含100μM Z-Gly-Pro-AMC肽(BACHEM，#L-1145)的FAPα测定缓冲液(50mM Tris pH 7.4、100mM NaCl、0.1mg/ml牛血清白蛋白)一起在37℃下避光培育1小时。为了测定测试化合物对FAPα酶外肽酶活性的抑制作用，在通过添加底物开始反应之前，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将所有测试化合物与所述酶一起在37℃下预培育15分钟。使用多功能微板读数仪(Synergy 4，Biotek)，通过在Ex/Em 380/460nm下测量荧光来检测7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)的释放。所有测量都是一式两份进行。使用Val-boroPro作为阳性对照，它是一种非特异性脯氨酰肽酶抑制剂。确定某些化合物在1μM下对rmFAPα或rhFAPα酶外肽酶活性的抑制百分比，如表2中所示。对于计算，将由仅含媒剂和底物且不含酶的反应得到的平均测量值用作空白，并从其余测量值中减去。使用由含有媒剂、酶和底物的反应得到的平均测量值作为最大酶活性计算抑制百分比。此外，某些化合物针对rmFAPα或rhFAPα酶外肽酶活性的IC50值也显示于表2中。测量是以单一点执行。
FAPα酶内肽酶(胶原蛋白酶)活性测定.为了测定基线FAPα酶外肽酶活性，在384孔非底透微孔板(Perkin Elmer，#384-F)中，将50ng在FAPα测定缓冲液(50mM Tris pH 7.4、100mM NaCl、0.1mg/ml牛血清白蛋白)中稀释的重组人FAPα(rhFAPα)(R&S system，#3715-SE)与5μg底物DQ胶原蛋白溶液(Molecular Probes#D-12060)一起在37℃下避光培育5小时。为了测定测试化合物对FAPα酶内肽酶活性的抑制作用，在通过添加底物开始反应之前，在384孔非底透微孔板(Perkin Elmer，#384-F)中，将所有测试化合物与所述酶一起在37℃下预培育30分钟。使用多功能微板读数仪(Synergy4，Biotek)，通过在Ex/Em 495/515nm下测量荧光来确定胶原蛋白水解。所有测量都是以单一点执行。使用Val-boroPro作为阳性对照，它是一种非特异性脯氨酰肽酶抑制剂。某些化合物针对rhFAPα酶内肽酶活性的IC50值(通过胶原蛋白酶测定法确定)也显示于表2中。
表2：测试化合物对rmFAPα或rhFAPα的外肽酶或内肽酶抑制作用
Figure GDA0002789796510001561
Figure GDA0002789796510001571
参照化合物：如Jansen,K.等人,《药物化学杂志(J Med Chem)》,2014.57(7):第3053-74页中所述的化合物60；对于抑制％：+++是指在1μM测试化合物下，>50％抑制；++是指在1μM测试化合物下，25％<抑制％<50％；+是指在1μM下，<25％抑制；对于IC50：+++是指IC50<1μM；++是指1μM<IC50<10μM；+是指IC50>10μM；-表示化合物未测试；rmFAPα：重组小鼠成纤维细胞激活蛋白α；rhFAPα：重组人成纤
维细胞激活蛋白α；endo：内肽酶；exo：外肽酶；inh：抑制。
实例B2
与以下其它脯氨酰寡肽酶家族S9成员相比较来评估测试化合物对FAPα抑制的选择性：DPPIV、PREP和DPP9
DPPIV酶活性测定
为了测定基线二肽基肽酶-4(DPPIV)活性，在96孔黑色板(Nunc,#237108)中，将40ng重组人DPPIV(rhDPPIV)(R&S system，#1180-SE)或40ng重组小鼠DPPIV(rmDPPIV)(R&Ssystem，#954-SE)与含400μM H-Gly-Pro-pNA底物(BACHEM，#L-1880)的DPPIV测定缓冲液(25mM Tris，pH 8.3)一起在37℃下避光培育30分钟。为了测定测试化合物对DPPIV的抑制作用，在通过添加底物开始反应之前，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将测试化合物与所述酶一起在37℃下预培育15分钟。使用多功能微板读数仪(Synergy 4，Biotek)，通过在405nm下测量吸光度来检测对硝基苯胺(pNA)的释放。所有测量都是一式三份进行。使用Val-boroPro作为阳性对照，它是一种非特异性脯氨酰肽酶抑制剂。
PREP酶活性测定
为了测定基线脯氨酰内肽酶(PREP)活性，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将20ng重组人PREP(rhPREP)(R&S system，#4308-SE)或20ng重组小鼠PREP(rmPREP)(R&Ssystem，#6339-SE)与含100μM Z-Gly-Pro-AMC肽(BACHEM，#L-1145)的PREP测定缓冲液(25mM Tris、250mM NaCl、10mM DTT，pH 7.5)一起在37℃下避光培育30分钟。为了测定测试化合物对PREP活性的抑制作用，在通过添加底物开始反应之前，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将测试化合物与所述酶一起在37℃下预培育15分钟。使用多功能微板读数仪(Synergy 4，Biotek)，通过在Ex/Em 380/460nm下测量荧光来检测7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)的释放。所有测量都是一式三份进行。使用Val-boroPro作为阳性对照，它是一种非特异性脯氨酰肽酶抑制剂。
DPP9酶活性测定
为了测定基线二肽基肽酶9(DPP9)活性，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将40ng重组人DPP9(rhDPP9)(R&S system，#5419-SE)与含100μM H-Gly-Pro-AMC肽(BACHEM，#L-1215)的DDP9测定缓冲液(50mM HEPES，pH 8)一起在37℃下培育30分钟。为了测定测试化合物对rhDPP9活性的抑制作用，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，在通过添加底物开始反应之前，将测试化合物与所述酶一起在37℃下预培育15分钟。使用多功能微板读数仪(Synergy 4，Biotek)，通过在Ex/Em 380/460nm下测量荧光来检测7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)的释放。所有测量都是一式三份进行。使用Val-boroPro作为阳性对照，它是一种非特异性脯氨酰肽酶抑制剂。
为了确定新FAPα抑制剂是否具有选择性或这些抑制剂是否也抑制其它脯氨酰肽酶，确定某些测试化合物、参照化合物(如Jansen,K.等人,《药物化学杂志》,2014,57(7):第3053-74页中所描述的化合物60)和Val-boroPro针对rmDPPIV、rhDPPIV、rmPREP和/或DPP9的IC50值，如表3中所示。
表3：测试化合物对FAPα抑制的选择性
Figure GDA0002789796510001591
Figure GDA0002789796510001601
参照化合物：如Jansen,K.等人,《药物化学杂志》,2014.57(7):第3053-74页中所述的化合物60；对于IC50：+++是指IC50<1μM；++是指1μM<IC50<10μM；+是指IC50>10μM；-表示化合物未测试；rmFAPα：重组小鼠成纤维细胞激活蛋白α；rhFAPα：重组人成纤维细胞激活蛋白α；rmDPPIV：重组小鼠二肽基肽酶-4；rhDPPIV：重组人二肽基肽酶-4：rmPREP：重组小鼠脯氨酰内肽酶；rhDPP9：重组人二肽基肽酶9；exo：外肽酶。
实例B3
选择性PRXS-AMC底物用于FAPα活性测量的验证
可使用连接至化学淬灭的染料的肽底物如Ala-Pro-7-氨基-4-三氟甲基-香豆素(AFC)或含有共同Gly-Pro二肽的底物如Z-Gly-Pro-AMC，通过整体荧光强度测定法测量二肽基肽酶的FAPα活性(Levy,M.T.等人,《肝脏病学(Hepatology)》,1999,29(6):1768-78；Santos,A.M.等人,《临床研究杂志(J Clin Invest)》,2009,119(12):3613-25；Park,J.E.等人,《生物化学杂志》,1999,274(51):36505-12；Niedermeyer,J.等人,《分子与细胞生物学(Mol Cell Biol)》,2000,20(3):1089-94；Narra,K.等人,《癌症生物学与疗法(CancerBiol Ther)》,2007,6(11):1691-9；Lee,K.N.等人,《血栓和止血杂志(J ThrombHaemost)》,2011,9(5):987-96；Li,J.等人,《生物缀合物化学(Bioconjug Chem)》,2012,23(8):1704-11)。这些底物还可作为可存在于反应中的其它循环脯氨酸特异性内肽酶如PREP的靶。相比之下，名为PRXS-AMC的专用底物试剂可特异性监测FAPα活性。
