CN115569096B - 一种山茶花发酵滤液及发酵工艺 - Google Patents

一种山茶花发酵滤液及发酵工艺 Download PDF

Info

Publication number
CN115569096B
CN115569096B CN202211216309.5A CN202211216309A CN115569096B CN 115569096 B CN115569096 B CN 115569096B CN 202211216309 A CN202211216309 A CN 202211216309A CN 115569096 B CN115569096 B CN 115569096B
Authority
CN
China
Prior art keywords
camellia
fermentation
lactobacillus
filtrate
parts
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202211216309.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115569096A (zh
Inventor
林朝栋
徐梦漪
黄福山
叶海敏
何笙丽
郑跃萍
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Youke Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Guangzhou Youke Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Youke Biotechnology Co ltd filed Critical Guangzhou Youke Biotechnology Co ltd
Priority to CN202211216309.5A priority Critical patent/CN115569096B/zh
Publication of CN115569096A publication Critical patent/CN115569096A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115569096B publication Critical patent/CN115569096B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728—Fungi, e.g. yeasts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及本发明涉及植物发酵液领域，具体涉及一种山茶花发酵滤液及发酵工艺。所述山茶花发酵液的制备原料包括：山茶花、乳酸菌、低聚果糖、和水。本发明制备的山茶花发酵滤液含有丰富的茶多酚，黄酮等生物小分子天然营养物质，抗氧化性及抗皱性强，制备原料简单，工艺安全环保，过程可控，应用性强。

Description

一种山茶花发酵滤液及发酵工艺
技术领域
本发明涉及植物发酵液领域，具体涉及一种山茶花发酵滤液及发酵工艺。
背景技术
山茶(Camellia japonica Linn.)，俗称山茶花，古名海石榴，隶属于山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)自三国时代有记载的山茶栽培以来，山茶花在我国已经有1800多年的栽培历史，我国是世界上最早将茶花作为观赏植物的国家。其中，红山茶作为我国山茶属的特有种，它是一种优良的红山茶种，具有观赏、油用、药用价值。
红山茶花中蕴含的黄酮、多酚等成分都比国外的红山茶花含量高。更有相关数据进一步指出，在中国高山上生长的红山茶花所含的多酚含量超过5％，黄酮含量超过了7％；其他活性物质含量高10％左右，不仅具有观赏价值，而且护肤价值也更为高，传统的工艺方法多数都要通过酸碱、酶、超声等处理山茶花，再经过有机溶液萃取提纯得到，但这些方法会影响总多酚的组成和结构，并且不利于山茶花再护肤以及药用方面的应用。
现有技术中专利号为CN202110877216.6的文件中公开了一种用于山茶花多酚的提取方法，采用由丙酮、生物酶、冰醋酸和水制得的提取液和吸附剂提取山茶花中的多酚，并用饱和正丁醇和乙酸乙酯进行萃取，再经过浓缩干燥制得；专利号为CN201710612581.8的文件中公开了一种种西南山茶花中茶多酚的制备方法，该方法以干燥的西南山茶花为原料，以50～80％的丙酮水溶液为溶剂进行回流提取，提取液浓缩干燥后转溶于水、过滤，滤液经DM130大孔树脂吸附后，用蒸馏水洗脱杂质，再以浓度为20～60％乙醇溶液洗脱，采集乙醇脱液，浓缩干燥后得西南山茶花的茶多酚产品。
上述方法中均使用有机溶剂，以及蒸馏萃取的方法来提取山茶花中的多酚，最终制得产品中往往含有部分有机溶剂，不利于后续在化妆品等方面的应用。
