CN111904878B - 一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用 - Google Patents

一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111904878B
CN111904878B CN202010836764.XA CN202010836764A CN111904878B CN 111904878 B CN111904878 B CN 111904878B CN 202010836764 A CN202010836764 A CN 202010836764A CN 111904878 B CN111904878 B CN 111904878B
Authority
CN
China
Prior art keywords
rose fermentation
fermentation liquor
rose
liposome containing
liposome
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010836764.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN111904878A (zh
Inventor
张启清
余海励
盛俊娇
孙绪友
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Jieshibao Daily Chemical Group Co ltd
Original Assignee
Shanghai Jieshibao Daily Chemical Group Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Jieshibao Daily Chemical Group Co ltd filed Critical Shanghai Jieshibao Daily Chemical Group Co ltd
Priority to CN202010836764.XA priority Critical patent/CN111904878B/zh
Publication of CN111904878A publication Critical patent/CN111904878A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111904878B publication Critical patent/CN111904878B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/14—Liposomes; Vesicles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/40—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing nitrogen
    • A61K8/42—Amides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/55—Phosphorus compounds
    • A61K8/553—Phospholipids, e.g. lecithin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/63—Steroids; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/005—Preparations for sensitive skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明涉及一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用。本发明中加入玫瑰发酵液，所述的玫瑰发酵液采用特定的方法制备而成，本发明的玫瑰发酵液黄酮、多糖含量均较高，并且能够调节皮肤头皮菌群，同时也含有色氨酸，能够起到舒缓抗敏皮肤的作用；本发明的脂质体通过添加复合磷脂提高了其包封稳定性，减少溢出，充分保护玫瑰发酵液，添加神经酰胺等原料可以增加皮肤的相容性，提高脂质体的透皮吸收性，本发明的各原料起到协同增效的作用，充分发挥玫瑰发酵液保湿抗衰功效，通过玫瑰发酵液与各原料的协同作用，起到促渗和重塑皮肤屏障作用；本发明所述的脂质体的制备方法简单，生产成本低，可以大规模生产。