为了验证这一专用底物的高选择性，如实例B1和B2中所描述，使用Z-Gly-Pro-AMC或PRXS-AMC针对FAP、DPPIV、PREP和DPP9进行酶活性测定。
为了测定FAPα、DPPIV、DPP9和PREP酶活性，分别使用5nM、2.5nM、2.5nM和5nM最终浓度的人重组酶。所用Z-Gly-Pro-AMC或PRXS-AMC的最终浓度是25μM、50μM、100μM和200μM。反应在37℃下避光进行60分钟。使用多功能微板读数仪，按动力学模式，通过在Ex/Em 380/460nm下测量荧光来检测AMC的释放。测量是以单一点执行。在rhFAPα存在下PRXS-AMC和Z-gly-pro-AMC随时间产生的荧光分别显示于图1A和图1B中；在rhPREP存在下PRXS-AMC和Z-gly-pro-AMC随时间产生的荧光分别显示于图2A和图2B中；并且在rhDPPIV或rhDPP9存在下PRXS-AMC随时间产生的荧光分别显示于图3A和图3B中。
在类似浓度下，密切相关的脯氨酰寡肽酶PREP对PRXS-AMC的加工程度低于对Z-Gly-Pro-AMC的加工程度(参见图2A-2B)。PRXS-AMC不受DPPIV或DPP9加工(图3A-3B)。此外，PRXS-AMC还显示在水性缓冲液中的溶解度改善。
实例B4
在血浆中的酶活性
在小鼠血浆中的FAPα酶活性
通过末端心脏穿刺将约500μL来自C57BL/6小鼠的全血收集至BD
Figure GDA0002789796510001611
管(K2)EDTA(#365974，Becton Dickinson and Co.)中。在4℃下，立即将血液样品以约9000g离心5分钟。分离血浆并在-80℃下以300μL等分试样储存。为了测定基线FAPα酶外肽酶活性，用cFAP缓冲液(100mM Tris-HCl、400mM NaCl、50mM水杨酸、1mM EDTA，pH 7.5)稀释(1:5)5μL解冻的血浆，并将其与35μL所述缓冲液混合，随后在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，与不同浓度的10μL测试化合物或DMSO媒剂一起在37℃下预培育15分钟。预培育之后，将50μL的200μM二肽底物Z-Gly-Pro-AMC(Bachem，#L-1145)或PRXS-AMC添加至混合物中。所述测定是在37℃下避光执行1小时。使用多功能微板读数仪(Synergy 4，Biotek)，通过在380nm激发波长和460nm发射波长下测量荧光来检测7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)的释放。所有测量都至少以单一点进行。结果在表4中示出。
小鼠血浆中的DPPIV酶活性
通过末端心脏穿刺将约500μL来自C57BL/6小鼠的全血收集至BD
Figure GDA0002789796510001621
管(K2)EDTA(#365974，Becton Dickinson and Co.)中。在4℃下，立即将血液样品以约9000g离心5分钟。分离血浆并在-80℃下以300μL等分试样储存。为了测定基线DPPIV酶外肽酶活性，在缓冲液(100mM Tris-HCl、400mM NaCl、50mM水杨酸、1mM EDTA，pH 7.5)稀释(1:5)5μL解冻的小鼠血浆，并将其与35μL所述缓冲液混合，随后在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，与不同浓度的10μL测试化合物或DMSO媒剂一起在37℃下预培育15分钟。预培育之后，将50μL的200μM二肽底物H-Gly-Pro-AMC(Bachem，#L-1225)添加至混合物中。所述测定在37℃下执行1小时。使用多功能微板读数仪(Synergy 4，Biotek)，通过在360nm激发波长和460nm发射波长下测量荧光来检测7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)的释放。所有测量都是至少一式两份进行。结果在表4中示出。
表4：在生物样品中测试化合物的抑制作用和特异性
Figure GDA0002789796510001622
参照化合物：如Jansen,K.等人,《药物化学杂志》,2014.57(7):第3053-74页中所描述的化合物60；IC50：+++是指IC50<1μM；++是指1μM<IC50<10μM；+是指IC50>10μM；exo：外肽酶。
实例B5
在人血浆中的FAPα酶活性
在PBS中以1/10稀释人血浆。为了测定基线FAPα酶外肽酶活性，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将稀释过的血浆与100μM Z-Gly-Pro-AMC肽(BACHEM，#L-1145)一起在37℃下培育1小时。在通过添加底物开始反应之前，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将测试化合物与稀释过的血浆一起在37℃下预培育15分钟。使用多功能微板读数仪(Synergy4，Biotek)，通过在Ex/Em 380/460nm下测量荧光来检测7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)的释放。所有测量都是一式三份进行。
实例B6
来自不同物种的血浆的循环FAPα活性的离体抑制
人血浆
从健康的年轻志愿者获得人血液。通过静脉穿刺方法将血液样品收集于涂有EDTA-K2的管中，轻缓地混合，接着将其保持在冰上并在4℃下以2,500×g离心15分钟。分离血浆之后，在-80℃下将样品以300μL等分试样储存。
为了确定示例性测试化合物针对来自人血浆的循环FAPα活性的抑制效力，将20μL解冻的血浆与20μL cFAP缓冲液(100mM Tris-HCl、400mM NaCl、50mM水杨酸、1mM EDTA，pH7.5)和10μL不同浓度的示例性测试化合物或媒剂(DMSO)混合。
使示例性化合物与所述酶在37℃下相互作用15分钟。预培育之后，将50μl的200μMPRXS-AMC底物添加至所有混合物中。所有反应在37℃下避光进行1小时。使用多功能微板读数仪，通过在380/460nm的激发/发射波长下测量荧光来检测AMC的释放。所有测量都以单一点进行。
示例性测试化合物针对来自人类的循环FAPα的IC50结果显示于表5中。
仓鼠血浆
雄性黄金叙利亚仓鼠(Golden Syrian hamster)是由中国台湾的实验动物中心(National Laboratory Animal Center，NLAC)提供。将动物维持在受控温度(20-24℃)和湿度(50％-80％)且具有12小时亮/暗循环的卫生环境中。使其自由获取标准实验室饮食[MFG(日本Oriental Yeast Co.,Ltd.)]和高压灭菌的自来水。本研究的所有方面，包括动物圈养、实验和处置，都大体上根据“实验动物照护和使用指南(Guide for the Care andUse of Laboratory Animals)：第八版”(National Academies Press,华盛顿哥伦比亚特区(Washington,D.C.),2011)执行。此外，动物照护和使用方案还在PharmacologyDiscovery Services Taiwan,Ltd得到IACUC的评审和批准。
在处死仓鼠之后，立即通过末端心脏穿刺将血液样品收集于涂有EDTA-K2的管中，轻缓地混合，接着将其保持在冰上并在4℃下以2,500×g离心15分钟。分离血浆之后，在-80℃下将样品以300μL等分试样储存。
为了在仓鼠血浆中测定示例性化合物，通过在cFAP缓冲液中以1:2稀释解冻的血浆来执行如关于人血浆所描述类似的方案。在96孔黑色板中，将5μl稀释过的仓鼠血浆与35μl所述缓冲液和10μl不同浓度的示例性测试化合物或媒剂(DMSO)混合。
使示例性测试化合物与所述酶在37℃下相互作用15分钟。预培育之后，将50μl的200μM PRXS-AMC底物添加至所有混合物中。所有反应在37℃下避光进行1小时。使用多功能微板读数仪，通过在380/460nm的激发/发射波长下测量荧光来检测AMC的释放。所有测量都以单一点进行。
示例性测试化合物针对来自仓鼠血浆的循环FAPα的IC50结果显示于表5中。
表5-示例性化合物针对来自人和仓鼠血浆的循环FAPα活性的体外抑制作用.