发明内容
基于此，本申请通过提供一种山茶花发酵滤液及发酵工艺，通过使用乳酸菌群发酵工艺的方式，降解产生更多小分子活性成分，得到富含茶多酚、总黄酮及小分子天然营养物质等的发酵滤液，可迅速渗透肌底，显著改善细纹与毛孔，提升肌肤弹性，抵御并修护肌肤初老，并且制备过程中不使用有机溶剂，安全环保，应用性更强。
本发明第一个方面提供了一种山茶花发酵滤液，制备原料包括：山茶花，乳酸菌，低聚果糖和水。
在一些优选的方案中，所述乳酸菌的接种量是山茶花的0.5-5倍。
进一步优选的，所述乳酸菌的接种量是山茶花的0.83倍。
本发明采用乳酸菌的接种量是山茶花的0.83倍，保证了山茶花滤液中活性物质的含量及纯度。本申请人推测：当乳酸菌的接种量过大时，会使得体系中的营养物质消耗过快，同时产生大量的副产物，导致部分乳酸菌因缺乏能量而生长受限，提前进入衰亡期，当接种量过少时，乳酸菌繁殖基数少，发酵效果低，发酵液中产生的活性物质少，降低了山茶花发酵液的功效。本申请人通过实验发现，当乳酸菌接种量是山茶花的0.83倍时，制得的山茶花滤液抗氧化性能最强。
在一些优选的方案中，所述乳酸菌选自乳杆菌、双岐杆菌、嗜热链球菌中的至少一种。
进一步优选的，所述乳杆菌的组成按重量份计，包括：植物乳杆菌1-2份、副干酪乳杆菌2-4份、鼠李糖乳杆菌1-2份、嗜酸乳杆菌1-2份。
本申请采用乳杆菌作为发酵的菌种，并且调控了其组成及比例，使得在发酵过程中产生含量高，纯度好的多酚和黄酮，提高了山茶花滤液的抗氧化能力和抗衰能力。本申请人推测：乳杆菌发酵能够促进生物活性物质的释放，从而提高其生物活性，并且植物乳杆菌发酵产生的某些特殊酶类如蛋白酶、淀粉酶等可将山茶花中的结合态多酚水解成游离态，同时乳杆菌在发酵过程中具有一定的抑菌作用，保证了山茶花滤液的纯度。
在一些优选的方案中，所述山茶花选自花蕾期的红山茶花、盛花期的红山茶花、落花期的红山茶中的至少一种。
进一步优选的，所述山茶花为花蕾期的红山茶花。
本发明采用花蕾期的红山茶花，保证了发酵的山茶花滤液具有更优异的抗氧化和抗炎效果。本申请人推测为：花蕾期的红山茶花花卉的胚囊、花粉囊逐渐形成，内部含有丰富的营养物质，使得在发酵工艺中经过乳酸菌降解会产生更为丰富的多酚、黄酮等小分子活性物质，制得的发酵滤液具有优异的抗氧化和抗炎效果。
在一些优选的方案中，所述山茶花的产地选自浙江大垟山、云南腾冲中的至少一种。
进一步优选的，所述山茶花的产地为浙江大垟山。
本发明采用浙江大垟山生产的红山茶花，使得制备的山茶花发酵液抗氧化能力最强。本人推测为：山茶花惧风喜阳，喜欢生长在地势高爽，空气流通，温暖湿润的地方，浙江大垟山地区平均海拔在800米以上，光照充足，土壤肥沃，年平均温度在14℃以下，适宜山茶花的生长，此地的山茶花富含更多的活性小分子物质，经过乳酸菌发酵后的提取液具有较强的抗氧化能力、DPPH·清除能力和羟基自由基清除能力。
进一步优选的，所述山茶花粉碎过40-80目筛。
在一些优选的方案中，所述山茶花发酵滤液，制备原料还包括：碳源、维生素、无机盐和防腐剂。
在一些优选的方案中，所述维生素选自维生素B族、维生素H、维生素E中的至少一种。
进一步优选的，所述维生素为维生素B族。
在一些优选的方案中，所述碳源选自单糖源、双糖源、多糖源、甘油、小分子醇、无机碳源中的至少一种。
在一些优选的方案中，所述单糖源为葡萄糖、果糖、半乳糖、甘油、小分子醇、无机碳源中的至少一种。
进一步优选的，所述碳源为葡萄糖。
在一些优选的方案中，所述无机盐为氯化钠。
在一些优选的方案中，所述防腐剂选自对羟基苯乙酮和1,2-己二醇中的至少一种。
在一些优选的方案中，所述山茶花、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖和水的重量份之比为(2-10)：(2-8)：(0.2-1)：(0.5-1)：(0.1-0.5)：(70-85)。
本发明第二个方面提供了一种山茶花发酵滤液的发酵工艺，包括以下步骤：
(1)山茶花粉碎过筛，得到山茶花细粉；
(2)将山茶花、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、水混合均匀，高压灭菌后，得到灭菌培养基，冷却备用；
(3)将乳酸菌扩大培养，得到二级种子液；
(4)将二级种子液转接到灭菌培养基中，在33±1℃条件下恒温培养发酵，以120-200r/min的搅拌速度摇床培养24～72小时，得到发酵液；
(5)发酵液高温处理后，加入防腐剂，混合均匀，得到山茶花发酵滤液。
在一些优选的方案中，所述步骤(3)的具体过程如下：将乳酸菌转接于MRS(De ManRogosa Sharpe)液体培养基中，在33±1℃下静置培养，得到一级种子液，再将一级种子液在MRS液体培养基中扩大培养，33±1℃下静置培养12-18小时，得到二级种子液。