Description

一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用。
背景技术
玫瑰不仅具有观赏价值，也具有一定的营养和药用价值，其中含有许多对人体有益的活性成分(如多糖、黄酮类物质、芳香油等)。在玫瑰活性物提取中常采用的蒸馏法和浸提法不仅所得的活性物有限而且会产生大量废弃物，所以采用更环保的发酵工艺可以充分提取玫瑰中的有效成分。CN109806201A公开了通过玫瑰发酵工艺可以显著提高美白、抗皱及保湿作用。但玫瑰发酵液中多糖等成分存在稳定性差、生物利用度低、易被降解及细胞穿透力差等缺点，限制了其功效的发挥。
皮肤角质层脂质是由神经酰胺(40-50％)、胆固醇(25％)、游离脂肪酸(25％)和胆固醇硫酸酯(5％)和少量磷脂组成的复杂混合物。研究发现，随着年龄的增加，皮肤角质层中的神经酰胺、胆固醇、脂肪酸等成分减少。皮肤屏障减弱、受损以及皮肤疾病的产生与这些成分含量减少息息相关。脂质体由双亲性分子组成，与皮肤角质有很好的相容性，亲肤性良好。而且在化妆品中添加脂质体能够修复受损肌肤。而且脂质体稳定性好，可以避免光热等对活性物的影响；其次安全性高，不易引发皮肤刺激性。CN110960454A公开了怀菊花提取物脂质体能够明显提高怀菊花提取物在皮肤中的贮存量，提高其抗衰老功效。
传统脂质体的主要成分包括磷脂和胆固醇。神经酰胺脂质体是一种由神经酰胺、胆固醇、油酸和氢化磷脂组成的类皮肤膜。不仅可以充分发挥神经酰胺的保湿、维持皮肤屏障、抗衰老等功能，而且克服了因其疏水性强、透皮吸收差以及易受环境的缺陷。同时研究发现，由两种具有不同相变温度的磷脂组成的脂质体被证明具有较高的脂泡稳定性。因此，可以通过改变磷脂的组成可以有效地控制其屏障功能。
鉴于以上原因，特提出本发明。
发明内容
为了解决现有技术存在的以上问题，本发明提供了一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用，本发明制备的脂质体稳定性好，皮肤相容性好，通过各原料的协同作用，提高了透皮的吸收性，具有保湿抗衰老的作用。
本发明的第一目的，提供了一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，包括如下步骤：
(a)称取复合磷脂100-600份、胆固醇50-300份和神经酰胺30-100份到旋蒸瓶溶于适量无水乙醇中，超声至完全溶解；
(b)将所述的无水乙醇用旋转蒸发仪蒸发，旋蒸瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜；
(c)将10-20份玫瑰发酵液和100-200份pH值为7.4的磷酸缓冲溶液加入到所述旋蒸瓶中，混合均匀，在温度小于40℃下搅拌水化，超声处理得到含有玫瑰发酵液的脂质体。
进一步的，步骤(a)中复合磷脂为大豆磷脂和氢化大豆磷脂的混合物，优选的，大豆磷脂和氢化大豆磷脂的质量比为10:1-5:1。
进一步的，步骤(b)中蒸发温度为55-65℃，蒸发时间为1.5-2.5h，转速为50-80rpm。
进一步的，步骤(c)中水化时间为2-4h，超声时间为10-30min。
本发明的大豆磷脂、胆固醇选自上海艾韦特医药科技有限公司。
进一步的，所述的玫瑰发酵液的制备方法包括如下步骤：
(1)玫瑰发酵基质制备：将干玫瑰花蕾粉碎后过筛，并加水配成混合液，灭菌后得到玫瑰发酵基质；
(2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到固体活化培养基表面，于37℃恒温倒置培养15～20h，得到活化菌株；
(3)混合发酵：将所述活化菌株扩大培养后进行混合得到混合菌液，将所述混合菌液以1.5％～2.5％的质量百分含量加入玫瑰发酵基质中，于40～45℃摇床发酵培养45～50h，得到初始发酵液；
(4)发酵后处理：对所述初始发酵液依次进行灭菌、菌体破碎和过滤后，得到所述玫瑰发酵液。
进一步的，步骤(1)中，所述混合液的质量浓度为10％～15％。
进一步的，步骤(1)中，筛网的目数为100～200目，灭菌为将混合液在121℃下灭菌15min，或对混合液进行软包装后，用水作为介质，在600MPa，25℃下进行超高压灭菌。超高压灭菌的温度较低，可保护多酚、黄酮类物质，但超高压灭菌成本高，可根据实际情况选择灭菌方式。
菌种活化的目的是使保藏菌种的活性得以恢复，同时恢复其优良的生产性能。菌种选自双歧杆菌、芽孢杆菌、乳杆菌、酿酒酵母中的至少一种。
进一步的，步骤(2)中，所述菌种选自青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271、酿酒酵母菌CICC 1252中的至少一种。
进一步的，所述菌种为纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC20271和酿酒酵母菌CICC 1252的混合菌种，步骤(3)中扩大培养后的所述纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC1252种子液的质量比例为1:(2～5):(2～5)。