Figure GDA0002789796510001641
对于IC50：+++是指IC50<1μM；++是指1μM<IC50<10μM；+是指IC50>10μM。
实例B7
静脉内和口服生物利用率
在向小鼠静脉内(IV)施用2mg/kg单次剂量或口服(PO)施用10mg/kg单次剂量的示例性测试化合物之后，测定其药物动力学特性。在含有聚乙二醇200(PEG200；目录号#P3015，Sigma Aldrich)和蒸馏水(dH2O)(50/50，v/v)的媒剂中将示例性测试化合物配制成0.4mg/ml和1mg/ml的给药溶液以分别供静脉内和口服施用。
从饲养室Fundación Ciencia&Vida Chile(智利圣地亚哥(Santiago,Chile))获得约8-10周龄的C57BL/6J和Balb/c小鼠并维持在具有12/12小时亮/暗时程并任意取用食物和水的温度受控房间中。在到达测试机构后，使动物适应最短4天时间。
研究当天，对小鼠称重并通过使用无毒永久性标记物对尾部标号进行标识，以指明实验组(n＝3只/组)。IV给药组中的每只小鼠通过尾静脉全身推注2mg/kg给药溶液。PO给药组中的每只小鼠通过饲喂管20G(目录号：FTP-2038；Instech Salomon Inc.)胃内推注10mg/kg。
在给药之后5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、60分钟、120分钟、240分钟、360分钟及480分钟，通过末端心脏穿刺收集血液样品。使用未给药的小鼠收集零时间点的样品。将全血收集至含(K2)EDTA的微量采血管(目录号#365974，Becton Dickinson&Co.)中。在4℃下，立即将血液样品以9,000g离心5分钟，并分离出血浆。将血浆样品放入个别地标记的冷冻管(目录号#366656，Thermo Fisher Scientific,Inc.)中并储存于-80℃冷冻器中，以待LC/MS/MS生物分析。
通过QTRAP 4500三重四极杆质谱仪(Applied Biosystems SCIEX)，根据测试化合物，以正离子或负离子模式并与ekspert ultraLC 100-XL UPLC系统(eksigent)接合来分析血浆样品，以确定示例性测试化合物的浓度。由原生小鼠血浆，且并行地用小鼠血浆研究样品(60μl)，通过用三体积冰冷的内标溶液(含有20μM茶碱的乙腈)沉淀，制备出校准标准品(0.001至10μM)和QC(0.02μM、0.2μM和2μM)。在4℃下，将沉淀的样品以6,100g离心30分钟。离心之后，将各上清液的等分试样转移至清洁的样品小瓶中并用二体积的水性流动相(含0.2％甲酸的水)稀释。将样品注射至反相分析柱(YMC Triart C18；2.0×50mm；1.9μm；YMC CO)上并用含0.1％或0.2％甲酸的乙腈梯度洗脱。使用Analyst软件(v1.6.2，AppliedBiosystems SCIEX)，通过多反应监测(MRM)实验监测测试化合物和内标。定量是使用MultiQuant软件(v2.1，Applied Biosystems SCIEX)进行并利用线性或二次回归和1/x权重拟合所得校准曲线。定量下限在0.003-0.01μM之间。
使用Phoenix WinNonlin软件(v6.4，新泽西州普林斯顿(Princeton,NJ)的Certara)，通过非房室模型分析由浓度-时间数据计算IV和PO PK参数。使用对数线性梯形法估算从给药时间至最后一个可测量浓度的浓度-时间曲线下面积(AUC最后)。小鼠血浆中示例性化合物的AUC结果显示于表6中。
表6-在向小鼠口服施用之后示例性化合物的AUC和生物利用率.
参照化合物：如Jansen,K.等人,《药物化学杂志》,2014.57(7):第3053-74页中所描述之化合物60
实例B8
测试化合物13的体内药物动力学和药效学
在蒸馏水中含有50％聚乙二醇200(PEG200，#P3015-1KG：Sigma-Aldrich,Inc.)的媒剂中制备1mg/mL测试化合物13的溶液供口服施用。
对获自饲养室(智利圣地亚哥的Fundación Ciencia&Vida)的雌性C57BL/6小鼠(约9-10周龄；20-21g)称重并如表7中所描述进行分组。
表7：关于测试化合物13施用的小鼠分组
Figure GDA0002789796510001662
在给药前24小时，从每只小鼠的尾静脉抽取100μL全血样品。给药当天，所有组的小鼠经口接受使用饲喂针(#FTP-2038/050312，Instech Laboratories,Inc.)给与的单次剂量(10mg/kg)的测试化合物13。
取决于每个组，在收集时间点，通过末端心脏穿刺将约500μL来自每只小鼠的全血收集至BD
Figure GDA0002789796510001671
管(K2)EDTA(#365974，Becton Dickinson and Co.)中(表5)。在4℃下，立即将血液样品以约9000g离心5分钟。分离血浆并将其放入个别地标记的冷冻管瓶(#366656；Thermo Fisher Scientific,Inc.)中，并在-80℃下储存，随后针对酶活性或LC/MS/MS分析进行测定。
将所有血浆样品解冻并用测定缓冲液(1份血浆/5份缓冲液)稀释。测定缓冲液含有100mM Tris-HCl、400mM NaCl、50mM水杨酸、1mM EDTA，pH 7.5。测定所有血浆的FAP和DPPIV活性。为了测定血浆的FAPα或DPPIV酶活性，将5μL各稀释过的血浆样品装载至96孔黑色板(Nunc，#237108)各孔中，该孔含有45μL的额外测定缓冲液。在测定开始之前，使板在37℃下升温，保持15分钟。为了开始测定，将50μL的200μM二肽底物Z-Gly-Pro-AMC(Bachem，#L-1145)(FAPα酶活性测定)或50μL的200μM二肽底物H-Gly-Pro-AMC(Bachem，#L-1225)(DPPIV酶活性测定)添加至各孔中。使用多功能微板读数仪(Synergy 4，Biotek)，通过在360nm激发波长和460nm发射波长下测量荧光来检测7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)的释放。所有测量都是至少一式两份进行。
对于经口给与化合物13的每只动物，将在给药后收集的血浆样品中发现的FAP和DPPIV活性针对给药前血浆样品中发现的对应活性归一化，以百分比表示。经口给与化合物13的小鼠的血浆中所发现的FAP活性的百分比概述于图4中。DPPIV活性的百分比概述于图5中。
实例B9
小鼠中进行的口服药物动力学(PK)和药效学(PD)研究
为了确定示例性测试化合物的PK/PD，对各组小鼠经口给与化合物13(示例性化合物)，接着对在不同时间点收集的血浆样品进行生物分析以确定化合物的浓度和FAP活性。
在到达测试机构后，使获自饲养室Fundación Ciencia&Vida的约8-10龄(19-21gr)的雌性C57BL/6小鼠适应最短4天时间。给药当天，对小鼠称重并如表8中所述，通过使用无毒永久性标记物对尾部标号进行标识，以指明治疗组。
表8-用于PK/PD研究的实验组.