在一些优选的方案中，所述步骤(5)的具体过程如下：发酵液进行第一次高温处理，冷却后进行超声，得到处理发酵液，再进行10um孔径滤板过滤去渣，得到澄清液体，澄清液体进行第二次高温处理，冷却后加入防腐剂，得到山茶花发酵滤液。
进一步优选的，所述第一次高温处理的处理温度为70-80℃。
进一步优选的，所述第二次高温处理的处理温度为80-90℃。
在本申请中，通过对发酵液进行两次高温处理，可以准确控制发酵的时间，确保了发酵液中茶多酚，总黄酮等生物小分子天然营养物质的含量和单一性，保证了山茶花发酵液的抗氧化性和自由基清除能力。本申请人推测：在第一次以70-80℃的温度处理山茶花发酵液后进行超声处理，可以迅速地使加入的乳酸菌失活，防止因发酵时间过长而产生酸性物质，影响山茶花发酵液的功效，第二次高温处理可以对发酵液进一步的纯化，并且消灭在制备过程可能滋生或掺入的微生物群，保证制得发酵液处于无菌环境，使发酵液具有一定的安全性和使用寿命。
在一些优选的方案中，所述步骤(4)中摇床培养时间为36小时。
本发明采用摇床培养时间为36小时，控制了乳酸菌发酵产生的活性物质的量及发酵的完全程度，保证了山茶花发酵液的功效。本申请人推测:发酵时间过长，虽然能使菌种充分生长、发酵，而对于乳酸菌来说，发酵时间过长又会使发酵液中产过多的酸类物质，酸度太高同样影响产品的品质；相反若发酵时间过短的话，则会使得菌种发酵不充分，发酵液中活性物质少，功效下降。
本发明第三个方面提供了一种山茶花发酵液在精华乳中的应用，所述山茶花发酵液在精华乳中的添加量为5-10wt％；进一步优选为0.1-10wt％。
在一些优选的方案中，所述精华乳按重量份计，包括：去离子水70-76份，甘油3-5份，丙二醇3-5份，聚丙烯酸钠0.01-0.1份，CARBOPOL UITREZ 21 0.1-0.3份，OLIVEM 10000.3-0.8份，聚二甲基硅氧烷0.1-0.5份，辛酸/癸酸甘油三酯0.1-1份，三乙醇胺0.1-0.3份，NMF-50氨基酸保湿剂1-5份，1，2-乙二醇0.2-1份，对羟基苯乙酮0.1-1份，UV Repair二裂酵母溶胞物1-10份，山茶花发酵液1-10份，芽孢杆菌发酵产物0.1-1份。
有益效果：
(1)本发明采用乳酸菌的接种量是山茶花的0.83倍，保证了山茶花滤液中活性物质的含量及纯度。
(2)本申请采用乳杆菌作为发酵的菌种，并且调控了其组成及比例，使得在发酵过程中产生含量高，纯度好的多酚和黄酮，提高了山茶花滤液的抗氧化能力和抗衰能力。
(3)本发明采用浙江大垟山生产的红山茶花，该地的山茶花具高含量的总多酚、总黄酮和总多糖，使得制备的山茶花发酵液抗氧化能力最强。
(4)本申请通过采用花蕾期的红山茶花，保证了山茶花发酵液中小分子活性物质的含量。
(5)在本申请中，通过对发酵液进行两次高温处理，可以准确控制发酵的时间，确保了发酵液中茶多酚，总黄酮等生物小分子天然营养物质的含量和单一性，保证了山茶花发酵液的抗氧化性和自由基清除能力。
(6)本申请将发酵温度控制在33±1℃，使得乳酸菌的活性保持最高，降解山茶花蕾产生更多的小分子活性成分，得到的发酵液抗氧化效果最佳。
(7)本发明采用摇床培养时间为36小时，控制了乳酸菌发酵产生的活性物质的量及发酵的完全程度，保证了山茶花发酵液的功效。
(8)本发明中通过加入一定比例的低聚果糖，使制得的山茶花发酵液具有保湿性和抗炎性，更易添加在化妆品中。
(9)本发明工艺原料简单安全，生产过程中不使用有机溶剂，应用性强，制得的山茶花发酵滤液不同于市面上的产品大多呈深棕色，而是透明微黄色，杂质少纯度高。
附图说明
图1为制得的山茶花滤液实物图；
图2为实施例1山茶花发酵滤液对DPPH·以及羟基自由基浓度的影响水平图；
图3为实施例1山茶花发酵滤液对培养的正常人真皮成纤维细胞内的活性氧(ROS)浓度的影响水平图；
图4为使用实施例1山茶花发酵滤液28天前后胶原蛋白III(密度)的合成模型对比图；
图5为志愿者使用实施例5％山茶花发酵液的山茶花精华乳28天前后眼部皱纹对比图；
图6为志愿者使用实施例5wt％山茶花发酵液的山茶花精华乳28天前后皮肤紧实度以及细纹改善程度图；
图7为志愿者使用实施例5wt％和10wt％山茶花发酵液的山茶花精华乳28天前后皮肤净弹性改善程度。
具体实施方式
实施例1
本实施例第一个方面提供了一种山茶花发酵滤液，制备原料包括：花蕾期的红山茶花、乳杆菌(Lactobacillus)、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、防腐剂和水，重量比为6：5：6：0.7：0.7：0.7：0.1：79，其中乳杆菌为乳杆菌二级种子液。
所述乳杆菌的组成按重量份计，包括：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)1.5份、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)3份、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)1.5份、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)1.5份。