申请人研究发现，当发酵菌种满足上述配比时，得到的玫瑰发酵液中含有较多的黄酮和糖类物质。
进一步的，菌种活化方式为：用灭菌竹签蘸取少量的菌种，按照平板划线法在固体活化培养基上划线，于37℃的恒温培养箱中倒置培养15～20h，得到活化菌株。由于双歧杆菌和乳杆菌需要无氧条件活化，芽孢杆菌和酿酒酵母需要有氧活化，可以将双歧杆菌、乳杆菌、芽孢杆菌和酿酒酵母分别接种于不同的固体活化培养基，然后在适宜的条件下培养，待混合发酵步骤将上述活化菌株加入玫瑰发酵基质中即可。
进一步的，步骤(2)中，所述活化培养基为MRS培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，pH值6.2±0.2。
不同菌种的扩大培养方法如下：
[1]对于酿酒酵母菌CICC 1252，固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到酿酒酵母种子液。
[2]对于纳豆芽孢杆菌CICC 10262，固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，轻微摆动接种针，使菌体分散于液体培养基内，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到纳豆芽孢杆菌种子液。
[3]对于青春双歧杆菌CICC 6175，由于在无氧条件进行活化，需要对其进行耐氧训练。具体为固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15％，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到青春双歧杆菌种子液；
[4]对于保加利亚乳杆菌CICC 20271，由于在无氧条件进行活化，需要对其进行耐氧训练。具体为固体培养基活化后，用接种针或接种环从固体培养基菌落中挑取菌落，放入装有液体培养基的三角瓶中，静置培养24h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为5％，37℃，20rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为10％，37℃，60rpm培养12h；吸取上步骤菌液再接种到装有液体培养基的三角瓶中，接种量为15％，37℃，120rpm培养，直到菌种数量达到1*10^9cfu/mL时结束，得到保加利亚乳杆菌种子液。
进一步的，步骤(2)中，所述活化培养基还包括海藻多糖，所述海藻多糖的加入量为3g/L。
所述海藻多糖可作为碳源加入，有利于菌株活化，对于菌落直径、形态、菌体体积以及长出的菌落时间都有正向效果。
进一步的，步骤(3)中采用摇床培养可以使菌种与发酵底物充分接触。
进一步的，步骤(3)中，所述摇床转速为100～150rpm。
进一步的，步骤(1)和(4)中，所述灭菌为将所述初始发酵液在121℃下灭菌15min，或对其在600MPa，25℃下进行超高压灭菌；
步骤(4)中，采用高压匀浆机破碎菌体，压力设定为100MPa，匀浆3～5次，出口温度为25℃。
过滤选自离心分离、超滤膜过滤、微滤膜过滤、反渗透过滤中的一种，或者在灭菌后破碎菌体无需进行过滤，目的是除去悬浮物，防止沉降。
采用高压匀浆机破碎菌体，目的是破碎发酵菌及部分玫瑰细胞，使胞内物质溶出，玫瑰发酵液的成分更丰富。高压匀浆压力设定为100MPa，匀浆3～5次，出口温度为25℃。也可采用超声破碎菌体。
本发明的第二目的，提供了所述的方法制备的脂质体在化妆品中的应用。
本发明的制备的脂质体可以应用在凝胶中，也可以应用在膏霜和乳液中。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明中加入玫瑰发酵液，所述的玫瑰发酵液采用特定的方法制备而成，本发明的玫瑰发酵液黄酮、多糖含量均较高，并且能够调节头皮菌群，同时也含有色氨酸，能够起到舒缓抗敏皮肤的作用；
(2)本发明的脂质体通过添加复合磷脂提高了其包封稳定性，减少溢出，充分保护玫瑰发酵液，添加神经酰胺等原料可以增加皮肤的相容性，提高脂质体的透皮吸收性，本发明的各原料起到协同增效的作用，充分发挥玫瑰发酵液保湿抗衰功效，通过玫瑰发酵液与各原料的协同作用，起到促渗和重塑皮肤屏障作用；
(3)本发明所述的脂质体的制备方法简单，生产成本低，可以大规模生产。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
制备例玫瑰发酵液的制备
制备例1
(1)玫瑰发酵基质制备：将干玫瑰花蕾粉碎后过100目筛，并加水配成质量浓度为10％的混合液，121℃下灭菌15min，得到玫瑰发酵基质。
(2)菌种活化：用灭菌竹签蘸取纳豆芽孢杆菌CICC 10262，按照平板划线法在固体活化培养基上划线，于37℃的恒温培养箱中倒置有氧培养15～20h，得到活化纳豆芽孢杆菌CICC 10262菌株。