Figure GDA0002789796510001681
在含有聚乙二醇200(PEG200；目录号#P3015，Sigma Aldrich)和蒸馏水(dH2O)(50/50，v/v)的媒剂中配制化合物13(示例性化合物)的5mg/ml给药溶液以供口服施用。
对于口服施用，来自第1组至第6组的小鼠接受10mL/Kg单次口服剂量的媒剂PEG200/dH2O(50/50，v/v)。来自第7组至第12组的小鼠接受在媒剂中新鲜配制的5mg/mL单次口服剂量的化合物13(示例性化合物)。
施用媒剂或化合物13(示例性化合物)之后1小时、4小时、8小时、12小时、16小时和24小时，通过心脏穿刺收集全血。第13组小鼠不给药并用于收集零时间点的样品。在4℃下，立即将血液样品以约9000g离心5分钟。分离血浆并将其放入个别地标记的冷冻管瓶中，并在-80℃下储存，随后针对酶活性或生物分析进行测定。
将所有血浆样品解冻并用测定缓冲液(100mM Tris-HCl、400mM NaCl、50mM水杨酸、1mM EDTA，pH 7.5)以1:5稀释。测定所有血浆的FAP和DPPIV活性。为了测定血浆的FAPα或DPPIV酶活性，将5μL各稀释过的血浆样品装载至96孔黑色板各孔中，该孔含有45μL的额外测定缓冲液。在测定开始之前，使板在37℃下升温，保持15分钟。为了开始反应，将在测定缓冲液中稀释的50μL的400μM二肽底物Z-Gly-Pro-AMC(FAPα酶活性测定)或50μL的200μM二肽底物H-Gly-Pro-AMC(DPPIV酶活性测定)添加至各孔中。使用多功能微板读数仪，通过在360nm激发波长和460nm发射波长下测量荧光来检测AMC的释放。所有测量都是至少一式两份进行。
通过自仅含底物和测定缓冲液的空白反应中减去平均荧光来校正所有荧光测量值。为了计算来自给与媒剂或化合物13(示例性化合物)的小鼠的血浆中的残留FAP和DPPIV，将每一测定的所有荧光测量值针对来自未给药组的样品的荧光归一化，该未给药组样品假定为100％活性。在经口给与媒剂或化合物13(示例性化合物)的小鼠的血浆中所发现的残留FAP活性的百分比显示于图6A中。DPPIV活性的百分比概述于图6B中。FAPα活性和化合物的PK/PD随时间的比较显示于图6C中。
实例B10
体内肿瘤抑制作用
将获自饲养室Fundación Ciencia&Vida(智利圣地亚哥)的雌性C57/BL6小鼠(约8-9周龄；20-21gr)维持在具有12/12小时亮/暗时程并任意取用食物和水的温度受控房间中。在到达测试机构后，使小鼠适应最短4天时间。
在37℃和含5％CO2的气氛下，将MC38小鼠结肠癌细胞系作为单层培养物维持在补充有10％胎牛血清(目录号：16000，Gibco)和青霉素/链霉素(目录号：15140122，Gibco)的DMEM-F12(目录号：SH30023.01，Hyclone)中。每3天使细胞常规地传代培养以使生长维持在指数期。使用含0.05％胰蛋白酶-EDTA(目录号：15400054，Gibco)的1×PBS收集在指数生长期生长的肿瘤细胞，随后在室温下，在离心机中以330g×离心3分钟。随后，通过抽吸移除上清液。使细胞团再悬浮于约10×体积的细胞培养基中并计数。通过锥虫蓝染色确定细胞活力>95％。
在接种当天，对雌性C57/Bl6小鼠(总计n＝15只)称重并通过使用无毒永久性标记物对尾部标号进行标识。将在1×PBS中含有约2×106个MC38细胞的单次0.1mL体积的细胞悬浮液皮下接种于小鼠的右下侧腹(接近背侧大腿区)中。每周三次用数字卡尺测量肿瘤并用下式计算肿瘤体积，以mm3表示：
肿瘤体积(mm3)＝(a×b2)/2
其中“b”是最小直径且“a”是最大垂直直径。
接种后七天，平均肿瘤体积是约100mm3。对小鼠称重并随机分入两个实验组(n＝5-6只小鼠)中，并接受每天两次经口给与的后续治疗直至结束：1)媒剂(含50％PEG200的水)；或2)含50mg/kg测试化合物24的50％PEG200/水。每周二次或三次记录小鼠的体重和肿瘤体积，总计持续22天。在第22天，处死小鼠并对所有肿块称重。
肿瘤体积在图7中显示为平均值加平均值的标准误差(SEM)。小鼠体重增加在图8中显示为平均值加平均值的标准误差(SEM)。肿瘤体积的个别记录显示于图9中。肿块重量在图10中显示为平均值加平均值的标准误差(SEM)。如图中所示，用测试化合物24治疗的小鼠的肿瘤体积小于仅用媒剂治疗的小鼠。在这些研究中未观察到统计显著性。
实例B11
鼠类肿瘤中的FAPα酶活性
使用ultra Turrax(IKA，#3737000)，将小鼠肿瘤蛋白质提取于溶解缓冲液(50mMTris HCl pH 7.6、1mM EDTA、10％甘油、蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合液)中，保持20分钟。为了测定肿瘤提取物中的基线FAPα酶外肽酶活性，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将10μg肿瘤提取物样品与含100μM Z-Gly-Pro-AMC肽(BACHEM，#L-1145)的1×PBS一起在37℃下培育1小时。在通过添加底物开始反应之前，在96孔黑色板(Nunc，#237108)中，将抑制剂与肿瘤提取物一起在37℃下预培育15分钟。使用多功能微板读数仪(Synergy 4，Biotek)，通过在Ex/Em 380/460nm下测量荧光来检测7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)的释放。所有测量都是一式三份进行。
实例B12
在鼠类癌症模型的肿瘤中进行的PK/PD研究
B16-F10鼠类黑素瘤模型