所述植物乳杆菌购自山东鑫博瑞生物科技有限公司，型号为002。
所述副干酪乳杆菌购自西安兰杉生物科技有限公司，货号为LS-01-75。
所述鼠李糖乳杆菌购自山东维昂生物科技有限公司，型号为鼠李糖乳杆菌JYLR-005。
所述嗜酸乳杆菌购自西安泽郎生物科技有限公司，型号为ZL-94816。
所述花蕾期的红山茶花的产地选自浙江大垟山。
所述维生素为维生素B9。
所述碳源为葡萄糖。
所述无机盐为氯化钠。
所述低聚果糖购自山东百龙创园生物科技股份有限公司，型号为FOS-95S。
所述防腐剂为对羟基苯乙酮(CAS:99-93-4)和1,2-己二醇(CAS:6920-22-5)，重量比为1：5。
本实施例第二个方面提供了一种山茶花发酵滤液的发酵工艺，包括以下步骤：
(1)花蕾期的红山茶花粉碎过筛，得到65目山茶花花蕾细粉；
(2)将花蕾期的红山茶花、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、水混合均匀，在102.3℃，103.4kPa下维持30分钟灭菌后，得到灭菌培养基，冷却备用；
(3)将乳酸菌转接于150mL MRS液体培养基中，在33±1℃下静置培养，得到一级种子液，再将一级种子液在MRS液体培养基中扩大培养，33±1℃下静置培养15小时，得到二级种子液；
(4)将二级种子液转接到灭菌培养基中，在33±1℃条件下恒温培养发酵，以160r/min的搅拌速度摇床培养36小时，得到发酵液；
(5)发酵液进行第一次高温处理，处理温度为80℃，保持20分钟，冷却至25℃后进行超声，超声功率为450W，温度为40℃，时间为60分钟，得到处理发酵液，再进行10um孔径滤板过滤去渣，得到澄清液体，澄清液体进行第二次高温处理，处理温度为90℃，保持30分钟，冷却至25℃后加入防腐剂，得到山茶花发酵滤液。
所述MRS液体培养基的pH值(25℃)为6.2±0.2，组成成分包括(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉浸粉5.0，酵母浸粉4.0，葡萄糖20.0，磷酸氢二钾2.0，柠檬酸三铵2.0，醋酸钠5.0，硫酸镁0.2，硫酸锰0.05，琼脂15.0，吐温80 1.0，购自上海联迈生物工程有限公司，编号为：LM0384-5。
本实施例第三个方面提供了一种含5wt％山茶花发酵液的山茶花精华乳，其组成按重量份计，包括：去离子水75.65份，甘油(CAS:56-81-5)4份，丙二醇(CAS:57-55-6)4份，聚丙烯酸钠0.05份，CARBOPOL UITREZ 21 0.25份，OLIVEM 1000 0.6份，聚二甲基硅氧烷0.3份，辛酸/癸酸甘油三酯(CAS:65381-09-1)0.5份，三乙醇胺(CAS:102-71-6)0.25份，NMF-50氨基酸保湿剂3份，1，2-乙二醇(CAS:16355-00-3)0.6份，对羟基苯乙酮(CAS:99-93-4)0.6份，UV Repair二裂酵母溶胞物5份，山茶花发酵液5份，芽孢杆菌发酵产物0.2份。
所述聚丙烯酸钠密度(25℃)为1.32g/mL，购自武汉诺梵生物科技有限公司，型号为AL225。
所述CARBOPOL UITREZ 21购自路博润特种化工(上海)有限公司。
所述聚二甲基硅氧烷粘度(25℃)为6Pa·s,购自道康宁(上海)有限公司，型号为MEM-0349。
所述NMF-50氨基酸保湿剂购自广州优科生物科技有限公司。
所述UV Repair二裂酵母溶胞物购自广州优科生物科技有限公司。
所述芽孢杆菌发酵产物购自广州优科生物科技有限公司，型号为悦适Sirelax。
对实施例1得到的山茶花发酵滤液进行常规数据检测，如下表1所示。
表1
实施例2
本实施例第一个方面提供了一种山茶花发酵滤液，制备原料包括：花蕾期的红山茶花、乳杆菌(Lactobacillus)、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、防腐剂和水，重量比为6：5：6：0.7：0.7：0.7：0.1：79，其中乳杆菌为乳杆菌二级种子液。
所述乳杆菌的组成按重量份计，包括：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)1.5份、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)3份、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)1.5份、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)1.5份。
所述植物乳杆菌购自山东鑫博瑞生物科技有限公司，型号为002。