用灭菌竹签蘸取保加利亚乳杆菌CICC 20271，按照平板划线法在固体活化培养基上划线，于37℃的恒温培养箱中倒置无氧培养15～20h，得到活化保加利亚乳杆菌CICC20271菌株。
用灭菌竹签蘸取酿酒酵母菌CICC 1252，按照平板划线法在固体活化培养基上划线，于37℃的恒温培养箱中倒置有氧培养15～20h，得到活化酿酒酵母菌CICC 1252菌株。
活化培养基为MRS培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1g/L，琼脂20g/L，pH值6.2±0.2。
(3)混合发酵：将活化菌株分别扩大培养，以纳豆芽孢杆菌CICC10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252的种子液质量比例为1:3:3混合，把混合菌液按照2％的质量百分含量加入玫瑰发酵基质中，于40℃，120rpm摇床发酵培养48h，得到初始发酵液。
(4)发酵后处理：对初始发酵液在121℃下灭菌15min后，使用High PressureHomogenizer高压匀浆机进行菌体破碎，压力设定为100MPa，匀浆3次，出口温度为25℃，然后离心分离取上清液，得到玫瑰发酵液。
制备例2～12改变某一项实验参数，其它操作步骤和测试过程同制备例1，具体设置方式见表1。制备例中的青春双歧杆菌CICC 6175、纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271、酿酒酵母菌CICC 1252均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
对比例1中的玫瑰提取液的提取方法为：将干玫瑰花蕾粉碎后过100目筛，并加水配成质量浓度为10％的混合液，121℃下灭菌15min，然后在40℃下保温48h，再在121℃下灭菌15min，离心分离取上清液，即得到清水提取液。
对比例2中的玫瑰发酵液的制备方法为：将步骤2)中的活化培养基替换为沙氏葡萄糖液体培养基。
表1
Figure BDA0002639996710000081
营养成分检测
对于制备例1至12制备得到的玫瑰发酵液，以及对比例1和2制备得到的玫瑰提取液，采用分光光度法测定总黄酮含量；参照GB/T 5009.7-2008测定总糖含量；参照GB/T5009.124-2003测定氨基酸含量。测试结果见表2和表3。
表2玫瑰发酵液各成分含量
Figure BDA0002639996710000091
表3玫瑰发酵液氨基酸含量
Figure BDA0002639996710000092
上述实验结果表明，比较制备例1和对比例1可知，与传统玫瑰水提物相比，本发明的玫瑰发酵液含有更多的活性物质，例如多糖、黄酮和氨基酸。
比较制备例1～6可知，采用纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC20271和酿酒酵母菌CICC 1252作为发酵菌种，且三者质量比例满足1:(2～5):(2～5)时，玫瑰发酵液中的活性物质含量最高。
比较制备例1和7～9可知，如果在此基础上向活化培养基和扩大培养基中均加入海藻多糖，能够进一步提升活性物质含量。但将海藻多糖替换为葡萄糖或米粉则不具有相应效果，原因可能是海藻多糖刺激菌种表达了某些基因，使其分解、合成活性物质的能力提升，并且使菌生长状态更加旺盛，活力更强。
比较制备例1和对比例2可知，采用固体活化培养基与液体活化培养基相比，能获得更多的活性物质。并且与液体培养基相比，固体培养基单位体积的质量更轻，而且对生产过程中所需设备要求较低。大量培育液体菌种需要在大型液体发酵罐中进行，对场地、能源(蒸汽)的需求较高；而使用固体培养基培育菌种，仅需灭菌设备即可，在条件较低的情况下即可生产。
抑菌实验
(1)将表皮葡萄球菌ATCC12228接种于营养肉汤培养基，金黄色葡萄球菌ATCC6538接种于营养肉汤培养基，痤疮丙酸杆菌ATCC6919接种于GAM培养液，糠秕马拉色菌ATCC44344培养于橄榄油培养基，短双歧杆菌ATCC15700和唾液乳杆菌ATCC11741培养于TPY培养基，大肠杆菌ATCC25312培养于LB培养基。
(2)每种培养液各取10mL，各2份，分别加入0.1mL制备例1的玫瑰发酵液和0.1mL去离子水作为空白对照。
(3)将表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌置于37℃下进行24h需氧培养，将痤疮丙酸杆菌、糠秕马拉色菌、短双歧杆菌和唾液乳杆菌置于37℃下进行48h厌氧培养。
(4)用稀释平板法测定培养前后培养液中各种菌的数目，测试结果如表4所示。
表4
Figure BDA0002639996710000111
以3.1*10^6为例，含义为3.1×106。