向雄性C57B1/6小鼠皮内植入1×106个悬浮于100μL无菌1×PBS中的B16-F10鼠类黑素瘤细胞(第0天)。在植入后第2天，一天两次(BID)向各组动物(n＝3)经口(PO)给与媒剂PEG200/dH2O(50/50v/v)或50mg/Kg化合物13(示例性化合物)，直至第15天。
在最后一天，处死所有小鼠并立即收集肿瘤和血浆样品，并在-80℃下储存，随后针对FAPα酶活性或生物分析进行测定。
使用Ultra Turrax均质机(IKA，#3737000)，将鼠类癌症肿瘤的蛋白质提取于溶解缓冲液(50mM Tris HCl pH 7.6、1mM EDTA、10％甘油、蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合液)中。在4℃下，通过以21,000g离心20分钟，使匀浆变澄清。收集上清液并使用BCA蛋白质测定试剂盒(目录号#23225，Thermo Scientific)定量蛋白质。用溶解缓冲液将所有蛋白质样品调整为2μg/μL，接着等分试样，以在-80℃下储存。
为了评估肿瘤匀浆中的FAPα活性，在96孔黑色板中用cFAP测定缓冲液稀释10μg各肿瘤提取物，最终体积为50μL，接着，将其与100μM PRXS-AMC肽混合。反应在37℃下进行1小时。使用多功能微板读数仪，通过在Ex/Em 380/460nm下测量荧光来检测AMC的释放并以相对荧光单位(RFU)表示。所有测量都以单一点进行。
化合物13(示例性化合物)的浓度显示于图11A中。来自带有B16-F10鼠类黑素瘤肿瘤的动物的血浆和肿瘤中的FAPα活性显示于图11B中。
MC38鼠类黑素瘤模型
向雌性C57B1/6小鼠皮下植入2×106个悬浮于100μL无菌1×PBS中的MC38小鼠结肠癌细胞(第0天)。在植入后第12天，基于肿瘤体积，将小鼠随机分入两个实验组(n＝6)中，其中平均肿瘤体积为约160mm3。各组动物通过PO bid接受媒剂PEG200/dH2O(50/50v/v)或50mg/kg的化合物13(示例性化合物)，直至第24天。
如关于B16-F10鼠类黑素瘤模型所描述，在最后一天，处死所有小鼠并立即收集肿瘤和血浆样品，并在-80℃下储存，随后针对FAPα酶活性或生物分析进行测定。
化合物13(示例性化合物)的浓度显示于图12A中。来自带有MC38鼠类黑素瘤肿瘤的动物的血浆和肿瘤中的FAPα活性显示于图12B中。
实例B13
体外FAP介导的FGF21蛋白水解裂解测定.
向糖尿病和肥胖动物模型药理学施用FGF21使啮齿动物的肥胖症、胰岛素抵抗、血脂异常、脂肪肝和高血糖症明显改善(Markan,K.R.等人,《细胞与发育生物学研讨文辑》,2016,53:85-93)，并且FGF21类似物有效地在患有2型糖尿病的肥胖人群中诱导体重减轻并校正高胰岛素血症、血脂异常和低脂联素血症(Gaich,G.等人,《细胞代谢(Cell Metab)》,2013,18(3):333-40；Dong,J.Q.等人,《英国临床药理学杂志》,2015,80(5):1051-63)。然而，在啮齿动物和灵长类动物中，外源施用的人FGF21因FAP介导的酶降解以及易于发生肾清除而具有较短半衰期(约0.5-2小时)(Hager,T.等人,《分析化学》,2013,85(5):2731-8；Xu,J.等人,《美国生理学会杂志：内分泌学与新陈代谢》,2009,297(5):E1105-14；Kharitonenkov,A.等人,《内分泌学》,2007,148(2):774-81)。常用的半衰期延长策略使这些FGF21类似物在体内的PK特性明显改善；不过，这些类似物中仍存在蛋白水解加工(Hecht,R.等人,《公共科学图书馆：综合》,2012,7(11):e49345；Mu,J.等人,《糖尿病》,2012,61(2):505-12；Camacho,R.C.等人,《欧洲药理学杂志》,2013,715(1-3):41-5)。为了确定本文所描述的FAP抑制剂化合物是否能抑制FGF-21裂解并且是否能提供口服疗法以加强内源性和/或外源性FGF21作用，将在示例性FAP抑制剂化合物存在和不存在下FAP介导的FGF21消化相比较。
体外FAP介导的FGF21消化
在37℃下，将重组人FGF21(rhFGF21；目录号#2539-FG-025/CF，R&D systems)与重组人FAP(rhFAP；目录号#3715-SE-010，R&D systems)一起在消化缓冲液(50mM Tris pH7.4、100mM NaCl、0.1mg/ml牛血清白蛋白)中培育过夜(16小时)。反应是以1000ng/mL最终浓度的hFGF21以及400ng/mL、800ng/mL或1200ng/mL最终浓度的rhFAP进行，体积为100μL。对于SDS-PAGE分析，在培育之后，各样品立即接受补充有0.1mlβ-巯基乙醇/10ml等分试样的4×Laemmli蛋白质样品缓冲液(目录号#161-0747，Bio-Rad)，接着在95℃下煮沸10分钟。接着，将15μL各样品的等分试样装载至还原性20％Tris-Tricine SDS-PAGE凝胶上。对于免疫印迹分析，在SDS-PAGE凝胶上分离蛋白质并将其转移至PVDF膜(目录号#1620177，Bio-Rad)上。对于免疫检测，将抗FGF21抗体(目录号#RD181108100，BioVendor)和抗兔HRP缀合的抗体(目录号#611-1322，Rockland)分别用作一次抗体和二次抗体。使用ECL蛋白质免疫印迹底物(目录号#32106，Thermo Fisher Scientific)检测蛋白质并使用ChemiDocTM成像系统(Biorad)和Image lab软件v5.2.1build 11观测。
针对rhFGF21的完整形式和rhFAP裂解形式的免疫检测显示于图13A中并且光密度测定分析显示于图13B中。如由免疫印迹图像和光密度测定分析所示，rhFGF21的裂解形式以rhFAP浓度依赖性方式增加。
体外对FAP介导的FGF21消化的抑制.