所述副干酪乳杆菌购自西安兰杉生物科技有限公司，货号为LS-01-75。
所述鼠李糖乳杆菌购自山东维昂生物科技有限公司，型号为鼠李糖乳杆菌JYLR-005。
所述嗜酸乳杆菌购自西安泽郎生物科技有限公司，型号为ZL-94816。
所述花蕾期的红山茶花的产地选自浙江大垟山。
所述维生素为维生素B9。
所述碳源为葡萄糖。
所述无机盐为氯化钠。
所述低聚果糖购自山东百龙创园生物科技股份有限公司，型号为FOS-95S。
所述防腐剂为对羟基苯乙酮(CAS:99-93-4)和1,2-己二醇(CAS:6920-22-5)，重量比为1：5。
本实施例第二个方面提供了一种山茶花发酵滤液的发酵工艺，包括以下步骤：
(1)花蕾期的红山茶花粉碎过筛，得到65目山茶花花蕾细粉；
(2)将花蕾期的红山茶花、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、水混合均匀，在102.3℃，103.4kPa下维持30分钟灭菌后，得到灭菌培养基，冷却备用；
(3)将乳酸菌转接于150mLMRS液体培养基中，在33±1℃下静置培养，得到一级种子液，再将一级种子液在MRS液体培养基中扩大培养，33±1℃下静置培养15小时，得到二级种子液；
(4)将二级种子液转接到灭菌培养基中，在33±1℃条件下恒温培养发酵，以160r/min的搅拌速度摇床培养36小时，得到发酵液；
(5)发酵液进行第一次高温处理，处理温度为80℃，保持20分钟，冷却至25℃后进行超声，超声功率为450W，温度为40℃，时间为60分钟，得到处理发酵液，再进行10um孔径滤板过滤去渣，得到澄清液体，澄清液体进行第二次高温处理，处理温度为90℃，保持30分钟，冷却至25℃后加入防腐剂，得到山茶花发酵滤液。
所述MRS液体培养基的pH值(25℃)为6.2±0.2，组成成分包括(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉浸粉5.0，酵母浸粉4.0，葡萄糖20.0，磷酸氢二钾2.0，柠檬酸三铵2.0，醋酸钠5.0，硫酸镁0.2，硫酸锰0.05，琼脂15.0，吐温80 1.0，购自上海联迈生物工程有限公司，编号为：LM0384-5。
本实施例第三个方面提供了一种含10wt％的山茶花发酵液的山茶花精华乳，其组成按重量份计，包括：去离子水60.65份，甘油4份，丙二醇4份，聚丙烯酸钠0.05份，CARBOPOLUITREZ 21 0.25份，OLIVEM 1000 0.6份，聚二甲基硅氧烷0.3份，辛酸/癸酸甘油三酯0.5份，三乙醇胺0.25份，NMF-50氨基酸保湿剂3份，1，2-乙二醇0.6份，对羟基苯乙酮0.6份，UVRepair二裂酵母溶胞物5份，山茶花发酵液10份，芽孢杆菌发酵产物0.2份。
所述聚丙烯酸钠密度(25℃)为1.32g/mL，购自武汉诺梵生物科技有限公司，型号为AL225。
所述CARBOPOL UITREZ 21购自路博润特种化工(上海)有限公司。
所述聚二甲基硅氧烷粘度(25℃)为6Pa·s,购自道康宁(上海)有限公司，型号为MEM-0349。
所述NMF-50氨基酸保湿剂购自广州优科生物科技有限公司。
所述UV Repair二裂酵母溶胞物购自广州优科生物科技有限公司。
所述芽孢杆菌发酵产物购自广州优科生物科技有限公司，型号为悦适Sirelax。
对比例1
对比例1的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例1中的山茶花发酵滤液，制备原料包括：盛花期的红山茶花、乳杆菌(Lactobacillus)、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、防腐剂和水，重量比为6：5：6：0.7：0.7：0.7：0.1：79。其中乳杆菌为乳杆菌二级种子液。
对比例2
对比例2的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例2中的山茶花发酵滤液，制备原料包括：落花期的红山茶花、乳杆菌(Lactobacillus)、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、防腐剂和水，重量比为6：5：6：0.7：0.7：0.7：0.1：79。其中乳杆菌为乳杆菌二级种子液。
对比例3
对比例3的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例3中的花蕾期的红山茶花的产地选自云南腾冲。
对比例4
对比例4的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例4中的乳杆菌的组成按重量份计，包括：植物物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)1.5份、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)1.5份、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)1.5份、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)3份。