表4数据可以看出，加入玫瑰发酵液培养24h后，与未加入玫瑰发酵液培养的糠秕马拉色菌的数量相比，下降了1个数量级，金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的数量也被抑制了。表明将玫瑰发酵液应用在脂质体中可以保护皮肤的有益菌群，抑制皮肤上有害菌群，从而调节皮肤菌群到平衡状态，加入玫瑰发酵液作为益生元和后生元能够调节菌群和皮肤，达到舒敏镇定皮肤的功效。另外加入玫瑰发酵液培养，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌这类有害菌数量比不加入玫瑰发酵液的空白组降低很多，但短双歧杆菌、唾液乳杆菌这类有益菌比不加入玫瑰发酵液的空白组增加了。说明本发明的玫瑰提取液可以作用于肠道微生物，特别是能够选择性抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有害菌的生长，同时促进短双歧杆菌、唾液乳杆菌这类有益菌的生长，从而调节肠道菌群，使其达到健康平衡的状态。
实施例1
利用制备例1制备的玫瑰发酵液制备脂质体，所述的脂质体的制备方法包括如下步骤：
(a)将复合磷脂100g、胆固醇300g和神经酰胺30g到旋蒸瓶溶于适量无水乙醇中，超声至完全溶解，其中，复合磷脂为大豆磷脂和氢化大豆磷脂的混合物，大豆磷脂和氢化大豆磷脂的质量比为10:1；
(b)将所述的无水乙醇用旋转蒸发仪蒸发，旋蒸瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜，蒸发温度为55℃，蒸发时间为2.5h，转速为50rpm；
(c)将10g玫瑰发酵液和200g pH值为7.4是磷酸缓冲溶液加入到所述旋蒸瓶中，混合均匀，在温度小于40℃下搅拌水化，超声处理得到含有玫瑰发酵液的脂质体，水化时间为2h，超声时间为30min。
实施例2
利用制备例11制备的玫瑰发酵液制备脂质体，所述的脂质体的制备方法包括如下步骤：
(a)将复合磷脂350g、胆固醇175g和神经酰胺65g到旋蒸瓶溶于适量无水乙醇中，超声至完全溶解，其中，复合磷脂为大豆磷脂和氢化大豆磷脂的混合物，大豆磷脂和氢化大豆磷脂的质量比为7.5:1；
(b)将所述的无水乙醇用旋转蒸发仪蒸发，旋蒸瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜，蒸发温度为60℃，蒸发时间为2h，转速为75rpm；
(c)将15g玫瑰发酵液和150g pH值为7.4的磷酸缓冲溶液加入到所述旋蒸瓶中，混合均匀，在温度小于40℃下搅拌水化，超声处理得到含有玫瑰发酵液的脂质体，水化时间为3h，超声时间为20min。
实施例3
利用制备例12制备的玫瑰发酵液制备脂质体，所述的脂质体的制备方法包括如下步骤：
(a)将复合磷脂100g、胆固醇300g和神经酰胺100g到旋蒸瓶溶于适量无水乙醇中，超声至完全溶解，其中，复合磷脂为大豆磷脂和氢化大豆磷脂的混合物，大豆磷脂和氢化大豆磷脂的质量比为10:1；
(b)将所述的无水乙醇用旋转蒸发仪蒸发，旋蒸瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜，蒸发温度为55℃，蒸发时间为2.5h，转速为50rpm；
(c)将20g玫瑰发酵液和100g pH值为7.4的磷酸缓冲溶液加入到所述旋蒸瓶中，混合均匀，在温度小于40℃下搅拌水化，超声处理得到含有玫瑰发酵液的脂质体，水化时间为2h，超声时间为30min。
实施例4
利用制备例7制备的玫瑰发酵液制备脂质体，其他的原料及制备方法均与实施例1相同。
对比例3
本对比例制备的脂质体的方法与实施例1相同，不同之处，原料中不添加玫瑰发酵液。
对比例4
本对比例制备的脂质体的方法与实施例1相同，不同之处，玫瑰发酵液替换为对比例1制备的提取液。
试验例1透皮吸收试验
将实施例1-4和对比例3-4制备的脂质体进行透皮吸收试验测试，每组选定10个小鼠皮肤组织进行测定，结果取平均值，如表5所示。
测定方法：选择离体小鼠皮肤组织(浸泡于生理盐水中，冰箱内冷藏，24h内使用，使用前检查皮肤的完整性)，把转子放进10mL扩散池内，PBS作为接收液，将小鼠腹部皮肤固定于扩散池口，真皮层一侧接触扩散池，在供药池中加入10mL所测定的脂质体，将接收池置于36℃恒温水域，20r/min下进行磁力搅拌。加样平衡10min后开始计时，在24h从扩散池中取样1mL测定并补足等温PBS。
表5
Figure BDA0002639996710000141
从表5可以看出，采用本发明的方法制备的脂质体的透皮吸收率较高，且在玫瑰发酵液制备过程中向活化培养基和扩大培养基中均加入海藻多糖，能够进一步提升活性物质含量，进而提高脂质体的透皮吸收率，不添加玫瑰发酵液或采用水提玫瑰提取液的脂质体透皮吸收率明显降低。
试验例2
分别测定实施例1-4和对比例3-4制备的脂质体的包封率，结果如表6所示。
表6
Figure BDA0002639996710000142
从表6中可以看出，采用本发明的方法制备的脂质体的包封率较高，且在玫瑰发酵液制备过程中向活化培养基和扩大培养基中均加入海藻多糖，能够提高包封率，不添加玫瑰发酵液或采用水提玫瑰提取液的脂质体的包封率明显降低。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (11)