为了比较抑制rhFAP介导的rhFGF21蛋白水解加工的功效，在体外FGF21裂解测定中测试低浓度的示例性化合物和市售非选择性DDP抑制剂Val-boroPro。
在DMSO中由测试化合物和Val-boroPro粉末制备10mM储备溶液，并在N2中性气氛存在下，在-80℃下储存。储备溶液在DMSO中预先稀释以得到1mM和0.1mM的稀释过的等分试样。这些等分试样再在消化缓冲液中稀释10倍，接着，将10μL这些稀释液添加至50μL rhFAP中。使酶-抑制剂混合物在37℃下相互作用30分钟，接着，添加40μL rhFGF21以开始反应。反应在37℃下，以1000ng/mL hFGF21的最终浓度和1200ng/mL rhFAP的最终浓度进行16小时。培育之后，立即在Laemmli蛋白质样品缓冲液中将样品煮沸，接着在还原性20％Tris-Tricine SDS-PAGE凝胶中解析蛋白质。如上文所描述，进行rhFGF21的完整形式和rhFAP裂解形式的免疫检测。
100nM和1000nM的化合物13(示例性化合物)与Val-boroPro在体外抑制rhFAP蛋白水解加工rhFGF21的功效的比较显示于图13C中且光密度测定分析显示于图13D中。如由免疫印迹图像和光密度测定分析所示，rhFGF21的完整形式在化合物13(示例性化合物)存在下，甚至在低浓度化合物13存在下得以保持。
此外，使用连续稀释的化合物13(示例性化合物)确定FAP介导的FGF21蛋白水解裂解的IC50。如图14A中所示，示例性化合物在体外以剂量依赖性方式抑制rhFAP介导的FGF21蛋白水解加工。如图14B中光密度测定分析所示，示例性化合物在FAP介导的FGF21蛋白水解裂解测定中显示在纳摩尔范围内的IC50。
实例B14
rhFGF21施用以及体内FAP抑制
为了确定本发明示例性化合物是否能使hFGF21体内半衰期延长，对大鼠经口给与媒剂或化合物13(示例性化合物)，随后给与次治疗剂量的rhFGF21。
从饲养室Universidad Católica de Chile(智利圣地亚哥)获得约7-8周龄(约250g)的雄性Sprague Dawley大鼠。在到达测试机构后，使动物适应最短4天时间。在研究当天，使用七氟醚(sevoflurane)使两只大鼠麻醉并通过手术将导管植入颈动脉和颈静脉中。将导管塞固定至导管的外部端并使用在0.9％NaCl Apiroflex(Fresenius Kabi,Laboratorio Sanderson)中含有25U/mL肝素(Fresenius Kabi,Laboratorio Sanderson)的抗凝血剂肝素化生理盐水溶液使其保持畅通。在手术恢复之后，对大鼠称重并如表9中所述，通过使用无毒永久性标记物对尾部标号进行标识，以指明治疗。
表9-插管大鼠的实验性治疗.
Figure GDA0002789796510001731
在媒剂PEG200/dH2O(50/50，v/v)中将化合物13(示例性化合物)配制成5mg/ml以供口服施用并在0.9％NaCl Apiroflex中将rhFGF21配制成100μg/mL。
通过植入的颈动脉导管，从两只动物收集全血样品(时间点＝-15分钟)，随后立即施用第一次剂量(通过饲喂管(15号)分别向大鼠#1和#2施用50mg/Kg单次口服剂量的媒剂或化合物13)。15分钟之后，收集第二份全血样品(时间点＝0分钟)，随后立即施用第二次剂量(通过植入的颈静脉导管施用90μg/Kg单次静脉内剂量的rhFGF21)。接着，在第二次给药后的以下时间点，收集全血样品：5分钟、15分钟、30分钟、60分钟、120分钟、240分钟和480分钟。在4℃下，立即将血液样品以约9000g离心5分钟。如上文在先前实例中所描述，分离血浆并放入个别地标记的冷冻管瓶中，并在-80℃下储存，随后通过蛋白质印迹技术、使用PRXS-AMC或生物分析进行的FAPα活性测定对rhFGF21进行免疫检测。
对于免疫检测，在4℃下，将解冻的血浆样品以2,000g离心15分钟，接着将上清液转移至清洁的Eppendorf管中。将1.5μL各血浆样品与11.25μL的4×Laemmli蛋白质样品缓冲液和32.25μL的dH2O混合。如上文所描述，将蛋白质煮沸，接着将15μL各样品溶解于还原性20％Tris-Tricine SDS-PAGE凝胶中，然后进行免疫印迹以检测FGF21。
结果概述于图15中。施用50mg/kg单次口服剂量的化合物13有效地抑制血浆FAP活性。用示例性化合物预先治疗使血浆中随时间检测的rhFGF21的量增加。
实例B15
在仓鼠中进行的口服PK/PD研究.
hFAP水解在P2处具有甘氨酸(Gly)且在P1处具有脯氨酸(Pro)的肽。在人FGF21中170-171位处的Gly-Pro FAP共同残基保留在具有可用FGF21序列(包括预测的序列)的大多数哺乳动物中。然而，在大鼠和小鼠体内表达的FGF21具有Glu-Pro代替在推定的FAP裂解位点处的保守Gly-Pro。据报导，hFAP不加工含有鼠类序列的FGF21(Dunshee,D.R.等人,《生物化学杂志》,2016,291(11):5986-96)。值得关注的是，在P1′位置处具有Leu的来自叙利亚仓鼠FGF21的相应肽展现hFAP引起的明显水解(Dunshee,D.R.等人,《生物化学杂志》,2016,291(11):5986-96)。
为了评估示例性化合物抑制FAP对内源产生的FGF21的裂解的影响，在单次静脉内和口服施用示例性化合物之后，对雄性黄金叙利亚仓鼠进行体内PK/PD研究。
雄性黄金叙利亚仓鼠是由中国台湾的实验动物中心(NLAC)提供。将动物维持在受控温度(20-24℃)和湿度(50％-80％)且具有12小时亮/暗循环的卫生环境中。使其自由获取标准实验室饮食[MFG(日本Oriental Yeast Co.,Ltd.)]和高压灭菌的自来水。本研究的所有方面，包括动物圈养、实验和处置，都大体上根据“实验动物照护和使用指南：第八版”(National Academies Press,华盛顿哥伦比亚特区,2011)，在兽医监督下执行。此外，动物照护和使用方案还在Pharmacology Discovery Services Taiwan,Ltd受到IACUC的评审和批准。
将化合物13(示例性化合物)在二甲亚砜
Figure GDA0002789796510001741
HS15(德国BASF)/磷酸盐缓冲生理盐水(PBS，美国Sigma)(5/5/90，v/v/v)中配制成0.2mg/mL以供静脉内注射并在聚乙二醇(PEG)200(美国Sigma)/注射用水(WFI；中国台湾Tai-Yu)(50/50，v/v)配制成1mg/mL以供PO施用。IV施用的给药体积是5mL/kg且PO施用的给药体积是10mL/kg。
在研究当天，使仓鼠麻醉并通过手术将导管植入颈静脉中。将导管塞固定至导管的外部端并使用抗凝血剂肝素化生理盐水溶液使其保持畅通。在手术恢复之后，对仓鼠称重并如表10详述，通过使用无毒永久性标记物对尾部标号进行标识以指明IV或PO组(n＝3)。
表10-用于仓鼠PK/PD研究的实验组.