对比例5
对比例5的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例5中山茶花发酵滤液的发酵工艺，所述步骤(5)的实施方式为，将发酵液进行高温处理，处理温度为80℃，保持30分钟，冷却至25℃后加入防腐剂，得到山茶花发酵滤液。
对对比例5得到的山茶花发酵滤液进行常规数据检测，如下表2所示
表2
对比例6
对比例6的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例6中山茶花发酵滤液的发酵工艺，所述步骤(4)的恒温培养温度为25±1℃。
对比例7
对比例7的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例7中山茶花发酵滤液的发酵工艺，所述步骤(4)的恒温培养温度为45±1℃。
对比例8
对比例8的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例8中山茶花发酵滤液的发酵工艺，所述步骤(4)的摇床培养时间为24小时。
对比例9
对比例9的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例9中山茶花发酵滤液的发酵工艺，所述步骤(4)的摇床培养时间为48小时。
对比例10
对比例10的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例10中的山茶花发酵滤液，制备原料包括：花蕾期的红山茶花、乳杆菌(Lactobacillus)、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、防腐剂和水，重量比为6：2：6：0.7：0.7：0.7：0.1：82，其中乳杆菌为乳杆菌二级种子液。
对比例11
对比例11的具体实施方式同实施例1；不同的是，对比例11中的山茶花发酵滤液，制备原料包括：花蕾期的红山茶花、乳杆菌(Lactobacillus)、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、防腐剂和水，重量比为6：12：6：0.7：0.7：0.7：0.1：72，其中乳杆菌为乳杆菌二级种子液。
性能测试
1、抗氧化性能
将实施例1与对比例1-11制得的山茶花发酵滤液用蒸馏水配置成5％的山茶花发酵滤液作为待测样品，体外测试待测样品对羟基自由基清除率(Fe-水杨酸法)、超氧阴离子自由基清除率(邻苯三酚法)、Fe3+还原(FeCl3法)脂质过氧化抑制率(硫代巴比妥酸法)、DPPH自由基清除率(DPPH·法)，测试结果如表3所示，实施例1山茶花发酵滤液对DPPH·以及羟基自由基浓度的影响水平如图2所示。
表3
2、抗老化性能
山茶花发酵液的抗氧化活性通过活性氧(ROS)抑制率、胶原蛋白Ⅲ生长率和弹性蛋白酶抑制率测定来评估，测试结果如表4所示。
(1)ROS抑制率
将实施例1与对比例1-11制得的山茶花发酵滤液用蒸馏水配置成5wt％和10wt％的山茶花发酵滤液作为待测样品，将待测样品加入培养的正常人真皮层纤维细胞中，培养2h后加入1μg/ml的LPS(脂多糖)为刺激剂，测量细胞内ROS浓度，实施例1山茶花发酵滤液对培养的正常人真皮成纤维细胞内的活性氧(ROS)浓度的影响水平如图3所示。
(2)胶原蛋白Ⅲ生长率
将实施例1-2与对比例1-11制得的山茶花发酵滤液用蒸馏水配置成5wt％的山茶花发酵滤液作为待测样品，将待测样品加入培养的正常人真皮层纤维细胞中，培养2h后，使用高效液相色谱法测定细胞内胶原蛋白Ⅲ的含量。使用实施例1山茶花发酵滤液28天前后胶原蛋白III(密度)的合成模型对比如图4所示。
(3)弹性蛋白酶抑制率
将实施例1与对比例1-11制得的山茶花发酵滤液用蒸馏水配置成5wt％的山茶花发酵滤液作为待测样品，将待测样品、弹性蛋白酶和结缔组织蛋白质中的弹性蛋白混合均匀后测定590nm处的吸光度值，来计算弹性蛋白酶抑制率，测试结果如表4所示。
表4
3、将实施例1-2与对比例1-11得到的含山茶花发酵液的山茶花精华乳进行人体抗衰老测试，测试仪器为皮肤弹性测试仪MPA580，测试结果如表5所示。
选择30名年龄在40-60岁间，有明显的衰老迹象的志愿者，连续28天，在脸部和前臂使用安慰剂和含5wt％山茶花发酵液的精华，测试皮肤紧密度，细纹改善度，以及肌肤弹性是否得到明显改善。志愿者使用实施例1中5wt％山茶花发酵液的山茶花精华乳28天前后眼部皱纹对比如图5所示，志愿者使用实施例5wt％山茶花发酵液的山茶花精华乳28天前后皮肤紧实度以及细纹改善程度如图6所示，志愿者使用实施例5wt％山茶花发酵液的山茶花精华乳28天前后皮肤净弹性改善程度如图7所示。