1.一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)称取复合磷脂100-600份、胆固醇50-300份和神经酰胺30-100份到旋蒸瓶溶于适量无水乙醇中，超声至完全溶解；
(b)将所述的无水乙醇用旋转蒸发仪蒸发，旋蒸瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜；
(c)将10-20份玫瑰发酵液和100-200份pH值为7.4的磷酸缓冲溶液加入到所述旋蒸瓶中，混合均匀，在温度小于40℃下搅拌水化，超声处理得到含有玫瑰发酵液的脂质体；
所述的玫瑰发酵液通过如下方法制备而成：
(1)玫瑰发酵基质制备：将干玫瑰花蕾粉碎后过筛，并加水配成混合液，灭菌后得到玫瑰发酵基质；
(2)菌种活化：采用平板划线法将菌种分别接种到固体活化培养基表面，于37℃恒温倒置培养15～20h，得到活化菌株；
(3)混合发酵：将所述活化菌株扩大培养后进行混合得到混合菌液，将所述混合菌液以1.5％～2.5％的质量百分含量加入玫瑰发酵基质中，于40～45℃摇床发酵培养45～50h，得到初始发酵液；
(4)发酵后处理：对所述初始发酵液依次进行灭菌、菌体破碎和过滤后，得到所述玫瑰发酵液；
其中，所述菌种为纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC
20271和酿酒酵母菌CICC 1252的混合菌种，步骤(3)中扩大培养后的所述纳豆芽孢杆菌CICC 10262、保加利亚乳杆菌CICC 20271和酿酒酵母菌CICC 1252种子液的质量比例为1:(2～5):(2～5)。
2.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(a)中复合磷脂为大豆磷脂和氢化大豆磷脂的混合物。
3.根据权利要求2所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，大豆磷脂和氢化大豆磷脂的质量比为10:1-5:1。
4.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(b)中蒸发温度为55-65℃，蒸发时间为1.5-2.5h，转速为50-80rpm。
5.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(c)中水化时间为2-4h，超声时间为10-30min。
6.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述混合液的质量浓度为10％～15％。
7.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述活化培养基为MRS培养基，包括牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L，酵母粉4g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2g/L，柠檬酸三铵2g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-801g/L，琼脂20g/L，pH值6.2±0.2。
8.根据权利要求7所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述活化培养基还包括海藻多糖，所述海藻多糖的加入量为3g/L。
9.根据权利要求1所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述摇床转速为100～150rpm；
步骤(4)中，采用高压匀浆机破碎菌体，压力设定为100MPa，匀浆3～5次，出口温度为25℃。
10.根据权利要求9所述的含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法，其特征在于，所述灭菌为将所述初始发酵液在121℃下灭菌15min，或对其在600MPa，25℃下进行超高压灭菌。
11.一种权利要求1-10任意一项所述的方法制备的脂质体在制备化妆品中的应用。
CN202010836764.XA 2020-08-19 2020-08-19 一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用 Active CN111904878B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010836764.XA CN111904878B (zh) 2020-08-19 2020-08-19 一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010836764.XA CN111904878B (zh) 2020-08-19 2020-08-19 一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111904878A CN111904878A (zh) 2020-11-10
CN111904878B true CN111904878B (zh) 2022-06-28