Figure GDA0002789796510001751
第1组仓鼠通过颈静脉，静脉内推注1mg/kg化合物13(示例性化合物)。另一方面，第2组仓鼠使用饲喂针接受胃内推注的10mg/kg化合物13(示例性化合物)。
在给药后5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、60分钟、120分钟、240分钟、360分钟、480分钟及1440分钟，收集IV组和PO组的血浆样品。第3组仓鼠未给药并且用于收集零时间点样品以及基线FAP活性和内源性FGF21水平。
从颈静脉插入导管的仓鼠收集血液等分试样(100-150μL)，放入涂有EDTA-K2的管中，在收集的1小时内，轻缓地混合，接着将其保持在冰上，并在4℃下以2,500×g离心15分钟。如上文在先前实例中所描述，将血浆样品放入个别地标记的冷冻管瓶中，并在-80℃下储存，随后针对FAPα活性测定(Z-Gly-Pro-AMC底物)和生物分析进行测定。
通过使用ELISA试剂盒(目录号#EZRMFGF21-26K，Millipore)，根据制造商的说明书，定量血浆样品中内源性仓鼠FGF21的水平。检测限是44.85pg/ml。未给药动物的血浆样品作为血浆池进行分析。所有样品都以单一点进行测定。结果显示于图16中。
供静脉内和口服施用的化合物13(示例性化合物)的AUC最后分别等于255hr.ng/mL和350hr.ng/mL。与基线水平相比较，在施用化合物13(示例性化合物)之后，FAP活性迅速降低，而且尽管FGF21的基线水平在个体间不同，但大多数仓鼠中的总FGF21水平增加。重要的是，这一增量的时程与血浆中内源性FAP的活性抑制密切相关。因此，在体内通过施用示例性化合物抑制FAP使得内源性血清FGF21增加，表明防止FAP引起的裂解。
实例B16
针对仓鼠的饮食诱导的肥胖(DIO)模型的功效
在整个实验中，对各组10只重90±10g的雄性黄金叙利亚仓鼠饲喂高脂肪膳食(HFD)(g/100g：玉米油，5；椰子油，5；胆固醇，0.2；标准食物，89.8)。在开始该饮食之后七天，连续28天，通过每天经口管饲(PO、QD)施用媒剂、依泽替米贝(ezetimibe)(阳性对照)或示例性测试化合物(第1天)。额外未治疗组的动物(第5组)饲喂正常饮食(对照)。一周两次测量体重(BW)并记录。
空腹过夜之后，在给药后第1天、第8天、第15天、第22天及第29天每天给药之前5分钟，从每只动物的眶后窦获得血液，持续0、7天、14天、21天及28天。
测定获自每只仓鼠的血清的空腹葡萄糖、总胆固醇(Total)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)及三酸甘油酯(TG)。治疗后的值是以治疗前值的百分比计算。另外，还确定治疗组相对于媒剂对照组的变化百分比。
在最后一天，即第29天，处死所有动物并立即对其进行心脏穿刺以收集最大体积的血液样品。对一半血液样品进行加工以获得血清，并使用血清，通过ELISA方法测定终末脂联素和胰岛素。对另一半血液样品进行加工以获得血浆。如上文在先前实例中所描述，将血浆样品放入个别地标记的冷冻管瓶并在-80℃下储存，随后在示例性化合物存在下进行FAPα活性测定、通过ELISA进行FGF21水平的定量及生物分析。
此外，收集如脑、肝、肩胛间BAT、附睾WAT、胰腺和腓肠肌等组织用于FGF21靶基因和蛋白质的分子和生化评估。还收集肝脏各部分作为未固定的冷冻样品，并用油红-O染色剂进行染色，或作为福尔马林固定且石蜡包埋的样品用于H&E染色和组织病理学分析。
通篇的所有参考文献，如出版物、专利、专利申请和公布的专利申请，都以全文引用的方式并入本文中。

Claims (60)

1.一种式(I)的化合物，
Figure FDA0002610488500000011
或其药学上可接受的盐，其中：
R是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rd取代；
m是0、1、2、3或4；
n是0、1、2、3或4，
其中m+n是1、2、3或4；
X是-C(＝O)-、-O-、-CH(OH)-、-S-、-S(＝O)-或-S(＝O)2-；
L是
(a)
Figure FDA0002610488500000012
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
Ra是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于Ra的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Re取代，
R1和R2彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C1-C2烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R1和R2的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rf取代，
或R1和R2连同其所连接的一个或多个碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rf取代，
q是1、2或3，
R3和R4彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R3和R4的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rg取代，
或R3和R4连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rg取代，并且
p是0、1或2；
(b)
Figure FDA0002610488500000021
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
R5和R6彼此独立地并且在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R5和R6的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rh取代，
Rb和Rc独立地是H、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基、C6-C14芳基或-C(＝O)OR17，其中关于Rb和Rc的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Ri取代，并且
r是1、2或3；或
(c)
Figure FDA0002610488500000022
其中
*表示与Y-X-部分的连接点，
**表示与分子其余部分的连接点，
R7和R8彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R7和R8的所述C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rj取代，
或R7和R8连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基，其任选地被Rj取代，
R9和R10彼此独立地并且在每次出现时独立地是H、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基或C6-C14芳基，其中关于R9和R10的所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基和C6-C14芳基独立地任选被Rk取代，
s是1、2或3，
t是1、2或3，
其中s+t是2、3或4，
u是0或1，并且
v是0或1；
Y是任选地被R11取代的C6-C9芳基、任选地被R12取代的6至10元杂芳基或任选地被R13取代的3至12元杂环基，其中当Y是苯基或萘基时，关于Y的所述苯基或萘基被至少一个R11取代，并且其中当L是*-NH-CH2-**并且Y是任选地被取代的喹啉基时，关于Y的所述任选地被取代的喹啉基在2位、3位、5位、6位、7位或8位处连接至母结构，其中
R11、R12和R13彼此独立地并且在每次出现时独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C4-C8环烯基、3至12元杂环基、5至10元杂芳基、C6-C14芳基、卤素、氰基、氧代、-OR14、-NR15R16、-SR14、-NO2、-C＝NH(OR14)、-C(O)R14、-OC(O)R14、-C(O)OR14、-C(O)NR15R16、-NR14C(O)R15、-NR14C(O)OR15、-NR14C(O)NR15R16、-S(O)R14、-S(O)2R14、-NR14S(O)R15、-NR14S(O)2R15、-S(O)NR15R16、-S(O)2NR15R16或-P(O)(OR15)(OR16)，其中各R11、R12和R13独立地任选被RL取代；
各R14独立地是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基或3至12元杂环基，其中关于R14的所述C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基和3至12元杂环基独立地任选被以下取代：卤素、-OH、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基；
R15和R16彼此独立地并且在每次出现时独立地是氢、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基或3至12元杂环基，其中关于R15和R16的所述C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基和3至12元杂环基独立地任选被以下取代：卤素、-OH、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基，
或R15和R16连同其所连接的原子一起形成3至6元杂环基，其任选地被以下取代：卤素、氧代、氰基、或任选地被卤素、-OH或氧代取代的C1-C6烷基；
Rd、Re、Rf、Rg、Rh、Ri、Rj及Rk彼此独立地并且在每次出现时独立地是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基、3至12元杂环基、-OR14、-NR15R16、氰基或硝基；并且
各RL独立地是卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C14芳基、5至10元杂芳基、3至12元杂环基、-OR14、-C(O)R14、-NR15R16、氰基、氧代或硝基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中X是-C(＝O)-。
3.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中X是-O-。