表5
/>

Claims (6)

1.一种山茶花发酵滤液，其特征在于，制备原料包括：山茶花，乳酸菌，低聚果糖和水；
所述乳酸菌的接种量是山茶花的0.83倍；所述乳酸菌为乳杆菌；
所述乳杆菌的组成按重量份计，包括：植物乳杆菌1-2份、副干酪乳杆菌2-4份、鼠李糖乳杆菌1-2份、嗜酸乳杆菌1-2份。
2.如权利要求1所述的一种山茶花发酵滤液，其特征在于，所述山茶花选自花蕾期的红山茶花、盛花期的红山茶花、落花期的红山茶中的至少一种。
3.如权利要求2所述的一种山茶花发酵滤液，其特征在于，所述山茶花的产地选自浙江大垟山、云南腾冲中的至少一种。
4.如权利要求3所述的一种山茶花发酵滤液，其特征在于，所述山茶花发酵滤液的制备原料还包括：碳源、维生素、无机盐和防腐剂。
5.一种如权利要求4所述的一种山茶花发酵滤液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)山茶花粉碎过筛，得到山茶花细粉；
(2)将山茶花、碳源、维生素、无机盐、低聚果糖、水混合均匀，在102.3℃，103.4kPa下维持30分钟灭菌后，得到灭菌培养基，冷却备用；
(3)将乳酸菌扩大培养，得到二级种子液；
(4)将二级种子液转接到灭菌培养基中，在33±1℃条件下恒温培养发酵，以120-200r/min的搅拌速度摇床培养24～72小时，得到发酵液；
(5)发酵液高温处理后，加入防腐剂，混合均匀，得到山茶花发酵滤液；
所述步骤(5)的具体过程如下：发酵液进行第一次高温处理，处理温度为80℃，保持20分钟，冷却至25℃后进行超声，得到处理发酵液，再进行10um孔径滤板过滤去渣，得到澄清液体，澄清液体进行第二次高温处理，处理温度为90℃，保持30分钟，冷却至25℃后加入防腐剂，得到山茶花发酵滤液。
6.如权利要求5所述的一种山茶花发酵滤液的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体过程如下：将乳酸菌转接于MRS液体培养基中，在33±1℃下静置培养，得到一级种子液，再将一级种子液在MRS液体培养基中扩大培养，33±1℃下静置培养12-18小时，得到二级种子液。
CN202211216309.5A 2022-09-30 2022-09-30 一种山茶花发酵滤液及发酵工艺 Active CN115569096B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211216309.5A CN115569096B (zh) 2022-09-30 2022-09-30 一种山茶花发酵滤液及发酵工艺

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211216309.5A CN115569096B (zh) 2022-09-30 2022-09-30 一种山茶花发酵滤液及发酵工艺

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115569096A CN115569096A (zh) 2023-01-06
CN115569096B true CN115569096B (zh) 2023-09-05

Family

ID=84583637

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211216309.5A Active CN115569096B (zh) 2022-09-30 2022-09-30 一种山茶花发酵滤液及发酵工艺

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115569096B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116077415B (zh) * 2023-02-28 2023-12-26 广东中科卓原生物科技有限公司 一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008231002A (ja) * 2007-03-19 2008-10-02 Ina Food Ind Co Ltd 抗酸化剤及びラジカル消去活性化剤、並びにそれらいずれかが含まれた食品
JP2020068773A (ja) * 2018-10-26 2020-05-07 炭プラスラボ株式会社 乳酸菌生産物質含有組成物、エクオール生成方法および乳酸菌生産物質含有組成物の製造方法
CN114540426A (zh) * 2022-04-27 2022-05-27 广州优科生物科技有限公司 一种牡丹发酵滤液及其发酵工艺