Family

ID=73279111

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010836764.XA Active CN111904878B (zh) 2020-08-19 2020-08-19 一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111904878B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115569229B (zh) * 2022-08-30 2023-12-22 中南大学湘雅三医院 搭载多种后生元成分的皮肤软组织保护材料及其制备方法
CN116077389A (zh) * 2022-12-23 2023-05-09 深圳技术大学 一种含有植物发酵液的脂质体及其制备方法与应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110200275A (zh) * 2019-06-27 2019-09-06 湖北瑞晟生物有限责任公司 益生菌发酵玫瑰花渣产品及其制备

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110200275A (zh) * 2019-06-27 2019-09-06 湖北瑞晟生物有限责任公司 益生菌发酵玫瑰花渣产品及其制备

Also Published As

Publication number Publication date
CN111904878A (zh) 2020-11-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111904878B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用
CN111789790B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的美白乳液及其制备方法
KR20210088408A (ko) 락토바실러스 플란타럼 및 그의 용도
CN108685006A (zh) 一种欧米伽3固体饮料
CN106282264A (zh) 一种具有生发作用的槐糖脂的生产方法
CN105030950B (zh) 防治高血脂的微生态制剂及其制备方法和应用
CN111904908B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的精华液及其制备方法
CN111904909B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的去屑头皮精华及其制备方法
CN111789778B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的面霜及其制备方法
CN111920048B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的胶囊及其制备方法
CN116376731B (zh) 一种异常威克汉姆酵母菌在制备青刺果提取物中的应用
CN111870552A (zh) 一种含有玫瑰发酵液的舒敏面膜及其制备方法
CN115569096B (zh) 一种山茶花发酵滤液及发酵工艺
CN112516018B (zh) 一种具有美白、抗衰、保湿、排毒功效的富硒绿豆发酵液及其面膜组合物
CN111870550A (zh) 一种含有玫瑰发酵液的舒敏防晒霜及其制备方法
CN111956546B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的去屑洗发水及其制备方法
CN111789801B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的保湿沐浴露及其制备方法
CN105687110A (zh) 一种消除妊娠纹植物提取组合物及其在化妆品中的应用
CN107898677A (zh) 一种植物护肤酵素的制备方法
Jin et al. Enhanced extraction genistein from pigeon pea [Cajanus cajan (L.) Millsp.] roots with the biotransformation of immobilized edible Aspergillus oryzae and Monacus anka and antioxidant activity evaluation
CN107737365A (zh) 一种激光治疗术后皮肤修复生物纤维素敷料及其制备方法
CN112772925A (zh) 一种胶原蛋白肽和琼胶寡糖粉末制品及其应用
CN111888293B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的保湿爽肤水及其制备方法
CN107752039A (zh) 一种益生菌菌剂的制备方法
CN112155199B (zh) 一种含有灵芝子实体孢子粉发酵液的胶囊及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Address after: Room 1045, building 3, No. 800, North Ring Road, Zhuangxing Town, Fengxian District, Shanghai 201402

Applicant after: Shanghai jieshibao Daily Chemical Group Co.,Ltd.

Address before: Room 1045, building 3, No. 800, North Ring Road, Zhuangxing Town, Fengxian District, Shanghai, 201499

Applicant before: Shanghai Yibao cosmetics Group Co.,Ltd.

CB02 Change of applicant information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
PP01 Preservation of patent right

Effective date of registration: 20230418

Granted publication date: 20220628

PP01 Preservation of patent right