4.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中X是-CH(OH)-。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物或其盐，其中L是-NH-CR1R2-。
6.根据权利要求5所述的化合物或其盐，其中L是-NH-CH2-。
7.根据权利要求5所述的化合物或其盐，其中L是-NH-CH(CH3)-。
8.根据权利要求5所述的化合物或其盐，其中L是-NH-CR1R2-，其中R1和R2连同其所连接的碳原子一起形成3至8元亚环烷基。
9.根据权利要求8所述的化合物或其盐，其中R1和R2连同其所连接的碳原子一起形成亚环丙基。
10.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物或其盐，其中L是-CR5R6-CH(NRbRc)-。
11.根据权利要求10所述的化合物或其盐，其中L是-CR5R6-CH(NRbRc)-，其中R6、Rb和Rc是H，并且R5是H或C1-C6烷基。
12.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物或其盐，其中L是
Figure FDA0002610488500000041
其中*表示与Y-X-部分的连接点，**表示与分子其余部分的连接点。
13.根据权利要求12所述的化合物或其盐，其中L是
Figure FDA0002610488500000042
其中*表示与Y-X-部分的连接点，并且**表示与分子其余部分的连接点。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R12取代的6至10元杂芳基或任选地被R13取代的3至12元杂环基。
15.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R11取代的C6-C9芳基，其中当Y是苯基或萘基时，关于Y的所述苯基或萘基被至少一个R11取代。
16.根据权利要求15所述的化合物，其中Y是被1至5个R11取代的苯基，所述R11独立地选自卤素、三卤代甲基、氰基和-C(＝O)NH2。
17.根据权利要求15所述的化合物，其中Y是未被取代的2,3-二氢-1H-茚-2-基。
18.根据权利要求14所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R12取代的6至10元杂芳基，其中当L是*-NH-CH2-**并且Y是任选地被取代的喹啉基时，关于Y的所述任选地被取代的喹啉基在2位、3位、5位、6位、7位或8位处连接至母结构。
19.根据权利要求18所述的化合物或其盐，其中：
(a)L是*-CH2-CH(NH2)-**或*-CH(CH3)-CH(NH2)-**并且Y是任选地被R12取代的喹啉-4-基或
(b)L是*-NH-CH2-**，Y是任选地被R12取代的喹啉-6-基，所述R12独立地选自-OH和苯基。
20.根据权利要求18所述的化合物或其盐，其中Y是在3位中被R12取代的吡啶-4-基。
21.根据权利要求20所述的化合物或其盐，其中R12是任选地被C1-C6烷基取代的吡啶基。
22.根据权利要求20所述的化合物或其盐，其中R12是任选地被C1-C6烷基取代的吲哚基。
23.根据权利要求20所述的化合物或其盐，其中R12是任选地被C1-C6烷基、卤素或C1-C6烷氧基取代的苯基。
24.根据权利要求18所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基或C5-C10环烷基稠合的嘧啶-4-基，其中C6-C14芳基和C5-C10环烷基任选地被R12取代。
25.根据权利要求24所述的化合物或其盐，其中Y是与C6-C14芳基稠合的嘧啶-4-基，其中C6-C14芳基任选地被R12取代。
26.根据权利要求24所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被取代的吡啶-3-基、未被取代的喹唑啉-4-基或未被取代的6,7-二氢-5H-环戊并[d]嘧啶-4-基。
27.根据权利要求18所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基稠合的2H-吡喃-2-酮-5-基，所述C6-C14芳基任选地被R12取代。
28.根据权利要求27所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被卤素取代的1H-异色烯-1-酮-4-基。
29.根据权利要求18所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R12取代并且任选地与C6-C14芳基或5至10元杂环基稠合的吡啶-2(1H)-酮-5-基，所述C6-C14芳基或5至10元杂环基彼此独立地并且在每次出现时独立地任选被R12取代。
30.根据权利要求29所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被C1-C6烷基或C6-C14芳基取代的吡啶-2(1H)-酮-5-基。
31.根据权利要求29所述的化合物或其盐，其中Y是未被取代的7,8,9,10-四氢吡啶并[1,2-a]氮杂环庚三烯-4(6H)-酮-1-基。
32.根据权利要求29所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被卤素、C1-C6烷基、C6-C14芳基或C3-C8环烷基取代的异喹啉-1(2H)-酮-4-基。
33.根据权利要求14所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被R13取代的3至12元杂环基。
34.根据权利要求33所述的化合物或其盐，其中Y是未被取代的异吲哚啉-2-基。
35.根据权利要求33所述的化合物或其盐，其中Y是任选地被C1-C6烷基或C6-C14芳基取代的哌啶-2-酮-5-基。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的化合物或其盐，其中m＝n＝1。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或其盐，其中R是氢。
38.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中-X-L-部分选自由以下组成的组：
Figure FDA0002610488500000061
Figure FDA0002610488500000062
其中*表示与所述Y部分的连接点，并且**表示与分子其余部分的连接点。
39.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
40.一种治疗有需要个体的由成纤维细胞激活蛋白(FAP)介导的疾病或病症的方法，所述方法包含向所述个体施用治疗有效量的根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物。
41.一种治疗有需要个体的以增生、组织重构、慢性炎症、肥胖、葡萄糖不耐或胰岛素不敏感为特征的疾病或病症的方法，所述方法包含向所述个体施用治疗有效量的根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物。
42.根据权利要求40或41所述的方法，其中所述疾病或病症是乳癌、结肠直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、黑素瘤、纤维肉瘤、骨肉瘤、结缔组织肉瘤、肾细胞癌、巨大细胞癌、鳞状细胞癌、白血病、皮肤癌、软组织癌、肝癌、胃肠癌或腺癌。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述疾病或病症是转移性肾癌、慢性淋巴细胞性白血病、胰腺腺癌或非小细胞肺癌。
44.根据权利要求40或41所述的方法，其中所述疾病或病症是纤维化疾病、创伤愈合、瘢痕疙瘩形成、骨关节炎、类风湿性关节炎以及涉及软骨退化的相关病症、动脉粥样硬化疾病、克罗恩氏病或II型糖尿病。
45.一种减少有需要个体的肿瘤生长、肿瘤增殖或肿瘤形成的方法，所述方法包含向所述个体施用根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物。
46.一种抑制个体体内的FAP的方法，所述方法包含向所述个体施用根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物。
47.一种抑制细胞中的FAP的方法，所述方法包含向所述细胞施用或递送根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物、或前述的代谢物。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述细胞是成纤维细胞。
49.根据权利要求47或48所述的方法，其中所述细胞是癌症相关成纤维细胞(CAF)或反应性基质成纤维细胞。
50.一种抑制肿瘤中的FAP的方法，所述方法包含向所述肿瘤施用或递送根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物、或前述的代谢物。
51.一种抑制血浆中的FAP的方法，所述方法包含向所述血浆施用或递送根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物、或前述的代谢物。
52.根据权利要求46至51中任一项所述的方法，其中抑制FAP包含抑制FAP的内肽酶活性。
53.根据权利要求46至51中任一项所述的方法，其中抑制FAP包含抑制FAP的外肽酶活性。
54.一种增强个体的免疫反应的方法，所述方法包含施用(a)免疫检查点抑制剂以及(b)根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物。
55.一种增加个体体内FGF21的表达水平的方法，所述方法包含向所述个体施用根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物。
56.根据权利要求55所述的方法，所述方法另外包含施用FGF21表达的诱导剂。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述FGF21表达的诱导剂是PPARα激动剂。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述PPARα激动剂是贝特类或非诺贝特。
59.根据权利要求39所述的组合物，所述组合物用作人类或兽医学药剂。
60.一种根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或根据权利要求39所述的药物组合物在制造用于预防和/或治疗由FAP介导的病症或疾病的药剂中的用途。
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