CN115068382A (zh) * 2022-07-05 2022-09-20 长沙理工大学 一种山茶花提取液及其制备方法与其在化妆品中的应用
CN115105452A (zh) * 2022-08-23 2022-09-27 广州优科生物科技有限公司 一种红茶发酵滤液及其制备方法和应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI704873B (zh) * 2019-07-10 2020-09-21 貫閎開發生技股份有限公司 用於製備一發酵產物的方法及其所製得的發酵產物暨其應用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008231002A (ja) * 2007-03-19 2008-10-02 Ina Food Ind Co Ltd 抗酸化剤及びラジカル消去活性化剤、並びにそれらいずれかが含まれた食品
JP2020068773A (ja) * 2018-10-26 2020-05-07 炭プラスラボ株式会社 乳酸菌生産物質含有組成物、エクオール生成方法および乳酸菌生産物質含有組成物の製造方法
CN114540426A (zh) * 2022-04-27 2022-05-27 广州优科生物科技有限公司 一种牡丹发酵滤液及其发酵工艺
CN115068382A (zh) * 2022-07-05 2022-09-20 长沙理工大学 一种山茶花提取液及其制备方法与其在化妆品中的应用
CN115105452A (zh) * 2022-08-23 2022-09-27 广州优科生物科技有限公司 一种红茶发酵滤液及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN115569096A (zh) 2023-01-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113773999B (zh) 副干酪乳杆菌发酵滤液、制备方法及其应用
CN113930361B (zh) 一种副干酪乳杆菌的发酵培养基及其应用
CN110974740B (zh) 一种具有皮肤抗刺激抗氧化功效的植物二步发酵物及其制备方法和用途
CN113143812B (zh) 一种卡瓦胡椒发酵物的制备方法和产品及其在化妆品中的应用
CN106726949B (zh) 一种葡萄籽发酵原浆化妆品及其制备方法与应用
CN115572738B (zh) 一种具有抗炎、舒缓和修护功效的铁皮石斛发酵液及其制备方法和应用
CN113604395B (zh) 一株可发酵石斛且其发酵液可改善皮肤质量的植物乳杆菌
CN115569096B (zh) 一种山茶花发酵滤液及发酵工艺
CN108042436B (zh) 蓝铜胜肽抗衰保湿精华霜
CN107802522B (zh) 一种含益生菌发酵液的美白面膜液及其制备方法
CN105687558B (zh) 一种儿童湿疹用植物提取物组合物及其在化妆品中的应用
CN110710677A (zh) 一种复合酵素及其制备方法
CN116376731B (zh) 一种异常威克汉姆酵母菌在制备青刺果提取物中的应用
KR101737940B1 (ko) 발효 콩잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물
CN111904878B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的脂质体的制备方法及应用
CN113975189B (zh) 一种低刺激性视黄醇类包载体及其制备方法
KR101761771B1 (ko) 닥나무 또는 그 추출물의 발효방법, 그 발효 추출물 및 이를 포함하는 화장료 조성물
CN105687110A (zh) 一种消除妊娠纹植物提取组合物及其在化妆品中的应用
KR101814941B1 (ko) 맨드라미꽃 물추출물의 유산균 발효액을 함유하는 항산화 기능성 식품 조성물 및 그 제조방법
CN111789801B (zh) 一种含有玫瑰发酵液的保湿沐浴露及其制备方法
CN115414300A (zh) 一种具有抗氧化、控油、收缩毛孔功效的绿茶复合发酵液及其制备方法和应用
CN114788806A (zh) 一种具有抗氧化美白一体功效的中药组合物发酵原浆及其制备方法和应用
KR20150024628A (ko) 마로부터 발효된 식물성 뮤신을 제조하는 방법 및 이를 포함하여 콜라겐 합성능, 보습, 피부 보호 및 상처 재생이 우수한 화장료 조성물
CN113648254A (zh) 可用于化妆品的羽扇豆针叶樱桃发酵物及其制备方法
KR20140121210A (ko) 발효 마카 함유 피부 외용제

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant